KR20090081381A

KR20090081381A - 경비 항경련성 약학 조성물

Info

Publication number: KR20090081381A
Application number: KR1020097009483A
Authority: KR
Inventors: 김권호; 파람지트 카우르; 조재훈; 백명기; 육여주
Original assignee: 에스케이 주식회사
Priority date: 2006-11-15
Filing date: 2007-10-31
Publication date: 2009-07-28
Also published as: DK2086524T3; WO2008060051A1; MX2009005218A; JP2010509394A; ES2529432T3; CA2678225C; EP2086524A1; EP2086524B1; KR101512733B1; JP5288211B2; CN101534804B; CN101534804A; EP2086524A4; US7745430B2; US20080113970A1; CA2678225A1

Abstract

본 발명은 경비 항경련성 약학 조성물에 관한 것으로, 활성성분으로 디아제팜을 함유하고, 물, 지방산 에스테르, 디에틸렌글리콜 모노에틸에테르, 에탄올 및 소디움글리코콜레이트를 포함하며, 상기 지방산 에스테르의 중량비는 물의 중량비보다 적어도 2배 이상이며, 에탄올의 중량비보다 적어도 2배 이상인 것을 특징으로 하는 경비 항경련성 약학 조성물이 제공된다.

본 발명에 따른 경점막 운반용 항경련성 약학 조성물은 물과 에탄올의 함량을 최소화하고, 지방산 에스테르를 주성분으로 하며, 극성용매인 글리콜을 사용하지 않고, 소량의 물과 에탄올을 사용함으로써 향상된 디아제팜의 용해도 및 경점막 투과도를 갖는다. 본 발명은 또한 상기 개시된 조성물의 치료학적으로 유효한 양을 이를 필요로 하는 환자에게 경비 투여함으로써 경련을 치료하는 것을 포함한다.

경비 투여, 항경련, 약학 조성물, 디아제팜, 지방산 에스테르

Description

경비 항경련성 약학 조성물{Transnasal anticonvulsive pharmaceutical composition}

본 발명은 경비 항경련성 약학 조성물에 관한 것이다. 보다 상세하게, 본 발명은 향상된 디아제팜의 용해도 및 경점막 투과도를 갖는 디아제팜의 경점막 운반용 항경련성 약학 조성물에 관한 것이다.

간질 지속상태인 경련중첩증(status epilepticus)은 3-35%의 사망률을 갖는 신경학적 응급상태이다. 치료의 주 목적은 병리학적 발작 활성의 신속한 관리이며, 경련중첩증의 증상이 미처리되는 것이 오래될 수 록 조절하는 것이 어려워지며 영구적인 뇌 손상의 위험이 증가된다. 따라서, 환자의 치료를 위해 중요한 것은 유효 약제를 포함하는 적절한 약제학적 제형을 갖는 약학 조성물을 적절한 투여량으로 투여하는 신속한 치료가 중요하다.

현재 여러 가지 약물 요법이 경련중첩증 치료에 적용될 수 있는 것으로 알려졌다. 디아제팜은 이러한 목적을 위해 가장 광범위하게 사용되는 벤조디아제핀 중 하나이다. 항경련제의 정맥내 투여는 간질병 경련을 억제하기 위한 가장 신속한 방법이다. 그러나, 정맥내 투여가 불편한 경우, 예를 들어, 멸균 장치 및 숙련자가 필요한 것과 같은 기술적 어려움에 기인하여 지연된 경우, 그리고 있을 수 있는 정맥염의 발달 때문에 다른 경로의 투여가 매우 바람직할 수 있다. 또한, 정맥내 약제는 종종 저혈압증, 심부정맥 또는 중추신경계 저하와 관련된다. 이와 관련하여 Moolenar 등(Int. J. Pharm., 5: 127- 137(1986))은 근육내 주사, 경구 정제 및 직장 용액과 같은 여러 가지 다른 경로를 통해 인간에 디아제팜을 투여하는 것을 시도하였다. 직장 투여만이 꽤 신속한 흡수를 제공하는 것으로 발견되었으며, 따라서 이는 정맥 주입에 대한 대체 경로로서 간주될 수 있다. 그러나, 직장 경로는 특히 응급 치료시 매우 불편한 약물 투여 방법이다.

Burghardt는 미국특허 제 4,863,720에서 설하선 분무가능한 약학 제조물을 개시하였으며, 여기서 활성 약물은 벤조디아제핀일 수 있으며, 바람직하게 폴리에틸렌 글리콜(PEG)을 포함하며 그리고 에탄올, 지방산의 디- 및/또는 트리글리세라이드 및 약학적으로 허용가능한 추진제 가스를 필요로 한다.

