KR20090107545A

KR20090107545A - 알레르기 민감성의 예방

Info

Publication number: KR20090107545A
Application number: KR1020097017431A
Authority: KR
Inventors: 한나 비스카리; 미카엘 크닙; 타피오 세이스카리; 헤이키 하이오티; 라우라 쿰모라; 아니타 콘드라쇼바
Original assignee: 백테크 오이
Priority date: 2007-02-01
Filing date: 2008-01-31
Publication date: 2009-10-13
Also published as: EP2114448A1; US8182805B2; FI20075063A0; EP2114448A4; AU2008211810A1; RU2009132487A; NZ578362A; ZA200905104B; US20100034848A1; JP2010517982A; RU2429881C2; CA2676624A1; CN101646454A; AU2008211810B2; BRPI0807059A2; EP2114448B1; WO2008092996A1

Abstract

본 발명은 바이러스성 게놈 속에 통합되어 알레르기 민감성을 유도하는 알레르겐을 인코딩(encode)하는 외인성 핵산 시퀀스(exogenous nucleic acid sequence)를 포함하지 않는 것을 특징으로 하는 장내 바이러스 백신을 처리함으로써, 상기 알레르기 민감성 및 그것과 관련된 질환의 예방 및 치료에 관한 것이다.

알레르기 민감성, 제약 합성물, 외인성 핵산 시퀀스, 장내 바이러스

Description

알레르기 민감성의 예방{PREVENTION OF ALLERGIC SENSITIZATION}

본 발명은 특히 IgE와 매개된 민감성 반응 및 그것의 임상학적 질병으로의 진행과 같은 알레르기 민감성 위험의 감소에 관한 것으로서, 그에 의하여 천식, 습진, 알레르기성 비염 및 결막염과 같은 알레르기성 질환이 예방되거나 치료될 수 있도록 하는것에 관한 것이다. 보다 상세하게는, 본 발명은 알레르기 민감성과 관련된 질환을 예방하거나 또는 치료하기 위한 제약 합성물(pharmaceutical composition)의 제조에 있어서 특정 바이러스의 용도에 관한 것이다.

알레르기성 질환의 유행은 최근 10년 동안 선진국에서 지속적으로 증가했다. 신생아의 면역 시스템은 미숙하고, 첫째 달 및 유년기(years of childhood) 동안 발달한다. 건강한 아이들은 그들의 환경에 존재하는 병원체(pathogens)에 대항하는 면역 반응을 발달시키고, 그에 따라 증가한 아이들의 비율은 환경에 존재하는 유해하지 않은 요소에 대하여 알레르기 반응을 발달시켜서 알레르기성 질환을 초래한다.

알레르기성 질환의 발달을 예방하기 위한 여러 가지 시도들이 행해졌다. 오랫동안 독점적 모유수유, 및 초기 유년기 동안 고양이와 개와 같은 알레르기 반응 가능한 소스(sources)와의 접촉을 차단하는 것이 알레르기성 질환의 위험을 감소하 는 수단으로 여겨졌다. 그러나, 그 결과는 설득력이 높지 않다.

알레르기성 질환의 원인에 대한 보다 최근의 가설은 "위생 가설(hygiene hypothesis)이다. 상기 가설은 알레르기성 질환의 유행이 위생 수준이 낮은 나라보다 삶의 질과 위생 수순이 높은 부유한 나라에서 더 많이 발생한다는 사실에 기초한다. 또한, 형제들의 수와 알레르기성 질환 사이의 역학 관계(inverse association)는 질병학적 조사에 기록되어 있다(참고문헌 1, 2). 농장에서 성장하는 것은 알레르기성 비염 및 민감성 반응의 낮은 유행과 관련이 있는 것으로 보인다(참고문헌 3, 4, 5). 농장에 살지는 않지만 규칙적으로 가축들과 접촉하는 아이들 역시 알레르기 민감성 반응의 낮은 유행을 보였다(참고문헌 4). 이러한 관련 사항의 근원적인 이유는 대부분 알려져 있지 않다. 그러나, 상기 "위생 가설"은 유년기 시절에 다양한 병원균(microbes)에 노출되는 것이 면역 시스템의 성숙을 촉진함으로써 알레르기성 질환을 방어할 수 있다고 제안 가능한 설명을 제공한다(참고문헌 2, 6). 알러지를 막기 위한 가능한 시도는 특히 내성 생성 면역 반응(tolerogenic immune response)을 촉진하는 것으로 나타난 유산균(lactic acid bacteria)과 같은 생균 박테리아(probiotic bacteria)를 투여하는 것이다.

여러 연구들이 천식 및 알러지의 발병에 있어서 Th2-극성 CD4+ T 세포의 역할을 시사했다(참고문헌 7, 9). 그러나 알레르기 민감성을 조절하는 정확한 면역학적 메커니즘은 알려져 있지 않았다. Th1-편향된 면역 반응은 Th2 세포의 효과를 저하시키며(down-regulate)(참고문헌 7), 또는 조절 T 세포는 두 Th1 및 Th2 세포의 기능뿐만 아니라 Th1/Th2 균형을 조절한다(참고문헌 8, 9). 비록 몇몇 논문들은 모 순적이지만, A형 간염 바이러스(HAV)(참고문헌 10 - 13), 톡소플라즈마 곤디이(toxoplasma gondii)(참고문헌 12, 13), 헬리코박터 필로리(helicobacter pylori)(참고문헌 12 - 14), 및 박테리아의 구성 성분(bacterial components)(참고문헌 15 - 17)과 같은 몇몇 감염(infections)들이 알레르기성 질환 위험의 감소와 관련되어 있다는 역학적 지지 자료가 있으며, 그것이 미생물의 제공이 유년기 시절 알러지의 발달을 보호해 주는 중요한 환경적인 요소라는 가설을 지지해 준다(참고문헌 18). 게다가, 5살 이전의 위장 감염(gastrointestinal infections)의 수와 UK(참고문헌 19)에서의 아토피(atopy)의 위험 사이에서의 독립적인 역학관계가 관찰되었다. 또한, 초기에 제6형 사람 헤르페스 바이러스(human herpes virus type 6: HHV-6)에 감염된 아이들은 유년기 시절 IgE 민감성 질환, 아토피성 질환 및 알러지의 발달을 보호할 수 있다고 보고되었다 (WO2006/031195).

