KR20110039842A

KR20110039842A - 이미다졸 화합물을 유효성분으로 포함하는 안구의 혈관 신생 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20110039842A
Application number: KR1020090096866A
Authority: KR
Inventors: 김태윤
Original assignee: 주식회사 바이오씨에스
Priority date: 2009-10-12
Filing date: 2009-10-12
Publication date: 2011-04-20
Also published as: WO2011046239A1

Abstract

본 발명은 화학식 I로 표시되는 이미다졸 화합물의 새로운 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 화학식 I로 표시되는 (E)-2-(2-((3,4-디하이드록시페닐)(4-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-이미다졸-1-일)메틸)벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)비닐설페이트를 유효성분으로 포함하는 안구의 혈관 신생 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다. 본 발명의 화합물은 안구 내에서 VEGF A와 FLK-1의 발현을 억제하여 혈관신생을 억제하는 효과를 나타낸다. 따라서, 본 발명의 약학적 조성물은 안구의 혈관신생 관련 질환을 예방 및 치료하는 데에 유용하게 사용될 수 있다.

이미다졸, 안구, 혈관신생, 치료

Description

이미다졸 화합물을 유효성분으로 포함하는 안구의 혈관 신생 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물{Composition for preventing and treating angiogenesis-related disease of eyes comprising imidazol compound as an active ingredient}

본 발명은 화학식 I로 표시되는 이미다졸 화합물의 새로운 용도에 관한 것으로, 보다 상세하게는 화학식 I로 표시되는 (E)-2-(2-((3,4-디하이드록시페닐)(4-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-이미다졸-1-일)메틸)벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)비닐설페이트를 유효성분으로 포함하는 안구의 혈관 신생 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물에 관한 것이다.

혈관신생(angiogenesis)이란 기존의 미세혈관으로부터 새로운 모세혈관이 형성되는 과정을 말한다. 혈관신생이 정상적으로 일어나는 경우는 배아의 발생, 조직 재생, 기관의 성장, 상처 치유, 여성의 생식기 계통의 주기적인 변화인 황체가 발달될 때이며, 이러한 경우에도 혈관신생은 엄격히 조절되어 진행된다(Folkman and Cotran, Int. Rev. Exp. Patho., 16:207-248, 1976). 혈관신생은 일반적으로 단백 질 분해효소에 의한 혈관 기저막의 분해, 혈관내피세포의 이동, 증식 및 혈관내피세포 분화에 의한 관강의 형성, 이로 인한 혈관의 재구성을 수반한다.

혈관신생은 분출성, 비-분출성 두가지 종류가 존재한다. 분출성 혈관신생은 혈관의 기저막과 세포간질의 분해로부터 시작된다. 혈관신생인자들은 혈관내피세포의 증식 및 이동을 촉진시키게 되고, 소관이 형성되면 가는 혈관과 융합성의 꽈리혈관들이 생겨난다. 그 후 새로운 혈관은 혈관주위세포의 보충으로 분화 및 성숙단계를 거친다. 신생혈관 생성과정은 기저막에 종료전달물질이 축적됨으로써 그 과정을 마치게 된다. 비분출성 혈관신생은 이미 존재하는 혈관내에서 내피세포의 분화가 유발되어 내강을 형성하는 경우이며 주로 종양이나 배아시기의 폐에서 관찰된다. 혈관신생단계에 있어서 각 단계에 알맞은 조치를 함으로써 새로운 혈관형성을 억제시킬 수있으며, 반대로 혈관신생을 촉진시킬 수도 있다. 내인성 자극물질과 억제물질 사이의 정상적인 균형은 성숙된 혈관생성을 일으켜서 정상적인 혈관의 형성을 유도한다. 하지만 이러한 균형이 깨어지는 경우에는 비정상적인 신생혈관이 생겨나게 된다.