보다 최근에, 코의 점막은 많은 의약 물질의 치료적 효과를 위해 실질적인 경로를 제공한다. 비강내 투여는 필요에 따라 전신적 또는 국소적 효과를 달성하기위해 약물이 쉽고 간단하게 투여될 수 있는 장점을 갖는다. 그러나, 비강내 약물 투여와 관련된 주요 문제는 대부분의 약물 분자가 비강 점막을 통해 잘 확산되지 않으며 천천히 확산 되게 되어 원하는 수준의 치료제가 간단한 경비 투여의 수단으로 달성될 수 없다는 사실이다. 비강 투여와 관련된 추가적인 제약조건은 투여가 소량으로 한정된다는 것이다. 즉, 일반적으로 비공당 약 150㎕이상으로 투여하는 것은 불가능하며, 이 이상 수준의 배합물량은 인두내로 유출되어 삼켜진다. 따라서, 약물의 필요 투여량은 이러한 양으로 제공되는 것이 필요하다.

또한 디아제팜은 일반적으로 약물의 용해를 위해서 사용하는 물에서의 용해도가 낮아서 비강분무에 적합한 제형을 개발하는 것이 어렵다. 따라서, 원하는 의약, 즉 디아제팜을 고농도로 용해하면서 비 점막을 자극하지 않는 용매 비히클(vehicle)이 크게 요구된다.

약물의 비강내 흡수는 화학적 보조제 또는 침투 증진제를 동시에 투여함으로써 증가될 수 있다. 예를 들어, Lau 및 Slattery[Lau 등, Int. J. Pharm., 54: 171-174(1989)]는 디아제팜과 같은 벤조디아제핀을 여러가지 용매내에(트리아세틴, 디메틸설폭시드, PEG 400, Cremophor EL, Lipal-9-LA, 이소프로필 아디페이트 및 Azone) 용해시켜 투여하는 것을 시도하였다.

그러나 다수의 용매는 원하는 농도로 디아제팜을 용해시키지만 이들을 경비 투여용으로 사용하기에는 너무 자극적이었다. Cremophor EL은 비 점막 조직에 가장 자극이 적은 것으로 알려졌지만 인간에서 이러한 비히클의 사용시 비강 흡수는 다 소 느리며(T_max 1.4 시간), 피크 농도는 정맥 투여후 관찰되는 경우에 비해 낮았다.

최근에, Li 등은 International Journal of Pharmaceutics Vol. 237, pp77-85, 2002에 디아제팜의 신속한-온셋 경비 운반을 위한 마이크로에멀젼을 개시하였다.

또한 미국특허 제 6,627,211호에는 지방족 알코올, 극성 용매인 글리콜, 물 등을 이용하여 디아제팜을 용해시킨 가용화 제제를 통한 디아제팜의 경비투여 조성물이 개시되어 있으며, 미국특허공개 2005-0002987호에는 동등한 양의 지방산과 물로 구성되고, 나머지는 친수성 계면활성제, 극성용매인 글리콜 등으로 구성된 비히클을 이용하여 디아제팜을 용해시킨 디아제팜 경비 투여용 마이크로에멀젼이 개시되어 있다.

미국특허 제 6,627,211호에 기술된 배합물에서는 지방족 알코올과 극성용매인 글리콜류 및 에탄올을 다량 사용한 가용화 제제로서, 소량의 디아제팜을 포함한 경우는 경점막 투과도를 높일 수는 있지만, 디아제팜의 함량을 실시예 4의 2.5%이상으로 높일 경우 용해되지 않으므로, 디아제팜을 유효농도로 전달하기 위해서는 많은 양(volume)을 경비 투여하여야 하나, 각 비강내 최대 투여 가능량은 150ul로 한계가 있으므로, 반복투여를 해야 하는 문제가 있다. 또한 미국특허공개 2005-0002987호는 동등한 양의 지방산 에스테르와 물을 사용하고, 친수성 계면활성제 및 극성용매인 글리콜류와 알코올을 다량 사용한 마이크로에멀젼 제제로서 디아제팜의 농도가 41mg/ml로 약 4.1%까지 용해시킬 수 있어서, 미국특허 제 6,627,211호의 제제에 비하여 디아제팜의 용해도는 증가하였지만, 경점막 투과도가 감소하므로, 이 제형 역시 디아제팜을 유효농도로 전달하기 위해서는 많은 양(volume)을 경비 투여하여야 하므로, 반복투여를 해야 하는 불편한 점이 있다. 따라서, 향상된 디아제팜의 용해도 및 경점막 투과도를 갖는 디아제팜을 함유하는 마이크로에멀젼 경점막 투여용 약학 조성물이 요구된다. 이러한 조성물 및 치료 방법은 본 발명에 따라 제공된다.