그러나, 모든 세균 감염이 아토피성 질환의 유행에 대하여 보호적 효과를 가지는 것은 아니다. 예컨데, 클로스트리듐 디피실리(Clostridium difficile), 캄필로박터 제주니(Campylobacter jejuni: 빈창자캄필로박터), 예르시니아 엔테로콜리티카(Yersinia enterocolitica)와 같은 장에 기생하는 박테리아 병원균에 대한 혈청 양성 반응은 덴마크 성인(Danish adults) 사이에서(참고문헌 13) 아토피의 높은 유행과 관련되어 있는 것으로 나타났다. 최근에, 벤(Benn et al.)등은 생후 첫 6개월 동안의 전염성 질환(대부분 상기도 감염: upper respiratory infections)이 아토피의 위험을 증가시킨다(참고문헌 20)고 발표하였다. 그리고 바게르(Bager) 및 그의 동료들은 생후 1년 전에 공기 중의 바이러스(홍역: measles, 풍진: rubella, 이하선염: mumps 및 수두: varicella)에 의해 야기된 감염의 횟수가 증가함에 따라 아토피의 위험이 증가함을 관찰하였다(참고문헌 21).

알레르기 민감성의 위험을 감소하기 위한 효과적인 방법이 분명히 필요하며, 그에 따라, 관련된 질환을 예방하거나 치료할 수 있다. 특히, 천식, 습진, 알레르기성 비염, 결막염 및 식품에서 유도된 알러지와 같은 알레르기성 질환의 발달을 예방할 필요가 있다. 본 발명은 이러한 필요를 충족시킨다.

본 발명은 알레르기 민감성과 관련된 질환을 예방하거나 치료할 목적으로 장내 바이러스(enterovirus)의 용도에 근거한다. 특히, 본 발명은 알레르기 민감성과 관련된 질환을 예방하거나 치료하기 위한 제약 합성물의 제조에 있어서 장내 바이러스의 용도를 제공하며, 상기 장내 바이러스는 바이러스성 게놈(viral genome) 속에 통합되어(integrated) 상기 알레르기 민감성을 유도하는 알레르겐(allergen)을 인코딩(encode)하는 외인성의 핵산 시퀀스(exogenous nucleic acid aequence)를 포함하지 않는다. 알레르기 민감성과 관련된 질환을 예방하거나 치료하는 방법에 있어서, 장내 바이러스를 포함하는 제약 합성물의 효과적인 양이 그것이 필요한 사람에게 투여되고 또한 개시되며, 그리고 상기 장내 바이러스는 바이러스성 게놈 속에 통합되어 상기 알레르기 민감성을 유도하는 알레르겐을 인코딩하는 외인성의 핵산 시퀀스를 포함하지 않는다.

특히, 본 발명의 함축적인 의미는 종속항에 개시되어 있다. 본 발명의 다른 목적, 세부사항 및 장점은 다음의 상세한 설명에 의해 보다 분명해 질 것이다.

도 1은 러시아의 카렐리아 아이들에 있어서 다른 장내 바이러스 혈청형(항원형)에 대한 혈청 양성 반응에 따른 알레르겐-특이성(allergen-specific) IgE의 유행(보급)을 나타낸다.

도 2는 전염성 장내 바이러스(CBV4), 열처리되고 정제된 장내 바이러스(CBV4), 다른 TLR 작용제[폴리(I:C), LPS, 레시퀴모드: Resiquimod] 및 다클론 T-세포 자극제(항-CD3+항-CD28)와 함께 촉진된 말초 혈액(peripheral blood) 단핵세포 배양에 있어서 FoxP3 mRNA의 유도를 나타낸다. 세포들은 24 시간의 인큐베이션 후에 수집된다. 결과는 미디엄이 처리된 세포와 비교되는 FoxP3 mRNA의 상대적인 형질발현으로써 나타난다(EV= 장내 바이러스).

도 3은 전염성 장내 바이러스(CBV4), 열처리되고 정제된 장내 바이러스(CBV4), 다른 TLR 작용제[폴리(I:C), LPS, 레시퀴모드] 및 다클론 T-세포 자극제(항-CD3+항-CD28)와 함께 촉진된 말초 혈액 단핵세포 배양에 있어서 IL-10 mRNA의 유도를 나타낸다. 세포들은 24 시간의 인큐베이션 후에 수집된다. 결과는 미디엄이 처리된 세포와 비교되는 IL-10 mRNA의 상대적인 형질발현으로써 나타난다(EV= 장내 바이러스).

본 발명은 알레르기 민감성 및 그와 관련된 질환들이 면역활성 성분(immunoactive ingredient)으로써 장내 바이러스를 포함하는 구성을 가진 백신을 접종함으로써 예방될 수 있다는 발견에 기초한다. 비록 알러지에 대한 효과가 증명 된 예는 없지만, 바이러스성 게놈 속에 통합되어 알레르겐 및 인공적인 단백질분해 분할 사이트(proteolytic cleavage site)의 에피토프(epitope: 항원결정인자)를 인코딩하는 외인성 핵산 시퀀스를 포함하는 재조합형 바이러스(Recombinant viruses)가 앞서 알러지에 대한 백신으로써 제안되었다. 상기 시도는 본원 발명과 완전히 다르다. 그 이유인 즉, 상기 바이러스는 상기 항원에 대한 희망 면역 반응을 유도할 것으로 기대되는, 바이러스성 게놈에 통합되어 항원을 코딩(coding)하는 외인성 핵산에 대한 수동적인 "전달자" 또는 "배달자(delivery vehicle)"의 역할을 한다. 반면에 본 발명은 장내 바이러스 자체에 의해 유도되는 면역조절자적 효과(immunoregulatory effect)에 근거한다. 그러므로, 본 발명의 장내 바이러스는 활성 구성성분이며 그것은 예방되거나 치료될 알레르기 민감성을 유도하는 알레르겐을 인코딩하는 합성된 외인성 핵산 시퀀스를 포함하지 않는다. 그러나, 본 발명에 사용된 장내 바이러스는 바이러스성 게놈에 통합되지 않은 코딩되거나 코딩되지 않은(coding or non-coding) 외인성 핵산뿐만 아니라 바이러스성 게놈에 통합된 코딩되지 않은 외인성 핵산 시퀀스를 포함할 수 있다. 또한, 본 발명에 사용된 장내 바이러스는 외인성 단백질을 포함할 수 있다. 본 발명의 일 실시예에서, 상기 장내 바이러스는 외인성 단백질을 인코딩하는 외인성 핵산을 포함하지 않으며, 특히 그것은 외인성 단백질을 인코딩하는 합성된 외인성 핵산을 포함하지 않는다.

여기서 사용된 "알레르겐"은 알레르기성 면역반응을 유도할 수 있는 합성물이며, 그것은 전체 단백질일 수 있으며, 또는 그것의 에피토프와 같이 단지 면역활성 부위(fragment)일 수 있다. 핵산은 이와 관련된 알레르겐에서 명확하게 고려되 지 않는다.