혈관신생이 자율적으로 조절되지 못하고, 비정상적으로 발생되게 되면 여러 질환을 유발한다. 병리학적 상태에서 나타나는 혈관신생과 관련된 질환으로는 각종 암(종양)을 비롯하여 혈관기형, 동맥경화, 혈관유착, 부종성 경화증 등과 같은 혈관 질환, 각막이식성 혈관신생, 혈관신생성녹내장, 당뇨병성 망막증, 신생혈관에 의한 각막질환, 반점의 변성, 익상편, 망막 변성, 후수정체 섬유증식증, 과립성 결막염 등과 같은 안과 질환, 류마티스성 관절염, 전신성 홍반성 루푸스, 갑상선염 등과 같은 염증성 질환, 건선, 모세관 확장증, 화농성 육아종, 지루성 피부염, 여드름 등과 같은 피부과 질환 등이 있다(미국특허 제5,994,292호 대한민국 공개특허 특2001-66967; D'Amato R. J. et al., Ophtahlmol., 102:1261-1262, 1995; Arbiser J. L. J. Am. Acad. Derm., 34(3):486-497, 1996; O'Brien K. D. et al., Circulation,93(4):672-682, 1996; Hanahan D. et al., Cell, 86:353-364, 1996).

특히, 성인에게 있어 발생하는 안구내 혈관신생은 주로 병적인 상황으로서 여러 실명에 이르는 주요한 원인을 제공한다. 눈은 면역 특권을 가진 조직으로 이루어져 있으며, 각막은 혈관이 없다. 각막에서 신생혈관 생성은 투명성을 저해하여 시력저하를 가져오며, 각막이식 후 신생혈관의 생성은 이식거부 반응의 원인이 된다. 망막에서 신생혈관 생성은 비정상적인 혈관이 생성됨으로 혈액의 삼출현상이 일어나 망막신경세포의 퇴화를 유도한다. 연령관련 황반변성, 당뇨병성 망막병증, 신생혈관성 녹내장, 각막혈관신생, 미숙아성 망막병증 및 안구내 종양이 이러한 상황으로, 이러한 질환은 실명을 일으키는 가장 흔한 원인중 하나이다. 그러므로 어떠한 기전으로 혈관신생이 일어나는가를 명확히 규명하는 것은 실명을 예방할 수 있는 방법을 밝힐 수 있을 것으로 생각한다.

따라서 혈관신생의 기전에 대한 연구 및 이를 억제할 수 있는 물질의 발견은 혈관신생과 관련된 여러 질환의 예방 및 치료에 있어서 중요한 관심의 초점이 되고 있다. 현재 혈관신생 억제에 관한 연구는, 혈관신생의 과정에 있어서 강력한 유도인자로 알려져 있는 VEGF와 bFGF(basic fibroblast growth factor) 등의 작용을 억제하기 위하여 경쟁물질을 투여하는 방법과 암세포의 전이를 억제하기 위하여 혈관내피세포에서의 인테그린(integrin)의 발현을 조절하는 방법 등 다양한 방법으로 여러 가지 타켓 유전자를 대상으로 하여 진행되고 있으나, 아직까지는 매우 미비한 상태이다. 혈관신생 억제에 대한 연구는 혈관신생과 관계된 각종 질환의 진단, 치료 및/또는 예방에 응용될 수 있어 이에 대한 연구 및 개발이 계속 요구되고 있는 실정이다.

이에 본 발명자들은 혈관 신생으로 인한 안구 질환을 효과적으로 예방/억제/치료하기 위한 새로운 방법을 개발하고자 연구한 결과, 화학식 I로 표시되는 본 발명의 화합물이 안구, 특히 각막 및 망막에서 우수한 혈관신생 억제 효과를 나타냄을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

따라서 본 발명의 목적은 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 안구의 혈관 신생 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제공하는 것이다.

상기와 같은 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 안구의 혈관 신생 관련 질환의 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.

본 발명의 조성물은 하기 화학식 I로 표시되는 (E)-2-(2-((3,4-디하이드록시페닐)(4-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-이미다졸-1-일)메틸)벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)비닐설페이트((E)-2-(2-((3,4-dihydroxyphenyl)(4-(2-(dimethylamino)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)benzo[d][1,3]dioxol-5-yl)vinyl sulfate) 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하며, 안구의 혈관 신생관련 질환 예방 및 치료의 목적으로 사용될 수 있다.

