KR20100045413A

KR20100045413A - 피내 인플루엔자 백신

Info

Publication number: KR20100045413A
Application number: KR1020097027674A
Authority: KR
Inventors: 그리스챤 허조그; 헤드비카 라자르
Original assignee: 크루셀 스위츨랜드 아게
Priority date: 2007-06-14
Filing date: 2008-06-11
Publication date: 2010-05-03
Also published as: ES2391599T3; CN101754770A; US20130183340A1; CA2684699C; PT2175881E; HRP20120825T1; BRPI0811459A2; WO2008152052A1; BRPI0811459A8; JP2010529166A; IL202670A0; DK2175881T3; CN101754770B; AU2008263970A1; US20100136053A1; EP2175881A1; AU2008263970B2; EP2175881B1; EA020953B1; NZ580603A

Abstract

본 발명은 인간의 피내로 투여하는 약제의 제조를 위한 비로좀-기초 인플루엔자 백신에 관한 것이다. 본 발명은 백신접종 기구에서 사용하기 위한, 혈청전환율, GMT-배 증가 및 방어율과 관련된 면역 반응 기준을 만족하는 비로좀 제제내 헤마글루티닌 (HA) 항원의 낮은 투여량을 포함하는 (3가) 조성물을 제공한다.

피내 투여, 비로좀-기초 인프루엔자 백신, 혈청전환율, 방어율, 헤마클루티닌

Description

피내 인플루엔자 백신{INTRADERMAL INFLUENZA VACCINE}

본 발명은 의학 분야, 특히 감염성 질환 분야에 관한 것이다. 더 구체적으로, 본 발명은 인플루엔자 감염의 예방적 치료를 위한 약제의 제조에서 비로좀 (virosome)을 포함하는 백신에 관한 것이다.

오르토믹소비리다에 (Orthomyxoviridae) 과의 일부인, 인플루엔자 바이러스는 매년 유행하는 급성 호흡기 질환의 원인균이다. 인플루엔자 유행병 및 대유행병은 지속적으로 인간의 삶을 위협하고 세계 경제에 영향을 미친다. US에서만, 매년 5,000만 명의 미국인들이 플루에 걸린다. 전세계적으로 매년 (1972-1992) 사망자는 60,000명으로 추정된다 (CDC 통계). 계절성 유행병 이외에, 지난 세기 동안 인플루엔자의 대유행이 출현하는 3가지의 주요한 경우가 존재해왔다. 심각한 인플루엔자 대유행병의 전형적인 예로는 전 세계에 걸쳐 4,000 내지 5,000만명으로 추정되는 사람들이 사망한 1918-1919에 발생한 "스페인 플루"가 있다. 다른 대유행병은 1957년 (아시아 플루, 100만명의 사람들이 사망한 것으로 추정됨), 및 1968년 (홍콩 플루, 700,000명의 사람들이 사망한 것으로 추정됨)에 발생하였다. 오늘날 (치명적인) 조류 인플루엔자 바이러스들이 인간 집단으로 들어올 수 있다는 것이 발견되었고 특정한 경우에 상기 조류 바이러스들이나 그들의 치명적인 성분들의 인간-대-인 간 전이가 실제 가능하다는 것이 명백해졌다.

인플루엔자 바이러스의 감염은 특히 노년층 및 만성 질환에 걸린 환자들에서, 상당한 세계적인 질병률 및 사망률을 초래하는 질병의 넓은 범위 및 합병증과 관련된다. 인플루엔자에 대한 백신접종은 이 감염과 관련된 매우-치명적인 합병증을 예방하는데 가장 효과적이므로, 인플루엔자 백신을 개발하기 위하여 많은 노력을 기울이고 있다.

불활성화 인플루엔자 백신의 3가지 유형: 전 바이러스 (whole virus), 스플릿 조각 (split product) 및 표면 항원 또는 소단위 백신이 현재 사용되고 있다. 계절 백신들은 모두 다음해에 인간 집단 사이에서 유행할 것으로 예상되는 인플루엔자 바이러스 균주의 표면 당단백질 헤마클루티닌 (HA)과 뉴라미니다제 (NA) 단백질을 함유한다. 백신에 결합된 HA 및 NA를 전달하는 균주들은 부화된 계란 (embryonated hens' egg)에서 성장하고, 그 다음 바이러스 입자들은 추가 공정 전에 정제된다.

"항원 이동" 및 "항원 흐름"으로 알려진 과정을 야기하는 항원 돌연변이로 인해 인플루엔자 백신을 매년 조정하는 것이 필요하다: 항원 이동은 아미노산 치환을 초래하는 바이러스의 HA 또는 NA 단백질에서 일련의 점돌연변이의 축적에 의해 발생한다. 이러한 치환은 이전의 감염에 의해 유도된, 중화 항체의 결합을 막고, 그리고 새로운 변이체는 숙주를 감염시킬 수 있다. 항원 흐름은 동물 (대부분 조류)과 인간 인플루엔자 A 바이러스 사이의 유전자 재편성에 의해 새로운 하부유형이 출현된 것이다. 1957 (H2N2) 및 1968 (H3N2)의 대유행병 균주는 인간 집단 사이 에 유행할 수 있는, 유행성 인간 바이러스에 조류 HA 및 또는 NA 코드화 유전자를 도입하는 것에 의해 재편성된 바이러스의 예이다.

100년에 걸친 세계적인 National Influenza Centers에 의한 유행병학적 조사를 기반으로, 세계 보건복지 기구 (WHO)는 매년 일반적으로 북반구에서는 2월, 및 남반구에서는 9월에 인플루엔자 백신의 조성물을 권장한다. 이러한 실천은 백신의 생산과 표준화를 위한 시간대를 최대 9개월로 제한한다.

백신의 많은 투여량이 긴급하게 요구되는 경우, 예를 들면 인플루엔자 A 바이러스의 새로운 하부유형이 항원 이동 및 항원 흐름에 의해 발생하여, 백신의 증가된 공급이 요구되는 경우에, 계란의 제한된 이용가능성은 백신의 빠른 생산을 방해할 수 있다. 또한 이 생산 시스템의 단점으로는 융동성의 부족, 독소의 존재 위험 및 외래 바이러스, 특히 레트로바이러스의 위험 및 불임에 대한 관심을 들 수 있다. 몇몇 균주들은 상기 백신이 최종적으로 전달되는 속도를 방해할 수 있는 것보다 더 빨리 계란에서 성장한다. 전체적으로, 이러한 단점은 상기 부화된 계란을 사용하는 인플루엔자 백신 생산의 오늘날 현실에서 심각한 문제를 제공한다. 따라서 유행병뿐 아니라 대유행병을 위한 인플루엔자 백신 생산에 세포 배양 시스템을 사용하는 것은 매력적이고 신뢰성 높은 생산 대안책이다. 인플루엔자 바이러스 생산을 위한 아데노바이러스-E1 형질전환 및 영구화된 세포주의 사용은 WO 01/38362에 개시되어 있다.

매년 인플루엔자 백신은 전형적으로 2개의 인플루엔자 A 바이러스 균주와 하나의 인플루엔자 B 균주의 항원을 함유한다. 표준 0.5 ml 주입가능한 투여량은 일 반적으로 단일원 면역확산법으로 측정된 바와 같이, 각각의 균주의 헤마글루티닌 (HA) 항원 성분의 15 μg을 함유하고, 전체 약 45 μg HA까지 첨가된다.

