KR20100083739A - 카모듈린 유사 피부 단백질（ｃｌｓｐ）의 복합체 형태의 용도 - Google Patents

카모듈린 유사 피부 단백질（ｃｌｓｐ）의 복합체 형태의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 상피 상태를 평가하기 위한 마커로서, 카모듈린 유사 피부 단백질(CLSP), 상기 단백질로부터 유래한 폴리펩타이드 또는 그의 유사체의 복합체 형태의 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 상기 복합체 형태의 생물학적 활성을 조절할 수 있는 생물학적 또는 화학적 화합물을 선별 또는 다층화된 세포 모델을 준비 또는 개선하기 위한 상기의 복합체 형태의 용도에 관한 것이다.

Description

카모듈린 유사 피부 단백질（ＣＬＳＰ）의 복합체 형태의 용도{Use of complex forms of calmodulin-like skin protein CLSP}
본 발명은 상피, 특히 표피 표면의 자연 노화(chronological ageing)의 상태를 평가하기 위한 마커로서의, 카모듈린 유사 피부 단백질(CLSP), 상기 단백질의 펩타이드 절편 또는 그의 유사체의 복합체 형태의 용도에 관한 것이다.
상피는 세포들이 다른 세포들과 결합하여 서로 연결되어 있는 조직이며 기저막 위에 존재한다. 상피는 외부 표면, 예를 들면 피부의 표면, 즉 표피를 형성하거나, 점막의 표면에 있는 내부 표면을 형성한다. 상피는 또한 샘(gland)을 형성할 수 있다.
보다 상세하게, 이러한 상피는 세포 증식, 이동 및 분화의 모든 단계에서 활동하는 미세하게 조절된 세포 내부의 징후(sign) 및 세포 외부의 징후(sign)의 미세하게 조절되는 한 세트의 실행 및 다양한 세포 외부 기질 성분의 합성으로부터 유래된 항상성의 구조이다. 이러한 징후(sign)는 특히 각질형성세포(keratinocyte)에 의해 생성된 팩터(factor)의 작용으로부터 유발될 수 있다.
상피의 정확한 생리적 기능의 유지는, 특히 상피의 최종 분화 또는 프로테오글라이칸 합성을 포함한다.
더욱 상세하게 표피에 관하여 말하자면, 표피는 전통적으로 특히, 피부 줄기 세포를 포함하며, 표피의 종자층(germinative layer), 기저층 위에 있는 다면체 세포(polyhedral cell)의 여러 층으로 구성된 유극층(spiny layer), 개별적인 세포질을 함유하는 케라토히알린 과립(keratohyalin granule)을 포함하는 평편 세포(flattened cell)로 일컬어지는 1 개 내지 3 개 층을 포함하는 과립층(granular layer), 그리고 마지막으로 사세포(corneocyte)로 일컬어지는, 분화의 마지막 단계의 각질형성세포(keratinocyte)로 구성된 각질층(horny layer 또는 stratum corneum)으로 일컬어지는 한 세트의 상위 세포(upper cell)를 구성하는, 각질형성세포(keratinocyte)의 기저층으로 나뉜다.
생물과 환경 사이의 장벽의 기능을 하는 피부의 가장 바깥 부분인 각질층 및 머리를 구성하는 모낭(hair follicle) 부분을 나타내는, 모간(hair shaft)은 모두, 각질형성세포(keratinocyte) 분화 과정의 결과를 나타낸다. 표피 분화는 기저층으로부터의 각질형성세포(keratinocyte)가 분화되고 이동하는 성숙 과정 이후에 완전히 각질화되는 죽은 세포인 사세포(corneocyte)의 형성을 유발한다. 분화는 일정하게 유지되는 표피의 두께를 유발하여 표피의 항상성을 보장하는 완벽하게 잘 조화된 현상의 결과이다.
많은 피부 장애 또는 병리학상의 상태는 표피의 항상성의 기능장애로부터 유발될 수 있다.
따라서, 노화된 피부의 경우에 있어서, 이러한 기능 장애는 일반적으로 겉보기의 주름살(미세 주름살 및 깊은 주름살), 탄력성의 상실, 까칠한 감촉 및 건조함으로 나타난다. 조직학적 관점에서는, 진피와 표피의 접선(dermo-epidermal junction)의 평평화(flattening) 및 진피 및 표피의 두께의 감소가 관찰된다. 콜라겐 및 글리코사미노글라이칸 함량이 감소하고, 피부의 장벽 기능이 손상된다. 모든 이러한 현상은 태양에 대한 만성적인 노출에 의해 상승된다.
유사하게, 이러한 기능 장애는 폐경기의 여성에서 더욱 악화될 수 있다.
더욱 구체적으로 본 발명은 상피의 시간생물 노화(chronobiological ageing)의 과정 동안 각자 다르게 조절되는 것으로 밝혀진 CLSP 단백질의 복합체 형태를, 본 발명자에 의해 각질층에서 식별(chraterization)한 것으로부터 유발된다.
CLSP는 146 개의 아미노산을 포함하는 전구체 형태인, 카모듈린계에 속하는 칼슘-결합 단백질이다. CLSP는 대략 16　kDa의 분자량을 가지며, 카모듈린과 대략 52%의 아미노산 서열 상동성을 가진다.
CLSP의 구조는 4 개의 잠재적 "EF-hand" 칼슘-결합 부위, 잠재적 N-당화(N-glycosylation) 부위, 다수의 잠재적 인산화(phosphorylation) 부위 및 미리스틸레이션(myristylation) 부위를 포함한다.
CLSP에 대한 칼슘의 결합은 CLSP의 활성을 이끄는 입체적 구조(conformation)의 변화를 유도하여, 특히 다양한 타겟 단백질과의 상호작용을 가능하게 만든다.
CLSP를 코딩하는 mRNA의 증가는 광-유발 노화(Urschitz, J. et al., J. Invest. Dermatol., 2002, 119:3-13), 예를 들어 태양 광선에 대한 피부의 반복적 노출 또는 자연 노화(chronological ageing)의 과정과 구별되는 과정, 예를 들면 시간의 경과와 관련된 생리적 노화로부터 유발된 노화의 과정 동안에 보인다.
그러한 측면에서, 미국 특허 제2004/0142335호는 전사체(transcriptome) 분석에 의하여, 젊은 개체의 피부와 비교되는 나이든 개체의 피부에서 CLSP 단백질을 코딩하는 mRNA의 발현의 증가에 대해 제시한다.
따라서, CLSP는 각질형성세포(keratinocyte)의 최종 분화에 특히 연관될 수 있다(B. Mehul et al., J. Biol. Chem., 2000, Apr. 28; 275(17):12841-7), (EP　1　204　744).
최근에, 본 발명자들은 놀랍게도, 나이든 사람의 표피의 각질층에서 CLSP의 특정한 형태의 발현이 감소하는 것을 알아냈다. 매우 명확하게, 본 발명자에 의해 식별된(charaterized) 형태는 지금까지 고려되고 특히 상기에서 언급한 CLSP 형태와 구별되는 단백질의 성숙 단계와 일치한다.
이하에서 나타낸 바와 같이, 복합체 형태는 특정한 ELISA 분석 기법, 특히 이하의 실시예 1에 설명된 실행에 의하여 본 발명자들에 의해 식별(charaterization)되었다.
따라서, 그러한 관점 중의 하나에 의하여, 본 발명은 서열번호 1 또는 그의 유사체에 의하여 완전히 또는 부분적으로 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩되는 아미노산 서열 또는 그의 절편을 갖는 폴리펩타이드로부터 적어도 부분적으로 유래한, 특히 시험관 내(in vitro) 또는 생체 밖(ex vivo )에서, 상피, 특히 표피의 자연 노화(chronological ageing)의 상태의 식별(charaterization)하기 위한 도구로서의, 카모듈린-유사 피부 단백질(CLSP)의 적어도 하나의 복합체 형태의 용도를 제공하고자 한다.
본 발명에서 사용하는 용어 "자연 노화(chronological ageing)"는 본 발명의 범위에서 벗어나는 것으로서, 태양 또는 자외선 노출, 즉 광-유발 피부 노화에 따르는 피부 현상을 의미한다.
본 발명에서 사용하는 용어 "복합체 형태"는 CLSP 단백질 또는 그의 유도체와, 이들과 구별되는 또다른 단백질 또는 또다른 CLSP 단백질 또는 그의 절편과의 컨쥬게이트(conjugate)를 포함한다.
본 발명에서 사용하는 용어 "CLSP 단백질의 유도체"는 이하에서 설명하는 CLSP의 절편 또는 그의 유사체를 의미한다.
더욱 상세하게, 복합체 형태는 CLSP 전체의 회합(association), CLSP 절편과 CLSP의 회합(association), CLSP 절편의 회합(association), CLSP 또는 CLSP 절편과 타겟 단백질의 회합(association), 심지어 CLSP 또는 CLSP 절편과 각질층에서 단백질 분해된(proteolysed) 각질 세포막(cornified envelope)과 같은 단백질 구조의 회합(association)으로부터 유래할 수 있다.
따라서, 본 발명의 일 변형예로서, 본 발명에 따른 복합체 형태는 CLSP 단백질의 이합체(dimer) 형태, 또는 상기 단백질의 동일한 2 개의 펩타이드 절편의 컨쥬게이트(conjugate) 또는 상기 단백질의 서로 다른 2 개의 펩타이드 절편의 컨쥬게이트가 될 수 있다.
