KR20110043580A - 인공 신장 전구체 및 그 제조 방법 - Google Patents

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KR20110043580A
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Abstract

본 발명은, 생체외로 적출된 비인간 포유동물 메타네프론을 포함하는 인공 신장 전구체로서, 이 메타네프론이 생체외에서 동결 및 융해 처리가 행해진 것이며, 또한 생체외에서 이입된 포유동물의 간엽계 줄기세포를 포함하는 인공 신장 전구체 및 그 제조 방법을 제공하는 것을 목적으로 한다.

Description

인공 신장 전구체 및 그 제조 방법{ARTIFICIAL KIDNEY PRECURSOR AND PROCESS FOR PRODUCTION THEREOF}
본 발명은 인공 신장 전구체 및 그 제조 방법에 관한 것이다.
신장은 에리트로포이에틴의 주요한 생성 장기로서, 신부전에 따른 에리트로포이에틴 생성 저하에 의해 신성(腎性) 빈혈의 합병증이 발생한다.
최근, 이 신성 빈혈의 차세대 치료 방법으로서, 재생 의료 기술에 의해 에리트로포이에틴 생성능을 갖는 인공 신장이나 그 전구체를 제조하고, 이것을 신성 빈혈 환자에게 이식하는 방법이 제안되어 있다. 예컨대, 특허문헌 1에는, 분취한 포유동물 유래의 간엽계 줄기세포를 임신 포유동물 숙주 내의 태아 또는 임신 포유동물 숙주로부터 분리한 태아에게 이식하여 이 간엽계 줄기세포의 분화를 유도함에 따른 에리트로포이에틴 생성 오르가노이드(인공 신장) 전구체의 제조 방법에 있어서, 이 간엽계 줄기세포의 이식 부위는 태아에게 있어서의 신 형성 부위이고, 이식 시기는 숙주 면역계가 아직 면역 관용의 단계인 것을 특징으로 하는 에리트로포이에틴 생성 오르가노이드 전구체의 제조 방법이 개시되어 있다.
그러나, 이 방법에서는, 인공 신장 전구체를 환자에게 이식하기 직전에, 임신 포유동물의 양수를 채취하고, 이 전구체의 생물학적 안전성을 확인해야 하기 때문에, 그 조작이 번잡하다고 하는 문제점이 있다. 또한, 간엽계 줄기세포를 태아 내의 장래 신장이 될 수 있는 적절한 부위에 주입하지 않으면 안되고, 이 조작에 숙련을 필요로 한다. 또한, 숙주 면역계가 면역 관용에 있는 단계를 적당히 골라서 간엽계 줄기세포를 태아에게 주입하지 않으면 안되기 때문에, 치료 전체의 스케줄의 유연성이 부족하다. 이 방법에서는, 전배(全胚) 배양을 행하지 않으면, 기능적인 인공 신장 전구체를 얻을 수 없기 때문에, 배양에 의해 콘타미네이션의 리스크가 발생하여 배양 후의 번잡한 정제 조작이 필요하게 된다.
그래서, 1) 환자에게 이식하기 전의 인공 신장 전구체의 생물학적 안전성을 용이하게 검사할 수 있고, 2) 조작이 간단하며, 3) 치료 전체의 스케줄의 유연성을 확보할 수 있고, 또한 4) 배양 조작이 불필요한 인공 신장 전구체의 제조 방법의 개발이 요구되고 있다.
[특허문헌]
특허문헌 1 : 국제 공개 제2008/004598호 팜플렛
본 발명의 목적은, 1) 환자에게 이식하기 전의 인공 신장 전구체의 생물학적 안전성을 용이하게 검사할 수 있고, 2) 조작이 간단하며, 3) 치료 전체의 스케줄의 유연성을 확보할 수 있고, 또한 4) 배양 조작이 불필요한 인공 신장 전구체의 제조 방법을 제공하는 것이다.
상기 목적을 달성하기 위해 예의 연구한 결과, 태아로부터 적출된 메타네프론을 동결·융해하고, 융해된 메타네프론 속에 환자 유래의 간엽계 줄기세포를 이입함으로써 얻어지는 인공 신장 전구체를 이용함으로써, 상기 과제를 해결할 수 있는 것을 발견하여 본 발명을 완성시켰다.
즉, 본 발명은 이하에 관한 것이다.