장내 바이러스의 그룹은 100개 이상의 다른 혈청형(serotype)을 포함한다. 장내 바이러스 감염은 대부분 잠재적(subclinical)이지만, 그들은 다양한 종류의 질환을 야기할 수 있다. 나열된 장내 바이러스뿐만 아니라 폴리오바이러스(polioviruses), 콕삭키 B군(coxsackie B-), 콕삭키 A군(coxsackie A-), 및 에코바이러스(echovirus)들은 다양한 질환의 발달에 관련되어 있는 것으로 알려진 장내 바이러스들이다. 장내 바이러스 감염은 배변-구강 루트(fecal-oral route)를 통해 확산되며, 점막 및 장-연관 면역 시스템(mucosal and gut-associated immune system)을 통해 숙주(host)를 감염시킨다. 상기 장내 바이러스들은 면역 시스템의 잠재적 활성제(activator)이며, 면역 시스템의 강한 변화를 야기한다.

여기에서 사용되는 "장내 바이러스"는 장내 바이러스의 구성 성분 또는 그들의 조합뿐만 아니라 전체 장내 바이러스를 모두 포함한다. 상기 장내 바이러스들은 약화되거나 약화되지 않고 살아있는 장내 바이러스 계통일 수 있으며, 유전자 조작된 계통일 수 있고, 또는 서브유니트나 펩티드와 같은 장내 바이러스 계통에서 파생된 성분일 수 있으며, 바이러스 입자와 같은 구조 단백질 성분 또는 그들의 재조합일 수 있으며, 면역활성 바이러스성 단백질(immunologically active viral protein)을 인코딩하는 RNA 또는 cDNA와 같은 게놈 또는 게놈 조각(fragment)일 수 있다. 또한, 상기 장내 바이러스들은 죽어있는 즉, 비활성화된 장내 바이러스 계통일 수 있다.

특히, 본 발명 및 알레르기 민감성의 치료에 사용되는 장내 바이러스들은 면 역조절 경로(immunoregulatory pathway)를 유도하거나 Th2-형 면역 반응을 저하시키는(down-regulate) 그들의 능력에 의해 확인될 수 있다. 그러한 장내 바이러스들은 조절 T 세포 및/또는 Th1/Th2 균형 및/또는 다른 장내 바이러스에 의한 말초 혈액 백혈구(peripheral blood leukocytes)의 생체 외적(in vitro) 자극 또는 장내 바이러스에 감염된 아이들의 생체 내(in vivo)에 있는 IL-10과 같은 면역조절 사이토카인(cytokines)의 생산에 대한 그들의 효과를 분석함으로써 확인될 수 있다. 전형적으로 그러한 장내 바이러스들은 IL-10 또는 다른 면역조절 사이토카인을 생산하는 PoxP3-양성(positive) 조절 T 세포 또는 조절 T 세포를 활성화 시킨다. 또한, 그러한 장내 바이러스들은 예컨데, IL-4 또는 다른 Th2-형 사이토카인의 생산 감소 및/또는 Th1-형 세포 활성의 평행한 증가 및 인터페론-감마(interferon-gamma) 또는 다른 Th1-형 사이토카인의 생산 증가에 의해 반영된 Th2-형 세포의 활성을 감소시킨다. 특히, 본 발명에서 사용되는 장내 바이러스들은 역학 조사에서 그들의 보호적 효과에 의해 확인될 수 있다. 전형적으로, 그러한 장내 바이러스들은 알레르기 민감성이나 알레르기성 증상이 발달한 대상에 비하여 알레르기 민감성이나 알레르기성 증상이 발달하지 않은 개체들에게 더 자주 있어야 한다. 이러한 바이러스들은 혈액으로부터 혈청형 특이성 항원을 측정함으로써, 또는 이러한 종류의 역학 조사에서 검출된 바이러스의 항원 또는 유전적 특성을 분석함으로써 확인될 수 있다.

약화된 바이러스들은 병독성이 감소된 바이러스들이다. 이것은 세포 배양에 있어서 바이러스의 연속계대(serial passage)를 포함하여, 화학처리에 의한 항원 변형, 재조합 또는 키메릭 바이러스의 구조(construction), 바이러스성 게놈(viral genome)의 돌연변이, 특정 유전자 부위의 결손 및 삽입, 및 온도 민감성 돌연변이 또는 방사성 조사와 같은 여러가지 방법에 의해 수행될 수 있다. 대안으로, 장내 바이러스들은 천연 바이러스 분리(natural virus isolates) 또는 임상학적 질환을 야기하는 능력이 약화된 감염성 바이러스 cDNA 또는 RNA에 의해 약화될 수 있다.

살아있는 약화되거나 약화되지 않은 장내 바이러스들은 전통적으로 구강으로 투여된다. 각각의 면역량(immunizing dose)은, 감염을 일으키거나 선천성 또는 적응성 면역 시스템을 야기하고 또는 인간의 조절 T-세포 혹은 조절 사이토카인을 유도할 수 있는, 적정농도(in a titer: 역가)에 있는 감염성 바이러스 또는 감염성 RNA 또는 cDNA를 포함한다. 상기 양(dose)은 폴리오바이러스 1형에 대해서는 최소 10^5.5 - 10⁶ TCID₅₀, 폴리오바이러스 2형에 대해서는 10⁵TCID₅₀ 및 폴리오바이러스의 살아있는 약화된 사빈계통인 폴리오바이러스 3형에 대해서는 최소 10^5.5 - 10^5.8 TCID₅₀을 포함하는 전통적인 사빈-형 살아있는 경구용 폴리오바이러스 백신에 사용되는 양과 상응할 것이다. 안전하고 감염가능하며 또는 선천적이거나 적응적인 면역 시스템을 활성화 할 수 있는 것으로 확인된다면, 상기 양은 달라질 수 있다. (TCID= 조직배양 감염량: tissue culture infectious dose; TCID₅₀= 배양액의 50%를 감염시키는 양)

대안으로, 상기 장내 바이러스는 전체 바이러스들, 비활성화된 감염력(infectivity), 또는 바이러스의 특정 항원 구조, 단백질, 펩티드, 또는 그들의 조합(바이러스 입자와 같은)을 포함하는 서브유니트 백신, 또는 전체 바이러스, 각각의 바이러스성 단백질 또는 바이러스의 비활성화된 형태를 인코딩하는 바이러스성 RNA 또는 cDNA의 조각(fragments)을 포함할 수 있다. 비활성화된 백신은 세포배양과정에서 바이러스를 증식시키고, 슈크로스(sucrose) 또는 다른 높은-밀도의 미디어에의해 형성된 밀도구배에서 높은-속도의 원심분리에 의해 감염된 세포와 배양 미디어(media: 배지)로부터 정제함으로써 생산될 수 있다. 대안으로, 상기 바이러스는 크로마토그래피(chromatography)에 의해 정제될 수 있다. 상기 정제된 바이러스들의 감염력은 화학적 처리[예컨데, IPV를 생산하는데 사용되는 것과 같은 포르말린(formalin) 비활성화], 방사선조사(irradiation) 또는 열처리에 의해 바이러스를 비활성화시킴으로써 파괴된다. 서브유니트 백신들은 정제된 바이러스성 단백질 또는 재조합형 바이러스성 단백질, 바이러스성 항원 에피토프, 바이러스 입자에 상응하는 합성 펩티드 또는 감염된 동안 생성되지만 바이러스성 게놈이 없는 빈 바이러스 캡시드(empty viral capsids)로 구성될 수 있다. 상기 서브유니트 백신들은 합텐(haptens) 또는 캐리어(carriers)에 접합되어 투여될 수 있다(예컨데, 면역자극 복합체 입자: ISCOM particles, 카이토산: chitosan, TLR 작용제, 생물분해성 미세입자: biodegradable microparticles).

