KR20110039843A - α-리포산 또는 이의 유도체에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 갑상선암 치료용 약학조성물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 α-리포산 또는 이의 유도체에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 갑상선암 치료용 약학조성물 및 건강식품에 관한 것으로, α-리포산 또는 이의 활성형인 디하이드로리포산은 갑상선 특이적인 유전자 예를들어, 소디움요오드동반수송체 (NIS), 갑상선 글로블린 (Tg) 또는 갑상선 전사인자-1 (TTF-1)의 발현을 촉진함으로써 갑상선암의 새로운 분화유도제로서 사용할 수 있다.
α-리포산, 갑상선암, 소디움요오드동반수송체, 갑상선 글로블린, 갑상선 전사인자-1, 분화유도제, 디하이드로리포산

Description

α-리포산 또는 이의 유도체에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 갑상선암 치료용 약학조성물{Pharmaceutical composition for treating thyroid cancer comprising at least one compound selected from α-lipoic acid or derivative thereof}
본 발명은 α-리포산 또는 이의 유도체에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 갑상선암 치료용 약학조성물 및 건강식품에 관한 것이다.
분화 갑상선암 환자의 약 10-15%가 초치료 후에 재발을 하고, 약 5%는 원격전이를 하는 것으로 알려져 있다. 방사선 요오드 치료는 재발되거나 전이된 갑상선암의 치료에 있어서 중요한 역할을 하고 있지만, 이전 보고에 따르면 약 30%의 재발 또는 전이된 분화 갑상선암에서 역분화 현상이 일어나는 것으로 알려져 있다.
분화도가 감소된 분화 갑상선암 세포는 소디움요오드동반수송체 (sodium iodine symporter; NIS)와 갑상선 글로블린 (thyroglobulin; Tg)의 발현이 감소되고, 요오드의 섭취능이 떨어지게 되면서 방사성 요오드 치료의 효과도 감소하게 된다.
분화도가 떨어진 갑상선암의 효과적인 치료를 위해 암세포의 분화도 및 요오드 섭취능을 호전시키는 분화유도제를 발굴하고자 하는 노력은 재발 또는 전이된 갑상선암 연구에 있어서 중요한 부분이나 아직 만족할 만한 효과를 보이는 약제는 없다.
현재까지 갑상선암 세포에서 분화유도제로 연구된 약물은 레티노익산 (retinoic acid; RA)과 히스톤 디아세틸레이즈 (histone deacetylase; HDAC) 억제제인 트리코스타틴 A (TSA), 뎁시펩타이드 (depsipeptide), 발프로산 (valproic acid), 탈메틸화제제인 5'-아자사이티딘(5'-azacytidine; AZT) 그리고 트로글리타존 (troglitazone) 등이 알려져 있다.
최근, 암세포에 대한 표적치료제로 개발 중인 마이토젠 활성화 단백질 (mitogen activated protein; MAP) 카이네이즈 신호전달 체계나 포스포이노시타이드 (phosphoinositide 3; PI3) 카이네이즈에 대한 선택적 억제제들도 갑상선암 영역의 분화유도 연구에 적용되고 있다.
하지만, RA에 의한 분화유도제가 사용된 임상 연구에서 방사능 요오드 섭취능을 증가시키는 효과는 0-20% 정도로 미미한 것으로 확인되었으며, 다른 분화유도제 역시 임상에 적용하기에는 한계가 있었다. 또한, 최근 연구에서 밝혀진 바와 같이 갑상선암 연구에 많이 사용되고 있는 많은 세포주들이 갑상선 암세포가 아닐 가능성이 높다는 연구가 발표됨에 따라 분화유도제의 발굴과 개발을 위한 연구는 대폭적인 수정이 불가피하다.
상기 종래기술의 문제점을 해결하기 위하여, 본 발명자들은 갑상선 여포암 세포주인 FTC-133 세포와 갑상선 유두암 세포주인 TPC-1 세포에서 기존에 알려진 분화유도제들과 α-리포산 (ALA) 또는 디하이드로리포산 (DHLA)을 사용하여 갑상선 특이 유전자 발현에 미치는 영향을 확인하였고, 처음으로 ALA 및 DHLA가 갑상선암 분화유도제로 이용될 수 있다는 점을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
이에, 본 발명의 목적은 갑상선암의 새로운 분화유도제를 제공하는 데에 있다.
