KR20100072194A - 항종양 약물의 분류 마커로서 ｅｄ―ｂ 피브로넥틴 - Google Patents

항종양 약물의 분류 마커로서 ｅｄ―ｂ 피브로넥틴 Download PDF

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루드게르 딘켈보르크
토비아스 하인리히
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바이엘 쉐링 파마 악티엔게젤샤프트
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Abstract

본 발명은 (a) 분석을 위한 종양 세포를 포함하는 샘플을 제공하는 단계, (b) 상기 샘플을 ED-B 피브로넥틴-특이적 분자와 접촉시키고, 상기 샘플 중의 종양 세포에의 그의 결합을 평가하는 단계, 및 (c) 단계 (b)에서의 평가에 기초하여 상기 종양 세포를 분류하는 단계를 포함하는, 종양 세포를 분류하는 방법에 관한 것이다.

Description

항종양 약물의 분류 마커로서 ＥＤ―Ｂ 피브로넥틴 {ED-B FIBRONECTIN AS STRATIFICATION MARKER FOR ANTI-TUMOR DRUGS}
본 발명은 피브로넥틴의 엑스트라-도메인 B (ED-B)에 대한 분자, 예를 들어 ED-B 도메인에 대해 표지된 항체 또는 항체 단편의, 항종양 약물에 대한 민감도에 관하여 종양을 분류하기 위한 진단 시약으로서, 및 특히 EGF/EGFR 길항제에 대한 분류 마커로서의 용도에 관한 것이다.
상피 성장 인자 수용체 (EGFR)의 억제제는 종양 요법, 특히 비소세포 폐암 (NSCLC) 환자를 치료하는데 사용된다. EGFR-함유 인간 NSCLC 세포주의 EGFR 억제에 대한 민감도는 이들이 상피 중간엽 이행 (EMT)을 겪은 정도에 의존적이다. 상피 세포 연접 단백질 E-카드헤린을 발현하는 NSCLC 세포주는 EMT를 겪은 세포주에 비해 EGFR 억제에 대해 더 큰 민감도를 나타낸다 (문헌 [Thomson et al., Cancer Res. 65 (2005), 9455-9462]).
또한, NSCLC 환자에서의 EGFR 길항제의 임상 활성은 인간 종양 세포에서 EMT를 측정하는 것에 의해 예측가능함이 밝혀졌다 (문헌 [Yauch et al., Clin. Cancer Res. 11 (2005), 8686-8698]).
EMT는 상피 마커, 예를 들어 E-카드헤린의 손실, 및 중간엽 마커, 예를 들어 비멘틴의 획득을 특징으로 한다. EMT는 탈분화, 부착 통제의 상실 및 향상된 뮤틸리티(mutility) 및 침습을 유발한다. 이러한 특성들은 악성 종양이 증가되었다는 표식이다. 따라서, EMT는 암종 세포가 보다 공격적인 표현형을 획득하는 메카니즘을 제공한다 (문헌 [Lee et al., J. Cell. Biol. 172 (2006), 973-981]; [Christiansen and Rajasekaran, Cancer Res. 66 (2006), 8319-8326]). 그러나, 이러한 과정은 종양 내의 별개의 영역에서 일시적으로 일어날 것이기 때문에 (문헌 [Gotzman et al., Mutation Res. 566 (2004)9-20]), 통상적인 분석 방법으로 EMT를 검출하는 것은 어렵다.
따라서, 본 발명의 목적은 인간 종양 세포 또는 조직, 또는 기타 관심 세포 또는 조직에서의 상피 대 중간엽 표현형의 측정을 가능하게 하는, 신뢰성 있고 민감한 방법을 제공하는 것이다.
첫번째 측면에서, 본 발명은
(a) ED-B 피브로넥틴-특이적 분자를 종양 세포 또는 종양 조직과 접촉시키고, ED-B 피브로넥틴-특이적 분자가 종양 세포 또는 종양 조직에 결합하는지를 평가하는 단계, 및
(b) 단계 (a)에서의 평가에 기초하여 상기 종양 세포 또는 종양 조직을 분류하는 단계
를 포함하는, 종양 세포 또는 종양 조직을 분류하는 방법에 관한 것이다.
추가의 측면에서, 본 발명은
(a) ED-B 피브로넥틴-특이적 분자를 세포 또는 조직과 접촉시키고, ED-B 피브로넥틴-특이적 분자가 세포 또는 조직에 결합하는지를 평가하는 단계, 및
(b) 단계 (a)에서의 평가에 기초하여 상기 세포 또는 조직을 상피 유형의 세포 또는 조직으로서, 또는 중간엽 유형의 세포 또는 조직으로서 동정하는 단계
를 포함하는, 세포 또는 조직, 특히 종양 세포 또는 종양 조직에서 상피 중간엽 이행 (EMT)을 검출하는 방법, 특히 영상화하는 방법에 관한 것이다.
추가의 측면에서, 본 발명은
(a) ED-B 피브로넥틴-특이적 분자를 종양 세포 또는 종양 조직과 접촉시키고, ED-B 피브로넥틴-특이적 분자가 종양 세포 또는 종양 조직에 결합하는지를 평가하는 단계, 및
(b) 단계 (a)에서의 평가에 기초하여 상기 종양 세포 또는 종양 조직을 분류하는 단계
를 포함하는, ED-B 피브로넥틴-특이적 분자의 실질적인 결합이 관찰되는 경우에는 상피 유형의 종양 세포 또는 조직으로서, 또는 ED-B 피브로넥틴-특이적 분자의 실질적인 결합이 관찰되지 않는 경우에는 중간엽 유형의 종양 세포 또는 조직으로서 종양 세포 또는 종양 조직을 분류하는 방법에 관한 것이다.
특히 바람직한 실시양태에서, 상기 ED-B 피브로넥틴-특이적 분자의 실질적인 결합은 EGF/EGFR 길항제의 투여를 포함하는 항종양 치료에 대해 민감함을 나타낸다.
본 발명의 또다른 추가의 측면은 종양 세포 또는 종양 조직을 치료에 대해 민감성 또는 불응성으로 분류하기 위한 작용제를 제조하는데 있어서의 ED-B 피브로넥틴-특이적 분자의 용도에 관한 것이다.
