KR20100114501A - 신규한 단백질 - Google Patents

Abstract

신규하고 SEQ. ID. NO: 2 또는 SEQ. ID. NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 분리된 폴리펩티드, 그리고 이를 인코딩하는 핵산 분자. 상기 폴리펩티드는 암, 면역 연관된 질환, 바이러스 질환, 그리고 염증 질환을 비롯한 다양한 질환을 치료하는 방법에 이용될 수 있다.

Description

신규한 단백질{NOVEL PROTEIN}

본 발명의 기술분야

본 발명은 신규한 단백질 및 이들의 치료 용도에 관계한다.

본 발명의 배경기술

인간에게 영향을 주는 질환은 그들의 원인 기전에 따라서 분류될 수 있다. 가령, 면역학적 성분(component) 또는 병인(etiology)을 갖는 질환에는 감염 질환(infectious disease), 급성과 만성 염증 질환(inflammatory disease), 암(cancer), 이식(transplantation)과 자가면역(autoimmune) 질환이 포함된다.

자가면역 질환의 실례에는 다발성 경화증(multiple sclerosis, MS), 자가면역성 포도막염(autoimmune uveitis), 자가면역성 포도망막염(autoimmune uveoretinitis), 자가면역성 갑상선염(autoimmune thyroiditis), 하시모토병(Hashimoto's disease), 췌도염(insulitis), 쇼그렌 증후군(Sjogren's syndrome), 자연 유산(spontaneous abortion), 실험적 자가면역성 심근염(experimental autoimmune myocarditis), 류머티스 관절염(rheumatoid arthritis, RA), 염증성 장 질환(inflammatory bowel disease, IBD), 크론병(Crohn's disease), 루푸스(lupus)(SLE), 건선(psoriasis), 그리고 당뇨병(diabete), 특히 I형 당뇨병이 포함된다.

자가면역 질환의 추가적인 실례에는 급성 괴사성 출혈성 백질뇌염(Acute necrotizing hemorrhagic leukoencephalitis), 애디슨병(Addison's disease), 무감마글로불린혈증(Agammaglobulinemia), 알레르기성 천식(Allergic asthma), 알레르기성 비염(Allergic rhinitis), 원형 탈모증(Alopecia areata), 아밀로이드증(Amyloidosis), 강직성 척추염(Ankylosing spondylitis), 항-GBM/항-TBM 신염(nephritis), 항인지질항체 증후군(Antiphospholipid syndrome, APS), 자가면역성 재생불량성 빈혈(Autoimmune aplastic anemia), 자가면역성 자율신경이상(Autoimmune dysautonomia), 자가면역성 간염(Autoimmune hepatitis), 자가면역성 고지질혈증(Autoimmune hyperlipidemia), 자가면역성 면역결핍(Autoimmune immunodeficiency), 자가면역성 내이 질환(Autoimmune inner ear disease, AIED), 자가면역성 심근염(Autoimmune myocarditis), 자가면역성 혈소판감소성 자반증(Autoimmune thrombocytopenic purpura, ATP), 축삭(Axonal) & 뉴런(neuronal) 신경병질(neuropathy), 볼즈병(Bal's disease), 베넷병(Behnet's Disease), 수포성 유천포창(Bullous pemphigoid), 심근증(Cardiomyopathy), 캐슬만병(Castleman disease), 셀리악 스푸루(Celiac sprue)(비열대성), 샤가스병(Chagas' disease), 만성 피로 증후군(Chronic fatigue syndrome), 만성 염증성 탈수초성 다발신경병증(Chronic inflammatory demyelinating polyneuropathy, CIDP), 처그-스트라우스 증후군(Churg-Strauss syndrome), 반흔성 유천포창(Cicatricial pemphigoid)/양성 점막성 유천포창(benign mucosal pemphigoid), 코오간 증후군(Cogan's syndrome), 한랭 응집소병(old agglutinin disease), 선천성 심장 차단(Congenital heart block), 콕사키 심근염(Coxsackie myocarditis), CREST 병, 본태성 혼합 한냉글로불린혈증(Essential mixed cryoglobulinemia), 탈수초성 신경병증(Demyelinating neuropathy), 피부근염(Dermatomyositis), 데빅병(Devic disease), 원판성 루푸스(Discoid lupus), 드레슬러 증후군(Dressler's syndrome), 자궁내막증(Endometriosis), 호산구성 근막염(Eosinophilic fasciitis), 결절성 홍반(Erythema nodosum), 실험적 알레르기성 뇌척수염(Experimental allergic encephalomyelitis), 에반 증후군(Evan's syndrome), 섬유근통(Fibromyalgia), 섬유화 폐포염(Fibrosing alveolitis), 거대 세포 동맥염(Giant cell arteritis)(측두 동맥염(temporal arteritis)), 굿패스츄어 증후군(Goodpasture's syndrome), 그레이브즈병(Graves' disease), 길리안-바레 증후군(Guillain-Barr syndrome), 용혈성 빈혈(Hemolytic anemia), 헤노 숀라인 자반증(Henoch-Schonlein purpura), 임신 헤르페스(Herpes gestationis), 저감마글로불린혈증(Hypogammaglobulinemia), 특발성 혈소판감소성 자반증(Idiopathic thrombocytopenic purpura, ITP), IgA 신증(nephropathy), 면역조절성 지단백(Immunoregulatory lipoprotein), 봉입체 근염(Inclusion body myositis), 인슐린-의존성 당뇨병(Insulin-dependent diabete)(1형), 간질성 방광염(Interstitial cystitis), 소아 관절염(Juvenile arthritis), 소아 당뇨병(Juvenile diabete), 가와사키 증후군(Kawasaki syndrome), 람베르트-이튼 증후군(Lambert-Eaton syndrome), 백혈구파괴 혈관염(Leukocytoclastic vasculitis), 편평 태선(Lichen planus), 경화성 태선(Lichen sclerosus), 목질 결막염(Ligneous conjunctivitis), 선상 면역 글로불린 A 질환(Linear IgA disease, LAD), 라임병(Lyme disease), 메니에르병(Meniere's disease), 현미경적 다발성 동맥염(Microscopic polyangiitis), 혼합성 결합조직 질환(Mixed connective tissue disease, MCTD), 무렌 궤양(Mooren's ulcer), 무카-하베르만병(Mucha-Habermann disease), 중증근무력증(Myasthenia gravis), 근염(Myositis), 기면발작(Narcolepsy), 백혈구감소증(Neutropenia), 안 반흔성 유천포창(Ocular cicatricial pemphigoid), 골관절염(Osteoarthritis), 재발성 류마티즘(Palindromic rheumatism), 방종양성 소뇌 변성(Paraneoplastic cerebellar degeneration), 발작성 야간 혈색뇨증(Paroxysmal nocturnal hemoglobinuria, PNH), 바이러스성 신경 얼기 병증(Parsonnage-Turner syndrome), 주변부 포도막염(Pars planitis)(peripheral uveitis), 천포창(Pemphigus), 말초 신경병질(Peripheral neuropathy), 정맥주위 뇌척수염(Perivenous encephalomyelitis), 악성 빈혈(Pernicious anemia), POEMS 증후군, 다발성 결절성 혈관염(Polyarteritis nodosa), I형, II형 & III형 자가면역 다분비선 증후군(autoimmune polyglandular syndrome), 류마티스성 다발성근육통(Polymyalgia rheumatica), 다발근육염(Polymyositis), 심근경색후 증후군(Postmyocardial infarction syndrome), 심막절제술후 증후군(Postpericardiotomy syndrome), 프로게스테론 피부염(Progesterone dermatitis), 원발성 담즙성 경화(Primary biliary cirrhosis), 건성성 관절염(Psoriatic arthritis), 특발성 폐 섬유증(Idiopathic pulmonary fibrosis), 괴저고름피부증(Pyoderma gangrenosum), 적혈구계 무형성증(Pure red cell aplasia), 레이노 현상(Raynaud's phenomenon), 반사성 교감신경 이영양증(Reflex sympathetic dystrophy), 라이터 증후군(Reiter's syndrome), 재발성 다발성 연골염(Relapsing polychondritis), 하지불안 증후군(Restless legs syndrome), 류마티스성 열(Rheumatic fever), 유사 육종증(Sarcoidosis), 슈미트 증후군(Schmidt syndrome), 공막염(Scleritis), 경피증(Scleroderma), 정자(Sperm) & 고환(testicular) 자가면역(autoimmunity), 강직 인간 증후군(Stiff person syndrome), 아급성 심내막염(Subacute bacterial endocarditis, SBE), 교감 안염(Sympathetic ophthalmia), 다까야수 동맥염(Takayasu's arteritis), 측두 동맥염(Temporal arteritis)/거대 세포 관절염(Giant cell arteritis), 혈소판감소성 자반증(Thrombocytopenic purpura, TTP), 자가면역성 갑상성 질환(Autoimmune thyroid disease), 토로사-헌트 증후군(Tolosa-Hunt syndrome), 횡단성 척추염(Transverse myelitis) & 괴사성 골수증(necrotizing myelopathy), 궤양성 대장염(Ulcerative colitis), 미분화 결합조직 질환(Undifferentiated connective tissue disease, UCTD), 맥관염(Vasculitis), 수포성 피부병(Vesiculobullous dermatosis), 백반(Vitiligo), 그리고 베게너 육아종증(Wegener's granulomatosis)이 포함된다.