본 발명의 일 견지에 의하면, 활성성분으로 디아제팜을 함유하고, 물, 지방산 에스테르, 디에틸렌글리콜 모노에틸에테르, 에탄올 및 소디움글리코콜레이트를 포함하며, 상기 지방산 에스테르의 중량비는 물의 중량비보다 적어도 2배 이상이며, 에탄올의 중량비보다 적어도 2배 이상인 것을 특징으로 하는 경비 항경련성 약학 조성물이 제공된다. 본 발명의 다른 견지에 의하면, 경련으로 고통받는 환자에게 경련을 치료하기에 충분한 양의 상기 약학 조성물을 투여하여 경련을 치료하는 방법이 제공된다.

본 발명에 따른 경비 항경련성 약학 조성물은 활성성분으로 디아제팜을 함유하고, 물, 지방산 에스테르, 디에틸렌글리콜 모노에틸에테르, 에탄올 및 소디움글리코콜레이트를 포함하며, 상기 지방산 에스테르의 중량비는 물의 중량비보다 적어도 2배이상이며, 에탄올의 중량비보다 적어도 2배 이상인 것을 특징으로 한다. 본 발명의 디아제팜-함유 경비 항경련성 마이크로에멀젼 배합물은 상기 문헌에 기재된 유사한 배합물에 비해 우수한 특성을 갖는다.

다양한 광범위하고 집중적인 연구 및 실험 결과, 본 발명자들은 물과 에탄올의 함량을 최소화하고, 지방산 에스테르를 주성분으로 하며, 디에틸렌글리콜 모노에틸에테르를 포함하고, 소량의 물과 에탄올을 포함하는 디아제팜 함유 경비 항경련성 마이크로에멀젼 배합물이 디아제팜의 용해도에 있어서는, 미국특허 제 6,627,211호의 2.5%와 미국특허공개 2005-0002987호의 4.1%인 것에 비하여 6%까지 향상되며, 시험관내 경점막 투과도는 미국특허 제 6,627,211호 제제에 비하여 2.2배 증가됨을 발견하여, 이에 본 발명을 완성하게 되었다.

본 발명의 약학 조성물은 활성성분으로 디아제팜을 함유하고, 물, 지방산 에스테르, 디에틸렌글리콜 모노에틸에테르, 에탄올 및 소디움글리코콜레이트를 포함하며, 상기 지방산 에스테르의 중량비는 물의 중량비보다 적어도 2배이상이며, 에탄올의 중량비보다 적어도 2배 이상인 것을 특징으로 한다. 본 발명의 조성물에서 상기 지방산 에스테르의 중량비가 물의 중량비의 2배보다 낮거나 에탄올의 중량비보다 2배보다 낮은 경우에는 마이크로에멀젼이 투명하지 않고 안정성이 떨어져서 바람직하지 않다. 바람직하게, 상기 지방산 에스테르의 중량비는 물의 중량비에 2-4배로 포함되며, 에탄올의 중량비에 2-3.5배로 포함된다.

본 발명의 조성물에서 항경련 활성 성분인 디아제팜은 이에 한정하는 것은 아니나 조성물 전체 중량의 0.1 내지 10.0중량%로 포함되는 것이 바람직하다.

본 발명에 사용하기에 유용한 지방산 에스테르의 예는 카프릴로 카프로일 마크로골-8-글리세라이즈(caprylocaproyl macorogol-8-glycerides) 및 에틸라우레이트를 포함한다. 상기 성분들은 단독으로 혹은 서로 혼합하여 첨가될 수 있다. 상기 지방산 에스테르는 조성물 전체 중량의 적어도 30중량%이상으로 포함되는 것이 바람직하며, 보다 바람직하게는 조성물 전체 중량의 35 ~ 45중량%로 포함된다. 가장 바람직하게, 상기 지방산 에스테르는 조성물 전체 중량의 38 ~ 42 중량%로 포함되며, 상기 지방산 에스테르는 카프릴로 카프로일 마크로골-8-글리세라이즈와 에틸라우레이트가 4.5: 3.5 ~ 5.5 : 2.5 중량비로 혼합, 첨가되는 것이 바람직하다.

물과 에탄올은 두 성분을 합하여 조성물 전체 중량의 20~30중량%로 포함되는 것이 바람직하다. 소디움글리코콜레이트는 조성물 전체 중량의 0.5-1.2중량%로 포함되는 것이 바람직하다.

디에틸렌글리콜 모노에틸에테르는 조성물 전체 중량의 30-45중량%로 포함되는 것이 바람직하다. 본 발명에 사용되는 디에틸렌글리콜 모노에틸에테르는 상업적으로 구입가능하며, 예컨대 가테포스(Gattefosse, Westwood, NJ, USA)에서 생산 판매하고 있는 상품명 Transcutol P가 있다.