[1] 생체 외으로 적출된 비인간 포유동물 메타네프론을 포함하는 인공 신장 전구체로서, 이 메타네프론이 생체외에서 동결 및 융해 처리가 행해진 것이며, 또한 생체외에서 이입된 포유동물의 간엽계 줄기세포를 포함하는 것인 인공 신장 전구체.
[2] 상기 메타네프론은, MHC의 표출이 아직 미숙한 단계에 있는 포유동물 태아의 메타네프론인 것인 [1]에 기재된 인공 신장 전구체.
[3] 포유동물의 대망(omentum)에 이식되면, 에리트로포이에틴 생성능을 획득할 수 있는 것인 [1]에 기재된 인공 신장 전구체.
[4] 이하의 공정을 포함하는 것인 인공 신장 전구체의 제조 방법:
(I) 생체외로 적출된 포유동물 메타네프론을 동결시키는 것;
(II) 동결된 포유동물 메타네프론을 융해하는 것; 및
(III) (I)의 동결 전 또는 (II)의 융해 후에, 포유동물의 간엽계 줄기세포를 생체외에서 메타네프론 내로 이입하는 것.
[5] (I)에서 이용되는 메타네프론은, MHC의 표출이 아직 미숙한 단계에 있는 포유동물 태아로부터 생체외로 적출된 메타네프론인 것인 [4]에 기재된 방법.
[6] 인공 신장 전구체가, 포유동물의 대망에 이식되면, 에리트로포이에틴 생성능을 획득할 수 있는 것인 [4]에 기재된 방법.
본 발명의 방법을 이용하면, 이식 전에 인공 신장 전구체의 생물학적 안전성을 용이하게 검사할 수 있다. 또한, 본 발명의 방법을 이용하면, 간단한 조작으로 인공 신장 전구체를 제조하는 것이 가능하다. 또한, 본 발명의 방법을 이용하면, 동결 보존한 메타네프론을 사용함으로써, 원하는 타이밍에 인공 신장의 전구체를 제조할 수 있기 때문에, 치료 전체의 스케줄을 유연하게 설계할 수 있다. 또한, 본 발명의 방법은 배양 조작을 실질적으로 필요로 하지 않기 때문에, 콘타미네이션의 리스크가 없고, 배양 후의 번잡한 정제 조작이 불필요하다.
본 발명은, 생체외로 적출된 포유동물 메타네프론을 포함하는 인공 신장 전구체로서, 이 메타네프론이 생체외에서 동결 및 융해 처리가 행해진 것이며, 또한 생체외에서 이입된 포유동물의 간엽계 줄기세포를 포함하는 인공 신장 전구체를 제공하는 것이다.
본 발명에 있어서, 「인공 신장」이란, 단일 세포가 아니라, 세포 조직체로서, 신장이 원래 갖는 기능인 에리트로포이에틴 생성능을 갖는 것을 말한다. 본 발명에 있어서의 「인공 신장」은, 혈액 속의 노폐물이나 수분을 여과하고, 뇨를 배출하는 기능을 갖고 있지 않아도 좋다. 인공 신장은, 그 표면을 제외하고, 각 세포가 서로 3차원적으로 접촉하고 있으며, 인접한 세포끼리가 다양한 세포간 결합을 통해 정보 교환을 하고, 단순히 에리트로포이에틴을 생성할 뿐만 아니라, 에리트로포이에틴 생성 조정능을 가질 수 있다.
「전구체」란, 생체 내에 놓여짐으로써 인공 신장으로 변환되는 조직을 말한다. 「전구체」는, 에리트로포이에틴 생성능 및 생성 조정 능력에 필요한 인자를 갖지만, 환경적 요인에 의해, 에리트로포이에틴 생성능 및 생성 조정능을 발휘하지 않는 상태에 있다. 인공 신장 전구체는, 포유동물의 대망에 이식되면, 에리트로포이에틴 생성능을 획득할 수 있다.