세계 인구의 증가, 경제의 성장 및 발생, 국제 여행의 증가, 매년 인플루엔자 유행병의 확산 증가, 세계적인 인플루엔자 대유행병의 위협, 및 전 세계의 이용가능한 생산 시설의 제한으로 인해, 현재 사용되는 기준에 비해 개선된 특성을 갖는 백신으로 인간의 방어 면역 반응을 달성하는 것이 바람직하고; 또한 동일한 수준의 방어 면역성을 제공하면서, 낮은 투여량 (투여량 부족의 경우)으로 백신을 사용하는 것이 바람직하다. 그러나, 낮은 투여량을 고려하면, 알루미늄-기초 보조제와 같은 면역자극제가 고려될 수 있다. 그러나, 인플루엔자 백신에 알루미늄의 적용은 일반적으로 주입 부위의 통증과 같은 부작용 효과로 인해 적용되지 않는다.

발명의 요약

본 발명은 인간 대상자 (subject)의 피내 인플루엔자 백신으로 사용하기 위한 인플루엔자 헤마글루티닌 (HA) 항원을 포함하는 비로좀 제제에 관한 것이다. 본 기술은 인플루엔자 HA 항원을 포함하는 비로좀 제제가 동물 (돼지)에게 충분한 혈청전환-, 혈청방어- 및 GMT-배 증가 수준을 제공하지 않았었다는 것을 개시한다. 본 발명의 발명자들은 이제 이러한 백신이 인간에게 투여될 때 국제적인 기준을 만족시킨다는 것을 알았다.

본 발명은 또한 인간 대상자의 피내 투여를 위한 인플루엔자 백신의 제조에서 인플루엔자 HA 항원을 포함하는 비로좀 제제의 사용에 관한 것이고, 여기서 상기 제제는 Inflexal® V 백신 조성물인 것이 바람직하다. 또한, 적은 부피로, 바람직하기는 약 0.1 mL의 단일 투여 부피로 상기 백신을 제조하는 것이 바람직하다. 본 발명은 또한 본 발명에 따른 제제 및 백신의 피내 전달에 적합한 전달 장치, 바람직하기는 NanoPass에 의해 개발된 MicronJet 장치와 같은 다중-채널 피내 전달 장치를 포함하는 키트에 관한 것이다.

발명의 상세한 설명

일반적으로 백신을 개선하기 위한 한 선택은 보조제 또는 면역-증강제를 첨가하는 것이다. 오늘날 다양한 보조제가 존재한다. 전형적인 예로는 알루미늄 히드록사이드 또는 알루미늄 포스페이트와 같은 알루미늄-기초 보조제가 있다. 다른 예로는 오일-내-물 에멀젼, 사포닌 (ISCOM 형태일 수 있다), 및 파상풍 독소와 같은 병원균-유래 독소가 있다.

인플루엔자 항원에 대한 면역 반응을 자극하는 다른 방법은 외피에 결합된 헤마글루티닌 항원은 함유하지만, 인플루엔자 바이러스 자체의 유전 배경은 갖지 않는, 기능적 바이러스 외피가 필수적으로 재구성된 재구성 인플루엔자 비로좀을 발생시키는 것이다 (Gluck 1992; Huckriede et al. 2005). 그러한 인플루엔자 비로좀은 매년 발생하는 인플루엔자 유행병에 사용되는 인플루엔자 백신접종에 허가되었고, 상표 Inflexal® V하에 Berna Biotech AG에 의해 상품화되었다.

상기 기술된 바와 같이 비로좀을 함유하는 인플루엔자 백신은 전형적으로 매년 백신접종 프로그램에 WHO에 의해 권고된 각각의 균주: 2개의 인플루엔자 A 균주 및 하나의 인플루엔자 B 균주의 15 μg HA을 함유한다. 이러한 백신은 근육-내로, 일반적으로 주사 바늘을 사용하여 투여된다.

인플루엔자 백신 (투여 부족)에 대한 매년 수요를 만족시키는 충분한 백신을 제공하는 프로그램 이외에, 그들이 긴 바늘로 주입되는 것이 필요한 것처럼 이러한 백신을 투여하는 문제가 존재한다: 많은 개체들은 그러한 바늘을 무서워하므로 다른 투여 방법으로부터 해택을 볼 것이다.

피내 투여는 긴 바들의 사용을 회피하는 백신의 투여 방법이고 백신은 신뢰성있고 사용하기 쉬운 장치로 투여될 수 있다. 더욱이, 피부는 분화된 수지상 세포가 있는, 고밀도의 랑게르한스 세포가 존재하기 때문에, 훌륭한 면역 조직이다. 일반적으로 백신의 피내 투여는 항원의 더 효과적인 흡수를 제공한다. 더 낮은 투여량 (단일 균주의 3 내지 6 μg HA)으로 유망한 결과를 나타내는 기술분야에서 인플루엔자 백신의 피내 투여에 대해 보고되어 있다 (Belshe et al. 2004; Kenney et al. 2004). Belshe et al. (2004)은 100% 혈청전환율이 119명의 대상자의 피내 투여에서 6 μg HA를 사용하는 것에 의해 도달되었다는 것을 나타내지만, Kenney et al. (2004)은 혈청전환율 및 혈청방어율이 15 μg HA의 근육내 투여와 50명의 대상자에게 피내로 제공할 때의 3 μg HA 투여가 유사하다는 것을 나타낸다.

스플릿 바이러스 백신 또는 정제된 항원 백신의 피내 적용이 적용가능할 수 있어도, 부피 및 항원 투여량는 일반적으로 근육내 적용된 백신 조성물에 비해 낮고, 그리고 그러한 연구가 수행되고 개시되어 왔어도, 피내 인플루엔자 백신은 현재 상업적으로 이용가능하지 않다. 기준을 만족시키고 근육내 백신처럼 효과적이기 위하여, 보조제에 의한 그러한 조성물 (피내 적용시)의 면역 반응을 자극하는 것이 바람직할 것이다. 그러나, 알루미늄-기초 보조제는 전형적으로 피내 투여에 적합하지 않게 하는 부작용 효과를 초래한다. 면역 반응을 자극하는 다른 방법은 HA 항원을 함유하는 면역자극 재구성 인플루엔자 비로좀을 사용하는 것이고, 여기서 상기 항원은 비로좀 막과 세포막의 융합 과정을 거쳐 항원-제시 세포에 직접 전달된다. 그러한 비로좀 조성물들이 당업계에 잘 알려져 있으나 (예를 들면, Huang et al. 1979; Kawasaki et al. 1983; Hosaka et al. 1983 참고) WO 92/19267에 다른 종류의 백신에서의 사용이 개시되어 있다.

인플루엔자 비로좀은 피내 투여를 위해 사용되어 왔고, 이러한 방법은 WO 2004/016281에 개시되어 있다. WO 2004/016281의 실시예 및 도면은 ADP-리보실화 독소 (E. coli 이-열성 내독소 LT)의 다른 농도와 함께 비로좀-기초 인플루엔자 백신 (Inflexal® V)이 각각의 백신 균주를 위한 EMEA (40% 이상의 혈청전환율 = 백신접종 이후의 혈정 헤마글루티닌 (HI) 적정농노의 4-배 이상의 증가를 갖는 백신접종을 받은 사람의 비율)에 의해 성립된 기준 중 하나를 만족시킨다는 것을 개시한다 (상기 특허의 도 1 내지 3 참고). 그러나, 보조제 (ADP-리보실화 독소)를 사용하지 않고, 각각의 균주의 3 μg HA만 사용한 경우 긍정적인 결과를 얻지 못했다. 혈청전환율은 LT를 제외하고는 비로좀을 피내로 투여한 어느 경우에도 40%에 도달되지 않았다. 근육내로 투여하는 보통의 방법은 충분한 혈정전환을 초래하였다. 그러므로, WO 2004/016281의 결론은 비조롬-기초 인플루엔자 백신의 피내 투여는 충분한 방어를 얻는데 사용되어서는 안된다는 것이다.