상기 언급된 장내 바이러스들은 주입(injection)에 의해 비경구적으로 주어질 수 있고, 흡입법(inhalation) 또는 경직장(per rectum)적으로는 경구(perorally), 피내(intradermally), 경피(transcutaneously), 혀 밑(sublingually), 및 코 안(intranasally)으로 주어질 수 있다. 각각의 면역량은 인간에게 적절한 면역반응을 유도할 수 있는 적정 농도(in a titer)의 바이러스성 구조(structure)를 포함한다. 이 양은 각각의 양에 대해 1.8 - 2㎍의 바이러스성 단백질, 및 폴리오바이러스 1형의 20 - 40 항원 D-유니트, 폴리오바이러스 2형의 4 - 8 항원 D-유니트, 및 폴리오바이러스 3형의 16 - 32 항원 D-유니트를 포함하는 소크-형(Salk-type) 비활성 폴리오바이러스 백신에 사용되는 양과 상응할 것이다. 안전하고 면역성을 띠며(immunogenic) 또는 선천적이거나 적응적인 면역 시스템을 자극할 수 있으며, 또는 조절 T-세포나 조절 사이토카인을 유도할 수 있는 것으로 확인된다면, 상기 양은 달라질 수 있다. 장내 바이러스들은 동시에 또는 연속적으로 주어진 하나 또는 하나 이상의 장내 바이러스 혈청형을 포함하는 여러 재조합형으로 주어질 수 있다. 만약 여러 장내 바이러스들이 동시에 주어진다면, 제약 합성물(pharmaceutical composition)은 여러 장내 바이러스들의 혼합의 형태일 수 있다. 또한, 상기 장내 바이러스는, 예컨데 알레르겐에 대한 내성생성 반응(tolerogenic response)을 촉진하기 위한 전체 알레르겐 또는 그것의 면역활성 서브유니트와 같은, 적어도 하나의 알레르겐의 조합으로 주어질 수 있다. 본 발명의 일 실시예에 따르면, 상기 백신은 하나의 면역활성 성분(ingredient)으로써 장내 바이러스를 포함하며, 본 발명의 또 다른 실시예에 따르면, 상기 백신은 장내 바이러스의 혼합물(mixture) 및 하나 또는 하나 이상의 외인성 알레르겐을 포함한다.

상기 장내 바이러스는 제약 합성물로 조성되며, 면역 자극을 유도하는 활성 성분에 더하여, 상기 제약 합성물은 제약적으로 수용가능한 첨가제(excipient), 캐 리어(carrier), 합텐(hapten) 및 보조약(adjuvant)을 포함할 수 있다. 첨가제, 캐리어, 합텐 및 보조약들은 예컨데, 페녹시에탄올(phenoxyethanol), 염화마그네슘(magnesium chloride), (sucrose), 티오머살(thiomersal), 포름알데히드(formaldehyde), 페놀(phenol), 항생제[antibiotics (preservatives)] 또는 알루미늄 염(aluminium salts), 중합체 미세입자(polymer microparticles), 면역자극 복합체 입자(ISCOM particles), 캐리어 단백질[carrier proteins: 예컨데, 콜레라 독소(cholera toxin)], 리포솜(liposomes), 단백질 마이셀(protein micelles: 합텐/보조약), 또는 TLR 작용제(TLR agonists)를 포함할 수 있다.

상기 제약 합성물의 성분은 알레르기 민감성을 예방하기 위해 생후에 주어지는 예방주사(booster)로써, 바람직하게는 생후 5살 내에 있는 아이에게 투여되며, 보다 바람직하게는 3살 내의 아이에게 투여되며, 특히 바람직하게는 2살 내의 아이에게 투여되며, 가장 바람직하게는 생후 1살 내의 아이에게 투여된다. 이미 항원에 민감한 사람들은 질환의 징후에 상관없이 어떤 연령에서도 상기 제약 합성물의 성분이 투여될 수 있다.

상기 제약 합성물의 "효과적인 양"이란 중화항체(neutralizing antibody) 또는 세포매개반응(cell mediated response) 또는 그 둘을 유도함으로써, 면역반응을 유도하고 바이러스에 대한 수용체(recipient)를 보호할 수 있는 적응성 또는 선천성 면역반응을 유도할 수 있는 양을 의미한다. 또한, 비록 바이러스에 대한 보호적인 면역반응이 유도되지 않는다 하더라도, 상기의 효과적인 양이란 조절 사이토카인의 생산(IL-10과 같은) 또는 활성 조절 T 세포(Treg)를 유도할 수 있거나 Th1/Th2 세포 균형(cell balance)에 있어서 유리한 변화(shift)를 유도할 수 있는 양이 될 수도 있다. 상기 조절 사이토카인 또는 세포 또는 Th1/Th2 균형의 변화 유도는 바이러스-특이성 또는 알레르겐-특이성 면역반응 또는 그 둘에 의해 발생될 수 있다. 또한, 그것은 다른 항원 또는 알레르겐 특이성으로 가지 각색의 면역반응에 영향을 주는 면역시스템에 대한 보다 일반화된 효과일 수 있다. 그러한 일반화된 효과는 전형적으로 IL-10과 같은 가용성 면역조절 사이토카인에 의해 매개된다.

상기 면역시스템은 병원체를 포함하는 환경에 있는 외부 성분(foreign components)에 노출되었을 때, 면역반응이 유도되며, 그것은 Th1-형 또는 Th2-형 반응에 의해 조절될 수 있다. 상기 두 반응들은 Th2 세포가 알러지를 촉진하는 동안 감염과 싸운다. Th1/Th2 세포 사이의 적절한 균형이 적절한 반응을 위해 필수적이다. 그러나, 알러지 질환에 민감한 대상에 있어서, 상기 Th2-형 반응이 우세하다. 게다가, 이러한 개인들은 조절 T-세포 및 다른 면역 조절 구성성분의 비정상적 기능을 가질 수 있다.