암의 유형의 무제한적 실례에는 부신피질암(adrenocortical cancer); 악성 흑색종(Malignant melanoma); 비-흑색종 피부암(Non-melanoma skin cancer); 피부 T-세포 림프종(Cutaneous T-cell Lymphoma); 카포시 육종(Kaposi's Sarcoma); 방광암(Bladder cancer); 결장암(Colon cancer); 결장직장암(Colorectal cancer); 직장암(Rectal cancer); 신경외배엽암(Neuroectodermal cancer)과 송과암(Pineal cancer); 유아기 뇌간 교종(Childhood Brain Stem Glioma); 유아기 소뇌 성상세포종(Childhood Cerebellar Astrocytoma); 유아기 대뇌 성상세포종(Childhood Cerebral Astrocytoma); 유아기 속질모세포종(Childhood medulloblastoma); 유아기 시로 신경교종(Childhood visual pathway Glioma); 수막종(Meningioma); 혼합성 신경교종(Mixed Glioma); 희돌기교종(Oligodendroglioma); 성상세포종(Astrocytoma); 상의세포종(); 뇌하수체 선종(Pituitary adenoma); 전이성 선암종(Metastasic Adenocarcinoma); 청각성 신경암(Acoustic neuroma); 척추주위 악성 기형종(Paravertebral Malignant teratoma); 유방암(Breast cancer); 관상피내 암종(Ductal carcinoma); 유선 종양(Mammary gland neoplasia); 난소암(Ovarian cancer); 암양종 종양(Carcinoid tumour); 자궁경부암(Cervical cancer); 자궁암(Uterus cancer); 자궁내막암(Endometrial cancer); 질암(Vaginal cancer); 음문암(Vulva cancer); 임신성 융모성 암(Gestational Trophoblastic cancer); 나팔관암(Fallopain cancer); 자궁 육종(Uterine sarcoma); 백혈병(Leukemia); 림프종(Lymphoma)(호지킨병(Hodgkin's disease)과 비-호지킨병(Non-Hodgkin's disease)); 신경모세포종(Neuroblastom); 망막모세포종(Retinoblastoma); 연부 조직 육종(Soft tissue Sarcoma); 윌름 종양(Wilm's tumour); 판코니 빈혈(Fanconi Anaemia); 랑게르한스 세포 조직구증(Langerhan's cell histiocytosis); 신장의 악성 횡문근양 종양(Malignant Rhabdoid Tumour); 간암(Liver cancer); 신경모세포종(Neuroblastoma); 망막모세포종(Retinoblastoma); 융모막암종(Choriocarcinoma); 내분비암(Endocrine cancer); 자궁내막암(Endometrial cancer); 식도암(Esophageal cancer); 유잉 육종(Ewing's Sarcoma); 안암(Eye cancer); 위암(Gastric cancer); 위장암(Gastrointestinal cancer); 요생식기암(Genitourinary cancer); 신경교종(Glioma); 부인암(Gynaecological cancer); 두경부암(Head and neck cancer); 간세포암(Hepatocellular cancer); 하인두암(Hypopharynx cancer); 도세포암(Islet cell cancer); 신장암(Kidney cancer); 후두암(Laryngeal cancer); 폐암(Lung cancer); 림프종(Lymphoma); 남성 유방암(Male breast cancer); 흑색종(Melanoma); 중피종(Mesothelioma); 다발성 골수종(Multiple myeloma); 코인두암(Nasopharyngeal cancer); 비-흑색종 피부암(Non-melanoma Skin cancer); 식도암(Esophageal cancer); 골육종(Osteosarcoma); 난소암(Ovarian cancer); 췌장암(Pancreas cancer); 뇌하수체암(Pituitary cancer); 전립선암(prostate cancer); 신장 세포 암종(Renal cell carcinoma); 망막모세포종(Retinoblastoma); 횡문근육종(Rhabdomyosarcoma); 육종(Sarcoma); 피부암(Skin cancer); 편평 세포 암종(Squamous cell carcinoma); 위암(Stomach cancer); 고환암(Testicular cancer); 흉선암(thymus cancer); 갑상선암(Thyroid cancer); 이행세포암(Transitional cell cancer); 영양모세포암(Trophoblastic cancer); 자궁암(Uterus cancer); 급성 림프구성 백혈병(Acute Lymphatic leukemia); 급성 골수성 백혈병(Acute myeloid leukemia); 샘낭 암종(Adenocystic carcinoma); 항문암(Anal cancer); 골암(Bone cancer); 창자암(Bowel cancer); 관상피내 암종(Ductal carcinoma); 지방육종(Liposarcoma); 신경모세포종(Neuroblastoma); 콩팥모세포종(Nephroblastoma), 그리고 골육종(Osteosarcoma)이 포함된다.

염증성 질환(inflammatory disease)에는 패혈증(sepsis), 내독소혈증(endotoxemia), 췌장염(pancreatitis), 포도막염(uveitis), 간염(hepatitis), 복막염(peritonitis), 각막염(keratitis), SIRS, 그리고 상처-유도된 염증(injury-induced inflammation)이 포함된다.

생식력(fertility)에 연관된 질환에는 남성 불임(male infertility)과 여성 불임(female infertility)이 포함된다.

남성 불임은 다양한 문제점에 의해 유발될 수 있다. 더욱 일반적인 질환의 일부 실례가 하기에 열거된다.

- 결함성 정자 생산: 남성 불임의 90%는 충분한 정자를 생산하지 못함으로써 유발된다. 무정자(Azoospermia)는 정자가 전혀 생산되지 않을 때 발생하는 반면, 정자과소증(oligospermia)은 극소수의 정자가 생산될 때 진단된다. 대부분의 정자가 난자에 도달하기도 전에 파괴되기 때문에, 정자가 많을수록 난자가 성공적으로 수정될 가능성이 더욱 높아진다. 하지만, 건강하고, 적절하게 형성되고, 이동성이 있는 정자가 존재한다면, 적은 정자 수(sperm count), 또는 5백만 개/㎖ 미만의 총 정자 수(total sperm count)가 반드시, 남성 불임을 의미하는 것은 아니다.

- 정삭정맥류 ( Varicocele ): 2개의 정삭(spermatic cord) 중에서 한쪽 주변에서 정맥류(varicose vein)는 고환 내에서 울혈을 유발할 수 있다; 이는 차례로, 상기 부위 내에서 온도 증가를 유발한다. 더욱 높은 온도는 정자 생산을 감소시키고 불임으로 이어질 수 있다. 다행스럽게도, 이러한 문제점은 수술에 의해 해결될 수 있다.