또다른 본 발명의 일 변형예로서, 이러한 복합체 형태는 CLSP 단백질의 회합(association), 또는 CLSP 단백질 절편과 두번째(secondary) 타겟 단백질의 회합(association)으로부터 유발된 생성물일 수 있다. CLSP 또는 그의 절편과 상호작용할 수 있는 이러한 타겟 단백질로서, 특히 14.3.3 베타 폴리펩타이드, 14.3.3 시그마, 아넥신 II, 아넥신 V, 칼레티큘린(calreticulin), ERp72, 뉴클레오린(nucleolin), 트랜스글루타미나아제 3(transglutaminase　3), 흑색종 항원 유전자 D1(MAGED1), 프로틴 포스파타아제 4(PPP4C), 업스트림 전사 인자 2(USF2)를 들 수 있다. 또한 CLSP 또는 그의 절편과 상호작용할 수 있는 이러한 타겟 단백질로서, YWHAQ 모티프(motif)와 같은 펩타이드 모티프를 들 수 있다.
모든 예상과 달리, 본 발명자들은 각질층에서의 이러한 복합체 형태의 수량화는 대응되는 표피의 상태를 정의하는데 효과적이고 신뢰할만한 수단을 구성한다는 것을 알아냈다. 상기에서 설명한 대로, 이러한 복합체 형태의 발현의 감소는 자연 노화(chronological ageing)의 과정 중에 관찰된다.
이러한 관점에서, 본 발명에 따르는 복합체 형태(들)의 감소는 상피의 자연 노화(chronological ageing) 상태를 나타낸다.
따라서 이러한 복합체 형태의 식별(charaterization)은 표피 상태의 진단을 수립하는데 특히 유용한 용도라는 것이 본 발명자에 의해 밝혀졌다.
이러한 진단과 관련하여, 상기 개체의 프로파일에 특히 적합한 미용 처치(cosmetic treatment)를 개체에 편리하게 제공할 수 있다. 자명한 이유로서, 미용 처치(treatment)의 견지에서 이러한 타입의 맞춤화(personalization)가 사용자들에 의해 특히 요구되며 선호된다. 본 발명은 이러한 수요를 편리하게 만족시킬 수 있다.
본 발명의 또다른 관점에 따르면, 본 발명은 상기 표피의 각질층에서 본 발명에 따르는 적어도 어느 하나의 CLSP 복합체의 발현의 질적 또는 양적 식별(charaterization)을 포함하는, 특히 시험관 내(in vitro) 또는 생체 밖(ex vivo)에서, 표피의 연대순의(chronological) 상태를 식별(charaterization)하기 위한 비침습적, 특히 미용적인, 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또다른 실시예에 따르면, 상시 방법을 통하여 얻은 데이터 또는 수치는, 예를 들어, 식별(charaterization)의 대상 및 알려진 상태와 구별되는, 적어도 하나의 상피, 특히 표피로부터 얻은 참조용(reference) 데이터 또는 수치와 비교하여 평가될 수 있다.
본 발명의 또다른 관점에 따르면, 본 발명은, 상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 따르는 복합체 형태의 감소는 자연 노화(chronological ageing) 상태를 나타내는, 표피의 연대순(chronological) 상태를 식별(charaterization)하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또다른 관점에 따르면, 본 발명은 또한, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 CLSP의 복합체 형태의 질적 또는 양적 식별(charaterization)을 포함하는, 주름살 또는 미세한 주름과 같은, 개체에서의 자연 노화(chronological ageing)와 관련된 피부 노화의 징후(sign)를 예방 또는 치료하기 위한 미용적 또는 치료적 처치(treatment)의 유효성을, 특히 시험관 내(in vitro) 또는 생체 밖(ex vivo)에서, 식별(charaterization)하기 위한 비침습적, 특히 미용적 방법을 대상으로 한다.
본 발명에서 사용하는 용어 "피부 노화의 징후(sign)"는 자연 노화(chronological ageing), 예를 들면 주름살 및 미세한 주름, 쭈글쭈글한 피부, 탄력성 또는 피부의 긴장성의 부족, 진피의 약화(thinning) 또는 콜라겐 섬유의 분해(degradation)에 기인한 겉보기의 피부의 모든 변형을 의미하며, 이것은 늘어지고 주름진 피부를 초래한다.
본 발명에서 의미하는 피부 노화의 징후(sign)는 피부의 자연 노화(chronological ageing)와 결합된 징후(sign)이거나, 그로부터 유발된 징후(sign)이다.
상세하게, 본 발명에서 의미하는 피부 노화의 징후(sign)는 광-유발 피부 노화와 결합된 징후(sign)이거나, 그로부터 유발된 징후(sign)와 구별된다.
본 발명에서 사용하는 용어 "광-유발된 노화"는 표피의 자외선 노출, 특히, U.V.A. 노출로부터 유발된 산화 손상, 자유 라디칼, 단백질의 당화(glycation) 또는 세포 표면 수용체의 과도한 활성화 및 조직 수준에서의 엘라스틴 섬유의 비후(thickening)로부터 유발된 산화 손상을 의미한다.
따라서, 본 발명은 피부의 자연 노화(chronological ageing)와 관련되나, 특히 자외선 노출과 관련되지 않은 피부 증상의 예방 또는 치료에 관한 것이다.
본 발명은 특히, 세포 마모 및 세포 노화로부터 유발된 피부의 자연 노화(chronological ageing) 증상에 관한 것이다.
또한, 표피 세포 수준에서의 자연 노화(chronological ageing)는 텔로미어(telomere) 감소, DHEA와 같은 호르몬 감소에 기인한 세포 자극의 감소 또는 성장 인자 감소에 의해 나타나며, 세포 수용체 숫자의 감소 및 조직 수준에서의 엘라스틴 섬유의 상당한 감소에 기인하여 나타난다.
그러한 현상은 자외선 노출과 관련이 없으며, 따라서 광-유발 피부 노화와 관련이 없다.
피부의 자연 노화(chronological ageing)에 따르는 세포 및 조직의 감소는 건조증(xerosis), 표피 이완증(epidermis laxity), 주름살 또는 미세한 주름, 피부 처짐, 지루성 각화증(seborrheic keratose) 또는 버찌 혈관종(cherry angioma)을 유발할 수 있다.
더욱 상세하게, 상기에서 설명한 방법은 i) 개체를 대표하는 적어도 하나의 제 1 피부 표면 샘플을 제공하는 단계, ii) 상기 샘플에서, 특히 이하의 실시예 1에서 설명한, 특히 ELISA 분석 기법을 통하여, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 복합체 형태를 수량화하는 단계, iii) 상기 개체의 대표적인 제 2 피부 표면 샘플에 대해, 상기 i) 단계 및 ii) 단계를 반복하는 단계, 및 iv) 처치(treatment)의 적어도 하나의 효과와 관련된 정보로부터 추론하기 위하여, 상기 ii) 단계와 iii) 단계의 말(end)에 얻은, 제 1 및 제 2 피부 표면 샘플들의 결과를 비교하는 단계로 구성된 최소의 단계를 포함할 수 있다.
상기 ii) 단계의 참조 수치(reference value) 또는 데이터는, 상기 처치(treatment)를 하기 전 또는 처치 개시 날짜에 관련하여 더 짧은 연대순(chronological) 시간 내에, 처치의 대상인 대표적인 개체의 상피, 특히 표피로부터 얻은 데이터일 수 있다.
본 발명의 바람직한 일 실시예에 따르면, 상기 제 1 샘플은 처치전(pretreatment) 상태를 대표하며, 상기 제 2 샘플은 처치(treatment)의 과정 동안의 상태 또는 처치후(post-treatment) 상태를 대표한다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 복합체 형태(들)의 증가는 상기 피부 노화의 징후(sign)의 처치(treatment)의 유효성을 나타낸다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기의 방법들 중 하나는 CLSP의 복합체 형태를 식별(charaterization)하는 단계의 말(end)에, 상기 개체에, 상기 복합체 형태에서 얻은 정보와 관련되어 수립된 또는 선택된, 케어 조성물(care composition), 특히 미용 케어 조성물을 투여하는 적어도 하나의 추가적 단계를 더 포함할 수 있다. 상기 추가적 단계는 식별(charaterization)하는 단계에 연속적일 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 조성물은 본 발명의 방법에 따라서 얻을 수 있는 타입의 정보에 대해 특히 적합한 조성물로부터 또한 선택될 수 있다.
따라서, 본 발명의 장점은, 첫째, 상피, 특히 피부의 표피의 생리학적 상태를 식별(charaterization)하고, 둘째, 그에 따라서 상기 상피 또는 표피에 적합한 처치(treatment)를 조절하는, 간단하고 빠른 방법을 제공하는 것이다.
또한 본 발명에 따르는 방법은 시험관 내(in vitro) 또는 생체 밖(ex vivo)에서 실행될 수 있다.
이하의 설명에서 나타낸 바와 같이, 본 발명에 따르는 방법은 그 방법의 실행이 침습적 과정을 요구하지 않는 한 특히 편리하다.
