KR20110082148A - 간 장애의 표지로써 글루쿠로나이드화된 아세트아미노펜 - Google Patents

간 장애의 표지로써 글루쿠로나이드화된 아세트아미노펜

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KR20110082148A
KR20110082148A KR1020117009768A KR20117009768A KR20110082148A KR 20110082148 A KR20110082148 A KR 20110082148A KR 1020117009768 A KR1020117009768 A KR 1020117009768A KR 20117009768 A KR20117009768 A KR 20117009768A KR 20110082148 A KR20110082148 A KR 20110082148A
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나단 체링톤
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디 애리조나 보드 오브 리젠츠 온 비해프 오브 더 유니버시티 오브 애리조나
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Abstract

본 발명은 비알콜성 지방간염(NASH)과 같은 인간 간 장애를 진단하고, 약물 유해반응의 위험이 있는 인간 피험자를 파악하고, 그리고 인간 피험자에게 적당한 치료적 약물의 복용량을 결정하는 방법을 제공한다. 표지는 인간 피험자의 혈장 또는 소변 시료에서의 아세트아미노펜-글루쿠로나이드의 증가된 수준이다.

Description

간 장애의 표지로써 글루쿠로나이드화된 아세트아미노펜{GLUCURONIDATED ACETAMINOPHEN AS A MARKER OF HEPATIC DISORDERS}
본 출원은, 그의 전체 내용이 본원에 참고 인용되어 있는 것으로, 2008년 10월 1일 출원된 미국 가 출원 제61/194,835호에 대한 우선권을 주장한다.
정부 권리의 언급
본 발명은 미국 국립보건원이 수여한 R01 DK068039 하의 정부 지원과 함께 만들어졌다. 정부는 본 발명에 특정 권리가 있다.
아세트아미노펜(APAP)은 가장 흔히 사용되는 비마취성 진통제 및 다른 유사한 제품과 비교되는 표준 해열 및 진통 약제이다. 대부분이 간에서 일어나는 APAP의 대사는 잘 정의되어 있다(도 1). 투여된 복용량의 2분의 1 이상은 글루쿠론산(GLUC)과, 3분의 1은 술페이트(SULF)와 접합되어 있다. 주로 CYP2E1을 경유하는 CYP-450-의존성 혼합-기능 옥시다제 효소 경로는 약 5 - 9% 대사를 한다. 이는 독성 반응 중간체 대사물(NAPQI)의 형성을 가져오며, 이는 이어서 글루타티온과 접합하여 비독성 시스테인 및 메르캅터르산 복합체를 형성한다. 권장되는 아세트아미노펜 복용량의 5% 미만이 신장에 의해 바뀌지 않은 채 분비된다. 아세트아미노펜은 신체로부터 첫 번째 제거를 거치고 짧은 혈장 반감기를 갖는다(2.0 - 2.4 시간).
APAP는 간으로부터 약 대사물 배출에서 유출 운송자에 의해 수행되는 중요한 역할의 좋은 예를 제공한다. 모든 APAP 대사물들은 간으로부터 배출되기 위하여 유출 운송자를 필요로 하고, 그리고 각각은 담즙과 소변에서 검출될 수 있다. 체내 성질 연구와 체외 기능성 운송 실험은 ABC 운송체들 ABCC2, ABCC3, ABCC4 및 ABCG2 각각이 APAP 대사물을 포함하는 다양한 비접합 및 접합 약물을 운송하는 능력을 가진다는 것을 나타낸다. ABCC2 및 ABCG2는 간세포의 세관(끝) 막에 국소위치하며 거기로부터 그들은 그들의 기질을 모세담관으로 배출한다. 따라서, 건강한 간에서, APAP의 GSH 복합체, SULF 및 GLUC의 담즙의 배출은 뚜렷하게 ABCC2에 의해 매개되나, 반면에 ABCG2는 APAP-SULF 복합체의 배출에 기여하는 것으로도 보인다. ABCC3 및 ABCC4는 간세포 및 담관세포의 지누소이드(기저측의) 막에서 발현되며 그곳으로부터 그들은 그들의 기질을 혈액으로 배출한다. 간세포로부터의 APAP-GLUC 대사물의 지누소이드 배출은 뚜렷하게 ABCC3에 의해 매개되나, 반면에 ABCC4는 APAP-SULF 대사물의 배출을 매개하는 것으로 보인다. 최근 연구들은 ABCC3 및 ABCC4가 APAP-SULF의 유출에 동등한 역할을 가진다는 것을 보여준다.
최근 연구(문헌[Drug. Metabolism and Disposition, 35:1970-1978 (2007)])은 8주 동안 메티오닌 및 콜린 결핍(MCD) 식사를 제공하여 만들어낸 비알콜성 지방간염(NASH)의 쥐 모델에서, 간 유출 운송자 ABCC3 및 ABCC4가 단백질 발현이 증가한다는 것을 보여준다. APAP의 많은 복용량(1 mmol/kg) (150 파운드의 인간에게 10 그램의 복용량, 또는 250 파운드의 인간에게 17 그램의 복용량과 동등)의 이러한 MCD 쥐에게 투여는 대조군에 관하여 APAP-GLUC의 배출을 담즙으로부터 혈장까지 이동시키는 결과를 가져온다. 그러나, 메티오닌 및 콜린 결핍된 사람이 없고, 쥐 모델에 많은 복용량의 APAP가 투여된 상황에서, MCD 쥐는 인간 NASH 또는 인간 간 약물 대사의 연구를 위한 좋은 모델이 아니라고 추측된다. 어떤 동물 모델도 정확하게 인간 NASH를 요약할 수 없다는 것이 일반적으로 받아들여진다. 수많은 생화학적 차이로 인하여 이러한 직접적인 비교에는 잠재적으로 인위적인 결과물이 뒤따르게 된다. 예를 들어, MCD 모델은 종종 NASH의 구성요소인 인슐린 내성이 부족하다(Rinella ME and Green RM, J Hepatol. 2004 Jan; 40(1):47-51.). 게다가, 인간에게서 지방증은 간을 통하는 증가된 지질 총 흐름을 가져오는 지방이 높은 전형적인 서구식 식생활에서 발생하는 반면에, MCD 모델은 지질 대사의 생화학적인 결함에 의해 지방증과 지방간염을 야기한다. 그래서, MCD 모델과 인간의 직접적인 비교는 부적합하다. 이러한 비자연적인 식이요법의 효과 대 그들의 변인에 대한 간 손상의 효과는 설명될 수 없기 때문에, 이것은 특히 MCD 식이요법에 대한 염려이다.
첫 번째 양상에서, 본 발명은
(a) 간 장애의 위험이 있는 인간 피험자에게 아세트아미노펜(APAP)을 투여한 후 인간 피험자로부터 얻어진 혈장 시료 및/또는 소변 시료에서 아세트아미노펜(APAP)-글루쿠로나이드의 양을 결정하는 단계;
(b) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 대조군과 비교하는 단계; 및
(c) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양이 대조군에 비하여 상승한 경우 인간 피험자를 간 장애를 가진 것으로 파악하는 단계를 포함하는, 인간에서 간 장애를 진단하는 방법을 제공한다.