추가의 실시양태에서, 본 발명은 종양 세포 또는 종양 조직을 EGF/EGFR 길항제 치료에 대해 민감성 또는 불응성으로 분류하는 방법에 있어서의 ED-B 피브로넥틴-특이적 분자의 용도에 관한 것이다.
본 발명의 또다른 추가의 측면은 종양 세포 또는 종양 조직을 EGF/EGFR 길항제에 의한 치료에 대해 민감성 또는 불응성으로 분류하기 위한 작용제를 제조하는데 있어서의 ED-B 피브로넥틴-특이적 분자의 용도에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, ED-B 피브로넥틴-특이적 분자가 종양 세포 또는 종양 조직에 실질적으로 결합하는 것은 환자가 EGF/EGFR 길항제에 의한 치료에 민감하다는 것을 나타낸다.
본 발명의 또다른 추가의 측면은 상피 중간엽 이행을 검출하기 위한 작용제를 제조하는데 있어서의 ED-B 피브로넥틴 결합 분자의 용도에 관한 것이다. 본 발명의 또다른 추가의 측면은 상피 중간엽 이행을 검출하는 방법에 있어서의 ED-B 피브로넥틴 결합 분자의 용도에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, ED-B 피브로넥틴-특이적 분자가 종양 세포 또는 종양 조직에 실질적으로 결합하는 것은 조직이 상피 중간엽 이행을 겪지 않았거나 아직 겪지 않았음을 나타낸다.
본 발명의 또다른 추가의 측면은 검출가능한 표지기에 접합된 ED-B 피브로넥틴-특이적 결합 분자를 포함하는, 종양 세포 또는 종양 조직을 분류하기 위한 조성물 또는 키트에 관한 것이다.
본 발명의 또다른 추가의 측면은 검출가능한 표지기에 접합된 ED-B 피브로넥틴-특이적 결합 분자를 포함하는, 상피 중간엽 이행을 검출하기 위한 조성물 또는 키트에 관한 것이다.
본 발명의 또다른 추가의 측면은 검출가능한 표지기에 접합된 ED-B 피브로넥틴-특이적 결합 분자 및 EGF/EGFR 길항제를 포함하는, 종양을 치료하기 위한 조성물 또는 키트에 관한 것이다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명은 검출가능한 표지기에 접합된 ED-B 피브로넥틴-특이적 결합 분자 및 EGF/EGFR 길항제를 포함하는 조성물 또는 키트의, 종양을 치료하는 방법에서의 용도에 관한 것이다.
특히 바람직한 실시양태에서, 검출가능한 표지기에 접합된 ED-B 피브로넥틴-특이적 결합 분자는 검출가능한 표지기에 접합된 AP39, 특히 99mTc-표지된 AP39이다.
본 발명의 또다른 추가의 측면은 종양 세포 또는 종양 조직을 분류한 다음 EGF/EGFR 길항제를 이용하여 치료에 민감한 것으로 동정된 환자를 치료하는 것을 포함하는, 종양 환자를 치료하기 위한 조성물 또는 키트에 관한 것으로, 키트는 검출가능한 표지기에 접합된 ED-B 피브로넥틴-특이적 결합 분자 및 EGF/EGFR 길항제를 포함한다.
본 발명의 또다른 추가의 측면은 상피 중간엽 이행을 검출한 다음 상피 중간엽 이행을 겪지 않은 환자를 치료하는 것을 포함하는, 종양 환자를 치료하기 위한 조성물 또는 키트에 관한 것으로, 키트는 검출가능한 표지기에 접합된 ED-B 피브로넥틴-특이적 결합 분자 및 EGF/EGFR 길항제를 포함한다.
추가의 실시양태에서, 본 발명은
(a) 검출가능한 표지기에 접합된 ED-B 피브로넥틴-특이적 결합 분자의 진단상 유효량을 종양 환자에게 투여하는 단계,
(b) ED-B 피브로넥틴-특이적 결합 분자가 조직에 실질적으로 결합하는지 여부를 측정함으로써 환자가 EGF/EGFR 길항제에 의한 치료에 민감한지 여부를 측정하는 단계, 및
(c) 환자가 ED-B 피브로넥틴-특이적 결합 분자의 실질적인 결합을 나타내는 경우, EGF/EGFR 길항제의 치료상 유효량을 종양 환자에게 투여하는 단계
를 포함하는, 종양 환자를 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 의해, 놀랍게도 ED-B 피브로넥틴을 측정하는 것이 종양 세포 또는 종양 조직을 선별 또는 분류하고/하거나 EMT를 검출하는데 사용될 수 있음이 밝혀졌다. ED-B 특이적 분자에 종양 세포 또는 종양 조직이 결합한다는 것은 항종양 약물, 예컨대 EGF/EGFR 길항제에 대해 민감하고/하거나 상피 표현형임을 나타낸다. ED-B 특이적 분자에 종양 세포 또는 종양 조직이 결합하지 않거나 덜 결합한다는 것은 항-종양 약물, 예컨대 EGF/EGFR 길항제에 대해 저항성이고/이거나 중간엽 표현형임을 나타낸다. 따라서, 본 발명은 종양 환자 및 항종양 치료, 예컨대 EGF/EGFR 길항제에 의한 치료에 대한 그들의 민감도를 선별 또는 분류하는데 특히 적합하다.
선택적 스플라이싱에 의해 피브로넥틴 분자에 삽입된 피브로넥틴의 ED-B 도메인에 특이적인 분자 (91개의 아미노산 서열) (문헌 [Castellani et al. (1994), Int. J. Cancer 59, 612-18])는 본원에서 참고로 포함되는 WO 97/45544, WO 01/62800, WO 03/055917, WO 03/07649 및 WO 2005/0223318에 이미 기술되어 있다. 바람직한 결합 분자는 ED-B 도메인에 직접적이고 특이적으로 결합하는 분자로, 예를 들어 ED-B 도메인에 대한 항체 또는 그러한 항체의 단편, 예를 들어 Fab-, Fab'- F(ab2) 단편 등과 같이 단백질분해성 절단에 의해 얻어질 수 있는 항체 단편, 또는 단일쇄 Fv-단편과 같은 재조합 항체 단편이다. ED-B-결합 분자는 바람직하게는 진단 분야에 적합한 표지기와의 접합체로서 사용된다.
본 발명의 바람직한 실시양태는 표지기와의 접합체로서 존재하는 항체 L19 또는 이 항체의 단편 (L19 유도체)의 용도에 관한 것이다.