바람직한 일 구현으로, 본 발명의 경비 항경련성 약학 조성물은 디아제팜 약 4-6중량%, 물 약 8-12중량%, 지방산 에스테르 약 35-45중량%, 디에틸렌글리콜 모노에틸에테르 약 30-45중량% 및 에탄올 약 12-17중량%로 이루어진다.

본 발명의 에멀젼은 통상적인 기술에 의해 형성된다. 예를 들어, 본 발명의 에멀젼은 다음과 같이 제조될 수 있다. 오일(에틸 라우레이트) 및 계면활성제/보조계면활성제(트랜스큐톨/카프릴로카프로일 마크로골-8-글리세라이즈/에탄올)을 정확히 칭량하고 자기 교반기의 적절한 혼합하에 완전히 혼합하여 투명하고 균일한 혼합물을 형성한다. 그 다음 상기 오일/계면활성제/보조계면활성제 혼합물을 (초음파 분해하에) 일정하고 완전한 혼합하에 적가에 의해 적절한 양의 증류수로 정량하여 투명한 마이크로에멀젼을 형성한다. 1%w/v 소디움 글리코콜레이트(SGC; Sigma-Aldrich)는 충분한 양의 상기 염기성 마이크로에멀젼에 SGC 1그램을 용해하여 100mL을 만들어 제조한다. 디아제팜을 포함하는 마이크로에멀젼은 충분한 양의 1% SGC(w/c)/ME에 상기 약물 분말(예, 2g, 4g, 및 6g)을 용해하여 총 100mL의 투명 약물 마이크로에멀젼 제조물을 제조한다.

본 발명의 경비 항경련성 약학 조성물의 사용은 약물의 투여를 현저히 촉진한다. 비경구 투여와 비교하여, 예컨대, 단순 스프레이어(sprayer), 점적기(dropper), 또는 분무기(nebulizer)가 특히 간질의 급성 경련성 발작 현상의 응급 처리를 위한 약제의 신속하고, 편리한 전달을 충족시킬 것이다. 임상적 관점으로부터, 경비내 투여는 종종 항경련성 효과의 지속성을 개선시킨다. 본 발명에 따른 상기 제제의 1회 투여 및 다중 투여를 통하여 더욱 효과적이고, 정확한 제어가 가능하게 된다. 본 발명이 모델 화합물로서 항경련제에 대하여 기술하고 있을지라도, 본 발명은 또한, 사람 및 동물의 점막 투여에 적용할 수 있는 다른 생물학적 활성제에도 적용가능하다.

도 1은 기존 디아제팜 제제 및 본 발명에 따른 디아제팜 제제의 정맥내(i.v) 및 경비투여후 약물동력학 프로파일을 나타낸 것이다.

도 2는 본 발명에 따른 디아제팜 경비투여 제제의 정맥내(i.v) 및 경비투여후 토끼의 뇌 부위별 디아제팜의 농도를 나타낸 것이다.

이하 실시예를 통하여 본 발명을 보다 상세히 설명한다. 이는 본 발명의 실시의 특정 방식의 기술이고, 첨부된 청구항의 범위를 제한하는 것으로 의도하지 않는다.

실시예

실시예 1: 시험관내 비점막 투과 연구( in vitro nasal mucosal membrane permeation studies)

시험관내 연구에서 사용된 비 점막은 뉴질랜드 화이트 토끼(New Zealand White rabbit)(2.5 내지 3.0㎏)로부터 얻는다. 토끼는 펜토바비탈 소디움의 정맥 주사로 희생시킨다. 비 격막을 외과용 가위 및 뼈-절단 톱을 사용하여 뼈 블록으로부터 조심스럽게 제거한다. 비 점막의 두 조각을 상기 막 표면의 중앙을 건드리지 않고, 상기 비 격막으로부터 조심스럽게 벗기고, 표준 생리식염수 용액으로 세척한다. 상기 점막을 유리 확산 시스템의 셀 사이에 끼운다. 비점막의 노출된 영역은 대략 0.196㎠ 이었다. 시험 용액 또는 현탁액(3.5㎖)을 상기 공여체 구획에서 막의 점막 면에 도입하는 반면, 10% 에탄올, 40% 프로필렌 글리콜, 및 50% pH 7.4 등장성 인산 완충액 3.5㎖을 상기 수용체 구획에 첨가한다. 상기 전체 확산 시스템은 실험 전체를 통하여 37℃로 유지시킨다. 미리 정해진 시간 간격에서, 상기 수용체 용액의 100㎕를 분석을 위해 회수하고, 동일한 부피의 신선한 수용체 배지로 재충전하여 상기 부피를 일정하게 유지시킨다. 상기 정상-상태(steady-state) 플럭스 값은 시간의 함수로서 투과된 약물의 축적 양의 그래프로부터 얻어진 직선의 경사로부터 측정된다. 각 실험은 적어도 2회 실시된다.