왜냐하면, 각질층에서의 노화에 대한 이러한 새로운 바이오마커(biomarker)의, 본 발명자들에 의한, 국소화(localization)는 간단한 국소 견본추출(sampling)에 의해 상기 마커의 발현을 양적 또는 질적으로 식별(charaterization)하는 것을 가능하게 만들기 때문이다.
편리하게, 상기 방법은 박피(stripping)에 의해 간단하게 채취되는 조건에서 개체의 각질층의 샘플에 대해 실행될 수 있다. 견본추출(sampling) 방법은, 예를 들어, 상피, 특히 표피에 접착 테이프를 적용하는 박피 기법(stripping technique)이 될 수 있다. 상기 접착 테이프를 떼어내면서, 상피 부분, 예를 들면 표피 부분이 견본추출된다. 단백질 추출(extraction) 후에, 상기 상피 부분은 그 후 본 발명에서 사용되는 ELISA 분석에 의해 분석된다.
또한 본 발명의 또다른 관점에 따르면, 본 발명은 또한 상기 복합체 형태의 증가 또는 상기 복합체 형태의 안정성 또는 생물학적 활성을 조절할 수 있는, 특히 촉진할 수 있는, 생물학적 또는 화학적 화합물을 선별하기 위한 도구로서의, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 복합체의 용도에 관한 것이다.
상세하게, 본 발명은 a) 복합체 형태의 발현에 적합한 조건하에서, 적어도 하나의 화학적 또는 생물학적 테스트 화합물과 접촉하는 본 발명의 적어도 하나의 복합체 형태를 포함하는 적어도 하나의 세포 타입을 가지고 오는 단계, b) 상기 복합체 형태의 함량을 측정하는 단계, 및 c) 화학적 또는 생물학적 테스트 화합물의 부존재하에서 측정된 상기 복합체 형태의 함량과 상기 b) 단계에서 측정된 상기 함량을 비교하는 단계를 포함하는, 항-노화(anti-ageing) 활성 성분을 선별하는 방법에 관한 것이다.
본 발명의 일 실시예에 따라서, 본 발명의 복합체 형태(들)이 증가는 항-노화(anti-ageing) 물성을 갖는 활성 성분을 나타내는 것을 특징으로 하는 항-노화(anti-ageing) 활성 성분을 선별하는 방법에 관한 것이다.
따라서, 편리하게, 관찰되는 본 발명에 따르는 복합체 형태(들)의 함량의 증가와 관련된 활성 성분(들)을 선택하는 단계가 상기 c) 단계의 말(end)에서, 더 실행될 수 있다.
또한 본 발명의 또다른 관점에 따르면, 본 발명은 피부 노화의 징후(sign)를 예방 또는 치료하는데 유용한 성분으로서, 유효한 양의 복합체 형태(들)의 미용 용도에 관한 것이다.
또한 본 발명의 또다른 관점에 따르면, 본 발명은, 상기 조성물은 표피의 약화(thinning), 표피의 단단함, 탄력성, 밀도, 또는 긴장성의 상실, 또는 주름 및 미세한 주름의 형성을 예방 또는 치료하기 위한 유효한 양의 복합체 형태(들)의 용도에 관한 것이다.
또한 본 발명의 또다른 관점에 따르면, 본 발명은 본 발명에 따르는 유효한 양의 복합체 형태(들)의 용도 또는 다층화된 세포 모델, 특히 재구성된 피부 모델을 준비 또는 개선하기 위하여, 상기 복합체 형태(들)의 형성을 조절하는 적어도 하나의 유효한 양의 성분의 용도에 관한 것이다.
또한 본 발명의 또다른 관점에 따르면, 본 발명은 분리되어 재구성된 피부, 특히 각질형성세포(keratinocyte)를 생성할 수 있는 세포와 접촉하는 본 발명에 따르는 적어도 하나의 복합체를 가져오는 단계로 구성된 적어도 하나의 단계를 더 포함하는, 분리되어 재구성된 피부를 준비하는 방법에 관한 것이다.
CLSP 의 "복합체 형태"의 정의
상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 따르는 복합체 형태는 서열번호 1또는 그의 유사체에 의해 완전히 또는 부분적으로 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열, 또는 그의 절편을 포함하는 폴리펩타이드로부터 적어도 부분적으로 유래한다.
상세하게, CLSP의 복합체 형태는, 전체 CLSP의 회합(association), CLSP 절편과 CLSP의 회합(association), CLSP 절편의 회합(association), CLSP 또는 CLSP 절편과 타겟 단백질의 회합(association)되거나, 심지어 CLSP 또는 CLSP 절편과 각질층의 단백질 분해된 각질세포막(cornified envelope)과 같은 적어도 하나의 단백질 구조와 회합(association)된 것으로부터 유발된 중합체(multimer)가 될 수 있다.
본 발명에 따르는 CLSP 절편은 본 발명에 따르는 복합체 형태에 따르는 실행에 적합한 길이 및 활성을 갖는 절편이다.
상세하게, CLSP의 복합체 형태는 이합체가 될 수 있으며, 특히, 전체 CLSP 동종이합체(homodimer) 또는 그의 절편이 될 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따라서, 본 발명에 따르는 이합체는 전체 CLSP 단백질 또는 그의 절편에 의해 대표되는 제 1 모노머, 그리고 전체 CLSP 단백질 또는 그의 절편과 구별되는 구조에 의해 대표되는 제 2 모노머를 포함할 수 있다.
본 발명에 적합한 전체 CLSP 단백질 또는 그의 절편로부터 구별되는 구조에 의해 대표되는 모노머의 예로서, 전체 CLSP 또는 그의 절편과 이합체를 형성할 수 있는 상기 언급된 단백질 및 그의 절편을 들 수 있다.
본 발명의 또다른 일실시예에 따르면, 본 발명에 적합한 복합체 형태는 CLSP로부터 유래한 펩타이드를 포함할 수 있고, 전체 CLSP 서열과 구별될 수 있으며, 상세하게, 서열번호 1에 의해 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열과 구별될 수 있다.
상세하게, 본 발명에 적합한 CLSP로부터 유래한 펩타이드는 CLSP의 절편, 특히 서열번호 1에 의해 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 단백질의 절편이 될 수 있으며, 본 발명에 따르는 복합체 형태로서 그것의 용도에 적합한 적당한 길이 및 활성을 포함한다.
본 발명에서 사용하는 용어 "핵산 서열의 절편"은 본 발명에 따르는 복합체 형태 또는 그의 유사체를 부분적으로 코딩하는 핵산 서열, 상세하게 서열번호 1 또는 그의 유사체에 의해 대표되는 핵산 서열을 의미한다.
본 발명에서 사용하는 용어 "핵산 서열의 유사체"는 핵산 코드의 퇴화로부터 선택적으로 유발되고, 상기 핵산 서열에 의해 코딩된 폴리펩타이드의 서열과 동일하거나 유사한 서열을 갖는 복합체 형태의 적어도 한 부분을 코딩하는, 핵산 서열을 의미한다.
기원의 생물체(organism of origin)에서 천연적으로 나타날 수 있거나 나타날 수 없는 사실을 미리 판단함이 없이, 핵산 서열은 가능한 상기의 어느 기원들(origins), 예를 들면, 동물, 특히 포유동물, 더더욱 특히 인간 또는 식물로부터, 또는 미생물(바이러스, 파즈(phage), 그중에서도 특히 박테리아)로부터, 또는 균류로부터 유래할 수 있다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 본 발명에 따르는 복합체 형태들은 수용성일 수 있다.
본 발명에서 사용하는 용어 "수용성"은 예를 들어, 카오트로픽제(chaotropic agent) 또는 이온 세척제(ionic detergent) 타입의 단백질-변성 물질의 존재하에서만 추출될 수 있는 본래의 CLSP와는 반대로, 그러한 물질 없이 물 또는 수용성 매체에서 용해되는 본 발명에 따르는 착화된(complexed) 펩타이드 형태의 능력을 설명하기 위한 것이다.
본 발명의 또다른 실시예에 따르면, 본 발명에 따르는 복합체 형태는 서열번호 2, 그의 유사체로부터 완전히 또는 부분적으로 대표되는 아미노산 또는 그의 절편을 갖는 폴리펩타이드로부터 적어도 부분적으로 유래한다.
본 발명에서 사용하는 용어 "CLSP"는 일반적으로, 달리 표현되지 않는다면, 그것의 명백한 분자량 또는 등전점(isoelectric point)을 변형할 수 있는, 포지션 25 또는 43에서 아스파라긴 잔기에 대한 당화(glycosylation) 타입, 인산화(phosphorylation) 타입 또는 미리스티레이션 타입의 번역후 변형(post-translational modification)을 하거나 하지 않을 수 있는 단백질의 서열(서열번호 2)을 의미한다.
더욱이, 폴리펩타이드의 주요 서열, 예를 들면, 트립신과 같은 프로테아제 효소에 의해 특별히 인식되는 위치를 결정하는, 일련의 아미노산은, 일단 이러한 위치의 인식이 유효하게 되면, 단백질 분해(proteolysis)에 의한 폴리펩타이드의 절단을 유래하는 것으로 잘 알려져 있다. 상기 단백질 분해(proteolysis)는 CLSP의 복합체 형태의, 다양한 펩타이드, 또는 단백질 분해의 절편의 생성을 유발한다.