- 기타 장애: 남성 불임을 유발할 수 있는 기타 장애에는 고환의 비정상적 발달 또는 손상(내분비 장애(endocrine disorder) 또는 염증에 의해 유발됨), 부속샘(accessory gland)의 장애, 성교 장애(coital disorder), 남성 생식 통로(reproductive tract)에서 낭포(cyst)를 유발하는 1950년대와 1960년대에 이용된 합성 에스트로겐(synthetic estrogen)인 디에틸스틸베스트롤(diethylstilbestrol, DES)에 노출, 정류하고 있는 고환(undescended testicle), 그리고 드물게, 유전학적 장애(genetic disorder), 예를 들면, 염색체 비정상(chromosomal abnormality)이 포함된다.

여성 불임 역시 다양한 문제점에 의해 유발될 수 있다. 더욱 일반적인 질환의 일부 실례가 하기에 열거된다.

- 다낭성 난소질환( Polycystic Ovarian Disease ): 상기 질환은 여성에서 배란 장애(ovulation disorder)의 가장 일반적인 원인이고, 난소 내에서 많은 미세한 낭포의 존재, 안드로겐(androgen)의 과도한 생산, 그리고 희발월경(infrequent period)(oligomenorrhea) 또는 무월경(absent period)(amenorrhoea)으로 특징된다. 배란 실패는 여성 불임의 가장 일반적인 원인이고, 명확한 이유 없이, 또는 스트레스(stress), 호르몬 불균형(hormonal imbalances), 그리고 생식계(reproductive system)의 다양한 질환과 장애(이들 중에서 일부가 하기에 기술될 것이다)의 결과로써 발생할 수 있다.

- 골반 염증 질환( Pelvic Inflammatory Disease ): 이러한 생식 통로 감염은 차단된 또는 파손된 나팔관(fallopian tube)으로 이어질 수 있고, 통상적으로 성적 접촉으로 감염되는 병(sexually transmitted disease), 유산(miscarriage), 낙태(abortion), 출산(childbirth), 또는 자궁내 장치(intrauterine device)에 의해 유발된다.

- 배란 장애( Ovulatory Dysfunction ): 이러한 장애는 연령(age), 호르몬 불균형(hormonal imbalance), 또는 기타 문제점으로 인하여, 여성의 난소가 난자를 생산하지 못하거나, 또는 평소보다 적은 난자를 생산할 때 발생한다.

- 자궁근종( Uterine Fibroid ): 이들 양성 자궁 종양은 40%의 여성에서 발생하고, 배아 착상(embryo implantation) 또는 태아 성장(fetal growth)을 간섭할 수 있다.

- 자궁내막증( Endometriosis ): 상기 질환은 자궁을 따라 정렬하는 조직(자궁내막(endometrium))이 자궁 외부(통상적으로, 난소, 나팔관, 그리고 자궁을 지지하는 인대(ligament); 질과 직장 사이의 공간; 자궁의 외부 표면; 골반강(pelvic cavity)의 내층(lining); 방광, 창자, 질, 자궁 경부, 음문, 그리고 복부 수술 흉터)의 종양 또는 병소로 성장할 때 발생한다. 월경 주기(menstrual cycle)에 맞춰, 상기 조직은 매달 구축되고, 와해되고, 흘러나간다; 하지만, 유감스럽게도, 이는 체내를 빠져나갈 방법이 없다. 결과적으로, 이는 내부 출혈(internal bleeding), 병소로부터 혈액과 조직의 와해, 그리고 가장 빈번하게는, 통증, 불임, 흉터 조직 형성, 유착(adhesion)과 장운동장애를 유발할 수 있는 염증을 유발한다.

- 면역학적 불임( Immunological Infertility ): 이러한 장애는 여성의 신체가 남성 배우자의 정자를 파괴하는 항정자 항체(antisperm antibody)를 생산할 때 발생한다.

탄수화물 대사(carbohydrate metabolism)의 장애는 여러 형태로 발생한다. 가장 일반적인 장애는 후천성(acquired)이다. 탄수화물 대사에서 후천성 또는 속발성(secondary) 장애, 예를 들면, 당뇨병성 케톤산증(diabetic ketoacidosis), 고삼투압성 혼수(hyperosmolar coma), 그리고 저혈당증(hypoglycemia) 모두 중추신경계(central nervous system)에 영향을 준다. 말초 신경 질환(peripheral nerve disease)의 많은 형태와 이형 역시 당뇨병에서 관찰된다. 탄수화물 대사의 기타 장애는 드물게 발생하는 대사의 선천적 오류(즉, 유전학적 결함)이다.

탄수화물 대사의 이들 후천성 장애는 미국에서 뿐만 아니라 국제적으로 상당히 일반적이다. 저혈당증은 신경학적 질환(neurological disease), 특히 급성 의식 악화(acute mental deterioration), 기억 상실(memory loss), 방향 감각 상실(disorientation), 둔감(obtundation), 그리고 알코올중독자 및 인슐린 치료를 받는 당뇨병 환자에서 혼수의 일반적인 원인이다. 다른 원인으로부터 고인슐린혈증(Hyperinsulinemia)은 드물지만, 췌장 종양(pancreatic tumor)이 그 원인일 수 있다. 다양한 신경학적 합병증(neurological complication)을 수반하는 당뇨병은 성인 환자에서 치료되는 가장 일반적인 질환 중의 하나이다. 당뇨병성 케톤산증은 교육과 면밀한 의학적 추적(medical follow-up)으로 수십 년 전보다 빈도가 줄어들고 있긴 하지만 여전히 발생하고 있다. 고삼투압성 혼수 역시 Plum과 Posner의 classic monograph Diagnosis of Stupor and Coma에 의해 내과 의사들의 주목을 처음으로 받게 되었을 때보다 장애의 심각성이 덜하다. 고삼투압성 혼수는 여전히 발생하고 있고, 둔화된 환자를 평가할 때 염두에 두어야 한다.

탄수화물 대사의 선천적 장애는 드물게 발생하다. 피루브산염 탈수소효소(pyruvate dehydrogenase, PDH) 복합체의 심각한 결함 및 오탄당뇨증(pentosuria)으로 불리는 양성 화학적 이형(benign chemical anomaly)이 극소수(2-6명) 환자에서 보고되었다.

저혈당증, 당뇨병성 케톤산증, 그리고 고삼투압성 혼수는 모두 잠재적으로 치명적이긴 하지만 치료가능하다.

본 발명의 요약

신규한 cDNA에 기초된 신규한 단백질, KTPAF50이 발견되었다. 상기 cDNA에 의해 인코딩되는 펩티드는 74개 아미노산 길이를 갖고, N-말단 단부에서 24개 아미노산의 신호 펩티드(signal peptide)를 포함한다. KTPAF50의 cDNA 서열(SEQ. ID. NO: 1)과 아미노산 서열(SEQ. ID. NO: 2)은 아래와 같다:

atgccaggc cattctagg cttctgtct atcctggtt tctggtctg tgcgttgtg ggtagcagc attggcgta ttacgccgg agggagcag gctgagcga ggctccaga aggtgcgca atagccgga gaggaaagg gcgatgctg tcacctagc cccctccct gagactcca ttcagccca gaaaaagga gctgctttc tcccccatc taccctagg agaaaa (SEQ. ID. NO:1)

MPGHSRLLSILVSGLCVVGSSIGVLRRREQAERGSRRCAIAGEERAMLSPSPLPETPFSPEKGAAFSPIYPRRK (SEQ. ID. NO:2)

따라서 본 발명에서는 SEQ. ID. NO: 1의 핵산 분자 및 SEQ. ID. NO: 2의 펩티드를 제시한다. SEQ. ID. NO: 2의 폴리펩티드는 본 명세서에서, "완전한 KTPAF50 펩티드"로서 지칭될 것이다.

이러한 완전한 KTPAF50 펩티드는 24개 아미노산으로 구성되는 것으로 생각되는 신호 서열 역시 포함한다. 따라서 본 발명에서는 아래의 서열(SEQ ID. NO: 4)로 구성되는, 상기 신호 펩티드가 없는 완전한 KTPAF50 펩티드의 서열을 포함하는 펩티드를 제시한다:

LRRREQAERGSRRCAIAGEERAMLSPSPLPETPFSPEKGAAFSPIYPRRK (SEQ ID. NO: 4)

신호 서열이 결여된 이러한 KTPAF50 펩티드(SEQ. ID. NO: 4)는 본 명세서에서, "KTPAF50 펩티드" 또는 "KTPAF50"으로서 지칭될 것이다.