두 번째 양상에서, 본 발명은
(a) 치료적 약물 처리가 필요한 인간 피험자에게 아세트아미노펜(APAP)을 투여한 후 인간 피험자로부터 얻어진 혈장 시료 및/또는 소변 시료에서 아세트아미노펜(APAP)의 양을 결정하는 단계;
(b) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 대조군과 비교하는 단계; 및
(c) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양이 대조군에 비하여 상승한 경우 인간 피험자를 약물 유해반응의 위험이 있는 것으로 파악하는 단계를 포함하는, 약물 유해반응의 위험이 있는 인간 피험자를 파악하기 위한 방법을 제공한다.
세 번째 양상에서, 본 발명은
(a) 치료적 약물 처리가 필요한 인간 피험자에게 아세트아미노펜(APAP)을 투여한 후 인간 피험자로부터 얻어진 혈장 시료 및/또는 소변 시료에서 아세트아미노펜(APAP)의 양을 결정하는 단계;
(b) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 대조군과 비교하는 단계; 및
(c) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양이 대조군에 비하여 상승한 경우 인간 피험자가 약물의 비표준 복용량을 받아야하는지 결정하는 단계를 포함하는, 인간 피험자에게 적합한 치료적 약물의 복용량을 결정하는 방법을 제공한다.
네 번째 양상에서, 본 발명은 대사물 측정 장치가 첫 번째, 두 번째, 및 세 번째 실시태양의 방법 중의 임의의 실시태양에서 측정, 비교, 및 파악하는 단계를 수행하도록 하기 위한 일련의 지시를 포함하는 기계 판독가능 저장 매체를 제공한다.
본 발명의 이러한 양상의 각각의 실시태양이 여기에 제공된다.
도 1은 아세트아미노펜의 대사물을 보여주는 절차도이다.
도 2는 NAFLD를 가진 인간에서 간의 ABCC3 및 ABCC4의 발현을 보여주는 방사능 사진을 제공한다.
도 3A-B는 정상의 건강한 환자로부터의 간의 세관막의 매우 빳빳한 모서리에 국소위치하지만(A), NASH 간에서 세관으로부터 떨어진 막포로 확실하게 모호해지는 ABCC2 단백질을 보여준다(B).
도 4는 4시간에 걸친 혈장 내 APAP 및 그것의 주요 대사물 농도를 보여준다.
도 5는 정상의 건강한 자원자, 지방증 환자, 및 지방간염 환자의 소변 내 APAP 및 APAP 대사물 농도를 보여주는 그래프이다.
도 6A-C는 NASH(A), 간염(B), 및 간섬유증(C)의 혈장 APAP-Gluc 분석의 그래프이다.
인용된 모든 참고문헌은 전체가 본원에 참고문헌으로 인용된다. 본 출원서 안에서, 다르게 언급하지 않는다면, 사용된 기술을 임의의 몇 개의 잘 알려진 참고문헌, 이를테면: 문헌[Molecular Cloning : A Laboratory Manual (Sambrook, et al., 1989, Cold Spring Harbor Laboratory Press), Gene Expression Technology (Methods in Enzymology, Vol. 185, D. Goeddel 편집, 1991. Academic Press, San Diego, CA), Methods in Enzymology 중 "Guide to Protein Purification" (M.P. Deutshcer, ed., (1990) Academic Press, Inc.); PCR Protocols : A Guide to Methods and Applications (Innis, et al. 1990. Academic Press, San Diego, CA), Culture of Animal Cells : A Manual of Basic Technique , 2 nd Ed . (R.I. Freshney. 1987. Liss, Inc. New York, NY), Gene Transfer and Expression Protocols, pp. 109 - 128, ed. E.J. Murray, The Humana Press Inc., Clifton, N.J.), 및 Ambion 1998 Catalog (Ambion, Austin, TX)]에서 발견할 수 있다.
본원에서 사용된, 단수 형태 그("a", "an" 및 "the")는 그 문맥이 명백하게 달리 지시하지 않는다면 복수의 지시대상도 포함한다. 본원에 사용된 및("And")은 분명히 달리 언급되지 않는다면 또는("or")과 교체될 수 있게 사용된다.
첫 번째 양상에서, 본 발명은
(a) 간 장애의 위험이 있는 인간 피험자에게 아세트아미노펜(APAP)을 투여한 후 인간 피험자로부터 얻어진 혈장 시료 및/또는 소변 시료에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 결정하는 단계;
(b) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 대조군과 비교하는 단계; 및
(c) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양이 대조군에 비하여 상승한 경우 인간 피험자를 간 장애를 가진 것으로 파악하는 단계를 포함하는, 인간에서 간 장애를 진단하는 방법을 제공한다.
본 첫 번째 양상의 바람직한 실시태양에서, 본 방법은
(a) 간 장애의 위험이 있는 인간 피험자에게 아세트아미노펜(APAP)을 투여하는 단계;
(b) 인간 피험자로부터 혈장 시료 및/또는 소변 시료를 얻는 단계;
(c) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 측정하는 단계;
(d) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 대조군과 비교하는 단계; 및
(e) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양이 대조군에 비하여 상승한 경우 인간 피험자를 간 장애를 가진 것으로 파악하는 단계를 포함한다.
발명자는 본 발명의 방법이 비침습성 혈액검사 또는 소변검사를 제공하여 다양한 간 장애를 가진 인간 환자를 파악한다고 설명해왔다.
인간 피험자는 청소년 및 성인 인간 피험자를 포함하여, 간 장애의 위험이 있는 임의의 인간일 수 있다. 당업자에게 잘 알려진 표준 기술에 의해 인간 피험자로부터 혈장 및/또는 소변 시료를 얻는다.
본원에서 사용된, 용어 "간 장애"는 본원에 설명된 것처럼 아세트아미노펜 대사의 변형을 보여주는 인간에서의 간섬유증, 간염, 비알콜성 지방간염(NASH), 알콜성 지방간염, 독소 유발 지방간염, 원발성 경화성 담관염, 간경화증, 패혈증을 포함하지만 이들로 한정되는 것은 아닌 임의의 간 질병을 포함한다.