본 발명자들은 각질층에서 그러한 펩타이드의 존재를 감지하였다.
따라서, 본 발명은 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24 및 서열번호 25에 의해 대표되는 펩타이드 서열을 갖는 적어도 하나의 CLSP의 단백질 분해의 절편을 포함하는 복합체 형태도 포함한다.
따라서, 본 발명의 일실시예에 따라서, 본 발명에 따르는 복합체 형태는 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24 및 서열번호 25, 그리고 이들의 혼합물로부터 선택된 아미노산 서열에 의해 완전히 또는 부분적으로 대표되는 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드로부터 유래한다.
본 발명에서 사용하는 용어 "폴리펩타이드의 유사체"는 특히 상기 폴리펩타이드의 특징적 서열의 하나에 따르며, 상기 폴리펩타이드와 동일한 성질의 생물학적 활성을 갖는, 서열 상동성을 보여주는 폴리펩타이드를 의미한다.
이러한 유사체는 펩티드 유사 성분(peptidomimetic agent)일 수 있다.
상동성은 적어도 85%, 예를 들어 적어도 90%, 적어도 95%일 수 있다. 상동성은 시각적 대조 또는 www.ncbi.nlm.nih.gov 에서 이용가능한 BLAST 프로그램과 같은, 업계에서 일반적으로 사용되는 어떠한 컴퓨터 도구에 의해 측정될 수 있고, 디폴트 함수(default parameter)를 가지고 사용될 수 있다.
서열 상동성은, 본 발명에 따르는 폴리펩타이드의 특징적 서열에서 하나 이상의 아미노산의 삭제, 또는 하나 이상의 아미노산의 삽입, 또는 하나 이상의 아미노산의 치환으로부터 발생하는, 본 발명에 따르는 펩타이드의 서열에서 일어난 돌연변이 또는 다양성으로부터 유래한 변형으로부터 유발될 수 있다.
본 발명에서 사용하는 용어 "절편"은 적어도 4 개, 적어도 6 개, 바람직하게 적어도 8 개, 그리고 더욱 바람직하게 12 개의 CLSP 단백질의 연속적 아미노산을 포함하며, 실질적으로 유사한 생물학적 활성을 나타내는 펩타이드 부분을 의미한다. 일반적으로, 폴리펩타이드 유사체는 천연 아미노산 서열에 따르는 보수적 치환을 포함할 수 있다.
이러한 다양한 변형이 이루어질 수 있다.
본 발명에서 고려될 수 있는 돌연변이의 실시예의 한 예로서, 유사한 수치료법의 지수(hydropathic index)를 갖는, 그러나 본 발명에 따르는 복합체 형태의 생물학적 성질에 실질적으로 영향을 미치지 않는, 아미노산 잔기를 가진 하나 이상의 아미노산 잔기의 대체에 관한 언급이 비소모적으로 이루어질 수 있다.
수치료법의 지수는 아미노산의 소수성(hydrophobicity) 및 전하(charge)에 따라서 아미노산에 할당된 지수이다(Kyte et al. (1982), J. Mol. Biol., 157: 105).
본 발명에 의하여 또한 밝혀진 복합체 형태는 상기에서 한정한 하나 이상의 번역후 변형(들)(post-translational modification(s))이 일어난 폴리펩타이드로부터 유래할 수 있다.
본 발명에서 사용하는 용어 "번역후 변형(들)"은 펩타이드 또는 단백질이 세포에서 세포 합성의 말기에 겪을 수 있는 모든 변형들, 예를 들어, 하나 이상의 인산화 반응(들), 하나 이상의 티올화 반응(들), 하나 이상의 아세틸레이션 반응(들), 하나 이상의 당화 반응(들), 미리스티레이션과 같은, 하나 이상의 리피데이션 반응(들)(lipidation(s)), 펩타이드 서열 내에서 이황화 결합 또는 절단의 형성과 같은 구조적 재배열과 같은 것을 의미한다.
더욱이, 유사체는 천연 폴리펩타이드와 실질적으로 동일한 생물학적 활성을 갖는다.
본 발명의 일 실시예에 따르면, 본 발명의 실행에 적합한 복합체 형태는, CLSP의 원래 형태의 효소적 또는 화학적 세포 용해(lysis) 후에 적당히 얻을 수 있거나, 또는 화학적 또는 생물학적 합성에 의해 적당히 얻을 수 있거나, 또는 생물학적 조직, 예를 들면 원래 이러한 복합체 형태를 천연적으로 발현하는 피부로부터의 추출에 의하여 적당히 얻을 수 있는, 천연 또는 합성 폴리펩타이드, 또한 이들의 다양한 번역후 변형으로부터 유래할 수 있다.
당업자는 재조합 DNA에 기초한 방법들, 예를 들어 매뉴얼 "Molecular Cloning - A Laboratory Manual" (2차 발행), Sambrook et al., 1989, Vol. I-III, Coldspring Harbor Laboratory, Coldspring Harbor Press, NY, (Sambrook)에 의하여 본 발명에 따르는 복합체 형태를 얻을 수 있다.
본 발명의 또다른 실시예에 따라서, 본 발명의 실행에 적합한 복합체 형태들은 상기에서 언급한 것들, 친수성 또는 소수성 표적제(targeting agent), 생물전환 전구체(bioconversion precursor), 또는 형광의, 방사성의, 측색의(colorimetric)의 표지제와 구별되는 다른 폴리펩타이드와 또한 융합될 수 있다.
비제한 방법에서, 본 발명에 따르는 복합체 형태와 결합될 수 있는 화합물의 예로서, Green Fluorescent Protein와 같은 형광 단백질, 로다민(rhodamine), 플루오레세인(fluorescein), 또는 Texas Red®과 같은 형광의 화학적 화합물, 인광(phosphorescent) 화합물, 3H, 14C, 35S, 121I 또는 125I와 같은 방사성 원소, 또는 갈락토시다아제(galactosidase), 펄옥시다아제(peroxidase), 클로람페니콜 아세틸전이효소(chloramphenicol acetyltransferase), 루시퍼라아제(luciferase) 또는 알칼리성 포스파타아제(alkaline phosphatase)의 반응에 민감한 크로모제닉(chromogenic) 기질과 같은 측색의 표지제를 들 수 있다.
본 발명에 따르는 복합체 형태와 커플링 될 수 있는 화합물의 성질에 따라서, 커플링(coupling)은 화학적 방법에 의해 실행될 수 있으며, 특히 민감한 화학적 작용에 의해서, 또는 당업자에게 알려진 분자 생물학적 방법에 의하여 실행될 수 있다.
폴리펩타이드를 감지하는 방법으로서, 웨스톤 블로팅(Western blotting), 슬롯 블로팅(slot blotting), 도트 블로팅(dot blotting), 싱글플렉스 또는 멀티플렉스 타입의 ELISA(효소결합면역흡착검사법), 프로테오믹스(proteomics) 또는 글리코믹스(glycomics) 방법, 은계 염색약(silver-based stain), 쿠마시 블루(Coomassie blue) 또는 SYPRO를 사용하여 폴리아크릴아미드 겔에서 폴리펩타이드를 염색하는 방법, 면역형광법(immunofluorescence), 자외선 흡수법(UV absorption), 전통적인 면역조직화학(immunohistochemical) 방법, 전자 또는 공초점 주사현미경(confocal microscopy), FRET(형광공명에너지전이), TR-FRET(시분할 FRET) 방법, FLIM(형광 수명 이미징 현미경술) 방법, FSPIM(형광 스펙트럼 이미징 현미경술) 방법, FRAP(광표백 이후의 형광 회복) 방법, 리포터-유전자(reporter-gene) 방법, AFM(원자력 현미경법), 표면 플라즈몬 공명법(surface plasmon resonance method), 미세열량계법(microcalorimetry method), 유세포분석법(flow cytometry method), 바이오센서법(biosensor method), 방사면역측정법(RIA), 등전집중방법(isoelectric focusing method), 및 효소 분석법(enzymatic assay), 펩타이드 칩, 당(sugar) 칩, 항체 칩을 이용한 방법, 질량분석법(mass spectrometry method), 및 SELDI-TOF 분광법(Ciphergen)을 들 수 있다.
이하에서 나타나는 바와 같이, 본 발명에 따르는 복합체 형태의 감지는 ELISA방법에 따른다.
표피 상태를 진단 또는 항-노화( anti - ageing ) 활성 성분을 선별하기 위한 방법으로서의, 본 발명에 따르는 복합체 형태의 용도
상기에서 설명한 바와 같이, 본 발명의 또다른 관점에 따라서, 본 발명은 CLSP, 또는 그의 유도체 또는 그의 절편으로부터 적어도 부분적으로 형성된 복합체 형태의 발현을 질적 또는 양적으로 식별(charaterization)하는 것을 목적으로 하는 방법에 관한 것이다. 더욱 상세하게, 본 발명은, 시험관 내( in vitro ) 또는 생체 밖(ex vivo)에서, 비병리학상의 표피의 표면 상태 또는 미용적 또는 치료적 처치(treatment)의 유효성을 식별(charaterization)하는 비침습적 방법에 관한 것이다.
본 발명의 식별(charaterization)을 실행하기 위한 외과적 기법이 요구되지 않는 한, 이러한 본 발명은 특히 편리하다.