본 발명의 화합물은 그 자체 또는 염의 형태, 바람직하게는 약학적으로 허용 가능한 염의 형태로 사용될 수 있다. 상기 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의하여 형성된 산 부가염이 바람직하다.

본 발명의 화합물은 당업계에 공지된 방법에 따라 추출, 분리하여 사용할 수 있으며, 또한, 당업계에 공지된 화학적 방법에 따라 화학적으로 합성될 수도 있다.

본 발명의 화합물은 안구 내에서 발생하는 혈관신생을 억제하며, 따라서, 이와 관련된 질환을 예방하거나 치료할 수 있는 효과가 있다. 이 때, 안구는 각막 또는 망막일 수 있으며, 바람직하게는 인간의 안구일 수 있다. 상기 질환, 즉 안구의 혈관 신생 관련 질환은 각막염증, 충혈, 당뇨병성 망막증, 황반부변성증, 맥락막신생혈관생성증, 신생혈관성 녹내장, 각막혈관신생, 미숙아성 망막병증 및 안구 종양 일 수 있다.

본 발명의 일실시예에서는 질산은으로 유도된 각막 혈관신생 모델에서 본 발명의 화합물의 나트륨염 5μg과 50μg을 결막하로 주사하고 혈관신생에 미치는 효과를 관찰하였다. 그 결과, 본 발명의 화합물 5μg 투여 군에서는 혈관신생 억제효과가 크지 않았으나, 본 발명의 화합물 50μg 투여군에서는 각막에서의 혈관신생이 억제된 것을 확인하였다.

본 발명의 다른 실시예에서는 망막에서의 혈관신생에 미치는 본 발명의 화합물의 효과를 레이져 손상에 따른 모델에서 관찰하였다. 그 결과, 레이져 손상을 받은 부위가 본 발명의 화합물 투여시 손상 정도가 감소됨을 확인하였다.

본 발명의 또다른 실시예에서는 본 발명의 화합물 처리에 따른 혈관신생 억제 기작을 확인하기 위하여, 본 발명의 화합물 처리시 각막에서 VEGF 및 VEGF 수용체 2(FLK-1)의 발현에 미치는 영향을 확인하였다. 그 결과, 신생혈관이 생성된 각막에서는 VEGF A와 FLK-1의 발현이 강하게 관찰된 반면, 본 발명의 화합물이 투여된 각막에서는 VEGF A와 FLK-1의 발현이 현저하게 줄어듬을 확인하였다.

따라서, 본 발명은 화학식 I로 표시되는 (E)-2-(2-((3,4-디하이드록시페닐)(4-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-이미다졸-1-일)메틸)벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)비 닐설페이트 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 안구의 혈관 신생관련 질환 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명의 화합물은 그 자체 또는 약학적으로 허용가능한 염의 형태로 사용될 수 있다. 상기에서 '약학적으로 허용되는'이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 통상적으로 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 것을 말하며, 상기 염으로는 약학적으로 허용 가능한 유리산(free acid)에 의하여 형성된 산 부가염이 바람직하다. 상기 유리산은 유기산과 무기산을 사용할 수 있다. 상기 유기산은 이에 제한되는 것은 아니나, 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 말레인산, 푸마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플로오로아세트산, 벤조산, 글루콘산, 메타술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 글루탄산 및 아스파르트산을 포함한다. 또한, 상기 무기산은 이에 제한되는 것은 아니나 염산, 브롬산, 황산 및 인산을 포함한다.

본 발명에 따른 약학적 조성물은 약학적으로 유효한 양의 본 발명의 화합물 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 단독으로 포함하거나 하나 이상의 약학적으로 허용되는 담체를 추가로 포함할 수 있다. 상기에서 "약학적으로 유효한 양"이란 음성 대조군에 비해 그 이상의 반응을 나타내는 양을 말하며 바람직하게는 비만을 치료 또는 예방하기에 충분한 양을 말한다. 본 발명에 따른 본 발명의 화합물의 약학적으로 유효한 양으로는 0.00001 내지 100 mg/day/kg 체중이다. 그러나 상기 약 학적으로 유효한 양은 질환 및 이의 중증정도, 환자의 연령, 체중, 건강상태, 성별, 투여 경로 및 치료기간 등과 같은 여러 인자에 따라 적절히 변화될 수 있다.