L19는 피브로넥틴의 엑스트라-도메인 B (ED-B)에 대한 단일클론 항체의 scFv 단편 (scFv: 단일쇄 가변 항체 단편)이며, 다음과 같은 아미노산 서열 (서열 1)을 갖는다:
(VH):
Figure pct00001
(링커):
Figure pct00002
(VL):
Figure pct00003
특히 바람직한 것은,
(aa) 표 1에 나타낸 바와 같은 상보성 결정 영역 HCDR3 및/또는 LCDR3을 포함하는 피브로넥틴의 엑스트라-도메인 B (ED-B)에 대한 1종 이상의 항원 결합 부위, 또는 HCDR3 영역에서 최대 5개의 아미노산 및 LCDR3 영역에서 최대 6개의 아미노산이 결실, 삽입 및/또는 치환된 것으로, 이에 의한 항원 결합 부위가 서열 1에 나타낸 고유의 L19와 동일한 기능을 나타내는 그의 변이체,
(ab) 표 1에 나타낸 바와 같은 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함하는 피브로넥틴의 엑스트라-도메인 B (ED-B)에 대한 1종 이상의 항원 결합 부위, 또는 HCDR1 영역에서 최대 3개의 아미노산, HCDR2 영역에서 최대 8개의 아미노산, HCDR3 영역에서 최대 5개의 아미노산, LCDR1 영역에서 최대 6개의 아미노산, LCDR2 영역에서 최대 4개의 아미노산, 및 LCDR3 영역에서 최대 6개의 아미노산이 결실, 삽입 및/또는 치환된 것으로, 이에 의한 항원 결합 부위가 서열 1에 나타낸 고유의 L19와 동일한 기능을 나타내는 그의 변이체, 또는
(ac) 서열 1에 나타낸 고유의 L19의 서열을 포함하는 피브로넥틴의 엑스트라-도메인 B (ED-B)에 대한 1종 이상의 항원 결합 부위, 또는 최대 30개의 아미노산이 결실, 삽입 및/또는 치환된 것으로, 이에 의한 항원 결합 부위가 서열 1에 나타낸 고유의 L19와 동일한 기능을 나타내는 그의 변이체, 및 임의로
(ba) 아미노산 서열 Xaa1-Xaa2-Xaa3-Cys (서열 2) (여기서 Xaa1, Xaa2, 및 Xaa3은 서로 독립적으로 임의의 천연 발생 아미노산을 나타냄),
(bb) 아미노산 서열 Xaa1-Xaa2-Xaa3-Cys-Xaa4 (서열 3) (여기서 Xaa1, Xaa2, Xaa3, 및 Xaa4는 서로 독립적으로 임의의 천연 발생 아미노산을 나타냄),
(bc) 아미노산 서열 (His)n (서열 4) (여기서 n은 4 내지 6의 정수임), 또는
(bd) 서열 5, 서열 6 또는 서열 7에 나타낸 서열을 포함하는 아미노산 서열
을 포함하는 L19 유도체이고, 상기에서 (aa), (ab), 또는 (ac)의 C-말단은 임의로 펩티드 결합을 통해 (ba), (bb), (bc) 또는 (bd)의 N-말단에 결합된다.
본 발명의 범위 내에서, 표지된 L19 유도체는 항원 결합 부위 (aa), (ab) 또는 (ac)로부터 선택된 피브로넥틴의 엑스트라-도메인 B (ED-B)에 대한 N-말단 항원 결합 부위 및 임의로는 아미노산 서열 (ba), (bb), (bc) 또는 (bd)로부터 선택된 C-말단 아미노산 서열을 포함하고, 상기 항원 결합 부위는 서열 1에 나타낸 고유의 L19와 동일한 기능을 나타낸다.
본 발명에 따르면, 표지된 L19 유도체의 피브로넥틴의 엑스트라-도메인 B (ED-B)에 대한 항원 결합 부위 (aa) 또는 (ab)는 표 1에 나타낸 바와 같은 상보성 결정 영역 HCDR3 및/또는 LCDR3 또는 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3을 포함한다. 본 발명의 범위 내에서, 상보성 결정 영역 HCDR1, HCDR2, HCDR3, LCDR1, LCDR2 및 LCDR3은 다음과 같이 정의된다:
Figure pct00004
표 1에서 정의된 상보성 결정 영역에 더하여, 표지된 L19 유도체의 피브로넥틴의 엑스트라-도메인 B (ED-B)에 대한 항원 결합 부위 (aa) 또는 (ab)는 또한 이들 영역의 변이체를 포함할 수 있다. 본 발명에 따르면, HCDR1 영역의 변이체는 HCDR1 영역에서 최대 3개의 아미노산의 결실, 삽입 및/또는 치환, 즉 표 1에 나타낸 서열 (서열 8)과 관련하여 1개, 2개 또는 3개의 아미노산의 결실, 삽입 및/또는 치환을 포함한다. HCDR2 영역의 변이체는 HCDR2 영역에서 최대 8개의 아미노산의 결실, 삽입 및/또는 치환, 즉 표 1에 나타낸 서열 (서열 9)과 관련하여 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개 또는 8개의 아미노산의 결실, 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 또한, HDCR3 영역의 변이체는 HCDR3 영역에서 최대 5개의 아미노산의 결실, 삽입 및/또는 치환, 즉 표 1에 나타낸 서열 (서열 10)과 관련하여 1개, 2개, 3개, 4개 또는 5개의 아미노산의 결실, 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 그러나, LCDR1 영역의 변이체는 LCDR1 영역에서 최대 6개의 아미노산의 결실, 삽입 및/또는 치환, 즉 표 1에 나타낸 서열 (서열 11)과 관련하여 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 아미노산의 결실, 삽입 및/또는 치환을 포함한다. 또한, LCDR2 영역의 변이체는 LCDR2 영역에서 최대 4개의 아미노산의 결실, 삽입 및/또는 치환, 즉 표 1에 나타낸 서열 (서열 12)과 관련하여 1개, 2개, 3개 또는 4개의 아미노산의 결실, 삽입 및/또는 치환을 포함한다. LCDR3 영역의 변이체는 LCDR3 영역에서 최대 6개의 아미노산의 결실, 삽입 및/또는 치환, 즉 표 1에 나타낸 서열 (서열 13)과 관련하여 1개, 2개, 3개, 4개, 5개 또는 6개의 아미노산의 결실, 삽입 및/또는 치환을 포함한다.