이하에서 설명하는, 본 발명에 따르는 방법은, 샘플, 예를 들어, 상피, 특히 개체로부터 얻은, 표피의 분리된 샘플에 대해 실행될 수 있다.
본 발명에 따르는 방법은 상피, 및 특히 상피 세포 모델로부터 채취한 표피, 특히 표피 세포 모델, 또는 그러한 세포 모델의 상태를 제한하기 위하여 분리된 재구성된 피부로부터 얻은 샘플에 대하여 또한 실행될 수 있다.
따라서, 표피의 추출물은 간단한 박피에 의하여 얻어질 수 있고, 하기의 실시예 1에서 설명한 대로 ELISA에 의해 직접적으로 분석될 수 있다.
박피 기법은 표피 표면에 끈적한 표면을 적용하는 것, 즉 3M의 Blenderm®, D'squam(CuDERM의 상업적 접착제), 또는 시아노아크릴레이트 접착제 같은 것을 적용하는 것이다. 이러한 박리에 의하여, 점착성 각질세포(corneocyte) 및 그의 세포내 공간의 함량이 견본추출될 수 있고 결과적으로 단백질 함량에 접근할 수 있는 추출물이 될 수 있다.
본 발명의 방법에 적합한 샘플을 채취하는 것은 피부 표면을 "수세((washing)"한 것에 의해 더욱 직접적으로 실행될 수 있다. 예를 들어, 유체 순환(fluid circuit)과 결합된 프랑스 특허 제2　667　778 호에 설명된 바와 같은, 베인 터빈(vane turbine) 타입 또는 와선형(spiral) 세포 타입의 부속물에 의하거나, 간단히 피부의 표면에 완충액 액적을 추가/제거하는 것에 의할 수 있다.
본 발명을 실행하는데 적합한 또다른 견본추출 방법의 수단으로서, 트윈 블레이드 시스템(twin blade system) 또는 면도 생검(shave biopsy)에 의하여 각질층의 상단 부분을 벗겨내는 것에 기초하는 방법을 들 수 있다. 이러한 기법은 스꽈메(squamae)를 수집하는 것을 가능하게 하며, 상기 수집된 스꽈메는 미네랄, 아미노산 또는 지질 함량을 측정하기 위하여 다양한 기법에 의해 직접적으로 분석될 수 있다.
견본 추출의 말(end)에, 샘플은 ELISA방법에 의하여 식별(characterization)된다.
이러한 방법은 본 발명에 따르는 복합체 형태의 감지에 적합한 항체의 사용에 특히 기초한 것이다. 표피 상태를 평가하기 위한 도구로서 사용될 수 있는 항체는 "Antibodies: A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1990)에서 설명된 바와 같이, 당업자에게 알려진 방법에 의해서도 얻어질 수 있다.
이하의 실시예 1에서 설명된 바와 같이, CLSP의 복합체 형태를 감지하는 방법은 특히 covalAb 회사에 의해 개발된 2개 타입의 단일클론 항체, 예를 들면 캡쳐 항체(capture antibody)(클론 DB15C9) 및 "술포-태그(sulpho-tag)"(CLSP 클론 DB7g12)로 표지된 셀렉션 항체(selection antibody)의 사용을 요구한다.
표피 상태의 진단 방법
: 본 발명의 일실시예에 따라서, 상피, 예를 들면 표피의 상태를 식별(charaterization)하는 방법은, a) 상기 상피의 표면 샘플에서, 본 발명에 따르는 적어도 하나의 복합체 형태의 함량을 측정하는 단계, 및 b) 참조값(reference value)과 상기 a) 단계에서 측정된 상기 함량을 비교하는 단계로 구성된 최소한의 단계를 포함한다.
편리하게, 본 발명의 방법은 비침습적이다.
참조값(reference value)은, 예를 들어 상피, 특히 보통의 피부, 예를 들면 생리학적 관점에서 만족스러운 피부, 예를 들면 젊은 피부 같은 것으로부터 채취한 표피 샘플에 대해 측정된, 복합체 형태의 함량일 수 있다.
참조값(reference value)의 측정은 상기 복합체 형태의 상기 함량의 측정에 병행하거나 연속하여 실행될 수 있다.
참조값(reference value)으로 측정된 함량을 비교함으로써, 상기 수치에 비례하는 편차를 평가할 수 있다.
상기 편차(음성 또는 양성)의 크기 또는 성질의 분석은 표피 상태에 관한 정보가 될 수 있다.
표피 상태의 식별(charaterization)은 본 발명의 복합체 형태의 발현을 조절할 수 있는 화합물의 사용함으로써 수정될 수 있는 가능 피부 장애를 나타낼 수 있다.
따라서, 본 발명의 복합체 형태(들)의 감소는 자연 노화(chronological ageing) 상태를 나타내는 것이다.
본 발명의 일 실시예에 따라서, 본 발명에 따르는 방법은 특히 자연 노화(chronological ageing) 상태를 진단하는 방법에서 실행될 수 있다. 예를 들어, 자연 노화(chronological ageing)와 관련된 개체의 결함 또는 변화를 평가하기 위하여, 상피, 특히 표피의 생체 내(in vivo), 시험관 내(in vitro) 또는 생체 밖(ex vivo)의 생리학적 상태를 진단하는 방법에서 실행될 수 있다.
생물학적 또는 화학적 화합물의 선별
본 발명은 복합체 형태의 증가 또는 안정성 또는 생물학적 활성을 조절할 수 있는 생물학적 또는 화학적 화합물을 선별하기 위한 도구로서, 본 발명에 따르는 복합체 형태의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한, 본 발명에 따르는 복합체 형태의 함량을 조절할 수 있는, 생물학적 또는 화학적 화합물, 또는 심지어 노화 예방 활성 성분, 또는 물리화학적 팩터(factor)를 선별하는 방법에 관한 것으로서, a) 상기 복합체 형태의 방출에 적합한 상태에서, 적어도 하나의 화학적 또는 생물학적 테스트 화합물과 접촉하는 본 발명에 따르는 적어도 하나의 복합체 형태를 포함하는 적어도 하나의 세포 타입을 가져오는 단계, b) 상기 복합체 형태의 함량을 측정하는 단계, 및 c) 화학적 또는 생물학적 테스트 화합물의 부존재 하에서 측정된 상기 복합체 형태의 함량과 상기 단계 b)에서 측정된 함량을 비교하는 단계를 포함한다.
상기 단계 c)에서 실행된 비교를 통하여, 본 발명에 따르는 복합체 형태의 발현을 조절하는 상기 테스트 화합물의 성질에 관한 정보를 추론할 수 있다.
상기에서 설명된 바와 같이, 본 방법은 복합체 형태(들)의 함량의 증가를 관찰하기 위한 활성 성분을 계속 유지하기 위한 단계를 또한 포함할 수 있다.
더욱 특별하게, 개체에서 피부 노화의 징후(sign)를 예방 또는 치료할 수 있는 처치(treatment)의 유효성을 식별(charaterization)하는데 유익한 방법은 i) 상기 개체를 대표하는 적어도 하나의 제 1 피부 표면 샘플을 제공하는 단계, ii) 상기 샘플에서, 특히 실시예 1에서 설명한 ELISA 분석 기법을 통하여, 본 발명의 적어도 하나의 복합체 형태를 수량화하는 단계, iii) 상기 개체의 대표적인 제 2 피부 표면 샘플에 대해, 상기 i) 단계 및 ii) 단계를 반복하는 단계, 및 iv) 특히, 처치(treatment)의 적어도 하나의 효과에 관한 정보로부터 추론하기 위하여, 상기 ii) 단계와 iii) 단계의 말(end)에 얻은 제 1 및 제 2 피부 표면 샘플들의 결과를 비교하는 단계를 포함할 수 있다.
생물학적 또는 화학적 테스트 화합물 또는 물리화학적 테스트 팩터의 사용에 앞서 참조값(reference value)의 측정이 실행되는 경우에 있어서, 본 발명에 따르는 방법은 또한, 적절하게, 상기 화합물의 잠재적 유효성을 평가할 수 있다.
상기 함량은 상기 화합물의 존재에 의하여 영향을 받지 않을 수 있으나, 또 한편으로는 억제되거나 자극될 수 있다.
상기 함량의 증가가 관측되는 경우에 있어서, 테스트된 화합물은 예를 들어, 항-노화(anti-ageing) 활성 성분으로서 사용될 수 있다.
일 실시예에 따르면, 상기에서 설명된 방법들은, 개체에게 iv) 단계의 말에 얻은 정보와 관련하여 수립되거나 선택된 미용 케어 조성물을 투여하는 단계로 구성된 적어도 한 단계를 더 포함할 수 있다.
본 발명에 따르는 복합체 형태의 함량의 측정은, 특히 이하의 실시예 1에서 상세하게 설명되는, ELISA 방법에 의하여 실행된다.
본 발명의 또다른 관점에 따르면, 상기에서 설명된 CLSP의 복합체 형태는 미용적 또는 치료적 조성물에서 사용될 수 있다.
본 발명에 따르는 모든 미용적 또는 치료적 조성물은 생리학적으로 허용가능한 매체를 사용할 수 있다.