본원에서 사용된, 도 1에 보여진 구조의 "아세트아미노펜"(APAP) 및 그것의 제형은 널리 알려진 통증 및 열 감소제이다. APAP의 임의의 적합한 복용량이 인간 피험자에게 투여될 수 있다. APAP의 1회 초과의 복용이 인간 피험자에게 투여될 수 있으나, 1000 mg의 지시된 최대 복용량이 여전히 대사물 형성의 분석을 용이하게 하면서 독성의 위험을 최소화하는데 바람직하다. 본 발명의 모든 양상 및 실시태양 중 하나의 바람직한 실시태양에서, 250 mg 내지 1000 mg APAP의 총 복용량이 인간 피험자에게 투여된다. 하나의 바람직한 실시태양에서, 인간 피험자는 검사 전 적어도 24시간 동안 어떤 APAP도 취하지 않는다. 본 발명의 모든 양상 및 실시태양 중 하나의 바람직한 실시태양에서, 250 mg 내지 1000 mg APAP의 총 복용량이 인간 피험자에게 투여된다. 액체의 경구 복용 형태 및 고체 경구 복용 형태를 포함하지만 이들로 한정되는 것은 아닌 APAP의 임의의 적합한 제형이 투여될 수 있다.
본원에서 사용된 "APAP-글루쿠로나이드"는 APAP의 하나의 특정한 대사물을 언급하며, 도 1에서 구조식을 보여준다.
본원에서 사용된 "대조군"은 건강한 간을 가진 인간 피험자에게 측정되는 APAP-글루쿠로나이드의 양을 정상화하는 임의의 수단이다. 하나의 바람직한 실시태양에서, 대조군은 정상의 개인 또는 집단(즉, 관련된 간 장애를 앓고 있는 것으로 알려지지 않은)으로부터의 기정된 APAP-글루쿠로나이드 수준을 구성한다.
본원에서 사용된 대조군과 관련된 APAP-글루쿠로나이드의 "상승된" 양은 대조군을 초과하는 임의의 증가일 수 있고, 바람직하게는 통계학적으로 상당한 증가이다(예를 들어 p ≤ 0.05). 다양한 바람직한 실시태양에서, APAP-글루쿠로나이드의 상승된 수준은 적절한 대조군과 관련된 혈액 또는 소변 시료에서 APAP-글루쿠로나이드의 양에서 1.2 배, 1.4 배, 1.5 배, 2 배, 3 배, 4 배, 5 배, 또는 더 큰 차이에 있다.
본 발명의 모든 양상 및 실시태양의 방법에 APAP-글루쿠로나이드의 검출을 위한 APAP 투여 후 임의의 적합한 시간에 얻어진 혈장 및/또는 소변 시료를 사용할 수 있다. 본 발명의 모든 양상 및 실시태양 중 하나의 바람직한 실시태양에서, 혈장 시료에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 측정하는데, APAP 투여 후 1분 내지 180분 사이; 더 바람직하게는 APAP 투여 후 1분 내지 120분 사이, 및 훨씬 더 바람직하게는 APAP 투여 후 1분 내지 60분 사이에 측정을 한다. 다양한 다른 바람직한 실시태양에서, 10분 내지 180분; 30분 내지 180분; 45분 내지 180분; 60분 내지 180분; 10분 내지 120분; 30분 내지 120분; 45분 내지 120분; 10분 내지 60분; 30분 내지 60분; 및 45분 내지 60분 사이에 측정을 한다. 본 발명의 모든 양상 및 실시태양 중 다른 바람직한 실시태양에서, 소변 시료에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 측정하는데, APAP 투여 후 120분 내지 480분 사이; 더 바람직하게는 APAP 투여 후 120분 내지 360분 사이, 및 훨씬 더 바람직하게는 APAP 투여 후 120분 내지 300분 사이 또는 APAP 투여 후 120 분 내지 240분 사이에 상기 측정을 한다. 다양한 다른 바람직한 실시태양에서, 180분 내지 480분; 180분 내지 360분; 180분 내지 300분; 180분 내지 240분; 240분 내지 480분; 240분 내지 360분; 240분 내지 300분; 300분 내지 480분; 300분 내지 360분; 360분 내지 480분 사이에 측정을 한다. 다양한 다른 바람직한 실시태양에서, 예를 들어, 하나 이상의 시점에서 대조군과 비교되는 APAP-글루쿠로나이드 중 증가를 평가하기 위해서 1,2,3,4, 또는 더 많은 측정을 할 수 있다. 그 방법은 APAP, APAP-술페이트, APAP-NAC 및 APAP-CG/CYS를 포함하지만 이것들로 한정되지 않는 혈장 및/또는 소변 중의 다른 분석물의 검출 및/또는 측정을 추가로 포함할 수 있다.
임의의 적합한 가공 단계가 APAP-글루쿠로나이드 측정을 위한 혈장 및/또는 소변 시료를 준비하기 위하여 수행될 수 있다. 하나의 예시적 실시태양에서, 표준 기술을 사용하여 혈장 및/또는 소변 시료로부터 단백질을 침전시키고, 원심분리시키고; 그리고 나서 얻어진 상층액을 본 발명의 방법 중 측정 단계를 위해 사용한다.
혈장 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 측정하는 것은 분석물 측정을 위해, 크로마토그래피(이를테면 고압 액체 크로마토그래피(HPLC), 기체 크로마토그래피(GC), GC-질량 분석기(GC-MS), 박막 크로마토그래피(TLC), 등), 핵자기 공명(NMR), 분광학 전기화학적 기술, 모세관 전기영동, 면역학적 기술을 포함하지만 이들로 한정되지 않는 임의의 적합한 기술에 의해 수행될 수 있다.
임의의 상기 실시태양 중 다른 바람직한 실시태양에서, 측정, 비교, 및 파악하는 단계는 자동화되어 있다; 이 실시태양에서, 임의의 상기 기술을 수행하기 위한 장치와 같은 자동화된 기구를 사용하여 이러한 단계를 수행할 수 있다. 이러한 장치들은 장치가 측정, 비교, 및 파악 단계를 수행하게 하는 지시를 포함한 기계 판독가능 저장 매체를 포함할 수 있다.
인간 검사 피험자로부터 얻어진 혈장 및/또는 소변 시료를 APAP-GLUC를 측정하기 전에 저장할 수 있다; 적합한 저장 조건은 당업자에게 알려져 있다. 예를 들어, 시료를 원하는 저장 길이를 위한 적합한 온도에서 얼린다; 하나의 실시태양에서, 시료는 -80 ℃에서 일년까지 안정하다.
첫 번째 양상 중 하나의 바람직한 실시태양에서, 인간 피험자는 비알콜성 지방간염(NASH)의 위험이 있다. 비알콜성 지방간 질환(NAFLD)은 간 지방증에서 NAFLD의 가장 심한 형태인 비알콜성 지방간염(NASH)으로 알려진 지방 간염의 형태까지 걸쳐있는 병리학적 병변의 스펙트럼을 포함한다. 인간 생체검사에서 NASH 진단과 독립적으로 연관되는 조직학적 특징은 간 지방증, 간세포 팽창, 소엽 염증, 말로리 유리체 및 지누소이드 섬유증을 포함한다. 더욱이, NASH는 간 이식을 필요로 하는 간경화증으로 발전될 수 있는 가능성을 갖는다.