본 발명에 따르면, 표지된 L19 유도체의 피브로넥틴의 엑스트라-도메인 B (ED-B)에 대한 항원 결합 부위 (ac)는 서열 1에 나타낸 바와 같은 고유의 L19의 서열을 포함하거나, 또는 최대 30개의 아미노산이 결실, 삽입 및/또는 치환된, 즉 서열 1에 나타낸 서열과 관련하여 1개, 2개, 3개, 4개, 5개, 6개, 7개, 8개, 9개, 10개, 11개, 12개, 13개, 14개, 15개, 16개, 17개, 18개, 19개, 20개, 21개, 22개, 23개, 24개, 25개, 26개, 27개, 28개, 29개 또는 30개의 아미노산이 결실, 삽입 및/또는 치환된 그의 변이체를 포함한다.
표지된 L19 유도체의 아미노산 서열 (ba), (bb) 또는 (bc)는 서열 Xaa1-Xaa2-Xaa3-Cys (서열 2), Xaa1-Xaa2-Xaa3-Cys-Xaa4 (서열 3) 또는 (His)n (서열 4)을 포함한다.
본 발명의 바람직한 실시양태에서, 아미노산 서열 (ba) Xaa1-Xaa2-Xaa3-Cys (서열 2)는 서열 Gly-Gly-Gly-Cys (서열 14) 또는 Gly-Cys-Gly-Cys (서열 15)이다. 특히 바람직한 것은 서열 Gly-Gly-Gly-Cys (서열 14)이다.
본 발명의 또다른 바람직한 실시양태에서, 아미노산 서열 (bb) Xaa1-Xaa2-Xaa3-Cys-Xaa4 (서열 3)은 서열 Gly-Gly-Gly-Cys-Ala (서열 16) 또는 Gly-Cys-Gly-Cys-Ala (서열 17)이다. 특히 바람직한 것은 서열 Gly-Gly-Gly-Cys-Ala (서열 16)이다.
본 발명의 또다른 바람직한 실시양태에서, 아미노산 서열 (bc) (His)n (서열 4)은 n이 6인 서열 (His)6 (서열 18)이다.
본 발명의 또다른 바람직한 실시양태에서, (aa), (ab) 또는 (ac)의 N-말단은 임의로는 펩티드 결합을 통해 링커 아미노산 서열의 C-말단에 연결된다. 링커 아미노산 서열은 바람직하게는 최대 30개의 아미노산, 바람직하게는 최대 25개의 아미노산, 특히 바람직하게는 최대 22개의 아미노산 길이를 갖는다. 특히 바람직한 것은 서열 19에 나타낸 서열인 링커 아미노산 서열이다.
본 발명에 따르면, 특히 바람직한 표지된 L19 유도체는 서열 1 (고유의 L19), 서열 20 (AP38), 서열 21 (AP39), 서열 22 (L19-GlyCysGlyCys), 서열 23 (L19-GlyCysGlyCysAla), 서열 24 (ZK225293), 서열 25 (ZK217691/217695), 서열 26 (ZK210917) 및 서열 27 (ZK248219/248220)에 나타낸 서열을 포함한다. 특히 바람직한 것은 AP39이다.
99mTc-표지된 AP39는 바람직하게는 비경구 또는 정맥내 투여에 의해, 보다 바람직하게는 정맥내 주사에 의해 환자에 적용된다. 인간에 대한 용량은 전형적으로는 환자 당 약 0.01 내지 10 mg이고, 바람직하게는 약 0.1 내지 1 mg이다.
ED-B 도메인에 대한 결합 분자는 바람직하게는 표지기와의 접합체의 형태로 존재한다. 표지기로서, 진단 분야, 특히 생체내 진단 분야에 적합한 모든 표지 물질을 사용할 수 있으며, 예를 들어 광학 영상 또는 자기 공명 영상에 적합한 표지 물질과 같은 방사성 검출 (예를 들어, 방사성 영상화 방법), 또는 비방사성 검출 (예를 들어, 비방사성 영상화 방법)을 위한 방사성표지 물질을 사용할 수 있다. 특히 바람직한 실시양태에서, 표지기는 SPECT (단광자 방출 전산화 단층촬영)에 적합한 표지기, 특히 방사성동위원소 99mTc이다. 추가의 특히 바람직한 실시양태에서, 표지기는 PET (양전자 방출 단층촬영)에 적합한 표지기, 특히 방사성동위원소 18F이다. 본 발명의 방법 및 용도는 PET 또는 SPECT에 적용하는데 바람직하다.
생검은 종종 행하기 어렵고 외과적 개입을 필요로 하는데 본 발명의 용도 및 방법은 생검을 하지 않고도 진단을 가능하게 하기 때문에, 생체내 진단 분야에서 특히 바람직하다. 또한, ED-B 피브로넥틴은 스트로마의 세포외 기질 단백질로, 생체내 영상 진단에 이용가능하다. 이는 종양의 신생혈관에서 관강에서 떨어져서 세포외적으로 위치한다.
폴리펩티드, 펩티드 및 특히 scFv 단편에 표지 물질을 도입하는 방법은 종래 널리 공지되어 있다. 결합 분자는 바람직하게는 방사성동위원소, 예를 들어 요오드 (I), 인듐 (In), 이트륨 (Y), 테크네튬 (Tc), 레늄 (Re), 갈륨 (Ga), 브롬 (Br) 또는 불소 (F)의 방사성동위원소에 의해 표지된다. 특히 바람직한 것은 방사성동위원소 125I, 123I, 124I, 131I, 111In, 186Re, 188Re, 86Y, 94mTc, 99mTc, 67Ga, 68Ga, 76Br 또는 18F이다. 바람직한 방사성동위원소는 99mTc, 18F 및 123I이다.
18F-표지된 AP39 분자의 합성은 실시예 4 및 5에서 기술한다. 이들 18F-표지된 분자는 특히 본 발명에 따라 PET에 사용하는데 적합하다. AP39는 WO 03/055917에 기재되어 있는 바와 같은 L19 항체의 유도체이다.
따라서, 다른 바람직한 실시양태에서, 18F-표지된 AP39, 특히 [18F]FBAM-AP39 및 [18F]SFB-AP39로부터 선택된 것은 본 발명의 방법 및 용도, 특히 PET에 특히 유용하다.