상기에서 "약학적으로 허용되는" 이란 생리학적으로 허용되고 인간에게 투여될 때, 활성성분의 작용을 저해하지 않으며 통상적으로 위장 장애, 현기증과 같은 알레르기 반응 또는 이와 유사한 반응을 일으키지 않는 비독성의 조성물을 말한다. 본 발명의 조성물은 상기 약학적으로 허용되는 담체와 함께 당업계에 공지된 방법으로 투여경로에 따라 다양하게 제형화될 수 있다. 투여 경로로는 이에 한정되지는 않으나 경구적 또는 비경구적으로 투여될 수 있다. 비경구적 투여 경로로는 예를 들면, 경피, 비강, 복강, 근육, 피하, 정맥 또는 눈의 초자체강 주사 등의 여러 경로가 포함된다.

본 발명의 약학적 조성물을 경구 투여하는 경우 본 발명의 약학적 조성물은 적합한 경구 투여용 담체와 함께 당 업계에 공지된 방법에 따라 분말, 과립, 정제, 환제, 당의정제, 캡슐제, 액제, 겔제, 시럽제, 현탁액, 웨이퍼, 안약 등의 형태로 제형화될 수 있다. 적합한 담체의 예로는 락토즈, 덱스트로즈, 수크로즈, 솔비톨, 만니톨, 자일리톨, 에리스리톨 및 말티톨 등을 포함하는 당류와 옥수수 전분, 밀 전분, 쌀 전분 및 감자 전분 등을 포함하는 전분류, 셀룰로즈, 메틸 셀룰로즈, 나트륨 카르복시메틸셀룰로오즈 및 하이드록시프로필메틸-셀룰로즈 등을 포함하는 셀룰로즈류, 젤라틴, 폴리비닐피롤리돈 등과 같은 충전제가 포함될 수 있다. 또한, 경우에 따라 가교결합 폴리비닐피롤리돈, 한천, 알긴산 또는 나트륨 알기네이트 등을 붕해제로 첨가할 수 있다. 나아가, 상기 약학적 조성물은 항응집제, 윤활제, 습윤제, 향료, 유화제 및 방부제 등을 추가로 포함할 수 있다.

또한, 비경구적으로 투여하는 경우 본 발명의 약학적 조성물은 적합한 비경구용 담체와 함께 주사제, 경피 투여제 및 비강 흡입제의 형태로 당 업계에 공지된 방법에 따라 제형화될 수 있다. 상기 주사제의 경우에는 반드시 멸균되어야 하며 박테리아 및 진균과 같은 미생물의 오염으로부터 보호되어야 한다. 주사제의 경우 적합한 담체의 예로는 이에 한정되지는 않으나, 물, 에탄올, 폴리올(예를 들어, 글리세롤, 프로필렌 글리콜 및 액체 폴리에틸렌 글리콜 등), 이들의 혼합물 및/또는 식물유를 포함하는 용매 또는 분산매질일 수 있다. 보다 바람직하게는, 적합한 담체로는 행크스 용액, 링거 용액, 트리에탄올 아민이 함유된 PBS(phosphate buffered saline) 또는 주사용 멸균수, 10% 에탄올, 40% 프로필렌 글리콜 및 5% 덱스트로즈와 같은 등장 용액 등을 사용할 수 있다. 상기 주사제를 미생물 오염으로부터 보호하기 위해서는 파라벤, 클로로부탄올, 페놀, 소르빈산, 티메로살 등과 같은 다양한 항균제 및 항진균제를 추가로 포함할 수 있다. 또한, 상기 주사제는 대부분의 경우 당 또는 나트륨 클로라이드와 같은 등장화제를 추가로 포함할 수 있다. 경피 투여제의 경우 연고제, 크림제, 로션제, 겔제, 외용액제, 파스타제, 리니멘트제, 에어롤제 등의 형태가 포함된다. 상기에서 "경피 투여"는 약학적 조성물을 국소적으로 피부에 투여하여 약학적 조성물에 함유된 유효한 양의 활성성분이 피부 내로 전달되는 것을 의미한다.