본원에 공개된 것처럼, 발명자는 인간 NASH 환자들 중, ABCC2 운송자는 정확하게 세관막에 국소위치하지 않지만, 대신에 NASH 간의 세관으로부터 떨어진 막포에 국소위치한다는 것을 발견하였다. ABCC2 운송자의 이러한 이상 국소위치는 문헌[Lickteig et al. (2007)]에 기술된 쥐 MCD 모델에서는 파악되지 않았다. 발명자는 간의 ABCC3 및 ABCC4의 발현이 인간 NASH 환자에게서 상승 조절되는 것을 또한 발견하였다. 어떤 작용기작에 의하여도 제한되지 않지만, 발명자는 막포에 ABCC2의 변경된 간 트래픽킹은 ABCC2를 통한 담관의 청소보다, ABCC3 및/또는 ABCC4을 통한 혈장 잔류(그리고 난 후 소변으로 배출)를 선호하도록 APAP-GLUC의 성질을 변경한다고 믿는다.
이 실시태양의 방법은 NAFLD를 앓고 있는 피험자를 계층화하는 것 및, NASH를 앓고 있는 피험자를 간 지방증을 앓고 있는 피험자로부터 구별하는 것을 도울 수 있다. 최근 NASH를 진단하는 방법은 간 생체검사에 의존한다. 그래서, NASH 진단을 위한 비침습성 방법은 임상학적 가치가 있고, 공격적인 체중 감량 프로그램 및 치료적 약물 처리를 포함하지만 이로 한정되는 것은 아닌 NASH의 치료의 더 빠른 개시를 허용한다.
바람직한 실시태양에서, NASH의 위험이 있는 인간 피험자는 비알콜성 지방간 질환, 지방증 대사 증후군, 비만, 이상지질혈증, 인슐린 내성, 심장혈관질환, 및 당뇨병 중 하나 이상을 앓는다.
본 발명의 첫 번째 양상 중 다른 바람직한 실시태양에서, 인간 피험자는 간섬유증의 위험이 있다. 간섬유증은 과도하게 증식하는 상처 치유이며 간에서 과도한 결합조직이 형성된다. 세포외기질은 과생산되거나, 결핍되게 감소되거나 또는 둘 다일 수 있다. 섬유증은 그 자체로 아무런 증상을 야기하지는 않지만 문맥고혈압(흉터형성이 간을 통한 혈액 흐름을 비틀 수 있다) 또는 간경화증(파괴된 간세포의 적절한 대체의 실패가 간 기능장애를 가져온다)을 야기할 수 있다. 최근 간섬유증을 진단하는 방법은 간 생체검사에 의존한다. 그래서, 간섬유증을 진단하기 위한 비침습성 방법은 임상학적 가치가 있다. 바람직한 실시태양에서, 간섬유증의 위험이 있는 인간 피험자는 α1-항트립신 결핍, 윌슨병, 과당혈증, 갈락토오스혈증, 유형 III, IV, VI, IX, 및 X 글리코겐 축적병, 혈색소침착증, 고셰병, 젤베거 증후군, 티로신혈증, 박테리아 감염, 바이러스 감염(이를테면, B형 간염 바이러스(HBV) 또는 C형 간염 바이러스(HCV)), 기생충 감염, 버드-키아리 증후군, 알콜 중독, 약물 중독, 심장기능 상실, 간정맥 폐쇄병, 담도폐쇄증, 및 문정맥 혈전증으로 구성된 군으로부터 선택된 간섬유증에 걸리기 쉬운 하나 이상의 병태를 앓거나, 또는 이미 앓았다.
하기에 더 자세히 공개된 것처럼, 발명자는 간섬유증을 가진 인간 피험자는 간섬유증이 없는 인간 피험자보다 혈장 및 소변에 상승된 APAP-GLUC의 양을 가진다는 것을 발견하였다. 본 발명의 방법은 예를 들어 HBC 또는 HCV를 제거하는 항바이러스 치료에 의해 간 손상의 근원을 제거하는 것; 알콜 중독된 간 질환에 알콜을 삼가는 것; 혈색소침착증 및 윌슨병 각각에서 철 또는 구리와 같은 중금속을 제거하는 것; 또는 담도폐쇄증에서 담관의 압축을 줄이는 것을 포함하지만 이것으로 한정되는 것은 아닌 간섬유증을 위한 치료의 더 빠른 개시를 허용한다.
간섬유증은 일반적으로 경도(혈관 주변의 최소의 흉터형성), 중등도(간 혈관으로부터 확장되어나가는 흉터형성), 또는 중도(혈관 사이에 다리를 형성하는 흉터형성)로 조직학적으로 계층화되어있다. 바람직한 실시태양에서, 혈장 및 소변 시료 중 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양이 대조군에 비하여 상승한 경우 인간 피험자가 심각한 간섬유증을 가진 것으로 파악한다. 다른 바람직한 실시태양에서, 인간 피험자는 NASH를 앓고 있다.
본 발명의 첫 번째 양상 중 다른 바람직한 실시태양에서, 인간 피험자는 광범위 또는 국소 괴사로 특징되는 간의 염증, 간염의 위험이 있다. 주요 요인은 특정한 간염 바이러스, 알콜, 및 약물이다. 그래서, 바람직한 실시태양에서, 인간 피험자는 알콜 중독, 약물 중독, 박테리아 감염, 바이러스 감염(이를테면, 간염 A, B, C, D 및/또는 E), 진균 감염, 원충 감염, 연충 감염, 스피로헤타 감염, 사코이드증, 궤양대장염, 및 크론병으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 장애를 앓거나 이미 앓았다.
하기에 더 자세히 공개된 것처럼, 발명자는 간 염증(간염)을 가진 인간 피험자는 간섬유증을 가지지 않는 인간 피험자보다 혈장 및 소변에서 상승된 APAP-GLUC의 농도를 가진다는 것을 발견하였다. 간 염증은 일반적으로 경도(2 미만의 염증 부위), 중등도(2 - 4의 염증 부위), 또는 중도(4 초과의 염증 부위)로 조직학적으로 계층화되어있다. 바람직한 실시태양에서, 혈장 및 소변 시료 중 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양이 대조군에 비하여 상승한 경우, 인간 피험자가 보통의 또는 심한 간 염증을 가진 것으로 파악한다. 가장 바람직한 실시태양에서, 혈장 및 소변 시료 중 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양이 대조군에 비하여 상승한 경우, 인간 피험자가 심한 간 염증을 가진 것으로 파악한다. 다른 바람직한 실시태양에서, 인간 피험자는 NASH 및/또는 간섬유증을 앓고 있다.
두 번째 양상에서, 본 발명은
(a) 치료적 약물 처리가 필요한 인간 피험자에게 아세트아미노펜(APAP)을 투여한 후 인간 피험자로부터 얻어진 혈장 시료 및/또는 소변 시료에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 결정하는 단계;
(b) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 대조군과 비교하는 단계; 및
(c) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양이 대조군에 비하여 상승한 경우 인간 피험자를 약물 유해반응의 위험이 있는 것으로 파악하는 단계를 포함하는, 약물 유해반응의 위험이 있는 인간 피험자를 파악하는 방법을 제공한다.