본 발명의 발명자들은 요번에 이름 Inflexal® V하에 시판되는 것들과 같은, 비로좀을 기초로 하는 인플루엔자 백신을 피내 투여 (근육내 주입하는 것 대신에)하면 인간에 사용하는 경우, 당국에 의해 성립된 기준에 도달한다는 것을 발견하였다. 본 발명에 따른 피내 적용은 그러한 백신을 위해 성립된 일반적인 기준 (EMEA에 의해 성립된 것과 같은)에 의해 요구되는 바와 같이 보호 면역을 유도하면서, 일반적으로 요구되는 각각의 균주의 15 μg HA 보다 낮은 투여량 (및 부피)로 수행된다. 투여량을 낮추는 것은 세계적인 생산 능력 문제, 및 인플루엔자 백신의 증가하는 요구에 대한 해결책을 제공한다. 피내 투여는 또한 많은 사람들이 두려워하는 바늘로 성가신 근육내 주입에 대한 해결책을 제공한다. 더욱이, 비로좀-기초 백신을 사용하는 것에 의해 비로좀 보강된 인플루엔자 백식의 높은 순도에 의한 낮은 비율의 부작용이 예상될 것이다.

명확히, 본 발명의 발명자들이 낮은 투여량을 갖는 비로좀 형태의 백신을 발견하였다는 사실은 WO 2004/016281에서는 매우 기대되지 않았던 피내 적용시 충분한 보호를 제공한다. 차이점은 WO 2004/016281의 실험이 인간이 아닌, 동물, 정확히 돼지에서 수행되었다는 사실로 설명될 수 있다. 본 발명의 발명자들은 이제 비로좀-기초 인플루엔자 백신 투여의 피내 투여가 HA 항원의 낮은 투여량이 인간 대상자에게 투여될 때 충분한 형청전환율 및 혈청방어율을 제공한다는 것을 발견하였다.

본 발명은 단일 인플루엔자 바이러스 균주로부터 약 3 μg HA 항원을 포함하는 조성물에 관한 것이고, 여기서 상기 조성물은 추가로 인간 치료 또는 예방에 사용하기 위한, 다중 인플루엔자 바이러스 균주, 바람직하기는 A-형뿐만 아니라, B-형 균주로부터 HA 항원을 포함할 수 있다. 상기 조성물은 다중 인플루엔자 균주로부터 HA 항원을 포함할 것이라고 이해될 것이고, 여기서 HA 항원의 양은 바람직하기는 균주 당 약 3 μg이다.

본 명세서에서 사용된 바와 같이 "피내 전달" 또는 "피내 투여"는 피부의 진피 영역으로 인플루엔자 백신의 전달을 의미하지만, 그것은 오로지 인간 피부 표면으로부터 약 1.0 내지 약 2.0 mm 사이에 위치하는 피부 층인, 진피에 위치될 필요는 없다. 개체 간에 그리고 인체의 다른 부분에 다양한 함유량이 존재할 수 있다. 일반적으로, 진피는 피부 및 피하 층 하부의 각각 각질층과 표피 사이에 있는, 피부의 표면 밑으로 대략적으로 1.5 mm 지나 도달된다. 투여 이후에, 백신은 오로지 진피에만 위치할 수 있고, 그것은 또한 표피에 존재할 수 있다.

피내 백신으로 사용하기에 적합한 장치는 NanoPass Technologies Ltd.에 의해 시판되는 것들과 US 4886499, US 5190521, US 5328483, US 5527288, US 4270537, US 5015235, US 5141496, US 5417662, WO 99/34850, EP 1092444, US 5480381, US 5599302, US 5334144, US 5993412, US 5649912, US 5569189, US 5704911, US 5383851, US 5893397, US 5466220, US 5339163, US 5312335, US 5503627, US 5064413, US 5520639, US 4596556, US 4790824, US 4941880, US 4940460, US 6494865, US 6569123, US 6569143, US 6689118, US 6776776, US 6808506, US 6843781, US 6986760, US 7083592, US 7083599, WO 2004/069302, WO 2004/098676, WO 2004/110535, WO 2005/018703, WO 2005/018704, WO 2005/018705, WO 2005/086773, WO 2005/115360, WO 02/02178, WO 02/02179, WO 02/083205, WO 02/083232, WO 03/066126, WO 03/094995, WO 2004/032990, WO 2004/069301, WO 97/37705, 및 WO 97/13537에 기술된 것들과 같은 어플리케이터를 포함한다.

인플루엔자 백신의 전달을 위한 당업자에 의해 적합하게 발견된 어느 피내 전달 장치도 본 발명에 따라 사용될 수 있고, 그리고 본 발명에 따른 키트의 부품일 수 있다. NanoPass에 의해 개발된 것들과 같은 장치가 바람직하고 일반적으로 다중 전달 채널을 포함하는 MicronJet 장치와 같은 것들이 속하고, 또한 미세바늘 (microneedles) 또는 MicroPyramids과 같은 것들이 속한다. MicronJet 장치는 4개의 분리된 미세바늘이 함유된 내부 (여기서 하기의 실시예 2)를 사용하였으나, MicronJet 장치는 2 이상부터 인간 피부에 전달되는 것이 필요한 조성물을 흐르게 하는 수까지와 같은 분리된 미세바늘의 다른 수를 함유할 수 있다.

인플루엔자 백신의 효능을 측정하기 위하여 국제적인 기준이 적용된다. 인플루엔자에 대해 효과적인 백신을 위한 EMEA 기준은:

혈청전환율: >40% (18세 내지 60세)

>30% (>60세)

전환 인자: >2.5 (18세 내지 60세)

>2.0 (>60세)

방어율: >70% (18세 내지 60세)

>60% (>60세)

혈청전환율은 각각의 백신 균주를 위한, 백신접종 이후의 혈청 헤마글루티닌 억제 (HI) 적정농도에서 적어도 4-배 증가를 갖는 백신접종을 받은 사람의 백분율로 정의된다. 전환 인자는 각각의 백신 균주를 위한, 백신접종 이후의 혈청 HI 기하학적 평균 적정농도 (GMT)에서 배수 증가로 정의된다. 방어율은 백신접종 (각각의 백신 균주를 위한) 이후의 1:40과 동일하거나 큰 혈청 HI 적정농도를 갖는 백신의 백분율을 의미하고 보통 방어를 나타내는 것으로 받아들여진다.

이론적으로, 유럽의 요구조건을 충족시키기 위하여, 인플루엔자 백신은 백신에 포함된 인플루엔자의 모든 균주에 대하여, 상기 약술된 기준 중 하나만 충족시켜야 한다. 그러나, 실제, 모든 균주에 대하여 2 이상을 만족시키는 것이 필요하고 충분할 것이다. 몇몇 균주들은 다른 것보다 면역성이 있고 근육내 투여할 경우에도, 기준에 도달할 수 없다. 종종, 18 내지 60세의 건강한 개체에 대하여 상기 기준이 충족되면, 상기 기준은 연령자 (>60 세)에게는 충족되지 않을 수 있다.

본 발명은 인간에게 피내 투여하기 위한 인플루엔자 백신의 제조에서 비로좀-기초 인플루엔자 백신 제제의 사용에 관한 것이다. 더욱이, 백신이 피내로 전달될 때, 낮은 부피가 투여된다.

특정 구현예에서, 본 발명에 따른 조성물에서 항원의 양은 단일 백신 투여로 각각의 인플루엔자 균주의 1 내지 10 μg HA, 예를 들면, 단일 백신 투여로 각각의 인플루엔자 균주의 예를 들면, 2 내지 10 μg, 예를 들면, 약 3, 4, 5, 6, 7, 8 또는 9 μg HA이다. 본 발명에 따른 조성물내 항원의 양은 바람직하기는 단일 백신 투여로 각각의 인플루엔자 균주의 약 3.0 μg HA이고; 그리고 이것은 전형적인 근육내 투여 중 약 20%의 투여만을 요구한다 (0.5 mL 대신에 0.1 mL).