「에리트로포이에틴 생성 조정능」이란, 수혜자(환자)의 체내에서 에리트로포이에틴이 정상적인 상태에 비하여 많이 필요할 때(빈혈시 등)에는, 에리트로포이에틴을 다량(빈혈을 개선하는 데 필요한 양)으로 생성해 내고, 수혜자(환자)가 정상적인 상태일 때(빈혈이 개선되었을 때 등)에는, 체내의 정상적인 상태를 유지하기 위해서 필요한 양의 에리트로포이에틴을 생성할 수 있는 능력을 의미한다. 즉, 본 발명에 따른 인공 신장은, 종래의 에리트로포이에틴 생성 세포에 비하여 수혜자(환자)에게 필요한 양의 에리트로포이에틴을 생성할 수 있는 점 및 대망 내의 혈관으로부터 필요한 영양을 받아들임으로써 장기간 계속해서 에리트로포이에틴을 생성할 수 있는 점에서 우수하다.
본 발명에 있어서, 「메타네프론」이란, 포유동물의 태아에 있어서의 신장 발생 상당 부위를 말한다. 본 발명에 있어서 사용되는 메타네프론은, 신장의 아세포가 발달 개시 전인 맹아(萌芽) 상태에 있는 것이 바람직하다. 메타네프론은, 포유동물 태아의 요관아 발아 부위의 주위, 보다 상세하게는 체절과 측판 사이에 위치한다. 메타네프론은, 바람직하게는, 후신(後腎) 형성 중배엽이다.
메타네프론이 유래되는 포유동물로서는, 예컨대, 마우스, 래트, 햄스터, 마멋 등의 설치류나 토끼 등의 실험동물, 돼지, 소, 염소, 말, 양, 밍크 등의 가축, 개, 고양이 등의 페트, 인간, 원숭이, 붉은털원숭이, 마모셋, 오랑우탄, 침팬지 등의 영장류 등을 들 수 있다. 포유동물은 바람직하게는 래트 또는 돼지이다.
메타네프론은 포유동물의 태아로부터 생체외로 적출된다. 이 태아로서는, MHC(주요 조직 적합 항원 복합체)의 표출이 아직 미숙한 것이 적합하게 이용된다. 이 시기의 메타네프론을 사용함으로써, 수혜자에게 인공 신장 전구체를 이식했을 때의 면역 반응을 회피할 수 있다. 태아가 영장류 이외의 포유동물인 경우는, 이종 항원(알파·갈(alpha-Gal) 등의 당쇄 항원)이 나오기까지의 기간에 적출하는 것이 바람직하다. 예컨대, 래트를 이용한 실험에서는, 통상 E[스테이지 배일(胚日)] 9∼16, 바람직하게는 E10∼15, 보다 바람직하게는 E11∼14의 태아가 이용된다. 그 밖의 포유동물에게 있어서도, 동일한 스테이지의 태아를 적합하게 사용할 수 있다. 그러나, 그 전후의 스테이지도, 조건을 선정함으로써 적용할 수 있다. 태아로부터의 메타네프론의 적출은, 실체 현미경 등을 이용하여 행할 수 있다.
메타네프론의 동결 처리는, 포유동물의 조직이나 세포를 동결시킬 때에 통상 이용되는 동결 보존액 속에서 행해진다. 이 동결 보존액은, 통상 DMSO, 글리세린 등의 동결 보호제를 포함한다. 동결 보호제의 농도는 통상 5∼30 중량%, 바람직하게는 10∼20 중량%의 범위 내이다. 이 보존제는, 혈청을 함유하고 있어도 좋다. 혈청의 농도는 통상 5∼50 중량%, 바람직하게는 10∼30 중량%이다. 바람직한 동결 보존액으로서는, DMSO 및 FCS를 함유하는 ET-KYOTO액, 셀뱅커(등록상표) 등을 들 수 있다.
메타네프론을 동결시킴으로써, 수혜자(환자)에게 인공 신장 전구체를 이식했을 때의 면역반응을 억제할 수 있다.
동결시킨 메타네프론은, 동결시킨 상태로 반영구적으로 보존할 수 있고, 필요에 따라 융해·기면(起眠)하여 사용할 수 있다. 동결 보존시의 온도는 통상 -80∼-200℃, 바람직하게는 -196℃(액체 질소 중)이다. 메타네프론의 동결 보존에 의해 원하는 타이밍에 인공 신장 전구체를 제조할 수 있기 때문에, 치료 전체의 스케줄을 유연하게 설계할 수 있다.