본 발명에서 사용하는 용어 "생리학적으로 허용가능한 매체"는 상피 또는, 피부, 두피, 입술, 점막과 같은 케라틴 물질, 머리카락, 손톱 및 체모와 같은 케라틴 섬유, 또는 구강 또는 장관 외(parenterally) 적합한 곳에 본 발명의 조성물을 적용하는데 적합한 매체를 의미한다.
본 발명에서 사용하는 용어 "미용적"은 원칙적으로, 심미적 또는 안락한 효과를 제공하기 위한 용도를 나타낸다.
본 발명에서 사용하는 용어 "치료적"은 예방적 또는 치료적 처치(treatment), 또는 상피, 특히 표피 상태를 평가하기 위한 방법의 맥락에서 사용될 수 있는 조성물을 나타내기 위한 것이다.
본 발명에서 사용하는 용어 "예방적(prophylactic 또는 preventive)"은, 현상, 예를 들면 병리학상의 상태가 발생할 위험이 감소되는 것을 의미한다.
또다른 실시예에 따르면, 본 발명에 따르는 미용적 조성물 또는 치료적 조성물은 적어도 하나의 미용적 또는 치료적 활성 성분을 또한 포함할 수 있다.
본 발명의 문맥에서 사용될 수 있는 활성 성분의 예로서, 실리콘 오일, 트리글리세라이드 타입의 식물 오일, 팔렘 오일(parleam oil)과 같은 탄화수소계 오일, 지방산과 지방산 알코올의 에스테르와 같은, 미용 오일을 들 수 있다.
또한 본 발명에서는, 보습 활성성분, 또는 세라마이드, 콜레스테롤 설페이트 또는 지방산 및 이들의 혼합물과 같은, 천연 지질막(natural lipid barrier)을 개선시키는 활성 성분과 같은, 피부 상태를 개선시킬 수 있는 다른 활성 성분이 또한 사용될 수 있다.
또한 본 발명에서는, 프로테아제, 리파아제, 글루코시다아제, 아미다아제, 세레브로시다아제(cerebrosidase) 또는 멜라나아제, 및 이들의 혼합물과 같은, 피부에서 활성을 갖는 효소가 또한 사용될 수 있다.
일반적으로 본 발명의 조성물은 피부(몸의 피부 부위) 또는 점막(볼, 협골점(jugal), 잇몸, 생식기관, 결막, 등)에 적용될 수 있다.
공지된 방법에 의해, 본 발명의 미용적 조성물은 친수성 또는 소수성 겔화제, 친수성 또는 소수성 부가제(additive), 보존제, 항산화제, 용매, 향기, 부형제(filler), 차단제(screening agent), 냄새 흡수제 및 염료와 같은, 미용 업계에서 통상적인 보조제(adjuvant)를 또한 포함할 수 있다.
본 발명에 따르는 조성물의 다양한 구성성분의 함량은 업계에서 전통적으로 사용되는 함량이다.
본 발명에 따르는 조성물에 포함된, 본 발명에 따르는 복합체 형태(들)의 함량은 "유효한 양"으로 언급되며, 유효한 양은 화합물의 성질 및 원하는 효과에 따라 달라지며, 따라서 대용량으로 까지 달라질 수 있다.
또한 본 발명의 조성물은, 조성물 총 중량의 0.00001% 내지 50%의 함량, 바람직하게 조성물 총 중량의 0.001% 내지 10%의 함량, 더욱 바람직하게 조성물 총 중량의 0.1% 내지 1%의 함량으로 본 발명에 따르는 복합체 형태를 포함할 수 있다.
더욱 상세하게, 본 발명에 따르는 조성물은, 상피, 특히 표피의 상태의 악화를 일으킬 수 있는 상태를 감소 또는 치료하기 위한 것일 수 있다.
그러한 상태는 자연적 기원(예를 들면 피부 노화와 같은, 경과하는 시간에 관련된 것) 또는 피부 장애, 예를 들면 광노화에 연관된 것의 지표가 될 수 있다.
따라서, 본 발명에 따르는 조성물, 상세하게 미용적 조성물은, 특히 표피의 약화 또는 단단함, 탄력성, 밀도, 또는 표피의 긴장성의 손실 또는 주름살 및 미세한 주름의 형성을 예방 또는 치료하는 용도로 사용될 수 있다.
본 발명의 또다른 실시예에 따르면, 본 발명에 따르는 조성물, 상세하게 미용적 조성물은, 특히, 건조함에 대한 피부 징후(sign)를 예방 또는 치료하는, 특히 표피의 탈수를 예방 또는 치료하는 용도로 사용될 수 있다.
본 발명의 또다른 실시예에 따라서, 본 발명에 따르는 조성물, 상세하게 미용적 조성물은, 표피 노화에 대한 징후(sign)를 예방 또는 치료하는 용도일 수 있다.
본 발명의 또다른 관점에 따라서, 본 발명은, 피부, 점막 또는 케라틴 섬유의 적어도 일부에 본 발명에 따르는 적어도 하나의 미용적 조성물을 적용하는 적어도 하나의 단계를 포함하는, 피부 노화에 대한 징후(sign)의 처치(treatment)를 위한 방법에 관한 것이다.
본 발명의 또다른 관점에 따르면, 본 발명은 또한 용도에 관한 것이며, 상세하게 피부 노화의 징후(sign)를 예방하기 위한, 더욱 상세하게 노화된 피부의 예방 또는 치료를 위한, CLSP 단백질의 복합체 형태, 상기 단백질 또는 그의 유사체의 펩타이드 절편 또는 그러한 폴리펩타이드의 활성, 발현 또는 안정성을 조절하는 성분의, 미용적 또는 치료적 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 다층화된 세포 모델, 특히 표피 또는 점막 타입, 그리고 특히 재구성된 피부 모델을 준비 또는 개선하기 위한 본 발명에 따르는 복합체 형태의 유효한 함량의 용도에 관한 것이다.
본 발명에서 사용되는 용어 "재구성된 피부 모델"은 다양한 특히 피부의 천연 구성성분과 같은, 세포 타입, 예를 들면, 각질형성세포, 섬유모세포(fibroblast), 랑게르한 세포 및 멜라닌세포와 같은 것이 결합된 모델을 나타낸다.
섬유모세포는 방사선 조사되거나, 그렇지 않을 수도 있다.
그러한 모델 및 그의 제조는 당업자에게 알려져 있다.
따라서, 본 발명은 분리되고 재구성된 피부, 특히 각질형성세포를 생성할 수 있는 세포와 접촉하는 본 발명에 따르는 적어도 하나의 복합체 형태를 가져오는 최소한의 단계를 포함하는, 분리되고 재구성된 피부를 준비하는 방법에 또한 주의를 기울인다.
이하의 실시예 및 도면은 본 발명의 비제한 예로서 나타난다.
본 발명의 장점은, 첫째로, 상피, 특히 피부의 표피의 생리학적 상태를 특성화하고, 둘째로, 그에 따라서 상기 상피 또는 표피에 적합한 처치를 조절하는, 간단하고 빠른 방법을 제공하는 것이다.
도 1은 팔뚝 또는 얼굴의 피부에 있는 본 발명에 따르는 복합체 형태의 함량과 나이와의 관계를 나타낸다.
도 2는 팔뚝 또는 얼굴의 피부에 있는 본 발명에 따르는 복합체 형태의 함량에 있어서, 10%의 비피디오바이오틱(bifidiobiotic)(CLR 복합체) 및 0.002%의 파이토스핑고신-SLC(phytosphingosine-SLC)(처치 "G")로 구성된, 미용적 조성물의 적용에 관련된 효과를 나타낸다.
본 출원은 2009년 1월 13일에 출원된 프랑스 가출원 제09 50162호와 2009년 1월 27일에 출원된 미국 가출원 제61/202,077호의 우선권 이익을 주장하며, 상기 출원의 내용들은 인용에 의하여 그 전체가 본 명세서에 포함된다.
실시예 1 :
본 발명에 따르는 CLSP 의 복합체 형태를 분석하기 위한 고감도 ELISA 분석법의 개발
MSD(MesoScale Discovery)기법을 사용하여, 개발된 맞춤형 CLSP 플레이트는 본 분석법에 사용되었다. GST와 융합된 재조합 "완전한 길이(full-length)" CLSP 단백질에 대한 단일클론 항체는 CovalAb 회사(Lyon, France) (Mehul et al., 2006)에 의해 개발되었다. 캡쳐 항체(클론DB15C9)는 "작은 반점" 타입(MesoScale)의 표준 96-웰 플레이트 위에 200 마이크로그램/ml의 농도로 떨어뜨렸다.
참조 곡선(5 내지 0.078　마이크로그램/ml)은 재조합 CLSP 단백질을 사용하여 수립되었다.
각각의 플레이트는 주위 온도에서 1시간 동안 블로킹 완충액(MesoScale)로 블로킹되었다. 각각 25 마이크로리터의 샘플과 표준물질은 3 개씩 준비하고 주위 온도에서 1 시간 동안 교반하여 배양하였다. 그 후 플레이트는 트리스 완충액(MesoScale)으로 4 번 수세되었다. 그 후 플레이트는 1　마이크로그램/ml의 농도에서 "술포-태그(sulpho-tag)" (CLSP 클론 DB7g12)로 표지된 25　마이크로리터의 검출 항체(MesoScale)로 주위 온도에서 1 시간 동안 교반하여 배양하였다. 플레이트는 150 마이크로리터의 1　X read buffer T (MesoScale)를 첨가하기 전에 트리스 완충액(MesoScale)으로 4 번 수세되었다. 플레이트는 "Sector Imager 6000" 기구를 통하여 읽혔다. 데이터는 총 단백질 마이크로그램 당 CLSP ng 단위로 표준화되었다.