본 발명은 인간 대상자의 피내 인플루엔자 백신으로 사용하기 위한, 인플루엔자 헤마글루티닌 (HA) 항원을 포함하는 비로좀 제제에 관한 것이다. 바람직하기는, 상기 제제는 인플루엔자 이외의 바이러스로부터 항원을 포함하지 않는다. HA 항원을 포함하는 비로좀은 수년간 만들어져 왔고 상기 비로좀의 제조 방법은 본 기술분야의 당업자들에게 잘 알려져 있다. 인플루엔자 바이러스로부터 HA 항원을 포함하는 비로좀 제제는 또한 간염 A 백신 (Epaxal®)을 위해 제조된 것과 같은 다른 예방적 치료에 적용되어 왔다. 그러나, 바람직한 구현예에서, 치료받은 인간 대상자가 인플루엔자 감염을 예방하기 위하여 백신접종을 받을 경우, 상기 제제는 간염 A 바이러스와 유사한 바이러스 같은 다른 병원균으로부터 항원들을 포함하지 않는다. 인플루엔자 바이러스로부터 HA 항원을 포함하는 비로좀 제제는 대유행병이 발생할 경우 사용될 수 있다. 그 경우에, 단일 인플루엔자 균주로부터 HA 항원은 비로좀 제제의 일부로 사용될 수 있다. 그러나, 계절 백신이 생산되면, 상기 백신은 전형적으로 HA가 세개의 다른 인플루엔자 균주, 일반적으로 2개의 A 균주 및 하나의 B 균주로부터 존재한다는 점에서 3가(trivalent)이다. 계절 플루 캠패인 동안 인간 대상자의 치료를 위하여, 본 발명에 따른 제제는 2 이상의 인플루엔자 바이러스 균주, 바람직하기는 3개의 균주, 더 바람직하기는 2개의 A-형 균주와 하나의 B-형 균주로부터 HA 항원을 포함하는 것이 바람직하다. 본 발명에 따른 제제는 바람직하기는 인간의 예방적 치료에 사용될 수 있으므로, 바람직하기는 약제학적으로 허용가능한 부형제 및/또는 용매를 추가로 포함한다. 약제학적으로 허용가능한 부형제는 본 기술분야에 잘 알려져 있고 예를 들면, 레시티넘(lecithinum), Na₂HPO₄, KH₂PO₄ 및 NaCl로부터 선택될 수 있다. 적합한 용매는 물이다.

바람직한 구현예에서, 본 발명은 본 발명에 제제에 관한 것이고, 여기서 각각의 인플루엔자 균주로부터 HA 항원의 농도는 인플루엔자 균주 당 약 3.0 μg이다. 일반적으로, 계절 플루 캠패인을 위한 비로좀 제제의 근육내 투여는 인플루엔자 바이러스 균주 당 약 15 μg HA으로 수행된다. 본 명세서에서 개시한 바와 같이, 근육내 투여를 위해 사용되는 상기 재재의 약 1/5 (20%)이 지금 혈청전환-, 혈청방어- 및 GMT-배 증가의 적절한 수준을 제공하면서 피내로 적용될 수 있다. 그러므로, 피내 투여의 경우, 인플루엔자 균주 당 HA의 바람직한 농도는 약 1/5: 약 3.0 μg이다.

인플루엔자 바이러스를 기초로한 비로좀을 포함하고 그리고 면역원 결정기로서 HA 항원을 포함하는 제제는 상업적으로 이용가능하다. 피내 사용을 위한 상기 제제의 1/5을 샘플링하는 것은 각각의 생산율로 인해 바람직하다. 바람직한 구현예에서, 본 발명은 본 발명에 따른 제제에 관한 것이고, 여기서 상기 제제는 Berna Biotech AG, Switzerland에 의해 시판되는 바와 같이, Inflexal® V 백신 조성물이다. 이 백신은 전형적으로 WHO의 권고사항에 따라, 매해 다른 인플루엔자 균주로부터 HA 백신 내용물을 가진다. 바람직하기는, 본 발명에 따른 제제는 인플루엔자 균주 A/New Caledonia/20/99, A/Moscow/10/99 및 B/Hong Kong/330/2001로부터 HA 항원의 3가 조합을 함유하지 않는다. 그럼에도 불구하고, 다른 균주 또는 이러한 균주와 비슷한 바이러스 중 다른 조합이 가능한바, 본 발명에 따른 제제에 포함될 수 있다.

본 발명은 또한 인간 대상자의 피내 투여를 위한 인플루엔자 백신의 제조에서 인플루엔자 HA 항원을 포함하는 비로좀 제제의 사용에 관한 것이다. 바람직하기는, 본 발명에 따른 사용에서 상기 제제는 인플루엔자 바이러스 이외의 바이러스로부터 항원을 포함하지 않는다. 계절성 적용의 경우, 상기 제제는 2 이상의 인플루엔자 바이러스 균주로부터 HA 항원을 포함하는 것이 바람직하다. 대유행성의 경우, 대유행성을 야기하는 단일 인플루엔자 균주는 본 발명에 따라 사용되는 제제에 있는 그의 HA 항원에 의해 나타내어지는 것이 바람직하다. 바람직한 사용에서, 각각의 인플루엔자 균주로부터 HA 항원의 농도는, 오직 하나의 인플루엔자 균주가 제제에 존재하는 경우에도, 인플루엔자 균주 당 약 3.0 μg이다. 바람직하기는 Inflexal® V 백신 조성물이 본 발명에 따른 약제의 제조에 사용될 수 있고, 여기서 상기 제제는 인플루엔자 균주 A/New Caledonia/20/99, A/Moscow/10/99 및 B/Hong Kong/330/2001로부터 HA 항원의 3가 조합을 함유하지 않는 것이 바람직하다.

피내 전달은 적은 부피를 가능하게 한다. 원래 근육내 백신은 0.5 mL (단일 투여량으로 Inflexal® V와 같음) 부피를 가지나, 피내 투여의 부피 중 20%를 사용하는 것이 바람직하다. 따라서, 백신은 약 0.1 mL의 단일 투여량 부피로 제조되는 것이 바람직하다.

비로좀은 보조 활성을 가질 수 있으므로, 보조제라 할 수 있다. 본 명세서에서 본 발명에 따른 비로좀 제제가 인플루엔자에 대한 인간의 피내 백신접종을 위해 사용되는 경우 추가 보조제 (즉, 비조롬 이외)는 요구되지 않는 것으로 나타낸다. 그러므로, 바람직한 구현예에서, 본 발명의 백신 조성물은 부가적인 보조제를 포함하지 않는다. 상기 부가적인 보조제는 본 발명에 따르면 회피되는, 부작용을 야기시킬 수 있다. 또한, 본 발명은 이러한 부가적인 보조제의 제조 및 시험을 요구하지 않으므로, 부가적인 보조제와 관련되는 부가적인 비용 및 복잡성을 회피할 수 있다.