"알레르기 민감성"은 대부분 해롭지 않은 다양한 환경의 항원에 대해서 알레르겐-특이성 IgE의 생산을 유도하는 Th2 우성 면역 반응을 유도하는 것으로 나타난다. 알레르겐-특이성 IgE는 차례로 알러지 질환의 증상을 유발하는 과민성 반응(hypersensitivity reactions)을 매개한다. 이러한 종류의 면역 반응은 예컨데 혈액 샘플에서 알레르겐 특이성 IgE를 분석함으로써 측정될 수 있다. 알레르겐-특이성 IgE의 높은 수준은 특정 알레르겐에 대한 알레르기 민감성을 반영한다. 또한, 전체 IgE 면역글로불린(Immunoglobulin)의 높은 수준은 알레르기 민감성을 나타낼 수 있다. 또한, 피부 바늘통각검사(skin prick testing)가 알러지 질환을 진단하는데 사용된다. 장내 바이러스를 포함하는 제약 합성물은 알레르기 민감성과 관련된 특정 질환을 예방하거나 치료할 수 있는 백신이다.

IgE 매개 알레르기 민감성은 알레르기성 습진, 알레르기성 천식, IgE 매개 음식 또는 약물 알러지, 알레르기성 결막염 또는 비염과 같은 다양한 종류의 알러지 질환을 유도할 수 있다. 상기 장내 바이러스 백신은 IgE 매개 민감성의 위험을 감소할 수 있으며, 그에 따라 알레르기성 비염 및 천식과 같은 IgE 민감성에 의해 유발되는 질환을 예방할 수 있다.

상기 장내 바이러스 백신은 알레르기 민감성을 예방하기 위해서 전체 출생 코호트(birth cohort) 또는 적어도 한명의 가족 구성원이 알레르기 반응 또는 알레르기 질환을 가진 것으로 진단된 가족에 있는 아이들과 같은 선택된 개체군의 집단(group)에 투여될 수 있다. 또한, 상기 장내 바이러스 백신은 무증상(asymptomatic)의 알레르기 민감성(증상없이 증가된 알레르겐-특이성 IgE 농도)을 가진 사람들에게 병상적 증상(clinical symptoms)의 발달을 예방하기 위해 사용될 수 있다. 이와 같은 맥락에서, 상기 장내 바이러스 백신은 알레르기성 증상 및 질환을 완화하기 위해 사용될 수 있다.

핀란드 및 러시아에 있는 아이들의 세균성 감염 및 알레르기 민감성의 유행에 있어서 변형(variations) 및 관련성(associations)은 비록 지리적으로 인접한 지역이지만 사회 경제적으로 그리고 문화적으로 현저하게 다른 두 나라의 특이한 역학 환경(epidemiological setting)에서 연구되었다.

방법

대상(Subject)

러시아의 카렐리아 연구 코호트(cohort)는 266명의 아이들을 포함하고 마찬가지로 핀란드의 코호트는 266명의 아이들을 포함한다. 상기 아이들은 주류 개체군(mainstream populations)을 대표하며 가능한 알러지 또는 다른 질환에 의해 선택되지 않았다. 카렐리아 공화국에서 온 모든 아이들은 핀란드 또는 카렐리아 종족의 두 부모를 가졌고, 그것은 핀란드의 아이들의 부모와 비슷한 종족적인 배경을 부여한다(참고문헌 22). 상기 연구대상 코호트들은 각각의 나라로부터 모두 114명의 남자아이들과 152명의 여자아이들을 포함한다. 상기 두 코호트에서 샘플의 평균 나이는 11.4 세(범위: 7 - 15 세)이다.

혈액 샘플들은 카렐리아에 있는 총 1988명에서 랜덤으로 선택된 아이들로부터 획득되었다. 어머니와 아버지의 종족적인 배경이 기록되며, 두 부모가 핀란드 또는 카렐리아 종족인 모든 아이들은 현재의 연구대상(N=266)에 포함된다. 이러한 카렐리아 아이들을 대해서, 핀란드 아이들의 코호트도 나이, 성별, 및 샘플링의 기간(1달 이상 떨어지지 않음)에 있어서 짝지워져 일치되며, 그에 따라 병원균(microbes) 및 알레르겐의 노출에 대한 시기(season)적 효과를 최소화 한다. 상기 핀란드 코호트는 카렐리아 코호트와 동일한 방식으로 선발되며, 초기에는 핀란드의 오우루(Oulu) 지역에 사는 3654명의 아이들을 포함한다(참고문헌 23). 혈액 샘플들은 각각의 아이들로부터 획득된다.

IgE 및 바이러스 항체

알레르겐-특이성 IgE의 수준은 Uni-CAP® 플루오르엔자임(fluoroenzyme) 면역분석법(Pharmacia Diagnostics, Uppsala, Sweden)을 사용하여 측정된다. 공통된 두 개의 흡입성 알레르겐(birch 및 cat) 및 난알부민(egg albumin)에 대한 특이성 IgE는 제조업자의 사용 설명서(instruction)에 따라 분석된다. 상기 알레르겐들은 그들에 대한 노출이 두 개체군에서 상당히 비슷한 것으로 예상될 수 있으므로 선택되었다. 알레르겐-특이성 IgE에 대해 0.35IU/l 또는 그 이상의 값(values)이 긍정적으로 고려되었다. 이전의 연구에서, 100IU/l을 초과하는 전체 IgE 값은 아토피 소인(atopic predisposition)의 표지(markers)로 고려되었다(참고문헌 24).

집단-반응(group-reactive) 장내 바이러스 항체는 앞서 설명된 바와 같이 효소 면역분석법(EIA) 및 항원으로써 열-처리된 콕삭키바이러스 B4(coxsackievirus B4: CBV4)를 사용하여 분석된다(참고문헌 25). 상기 방법은 혈청형에 특이적이지 않고 여러 장내 바이러스의 혈청형 사이에서 교차-반응(cross-reactive)하는 항체를 검출한다. 여러 혈청형에 대한 교차-반응 항체를 검출하는 상기 방법의 능력은 바이러스 항원을 열-처리함으로써 강화되며, 그것은 상기 처리가 바이러스의 숨겨진 교차-반응 구조를 노출시키기 때문이다.

주어진 혈청형에 대해 특이적인 항체들은 앞서 설명된 바와 같이 플라크 중화 측정법(plaque neutralising assay)을 사용하여 측정된다(참고문헌 26). 상기 방법은 상기 측정법에 사용된 혈청형에 대해 특이적인 중화항체(neutralizing antibodies)를 측정한다. 우리는 ATCC 기준 바이러스 계통(reference virus strains)을 사용하여 두 개의 콕삭키바이러스 B 혈청형(CBV4 및 CBV5) 및 두 개의 에코바이러스 혈청형(echovirus 9 및 11)에 대한 항체를 가려낸다.