또한, 본 발명에서는 상기 KTPAF50 펩티드를 인코딩하는 서열을 포함하는 핵산 분자를 제시한다. 이는 아래의 서열(SEQ. ID. NO: 3)을 포함한다:

ttacgccgg agggagcag gctgagcga ggctccaga aggtgcgca atagccgga gaggaaagg gcgatgctg tcacctagc cccctccct gagactcca ttcagccca gaaaaagga gctgctttc tcccccatc taccctagg agaaaa (SEQ. ID. NO:3)

또한, 본 발명에서는 하나 이상의 뉴클레오티드 또는 아미노산 잔기가 각각, 변형되지 않은 분자와 비교하여 이러한 변형된 분자의 생물학적 특징에 현저한 영향을 주지 않으면서 부가, 결실 또는 치환된, SEQ. ID. NO: 1 또는 SEQ. ID. NO: 3의 변형된 핵산 분자 및 SEQ. ID. NO: 2 또는 SEQ. ID. NO: 4의 변형된 펩티드를 제시한다.

본 명세서에서, 용어 "펩티드"는 펩티드, 폴리펩티드 또는 단백질을 나타내는데 이용된다. 펩티드는 유전자 조작(genetic engineering) 방법, 숙주 세포 내에서 발현, 또는 임의의 다른 적절한 수단을 통하여, 합성 방식으로 획득될 수 있다. 달리 명시되지 않으면, 펩티드는 일반적으로, 자연-발생 L-아미노산으로 구성된다.

펩티드 분자에 관련하여, 용어 "생물학적 특징"은 본 명세서에 기술된 생물학적 활성이 포함되지만 이들에 국한되지 않는, 완전한 KTPAF50 펩티드 또는 KTPAF50 펩티드에 의해 발휘될 수 있는 시험관내 또는 생체내 효과 중에서 적어도 한 가지를 발휘하는 상기 펩티드의 능력을 지칭한다. 가령, 생물학적 특징에는 암, 면역계(immune system) 연관된 질환, 바이러스 질환, 그리고 염증-기초된 질환을 치료하는 능력이 포함된다. 특히, (i) SEQ. ID. NO: 1 또는 SEQ. ID. NO: 3의 서열과 상이한 서열을 보유하지만 유전자 코드(genetic code)의 중복성(redundancy)으로 인하여, 각각 완전한 KTPAF50 펩티드 또는 KTPAF50 펩티드를 인코딩하는 핵산 분자; 그리고 (ii) 완전한 KTPAF50 펩티드 또는 KTPAF50 펩티드의 서열과 상이한 서열을 보유하는 아미노산 분자를 인코딩하지만 각각, 완전한 KTPAF50 펩티드 또는 KTPAF50 펩티드의 생물학적 특징과 유사한 생물학적 특징을 갖는 핵산 분자를 비롯한 핵산 분자에 관련하여, 용어 "생물학적 특징"은 완전한 KTPAF50 펩티드 또는 KTPAF50 펩티드의 생물학적 특징과 유사한 생물학적 특징을 갖는 펩티드를 인코딩하는 특성을 지칭한다.

용어 "변형되지 않은 분자와 비교하여 변형된 분자의 생물학적 특징에 현저한 영향을 주지 않으면서"는 변형된 분자가 변형되지 않은 분자의 생물학적 활성과 정성적으로 유사한 생물학적 활성을 유지한다는 것을 의미한다. 변형된 펩티드에 관련하여, 이는 상기 펩티드가 특히, 하기에 명시된 바와 같은 진단과 치료 효용, 그리고 본 명세서에서 기술된 시험관내와 생체내 활성을 비롯한, SEQ. ID. NO: 2 또는 SEQ. ID. NO: 4의 펩티드의 생물학적 특징 중에서 한 가지 이상을 유지한다는 것을 의미한다. 펩티드가 변형되지 않은 분자의 생물학적 활성과 정성적으로 유사한 생물학적 활성을 유지하는 지를 결정하기 위하여, 한 가지 이상의 분석법, 예를 들면, 변형된 펩티드를 병렬로 분석되는 상응하는 변형되지 않은 펩티드(다시 말하면, 완전한 KTPAF50 펩티드 또는 KTPAF50 펩티드)와 비교하는 시험관내, 생체내 또는 임상적 실험; 또는 변형된 펩티드가 별도로 수행된 실험으로부터 확인된 변형되지 않은 펩티드의 생물학적 효과와 유사한 생물학적 효과를 갖는 지를 조사하기 위하여, 변형된 펩티드를 분석하는 실험이 수행될 수 있다. 이런 실험은 예로써, 하기 실시예에서 기술된 방식으로 수행될 수 있다. 변형된 핵산 분자에 관련하여, 용어 "변형되지 않은 분자와 비교하여 변형된 분자의 생물학적 특징에 현저한 영향을 주지 않으면서"는 상기한 특징을 갖는 변형된 펩티드를 인코딩하는 특성을 나타낸다.

변형된 펩티드는 KTPAF50 펩티드 내에 포함된 적어도 8개, 12개, 15개, 20개, 25개, 30개, 35개, 40개 또는 적어도 45개 아미노산 잔기의 상응하는 서열에 동일성(degree of identity)을 갖는 적어도 8개, 12개, 15개, 20개, 25개, 30개, 35개, 40개 또는 적어도 45개 아미노산 잔기의 연속 서열을 포함하는 펩티드일 수 있는데, 상기 동일성은 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90%, 그리고 특히 적어도 95%이다.

또한, 본 발명에서는 적어도 8개 아미노산 잔기를 포함하는, 완전한 KTPAF50 펩티드로부터 부분 연속 서열을 포함하는 펩티드를 제시하는데, 상기 연속 서열은 상기 완전한 KTPAF50 펩티드 내에서 연속 서열로서 포함된다. 이런 펩티드는 본 명세서에서, "부분 KTPAF50 펩티드"로서 지칭될 것이다. 부분 KTPAF50 펩티드의 실례에는 하기 실시예 VI에서 기술된 SEQ. ID. NO:7과 SEQ. ID. NO:8이 포함되지만 이들에 국한되지 않는다.

또한, 본 발명에서는 완전한 KTPAF50 펩티드, KTPAF50 펩티드, 변형된 펩티드 또는 부분 KTPAF50 펩티드의 아미노산 서열을 포함하는 단백질 또는 폴리펩티드를 제시한다(이런 단백질 또는 폴리펩티드는 본 명세서에서, "KTPAF50 포함 단백질"로서 지칭될 것이다). KTPAF50 포함 단백질은 예로써, 완전한 KTPAF50 펩티드, KTPAF50 펩티드, 변형된 펩티드 또는 부분 KTPAF50 펩티드를 포함하는 융합 단백질(fusion protein)일 수 있다; 상기 단백질은 단백질 또는 다른 펩티드 또는 폴리펩티드의 완전한 KTPAF50 펩티드, KTPAF50 펩티드, 변형된 펩티드 또는 부분 KTPAF50 펩티드와의 접합체(conjugate)일 수도 있다.

또한, 본 발명에서는 (i) 적어도 8개 아미노산 잔기를 포함하는, KTPAF50 펩티드로부터 부분 연속 서열을 인코딩하는 올리고뉴클레오티드, 이는 SEQ. ID. NO: 1 내에 포함된 연속 24개 핵산 서열을 포함할 수 있다; (ii) 엄격한 혼성화(hybridization) 조건 하에 SEQ. ID. NO: 1의 뉴클레오티드 서열에 혼성화할 수 있는 뉴클레오티드 서열; 또는 (iii) SEQ. ID. NO: 1 내에 포함된 뉴클레오티드의 상응하는 연속 서열에 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90%, 그리고 특히 적어도 95%의 동일성(degree of identity)을 갖는 적어도 24개 연속 뉴클레오티드의 서열을 보유하는 올리고뉴클레오티드인 적어도 24개 뉴클레오티드의 올리고뉴클레오티드를 제시한다.