본 발명은 또한 본 발명에 따른 제제와 그것을 피내로 전달하는 전달 장치에 관한 것이다. 그러므로, 본 발명은 또한 본 발명에 따른 제제와 백신의 피내 전달에 적합한 전달 장치를 포함하는 키트에 관한 것이다. 제제가 이미 전달 장치 내부에 존재하고, 건강한 작업자가 인간 대상자에게 백신을 쉽게 투여할 수 있는 키트가 더욱더 바람직하다. 본 발명에 따른 키트에 사용되는 바람직한 전달 장치는 NanoPass®에 의한 이름 MicronJet 하에 시판되는 장치들이다. 본 발명에 따른 키트에 사용될 수 있는 이를 비롯한 다른 전달 장치는 하기의 특허 및 특허 출원: US 4886499, US 5190521, US 5328483, US 5527288, US 4270537, US 5015235, US 5141496, US 5417662, WO 99/34850, EP 1092444, US 5480381, US 5599302, US 5334144, US 5993412, US 5649912, US 5569189, US 5704911, US 5383851, US 5893397, US 5466220, US 5339163, US 5312335, US 5503627, US 5064413, US 5520639, US 4596556, US 4790824, US 4941880, US 4940460, US 6494865, US 6569123, US 6569143, US 6689118, US 6776776, US 6808506, US 6843781, US 6986760, US 7083592, US 7083599, WO 2004/069302, WO 2004/098676, WO 2004/110535, WO 2005/018703, WO 2005/018704, WO 2005/018705, WO 2005/086773, WO 2005/115360, WO 02/02178, WO 02/02179, WO 02/083205, WO 02/083232, WO 03/066126, WO 03/094995, WO 2004/032990, WO 2004/069301, WO 97/37705, 및 WO 97/13537 중 어느 하나에 개시되어 있는 것이다.

본 발명은 또한 인플루엔자 감염에 대한 인간 대상자의 백신접종 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 부가적인 보조제가 없는 인플루엔자 헤마글루티닌 (HA)을 포함하는 비로좀 제제를 인간 대상자에게 피내 투여하는 것을 포함한다. 본 발명은 또한 인플루엔자 감염에 대한 포유류 대상자의 백신접종 방법을 제공하고, 상기 방법은 HA 항원 인플루엔자 균주를 포함하는 비로좀-기초 인플루엔자 백신을 제조하는 단계, 및 상기 백신을 피내로 투여하는 단계를 포함한다. 바람직하기는, 포유류는 인간이다. 대유행성 위험 상황에서, 백신은 바람직하기는 중요하고 대유행성을 위협하는 균주의 HA 항원만을 포함한다. 그러나, 일반적인 계절 백신 상황, 프로토콜 및 캠패인에서, 본 발명에 따라 피내로 투여되는 백신은 3개의 다른 인플루엔자 균주, 더 바람직하기는 2개의 A-형 균주와 하나의 B-형 균주로부터 HA를 포함하는, 3가 백신인 것이 바람직하다.

다른 바람직한 구현예에서, 백신은, 예를 들면, 단일 군주로부터 약 3.0 μg HA 항원, 또는 3개의 인플루엔자 균주 각각으로부터 3가 백신의 경우에 1-10를 포함한다. 더욱더 바람직한 구현예에서, 비로좀-기초 인플루엔자 백신은 상표명 Inflexal® V 백신 하에 Berna Biotech AG에 의해 상품화된 백신이다. 바람직하기는, 본 발명은 본 발명에 따른 방법에 관한 것이고, 여기서 상기 백신은 인플루엔자 균주 A/New Caledonia/20/99, A/Moscow/10/99 및 B/Hong Kong/330/2001로부터 HA 항원의 3가 조합을 함유하지 않는다. 본 명세서에서 알 수 있는 바와 같이, 투여는 바람직하기는 백신의 피내 전달에 적합한 전달 장치를 사용하여 수행된다. 피내 전달에 적합한 장치는 단일 피하주사용 바늘일 수 있다. 특정한 장치는 그들의 바늘이 준-최적 (sub-optimal) 전달을 초래하는 피부 층을 통과할 수 없도록 제조되었다는 것을 발견하였다. 바꾸어 말하면, 특정 장치는 모든 백신 제제가 피내로 전달되지 않는 경우, 대부분 매우 짧은 바늘을 함유한다. 본 발명에 따른 방법에서 사용되는 바람직한 장치는 미세 바늘 또는 MicroPyramids와 같은, 2 이상의 분리된 전달 채널을 함유하는 전달 장치이다. 더 바람직하기는, 상기 전달 장치는 4 이상의 분리된 전달 채널을 함유한다. 가장 바람직하기는 MicronJet 장치와 같은, NanoPass® 전달 장치이다.

도 1은 the A/New Caladenia 균주 (왼쪽 막대), A/Hiroshima 균주 (가운데 막대) 및 B/Malaysia 균주 (오른쪽 막대)의 경우, 근육내 전달 (IM) 또는 피내 전달 (ID) 이후에, 18세 내지 60세의 백신접종을 받은 사람의 (A) 혈청전환율 (SC) (%), (B) GMT-배 증가 기준 (>2.5 배), 및 (C) 혈청방어율 (SP) (>70%)을 나타낸다.

도 2는 A/New Caladenia 균주 (왼쪽 막대), A/Hiroshima 균주 (가운데 막대) 및 B/Malaysia 균주 (오른쪽 막대)의 경우, 근육내 전달 (IM) 이후에, 60세보다 고령자인 백신접종을 받은 사람의 (A) 혈청전환율 (%), (B) GMT-배 증가 기준 (>2.5 배), 및 (C) 혈청방어율 (>70%)을 나타낸다.

도 3은 EMEA 기준의 대부분을 만족시킨다는 것을 나타내고, 여기서 a + (플러스)는 기준의 달성을 나타내고, 그리고 a - (마이너스)는 기준을 만족시키지 않았다는 것을 나타낸다.

도 4는 근육내로 투여된 높은 투여량 (각 균주의 15 μg HA), 및 NanoPass 장치 (일반적으로 MicronJet 장치라 함)로 피내 투여된 낮은 투여량 (각 균주의 3 μg HA)와 비교한, 단일 피내 투여량으로 3개의 인플루엔자 균주로부터 3, 4.5 및 6 μg HA 항원의 투여를 포함하는 연구에서의 혈청전환율 및 혈청방어율을 나타낸다. 상기 연구는 각각의 연구 그룹에서 56명의 인간 개체들, 및 2007/2008 플루 시즌의 Inflexal® 인플루엔자 백신의 적용을 포함하는 Phase II 임상 실험이었다.

도 5는 각각의 균주로부터 3, 4.5 및 6 μg HA를 제공받은 그룹들의 백신접종 전- 및 후-의 GMT율을 나타낸다.

도 6은 단일 피하주사용 바늘을 사용하여 피내로, 각각의 균주로부터 3, 4.5 및 6 μg HA를 제공받은 그룹에서의 혈청전환-, 혈청방어- 및 GMT-배 증가를 나타낸다.

도 7은 단일 피하주사용 바늘을 사용하여 근육내로 각각의 균주로부터 15 μg HA, 및 피내로 각각의 균주로부터 3 μg HA를 제공받은 그룹에서의 혈청전환-, 혈청방어- 및 GMT-배 증가를 나타낸다.

도 8은 NanoPass MicronJet (다중 미세바늘) 장치을 사용하여 근육내로 각각의 균주로부터 15 μg HA, 및 피내로 각각의 균주로부터 3 μg HA를 제공받은 그룹 에서의 혈청전환-, 혈청방어- 및 GMT-배 증가를 나타낸다.

도 9는 단일 피하주사용 바늘 또는 NanoPass MicronJet (다중 미세바늘) 장치에 의해, 각각의 균주로부터 3 μg HA를 제공받은 그룹에서의 백신접종 전- 및 후-의 GMT 비율을 나타낸다. 각각의 왼쪽 막대는 A/Solomon Islands 균주를 나타내고, 가운데 막대는 A/Wisconsin 균주를 나타내고 그리고 오른쪽 막대는 B/Malaysia 균주를 나타낸다.