동결시킨 메타네프론은, 통상적인 방법에 따라 생리적인 배양액 속에서 융해 처리를 행한다. 융해의 방법도 특별히 한정되지 않지만, 예컨대, 37℃의 항온조 내에 동결 튜브를 띄우고, 동결시킨 메타네프론에 생리적인 배양액을 적하함으로써 융해한다. 동결 보존액의 혼입을 제거하기 위해서, 적합하게는, 융해된 메타네프론을 생리적인 배양액으로 세정한다.
본 발명의 인공 신장 전구체에 사용되는 메타네프론은, 생체외에서 이입된 포유동물의 간엽계 줄기세포를 포함한다.
「간엽계 줄기세포」란, 미분화의 상태로 증식하며, 골아세포, 연골아세포 및 지방아세포 등의 전부 또는 몇 개로의 분화가 가능한 줄기세포 또는 그 전구세포의 집단을 광의로 의미한다. 본 발명에 있어서 사용되는 간엽계 줄기세포는 신장의 에리트로포이에틴 생성 세포로의 분화능을 갖는다.
간엽계 줄기세포가 유래되는 포유동물로서는, 예컨대, 마우스, 래트, 햄스터, 마멋 등의 설치류나 토끼 등의 실험동물, 돼지, 소, 염소, 말, 양, 밍크 등의 가축, 개, 고양이 등의 페트, 인간, 원숭이, 붉은털원숭이, 마모셋, 오랑우탄, 침팬지 등의 영장류 등을 들 수 있다. 포유동물은 바람직하게는 래트 또는 인간이다.
간엽계 줄기세포가 유래되는 포유동물은, 바람직하게는 본 발명의 인공 신장 전구체의 이식이 의도되는 수혜자와 동일한 동물 종이다. 가장 바람직하게는, 수혜자 본인의 간엽계 줄기세포가 이용된다.
간엽계 줄기세포는, 포유동물의 골수액, 말초혈, 제대혈 등으로부터 공지의 일반적인 방법으로 채취할 수 있다. 예컨대, 골수 천자(穿刺) 후의 조혈 줄기세포 등의 배양, 계대에 의해 인간 간엽계 줄기세포를 단리시킬 수 있다(Journal of Autoimmunity, 30(2008) 163-171).
생체로부터 단리된 간엽계 줄기세포는, 적절한 배지 속에서 접착 배양함으로써, 그 분화능을 유지하면서 시험관 내(in vitro)에서 증폭할 수도 있다. 이와 같이 시험관 내에서 증폭된 간엽계 줄기세포도 본 발명의 범위 내이다. 배지로서는, 예컨대 DMEM, EMEM, RPMI-1640, F-12, α-MEM, MSC 성장 배지(Bio Whittaker) 등이 이용된다. 배양 온도는 통상 약 30℃∼40℃의 범위이며, 바람직하게는 약 37℃이다. CO2 농도는 통상 약 1%∼10%의 범위이며, 바람직하게는 약 5%이다. 습도는 통상 약 70%∼100%의 범위이며, 바람직하게는 약 95%∼100%이다. 높은 분화능을 유지하기 위해서, 배양은 2∼5 계대 이상은 하지 않는 것이 바람직하다.
메타네프론 내로의 간엽계 줄기세포의 이입은, 메타네프론의 동결 전 또는 융해 후에 행해진다. 예컨대, 실체 현미경 하에서 마이크로 피펫 등을 사용하여 간엽계 줄기세포를 메타네프론 내로 주입한다. 이입하는 세포의 수는 메타네프론의 크기 등에 기초하여 적절히 설정되지만, 1개의 래트 메타네프론에 대해, 통상 약 104∼106개(예컨대, 5×104개) 정도의 간엽계 줄기세포를 주입한다.
이입에 있어서는, 생리적인 배양액에 현탁된 간엽계 줄기세포를 이용하여도 좋지만, 동결 보존 후의 천자시에 있어서의 세포내액의 누출 방지의 관점에서, 세포외 매트릭스 성분[라미닌, 콜라겐 타입 IV, 엔탁틴, 헤파란황산프로테오글리칸, 매트리겔(등록상표) 등]을 함유하는 겔 속에 봉입된 간엽계 줄기세포가 적합하게 이용된다.
본 발명의 인공 신장 전구체의 크기는, 에리트로포이에틴 생성 기관인 신장과 근사한 크기일 필요는 없고, 신장 전체의 1/50∼1/10의 크기로 충분하다.