상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 α-리포산 또는 이의 유도체에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 갑상선암 치료용 약학조성물을 제공한다. 상기 이의 유도체로는 α-리포산의 활성화형인 디하이드로리포산을 들 수 있다.
상기 α-리포산 또는 이의 유도체에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물은 갑상선 특이적인 유전자의 발현을 촉진하는 분화유도제로써, 상기 갑상선 특이적인 유전자로는 소디움요오드동반수송체 (NIS), 갑상선 글로블린 (Tg) 또는 갑상선 전사인자-1 (TTF-1)일 수 있다.
특히, α-리포산 또는 이의 유도체에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물은 갑상선 여포암 세포주인 FTC-133 세포에서 Tg 및 TTF-1의 유전자 발현을 증 가시킨 반면, 기존에 알려진 분화유도제들은 이러한 갑상선 특이적인 유전자 발현에 별다른 영향을 미치지 않는 것으로 나타났다. 또한, 갑상선 유두암 세포주인 TPC-1 세포에서 Tg 및 NIS의 유전자 발현을 증가시켰다.
또한, 본 발명의 약학조성물은 약학조성물의 제조에 통상적으로 사용하는 적절한 담체, 부형제 또는 희석제를 더 포함할 수 있다.
본 발명의 약학조성물에 포함될 수 있는 담체, 부형제 또는 희석제로는, 락토즈, 덱스트로즈, 수크로스, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨, 말티톨, 전분, 아카시아 고무, 알지네이트, 젤라틴, 칼슘 포스페이트, 칼슘 실리케이트, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 미정질 셀룰로스, 폴리비닐 피롤리돈, 물, 메틸히드록시벤조에이트, 프로필히드록시벤조에이트, 탈크, 마그네슘 스테아레이트 및 광물유를 들 수 있다.
본 발명에 따른 α-리포산 또는 이의 유도체에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물을 함유하는 약학조성물은, 각각 통상의 방법에 따라 산제, 과립제, 정제, 캡슐제, 현탁액, 에멀젼, 시럽, 에어로졸 등의 경구형 제형, 외용제, 좌제 및 멸균 주사용액의 형태로 제형화하여 사용될 수 있다.
제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 적어도 하나 이상의 부형제, 예를 들면, 전분, 칼슘카보네이트(calcium carbonate), 수크로스(sucrose) 또는 락토오스(lactose), 젤라틴 등을 섞어 조제한다.
또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트, 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조 제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로제라틴 등이 사용될 수 있다.
본 발명에서 사용하는 α-리포산 또는 이의 유도체는 현재 당뇨병 환자에서 사용되고 있고 부작용도 미미하다는 점에서 실제로 임상 적용이 가능한 약제이다. α-리포산 또는 이의 유도체는 돌연변이를 유발하거나 유전자에 독성이 거의 없는 약물로 알려져 있으며 하루에 체중 1kg 당 61.9 mg까지의 섭취에도 큰 부작용이 없다(Regul Toxicol Pharmacol 46: 29-41, 2006).
본 발명에서 사용한 10-100 μM의 α-리포산 또는 이의 유도체의 농도는 당뇨병 환자에서 흔히 사용하는 하루 600 mg 용량의 α-리포산 섭취 시에 보이는 혈중 농도인 700-800 μM 농도보다 오히려 낮다(Int J Clin Pharmacol Ther 36: 625-628, 1998). 따라서, α-리포산 또는 이의 유도체는 갑상선암 환자에서 실제 임상 적용이 바로 가능한 약제이다.
물론, 상기 α-리포산 또는 이의 유도체의 투여량은 투여경로, 질병의 정도, 성별, 체중, 나이 등에 따라서 증감될 수 있다.　따라서, 상기 투여량은 어떠한 면으로든 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
상기 약학조성물은 쥐, 생쥐, 가축, 인간 등의 포유동물에 다양한 경로로 투여될 수 있다. 투여의 모든 방식은 예상될 수 있는데, 예를 들면, 경구, 직장 또는 정맥, 근육, 피하, 자궁 내 경막 또는 뇌혈관 내(intracerebroventricular)주사에 의해 투여될 수 있다.