도 10은 단일 피하주사용 바늘을 사용하여 피내로 각각의 균주로부터 3 μg HA, 및 NanoPass MicronJet (다중 미세바늘) 장치를 사용하여 피내로 각각의 균주로부터 3 μg HA를 제공받은 그룹에서의 혈청전환-, 혈청방어- 및 GMT-배 증가를 나타낸다.

실시예 1. 인간 대상자에서 비로좀 -기초 인플루엔자 백신으로 임상 실험 (각 균주의 3 μg HA )

중첩 (nested) 연구 그룹에서 피내로 투여되는 백신의 안정성 및 체액성 반응을 평가하기 위하여 Inflexal® V으로 인간 대상자에 대한 임상 실험을 수행하였다. 상기 연구는 공개하고 비-무작위로 하였다. 사용된 백신은 2006-2007 플루 시즌을 위해 개발되고 연구된 3가 비로좀 보조된 인플루엔자 백신 Inflexal® V 백신이였다. 이 근육내 백신의 투여량은 0.5 mL 용매에서 비로좀에 결합된 하기의 인플루엔자 균주: A/New Caledonia/20/99 (H1N1; IVR-116), A/Hiroshima/52/2005 (H3N2; IVR-142; A/Wisconsin/67/2005 유사 바이러스) 및 B/Malaysia/2506/2004의 (원래의) 15 μg 헤마글루티닌을 함유하였다. 백신의 20% 부로: 바늘을 갖는 보통 주입 주사기를 사용하여, 각각의 인플루엔자 균주의 3 μg HA를 함유하는 0.1 mL의 단일 투여량으로 피내 투여를 수행하였다. 피내 연구는 전부 18세 내지 60세 (연령 범위: 19.2 내지 59.6)인 23명의 건강한 지원자가 참가하였다. 사용된 기준은 EMEA에 의해 설정된 바와 같다. 상기 연구를 18세 내지 60세 (연령 범위 21.1 내지 59.8)인 56명의 성인 및 60세 이상의 (연령 범위 60.4 내지 83.3) 성인에서 0.5 mL 백신의 단일 투여량 (보통 IM 투여량)으로 수행한 근육내 투여와 비교하였다. 백신접종 후 20 내지 24일이 지난 다음 샘플링을 수행하였다.

도 1A는 근육내 전달 (IM) 이후 및 피내 전달 (ID)이후의 백신내 혈청전환율 (%)을 나타내고, 두 전달 방법에서 3개의 균주 모두가 설정 기준 (>40% 혈청전환)을 만족시킨다는 것을 나타낸다. 도 1B는 또한 3개의 균주 모두가 GMT-배 증가 기준 (>2.5 배)을 만족시킨다는 것을 나타낸다. 도 1C는 2개의 A 균주의 경우 혈청방어율이 충분하지만 (>70%), B 균주의 혈청방어율은 피내 전달 이후에 만족스럽지 않다는 것을 나타낸다. 그러나, 고령자 (>60세)로 얻어진 결과와 비교할 때, 도 2C에서 알 수 있듯이, 근육내 전달은 또한 이 연령 그룹의 기준인, 60% 이상의 방어율을 나타내지 않았다. 이 결과는 이 B 형 인플루엔자 균주의 HA 항원의 면역원성으로 인한 가능성이 매우 높다. 도 2A 및 2B는 >60세 연령 그룹에서 근육내 투여 이후의 결과를 나타내고, 수준이 EMEA 기준을 충족하기에 충분한 수준에 도달하였다는 것을 가리킨다. 도 3은 상기 결과의 개관을 제공하는바, 여기서 a + (플러스)는 기준의 달성을 나타나고, 그리고 a - (마이너스)는 기준을 만족시키지 않았다는 것을 나타낸다.

이러한 연구는 비로좀-기초 인플루엔자 백신이 인간으로 각각의 균주 (2개의 A-형 균주, 및 하나의 B-형 균주)의 3 μg 농도로 피내로 투여될 때, 세개의 균주는 모두 혈청전환율 및 GMT 기준을 만족하지만, 적어도 두개의 A 균주에서 혈청방어율을 만족시킨다는 것을 나타낸다. 이것은 매우 예상하지 못했던 것이고 WO 2004/016281 (상기 백신접종 체제는 본 명세서에서 사용한 세개의 균주 중 어느 하나의 경우에도, 당국에 의해 설정된 기준을 만족시키지 않는다)에서 개시한 발견들과 매우 대조된다.

실시예 2. 인간 대상자에서 비로좀 -기초 인플루엔자 백신으로 투여량 상승 (및 근육내 vs . 피내 ) 연구

피내로 투여된 계절 비로좀 보조된 인플루엔자 백신의 체액성 면역 반응을 평가하기 위하여 인간 개체들을 사용하여 두번째 임상 실험을 수행하였다. 이것은 단일-기관, 무작위, 투여량 상승 연구에 관한 것이고, 여기서 2007/2008 플루 시즌을 위한 3가 Inflexal® V 인플루엔자 백신을 0.1 mL 부피로 피내 투여하고, 그리고 여기서 투여량은 각각의 균주 (A/Solomon Islands/3/2006 [HlNl]; A/Wisconsin/67/2005 [H3N2]; B/Malaysia/2506/2004)의 3, 4.5 또는 6 μg HA를 포함하였다. 근육내로 전달된 백신을 양성 대조 (0.5 mL 투여량으로 균주당 3 x 15 μg HA을 함유함)로 간주하였다. 게다가, NanoPass (본 명세서에서 일반적으로 MicronJet 장치로 언급되었다)에 의해 개발된 미세바늘 장치가 또한 항원을 피내로 전달하는데 사용될 수 있는지 여부와 유리한 결과가 얻어지는지 여부를 시험하였 다.

Micronjet 장치는 단 하나의 채널만을 갖고 매우 가변적인 주입 깊이 (백신을 투여하는 사람에 크게 의존한다)를 갖는 단일의 피하주사용 바늘에 비해, 일반적으로 다중 주입 "바늘" 또는 채널의 사용을 안정되고 결정된 주입 깊이를 갖도록 만든다. 일반적으로 MicronJet 장치는 약물 및 백신의 고통없는 피내 전달을 위해 고안된 바늘-대체물이다. 통상적인 바늘 대신에 기준 주사를 설치하면, MicronJet가 피내 전달을 조절하는 어느 물질을 사실상 주입하는데 사용될 수 있다. 그것은 약물, 단백질 및 백신의 피내 투여에 매우 적합하고 최소한의 수행자 전문지식을 요구한다. 상기 장치의 윗부분은 밀리미터 높이의 1/2 미만의 작은 바늘, 미세바늘, 또한 "MicroPyramids"의 어레이를 함유한다. 미세 바늘은 매우 짧기 때문에, 그것들은 통증 감각을 담당하는, 피부의 자유 신경 종말에 도달하지 않으므로, 무 통증 "바늘 찌름"이고, 대부분의 물질들은 통증 없이 완전히 투여될 수 있다. 미세 바늘은 육안으로 거의 보이지 않을 정도로 매우 작고, MicronJet 장치는 통상적인 바늘에 비해 덜 위협스러우므로, 어린이와 바늘-공포증 환자에 적합하다.

투여량 상승 연구에서 가장 적은 투여량을 갖는 라인에서, MicronJet 장치 연구 그룹은 또한 각각의 균주의 3.0 μg HA을 제공받았다. 전체 연구는 총 5개의 그룹을 포함한다. 56명의 개체들을 함유하는 각각의 그룹에서, 3개의 그룹은 단일 피하주사용 바늘을 사용하여 피내 투여를 제공받았고 (그룹 Al, A2, A3), 한 그룹은 근육내 주입 (그룹 B; 15 μg 투여량)을 제공받았고, 그리고 한 그룹은 미세바 늘 장치로 피내 주입을 제공받았다 (그룹 C; 3.0 μg 투여량). 그룹 Al은 각각의 균주로부터 3 μg HA를 제공받았고, 그룹 A2는 각각의 균주로부터 4.5 μg HA를 제공받았고, 그리고 그룹 A3는 각각의 균주로부터 6 μg HA를 제공받았다.