IgG 분류(class) A형 간염 바이러스(HAV) 항체들은 Enzygnost® 항 HAV 상업적 EIA 키트(kit)를 사용하여 제조업자의 사용설명서(Dade Behring, Marburg, Germany)에 따라서 측정된다. 베링 엘리사 프로세서 Ⅲ(Behring Elisa Processor Ⅲ)는 상기 테스트의 추가적인 가공(processing) 및 항체 수준의 계산을 위해 사용된다.

면역조절 경로(immunoregulatory pathway)의 유도

면역조절 경로에 대한 장내 바이러스의 효과는 장내 바이러스를 가진 단핵 세포 배양을 촉진함으로써 분석된다. 건강한 실험 요원(laboratory personnel)으로 부터 나온 말초혈액 단핵 세포는 제조업자의 사용설명서에 따라 BD Vacutainer® CPT^TM 튜브(BD, Franklin Lakes, NJ, USA)를 사용하여 정제된다. 단핵 세포들은 RPMI 1640 (Gibco, Invitrogen, Carlsbad, CA, USA)를 사용하여 두번 세척되며, 둥근-바닥 미량 역가판 웰(microtitre plate wells: Costar 96 well cell culture cluster, Corning Inc., Corning, NY, USA)에서 웰당 100㎕당 200,000 세포를 사용하여 +37℃(5% CO₂)에서 48시간 동안 배양된다. 상기 배양 미디엄(medium)은 RPMI 1640에 있는 10% 인간 혈청(human serum), 1% 페니실린, 1% 스트렙토마이신(streptomycin) 및 1% L-글루타민과 다음의 자극제(stimulants) 중의 하나를 포함한다: 미디엄(조절), 감염성 장내 바이러스(콕삭키바이러스 B4)(3 PFU/cell), 고도로 정제되고 열-처리된 1.0㎍/ml 농도의 CBV4, 5 ㎍/ml 농도의 dsRNA 아날로그(TLR-3 작용제) 폴리(I:C) (Alexis Biochemicals, San Diego, CA, USA), 5 ㎍/ml 농도의 TLR7/8 작용제 레시퀴모드(Resiquimod) (Alexis Biochemicals), 100 ㎍/ml 농도의 TLR4 작용제로써 대장균(E. coli) 혈청형 J5(Rc)에서 나온 LPS (Alexis Biochemicals), 이 뿐만 아니라 다클론 T-세포 활성제(polyclonal T-cell activator)로써 가용성 항-CD3 및 항-CD28 항체의 조합(R&D Systems, Minneapolis, MN, USA).

조절 T 세포에 대한 바이러스의 효과는 FoxP3 및 IL-10 특이성 mRNA의 형질발현을 측정함으로써 분석된다. 분석들은 RT-PCR 및 7900 HT 빠른 실시간 PCR 시스템(Applied Biosystems, Foster City, CA, USA)을 사용하여 행해진다. RNA는 RNeasy 미니 키트에 의해 제조업자의 사용설명서에 따라 추출된다. 상기 RNA 추출단계 동안, 온-컬럼 DNA 분해효소(DNase) 소화(digestion)가 RNase-Free DNase 세트(Qiagen, Hilden, Germany)로 수행된다. 상기 RNA는 M-MLV 역전사 효소 및 완충액(buffer: Promega, Madison, WI, USA) 및 임의의 육합체 프라이머(hexamer primers)를 사용하여 역전사된다. 실시간 PCR 분석을 위한, FoxP3 및 IL-10에 대한 맞춤 프라이머(custom primers)들은 살림 유전자(housekeeping gene) TATA 박스 결합 단백질(TBP)에 대한 프라이머들이 전방향 프라이머(forward primer)에 있어서 이전의 공개공보(publication)로부터 약간 변형되는 동안 디자인 된다(참고문헌 27). 각각의 프라이머 세트(set)는 엑손-엑손의 가장자리(border)를 묶는 하나의 프라이머를 가진다. 상기 프라이머의 시퀀스는 다음과 같다: FoxP3 전방향(foward) 5'-ACA GCA CAT TCC CAG AGT TCC-3', 역방향(reverse) 5'-GAA CTC CAG CTC ATC CAC G-3'; IL-10 전방향(foward) 5'-CAG TTT TAC CTG GAG GAG GTG-3', 역방향 5'-AGA TGC CTT TCT CTT GGA GCT TAT-3'; TBP 전방향(foward) 5'-CGA ATA TAA TCC CAA GCG GTT-3' 및 역방향 5'-ACT TCA CAT CAC AGC TCC CC-3'. 상기 합성된 cDNA는 DyNAmo Flash SYBR Green qPCR 키트(Finnzymes, Espoo, Finland)에 의해 증폭된다. 온도 사이클 조건(conditions)들은 95℃에서 7분, 95℃에서 10초, 60℃에서 30초, 및 78℃에서 30초의 40 사이클(프라이머 이량체 제거를 위해)이며, 최종 연장기간은 60℃에서 1분이다. 60℃ - 95℃ 온도범위 단계의 해리곡선(dissociation curve)은 각 런(run)의 말단에 추가된다. 데이타 분석을 위한, FoxP3 및 IL-10의 역치 사이클(C_t) 값(threshold cycle values)은 내인성 조절 유전자(endogenous control gene) TBP의 C_t-값에 표준화된다. 관련된 형질발현 값은 앞서 설명된 바와 같이 Pfaffl 방법을 사용하여 계산된다(참고문헌 28).

통계적 방법(Statistical methods)

통계학적 분석은 SPSS 프로그램 버젼 12.0(SPSS Inc., Chicago, IL, USA) 및 신뢰구간 분석법(confidence interval analyses: CIA)으로 수행된다(참고문헌 29). 특이성 IgE, 전체 IgE의 높은 값(>100IU/l) 및 세균성 항체의 유행은 McNemar's 테스트를 사용하여 두 쌍의 코호트 사이에서 비교된다. 두 쌍의 코호트 사이에서 전체 IgE 수준(편중분포로 지속적으로 변동가능한)의 비교는 Wilcoxon Signed Ranks 테스트를 이용하여 수행된다. 교차-목록(cross-tabulation) 및 카이제곱검정(chi-square test) 또는 피셔의 정확성 테스트(fisher's exact test)는 러시아의 카렐리아와 핀란드인 사이에서 바이러스 항체, 전체 IgE의 높은 값 및 특이성 IgE 사이의 연관성을 분석하는데 적용된다. Mann-Whitney U 테스트는 전체 IgE 수준 및 특이성 IgE 사이의 연관성[긍정(positive) 또는 부정(negative)으로 분류됨]이 분석되고 또한 CBV4 IgG 수준 및 특이성 IgE 사이의 연관성이 분석될 때 사용된다. 적절한 때에는 다변량(multivariate) 기법, 로지스틱 회귀법(logistic regression)이 각각의 파라미터(parameter)의 독립적인 효과를 확인하기 위해 적용된다. 상기 모델 선택은 앞선 단계적 절차에 기초하며, 상기 기간(term)에 들어가고 제거하는 한계는 0.10으로 동일하다. 상기 결과값은 교차비(OR)의 평가(assessment) 및 95% 신뢰 구간(CI)에 의해 지지된다. 만약 빠뜨리거나 관계없는 값이 있다면, 그 경우는 특정 파라미터를 포함하는 분석에 포함되지 않는다. 그러한 경우의 수는 적으며, 예컨데, 러시아의 카렐리아 아이들의 미생물의 혈청학상, 각각의 미생물 분석당 0 - 2 경우이다. 모든 분석은 양측성(two-sided)이며, 통계학적 중요한 P-값(<0.05)은 주어진다.