수용체 배지에 포함되어 있는 디아제팜의 양을 측정하기 위하여 다중-용매 전달 시스템이 장착된 고압 액체 크로마토그라피 시스템(Model 600E, Waters Associates, Milford, MA, USA), 자동-주사기(Model 717 Plus, Waters Associates), 포토다이오드 어레이 감지기(Model 996, Waters Associates), 역상 대칭 C₁₈ 컬럼(150mm×3.9㎜ ID, 5㎛), 및 밀레니엄 2010 소프트웨어 컴퓨터 시스템이 본 연구에서 사용되었다. 디아제팜의 분석을 위해 사용된 상기 이동상 및 UV 파장이 각각 254nm에서 70% 메탄올, 30% 물; 252nm에서 60% 메탄올, 40% 물; 및 262nm에서 25% 아세토니트릴, 및 75% 물이었다. 이 실험방법은 실시예 3에 사용된다.

실시예 2 : 디아제팜 제제의 제조

토끼의 경점막 투과도 비교를 위해 미국특허 제 6,627,211호의 경비용 제제(제형 1) 및 본 발명의 비히클 시스템을 사용하여 마이크로에멀젼 제제(제형 2)를 제조하였다. 상기 제제 모두 동일한 중량의 디아제팜이 포함되도록 하였다.

경점막 투과 실험을 위하여, 미국특허 제 6,627,211호의 디아제팜 제제는 30% 에탄올(ETOH), 60% 프로필렌 글리콜(PG), 및 10% 물(WT)로 이루어진 공-용매 비히클에 소디움글리코콜레이트 1%를 첨가하고 여기에 디아제팜 1%를 첨가하여 제조하였다(제형 1). 본 발명의 마이크로에멀젼 비히클 시스템(표 1)을 사용하여 1% 디아제팜이 포함된 제제를 제조하였다(제형 2). 카프릴로 카프로일 마크로골-8-글리세라이즈는 가테포스(Gattefosse, Westwood, NJ, USA)사의 제품으로 Labrasol을 사용하였으며, 디에틸 글리콜 모노에틸 에테르는 가테포스(Gattefosse, Westwood, NJ, USA)사의 제품으로 Transcutol P를 사용하였고, 에틸라우레이트, 에탄올과 소디움글리코콜레이트를 포함하는 다른 시약들은 Sigma Chemical로부터 구입하였다.

[표 1] 제형 2의 조성

성분	함량(wt%)
카프릴로카프로일 마크로골-8-글리세라이즈	25.0
디에틸 글리콜 모노에틸 에테르	37.5
에틸라우레이트	15.0
에탄올	12.5
증류수	10.0
소디움 글리코콜레이트	1.0

실시예 3

본 실시예는 새로이 절개된 비막을 통하여 디아제팜의 시험관내 투과에 대한 실험이다. 이 연구에서 상기 미국 특허 제 6,627,211호에 제시된 경비용 제형 1과 본 발명에 따른 제형 2의 경점막 투과도를 비교하였다.

[표 2] 경비투여 제형의 경점막 투과율

제형	투과율 Jss(ug/㎠/hr)
제형 1 (미국특허 제 6,627,211)	89.7 ± 10.1
제형 2 (본 발명의 비히클)	196.6 ± 4.9

실시예 4: 디아제팜 제제의 제조

디아제팜을 포함하는 본 발명의 제제의 생체이용률이 뉴질랜드 화이트 토끼(n=3-4)에 경비내 적용 후 시험되었다. 비교를 위해 디아제팜이 1mg/Kg의 투여량 으로 정맥내로 투여 후 생체내에서 조사되었다. 이 주사제형은(10㎎/2㎖)을 Elkins-Sinn, Inc.(Cherry Hill, NJ, USA)로부터 구매하였고, 이를 프로필렌 글리콜(0.4㎖), 알코올(0.1㎖), 벤질 알코올(0.015㎖), 소디움 벤조에이트/벤조산(50㎎), 및 주사를 위한 충분한 양의 물로 제조하여 1㎖을 만들었다(제형 3).

비교를 위하여 미국특허 제 6,627,211호의 경비용 제제(제형 4, 디아제팜 2%), 미국특허출원 제 2005-0002987 A1호의 경비용 제제(제형 5, 디아제팜 4%), 본 발명의 비히클 시스템을 사용하여 마이크로에멀젼 제제(제형 6, 디아제팜 6%)를 제조하였다. 상기 제제 모두 최대의 용해도를 보이는 중량의 디아제팜이 포함되도록 하였다.