또한, 본 발명에서는 임의의 상기한 핵산 분자를 포함하는 핵산 분자, 예를 들면, 전이 벡터(transfer vector) 또는 발현 벡터(expression vector)를 제시한다,

또한, 본 발명에서는 앞서 정의된 임의의 펩티드로부터 유래된 변형된 펩티드, 예를 들면, 하나 이상의 아미노산이 보존성 치환(conservative substitution)에 의해 다른 아미노산으로 치환된 변형된 펩티드를 제시한다. 본 명세서에서, "보존성 치환"은 한 클래스(class)에서 아미노산의 동일한 클래스의 아미노산에 의한 치환을 지칭하는데, 여기서 클래스는 자연에서 발견되는 상동성 단백질 내에서 공통의 물리화학적 아미노산 측쇄 특성 및 높은 치환 빈도(substitution frequency)에 의해 정의된다. 아미노산 측쇄(side chain)의 6가지 포괄적 클래스가 분류되었는데, 여기에는 클래스 I (Cys); 클래스 II (Ser, Thr, Pro, Ala, Gly); 클래스 III (Asn, Asp, Gln, Glu); 클래스 IV (His, Arg, Lys); 클래스 V (Ile, Leu, Val, Met); 그리고 클래스 VI (Phe, Tyr, Trp)이 포함된다. 가령, 다른 클래스 III 잔기, 예를 들면, Asn, Gln, 또는 Glu에 대한 Asp의 치환은 보존성 치환이다.

한 구체예에서, 아미노산 서열 내에서 단지 하나의 치환이 만들어진다. 다른 구체예에서, 2개의 치환이 만들어진다. 또 다른 구체예에서, 3개의 치환이 만들어진다. 치환의 최대치는 치환되지 않은 서열 내에 아미노산 중에서 적어도 70%, 바람직하게는 적어도 80%, 더욱 바람직하게는 적어도 90%, 가장 바람직하게는 적어도 95%가 남아 있도록 하는 아미노산의 숫자를 초과하지 않아야 한다. 바람직한 구체예에서, 다른 아미노산 잔기에 의해 치환되는 최대 3개, 때때로 최대 6개 아미노산 잔기를 포함하는 치환이 보존성 치환이다.

다른 구체예에서, 하나 이상의 아미노산이 D-아미노산, 바람직하게는 상응하는 D-아미노산에 의해 치환될 수 있다. 바람직한 구체예에서, 모든 아미노산이 D-아미노산이다.

또 다른 구체예에서, 상기 서열의 역순(reverse order) 서열 역시 본 발명에 포함된다.

또한, 본 발명에서는 하나 이상의 보존성 치환에 의해 변형된, SEQ ID NO: 2의 완전한 KTPAF50 펩티드, 또는 바람직하게는 SEQ ID NO: 4의 KTPAF50 펩티드, 또는 이들의 부분 KTPAF50 서열을 제시한다.

따라서 KTPAF50 펩티드의 적어도 10개, 또는 15개, 또는 20개, 또는 25개, 또는 30개, 또는 35개, 또는 40개 아미노산 잔기 또는 전체 서열을 포함하는 펩티드가 제시된다.

또한, 본 발명에서는 KTPAF50 펩티드, 완전한 KTPAF50 펩티드, 부분 KTPAF50 펩티드, 변형된 펩티드, KTPAF50 포함 단백질, 또는 앞서 언급된 임의의 핵산 분자를 이용한 치료 방법, 진단 방법 및 제약학적 조성물을 제시한다. 이들 치료 방법, 진단 방법 및 제약학적 조성물은 상기 배경 단락에서 열거된 하나 이상의 질환과 질병에 관련하여 이용될 수 있다.

본 발명에 따른 제약학적 조성물은 제약학적으로 허용되는 담체와 함께, KTPAF50 펩티드, 완전한 KTPAF50 펩티드, 부분 KTPAF50 펩티드, 변형된 펩티드, KTPAF50 포함 단백질 또는 앞서 언급된 임의의 핵산 분자를 포함한다,

용어 "제약학적으로 허용되는 담체"는 활성 성분과 반응하지 않는 임의의 불활성 비-독성 물질을 의미한다. 담체는 때때로, 원하는 제제(formulation) 형태에 기초하여 선택된다. 또한, 담체는 때때로, 약물의 안정성(stability)을 향상시키고, 제거 속도(clearance rate)를 늦추고, 느린 방출 특성을 부여하고, 원치 않는 부작용을 감소시키는 등의 이유로, 활성 성분의 표적 조직으로의 전달 또는 침투를 향상시키는 효과를 갖는다. 또한, 담체는 식용가능 향미료 등을 포함하는 제제를 제공하기 위하여, 제제를 안정화시키는 물질(가령, 보존제(preservative))일 수도 있다. 담체는 임의의 통상적으로 이용되는 담체일 수 있고, 물리-화학적 고려사항, 예를 들면, 용해도(solubility) 및 폴리펩티드와의 반응성(reactivity) 결여에 의해, 그리고 투여 경로에 의해서만 제한된다. 담체에는 첨가제(additive), 착색제(colorant), 희석제(diluent), 완충제(buffering agent), 붕해제(disintegrating agent), 습윤제(moistening agent), 보존제(preservative), 방향제(flavoring agent), 그리고 약리학적으로 융화성 담체(pharmacologically compatible carrier)가 포함된다. 이에 더하여, 담체는 어쥬번트(adjuvant)일 수 있는데, 이는 정의에 따르면, 활성 성분의 작용에 예측가능한 방식으로 영향을 주는 물질이다. 담체의 전형적인 실례에는 (a) 활성 물질의 효과량이 희석제, 예를 들면, 물, 염수, 천연 주스, 알코올, 시럽 등에 용해될 때, 액상 용액(liquid solution); (b) 캡슐(capsule)(가령, 예로써, 계면활성제(surfactant), 윤활제(lubricant)와 불활성 충전제(inert filler)를 포함하는 통상적인 경갑(hard-shelled)- 또는 연갑(soft-shelled) 젤라틴 유형), 정제(tablet), 마름모꼴 정제(lozenge)(여기서 활성 물질은 향미료(flavor), 예를 들면, 수크로오스(sucrose)와 아카시아(acacia) 또는 트래거캔스(tragacanth) 내에 존재하거나, 또는 활성 물질은 불활성 기부(inert base), 예를 들면, 젤라틴(gelatin)과 글리세린(glycerin) 내에 존재한다), 그리고 트로키(troche), 이들 각각은 고체 또는 과립으로서, 미리 결정된 양의 활성 성분을 포함한다; (c) 분말(powder); (d) 적절한 액체에서 현탁액(suspension); (e) 적절한 에멀젼(emulsion); (f) 리포좀 제제(liposome formulation) 등이 포함된다.

KTPAF50 펩티드의 잠재적인 진단과 치료 적용에는 아래 중에서 하나 이상이 포함된다:

1. KTPAF50은 상이한 생물체로부터 독소의 피하 주입후, 면역적격(immunocompetence)의 결여에 대한 진단 도구(diagnostic tool)로서 기능할 수 있다.

2. 혈액 내에서 KTPAF50의 수준 검사는 면역계 활성의 수준에 대한 인디케이터(indicator)로서 기능할 수 있다.