결과

알레르겐-특이성 IgE의 유행은 핀란드 아이들 보다 러시아의 카렐리아 아이들이 상당히 낮았다(표 1).

장내 바이러스 및 A형 간염 바이러스 항체의 유행은 핀란드 아이들 보다 러시아의 카렐리아 아이들이 상당히 높았다(표 2). 또한, 러시아의 카렐리아인에 있어서 알레르기 민감성이 장내 바이러스 항체를 가진 아이들에게는 드물게 일어났으며 A형 간염 바이러스 항체의 점에서 볼 때 그 효과는 보이지 않았다(표 3). 장내 바이러스 혈청 반응 음성(seronegative)인 아이들의 총 22%는 혈청 반응 양성(seropositive)인 아이들의 5%와 비교해서 적어도 하나의 양성(positive) 특이성 IgE 결과를 가졌다. 적어도 하나의 알레르겐 특이성 IgE(P=0.048)를 가진 아이들의 49 EIU(범위: 0-154)와 비교해서 특이성 IgE를 갖지 않은 아이들에게 있어서, 정중(median) 장내 바이러스 항체의 수준은 74 효소 면역분석법 단위(EIU)(범위: 0-224)였다.

핀란드군의 경우, HAV 혈청 반응 양성인 아이들의 수가 매우 적어서(표 2), 알레르겐-특이성 IgE와의 관련성을 분석하기 어려웠다. 그러나, 장내 바이러스 항체들은 핀란드 아이들에게 자주 발생하였지만, 대조적으로 러시아의 카렐리아인의 경우, 그들은 알레르겐-특이성 IgE 반응과의 관련성을 나타내지 않았다(장내 바이러스 혈청 반응 음성인 아이들의 18%는 혈청 반응 양성인 아이들의 23%와 비교해서 적어도 하나의 양성(positive) 특이성 IgE 결과를 가졌다).

감염과 아토피의 유행 사이의 관련성이 오직 러시아의 카렐리아 아이들에게만 관찰되고 핀란드 아이들에게서 관찰되지 않은 사실은 핀란드 아이들이 더 많은 나이에 감염되었고, 장내 바이러스의 순환(circulation)으로 감염되었으며, 핀란드에서는 다른 병원균이 눈에 띄게 적다는 가정하에 설명될 수 있다. 위생 가설에 따르면, 생후 첫달 동안 발생하는 감염들이 가장 중요한 감염들이며, 그것은 이 시기에 아이들이 장-연관 면역 시스템의 성숙, 조절 경로의 발달 및 Th1/Th2 균형에 대한 현저한 효과를 가질 수 있기 때문이다.

상기 장내 바이러스의 보호적 효과가 다른 혈청형 사이에서 서로 다른지를 테스트 하기 위해서, 우리는 4개의 다른 장내 바이러스 혈청형(CBV4, CBV5, 에코바이러스 9 및 에코바이러스 11)에 대한 알레르겐 특이성 IgE 및 중화 항체에 대해서 총 244명의 러시아 카렐리아 아이들을 조사했다. 중화 항체는 몇 십년동안 증가하기 때문에, 이러한 중화 항체의 존재는 상기 분석법에서 사용되는 혈청형에 의한 지난 감염을 나타낸다. 에코바이러스 11은 알레르기 민감성(도 1)에 대한 강한 보호작용과 관련되어 있었다. 에코 바이러스 11 혈청 반응 음성인 아이들의 총 31.8%는 에코 바이러스 11 혈청 반응 양성인 아이들(P<0.001)의 오직 13.2%와 비교해서 표 1에서 보이는 세개의 알레르겐의 적어도 하나에 대해 알레르겐-특이성 IgE를 가졌다. 다중 로지스틱 회귀분석에서, 에코 바이러스 11 혈청 양성 반응은 알레르겐 특이성 IgE[P<0.001; OR3.2 (95% CI 1.7-6.2)]에 대해 명확하게 독립적인 효과를 가졌다. 상기 결과는 알레르기 민감성에 대한 장내 바이러스의 보호적 효과가 바이러스의 혈청형에 의존할 수 있음을 나타낸다.

알레르기 민감성에 대한 장내 바이러스의 보호적 효과는 그들의 면역 시스템에 대한 효과에 의해 매개될 수 있다. 일반적으로, 알레르기 민감성의 발달은 비정 상적 면역 조절과 관련이 있는 것으로 믿어진다. 조절 T 세포들은 면역 조절에 있어서 중요한 역할을 하며, 바이러스가 상기 관찰된 항-알러지 효과를 매개할 수 있는 하나의 가능한 메커니즘(mechanism)은 바이러스-유도된 이러한 세포들의 활성(activation)이다. 조절 T 세포는 특히 전사 요소인 FoxP3(자연의 조절 T 세포)를 발현하며, IL-10(Tr1 조절 세포)과 같은 면역조절 사이토카인을 분비한다. 특히, Tr1 세포에 의한 IL-10의 분비는 알러지 반응을 저하시키는데 중요할 수 있다(참고문헌 30). 우리는 말초 혈액 단핵 세포를 감염성 장내 바이러스 또는 체외에 있는(in vitro) 열-처리되어 정제된 장내 바이러스에 노출시킴으로써 장내 바이러스가 조절 세포를 자극할 수 있는지 분석하였다. 바이러스-유도 반응은 TLR-작용제[폴리(I:C), 레시퀴모드, 대장균 LPS] 및 다클론 T-세포 활성제(단일클론의 항-CD3 및 항-CD28 항체의 혼합)로 획득된 것과 비교된다.