또한, 본 발명은 α-리포산 또는 이의 유도체에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 갑상선암 개선용 건강식품을 제공한다.
상기 건강식품은 상기 α-리포산 또는 이의 유도체 이외에 다른 식품 또는 식품 첨가물과 함께 사용되고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효성분의 혼합양은 그의 사용 목적 예를들어 예방, 건강 또는 치료적 처치에 따라 적합하게 결정될 수 있다.
상기 건강식품에 함유된 상기 α-리포산 또는 이의 유도체의 유효용량은 상기 약학조성물의 유효용량에 준해서 사용할 수 있으나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 범위 이하일 수 있으며, 유효성분은 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있음은 확실하다.
상기 건강식품의 종류에는 특별한 제한이 없고, 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등을 들 수 있다.
본 발명에 따른 약학조성물은 소디움요오드동반수송체 (NIS), 갑상선 글로블린 (Tg) 또는 갑상선 전사인자-1 (TTF-1)의 발현을 촉진함으로써 갑상선암의 새로운 분화유도제로서 사용할 수 있는 α-리포산 또는 이의 유도체를 유효성분으로 함유함으로써 갑상선암의 치료 또는 예방에 유용하게 사용될 수 있다.
이하, 하기 실시예를 통해 본 발명을 보다 상세하게 설명한다. 다만, 이러한 실시 예에 의해 본 발명이 한정되는 것은 아니다.
<실시예 1> 재료 준비 및 세포 배양
1. 재료 준비
분화 유도를 위해서 사용된 TSA, trans-retinoic acid (tRA), AZT는 Sigma (St. Louis, MO, USA)에서 U0126, LY2904002, ALA의 활성형인 디하이드로-α-리포산(dihydro-alpha lipoic acid; DHLA)은 calbiochem (La Jolla, CA, USA)으로부터 구입하였다. 세포 배양에 필요한 우태아 혈청, Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) 배양액, Ham's F12 배양액, Roswell Park Memorial Institute (RPMI) 배양액, 페니실린-스트렙토마이신계 항생제, 트립신-EDTA, 인산염 완충 용액 (PBS)은 Gibco BRL (New York, USA)에서 구입하였다.
세포 생존 분석을 위해서 사용된 Colorimetric Cell Counting Kit-8 (CCK-8) 은 Dojindo Laboratories (Kumamoto, Japan)에서 구입하였다. RNA 추출에 필요한 트리졸 용액은 Invitrogen (Carlsbad, CA, USA), RevertAid Fist Strand cDNA 합성키트는 Fermentas (Glen Burnie, MD, USA)에서 구입하였다. 니트로셀룰로스막은 Amersham Bioscience (Piscataway, NJ, USA), BioMix DNA 중합효소와 한천은 Bioline (Taunton, MA, USA)에서 구입하였다. 이차 항체인 HRP-conjugated anti-rabbit IgG와 anti-mouse IgG는 Vector Laboratories (Burlingame, CA, USA)에서 구입하였다.
그 외에 사용된 화학 약품들은 Sigma-Aldrich (St.Louis, MO, USA)에서 구입하였다.
2. 세포 배양
분화된 여포 갑상선암 세포주인 FTC-133과 유두 갑상선암 세포주인 TPC-1은 European collection of cell culture (ECACC)를 통해서 구입하였다. FTC-133 세포는 DMEM 배지와 Ham's F12 배지를 반반씩 혼합하여 만든 배지에, TPC-1 세포는 RPMI 배지에 2 mM의 글루타민, 10%의 우태아혈청, 그리고 항생제가 함유된 배지를 사용하였다. 배양액은 2-3일마다 교환하였으며 세포가 70∼80% 정도 자라면 계대 배양을 하였다.