3. KTPAF50의 수준은 자가면역 질환의 인디케이터로서 기능할 수 있다.

4. KTPAF50은 면역계의 촉진인자로서 기능할 수 있다. 가령, KTPAF50은 세균, 기생충과 바이러스 독소에 대한 면역적격의 결여를 치료하는데 이용될 수 있다.

5. KTPAF50은 알레르기 반응과 염증 반응을 감소시키기 위한 치료 도구(therapeutic tool)로서 이용될 수 있다. 가령, KTPAF50은 천식 또는 이의 증상의 발생을 감소시키는데 이용될 수 있다.

6. KTPAF50은 면역결핍 질환(immunodeficiency disease), 예를 들면, AIDS와 복합 면역결핍증(combined immunodeficiency)을 치료하는 치료 도구로서 이용될 수 있다.

7. KTPAF50은 글루코오스 대사(glucose metabolism) 장애를 치료하는 치료 도구로서 이용될 수 있다.

9. KTPAF50은 여러 다른 질환을 치료하는데 이용될 수 있다. 가령, KTPAF50은 자가면역 병리, 예를 들면, BDI, 중중근무력증(myasthenia gravis), 다발성 경화증(multiple sclerosis), I형 당뇨병(diabetes type I), 류머티스 관절염(rheumatoid arthritis), 전신성 루푸스(systematic lupus), 경피증(scleroderma), 만성 자가면역 용혈성 빈혈(chronic autoimmune hemolytic anemia), 결장염(colitis)과 크론병(Crohn's disease) 등을 치료하기 위한 면역계의 억제물질로서 기능할 수 있다.

10. KTPAF50은 암 질환, 예를 들면, 폐암, 후두의 암종, 두경부와 유방의 암종, 호지킨병, 비-호지킨 림프종, 유방암, 간세포암, 흑색종을 치료하기 위한 면역계의 촉진물질로서 기능할 수 있다.

11. KTPAF50은 면역계가 약화된 늙은 또는 어린 개체의 면역 반응을 강화시킬 수 있다.

12. KTPAF50은 남성 또는 여성 불임(infertility)을 치료하기 위한 치료 도구로서 이용될 수 있다.

13. KTPAF50은 상이한 면역 반응의 보편적 촉진물질 또는 저해물질로서 기능할 수 있고, 또한 심장과 폐와 같은 다른 장기에 직접적으로 또는 간접적으로 영향을 줄 수도 있다.

14. KTPAF50은 면역계로부터 특정한 세포를 확인하고, 이들을 세포 요법(cell therapy)에 이용하기 위한 프로브(probe)로서 기능할 수 있다.

15. KTPAF50 또는 이의 일부분을 인코딩하는 핵산 서열은 특정한 인간 DNA와 cDNA 서열을 확인하기 위한 프로브로서 기능할 수 있다.

이들 진단과 치료 적용을 위하여, 완전한 KTPAF50 펩티드, 부분 KTPAF50 펩티드 또는 KTPAF50 포함 단백질, 또는 이들의 변형된 펩티드 역시 이용될 수 있다.

도면의 간단한 설명
본 발명을 이해하고 본 발명이 실제로 수행되는 방식을 살펴보기 위하여, 첨부된 도면과 관련하여, 무제한적 실례로써 구체예가 기술될 것이다:
도 1은 지정된 농도(ng/㎖)의 KTPAF50로 처리된 인간 말초혈액 백혈구로부터 IL-17(pg/㎖)의 분비를 보여주는 그래프이다;
도 2는 지정된 농도(ng/㎖)의 KTPAF50로 처리된 인간 말초혈액 백혈구로부터 INF-γ(pg/㎖)의 분비를 보여주는 그래프이다;
도 3은 지정된 농도(ng/㎖)의 KTPAF50로 처리된 인간 말초혈액 백혈구로부터 TNF-α(pg/㎖)의 분비를 보여주는 그래프이다;
도 4는 KTPAF50 농도(ng/㎖)의 함수로서 생존 세포의 %(기준 양(control amount)에 대하여 표준화됨)를 보여주는 막대그래프이다;
도 5는 면역 세포독성 반응에 관여하는 다양한 유형의 세포에서 KTPAF50 mRNA의 유도 정도를 보여주는 막대그래프이다;
도 6은 시간의 함수로서 치료된(▲) 누드 생쥐와 치료되지 않은(■)(대조) 누드 생쥐에서 U937 종양 체적(tumor volume)(㎣)을 보여주는 그래프이다; 그리고
도 7은 KTPAF50 펩티드와 이의 분획물의 농도(ng/㎖)의 함수로서 생존 세포의 %(기준 양에 대하여 표준화됨)를 보여주는 막대그래프이다.

구체예에 관한 상세한 설명

실시예 I

신규한 cDNA가 인간 cDNA 라이브러리로부터 분리되었다.

아래의 프라이머가 RT-PCR 분석에 이용되었다:

5' - GCT TCT GTC TAT CCT GGT TTC TGG - 3' (SEQ. ID. NO: 5)

5' - TTT CTC CTA GGG TAG ATG GG - 3' (SEQ. ID. NO: 6)

아래의 PCR 조건이 이용되었다:

2분 동안 95℃

40회 사이클:

45초 동안 95℃

45초 동안 59℃

5분 동안 72℃

종결 사이클:

5분 동안 72℃

PCR 산물을 염기서열분석하였다.

아가로즈 겔(agarose gel) 상에서 PCR 분석 및 Cybar Green(Invitrogene)으로 착색 이후에, BioRad ChemiDoc 분석기를 이용하여 PCR 산물의 강도를 평가하였다. 이의 결과는 아래와 같다:

상기 cDNA가 발현되는 주요 조직은 신장, 췌장, 고환, 그리고 태반인 것으로 관찰된다. 흥미롭게도, 상기 산물은 백혈구에서 발현되었고, 그 발현이 이들 세포의 활성화에 관련하여 변하였다.

실시예 II

다양한 질환에 대한 KTPAF50의 잠재적인 효과를 확인하기 위하여, KTPAF50을 인간 말초혈액 백혈구(peripheral white blood cell, pWBC)와 함께 배양하고, 한 무리의 사이토킨(cytokine)의 양을 측정하였다.

KTPAF50은 Anaspec Inc.에 의해 화학적으로 합성되었다.

완전한 인간 백혈구를 PHA 포함 배지(Biological Industries INC - 카탈로그 번호 - 01-201-1)(2 ㎖ 배지에서 2백만 개 세포/웰(well))에서 배양하였다. 이들 세포를 도면에서 지시된 농도에서 KTPAF50과 함께, 3일 동안 처리하였다. 대조 세포(control cell)는 처리되지 않았다.

3일 시점에, 배지를 수거하고, e-Bioscience 키트를 이용하여 인간 IL-17(카탈로그 번호: 88-7176), 인간 INF-γ(카탈로그 번호: 88-7316) 및 인간 TNF-α(카탈로그 번호: 88-7346)에 대한 ELISA 분석을 수행하였다. 이의 결과는 도 1, 2와 3에 요약된다.

KTPAF50은 측정된 3가지 사이토킨 모두를 분비하도록 pWBC를 자극하는 것으로 관찰된다. IL-17의 분비는 KTPAF50이 친-염증성(pro-inflammatory) 역할을 수행할 수 있음을 지시한다. INF-γ의 분비는 KTPAF50이 항-바이러스(anti-viral) 역할, 항암(anti-cancer) 역할과 친-염증성 역할을 수행할 수 있음을 지시한다. TNF-α의 분비는 KTPAF50이 면역계(immune system)를 자극하는데 일정한 역할을 수행할 수 있음을 지시한다.

실시예 III

암에 대한 KTPAF50의 효과를 더욱 확인하기 위하여, KTPAF50을 암 세포주(cancer cell line)와 함께 배양하였다.

U937 급성 골수성 백혈병(acute myeloid leukemia) 세포와 PC3 전립선 암 세포를 각각, 10% FCS + RPMI 배지에서 성장시키고, 4개의 복제물(quadruplicate)을 96 웰 평판 내로, 20,000개 세포/웰 밀도로 접종하였다.

이들 세포와 함께 KTPAF50을 하루 동안 배양하고, 레사주린(Resazurin)(R&D System) 및 분광광도계(spectrophotometer)를 이용하여 생존 세포를 검출하였다. 이의 결과는 도 4에 제시된다.

KTPAF50은 2가지 유형의 암으로부터 생존 세포의 현저한 감소를 유도하는 것으로 관찰된다.

실시예 IV

면역 반응(immune response)에서 KTPAF50의 역할을 더욱 조사하기 위하여, 다양한 면역 세포독성 세포(immune cytotoxic cell)에서 KTPAF50의 존재를 확인하였다.