실시예 2 :
박피에 의해 채취한 다양한 샘플 내의 CLSP 복합체 형태의 함량의 식별( charaterization )
본 실시예의 식별(charaterization)은 실시예 1에서 설명한 ELISA 분석법에 의하여 실행된다.
2 개의 임상적 연구가 실행된다: 팔뚝 및 얼굴로부터 채취한 샘플을 사용한 지식 연구(카프카스 사람의 피부: 30 내지 35세 및 60 내지 65세의, 20명의 여성 개체로 구성된 2개의 그룹) 및 오직 팔뚝으로부터만 채취한 샘플을 사용한 56 일을 초과한, 예를 들면 2개월(40 내지 45세의 카프카스 사람의 피부의, 24명의 여성 개체로 구성된 1개의 그룹)을 초과한 생성물 연구 생성물은 10%의 비피도바이오틱(CLR 복합체) 및 0.002%의 파이토스핑고신-SLC (처치 "G")로 구성된 혈청이다.
CLR 복합체는 INCI 이름 CLSP: Bifidat ferment Lysate, EINECS 이름: Bifidobacterium longum, EINECS 번호: 306-168-4 및 CAS 번호: 96507-89-0로 등록된 용해질에 관한 것이다.
그러한 용해질은 특히 K.　Richter GmbH 회사의 상품명 Repair Complex CLR®으로 판매된다. 파이토스핑고신-살리실레이트 유도체에 대응되는 상품명 Phytosphingosine-SLC은 Evonik Goldschmidt 회사에 의해 판매된다.
두 가지 연구 모두에 있어서, D-스콰메(D-squame) 샘플은 얼굴(뺨) 및 팔뚝(얼굴 뒷부분)으로부터 채취되었다. 팔뚝으로부터 견본추출된 D-스꽈메 코르네오디스크(D-squame corneodisc)는 생성물의 효과를 평가하기 위하여 사용되었다.
a) D- 스꽈메 코르네오디스크(D- squame corneodisc )로부터 단백질의 추출
코르네오디스크는 끈적한 표면이 안쪽을 향하는, 2 ml 에펜도르프(Eppendorf) 튜브 속에 놓고, 상기 튜브당 550 마이크로리터의 "Native+"추출 완충액 (TBS, 1%Triton X-100, 1M　NaCl) 및 하나의 스테인레스 스틸브레드(stainless steel bread)를 첨가하였다. 그 후 튜브는 MM400 진동 밀(mill)(Retsch)의 선반에 두었다. 추출은 30 Hz에서 2분당 1 싸이클의 진동 밀에 의해 실행되었다. 매체는 회수되어 0.45　마이크로미터 Millipore Ultrafree 컬럼을 통하여 여과된 후, 4℃ 에서 5000 g으로 5분 동안 원심분리되었다. 상층액은 분석되기 전까지 20℃에서 저장되었다.
b) 통계적 분석
나이(젊은 vs. 나이든) 및 부위(팔 vs. 얼굴) 효과에 대한 바이오마커의 분석은 고정 효과(fixed effect)로서 (1) 나이, (2) 부위 및 (3) 나이와 부위의 상호작용, 그리고 랜덤 효과(random effect)로서 주관적 요인을 갖는 변수의 혼합 모델의 분석에 의하여 실행된다. 나이에 대한 부위 효과와, 부위에 대한 나이 효과는 비교에 의하여 밝혀진다.
처치 효과(treatment effect)에 대한, 바이오마커의 분석은 고정 효과로서 시간 요인과 랜덤 효과로서 주관적 요인을 갖는 짝지은 활성 성분-플라시보 차이(paired active agent-placebo differences)에 기초하여, 변수의 혼합 모델의 분석에 의하여 실행된다.
D0 및 D56에서의 처치 효과는 비교에 의하여 테스트된다.
변수들은, 필요하면, 가우스(Gaussian) 분포를 만들기 위하여 미리 로그-전환된다.
SPSS 소프트웨어, 버전 14는 기술적 분석(평균 및 박스플롯의 그래프)을 위하여 사용되며, SAS Enterprise Guide 소프트웨어, 버전 3은 간섭(interference) 부분을 위하여 사용된다.
첫번째-종(first-species) 알파-위험은 양면 접근(two-sided approach)에서 5%로 고정되었다.
2 개의 연구의 결과는 도 1 및 도 2에 나타냈다.
도 1에 나타난 바와 같이, 데이터는 나이에 따라 CLSP의 복합체 형태가 감소하는 것으로 나타났다.
실제로 개발된 고감도 ELISA 키트는 CLSP의 복합체 형태의 발현이 나이에 따라서 감소하는 것을 증명할 수 있게 한다.
도 2는, 복합체 형태의 함량에 따른 테스트된 생성물의 효과를 나타낸다. 복합체 형태의 함량에 있어서 상당한 증가가 분명히 관찰되며, 그에 따라 상기 생성물의 활성화된 효과가 증명된다. 따라서 상기 생성물의 활성화된 효과는 실제로 항-노화(anti-ageing) 효과를 뒷받침한다.
<110> L'OREAL <120> Use of complex forms of calmodulin-like skin protein CLSP <130> IMP091431 <150> FR 09 50162 <151> 2009-01-13 <150> US 61/202,077 <151> 2009-01-27 <160> 25 <170> PatentIn version 3.3 <210> 1 <211> 858 <212> DNA <213> Homo Sapiens <400> 1 aattcccgga tccctgcggc tgcctgcact ctggaccacg agctctgaga gcagcaggtt 60 gagggccggt gggcagcagc tcggaggctc cgcgaggtgc aggagacgca ggcatggccg 120 gtgagctgac tcctgaggag gaggcccagt acaaaaaggc tttctccgcg gttgacacgg 180 atggaaacgg caccatcaat gcccaggagc tgggcgcggc gctgaaggcc acgggcaaga 240 acctctcgga ggcccagcta aggaaactca tctccgaggt tgacagcgac ggcgacggcg 300 aaatcagctt ccaggagttc ctgacggcgg caaggaaggc cagggccggc ctggaggacc 360 tgcaggtcgc cttccgcgcc ttcgaccagg atggcgacgg ccacatcacc gtggacgagc 420 tcaggcgggc catggcgggg ctggggcagc cgctgccgca ggaggagctg gacgccatga 480 tccgcgaggc cgacgtggac caggacgggc gggtgaacta cgaggagttc gcgaggatgc 540 tcgcccagga gtgaggctcc ccgcctgtgt ccccctggct gcgctctgag ccttcagggc 600 caccgcccgc tgctgctttt gtgctgggac tctccgggga 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Ala 1 5 10 15 Met Ile Arg <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 11 Glu Ala Asp Val Asp Gln Asp Gly Arg 1 5 <210> 12 <211> 24 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 12 Lys Ala Phe Ser Ala Val Asp Thr Asp Gly Asn Gly Thr Ile Asn Ala 1 5 10 15 Gln Glu Leu Gly Ala Ala Leu Lys 20 <210> 13 <211> 24 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 13 Lys Leu Ile Ser Glu Val Asp Gly Asp Gly Asp Gly Glu Ile Ser Phe 1 5 10 15 Gln Glu Phe Leu Thr Ala Ala Arg 20 <210> 14 <211> 15 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 14 Lys Leu Ile Ser Glu Val Asp Ser Asp Gly Asp Gly Glu Ile Ser 1 5 10 15 <210> 15 <211> 24 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 15 Lys Leu Ile Ser Glu Val Asp Ser Asp Gly Asp Gly Glu Ile Ser Phe 1 5 10 15 Gln Glu Phe Leu Thr Ala Ala Lys 20 <210> 16 <211> 24 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 16 Lys Leu Ile Ser Glu Val Asp Ser Asp Gly Asp Gly Glu Ile Ser Phe 1 5 10 15 Gln Glu Phe Leu Thr Ala Ala Arg 20 <210> 17 <211> 23 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 17 Leu Ile Ser Glu Val Asp Gly Asp Gly Asp Gly Glu Ile Ser Phe Gln 1 5 10 15 Glu Phe Leu Thr Ala Ala Arg 20 <210> 18 <211> 12 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 18 Leu Ile Ser Glu Val Asp Ser Asp Gly Asp Gly Glu 1 5 10 <210> 19 <211> 23 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 19 Leu Ile Ser Glu Val Asp Ser Asp Gly Asp Gly Glu Ile Ser Phe Gln 1 5 10 15 Glu Phe Leu Thr Ala Ala Lys 20 <210> 20 <211> 23 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 20 Leu Ile Ser Glu Val Asp Ser Asp Gly Asp Gly Glu Ile Ser Phe Gln 1 5 10 15 Glu Phe Leu Thr Ala Ala Arg 20 <210> 21 <211> 8 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 21 Asn Leu Ser Glu Ala Gln Leu Arg 1 5 <210> 22 <211> 8 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 22 Asn Leu Ser Glu Ala Gln Leu Arg 1 5 <210> 23 <211> 12 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 23 Ser Ala Val Asp Thr Asp Gly Asn Gly Thr Ile Asn 1 5 10 <210> 24 <211> 21 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 24 Ser Ala Val Asp Thr Asp Gly Asn Gly Thr Ile Asn Ala Gln Glu Leu 1 5 10 15 Gly Ala Ala Leu Lys 20 <210> 25 <211> 8 <212> PRT <213> Homo Sapiens <400> 25 Val Asn Tyr Glu Glu Phe Ala Arg 1 5

Claims (19)

  1. 서열번호 1 또는 그의 유사체에 의해 완전히 또는 부분적으로 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열 또는 그의 절편을 갖는 폴리펩타이드로부터 적어도 부분적으로 유래한, 시험관 내(in vitro) 또는 생체 밖(ex vivo)에서 상피의 자연 노화(chronological ageing) 상태를 식별(characterization)하기 위한 도구로서의, 카모듈린-유사 피부 단백질(CLSP)의 적어도 하나의 복합체 형태의 용도.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 복합체 형태(들)의 감소는 자연 노화(chronological ageing)의 상태를 나타내는 것을 특징으로 하는 용도.