첫째날, 백신접종 전에, 백신접종-전 샘플을 채취하고, 면역화-후 22일 날에, 다른 샘플들을 각각의 개체로부터 얻었다. 표 1은 각각의 그룹에서 평균 연령, 연구 그룹당 사람의 성별, 및 다른 균주의 GMT 시험-전 적정농도를 나타내는 연구의 세부사항을 제공한다. 매개변수, GMT-배 증가, 혈청방어 및 혈청전환은 이전 실시예에서 측정한 바와 같다.

도 4는 모든 3개의 균주와 모든 그룹에 대한 면역화 (오른쪽 그래프) 이후의 22째 날의 샘플에 비해 면역화-전 샘플 (왼쪽 그래프)의 혈청방어율을 나타낸다. 그것은, 백신접종 이전에, 일반적으로 어느 그룹도 어느 균주에 대한 충분한 방어 적정농도를 함유하지 않았으나, 백신을 제공받은 이후에는, 각각의 그룹이 거의 모든 경우에 70% 임계값 이상이 되는 평균 혈청방어 수준에 도달한다는 것을 명백하게 나타낸다.

도 5에서, 피하주사용 바늘로 균주 당 3, 4.5 및 6 μg HA를 제공받은, 피내 그룹 Al, A2, 및 A3의 GMT 수준을 나타낸다. 그것은 GMT의 실질적인 증가가 존재한다는 것을 명백히 나타낸다. GMT-배 증가를 도 6 (오른쪽 그래프)에 나타내었는바, 증가 (점선)의 임계값 (>2.5-배)에 도달하였고, 또한 B-형 바이러스의 경우에도 마찬가지였다. 이 수준은 심지어 3 μg HA 항원의 가장 낮은 투여량으로 달성된 것이다. 도 6, 왼쪽과 중간 그래프는 또한 피하주사용 바늘을 통해 이러한 3개의 낮은 투여량을 제공받은 그룹의 혈청전환 및 혈청방어율을 나타낸다. B-균주의 3 μg HA 투여량를 제외하고, 모든 백신은 본 명세서에서 기술한 바와 같이 임계값 이상의 충분한 비율을 제공하였다 (40% 혈청전환율 및 70% 혈청방어율). 그러므로, 백신의 면역원성이 각각의 균주에서 확인되었다.

기본 15 μg HA 투여량 (그룹 B)의 근육내 투여를 또한 피하주사용 바늘을 통해 투여받은 3 μg HA 투여량 (그룹 Al)과 비교하였다. 도 7은 충분한 혈청전환률이 얻어졌다는 것을 나타내지만 (왼쪽 그래프), (가운데 그래프), 도 6 (가운데 그래프, 왼쪽 3개의 막대)에서 나타낸 것을 갖는 라인에서, A-균주에 대해서만 혈청방어가 얻어지고, 그리고 B 균주의 혈청 방어는 단지 70% 임계값 이하였다. GMT-배 증가 (오른쪽 그래프)는 각각 근육내 및 피내 경로를 거쳐 투여된 높고 낮은 투여량 모두에서 충분하였다.

균주 (그룹 B) 당 15 μg HA의 근육내 전달을 또한 NanoPass (MicrorJet) 장치 (그룹 C)로 투여된 균주 당 3 μg HA의 피내 전달과 비교하였다. 낮은 투여량으로부터의 혈청전환율은 근육내 높은 투여량 전달에 비해 허용가능한 수준 이상에 도달하었고, 또한 중요하게는, 혈청방어율 (B-형 바이러스의 것을 포함한다)은 임계값 수준에 도달하였다 (도 8, 왼쪽 및 가운데 그래프). 따라서, 단일의 피하주사용 바늘을 사용한 피내 전달에 비해, 다중 바늘 MicronJet 장치는 B-형 바이러스 유도 혈청방어율도 추가로 증가시킨다는 점에 특별히 공헌하였다. NanaoPass 전달 장치는 몇몇의 매우 작은 바늘 (또는 MicroPyramids)을 사용해야 하므로, 피부의 매우 작은 조각에서 다중의 주입 부위를 사용하는 것은 백신이 전달되는 영역을 넓 힌다는 결론을 얻었다. 이것은 백신접종 효과를 추가로 증가시킨다. 따라서, 피내 전달을 적용할 때 다중의 동시의 주입 부위를 갖는 것이 바람직하다. 이 맥락에서 동시에는 동시에, 백신 투여량이 단일 장치로, 바람직하기는 단일의 발사로, 다중의, 각각의 패널을 통해 숙주로 전달되는 것을 의미한다. 바람직하기는, 하나 이상의 채널 (작은 바늘, 미세 바늘 또는 MicroPyramid)가 상기의 단일 전달 장치에서 사용된다: 적어도 2, 3, 또는 4개의 채널을 사용하는 것이 바람직하고, 더 바람직하기는 4개 이상의 채널이 사용된다. 가장 바람직하기는, 장치는 백신 조성물을 흐르게 하고 막힘 없이 다중 채널 위로 분리시키고, 그리고 충분한 (임계값-도달) 효능: 즉, 허용가능한 혈청전환-, 혈청방어- 및 GMT-증가 수준을 갖는 백신접종을 초래하는 백신 조성물을 전달하는데 사용되는 다수의 채널에 사용된다.

도 8, 오른쪽 그래프는 통상적인 바늘을 사용하는 근육내 전달과 NanoPass 장치를 사용하는 피내 전달 사이에, 백신접종-전 적정농도를 백신접종-후 적정농도와 비교할 때, GMT의 증가를 나타낸다. 엄격하게, HA 항원의 5x 낮은 투여량이 피내 경로를 통해 투여될 때, 높은 GMT 적정농도 증가가 근육내 경로 및 높은 투여량에 비해 3개의 균주에서 검출된다. 따라서, 비로좀-기초 인플루엔자 백신이 피내 전달 경로와 결합될 때, 바람직하기는 본 명세서에서 개시한 바와 같이 NanoPass 장치를 사용하는 것에 의해, 적어도 5x 낮은 투여량 ([균주당] 15 μg HA 투여량 내지 [균주당] 3 μg HA 투여량의 경우)이 사용될 수 있는 A- 및 B-형 인플루엔자 균주에서 허용가능하고 충분한 GMT 적정 농도가 얻어진다는 결론이 나온다. 이것은 비로좀 기초 인플루엔자 백신이 피내 전달 장치, 바람직하기는 NanoPass에 의해 개 발된 것과 같은 다중채널 장치와 조합된, 본 발명에 따른 키트를 사용하는 것에 의해, 극적인 투여량 부족이 해결되어 전 세계 인구를 위한, 특히 대유행병을 위협받는 경우에 엄청 많은 양의 이용가능한 투여량을 제공할 수 있다는 것을 의미한다.