하기 세포의 인간 cDNA 라이브러리는 Clontech Ltd로부터 구입되었다:

1. mono - 휴지기(R)와 활성화(A) 단핵구(이들 세포는 LPS 또는 PHA를 이용하여 활성화되었다)

2. CD8 - R과 A 세포독성 CD8 T 세포

3. CD19 - R과 A CD19 B 세포

4. CD4 - R과 A CD4 T 보조 세포

KTPAF50의 특정한 프라이머를 이용한 RT-PCR 방법으로, 이들 세포에서 KTPAF50 mRNA의 정량 분석(quantitative analysis)을 수행하였다. 이의 결과는 도 5에 요약된다.

단핵구와 세포독성 T 세포의 활성화는 KTPAF50의 발현에서 현저한 증가를 유도하는 반면, B 세포의 활성화는 KTPAF50 발현에서 감소를 유도하는 것으로 관찰된다. T 보조 세포의 활성화(activation) 또는 비활성화(deactivation)는 KTPAF50 발현에 영향을 주지 않았다. 따라서 KTPAF50은 세포 면역 반응(cellular immune response)의 활성화 및 TH1 대(對) Th2 경로 확인을 위한 마커(marker)로서 이용될 수 있다.

실시예 V

암 세포에 대한 KTPAF50의 효과를 생체내에서 조사하였다.

14마리의 무흉선(athymic) 누드 암컷 8-9주령 생쥐를 Harlan Biotech(Israel)로부터 구입하였다. 이들 생쥐에 15 x 10⁶개 U937 세포를 s.c. 접종하였다. 종양이 성장하기 시작하였고, 9일 시점에 이들 생쥐를 2가지 군으로 분할하였다:

- 염수가 주사된 대조 군(control group)

- KTPAF50(25 ㎍/생쥐)이 주사된 치료 군(treated group)

20일 시점에, 대조 군으로부터 4마리 생쥐는 거대한 종양으로 인한 윤리적인 이유로 희생되었다. 이의 결과는 도 6에 제시된다.

이와 같은 현저한 결과는 KTPAF50이 종양 성장을 완전하게 예방한다는 것을 증명한다.

실시예 VI

활성을 위하여 완전한 KTPAF50 펩티드가 요구되는 지를 확인하기 위하여, U937 세포를 이용하여, 상기 실시예 III에 기술된 실험을 완전한 KTPAF50 펩티드 및 이의 단편으로 반복하였다.

아래의 KTPAF50 펩티드가 이용되었다:

A - KTPAF50 펩티드(50개 아미노산)

B - KTPAF50의 N 말단 36개 aa(LRRREQAERGSRRCAIAGEERAMLSPSPLPETPFSP) (SEQ. ID. NO:7)

C - KTPAF50의 C 말단 14개 aa(EKGAAFSPIYPRRK) (SEQ. ID. NO:8)

이의 결과는 도 7에 요약된다.

이들 KTPAF50 분획물(fraction)은 KTPAF50 펩티드와 유사한 항암 활성을 갖는 것으로 관찰된다.

SEQUENCE LISTING <110> TWO TO BIOTECH LTD. <120> NOVEL PROTEIN <130> 1882745 <150> US 60/009,216 <151> 2007-12-27 <160> 8 <170> PatentIn version 3.5 <210> 1 <211> 222 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atgccaggcc attctaggct tctgtctatc ctggtttctg gtctgtgcgt tgtgggtagc 60 agcattggcg tattacgccg gagggagcag gctgagcgag gctccagaag gtgcgcaata 120 gccggagagg aaagggcgat gctgtcacct agccccctcc ctgagactcc attcagccca 180 gaaaaaggag ctgctttctc ccccatctac cctaggagaa aa 222 <210> 2 <211> 74 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 2 Met Pro Gly His Ser Arg Leu Leu Ser Ile Leu Val Ser Gly Leu Cys 1 5 10 15 Val Val Gly Ser Ser Ile Gly Val Leu Arg Arg Arg Glu Gln Ala Glu 20 25 30 Arg Gly Ser Arg Arg Cys Ala Ile Ala Gly Glu Glu Arg Ala Met Leu 35 40 45 Ser Pro Ser Pro Leu Pro Glu Thr Pro Phe Ser Pro Glu Lys Gly Ala 50 55 60 Ala Phe Ser Pro Ile Tyr Pro Arg Arg Lys 65 70 <210> 3 <211> 150 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 3 ttacgccgga gggagcaggc tgagcgaggc tccagaaggt gcgcaatagc cggagaggaa 60 agggcgatgc tgtcacctag ccccctccct gagactccat tcagcccaga aaaaggagct 120 gctttctccc ccatctaccc taggagaaaa 150 <210> 4 <211> 50 <212> PRT <213> Homo sapiens <400> 4 Leu Arg Arg Arg Glu Gln Ala Glu Arg Gly Ser Arg Arg Cys Ala Ile 1 5 10 15 Ala Gly Glu Glu Arg Ala Met Leu Ser Pro Ser Pro Leu Pro Glu Thr 20 25 30 Pro Phe Ser Pro Glu Lys Gly Ala Ala Phe Ser Pro Ile Tyr Pro Arg 35 40 45 Arg Lys 50 <210> 5 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 5 gcttctgtct atcctggttt ctgg 24 <210> 6 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Primer <400> 6 tttctcctag ggtagatggg 20 <210> 7 <211> 36 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The N terminal 36 aa of KTPAF50 <400> 7 Leu Arg Arg Arg Glu Gln Ala Glu Arg Gly Ser Arg Arg Cys Ala Ile 1 5 10 15 Ala Gly Glu Glu Arg Ala Met Leu Ser Pro Ser Pro Leu Pro Glu Thr 20 25 30 Pro Phe Ser Pro 35 <210> 8 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> The C terminal 14 aa of KTPAF50 <400> 8 Glu Lys Gly Ala Ala Phe Ser Pro Ile Tyr Pro Arg Arg Lys 1 5 10

Claims (21)