경점막 투과 실험을 위하여, 미국특허 제 6,627,211호의 디아제팜 제제는 30% 에탄올(ETOH), 60% 프로필렌 글리콜(PG), 및 10% 물(WT)로 이루어진 공-용매 비히클에 소디움글리코콜레이트 1%를 첨가하고 여기에 디아제팜 2%를 첨가하여 제조하였다(제형 4). 또한 미국특허출원 제 2005-0002987 A1호의 디아제팜 제제는 실시예의 배합물 A에 따라 에틸라우레이트 15%, 폴리소르베이트-80 23.3%, 프로필렌글리콜 23.3%, 에탄올 23.4%, 물 15%로 이루어진 마이크로에멀젼 비히클에 디아제팜 4%를 첨가하여 제조하였다(제형 5). 본 발명의 마이크로에멀젼 비히클 시스템(표 1)을 사용하여 6% 디아제팜이 포함된 제제를 제조하였다(제형 6).

실시예 5: 디아제팜 제제의 생체이용률

실험하기 바로 직전에, 토끼(n=3-4)를 무게를 재고, 토끼를 실험틀에 고정 시켰다. 정맥주사 투여를 위해서 각 토끼(n=3)에게 20초 동안 귀-정맥 주입으로서 제형 3를 디아제팜이 1mg/kg이 되도록 투여하였다. 경비 투여를 위해서는 각 토끼에게 각 콧구멍으로 제형 4, 5, 6을 디아제팜이 2mg/Kg이 되도록 5초 내로 파이퍼(Pfeiffer) 스프레이 장치로 분사하였다.

혈액 샘플(1㎖)을 상기 정맥주사 및 경비 투여 후, 0, 2, 5, 10, 20, 30, 45, 60, 및 120분에 토끼의 귀 정맥으로부터 수집하였다. 상기 혈액 샘플로부터, 혈장을 원심분리에 의해 분리하고, 분석할 때까지 -20℃에서 저장/보관하였다.

분석을 위해, 혈장 샘플(0.5㎖)을 정확하게 1.5㎖ 폴리프로필렌 원심분리관에 옮겼다. 상기 혼합물을 30초 동안 볼텍스(vortex)하고, 4000 rpm에서 10분 동안 원심분리하였다. 디아제팜의 상기 혈장내 농도를 HPLC로 분석하였다. 상기 분석을 실시예 1에 기술된 바와 같이 Wasters HPLC로 실시하였다. 본 연구에서 사용된 컬럼은 3.9mm × 150mm × 5㎛ 대칭성 C₁₈컬럼이다. 상기 이동상은 부피로 50% 메탄올, 10% 아세토니트릴, 40% pH 3.5 인산완충액이다. 상기 이동상의 유속은 1㎖/분이고, UV 검출은 229 nm에서 이루어진다. 디아제팜에 대한 검출 제한은 15 ng/mL이었다. 0에서 60분까지 약물 혈장 농도-시간 곡선 하의 영역(AUC)은 직선 트라페조 이달(trapezoidal) 방법으로 계산되었다.

본 방법으로 얻어진 생체이용률을 하기 표 3에 나타낸다. 1회 정맥 투여 제제(제형 3) 및 상기 통상적인 선행 기술에 따른 디아제팜 경비투여 제형 4 및 5와 본 발명의 투여 제제(제형 6)의 경비 투여한 결과의 생체이용률과 약물동력학(pharmacokinetic) 프로파일이 도 1에 도시된다.

표 3에 표시한 대로 제형 4의 생체이용률이 제형 6보다 높지만, 발명의 상세한 설명에서 기술한 것처럼, 제형 4의 최대 디아제팜 용해도는 2% 정도이고, 제형 5의 최대 디아제팜 용해도는 4% 정도이며, 제형 6의 최대 디아제팜 용해도는 6%이므로, 제형 4와 제형 5은 효과를 나타내기 위해서는 2회이상의 경비투여가 필요하지만, 제형 6은 한 번의 경비투여를 통해서 효과를 나타낼 수 있어서 상품화에 제형 6이 훨씬 유리하다.

[표 3] 경비투여 제형의 1시간 동안의 생체이용률

제형	생체이용률 (F, %)^b
제형 3 (주사제형, 정맥주사)^a	100
제형 4 (미국특허 제 6,627,211호)	65.0
제형 5 (미국특허출원 2005-0002987 A1)	50.3
제형 6 (본 발명의 비히클)	56.2

^a 정맥 제형 3: 0.5% 디아제팜 주사, USP, Elkins-Sinn, Inc,

(주사용 PG/ETOH/벤질 알코올/소디움 벤조에이트/벤조산/물)