도 9는 피하주사용 바늘 (각 그래프에서 왼쪽의 3개의 막대)을 사용한 피내 전달과 Micronjet 장치 (각 그래프에서 오른쪽 3개 막대)를 비교한 결과를 나타내는바: 주입 부위의 퍼짐 (동시에 다중 채널을 사용하는 것에 의한)은 GMT 적정농도의 높은 증가를 초래한다. 각각의 왼쪽 막대는 A/Solomon Islands 균주를 나타내고, 가운데 막대는 A/Wisconsin 균주를 나타내고 그리고 오른쪽 막대는 B/Malaysia 균주를 나타낸다. 단일 피하주사용 바늘로 투여되거나 MicronJet 장치로 투여된 균주 당 3 μg HA의 낮은 투여량을 비교할 때, 단일 바늘을 사용하는 경우 70% 임계값 이하로 남아있는 B-형 바이러스의 헐청방어율은 비로좀-기초 인플루엔자 백신이 MicronJet NanoPass 장치로 다중 바늘을 통해 투여할 때의 70& 이상의 수준에 도달한다는 결론이 나온다. 이것은 명백하게 유익한 면역원성 효과 및 단일 발사로 다중 주입 부위의 첨가 수준을 나타낸다.

HAI 적정농도의 투여 및 통계적 분석 이후에, B/Malaysia 바이러스와 관련된 3.0 μg 투여량 그룹 (단일 피하주사용 바늘로 피내 및 Micronjet 장치로 피내) 간의 차이점은 Micronjet 그룹이 이 B-형 바이러스와 관련하여 통계적으로 상당히 높은 HAI 적정농도 (p=0.001)를 가진다는 점에서 중요한 것처럼 보인다. 동일한 분석으로부터, A/Wisconsin 균주와 관련하여 15 μg 투여량 그룹 (근육내)과 3.0 μg Micronjet 그룹의 차이점은 또한 Micronjet 장치를 통해 백신을 제공받은 그룹이 근육내 전달을 통하여 5-배 높은 투여량을 제공받은 그룹보다 통계적으로 상당히 높은 HAI 적정농도 (p=0.008)를 가진다는 점에서 상당히 다른것 처럼 보인다.

대체로, 인플루엔자 백신의 피내 전달은 충분한 혈청방어- 및 혈청전환율을 초래한다는 결론이 나온다. 더욱이, 상기 비율은 매우 낮은 투여량 (각 균주의 3, 4.5 및 6 μg HA)이 인플루엔자 백신 캠패인 및 상황 (각 균주의 15 μg HA)에서 일반적으로 사용되는 것과 달리 투여될 때도 달성될 수 있다는 결론을 낼 수 있다. 또한, "실제" 피내 전달 (진피 이하로 가는 것 제외)을 달성하기 위한 일정하고 기준 주입-깊이를 가지는 다중-채널 전달 장치 및/또는 적어도 장치를 사용하는 것이 바람직하다는 결론이 나온다. 예를 들면, 3.0 μg HA 투여량이 4.5 μg 또는 a 6.0 μg 투여량보다 덜 수행되도록 증가와 관련된 투여량이 이 연구에서 검출되지 않기 때문에, 피내 전달이 본 명세서에서 기술한 바와 같이, Inflexal® 백신와 같은 비로좀-기초 인플루엔자 백신으로 사용되면, 투여량은 더욱 낮아질 수 있을 것이다. 바꾸어 말하면, 각각의 균주의 3.0 μg HA를 사용할 때, 적어도 피내로 투여하면 안정한 수준은 이미 달성된다는 결론이 나올 수 있다. 균주당 3.0 μg HA 보다 낮은 투여량이 사용될 수 있는지 여부는 조사되어야 한다.

표 1. Inflexal® 인플루엔자 백신의 피내 전달을 사용하는 2번째 단계 II 임상 연구의 기초 특성

참고문헌

Claims

인간 대상자 (subject)의 피내 (intradermal) 인플루엔자 백신으로 사용하기 위한, 인플루엔자 헤마글루티닌 (HA) 항원을 포함하는 비로좀 제제.
제1항에 있어서, 2 이상의 인플루엔자 바이러스 균주로부터의 HA 항원를 포함하는 것인 제제.
제1항 또는 제2항에 있어서, 각각의 인플루엔자 균주로부터의 HA 항원 농도는 인플루엔자 균주 당 1 내지 10 μg, 바람직하기는 인플루엔자 균주 당 약 3.0 μg인 것인 제제.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제제는 인플루엔자 균주 A/New Caledonia/20/99, A/Moscow/10/99 및 B/Hong Kong/330/2001로부터의 HA 항원의 3가 조합을 함유하지 않는 것인 제제.
인간 대상자의 피내 투여를 위한 인플루엔자 백신의 제조에서 인플루엔자 HA 항원을 포함하는 비로좀 제제의 사용.
제5항에 있어서, 상기 제제는 2 이상의 인플루엔자 바이러스 균주로부터의 HA 항원을 포함하는 것인 사용.
제5항 또는 제6항에 있어서, 각각의 인플루엔자 균주로부터의 HA 항원 농도는 인플루엔자 균주 당 1 내지 10 μg, 바람직하기는 인플루엔자 균주 당 약 3.0 μg인 것인 사용.
제5항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 백신은 약 0.1 mL의 단일 투여량 부피로 제조되는 것인 사용.
a) 인플루엔자에 대한 인간 대상자의 백신접종을 위한 인플루엔자 헤마글루티닌 (HA) 항원을 포함하는 비로좀 제제 (여기서 상기 제제는 부가적인 보조제를 함유하지 않고 그리고 상기 제제는 인플루엔자 바이러스 이외의 바이러스로부터 항원을 함유하지 않는다); 및

b) 백신의 피내 전달에 적합한 전달 장치를 포함하는 것인 키트.
제9항에 있어서, 상기 전달 장치는 미세바늘 또는 마이크로피라미드 (MicroPyramids)와 같이 2 이상의 분리된 전달 채널을 함유하고, 바람직하기는 상기 전달 장치는 4 이상의 분리된 전달 채널을 함유하는 것인 키트.
제9항 또는 제10항에 있어서, 상기 비로좀 제제는 2 이상의 인플루엔자 바이 러스 균주로부터의 HA 항원을 포함하는 것인 키트.
제9항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 각각의 인플루엔자 균주로부터의 HA 항원 농도는 인플루엔자 균주 당 1 내지 10 μg, 바람직하기는 인플루엔자 균주 당 약 3.0 μg인 것인 키트.
제9항 내지 제12항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제제는 인플루엔자 균주 A/New Caledonia/20/99, A/Moscow/10/99 및 B/Hong Kong/330/2001로부터의 HA 항원의 3가 조합을 함유하지 않는 것인 키트.
인플루엔자 감염에 대한 인간 대상자의 백신접종 방법으로, 상기 방법은 부가적인 보조제가 없는 인플루엔자 헤마글루티닌 (HA)을 포함하는 비로좀 제제를 인간 대상자에게 피내로 투여하는 것을 포함하는 것인 방법.
제14항에 있어서, 상기 비로좀 제제는 2 이상의 인플루엔자 바이러스 균주로부터의 HA 항원을 포함하는 것인 방법.
제14항 또는 제15항에 있어서, 상기 백신은 각각의 인플루엔자 균주로부터 1 내지 10 μg HA, 바람직하기는 각각의 인플루엔자 균주로부터의 약 3.0 μg HA 항원을 포함하는 것인 방법.
제14항 내지 제16항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 투여는 백신의 피내 전달에 적합한 전달 장치를 사용하는 것에 의해 수행되고, 여기서 상기 전달 장치는 미세바늘 또는 마이크로피라미드 (MicroPyramids)와 같은 2 이상의 분리된 전달 채널, 예를 들면 4 이상의 분리된 전달 채널을 함유하는 것인 방법.
인플루엔자 감염에 대한 포유류 대상자의 백신접종 방법으로, 상기 방법은:

부가적인 보조제 없이 3개의 인플루엔자 균주로부터 HA 항원을 포함하는 3가 비로좀-기초 인플루엔자 백신을 제조하는 단계; 및

상기 백신을 피내로 투여하는 단계를 포함하는 것인 방법.