1. SEQ. ID. NO: 2 또는 SEQ. ID. NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 분리된 폴리펩티드.
2. 변형되지 않은 분자와 비교하여 변형된 분자의 생물학적 특징에 현저한 영향을 주지 않으면서 하나 이상의 아미노산 잔기가 부가, 결실 또는 치환된 SEQ. ID. NO: 2 또는 SEQ. ID. NO: 4의 아미노산 서열을 포함하는 분리된 폴리펩티드.
3. 적어도 8개 아미노산 잔기를 포함하는, SEQ. ID. NO: 2로부터 부분 연속 서열을 포함하는 분리된 폴리펩티드에 있어서, 상기 연속 서열은 상기 SEQ. ID. NO: 2 내에서 연속 서열로서 포함되는 것을 특징으로 하는 분리된 폴리펩티드.
4. 청구항 3에 있어서, SEQ. ID. NO: 7 또는 SEQ. ID. NO: 8을 포함하는 것을 특징으로 하는 분리된 폴리펩티드.
5. 청구항 1 내지 4중 어느 한 항에 따른 분리된 폴리펩티드의 아미노산 서열을 포함하는 분리된 단백질 또는 폴리펩티드.
6. 청구항 2에 있어서, SEQ. ID NO: 2 또는 SEQ. ID. NO: 4의 변형된 서열을 포함하고, 여기서 최대 3개의 잔기가 각각, 보존성 치환에 의해 다른 아미노산 잔기로 치환되는 것을 특징으로 하는 분리된 폴리펩티드.
7. 청구항 1 내지 6중 어느 한 항에 있어서, 하나 이상의 아미노산이 상응하는 D-아미노산에 의해 치환되는 것을 특징으로 하는 폴리펩티드 서열.
8. 청구항 1 내지 7중 어느 한 항에 있어서, 아미노산은 역순(reverse order)으로 존재하는 것을 특징으로 하는 폴리펩티드 서열.
9. 청구항 1에 따른 분리된 폴리펩티드를 인코딩하는 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자.
10. 하나 이상의 핵산 잔기가 유전자 코드(genetic code)의 중복성(redundant nature)에 의해 용인되는 다른 핵산 잔기에 의해 치환된 SEQ. ID. NO: 1 또는 SEQ. ID. NO: 3의 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자.
11. 변형되지 않은 분자와 비교하여 변형된 분자의 생물학적 특징에 현저한 영향을 주지 않으면서 하나 이상의 뉴클레오티드가 부가, 결실 또는 치환된 SEQ. ID. NO: 1 또는 SEQ. ID. NO: 3의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 분리된 핵산 분자.
12. SEQ. ID. NO: 5와 SEQ. ID. NO: 6에서 선택되는 서열로 구성되는 분리된 핵산 분자.
13. (i) 적어도 8개 아미노산 잔기를 포함하는, SEQ. ID. NO: 2의 부분 연속 아미노산 서열을 인코딩하는 올리고뉴클레오티드; (ii) 엄격한 혼성화(hybridization) 조건 하에 SEQ. ID. NO: 1의 뉴클레오티드 서열에 혼성화할 수 있는 뉴클레오티드 서열; 또는 (iii) SEQ. ID. NO: 1 내에 포함된 뉴클레오티드의 상응하는 연속 서열에 적어도 70%의 동일성(degree of identity)을 갖는 적어도 24개 연속 뉴클레오티드의 서열을 보유하는 올리고뉴클레오티드인 적어도 24개 뉴클레오티드의 올리고뉴클레오티드.
14. 청구항 13에 있어서, SEQ. ID. NO: 1 내에 포함된 연속 30개 뉴클레오티드 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 올리고뉴클레오티드.
15. 청구항 9 내지 14중 어느 한 항에 따른 서열을 포함하는 핵산 벡터.
16. 청구항 1 내지 8중 어느 한 항의 분리된 폴리펩티드를 포함하는 제약학적 조성물.
17. 질환이나 질병의 치료 방법에 있어서, 청구항 1 내지 8중 어느 한 항의 폴리펩티드의 효과량을 병든 개체에 투여하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 질환이나 질병의 치료 방법.
18. 청구항 17에 있어서, 질환이나 질병은 면역학적 성분(component) 또는 병인(etiology)을 갖는 질환, 감염 질환(infectious disease), 급성과 만성 염증 질환(inflammatory disease), 암(cancer), 이식(transplantation)과 자가면역(autoimmune) 질환, 생식력(fertility)에 연관된 질환, 그리고 탄수화물 대사(carbohydrate metabolism) 장애로 구성된 군에서 선택되는 것을 특징으로 하는, 질환이나 질병의 치료 방법.
19. 청구항 18에 있어서, 암에는 부신피질암(adrenocortical cancer); 악성 흑색종(Malignant melanoma); 비-흑색종 피부암(Non-melanoma skin cancer); 피부 T-세포 림프종(Cutaneous T-cell Lymphoma); 카포시 육종(Kaposi's Sarcoma); 방광암(Bladder cancer); 결장암(Colon cancer); 결장직장암(Colorectal cancer); 직장암(Rectal cancer); 신경외배엽암(Neuroectodermal cancer)과 송과암(Pineal cancer); 유아기 뇌간 교종(Childhood Brain Stem Glioma); 유아기 소뇌 성상세포종(Childhood Cerebellar Astrocytoma); 유아기 대뇌 성상세포종(Childhood Cerebral Astrocytoma); 유아기 속질모세포종(Childhood medulloblastoma); 유아기 시로 신경교종(Childhood visual pathway Glioma); 수막종(Meningioma); 혼합성 신경교종(Mixed Glioma); 희돌기교종(Oligodendroglioma); 성상세포종(Astrocytoma); 상의세포종(Ependymoma); 뇌하수체 선종(Pituitary adenoma); 전이성 선암종(Metastasic Adenocarcinoma); 청각성 신경암(Acoustic neuroma); 척추주위 악성 기형종(Paravertebral Malignant teratoma); 유방암(Breast cancer); 관상피내 암종(Ductal carcinoma); 유선 종양(Mammary gland neoplasia); 난소암(Ovarian cancer); 암양종 종양(Carcinoid tumour); 자궁경부암(Cervical cancer); 자궁암(Uterus cancer); 자궁내막암(Endometrial cancer); 질암(Vaginal cancer); 음문암(Vulva cancer); 임신성 융모성 암(Gestational Trophoblastic cancer); 나팔관암(Fallopain cancer); 자궁 육종(Uterine sarcoma); 백혈병(Leukemia); 림프종(Lymphoma)(호지킨병(Hodgkin's disease)과 비-호지킨병(Non-Hodgkin's disease)); 신경모세포종(Neuroblastom); 망막모세포종(Retinoblastoma); 연부 조직 육종(Soft tissue Sarcoma); 윌름 종양(Wilm's tumour); 판코니 빈혈(Fanconi Anaemia); 랑게르한스 세포 조직구증(Langerhan's cell histiocytosis); 신장의 악성 횡문근양 종양(Malignant Rhabdoid Tumour); 간암(Liver cancer); 신경모세포종(Neuroblastoma); 망막모세포종(Retinoblastoma); 융모막암종(Choriocarcinoma); 내분비암(Endocrine cancer); 자궁내막암(Endometrial cancer); 식도암(Esophageal cancer); 유잉 육종(Ewing's Sarcoma); 안암(Eye cancer); 위암(Gastric cancer); 위장암(Gastrointestinal cancer); 요생식기암(Genitourinary cancer); 신경교종(Glioma); 부인암(Gynaecological cancer); 두경부암(Head and neck cancer); 간세포암(Hepatocellular cancer); 하인두암(Hypopharynx cancer); 도세포암(Islet cell cancer); 신장암(Kidney cancer); 후두암(Laryngeal cancer); 폐암(Lung cancer); 림프종(Lymphoma); 남성 유방암(Male breast cancer); 흑색종(Melanoma); 중피종(Mesothelioma); 다발성 골수종(Multiple myeloma); 코인두암(Nasopharyngeal cancer); 비-흑색종 피부암(Non-melanoma Skin cancer); 식도암(Esophageal cancer); 골육종(Osteosarcoma); 난소암(Ovarian cancer); 췌장암(Pancreas cancer); 뇌하수체암(Pituitary cancer); 전립선암(prostate cancer); 신장 세포 암종(Renal cell carcinoma); 망막모세포종(Retinoblastoma); 횡문근육종(Rhabdomyosarcoma); 육종(Sarcoma); 피부암(Skin cancer); 편평 세포 암종(Squamous cell carcinoma); 위암(Stomach cancer); 고환암(Testicular cancer); 흉선암(thymus cancer); 갑상선암(Thyroid cancer); 이행세포암(Transitional cell cancer); 영양모세포암(Trophoblastic cancer); 자궁암(Uterus cancer); 급성 림프구성 백혈병(Acute Lymphatic leukemia); 급성 골수성 백혈병(Acute myeloid leukemia); 샘낭 암종(Adenocystic carcinoma); 항문암(Anal cancer); 골암(Bone cancer); 창자암(Bowel cancer); 관상피내 암종(Ductal carcinoma); 지방육종(Liposarcoma); 신경모세포종(Neuroblastoma); 콩팥모세포종(Nephroblastoma), 그리고 골육종(Osteosarcoma)이 포함되는 것을 특징으로 하는, 질환이나 질병의 치료 방법.
20. 면역학적 성분(component) 또는 병인(etiology)을 갖는 질환, 감염 질환(infectious disease), 급성과 만성 염증 질환(inflammatory disease), 암(cancer), 이식(transplantation)과 자가면역(autoimmune) 질환, 생식력(fertility)에 연관된 질환, 그리고 탄수화물 대사(carbohydrate metabolism) 장애로 구성된 군에서 선택되는 질환이나 질병을 치료하기 위한 제약학적 조성물의 제조에서 청구항 1 내지 8중 어느 한 항의 폴리펩티드의 효과량의 용도.
21. 특정한 인간 DNA와 cDNA 서열을 확인하는 방법에 있어서, 이들 서열을 포함하는 물질을 KTPAF50 또는 이의 일부분을 인코딩하는 핵산 서열과 접촉시키는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는, 특정한 인간 DNA와 cDNA 서열을 확인하는 방법.
    

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