본 발명의 인공 신장 전구체는, 이하의 조작을 행함으로써 제조할 수 있다:
(I) 생체외로 적출된 포유동물 메타네프론을 동결시키는 것;
(II) 동결된 포유동물 메타네프론을 융해하는 것; 및
(III) (I)의 동결 전 또는 (II)의 융해 후에, 포유동물의 간엽계 줄기세포를 생체외에서 메타네프론 내로 이입하는 것.
각 용어의 정의 및 조작의 상세한 내용은 전술한 바와 같다.
상기 조작에 의해 얻어진 본 발명의 인공 신장 전구체를, 기관 배양으로 처리하여도 좋지만, 콘타미네이션의 리스크가 없고, 배양 후의 번잡한 정제 조작이 불필요하기 때문에, 기관 배양은 행하지 않는 편이 바람직하다. 본 발명의 인공 신장 전구체는, 이러한 기관 배양의 조작을 행하지 않아도, 포유동물 내에 이식되었을 경우에, 충분한 에리트로포이에틴 생성능 및 생성 조정능을 획득할 수 있는 점에서 우수하다. 또한, 기관 배양은, 인공 신장 전구체를 필터 상에 두고, 그 아래의 접시에 적절한 배지를 첨가하고, 접시를 인큐베이터 내에 정치시킴으로써 행할 수 있다.
본 발명의 인공 신장 전구체를 수혜자 포유동물의 생체 내에 이식하면, 이 전구체는 수혜자의 체내에 생착되고, 이 전구체 내에 포함되는 간엽계 줄기세포가 증식되어 신장의 에리트로포이에틴 생성 세포로 분화된다. 이 결과, 인공 신장 전구체가 에리트로포이에틴 생성능 및 생성 조정능을 갖는 인공 신장으로 분화되고, 혈관으로부터 필요한 영양을 받아들임으로써, 장기간 계속해서 생체 내에서 에리트로포이에틴을 생성할 수 있다. 따라서, 본 발명의 인공 신장 전구체는, 에리트로포이에틴 관련 질환의 치료용으로서 유용하다. 본 발명의 인공 신장 전구체를 포유동물에게 이식함으로써, 이 포유동물에 있어서의 에리트로포이에틴 관련 질환을 치료할 수 있다.
본 발명에 있어서, 「에리트로포이에틴 관련 질환」이란, 신부전, 당뇨병, 궤양, 암, 감염, 투석, 수술 및 화학 요법에 관련된 빈혈을 포함한, 에리트로포이에틴 생성량의 저하에 관련된 질환이다. 특히, 만성신부전에 의한 빈혈의 경우는, 진행성의 신실질(腎實質) 및 간기능 파괴 때문에 에리트로포이에틴이 생성될 수 없어 순환중인 에리트로포이에틴 농도가 증가하지 않기 때문에 큰 문제가 되고 있다.
수혜자 포유동물로서는, 예컨대, 마우스, 래트, 햄스터, 마멋 등의 설치류나 토끼 등의 실험동물, 돼지, 소, 염소, 말, 양, 밍크 등의 가축, 개, 고양이 등의 페트, 인간, 원숭이, 붉은털원숭이, 마모셋, 오랑우탄, 침팬지 등의 영장류 등을 들 수 있다. 수혜자 포유동물은 바람직하게는 래트 또는 인간이다.
본 발명의 인공 신장 전구체를 포유동물에게 이식하는 방법은, 이 전구체가 수혜자의 체내에 생착되고, 이 전구체가 에리트로포이에틴 생성능 및 생성 조정능을 획득할 수 있는 한 특별히 한정되지 않지만, 바람직하게는 본 발명의 인공 신장 전구체는, 수혜자 포유동물의 대망에 이식된다. 대망으로의 이식은 통상의 외과적 처방에 의해 행할 수 있지만, 예컨대, 예리한 족집게로 이식할 조직을 잡고, 족집게 끝으로 대망의 지방 조직의 표면에 아주 조그맣게 절단선을 만들어, 그 속에 조직을 매립하는 방법을 들 수 있다. 또한, 내시경을 이용하여 대망에 이식할 수 있다.