분화 유도제를 처리할 때는 60mm 배양 접시에 1 x 106 cells개의 세포를 분주하여 70% 정도 자랐을 때 배양액으로 바꾸어 주고 정해진 농도의 분화 유도제들을 처리하였다. 세포 사멸을 보기 위한 실험에서는 96 우물 배양판에 5 x 103 개씩 의 세포를 분주하여 48시간 후에 약물을 처리하였다.
RNA 추출을 위한 실험에서 60mm 배양 접시에 1 x 106 cells개의 세포를 분주하여 48 시간 후에 일정 농도의 약물이 포함된 배지로 교환하였으며 ALA는 72시간 동안 처리하였으나, 그 외 약물들은 48시간 동안 처리하였다.
<실시예 2> 세포 생존 분석 (Cell viablility assay)
분화 유도제들이 FTC-133 세포의 생존에 미치는 영향을 확인하기 위해서, MEK1/2 억제제인 U0126, PI3 카이네이즈 억제제인 LY2904002, DNA 메틸트랜스페레이즈 (DNMT) 억제제인 5'-아자사이티딘 (AZT), 히스톤 디아세틸레이즈 (HDAC) 억제제인 트리코스타틴 A (TSA), 레티노익산 수용체 리간드로써 분화유도체로 알려진 트랜스-레티노익산 (tRA), 그리고 항산화제로 알려진 α-리포산 (ALA)을 48 시간 동안 농도별로 처리한 후, CCK-8을 이용한 발색 분석법을 사용하였다.
96 우물 배양판에 각 우물 당 5 x 103 개씩의 세포를 분주하고 2일 후 정해진 농도의 분화 유도제가 포함된 배양액으로 갈아주고 48시간 동안 세포 배양기에 배양하였다. 배양액을 제거하고 PBS 용액으로 2번 세척하고 CCK-8 의 농도가 10%가 되도록 혈청을 포함하지 않은 배양액과 희석하여 각 우물마다 100 μL씩 첨가하였다.
세포 배양기에서 1-4시간 동안 배양한 후 세포의 탈수소효소의 활성도에 의한 포마잔(formazan) 염료 발색을 측정하기 위해 Spectramax Microplate 분광 광도계 (Molecular Devices, Sunnyvale, CA)에서 450 nm의 파장으로 흡광도를 측정하였 으며, 각 실험은 독립적으로 3회 반복 실행하여 평균치를 구하였다.
그 결과, 도 1과 같이 U0126에서 20 μM, LY294002에서는 5 μM 정도의 농도에서 세포 생존이 80% 정도 억제되었다(도 1A 및 도 1B 참조). TSA, RA 및 AZT 에서는 각각 50 μM, 0.5 μM, 10 μM 정도의 농도에서 80% 정도 세포 생존이 억제되었다(도 1C, 도 1D 및 도 1E 참조). 반면 ALA는 200 μM 농도에서도 세포의 생존은 약 10% 정도만 억제되었다(도 1F 참조).
<실시예 3> FTC-133 세포에서 RNA 분리와 역전사 중합효소 연쇄반응 (RT-PCR)
갑상선암 세포의 분화 유도 효과를 확인하기 위해서 세포의 생존이 80% 정도 억제되는 농도와 그 1/5 이 되는 농도에서 48시간 동안 약물을 처리하고 갑상선-특이 단백질의 mRNA 양 변화를 다음과 같이 살펴보았다.
FTC-133 세포로부터 Trizol을 이용하여 RNA를 추출하였다. 2 ㎍의 RNA에서 RevertAid First Stand cDNA 합성 키트를 이용하여 첫 가닥의 cDNA를 합성하였다. 역전사 중합효소 연쇄반응 (RT-PCR)에 사용되는 글리세르알데히드 3-포스페이트 디하이드로게네이즈 (GAPDH), Tg, paired box 8 (PAX-8), 티로이드 전사 인자-1 (TTF-1) 및 NIS 유전자 시동체 (primer)들의 염기서열과 증폭된 생성물의 크기, 합성(annealing) 온도 그리고 반응 주기는 다음 표 1과 같다.