본 두 번째 양상의 바람직한 실시태양에서, 본 방법은
(a) 치료적 약물 처리가 필요한 인간 피험자에게 아세트아미노펜(APAP)을 투여하는 단계;
(b) 인간 피험자로부터 혈장 시료 및/또는 소변 시료를 얻는 단계;
(c) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 측정하는 단계;
(d) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 대조군과 비교하는 단계; 및
(e) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양이 대조군에 비하여 상승한 경우 인간 피험자를 약물 유해반응의 위험이 있는 것으로 파악하는 단계를 포함한다.
세 번째 양상에서, 본 발명은
(a) 치료적 약물 처리가 필요한 인간 피험자에게 아세트아미노펜(APAP)을 투여한 후 인간 피험자로부터 얻어진 혈장 시료 및/또는 소변 시료에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 결정하는 단계;
(b) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 대조군과 비교하는 단계; 및
(c) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양이 대조군에 비하여 상승한 경우 인간 피험자가 약물의 비표준 복용량을 받아야하는지 결정하는 단계를 포함하는, 인간 피험자에게 적당한 치료적 약물의 복용량을 결정하는 방법을 제공한다.
본 세 번째 양상의 바람직한 실시태양에서, 본 방법은
(a) 치료적 약물 처리가 필요한 인간 피험자에게 아세트아미노펜(APAP)을 투여하는 단계;
(b) 인간 피험자로부터 혈장 시료 및/또는 소변 시료를 얻는 단계;
(c) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 측정하는 단계;
(d) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 대조군과 비교하는 단계; 및
(e) 혈장 시료 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양이 대조군에 비하여 상승한 경우 인간 피험자를 약물의 비표준 복용량을 받아야하는 자로 파악하는 단계를 포함한다.
본 발명의 첫 번째, 두 번째, 및 세 번째 양상에서 모든 일반적인 용어는 같은 정의를 공유한다; 문맥이 명백하게 다르게 지시하지 않는다면, 첫 번째 양상의 모든 실시태양은 본 발명의 두 번째 및 세 번째 양상에 적용 가능하다.
본원에 공개된 것처럼, 발명자는 인간 NASH 환자들 중, ABCC2 운송자는 정확하게 세관막에 국소위치하지 않지만, 대신에 NASH 간의 세관으로부터 떨어진 막포에 국소위치한다는 것을 발견하였다. ABCC2 운송자의 이러한 일탈 국소위치는 문헌[Lickteig et al. (2007)]에 기술된 쥐 MCD 모델에서는 파악되지 않았다. 발명자는 간의 ABCC3 및 ABCC4의 발현이 인간 NASH 환자에게서 상승 조절되는 것을 또한 발견하였다. 어떤 작용기작에 의하여도 제한되지 않지만, 발명자는 막포에 ABCC2의 변경된 간 트래픽킹은 ABCC2를 통한 담관의 청소보다, ABCC3 및/또는 ABCC4을 통한 혈장 잔류(그리고 난 후 소변으로 배출)를 선호하도록 APAP-GLUC의 성질을 변경한다고 믿는다. 그래서 담즙으로부터 혈장/소변까지 APAP 대사물의 제거 중의 비례적 이동은 약물 제거의 루트에 영향을 끼칠 수 있는 유출 운송자 발현 및/또는 세포 국소위치에서의 변경을 나타내고, 따라서 유출 운송자 발현 및/또는 국소위치에서의 변경 때문에 약물 유해반응의 위험이 있는 인간 피험자를 파악하는 방법을 제공한다.
본원에 사용된 "약물 유해반응의 위험"은 인간 피험자가 받아야 하는 약물과 연계된 하나 이상의 유해반응을 경험하기 더욱 쉽다는 것을 의미한다. 이러한 가능한 유해반응은 임의의 주어진 약물의 제품 내역에 나열된 것들뿐만 아니라, 특이한 유해반응 모두의 임의의 이러한 유해 반응을 포함한다.
본원에 사용된 "약물의 비표준 복용량"은 약물 유해반응의 증가한 위험을 고려하기 위하여 담당의가 인간 피험자에게 투여되는 약물의 복용량을 변경해야하는 것을 의미한다.
본 발명의 두 번째 및 세 번째 양상 중 다양한 바람직한 실시태양에서, 치료적 약물 처리가 필요한 인간 피험자는 NASH, 간섬유증, 및/또는 간 염증의 위험이 있거나 이들을 앓는다. 이 장애 각각의 위험이 있는 인간 피험자는 본 발명의 첫 번째 양상에 자세하게 공개되었다. 다른 바람직한 실시태양에서, 인간 피험자는 ABCC2, ABCC3, 및/또는 ABCC4 운송자 발현 및 국소위치에서의 변경을 가져오는 임의의 장애를 앓는다. 하나의 바람직한 실시태양에서, 장애는 ABCC2 운송자의 이상 국소위치를 가져온다.
다양한 바람직한 실시태양에서, 치료적 약물은 그것의 대사물(들)이 ABCC2, ABCC3, 및/또는 ABCC4 운송자를 통해서 간으로부터 이송되는 것이다. 다양한 비제한적 실시예에서, 이러한 치료적 약물은 독소루비신, 시스플라틴, 엑토포사이드, 메토트렉세이트, 모르핀, 에제이티마이브, 글루쿠로나이드화된 접합 약물, 글루타티온-접합 약물, 및 술페이트-접합 약물을 포함한다.
APAP의 임의의 적합한 복용량을 인간 피험자에게 투여할 수 있다. APAP의 1회 복용량을 초과하여 인간 피험자에게 투여할 수 있지만, 바람직한 실시태양에서는, 대사물 형성의 분석을 용이하게 하기 위하여 1회 복용량을 투여한다. 하나의 바람직한 실시태양에서, 인간 피험자는 검사 전 적어도 24시간 동안 어떤 APAP도 취하지 않는다. 본 발명의 모든 양상 및 실시태양 중 다른 바람직한 실시태양에서, 250 mg 내지 1000 mg APAP의 총 복용량을 인간 피험자에게 투여한다. 액체 경구 복용 형태 및 고체 경구 복용 형태를 포함하지만 이것으로 한정되는 것은 아닌 APAP의 임의의 적합한 제형을 투여할 수 있다.
APAP-글루쿠로나이드의 검출을 위한 APAP 투여 후 임의의 적합한 시간에 얻어진 혈장 및/또는 소변 시료를 본 발명의 모든 양상 및 실시태양의 방법에서 사용할 수 있다. 본 발명의 모든 양상 및 실시태양 중 하나의 바람직한 실시태양에서, 혈장 시료에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 측정하는데, APAP 투여 후 1분 내지 240분 사이; 더 바람직하게는 APAP 투여 후 1분 내지 180분 사이, 및 훨씬 더 바람직하게는 APAP 투여 후 1분 내지 120분 사이 또는 1분 내지 60분 사이에 측정을 한다. 본 발명의 모든 양상 및 실시태양 중 다른 바람직한 실시태양에서, 소변 시료에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 측정하는데, APAP 투여 후 120분 내지 480분 사이; 더 바람직하게는 APAP 투여 후 120분 내지 360분 사이, 및 훨씬 더 바람직하게는 APAP 투여 후 120분 내지 300분 사이 또는 120분 내지 240분 사이에 상기 측정을 한다.