본 발명의 바람직한 실시양태에서, 예를 들어 환원된 형태의 L19 유도체와 같은 항체 단편이 사용된다. 본 발명의 범위 내에서 용어 "환원된 형태"란, 단편이 예를 들어 분자간 이황화 가교에 의해 매개된 이량체 또는 다량체 형태가 아닌, 단량체 형태로 존재하는 것을 의미한다. 항체 단편의 환원된 형태는 바람직하게는 적합한 환원제를 첨가하는 것에 의해 얻어진다. 적합한 환원제는 종래 널리 공지되어 있으며, TCEP (트리스(2-카르복시에틸)포스핀) 및 1,4-다이머캅토-2,3-부탄디올이 포함된다.
또한, 본 발명은 결합 분자에 더하여, 임의로 생리학적으로 상용가능한 보조제, 비히클 및/또는 희석제를 함유하는 제약 조성물 또는 키트를 제공한다. 적합한 보조제, 비히클 및/또는 희석제는 제약 화학 분야에서 숙련된 당업자에게 가장 잘 알려져 있다.
본 발명의 바람직한 실시양태에서, 종양은 ED-B 피브로넥틴-특이적 분자의 실질적인 결합이 관찰되는 경우의 상피 유형의 종양 또는 ED-B 피브로넥틴-특이적 분자의 실질적인 결합이 관찰되지 않는 경우의 중간엽 유형의 종양으로 분류된다. 문맥상 용어 "실질적인 결합"은 대조군 세포 또는 대조군 조직에의 비특이적 결합 또는 중간엽 유형의 세포에의 결합과는 구분가능한 표적 항원과의 면역학적 반응을 포함한다. 문맥상 용어 "실질적인 결합"은 또한 세포내 흡수를 포함하는 것임을 주지한다. 실질적인 결합은 조직학적 염색 분석에 대한 육안 관찰에 의해, 또는 SPECT 카메라 및 PET 분석의 정량적 또는 반정량적 프로그램을 통해 직접적이고 정량적으로 측정할 수 있다.
본 발명에 따라 분석되어질 세포 또는 조직은 바람직하게는 EMT를 겪을 수 있는 세포, 또는 EMT를 겪을 수 있는 세포를 포함하는 조직이다. 보다 바람직하게는, 세포 또는 조직은 종양 세포 또는 종양 조직, 예를 들어 폐암 세포 또는 조직, 예컨대 NSCLC 세포 또는 조직, 또는 전립선암, 유방암, 췌장암, 결장암, 두경부암, 난소암, 신장암, 위암 또는 자궁경부암 유래의 세포 또는 조직, 및 다른 종양 세포 또는 조직, 예를 들어 상기 문헌 [Christiansen and Rajasekaran]에 기재되어 있는 세포 또는 조직이다.
바람직하게는, 세포 또는 조직은 인간 종양 환자 유래의 것이다. 본 발명의 방법은 시험관내 또는 생체내에서 수행될 수 있음을 주지한다. 시험관내 진단 방법은 바람직하게는 인간 환자 유래의 세포 또는 조직 샘플, 예를 들어 종양 세포 또는 종양 조직 샘플을 체외에서 시험하는 것을 포함한다. 생체내 방법은 ED-B 피브로넥틴 특이적 분자를 대상체, 예를 들어 인간 환자 또는 실험 동물에게 투여하고, 대상체에서 측정, 바람직하게는 영상 진단하는 것을 포함한다.
본 발명의 생체내 방법은 바람직하게는 ED-B-결합 분자를 포함하는 제약 조성물을 시험하고자 하는 환자의 정맥 및/또는 동맥에 주사하고, 세포 또는 조직, 예를 들어 종양 세포 또는 종양 조직에 결합된 표지된 ED-B-결합 분자가 존재한다면, 이를 검출하는 것에 의해 수행된다. 방사성동위원소-표지된 결합 분자를 사용하는 경우, 검출은 신티그래피, SPECT 또는 PET로 수행할 수 있다.
본 발명의 방법은 환자, 바람직하게는 종양 환자를 치료, 바람직하게는 항종양 치료에 대한 민감도와 관련하여 분류하는데 특히 적합하다. 본 방법은 특정 치료 프로토콜에 대한 민감도를 측정하기 위해 환자의 항종양 치료를 개시하기 전에 수행할 수 있다. 이와 달리 또는 부가적으로, 본 방법은 또한 환자의 항종양 치료 동안에도 수행할 수 있다. 항종양 치료는 EGF/EGFR 길항제를 임의로는 추가의 항종양제를 투여하고/하거나 방사선 요법을 행하는 것과 병행하여 투여하는 것을 바람직하게 포함한다. EGF/EGFR 길항제는 소분자 EGFR 억제제, 예를 들어 엘로티닙 또는 게피티닙과 같은 EGFR 키나제 억제제로부터 선택될 수 있다. 달리, EGF/EGFR 길항제는 세툭시맙과 같은 항-EGFR 항체로부터 선택될 수 있다.
단일요법으로서 또는 이리노테칸과 조합된 것으로서 세툭시맙의 인간 권장 용량은 정맥내로 투여되는 초기 부하 용량으로서 400 mg/m2이다. 권장되는 주간 유지 용량은 역시 정맥내로 투여되는 것으로 250 mg/m2이다. 그러한 용량 투여계획은 본 발명에 따라 환자에게 전형적으로 적용될 수 있지만, 또한 더 낮은 용량이나 더 높은 용량도 가능하다.
특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 방법은 EGFR 길항제, 예컨대 엘로티닙을 사용한 항종양 치료의 개시 이전에 수행된다. 그에 의해, 요법-저항성 환자는 요법-민감성 환자와 구분되어질 수 있고, 비효과적인 종양 요법을 크게 줄일 수 있다.
추가로, 본 발명을 이하의 실시예를 들어 보다 상세하게 설명한다.
실시예 1: L19 유도체의 제조
L19 유도체 AP39는 WO 03/055917에 기재된 바와 같이 제조하였고, 그 내용은 본원에서 참고가 된다.
실시예 2: 방사성동위원소에 의한 L19 유도체의 표지화
표지된 L19 유도체 AP39-Tc99m은 WO 03/055917에 기재된 바와 같이 제조하였고, 그 내용은 본원에서 참고가 된다.