단핵세포를 감염성 CBV4에 노출시키는 것은 FoxP3 특이성 mRNA(도 2)의 형질발현에 있어서 명확한 증가(3.3배)를 이끌었으며, 모의-처리된 배양과 비교해서 IL-10 특이성 mRNA의 3.6배 증가를 이끌었다(도 3). 비슷하게, 열-처리된 CBV4는 FoxP3 mRNA를 1.9배 증가시켰고, IL-10 mRNA를 3-4배 증가시켰다. 폴리(I:C)는 FoxP3 mRNA나 IL-10 mRNA를 유도하지 않은 반면, 상기 항-CD3/항-CD28 조합은 두 FoxP3 및 IL-10(각각 8.1배 및 2.6배 증가)의 형질 발현을 유도했다. 레시퀴모드 및 LPS는 FoxP3의 형질 발현을 유도하지 않았지만(도 2), IL-10의 형질 발현을 명확히 증가시켰다. 이러한 결과들은 장내 바이러스들이 조절 T 세포를 활성화 시킬 수 있음을 나타낸다. 장내 바이러스에 의해 유도된 활성은 이러한 현상의 생물학적 연관성(relevance)을 지지하는 강력한 다클론 T-세포 활성제(항-CD3/항-CD28 혼합물)를 사용하여 획득된 것과 비교된다. 게다가, 장내 바이러스는 상기 세 가지 분류의 TLR 작용제보다 더 강한 FoxP3의 형질 발현을 유도할 수 있었으며, TLR4 및 TLR7/8 작용제(각각, LPS 및 레시퀴모드) 만큼이나 강한 IL-10 형질 발현을 유도할 수 있었다.

따라서, 이러한 결과들은 장내 바이러스 감염이 알레르기 민감성의 위험을 감소시키는데 관련되어 있으며, 면역조절 경로를 자극할 수 있는 방식으로 면역 시스템을 조절하여 알레르기성 질환에 대하여 보호할 수 있음을 나타낸다.

표 1. 핀란드 및 러시아의 카렐리아에 있는 아이들에 있어서 알레르겐-특이성 IgE의 유행(% 및 95% CI)

	핀란드인 (n=266)	러시아의 카렐리아인 (n=266)	P 값
Cat	11% (8-16%)	2% (1-5%)	<0.001
Birch	11% (8-16%)	2% (1-5%)	<0.001
Egg albumen	6% (4-10%)	3% (2-6%)	0.093
적어도 하나의 양성	22% (17-27%)	6% (4-10%)	<0.001

표 2. 핀란드 및 러시아의 카렐리아에 있는 아이들에 있어서 장내 바이러스 및 A형 간염 바이러스 항체의 유행(% 및 95% CI)

	핀란드인 (n=266)	러시아의 카렐리아인 (n=266)	P 값
장내 바이러스	77% (72-82%)	93% (90-96%)	<0.001
A형 간염 바이러스	2% (1-5%)	24% (19-29%)	<0.001

＊ 오직 166명의 핀란드 아이들이 HAV 항체에 대해 스크린 되었다.

＊ 상기 분석에 사용된 장내 바이러스는 다양한 장내 바이러스 혈청형에 대 한 항체에 폭넓게 반응하기 위해 열처리되고 매우 많이 정제된 콕삭키바이러스 B4(coxsackievirus B4) 였다.

표 3. 러시아의 카렐리아에 있는 아이들에 있어서 장내 바이러스 및 A형 간염 바이러스 항체에 대한 혈청 반응 양성(seropositivity)과 관련된 적어도 하나의 알레르겐-특이성 IgE에 대해 양성(positive)인 아이들의 비율(% 및 95% CI)

	바이러스-혈청 반응 양성	바이러스-혈청 반응 음성	P 값	논리 모델(logistic model^＊) OR (95% CI) P 값
장내 바이러스	13/247 (5%; 3-9%)	4/18 (22%; 9-45%)	0.02	0.16 (0.04-0.6)	0.006
A형 간염 바이러스	5/63 (8%; 3-17%)	12/201 (6%; 3-10%)	0.579		NS

NS, 중요하지 않음. ^＊전방향 순차 모델(입력 및 제거 0.10에 대한 p)

참고 문헌

Claims

알레르기 민감성과 관련된 질환을 예방하거나 치료하기 위한 제약 합성물(pharmaceutical composition)의 제조에 있어서의 장내 바이러스의 용도로서, 상기 장내 바이러스는 바이러스성 게놈 속에 통합되어 상기 알레르기 민감성을 유도하는 알레르겐을 인코딩(encode)하는 외인성 핵산 시퀀스(exogenous nucleic acid sequence)를 포함하지 않는 제약 합성물의 제조에 있어서의 장내 바이러스의 용도.
제1항에 있어서, 상기 제약 합성물은 살아있는 장내 바이러스 계통, 유전자 조작된 장내 바이러스 계통, 비활성화된 장내 바이러스 계통, 또는 바이러스 입자와 같은 장내 바이러스 계통에서 파생된 구조적인 구성성분 또는 그들의 조합을 포함하는 제약 합성물의 제조에 있어서의 장내 바이러스의 용도.
제1항에 있어서, 상기 제약 합성물은 장내 바이러스 계통에서 파생된 게놈 또는 게놈 조각(fragment)을 포함하는 제약 합성물의 제조에 있어서의 장내 바이러스의 용도.
제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제약 합성물은 흡입법 또는 경직장적으로(per rectum) 경구, 피내(intradermally), 경피(transcutaneously), 혀 밑, 코 안으로 주어질 수 있으며, 주입(injection)에 의해 비경구적으로 주어질 수 있는 제약 합성물의 제조에 있어서의 장내 바이러스의 용도.
제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제약 합성물은 천식, IgE-매개 민감성, 알레르기성 습진, 식품 또는 약물 알러지, 또는 알레르기성 비염 또는 결막염을 예방하거나 치료하기 위해 사용되는 제약 합성물의 제조에 있어서의 장내 바이러스의 용도.
제1항에 있어서, 상기 제약 합성물은 생후 2년 내의 아이에게 투여되는 제약 합성물의 제조에 있어서의 장내 바이러스의 용도.
제1항 내지 제6항 중 어느 한 항에 있어서, 다양한 장내 바이러스 혈청형을 포함하는 제약 합성물이 동시에(simultaneously) 또는 연속적으로(serially) 주어지는 제약 합성물의 제조에 있어서의 장내 바이러스의 용도.
제1항 내지 제7항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 제약 합성물이 민감한 사람의 알레르기성 증상을 예방하거나 완화하기 위해 사용되는 제약 합성물의 제조에 있어서의 장내 바이러스의 용도.
제1항 내지 제8항 중 어느 한 항에 있어서, 장내 바이러스를 포함하는 상기 제약 합성물이 알레르겐의 조합으로 주어지는 제약 합성물의 제조에 있어서의 장내 바이러스의 용도.
알레르기 민감성과 관련된 질환을 예방하거나 치료하기 위한 방법에 있어서, 장내 바이러스를 포함하는 제약 합성물의 효과적인 양이 그것이 필요한 사람에게 투여되고, 상기 장내 바이러스가 바이러스성 게놈 속에 통합되어 알레르기 민감성을 유도하는 알레르겐을 인코딩하는 외인성 핵산 시퀀스를 포함하지 않음으로써 알레르기 민감성과 관련된 질환을 예방하거나 치료하기 위한 방법.