94ㅀC, 45초간 변성(denaturation), 기술된 온도에서 45초 동안 합성하였으며 72ㅀC, 45초간 신장 (extension)되는 과정을 표 1에 기술된 반응 주기에 따라서 반응시켰다. RT-PCR의 생성물은 1% 한천 젤에서 전기영동하였으며 Gel-doc 시스템 을 이용하여 사진을 찍어 확인하였으며, GAPDH의 양을 기준으로 상대적인 mRNA 발현량을 비교하였다.
유전자 유전자 은행 시동체 염기서열 산물크기 (bp) PCR 조건 서열번호
GAPDH NM 002046 정방향 5’-CGAGATCCCTCCAAAATCAA-3’ 321 55℃
25 cycles		 1
역방향 5’-GTCTTCTGGGTGGCAGTGAT-3’ 2
Tg NM 003235.4 정방향 5'-CCATTTCTGCTGGAGCTTTC-3' 433 58℃
30 cycles		 3
역방향 5'-TCAGAAGTCATGCAGGCAAC-3' 4
PAX-8 NM 003466.3 정방향 5'-GGCTCCACCTACTCCATCAA-3' 438 53℃
30 cycles		 5
역방향 5'-GGAAGGGGTGGAGCTAGAAC-3' 6
TTF-1 NM 003317.3 정방향 5'-ACGACTCCGTTCTCAGTGTCTG-3' 70 58℃
30 cycles		 7
역방향 5'-GCCCTCCATGCCCACTTT-3' 8
NIS　 NM 000453.1 정방향 5'-CTCCCTGCTAACGACTCCAG-3' 302
　		 58.2℃
30 cycles		 9
역방향 5'-TTGTTTCCAGTGGGGAGTTC-3' 10
그 결과는 도 2와 같다. 즉, 사람의 정상 갑상선 조직을 양성 대조군으로 사용하였으며 정상 갑상선 조직에서는 4가지 갑상선 특이 유전자의 발현을 모두 확인할 수 있었다. 약물을 처리하지 않은 상태에서 FTC-133 세포는 PAX-8과 TTF-1 mRNA가 잘 발현됨을 확인할 수 있었고, Tg mRNA의 발현량은 정상 갑상선 조직에 비해서 상대적으로 적었다. 또한, NIS mRNA는 FTC-133 세포에서 거의 발현되지 않은 것을 확인하였다.
FTC-133 세포에 U0126, LY29004002 및 TSA를 정해진 농도로 48시간 동안 처리한 후, 4가지 갑상선 특이 유전자들의 mRNA발현에는 변화가 없었다(도 2A). RA를 0.1 μM, 0.5 μM씩 처리한 경우에는 PAX-8과 TTF-1 mRNA의 발현에는 변화가 없었으나, Tg mRNA의 발현량이 상대적으로 증가되는 것을 확인할 수 있었다(도 2B). AZT을 처리한 후에는 mRNA 발현량에 큰 변화를 보이지 않았다(도 2B).
또한, 도 3과 같이, FTC-133 세포에서 ALA에 의해서 PAX-8과 NIS의 발현에는 변화가 없었으나, Tg mRNA의 발현량은 농도에 따라서 증가됨을 확인할 수 있었다. 또한, TTF-1 mRNA의 발현량도 10 μM 농도에서부터 증가되는 것을 확인할 수 있었다. 이러한 ALA에 의한 TTF-1 및 Tg mRNA의 증가 효과는 48시간 이후부터 유의하게 나타났다.
<실시예 4> 실시간 역전사 중합 효소 연쇄 반응 (Real-time quantitative PCR)
ALA 10 μM과 100 μM 농도로 72시간 처리한 후에 얻은 RNA를 통해서 만든 cDNA에서 real-time PCR로 Tg의 발현량의 변화를 정량화하였다.
즉, 정해진 농도의 ALA를 처리한 후에 각 시료에서 합성된 cDNA 단편을 주형으로 하였으며, 증폭된 유전자의 정량 분석을 위해 SYBR Green을 사용하였다. Real-time PCR에 사용한 시동체는 다음과 같다. β-액틴을 위한 시동체로, 서열번호 11 (5′-AGT ACT CCG TGT GGA TCG GC-3′)과 서열번호 12 (5′-GCT GAT CCA CAT CTG CTG GA-3′), Tg를 위한 시동체로, 서열번호 13 (5′-GTG CCA ACG GCA GTG AAG T-3′)과 서열번호 14 (5′-TCT GCT GTT TCT GTA GCT GAC AAA-3′)를 사용하였다.