임의의 적합한 가공 단계가 APAP-글루쿠로나이드 측정을 위한 혈장 및/또는 소변 시료를 준비하기 위하여 수행될 수 있다. 하나의 예시적 실시태양에서, 표준 기술을 사용하여 혈장 및/또는 소변 시료로부터 단백질을 침전시키고, 원심분리시키고; 그리고 나서 얻어진 상층액을 본 발명의 방법 중 측정 단계를 위해 사용한다.
혈장 및 소변 시료의 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 측정하는 것은 분석물 측정을 위해, 크로마토그래피(이를테면 고압 액체 크로마토그래피(HPLC), 기체 크로마토그래피(GC), GC-질량 분석기(GC-MS), 박막 크로마토그래피(TLC), 등), 핵자기 공명(NMR), 분광학 전기화학적 기술, 모세관 전기영동, 면역학적 기술을 포함하지만 이들로 한정되지 않는 임의의 적합한 기술에 의해 수행될 수 있다.
본원에서 사용된 "대조군"은 건강한 간을 가진 인간 피험자에게 측정되는 APAP-글루쿠로나이드의 양을 정상화하는 임의의 수단이다. 하나의 바람직한 실시태양에서, 대조군은 정상의 개인 또는 집단(즉, 관련된 간 장애를 앓고 있는 것으로 알려지지 않은)으로부터의 기정된 APAP-글루쿠로나이드 수준을 구성한다.
본원에서 사용된 대조군과 관련된 APAP-글루쿠로나이드의 "상승된" 양은 대조군을 초과하는 임의의 증가일 수 있고, 바람직하게는 통계학적으로 상당한 증가이다(예를 들어 p ≤ 0.05). 다양한 바람직한 실시태양에서, APAP-글루쿠로나이드의 상승된 수준은 적절한 대조군과 관련된 혈액 또는 소변 시료 중의 APAP-글루쿠로나이드의 양에서 1.2 배, 1.4 배, 1.5 배, 2 배, 3 배, 4 배, 5 배, 또는 더 큰 차이에 있다.
임의의 상기 실시태양 중 다른 바람직한 실시태양에서, 측정, 비교, 및 파악하는 단계는 자동화되어 있다; 이 실시태양에서, 임의의 상기 기술을 수행하기 위한 장치와 같은 자동화된 기구를 사용하여 이러한 단계를 수행할 수 있다. 이러한 장치들은 장치가 측정, 비교, 및 파악 단계를 수행하게 하는 지시를 포함한 기계 판독가능 저장 매체를 포함할 수 있다.
네 번째 양상에서, 본 발명은 대사물 측정 기기가 본 발명의 첫 번째, 두 번째, 및 세 번째 양상의 방법 중의 임의의 실시태양의 측정, 비교, 및 파악하는 단계를 수행하도록 하기 위한 일련의 지시를 포함하는 기계 판독가능 저장 매체를 제공한다. 본원에 사용된 용어 "컴퓨터 판독가능 매체"는 자기 디스크, 광학 디스크, 유기 메모리, 및 CPU에 의해 판독가능한 임의의 다른 휘발성(예, 임의 도달 기억장치("RAM")) 또는 비휘발성(예, 읽기 전용 기억장치("ROM")) 대용량 기억장치 시스템을 포함한다. 컴퓨터 판독가능 매체는 상호협력하거나 또는 상호 연결된 컴퓨터 판독가능 매체를 포함하는데, 이는 배타적으로 처리 시스템에 존재하거나 또는 처리 시스템과 가까이 있거나 떨어져 있을 수 있는 복수의 상호 연결된 처리 시스템들에 분배된다. 본원에 사용된 "대사물 측정 장치"는 크로마토그래피(이를테면 고압 액체 크로마토그래피(HPLC), 기체 크로마토그래피(GC), GC-질량 분석기(GC-MS), 박막 크로마토그래피(TLC), 등), 핵자기 공명(NMR)장치, 분광학 장치, 전기화학적 장치, 면역학적 검출 장치, 모세관 전기영동 장치를 포함하지만 이것들로 한정되는 것은 아닌, 본 발명을 수행하기 위해 대사물 측정을 수행할 수 있는 장치를 의미한다.
실시예 1: NASH 진단받은 인간에서 증가된 간의 유출 운송자 발현
NAFLD를 앓고 있는 환자들이 아세트아미노펜의 변경된 대사 및 성질을 보여주는지 여부를 결정하기 위하여 연구를 수행하였다. NIH 자금지원된 간 조직 조달 및 분배 시스템(LTPADS)으로부터 정상 간, 지방증, 지방간을 지닌 NASH 및 말기 NASH(잠재적인 간경화증)을 가진 환자로부터의 인간 간 시료를 얻었다.
면역블롯 단백질 분석. 7.5% 겔상의 SDS-PAGE로 전 세포 용해(20 μg/웰)를 분리했고 일정한 30 밀리암페어에서 밤새 PVDF 막으로 전달하였다. 인산염 완충 식염수와 Tween 20(PBST)에서 만든 5% 무지방 건조 우유에서 실온에서 1시간 동안 모든 막을 차단하였다. 그리고 나서 ABCC3, ABCC4(Abeam, Cambridge, MA) 단클론, 또는 GAPDH(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA) 다클론항체 중 어느 것으로 구성된 1차 항체용액(PBST-우유에서 1 : 2000으로 희석)에서 밤새 4 ℃에서 막을 인큐베이션하였다. 밤사이에 걸친 인큐베이션에 이어서 HRP 접합된 2차 항체(Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA)용액에서 1시간 동안 실온에서 막을 인큐베이션하였다. ECL 어드벤스 웨스턴 블로팅 디텍션 키트(GE Healthcare Life Sciences, Piscataway, NJ)를 사용하여 제조자의 프로토콜에 따라 항체 결합을 검출하였다.
도 2는 NAFLD를 가진 인간에서 간의 ABCC3 및 ABCC4의 발현을 보여준다. 정상 간과 비교할 때 지방증을 가진 간의 ABCC3 및 ABCC4 발현에 거의 변화가 없었다; 그러나, NASH의 각 단계를 가진 인간 간의 단백질의 발현에서 상당한 증가가 있다. 인간에서 이 운송자들의 발현은 큰 개인 간의 격차를 가진다고 이미 생각하였으나, 격차는 주로 질환 상태 때문일 것이라고 보인다.
실시예 2: ABCC2 의 세포 국소위치가 NASH 진단받은 인간 간에서 변경된다.