^b AUC : Area under curve, 1hr동안의 면적

하기 등식을 사용하여 측정된 표준 데이터

F= AUC_IN, ₂ _mg _{, 1} _hr/(2×AUC_{Ⅳ, 1} _mg _{, 1} _hr)×100

실시예 6: 토끼의 뇌 부위별 디아제팜의 분포 연구

실험하기 바로 직전에, 토끼를 무게를 재고, 토끼를 실험틀에 고정시킨다. 전체 토끼수는 30마리로 정맥주사 그룹과 경비투여그룹으로 각 15마리씩 나누었다. 정맥주사 투여그룹에는 제형 3을 디아제팜이 1mg/kg이 되도록 토끼(n=3)에게 20초 동안 귀-정맥을 통하여 주입하며, 토끼 3마리씩 5개 그룹을 준비하고, 경비 투여그룹에서는 각 토끼에게 각 콧구멍으로 제형 6을 디아제팜이 2 mg/Kg이 되도록 5초 내로 파이퍼(Pfeiffer) 스프레이 장치로 분사하여, 5개 그룹을 준비하였다. 뇌 샘플은 정맥주사(제형 3) 및 경비투여(제형 6) 후, 5, 10, 20, 40, 60분에 각각 분리하였다. 각 샘플링 시간마다 3마리씩 토끼를 사용하였다.

혈장(plasma) 샘플은 3 ml씩 동일한 시간에 토끼의 귀로부터 채취되었으며, 그 후, 토끼를 희생시키고, 뇌척수액(CSF, cerebral spinal fluid) 1ml을 뇌조천자(cisternal puncture) 기술을 이용하여 채취하였다. 그 후 두개골로부터 뇌를 분리한다. 분리된 뇌는 빠르게 생리식염수로 씻어서, 엉겨있는 피를 제거하고, Kimberly-Clarks wipe로 닦고 나서, 바로 -40℃에서 분석할 때까지 보관하였다.

분석을 위하여 토끼의 뇌는 후각망울(olfactory bulb, OB), 후각로(olfactory tract, OT), 대뇌 전두엽(anterior section of cerebrum, CB1), 대뇌두정엽(middle section of cerebrum, CB2), 대뇌 후두엽 (posterior section of cerebrum, CB3), 소뇌(cerebellum, CL)의 6개의 부위로 구분하였다.

분리된 뇌 부위는 전두엽, 두정엽, 후두엽 (Cerebrum)이 전체 뇌의 72.4%를 차지하고, 소뇌(cerebellum)가 20.3%를 차지한다. 그 외 후각로(olfactory tract)가 4.7%를 차지하고, 후각망울(olfactory bulb)이 2.6%를 차지한다. 토끼(2.5~3Kg) 마다 전체 뇌의 무게는 7~10그람으로 전체 무게의 0.3% 정도를 차지한다. 정확한 분석을 위하여, 세심하게 부위별로 분리하였으며, 각 부위의 뇌무게는 ±0.1mg의 오차까지 무게를 측정하였다.

혈장(plasma), 뇌척수액(CSF), 뇌조직(brain tissue) 샘플로부터 고상추출법(Solid phase extraction, SPE)을 사용하였으며, 이 과정에서 Oasis-HLB catridge를 사용하여 디아제팜을 추출하였다.

혈장, 뇌척수액, 뇌조직 샘플에서의 디아제팜의 함량을 결정하기 위하여, LC/MS(Perkin Elmer Sciex API 150EX mass spectrometer)가 사용되었다. 5번의 샘플링 시간중 두번째인 10분후 토끼의 혈장, 뇌척수액, 뇌조직에서의 디아제팜의 농도는 도 2와 같다.

도 2에 나타낸 바와 같이 정맥주사와 경비투여후 10분이면, 디아제팜이 유사한 농도에 도달함을 알 수 있다.

실시예 7: 화학적 안정성 연구

본 발명에 따른 약제학적 조성물 중 약제의 안정성을 확인하기 위하여 진행된 안정성 연구는 실시예 4의 제형 6을 대상으로, 20주에 걸쳐서 7℃, 25℃, 45℃의 저장 온도에서 실시하였다.

정해진 시간 간격 동안, 샘플링을 하여, 실시예 1의 HPLC방법을 사용하여, 디아제팜의 농도를 측정하였다. 약물 회복의 관점에서 측정된 화학적 안정성 자료를 표 4에 나타내었다.

[표 4] 본 발명 제형(제형 6)에서 디아제팜의 화학적 안정성 확인 연구 결과

시간 (주)	잔류량(%, 7^oC)	잔류량(%, 25^oC)	잔류량(%, 45^oC)
시작점(0시간)	100.0	100.0	100.0
1	100.5	100.1	100.3
2	100.6	100.7	100.4
3	100.4	100.3	100.2
4	100.0	100.2	100.0
6	100.9	100.1	100.1
8	100.7	100.4	100.3
20	100.2	100.1	99.9

상기 표 4에 따르면, 본 발명의 디아제팜 경비투여 제형은 20주 동안, 7℃, 25℃, 45℃의 저장 온도에서 안정함을 확인하였다.