96 우물판을 사용하였으며 ABI Prism 7000 Sequence Detector (Perkin-Elmer Corp. PE Applied Biosystems)를 이용하였다. 95℃, 15초에서 변성, 60℃, 1분에 결합, 72℃, 30초에 신장되는 조건에서 40 주기를 반응시켰다. 각 조건 마다 실험은 독립적으로 3회 반복하였으며, 각 시료 별로 5번 독립적인 실험을 진행하여 평균과 표준 편차를 계산하였고, 결과는 SDS 7000 software로 분석하였다.
β-액틴의 발현량을 기준으로 Tg의 상대적인 발현량 변화를 확인한 결과, 도 4와 같이 10 μM 농도의 ALA에서 Tg mRNA는 1.3배 정도 증가하였으며, 100 μM 농도에서는 3.6배 증가되는 양상을 확인하였다.
<실시예 5> TPC-1 세포에서 RNA 분리와 역전사 중합효소 연쇄반응 (RT-PCR)
갑상선 유두암 세포주인 TPC-1에서 ALA와 그 활성형인 DHLA에 의한 NIS와 Tg의 유전자 발현을 확인하기 위해서 실시예 3과 같은 방법으로 RT-PCR을 시행하였다. ALA와 DHLA를 48-72시간 동안 100 μM 내지 2 mM의 다양한 농도로 TPC-1 세포에 처리한 후에 RNA를 분리하였으며 Tg와 NIS의 mRNA 발현을 확인하였다.
결과, 도 5와 같이 우측 상단에 사람의 갑상선 조직으로부터 얻은 양성 대조군에서는 NIS와 Tg의 발현을 확인할 수 있었으며, ALA와 DHLA를 48시간 처리한 경우에 NIS와 Tg의 발현이 500 μM 농도에서 증가됨을 확인할 수 있었다. 72시간 뒤에는 DHLA에 의한 NIS의 증가는 뚜렷하였으나 ALA에 의한 NIS 발현량 증가는 48시간에 비해서 줄어드는 양상이었다. DHLA에 의한 NIS의 발현은 500 μM 농도에서 가장 증가하였으며, Tg의 발현은 1 mM 농도에서까지 증가되는 양상이었다. ALA와 그 활성형인 DHLA에 의해서 갑상선 유두암 세포의 Tg와 NIS mRNA가 증가됨을 확인할 수 있었다.
이하, 본 발명의 α-리포산을 함유하는 약학조성물의 제제예를 설명하나, 본 발명은 이를 한정하고자 함이 아닌 단지 구체적으로 설명하고자 함이다.
<제제예 1> 산제의 제조
α-리포산 100 mg, 유당 100 mg 및 탈크 10 mg을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.
<제제예 2> 정제의 제조
α-리포산 100 mg, 옥수수전분 100 mg, 유당 100 mg 및 스테아린산 마그네슘 2 mg을 혼합한 후 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.
<제제예 3> 캡슐제의 제조
통상의 캡슐제 제조방법에 따라 α-리포산 100 mg, 옥수수전분 100 mg, 유당 100 mg 및 스테아린산 마그네슘 2 mg을 혼합하고 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.
<제제예 4> 주사제의 제조
통상의 주사제의 제조방법에 따라 1 앰플 당(2㎖) α-리포산 50 mg, 주사용 멸균 증류수 적량 및 pH 조절제 적량을 함유하여 제조하였다.
<제제예 5> 액제의 제조
통상의 액제의 제조방법에 따라 적량의 정제수에 α-리포산 50 mg, 이성화당 10 g 및 만니톨 5 g을 가하여 용해시키고 레몬향을 적량 가한 후 혼합한 다음 정제수를 가하여 전체 100㎖로 조절한 후 갈색병에 충진하여 멸균시켜 액제를 제조하였다.