ABCC2의 기능을 조절하는 수단으로써 변경된 세포 트래픽킹은 약물 유도 독성 및 임신과 같은 다양한 조건에서 잘 기록되어왔다. ABCC2 활성을 위한 요구조건은 세관막에서의 적절한 국소위치이다. 세관막으로부터 막포로 ABCC2 운송자를 이동하는 것은 상대적으로 느린 단백질 분해/새로운 합성을 기다릴 필요없이 세포가 빠르게 운송 활성을 조절할 수 있게 하는 혁신적인 이점일 수 있다.
면역조직화학 염색. 요컨데, 포르말린 고정 파라핀 함몰 인간 간 시료로부터의 조직절편을 자일렌에서 탈파라핀화시키고 에탄올에서 재수화시키고, 시트르산염 버퍼(pH 6.0)에서 항원 복구를 하였다. 20분 동안 메탄올 중 0.3%(v/v) H2O2로 내부 퍼옥시다제 활성을 막았다. 남아있는 시약 인큐베이션을 위해 모든 슬라이드를 샌돈 시퀸자(Shandon Sequenza)™ 슬라이드 랙스(Thermo-Scientific, Waltham, MA)에 놓았다. 10분 동안 백그라운드 스니퍼(Background Sniper)™(Biocare Medical, Concord, CA)에서 모든 샘플을 인큐베이션하여 배경 염색을 막았다. 그리고 나서 4 ℃에서 밤새 쥐 단클론 MRP2 항체에서 시료를 인큐베이션하였다. 다음날, 각각 15분 동안 마우스 프로브 및 HRP 폴리머(Biocare Medical, Concord, CA)에서 시료를 인큐베이션하여 결합 항체를 검출하였다. 3분 동안 베타조이드(Betazoid)™ DAB (Biocare Medical, Concord, CA)에서 인큐베이션한 후 탈이온수에서 켄칭하여 발색현상을 수행하였다. 갓 여과한 헤마토실린 용액(Sigma-Aldrich, St. Louis, MO)으로 모든 시료를 대조염색하였다. 니콘 이클립스(Nikon Eclipse)™ E4000 현미경 및 소니 엑스웨이브(Sony Exwave)™ DXC-390 카메라로 모든 슬라이드의 이미지를 얻었다.
도 3에서 보이는 것과 같이, ABCC2 단백질은 정상의 건강한 환자로부터의 간의 세관막의 매우 빳빳한 모서리에 국소위치하지만, NASH 간에서 세관으로부터 떨어진 막포로 확실하게 모호해진다. ABCC2의 활성자리로부터 그것을 트래픽킹하는 이 메카니즘은 세포 스트레스 동안, 단백질 발현을 유지하면서 간세포가 중요한 내부 구성요소를 효율적으로 조절하고 보존하도록 한다. 막포에 ABCC2의 변경된 세포 트래픽킹은 담관의 청소보다, 혈장 잔류를 선호하도록 APAP-GLUC의 성질을 변경한다.
실시예 3: 아세트아미노펜 - 글루쿠로나이드 수준이 지방증 환자에서보다 소아의 NASH 환자의 혈장 및 소변에서 더 높다.
질환 상태가 생체검사로 확인된 소아 환자에게서 연구를 수행하였다. 24 명의 소아 환자들(12 - 18 살)은 혼입 인자(예, 알콜 소비, 불법 약물 사용) 및 아동 비만의 증가 유행이 적은 것으로 추정되기 때문에 예비 연구에 바람직하였다. 역으로, 소아 환자들은 단지 나이 때문에 발생될 수 있는 실제의 간 손상의 양이 한정되어 있고, 여기서 소아 환자들은 팽창 변성이 발전할 수 없고 지방 분해, 염증 및 섬유증에 한정되어 있다.
고성능 액체 크로마토그래피 분석. 혈장에서 APAP 및 그것의 대사물, 및 소변 시료를 이미 기술한 방법(Howie et al., 1977a; Chen et al., 2000; Slitt et al., 2003d)에 근거한 고성능 액체 크로마토그래피로 정량화하였다. 페노메넥스(Phenomenex)™ 시큐어러티 가드 컬럼 가드와 조르브맥스(Zorbmax)™ SB - Cl 8 역상 4.6 - mm x 25 - cm 컬럼을 사용하여 APAP 및 그것의 대사물을 분석하였고 12.5% HPLC - 등급 메탄올, 1% 아세트산, 및 86.5% 물로 구성된 이동상을 사용하여 용리하였고, 1.2 mL/분의 유속으로 등용매적으로 흐르게 하였다. 254 nm의 파장에서 대사물의 용리를 모니터하였다. 진정 표준의 잔류 시간과 비교하여 APAP 및 그것의 대사물의 잔류 시간을 결정하였다. 이 HPLC 방법은 시스테이닐 글리신 및 APAP의 시스테인 접합체를 분리하지 않기 때문에, 그들은 APAP-CG/CYS로써 함께 정량화되었다. 128 - nm 용매 모듈 및 166 - nm 검출기가 구비된 벡맨 시스템 골드(Beckman System Gold)™ HPLC 시스템(Beckman Coulter, Inc., Fullerton, CA)을 사용하여 시료를 분석하였다. 통합된 피크 면적을 기준으로 정량화하였다. APAP 및 그것의 접합된 대사물의 몰 흡광계수가 거의 같기 때문에(Howie et al., 1977b) APAP 표준 곡선을 사용하여 APAP 및 그것의 대사물 농도를 계산하였다. 혈장 및 소변 중 단백질을 침전시키기 위하여, 얼음 냉각된 메탄올로 시료를 1:2, 1:2, 및 1:3으로 각각 희석하였고 4 ℃에서 30분 동안 4,000 x g에서 원심분리하였다. HPLC 분석하기 전에 얻어진 상층액을 모으고 이동상에서 1:3 (소변) 또는 1:2 (혈장)으로 희석시켰다.
도 4는 APAP 투여 후 1시간 후 혈장 내 APAP 및 그것의 주요 대사물 농도를 보여준다. 표 1은 평균값과 중앙값 자료를 보여준다.
표 1
Figure pct00001
지방간염 환자의 혈장 내 APAP-GLUC 농도는 모든 시점에서 측정한 단순 지방증 환자에서보다 상당히 더 높았다. 부가적으로, 도 5는 정상의 건강한 자원자, 지방증 환자, 및 지방간염 환자의 소변 내 APAP 및 APAP 대사물의 농도를 보여준다. 4시간까지 NASH 환자와 다른 군 사이에서 APAP-GLUC의 수준에서의 차이는 소변 생산 및 배뇨의 시간 제약뿐만 아니라, 간 대사의 요건 및 차후 신장으로의 분배때문에 크게 다르지 않았다. 이 자료는 비침습성 혈액 검사 또는 소변 검사를 발전시켜 단순 지방증 환자로부터 NASH 환자를 설명할 수 있게 하는 가능성을 명확하게 나타낸다.