실시예 3: 표지된 L19 유도체의 NSCLC 세포주에 대한 결합 연구
결합 연구는 두 명의 인간 NSCLC 종양 모델과, 마우스: 엘로티닙-민감성 상피 유형 모델인 NCI-H292, 및 엘로티닙-저항성 중간엽 유형 모델인 Calu-6에서 행하였다.
TCEP-환원된 AP39를 3-(N-말레이미도프로피오닐)비오시틴 (시그마(Sigma))을 사용하여 비오티닐화하였다. 엑스트라비딘(ExtrAvidin, 시그마) 및 액체 DAB 기질 팩 (바이오제넥스 (BioGenex))을 이용하여 제조사의 프로토콜에 따라, 비오티닐화된 AP39의 NCI-H292 및 Calu-6 종양 조직의 동결 절편 (5 내지 10 ㎛)에 대한 시험관내 결합을 측정하였다. 비오티닐화된 AP39의 보다 광범위한 결합이 Calu-6 종양 조직에 비해 NCI-H292에서 관찰되었다.
Tc-99m 방사성표지된 AP39를 NCI-H292 및 Calu-6 종양 보유 누드 마우스 (체중 약 30 g)에 약 111 kBq의 용량으로 정맥내 주사하였다. 물질을 투여하고 1시간 후에 감마-계수기를 사용하여 생체외에서 종양에서의 방사능 농도를 측정하였다. Tc-99m-AP39의 농도는 NCI-H292 종양 조직에서 실질적으로 더 높음을 알 수 있었다.
Tc-99m 방사성표지된 AP39를 NCI-H292 및 Calu-6 종양 보유 누드 마우스 (체중 약 30 g)에 약 150 MBq의 용량으로 정맥내 주사하였다. 물질을 투여하고 4시간 후에 SPECT 영상화하였다. 본 조사의 결과는 SPECT 영상화에 의해 NCI-H292 종양이 Calu-6 종양에 비해 훨씬 더 잘 드러날 수 있음을 보여준다.
실시예 4: N-[6-(4-[ 18 F]플루오로벤질리덴)아미노옥시헥실]말레이미드 AP39 ([ 18 F]FBAM-AP39)의 합성
[18F]FBAM은 문헌 [Berndt et al. Nucl Med Biol. 2007, 34(1), 5-15]에 따라 GE 트레이서랩(tracerlab) 상에서 원-팟 합성법으로 합성하고, 등용매 반-정제용 HPLC (tR=15 분; 65/35 물/MeCN+0.1 ％TFA; ACE 5 C18-HL 250*10 mm; 5 ㎛; 어드밴스드 크로마토그래피 테크놀로지스(Advanced Chromatography Technologies); Cat.No.: ACE 321-2510)로 정제하였다. 전형적인 실험에서 75 분 후에 붕괴에 대해 수정된 30 내지 40 ％ 방사화학 수율로 [18F]FBAM을 500 내지 1.000 MBq의 양으로 단리해내었다. HPLC 후에 총 용적을 C-18 SPE로 감소시키고, [18F]FBAM을 2 mL MeCN 중에서 제제화하고, 건조 상태까지 55 ℃에서 질소 기류하에 건조시켰다. [18F]FBAM을 DMSO/0.05 M 트리스/NaCl 완충액 (pH=7.4) (1/9 (v/v)) 중에 용해시키고, AP39 (90 μL PBS 중의 100 μg, pH 7.4)를 첨가하고, 37℃에서 30분 동안 인큐베이션하였다. 접합율을 분석용 HPLC (tR=13.2 분; TSKgel superSW2000; 300*4.6 mm; 4 μ; 토소 바이오셉(Toso Biosep); TSK 완충액 (0.1 M Na2HPO4/0.1 M Na2SO4/0.05％ NaN3; pH 6.7, 등용매 0.3 ml/분)로 확인하였다. F-18 표지된 AP39를 세파덱스®(Sephadex, 등록상표) NAP 5 카트리지를 사용한 겔 여과에 의해 정제하고, HPLC 및 전기영동법으로 분석하였다. 면역반응성의 평가는 버클러 등(Birchler et al.)의 문헌 [J. Immunol. Methods 1999, 231, 239-248]에 따라 ED-B 피브로넥틴-접합된 세파로스를 함유하는 컬럼을 이용하여 친화성 크로마토그래피에 의해 행하였다. 수정되지 않은 접합 수율은 [18F]FBAM에 관하여 10 내지 15％였다. 18F-표지된 AP39, 특히 [18F]FBAM-AP39는 특히 본 발명의 방법 및 용도, 특히 PET에 유용하다.
실시예 5: N-숙신이미딜 4-[ 18 F]플루오로벤조에이트 AP39([ 18 F]SFB-AP39)의 합성
[18F]SFB는 문헌 [Kabalka et al., Journal of Labeled Compounds and Radiopharmaceuticals, 2008, 51, 68-71]에 따라 GE 트레이서랩 상에서 원-팟 합성법으로 합성하고, 등용매 반-정제용 HPLC (tR=16.5 분; 65/35 물/MeCN+0.1 ％TFA; ACE 5 C18-HL 250*10 mm; 5 ㎛; 어드밴스드 크로마토그래피 테크놀로지스; Cat.No.: ACE 321-2510)로 정제하였다. 전형적인 실험에서 65 분 후에 붕괴에 대해 수정된 30 내지 35 ％의 방사화학 수율로 [18F]SFB를 400 내지 800 MBq의 양으로 단리해내었다. HPLC 후에 [18F]SFB의 용적을 C-18 SPE로 감소시키고, [18F]SFB를 2 mL MeCN 중에서 제제화하고, 건조 상태까지 55 ℃에서 질소 기류하에 건조시켰다. [18F]SFB를 DMSO/0.1 M 보레이트 완충액 (pH=8.6) (1/9 (v/v)) 중에 재용해시키고, AP39 (90 μL PBS 중의 100 μg, pH 7.4)를 첨가하였다. 37℃에서 30분 동안 인큐베이션을 행하였다. 접합율을 분석용 HPLC (tR=13.2 분; TSKgel superSW2000; 300*4.6 mm; 4 μ; 토소 바이오셉; TSK 완충액 (0.1 M Na2HPO4/0.1 M Na2SO4/0.05％ NaN3; pH 6.7, 등용매 0.3 ml/분)로 확인하였다. F-18 표지된 AP39를 세파덱스® NAP 5 카트리지를 사용한 겔 여과에 의해 정제하고, HPLC 및 전기영동법으로 분석하였다. 면역반응성의 평가는 버클러 등에 따라 ED-B 피브로넥틴-접합된 세파로스를 함유하는 컬럼을 이용하여 친화성 크로마토그래피에 의해 행하였다. 수정되지 않은 접합 수율은 [18F]FBAM에 관하여 10 내지 12％였다.