본 발명의 인공 신장 전구체의 투여량은, 투여 대상, 대상 질환, 증상 등에 따라 차이는 있지만, 통상, 성인의 신성 빈혈 환자(체중 60 ㎏으로서)에게 돼지의 메타네프론으로부터 제조된 인공 신장 전구체를 이식하는 경우, 1회의 수술에 있어서 10개 정도의 메타네프론을 이식하여 환자의 빈혈 정도를 보면서 필요하다면 단계적으로 이식하는 개수를 늘리는 것이 적합하다. 다른 동물의 경우도, 60 ㎏당으로 환산한 양을 이식할 수 있다.
이하, 실시예를 나타내어 본 발명을 보다 구체적으로 설명하지만, 본 발명은 이하에 나타내는 실시예에 의해 전혀 한정되지 않는다.
실시예
임신 14일째 래트 태아로부터 메타네프론을 적출한 후, ET-Kyoto + 10% DMSO + 20% FCS 속에서 동결 보존하였다. 직경은 2 ㎜ 정도였다.
2일간 동결 보존 후, 동결 메타네프론을 융해하였다. 래트 간엽계 줄기세포는 매트리겔로 싸서 하나의 메타네프론에 1×104개를 주입하였다. 그 후, 같은 계의 래트의 대망에 메타네프론을 이식하였다.
이식하고 나서 7일 후, 메타네프론을 이식한 래트로부터 성장한 메타네프론을 적출하였다. 이식 개체는 2마리이고, 각각 성장한 메타네프론은 7개 중 3개, 6개였다. 메타네프론은 직경 6 ㎜∼8 ㎜로 성장하였다. 발육한 인공 신장 전구체로부터 Transplantation VOL85, No11, June 15 2008과 동일한 방법, 즉 에리트로포이에틴 생성 세포의 면역 염색 및 유전자 해석에 의해 에리트로포이에틴 생성을 확인하였다.
본 발명의 방법을 이용하면, 이식 전에 인공 신장 전구체의 생물학적 안전성을 용이하게 검사할 수 있다. 또한, 본 발명의 방법을 이용하면, 간단한 조작으로 인공 신장 전구체를 제조할 수 있다. 또한, 본 발명의 방법을 이용하면, 동결 보존한 메타네프론을 사용함으로써, 원하는 타이밍에 인공 신장의 전구체를 제조할 수 있기 때문에, 치료 전체의 스케줄을 유연하게 설계할 수 있다. 또한, 본 발명의 방법은 배양 조작을 실질적으로 필요로 하지 않기 때문에, 콘타미네이션의 리스크가 없고, 배양 후의 번잡한 정제 조작이 불필요하다.
본 출원은 일본에서 출원된 일본 특허 출원 제2008-173935호(출원일: 2008년 7월 2일)를 기초로 하고 있고, 그 내용은 본 명세서에 전부 포함되는 것이다.

Claims (6)

  1. 생체외로 적출된 비인간 포유동물 메타네프론을 포함하는 인공 신장 전구체로서, 상기 메타네프론은 생체외에서 동결 및 융해 처리가 행해진 것이며, 또한 생체외에서 이입된 포유동물의 간엽계 줄기세포를 포함하는 인공 신장 전구체.
  2. 제1항에 있어서, 상기 메타네프론은 MHC의 표출이 아직 미숙한 단계에 있는 포유동물 태아의 메타네프론인 인공 신장 전구체.
  3. 제1항에 있어서, 포유동물의 대망에 이식되면, 에리트로포이에틴 생성능을 획득할 수 있는 인공 신장 전구체.
  4. 이하의 공정을 포함하는 인공 신장 전구체의 제조 방법:
    (I) 생체외로 적출된 포유동물 메타네프론을 동결시키는 것;
    (II) 동결된 포유동물 메타네프론을 융해하는 것; 및
    (III) (I)의 동결 전 또는 (II)의 융해 후에, 포유동물의 간엽계 줄기세포를 생체외에서 메타네프론 내로 이입하는 것.
  5. 제4항에 있어서, (I)에서 이용되는 메타네프론은 MHC의 표출이 아직 미숙한 단계에 있는 포유동물 태아로부터 생체외로 적출된 메타네프론인 인공 신장 전구체의 제조 방법.
  6. 제4항에 있어서, 인공 신장 전구체는, 포유동물의 대망에 이식되면, 에리트로포이에틴 생성능을 획득할 수 있는 인공 신장 전구체의 제조 방법.
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