<제제예 6> 건강식품의 제조
α-리포산 10 ㎎, 비타민 혼합물 적량(비타민 A 아세테이트 70 ㎍, 비타민 E 1.0 ㎎, 비타민 B 1 0.13 ㎎, 비타민 B 2 0.15 ㎎, 비타민 B 6 0.5 ㎎, 비타민 B 12 0.2 ㎍, 비타민 C 10 ㎎, 비오틴 10 ㎍, 니코틴산아미드 1.7 ㎎, 엽산 50 ㎍, 판토텐산 칼슘 0.5 ㎎) 및 무기질 혼합물 적량(황산제1철 1.75 ㎎, 산화아연 0.82 ㎎, 탄산마그네슘 25.3 ㎎, 제1인산칼륨 15 ㎎, 제2인산칼슘 55 ㎎, 구연산칼륨 90 ㎎, 탄산칼슘 100 ㎎, 염화마그네슘 24.8 ㎎)을 혼합한 다음 과립을 제조하고 통상의 방법에 따라 건강식품을 제조하였다.
도 1은 FTC-133 세포주에서 분화유도제에 의한 세포생존을 분석한 것이고(A: U0126, B: LY294002, C: TSA, D: RA, E: AZT, F:ALA),
도 2 및 도 3은 FTC-133 세포주에서 분화유도제에 의한 갑상선 특이 유전자 발현량을 나타낸 RT-PCR 결과이고,
도 4는 FTC-133 세포주에서 α-리포산에 의한 Tg 발현량을 정량화한 real-time PCR 결과이고,
도 5는 TPC-1 세포주에서 α-리포산과 그 활성형인 디하이드로-α-리포산에 의한 NIS와 Tg 발현량의 변화를 나타낸 RT-PCR 결과이다.
<110> University of Ulsan Foundation For Industry Cooperation <120> Pharmaceutical composition for treating thyroid cancer comprising alpha-lipoic acid <130> DP-2009-0418 <160> 14 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for GAPDH <400> 1 cgagatccct ccaaaatcaa 20 <210> 2 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for GAPDH <400> 2 gtcttctggg tggcagtgat 20 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for Tg <400> 3 ccatttctgc tggagctttc 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for Tg <400> 4 tcagaagtca tgcaggcaac 20 <210> 5 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for PAX-8 <400> 5 ggctccacct actccatcaa 20 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for PAX-8 <400> 6 ggaaggggtg gagctagaac 20 <210> 7 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for TTF-1 <400> 7 acgactccgt tctcagtgtc tg 22 <210> 8 <211> 18 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for TTF-1 <400> 8 gccctccatg cccacttt 18 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for NIS <400> 9 ctccctgcta acgactccag 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for NIS <400> 10 ttgtttccag tggggagttc 20 <210> 11 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for beta-actin <400> 11 agtactccgt gtggatcggc 20 <210> 12 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for beta-actin <400> 12 gctgatccac atctgctgga 20 <210> 13 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Forward primer for Tg <400> 13 gtgccaacgg cagtgaagt 19 <210> 14 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Reverse primer for Tg <400> 14 tctgctgttt ctgtagctga caaa 24

Claims (5)

  1. α-리포산 또는 이의 유도체에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 갑상선암 치료용 약학조성물.
  2. 청구항 1에 있어서, 상기 유도체는 디하이드로리포산인 것을 특징으로 하는 갑상선암 치료용 약학조성물.
  3. 청구항 1 또는 청구항 2에 있어서, 상기 화합물은 갑상선 특이적인 유전자의 발현을 촉진하는 분화유도제인 것을 특징으로 하는 갑상선암 치료용 약학조성물.
  4. 청구항 3에 있어서, 상기 갑상선 특이적인 유전자는 소디움요오드동반수송체 (NIS), 갑상선 글로블린 (Tg) 또는 갑상선 전사인자-1 (TTF-1)인 것을 특징으로 하는 갑상선암 치료용 약학조성물.
  5. α-리포산 또는 이의 유도체에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상의 화합물을 유효성분으로 함유하는 갑상선암 개선용 건강식품.
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