이들 제형은 제약 화학에 일반적으로 공지된 처방서인 문헌(Remington's Pharmaceutical Science, 15th Edition, 1975, Mack Publishing Company, Easton, Pennsylvania)에 기술되어 있다.

흡입 투여제의 경우, 본 발명에 따라 사용되는 화합물은 적합한 추진제, 예를 들면, 디클로로플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체를 사용하여, 가압 팩 또는 연무기로부터 에어로졸 스프레이 형태로 편리하게 전달 할 수 있다. 가압 에어로졸의 경우, 투약 단위는 계량된 양을 전달하는 밸브를 제공하여 결정할 수 있다. 예를 들면, 흡입기 또는 취입기에 사용되는 캡슐 및 카트리지는 적합한 분말 기제의 분말 혼합물을 함유하도록 제형화할 수 있다.

그 밖의 약학적으로 허용되는 담체로는 다음의 문헌에 기재되어 있는 것을 참고로 할 수 있다(Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995).

나아가, 본 발명의 약학적 조성물은 안구의 혈관신생 관련 질환을 예방 및 치료하는 효과를 가지는 공지의 화합물과 병행하여 투여할 수 있다.

참고로, 본 명세서에서 언급한 뉴클레오티드 및 단백질 작업에는 다음의 문헌을 참조할 수 있다(Maniatis et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N.Y.(1982); Sambrook et al., Molecular Cloning: A Laboratory Manual, 2d Ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press(1989); Deutscher, M., Guide to Protein Purification Methods Enzymology, vol. 182. Academic Press. Inc., San Diego, CA(1990)).

따라서, 본 발명의 화합물은 안구 내에서 VEGF A와 FLK-1의 발현을 억제하여 혈관신생을 억제하는 효과를 나타낸다. 따라서, 본 발명의 약학적 조성물은 안구의 혈관신생 관련 질환을 예방 및 치료하는 데에 유용하게 사용될 수 있다.

이하. 본 발명을 실시예에 의해 상세히 설명한다.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.

<실시예 1>

각막에서의 혈관신생 억제 효과 확인

각막에서의 혈관신생모델은 공지문헌(Riazi-Esfahani M, Peyman GA, Aydin E, Kazi AA, Kivilcim M, Sanders DR. Prevention of corneal: evaluation of various commercially available compounds in an experimental rat model. Cornea. 2006;25(7):801-5; Manzano RP, Peyman GA, Khan P, Carvounis PE, Kivilcim M, Ren M, Lake JC, Chㅹvez-Barrios P. Inhibition of experimental corneal neovascularisation by bevacizumab (Avastin). Br J Ophthalmol. 2007 Jun;91(6):804-7)을 참조하여 다음과 같이 만들었으며, 이를 이용하여 혈관신생 억제 효과를 확인하였다: 흰쥐 (Sprague Dawley rat, 8주령, 수컷)를 이용하여 질산은 용액 면봉으로 각막 중심에 직경 2mm의 손상을 주어 각막 손상을 유도하였다. 각막신생혈관 생성은 수술현미경 하에서 확인하였다. 각막 손상 후 3일에 각막신생혈관 유도 모델이 확립된 것을 확인한 후, 결막하로 20㎕ 용량으로 본 발명의 화합물을 5μg, 50μg을 주사하였다. 혈관신생의 평가는 각막 사진을 이용하였고, 평가는 Image J (NIH, USA) 프로그램을 이용하였다.

각막손상 유도 1주일 후 확인한 결과, 도 1에서 보듯이, 아무것도 처리하지 않은 정상 대조군(A)에서는 각막에 별다른 혈관신생이 확인되지 않았고, 본 발명의 화합물 5μg 투여 군(C)에서는 음성 대조군(B)과 마찬가지로 다수의 신생 혈관이 발생하여, 별다른 혈관신생 억제효과가 관찰되지 않았으나, 본 발명의 화합물 50μg 투여군(D)에서는 각막에서의 혈관신생이 억제된 것을 확인하였다. B와 D의 확대 사진(E, F)에서 혈관 생성억제 효과를 확실하게 비교 할 수 있다.