  3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 서열번호 2 또는 그의 유사체에 의해 대표되는 서열에 의해 완전히 또는 부분적으로 대표되는 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 용도.
  4. 제 1항에 있어서, 상기 폴리펩타이드는 서열번호 3, 서열번호 4, 서열번호 5, 서열번호 6, 서열번호 7, 서열번호　8, 서열번호 9, 서열번호 10, 서열번호 11, 서열번호 12, 서열번호 13, 서열번호 14, 서열번호 15, 서열번호 16, 서열번호 17, 서열번호 18, 서열번호 19, 서열번호 20, 서열번호 21, 서열번호 22, 서열번호 23, 서열번호 24 및 서열번호 25로 구성된 그룹으로부터 선택된 아미노산 서열에 의해 완전히 또는 부분적으로 대표되는 아미노산 서열을 갖는 것을 특징으로 하는 용도.
  5. 제 1항에 있어서, 상기 복합체 형태는 CLSP의 회합(association), CLSP 절편과 CLSP의 회합(association), CLSP 절편의 회합(association), CLSP 또는 CLSP 절편과 타겟 단백질의 회합(association)으로부터 유래한 것을 특징으로 하는 용도.
  6. 제 5항에 있어서, 상기 타겟 단백질은 14.3.3 베타 폴리펩타이드, 14.3.3 시그마, 아넥신 II, 아넥신 V, 칼레티큘린, ERp72, 뉴클레오린(nucleolin), 트랜스글루타미나아제　3, 흑색종 항원 유전자 D1(MAGED1), 프로틴 포스파타아제 4(PPP4C), 업스트림 전사 인자 2(USF2) 및 YWHAQ 모티프(14.3.3 tau)로부터 선택된 것을 특징으로 하는 용도.
  7. a) 상피의 표면 샘플 내에, 서열번호 1 또는 그의 유사체에 의해 완전히 또는 부분적으로 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열 또는 그의 절편을 갖는 폴리펩타이드로부터 적어도 부분적으로 유래한, 카모듈린-유사 피부 단백질(CLSP)의 적어도 하나의 복합체 형태의 함량을 측정하는 단계, 및
    b) 참조값(reference value)과 상기 a) 단계에서 측정된 상기 함량을 비교하는 단계를
    포함하는 것을 특징으로 하는 상피의 상태를 식별(characterization)하는 방법.
  8. 제 7항에 있어서, 상기 방법은 비침습적인 것을 특징으로 하는 상피의 상태를 식별(characterization)하는 방법.
  9. 제 7항에 있어서, 서열번호 1 또는 그의 유사체에 의해 완전히 또는 부분적으로 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열 또는 그의 절편을 갖는 폴리펩타이드로부터 적어도 부분적으로 유래한, 카모듈린-유사 피부 단백질(CLSP)의 복합체 형태(들)의 감소는 자연 노화(chronological ageing) 상태의 지표인 것을 특징으로 하는 상피의 상태를 식별(characterization)하는 방법.
  10. a) 복합체 형태의 발현에 적합한 조건 하에서, 적어도 하나의 테스트 항-노화(anti-ageing) 활성 성분과 접촉하는, 서열번호 1 또는 그의 유사체에 의해 완전히 또는 부분적으로 대표되는 핵산 서열 또는 그의 절편에 의해 코딩된 아미노산 서열을 갖는 폴리펩타이드로부터 최소한 부분적으로 유래한, 카모듈린-유사 피부 단백질(CLSP)의 적어도 하나의 복합체 형태를 포함하는 적어도 하나의 세포 타입을 가져오는 단계,
    b) 상기 복합체 형태의 함량을 측정하는 단계, 및
    c) 화학적 또는 생물학적 테스트 화합물의 부존재하에서 측정된 상기 복합체 형태의 함량과 상기 b) 단계에서 측정된 상기 함량을 비교하는 단계를
    포함하는 것을 특징으로 하는 항-노화(anti-ageing) 활성 성분을 선별하는 방법.
  11. 제 10항에 있어서, 서열번호 1 또는 그의 유사체에 의해 완전히 또는 부분적으로 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열 또는 그의 절편을 갖는 폴리펩타이드로부터 적어도 부분적으로 유래한, 카모듈린-유사 피부 단백질(CLSP)의 복합체 형태(들)의 증가는 항-노화(anti-ageing) 물성을 갖는 활성 성분을 나타내는 것을 특징으로 하는 항-노화(anti-ageing) 활성 성분을 선별하는 방법.
  12. 서열번호 1 또는 그의 유사체에 의해 완전히 또는 부분적으로 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열 또는 그의 절편을 갖는 폴리펩타이드로부터 적어도 부분적으로 유래한, 카모듈린-유사 피부 단백질(CLSP)의 적어도 하나의 복합체 형태의 질적 또는 양적 식별(charaterization)을 포함하는, 개체의 자연 노화(chronological ageing)에 관련된 피부 노화의 징후(sign)를 예방 또는 치료하기 위한 미용적 또는 치료적 처치(treatment)의 유효성을 식별(characterization)하는 미용 방법.
  13. 제 12항에 있어서, 서열번호 1 또는 그의 유사체에 의해 완전히 또는 부분적으로 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열 또는 그의 절편을 갖는 폴리펩타이드로부터 적어도 부분적으로 유래한, 카모듈린-유사 피부 단백질(CLSP)의 복합체 형태(들)의 증가는 상기 피부 노화의 징후(sign)의 치료의 유효성을 나타내는 것을 특징으로 하는 미용 방법.
  14. 제 12항에 있어서, 식별(characterization)하는 단계의 말(end)에 얻어진 정보에 관하여 수립되거나 선택된 미용 케어 조성물을 상기 개체에 투여하는 적어도 하나의 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 미용 방법.
  15. i) 개체를 대표하는 적어도 하나의 제 1 피부 표면 샘플을 제공하는 단계,
    ii) 상기 샘플에서, 서열번호 1 또는 그의 유사체에 의해 완전히 또는 부분적으로 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열 또는 그의 절편을 갖는 폴리펩타이드로부터 적어도 부분적으로 유래한, 카모듈린-유사 피부 단백질(CLSP)의 적어도 하나의 복합체 형태를, 특히 ELISA 분석 기법을 통하여, 수량화하는 단계,
    iii) 상기 개체의 대표적인 제 2 피부 표면 샘플에 대해, 상기 i) 단계 및 ii) 단계를 반복하는 단계, 및
    iv) 처치(treatment)의 적어도 하나의 효과와 관련된 정보로부터 추론하기 위하여, 상기 ii) 단계와 iii) 단계의 말(end)에 얻은, 제 1 및 제 2 피부 표면 샘플들의 결과를 비교하는 단계를
    포함하는 것을 특징으로 하는 개체에서 피부 노화의 징후(sign)를 예방 또는 치료할 수 있는 처치(treatment)의 유효성을 식별(characterization)하는 비치료적 방법.
  16. 제 15항에 있어서, 상기 제 1 샘플은 처치전(pretreatment) 상태를 대표하며, 상기 제 2 샘플은 처치(treatment)의 과정 동안의 상태 또는 처치후(post-treatment) 상태를 대표하는 것을 특징으로 하는 비치료적 방법.
  17. 제 15항에 있어서, 상기 복합체 형태(들)의 증가는 상기 피부 노화의 징후(sign)의 처치(treatment)의 유효성을 나타내는 것을 특징으로 하는 비치료적 방법.
  18. 제 15항에 있어서, 상기 iv) 단계의 말(end)에 얻어진 정보와 관련하여 수립되거나 선택된 미용 케어 조성물을 상기 개체에 투여하는 단계로 구성된 적어도 하나의 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 비치료적 방법.
  19. 서열번호 1 또는 그의 유사체에 의해 완전히 또는 부분적으로 대표되는 핵산 서열에 의해 코딩된 아미노산 서열 또는 그의 절편을 갖는 폴리펩타이드로부터 적어도 부분적으로 유래한, 복합체 형태의 증가 또는 안정성 또는 생물학적 활성을 조절할 수 있는 생물학적 또는 화학적 화합물을 선별하기 위한 도구로서의, 카모듈린-유사 피부 단백질(CLSP)의 적어도 하나의 복합체 형태의 용도.
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