통상적인 선행 기술 미국특허 제 6,627,211호와 미국특허출원 제2005- 0002987 A1호의 경비 항경련성 조성물은 디아제팜의 유효농도에 도달하기 위해서는 2회 이상의 반복투여가 필요하였지만, 본 발명의 경비 항경련성 조성물은 1회 투여로 디아제팜의 유효농도에 도달할 수 있어, 환자의 사용 편의성을 크게 증진시켰다는 데 본 발명의 의의가 있다.

본 발명에 따른 경점막 운반용 항경련성 약학 조성물은 물과 에탄올의 함량을 최소화하고, 지방산 에스테르를 주성분으로 하며, 디에틸렌글리콜 모노에틸에테르를 포함하며, 소량의 물과 에탄올을 사용함으로써 향상된 디아제팜의 용해도 및 경점막 투과도를 갖는다.

본 발명의 바람직한 구현은 예시적인 목적으로 설명되었지만 당해 기술분야의 숙련자는 첨부된 청구범위에 개시된 본 발명의 범위 및 정신을 벗어나지 않고 다양한 변형, 첨가 및 치환이 가능함을 인식할 것이다.

Claims

활성성분으로 디아제팜을 함유하고, 물, 지방산 에스테르, 디에틸렌글리콜 모노에틸에테르, 에탄올 및 소디움글리코콜레이트를 포함하며, 상기 지방산 에스테르의 중량은 물의 중량보다 적어도 2배 이상이며, 에탄올의 중량보다 적어도 2배 이상인 것을 특징으로 하는 경비 항경련성 약학 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 디아제팜은 조성물 전체 중량의 0.1 내지 10.0중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 지방산 에스테르는 카프릴로 카프로일 마크로골-8-글리세라이즈, 에틸라우레이트 및 이들의 조합으로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 지방산 에스테르는 조성물 전체 중량의 약 30중량%이상으로 포함되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제 4항에 있어서, 상기 지방산 에스테르는 조성물 전체 중량의 35 ~ 45중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제 5항에 있어서, 상기 지방산 에스테르는 조성물 전체 중량의 약 38 내지 42중량%로 포함되며, 상기 지방산 에스테르는 카프릴로카프로일 마크로골-8-글리세라이즈와 에틸라우레이트가 4.5:3.5 내지 5.5:2.5 중량비로 혼합된 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 소디움글리코콜레이트는 조성물 전체 중량의 0.5 내지 1.2중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 디아제팜 약 4-6중량%, 물 8-12중량%, 지방산 에스테르 35-45중량%, 디에틸렌글리콜 모노에틸에테르 30-45중량% 및 에탄올 12-17중량%로 이루어진 것을 특징으로 하는 약학 조성물.
경련으로 고통받는 환자에게 치료학적으로 유효한 양의 제 1항의 약학 조성물을 투여하는 것을 포함하는 경련을 치료하는 방법.
제 9항에 있어서, 상기 디아제팜은 조성물의 총 중량으로 약 0.1 내지 10.0중량%의 양으로 약학 조성물에 함유되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 9항에 있어서, 상기 지방산 에스테르는 카프릴로카프로일 마크로골-8-글리세라이즈, 에틸 라우레이트 및 이들의 혼합물로 구성되는 그룹으로부터 선택되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 9항에 있어서, 상기 지방산 에스테르는 조성물의 총 중량으로 약 30중량% 이상의 양으로 약학 조성물에 함유되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 12항에 있어서, 상기 지방산 에스테르는 조성물의 총 중량으로 약 35-45중량%의 양으로 약학 조성물에 함유되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 13항에 있어서, 상기 지방산 에스테르는 조성물의 총 중량으로 약 38-42중량%의 양으로 약학 조성물에 함유되며, 상기 지방산 에스테르는 카프릴로카프로일 마크로골-8-글리세라이즈와 에틸라우레이트가 4.5:3.5 내지 5.5:2.5 중량비로 혼합된 것을 특징으로 하는 방법.
제 9항에 있어서, 상기 소디움 글리콜레이트는 조성물의 총 중량으로 약 0.5-1.2중량%의 양으로 약학 조성물에 함유되는 것을 특징으로 하는 방법.
제 9항에 있어서, 상기 조성물은 디아제팜 약 4-6중량%, 물 약 8-12중량%, 지방산 에스테르 약 35-45중량%, 디에틸렌 글리콜 모노에틸 에테르 약 30-45중량% 및 에탄올 약 12-17중량%로 구성되는 것을 특징으로 하는 방법.