또한, 각막손상 유도 2주일 후 확인한 결과, 도 2에서 보듯이, 본 발명의 화합물 50μg 처리군에서 역시 혈관신생 억제효과가 관찰되었고, 공지된 혈관신생 억제 화합물인 아바스틴(AVASTIN)과 비교하여도 비슷한 억제효과를 보임을 확인하였다.

<실시예 2>

망막에서의 혈관신생 억제 효과 확인

동물은 갈색쥐인 브라운 노르웨이 랫트(Brown Norway rat; 8주령, 수컷)을 사용하였다. 레이져로 손상으로 유도된 망막 맥락막 신생혈관 생성 모델을 이용하였다. 레이져는 Zeiss 532s lazer를 이용하였고, 200mV, 30ms의 강도에서 망막의 브루크막(Bruch's membrane)을 손상시켰다. 망막에서의 혈관신생에 미치는 본 발명의 화합물의 효과는 레이져 손상 후 3일에 본 발명의 화합물을 초자체강내로 10㎕의 용량으로 주사하였고, 대조군은 식염수(saline)를 주사하고 2주 후에 관찰하였다.

망막혈관의 관찰은 덱스트란-FITC(Dextran-FITC) 25mg/kg 농도의 용액을 좌심실에 주사하고 5분 뒤에 안구를 적출하여 10% 포르말린 용액에 고정하였다. 고정 된 안구는 각막과 수정체를 분리 제거하고 슬라이드 글라스에 올려 형광 현미경에서 관찰되어졌다. 혈관생성은 레이져 손상 부위의 덱스트란-FITC의 강도와 누출로 확인하였다 (Edelman JL, Castro MR. Quantitative image analysis of laser-induced choroidal neovascularization in rat. Exp Eye Res. 2000;71(5):523-33.). 형광현미경 이미지를 저장하고 Image J (NIH, USA) 프로그램을 이용하여 누출된 형광강도를 측정하였다.

그 결과, 도 3에서 보듯이, 정상의 망막 혈관은 덱스트란-FITC 염색에 의하여 그물모양으로 보이는 것이 관찰되었다(도 3A). 대조군에서는 레이져 손상을 받은 부위에서 덱스트란-FITC의 누출이 관찰되었다(도 3B). 본 발명의 화합물 투여군에서는 레이져 손상된 부위에서 덱스트란-FITC의 누출 면적이 줄어든 것이 관찰되었다(도 3C).

이를 수치적으로 확인하기 위해, 형광강도를 이용하여 분석한 결과에서도 본 발명의 화합물 투여군에서 형광 강도가 현저하게 낮은 것을 확인하였다. 이 때, 주변 혈관의 형광 강도를 1로 했을 때, 대조군은 2.90±0.39, 본 발명의 화합물 투여군은 1.8±0.35이어서 대조군에 비해서 수치 증가가 약 58% 정도 억제됨을 확인할 수 있었다(도 3D).

<실시예 3>

혈관신생 촉진 물질의 발현에 미치는 영향 확인

본 발명의 화합물 처리에 따른 혈관신생 억제 기작을 확인하기 위하여, 본 발명의 화합물 처리시 각막에서 VEGF 및 VEGF 수용체 2(FLK-1)의 발현에 미치는 영향을 확인하였다. 상기 실시예 1에서와 같이 처리하여 신생혈관이 생성된 각막(대조군)과 본 발명의 화합물에 의하여 신생혈관 생성이 억제된 각막(본 발명의 화합물 50μg 처리군)에서 트리졸을 이용하여 각각 mRNA를 분리하였다. 역전사 효소로 cDNA를 만든 다음, 이를 주형으로 하고, VEGF A에 대해서는 서열번호 1(forward; 5′-CTTGCCTTGCTGCTCTACC-3′) 및 서열번호 2(reverse; 5′-CACACAGGATGGCTTGAAG-3′)의 프라이머를 이용하고, FLK-1에 대해서는 서열번호 3(forward; 5′-AAAATGGGCGATGTTAGTGC-3′) 및 서열번호 4(reverse; 5′-AGAGCAAGCAACCTTCCAAA-3′)의 프라이머를 이용하여 PCR (94℃ 5분 denature; 94℃ 20초 denaturation, 58℃ 1분 annealing, 72℃ 25초 extension의 35 cycle)을 수행하여 각각의 발현을 조사하였다. PCR에 의하여 증폭된 산물은 1% 아가로스 겔에서 전기영동을 한 뒤 EtBr(ethidium bromide)로 염색하여 확인하였다.