실시예 4: 아세트아미노펜 - 글루쿠로나이드 수준이 간섬유증이 없는 환자에서보다 소아의 간섬유증 환자의 혈장에서 더 높다
HPLC 측정 및 다른 실험적 상세내용은 실시예 3에 기술된 것과 같고; 도 6은 자료를 보여준다. 간섬유증은 경도(혈관 주변의 최소의 흉터형성), 중등도(간 혈관으로부터 확장되어나가는 흉터형성), 또는 중도(혈관 사이에 다리를 형성하는 흉터형성)로 조직학적으로 특징화되었다.
실시예 5: 아세트아미노펜 - 글루쿠로나이드 수준이 간 염증이 없는 환자에서보다 소아의 간 염증 환자의 혈장에서 더 높다
HPLC 측정 및 다른 실험적 상세내용은 실시예 3에 기술된 것과 같고; 도 6은 자료를 보여준다. 간 염증은 경도(2 미만의 염증 부위), 중등도(2 - 4의 염증 부위), 또는 중도(4 초과의 염증 부위)로 조직학적으로 특징화되었다.

Claims (19)

  1. (a) 간 장애의 위험이 있는 인간 피험자에게 아세트아미노펜(APAP)을 투여한 후 인간 피험자로부터 얻어진 혈장 시료 및/또는 소변 시료에서 아세트아미노펜(APAP)-글루쿠로나이드의 양을 결정하는 단계;
    (b) 혈장 시료 및 소변 시료 중 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 대조군과 비교하는 단계; 및
    (c) 혈장 시료 및 소변 시료 중 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양이 대조군에 비하여 상승한 경우 인간 피험자를 간 장애를 가진 것으로 파악하는 단계를 포함하는, 인간의 간 장애 진단 방법.
  2. 제1항에 있어서, 간 장애의 위험이 있는 상기 인간 피험자가 대사 증후군, 비만, 이상지질혈증, 인슐린 내성, 및 당뇨병 중 하나 이상을 앓고 있는 방법.
  3. 제1항에 있어서, 상기 인간 피험자가 비알콜성 지방간염(NASH)의 위험이 있는 방법.
  4. 제3항에 있어서, NASH의 위험이 있는 상기 인간 피험자가 비알콜성 지방간 질환; 대사 증후군, 비만, 이상지질혈증, 인슐린 내성, 및 당뇨병 중 하나 이상을 앓고 있는 방법.
  5. 제1항에 있어서, 상기 인간 피험자가 간섬유증의 위험이 있는 방법.
  6. 제5항에 있어서, 상기 인간 피험자가 α1-항트립신 결핍, 윌슨병, 과당혈증, 갈락토오스혈증, 유형 III, IV, VI, IX, 및 X 글리코겐 축적병, 혈색소침착증, 고셰병, 젤베거 증후군, 티로신혈증, 박테리아 감염, 바이러스 감염, 기생충 감염, 버드-키아리 증후군, 알콜 중독, 약물 중독, 심장기능 상실, 간정맥 폐쇄병, 및 문정맥 혈전증으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 병태를 앓거나, 또는 이미 앓았던 방법.
  7. 제1항에 있어서, 상기 인간 피험자가 간염의 위험이 있는 방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기 인간 피험자가 알콜 중독, 약물 중독, 박테리아 감염, 바이러스 감염, 진균 감염, 원충 감염, 연충 감염, 스피로헤타 감염, 사코이드증, 궤양대장염, 및 크론병으로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 장애를 앓거나 이미 앓았던 방법.
  9. 제1 내지 8항 중 어느 한 항에 있어서, 혈장 시료에서 상기 APAP-글루쿠로나이드의 양을 측정하는데, APAP 투여 후 1분 내지 180분 사이에 상기 측정을 하는 방법.
  10. 제1 내지 8항 중 어느 한 항에 있어서, 소변 시료에서 상기 APAP-글루쿠로나이드의 양을 측정하는데, APAP 투여 후 120분 내지 480분 사이에 상기 측정을 하는 방법.
  11. 제1 내지 10항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 피험자에게 250 mg 내지 1000 mg의 APAP를 투여하는 방법.
  12. (a) 치료적 약물 처리가 필요한 인간 피험자에게 아세트아미노펜(APAP)을 투여한 후 인간 피험자로부터 얻어진 혈장 시료 및/또는 소변 시료에서 아세트아미노펜(APAP)의 양을 결정하는 단계;
    (b) 혈장 시료 및 소변 시료 중 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 대조군과 비교하는 단계; 및
    (c) 혈장 시료 및 소변 시료 중 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양이 대조군에 비하여 상승한 경우 인간 피험자를 약물 유해반응의 위험이 있는 것으로 파악하는 단계를 포함하는, 약물 유해반응의 위험이 있는 인간 피험자의 파악 방법.
  13. (a) 치료적 약물 처리가 필요한 인간 피험자에게 아세트아미노펜(APAP)을 투여한 후 인간 피험자로부터 얻어진 혈장 시료 및/또는 소변 시료에서 아세트아미노펜(APAP)의 양을 결정하는 단계;
    (b) 혈장 시료 및 소변 시료 중 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양을 대조군과 비교하는 단계; 및
    (c) 혈장 시료 및 소변 시료 중 하나 또는 둘 다에서 APAP-글루쿠로나이드의 양이 대조군에 비하여 상승한 경우 인간 피험자가 약물의 비표준 복용량을 받아야하는지 결정하는 단계를 포함하는, 인간 피험자에게 적당한 치료적 약물 복용량 결정 방법.
  14. 제12항 또는 제13항에 있어서, 상기 인간 피험자가 독소루비신, 시스플라틴, 엑토포사이드, 메토트렉세이트, 글루쿠로나이드화된 접합 약물, 글루타티온-접합 약물, 및 술페이트-접합 약물로 구성된 군으로부터 선택된 하나 이상의 치료적 약물의 처리를 필요로 하는 방법.
  15. 제12 내지 14항 중 어느 한 항에 있어서, 혈액 시료에서 상기 APAP-글루쿠로나이드의 양을 측정하는데, APAP 투여 후 1분 내지 180분 사이에 상기 측정을 하는 방법.
  16. 제12 내지 15항 중 어느 한 항에 있어서, 소변 시료에서 상기 APAP-글루쿠로나이드의 양을 측정하는데, APAP 투여 후 120분 내지 480분 사이에 상기 측정을 하는 방법.
  17. 제12 내지 16항 중 어느 한 항에 있어서, 인간 피험자에게 250 mg 내지 1000 mg의 APAP를 투여하는 방법.
  18. 제1 내지 17항 중 어느 한 항에 있어서, 측정, 비교, 및 파악 단계가 자동화된 방법.
  19. 대사물 측정 장치가 제1 내지 18항 중 어느 한 항의 측정, 비교, 및 파악 단계를 수행하도록 하기 위한 일련의 지시를 포함하는 기계 판독가능 저장 매체.
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