18F-표지된 AP39, 특히 [18F]SFB-AP39는 특히 본 발명의 방법 및 용도, 특히 PET에 유용하다.
SEQUENCE LISTING <110> Bayer Schering Pharma Aktiengesellschaft <120> ED-B fibronectin as stratification marker for anti-tumor drugs <130> 53623AWO <140> <141> <150> EP07018213 <151> 2007-09-17 <160> 28 <170> PatentIn Ver. 2.1 <210> 1 <211> 238 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> L19 or ZK212667 = single chain variable antibody fragment of a monocolonal antibody against the extra domain B of fibronectin <220> <220> <223> Description of Artificial Sequence:antibody or antibody fragment <400> 1 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Gly Ser Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Pro Phe Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln 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ZK217052/217053: labelled derivate of L19 <400> 21 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Gly Ser Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Pro Phe Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Asp Gly Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ala Ser 115 120 125 Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser 130 135 140 Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser 145 150 155 160 Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg 165 170 175 Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg 180 185 190 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg 195 200 205 Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Gly Arg 210 215 220 Ile Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly 225 230 235 240 Gly Cys Ala <210> 22 <211> 242 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:antibody or antibody fragment <220> <223> labelled derivate of L19 <400> 22 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Gly Ser Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Pro Phe Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Asp Gly Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ala Ser 115 120 125 Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser 130 135 140 Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser 145 150 155 160 Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg 165 170 175 Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg 180 185 190 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg 195 200 205 Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Gly Arg 210 215 220 Ile Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Cys 225 230 235 240 Gly Cys <210> 23 <211> 243 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:antibody or antibody fragment <220> <223> labelled derivate of L19 <400> 23 Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly Gly 1 5 10 15 Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Phe Thr Phe Ser Ser Phe 20 25 30 Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Gly Ser Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Pro Phe Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Asp Gly Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ala Ser 115 120 125 Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser 130 135 140 Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser 145 150 155 160 Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg 165 170 175 Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg 180 185 190 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg 195 200 205 Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Gly Arg 210 215 220 Ile Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Cys 225 230 235 240 Gly Cys Ala <210> 24 <211> 283 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:antibody or antibody fragment <220> <223> ZK225293: labelled derivate of L19 <400> 24 Met Lys Tyr Leu Leu Pro Thr Ala Ala Ala Gly Leu Leu Leu Leu Ala 1 5 10 15 Ala Gln Pro Ala Met Ala Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly 20 25 30 Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 35 40 45 Phe Thr Phe Ser Ser Phe Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly 50 55 60 Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Ser Gly Thr Thr 65 70 75 80 Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn 85 90 95 Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 100 105 110 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Pro Phe Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp 115 120 125 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Asp Gly Ser Ser Gly 130 135 140 Gly Ser Gly Gly Ala Ser Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro 145 150 155 160 Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg 165 170 175 Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys 180 185 190 Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Ser Arg Ala 195 200 205 Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 210 215 220 Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr 225 230 235 240 Cys Gln Gln Thr Gly Arg Ile Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys 245 250 255 Val Glu Ile Lys Ala Ala Ala Asp Asp Asp Ser Asp Asp Asp Tyr Lys 260 265 270 Asp Asp Asp Asp Lys His His His His His His 275 280 <210> 25 <211> 365 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:antibody or antibody fragment <220> <223> ZK217691/217695: labelled derivate of L19 <400> 25 Met Xaa Asp Thr Pro Ala Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly 1 5 10 15 Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 20 25 30 Phe Thr Phe Ser Ser Phe Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly 35 40 45 Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Ser Gly Thr Thr 50 55 60 Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn 65 70 75 80 Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 85 90 95 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Pro Phe Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 105 110 Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Gly Asp Gly Ser Ser Gly 115 120 125 Gly Ser Gly Gly Ala Ser Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro 130 135 140 Gly Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg 145 150 155 160 Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys 165 170 175 Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Ser Arg Ala 180 185 190 Thr Gly Ile Pro Asp Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe 195 200 205 Thr Leu Thr Ile Ser Arg Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr 210 215 220 Cys Gln Gln Thr Gly Arg Ile Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys 225 230 235 240 Val Glu Ile Lys Ser Gly Gly Ser Gly Gly Pro Arg Ala Ala Pro Glu 245 250 255 Val Tyr Ala Phe Ala Thr Pro Glu Trp Pro Gly Ser Arg Asp Lys Arg 260 265 270 Thr Leu Ala Cys Leu Ile Gln Asn Phe Met Pro Glu Asp Ile Ser Val 275 280 285 Gln Trp Leu His Asn Glu Val Gln Leu Pro Asp Ala Arg His Ser Thr 290 295 300 Thr Gln Pro Arg Lys Thr Lys Gly Ser Gly Phe Phe Val Phe Ser Arg 305 310 315 320 Leu Glu Val Thr Arg Ala Glu Trp Glu Gln Lys Asp Glu Phe Ile Cys 325 330 335 Arg Ala Val His Glu Ala Ala Ser Pro Ser Gln Thr Val Gln Arg Ala 340 345 350 Val Ser Val Asn Pro Glu Ser Ser Arg Arg Gly Gly Cys 355 360 365 <210> 26 <211> 244 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:antibody or antibody fragment <220> <223> ZK210917: labelled derivate of L19 <400> 26 Met Xaa Asp Thr Pro Ala Glu Val Gln Leu Leu Glu Ser Gly Gly Gly 1 5 10 15 Leu Val Gln Pro Gly Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly 20 25 30 Phe Thr Phe Ser Ser Phe Ser Met Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly 35 40 45 Lys Gly Leu Glu Trp Val Ser Ser Ile Ser Gly Ser Ser Gly Thr Thr 50 55 60 Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn 65 70 75 80 Ser Lys Asn Thr Leu Tyr Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp 85 90 95 Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Lys Pro Phe Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp 100 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Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val 35 40 45 Ser Ser Ile Ser Gly Ser Ser Gly Thr Thr Tyr Tyr Ala Asp Ser Val 50 55 60 Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Tyr 65 70 75 80 Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 Ala Lys Pro Phe Pro Tyr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val 100 105 110 Thr Val Ser Ser Gly Asp Gly Ser Ser Gly Gly Ser Gly Gly Ala Ser 115 120 125 Thr Gly Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Gly Thr Leu Ser Leu Ser 130 135 140 Pro Gly Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser 145 150 155 160 Ser Ser Phe Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg 165 170 175 Leu Leu Ile Tyr Tyr Ala Ser Ser Arg Ala Thr Gly Ile Pro Asp Arg 180 185 190 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Arg 195 200 205 Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Thr Gly Arg 210 215 220 Ile Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Gly Gly 225 230 235 240 Gly Cys Ala <210> 28 <211> 5 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:antibody or antibody fragment <220> <223> amino acid sequence (bc) <400> 28 His His His His His 1 5

Claims (29)

  1. (a) ED-B 피브로넥틴-특이적 분자를 종양 세포 또는 종양 조직과 접촉시키고, ED-B 피브로넥틴-특이적 분자가 종양 세포 또는 종양 조직에 결합하는지를 평가하는 단계, 및
    (b) 단계 (a)에서의 평가에 기초하여 상기 종양 세포 또는 종양 조직을 분류하는 단계
    를 포함하는, ED-B 피브로넥틴-특이적 분자의 실질적인 결합이 관찰되는 경우에는 상피 유형의 종양 세포 또는 조직으로서, 또는 ED-B 피브로넥틴-특이적 분자의 실질적인 결합이 관찰되지 않는 경우에는 중간엽 유형의 종양 세포 또는 조직으로서 종양 세포 또는 종양 조직을 분류하는 방법.