그 결과, 도 4에서 보듯이, 신생혈관이 생성된 각막에서는 VEGF A와 FLK-1의 발현이 강하게 관찰된 반면(NON), 본 발명의 화합물이 투여된 각막에서는 VEGF A와 FLK-1의 발현이 현저하게 줄어듬을 확인하였다(WON). 정상대조군으로 정상의 각막에서는 아무런 밴드가 나타나지 않았다 (N). 도 4의 VEGF A에 나타나는 두 개의 밴 드는 각각 189bp 및 165bp의 크기로, VEGF A는 발현되면서 이들 크기로 스플라이싱되어 단백질이 발현되며, 165bp의 것이 혈관 생성에 관여하는 것으로 알려져 있다.

이상 살펴본 바와 같이, 본 발명의 화합물은 안구 내에서 VEGF A와 FLK-1의 발현을 억제하여 혈관신생을 억제하는 효과를 나타낸다. 따라서, 본 발명의 조성물은 안구의 혈관신생 관련 질환을 예방 및 치료하는 데에 유용하게 사용될 수 있다.

도 1은 각막혈관신생 모델에서 각막 손상 유도후 1주일 후 본 발명의 화합물의 효과를 확인한 것이다.(A : 음성대조군, B : 양성대조군, C : 본 발명의 화합물 5μg 투여 군, D : 본 발명의 화합물 50μg 투여 군, E는 A의 확대사진, F는 D의 확대사진)

도 2는 각막혈관신생 모델에서 각막 손상 유도후 2주일 후 본 발명의 화합물(BAZ)의 효과를 확인한 것이다.(A : 대조군, B : 본 발명의 화합물 50μg 투여 군, C : 아바스틴 투여 군, D : A~C 결과의 수치결과)

도 3은 망막혈관신생 모델에서 본 발명의 화합물의 효과를 확인한 것이다.(A : 정상, B : 대조군, C : 본 발명의 화합물 50μg 투여 군, D : B~C 결과의 수치결과)

도 4는 본 발명의 화합물에 의한 VEGF-A의 발현억제와 FLK-1의 발현억제 효과를 확인한 것이다.(N : 음성대조군, NON : 양성대조군, IZ : 본 발명의 화합물 투여군)

<110> BioCS <120> composition for preventing and treating angiogenesis-related disease of eyes comprising imidazol compound as an active ingredient <130> NP09-0060 <160> 4 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VEGF A forward <400> 1 cttgccttgc tgctctacc 19 <210> 2 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> VEGF A reverse <400> 2 cacacaggat ggcttgaag 19 <210> 3 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> FLK-1 forward <400> 3 aaaatgggcg atgttagtgc 20 <210> 4 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> FLK-1 reverse <400> 4 agagcaagca accttccaaa 20

Claims

하기 화학식 I로 표시되는 (E)-2-(2-((3,4-디하이드록시페닐)(4-(2-(디메틸아미노)에틸)-1H-이미다졸-1-일)메틸)벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)비닐설페이트((E)-2-(2-((3,4-dihydroxyphenyl)(4-(2-(dimethylamino)ethyl)-1H-imidazol-1-yl)methyl)benzo[d][1,3]dioxol-5-yl)vinyl sulfate) 및 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유효성분으로 포함하는 안구의 혈관 신생관련 질환 예방 및 치료용 조성물.

<화학식 I>
제1항에 있어서, 상기 안구는 각막 또는 망막인 것을 특징으로 하는 조성물.
제1항에 있어서, 상기 안구의 혈관 신생 관련 질환은 각막염증, 충혈, 당뇨병성 망막증, 황반부변성증, 맥락막신생혈관생성증, 신생혈관성 녹내장, 각막혈관신생, 미숙아성 망막병증 및 안구 종양으로 이루어진 군에서 선택된 것임을 특징으로 하는 조성물.