  2. 제1항에 있어서, 상기 ED-B 피브로넥틴-특이적 분자의 실질적인 결합이 EGF/EGFR 길항제의 투여를 포함하는 항종양 치료에 대해 민감함을 나타내는 것인 방법.
  3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 종양 세포 또는 조직이 폐암, 특히 NSCLC, 또는 전립선암, 유방암, 췌장암, 결장암, 두경부암, 위암, 난소암, 신장암 또는 자궁경부암으로부터 선택된 것인 방법.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 종양 세포 또는 종양 조직이 인간 종양 환자로부터 유래된 것이거나, 또는 인간 종양 환자 내에 존재하는 것인 방법.
  5. 제4항에 있어서, 상기 환자의 항종양 치료의 개시 이전에 수행되는 것인 방법.
  6. 제4항에 있어서, 상기 환자의 항종양 치료 도중에 수행되는 것인 방법.
  7. 제5항 또는 제6항에 있어서, 상기 항종양 치료가 EGF/EGFR 길항제를 임의로는 추가의 항종양제의 투여 및/또는 방사선 요법과 병행하여 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기 EGF/EGFR 길항제가 소분자 EGFR 억제제, 특히 엘로티닙 또는 게피티닙으로부터 선택된 것인 방법.
  9. 제7항에 있어서, 상기 EGF/EGFR 길항제가 항 EGFR 항체, 특히 세툭시맙으로부터 선택된 것인 방법.
  10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ED-B 피브로넥틴-특이적 분자가 펩티드 또는 항체인 방법.
  11. 제10항에 있어서, 상기 ED-B 피브로넥틴-특이적 분자가 항체 L19 유래의 CDR 서열을 갖는 항체인 방법.
  12. 제11항에 있어서, 상기 ED-B 피브로넥틴-특이적 분자가 항체 AP39인 방법.
  13. 제1항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ED-B 피브로넥틴-특이적 분자가 검출가능한 표지기, 특히 영상화 기와 접합된 것인 방법.
  14. 제13항에 있어서, 표지기가 방사성 표지기인 방법.
  15. 제13항 또는 제14항에 있어서, 표지기가 SPECT 표지기, 특히 99mTc인 방법.
  16. 제14항에 있어서, 표지기가 PET 표지기, 특히 18F인 방법.
  17. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 시험관내에서 수행되는 것인 방법.
  18. 제1항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 생체내에서 수행되는 것인 방법.
  19. (a) ED-B 피브로넥틴-특이적 분자를 세포 또는 조직과 접촉시키고, ED-B 피브로넥틴-특이적 분자가 세포 또는 조직에 결합하는지를 평가하는 단계, 및
    (b) 단계 (a)에서의 평가에 기초하여 상기 세포 또는 조직을 상피 유형의 세포 또는 조직으로, 또는 중간엽 유형의 세포 또는 조직으로 동정하는 단계
    를 포함하는, 세포 또는 조직, 특히 종양 세포 또는 종양 조직에서 상피 중간엽 이행 (epithelial mesenchymal transition; EMT)을 검출하는 방법.
  20. 제1항 또는 제19항에 있어서, 단계 (a)에서의 평가는 영상 진단에 기초한 것인 방법.
  21. 종양 세포 또는 종양 조직을 EGF/EGFR 길항제 치료에 대해 민감성 또는 불응성으로 분류하는 방법에서의 ED-B 피브로넥틴-특이적 분자의 용도.
  22. 제21항에 있어서, 종양 세포 또는 종양 조직이 폐암, 특히 NSCLC, 또는 전립선암, 유방암, 췌장암, 결장암, 두경부암, 위암, 난소암, 신장암 또는 자궁경부암으로부터 선택된 것인 용도.
  23. 제21항 또는 제22항에 있어서, 상기 항종양 치료가 EGF/EGFR 길항제를 임의로는 추가의 항종양제의 투여 및/또는 방사선 요법과 병행하여 투여하는 것을 포함하는 것인 용도.
  24. 상피 중간엽 이행의 검출 방법에서의 ED-B 피브로넥틴 결합 분자의 용도.
  25. 검출가능한 표지기와 접합된 AP39 및 EGF/EGFR 길항제를 포함하는, 종양을 치료하기 위한 조성물 또는 키트.
  26. 제25항에 있어서, 검출가능한 표지기가 방사성 표지기, 특히 SPECT 표지기 또는 PET 표지기인 조성물 또는 키트.
  27. 제25항 또는 제26항에 따른 조성물의, 종양의 치료 방법에서의 용도.
  28. N-[6-(4-[18F]플루오로벤질리덴)아미노옥시헥실]말레이미드 AP39 ([18F]FBAM-AP39).
  29. N-숙신이미딜 4-[18F]플루오로벤조에이트 AP39 ([18F]SFB-AP39).
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