KR20090076536A - Essential oil of lotus flower extract for treating dermatological diseases and method for preparing the same - Google Patents

Essential oil of lotus flower extract for treating dermatological diseases and method for preparing the same Download PDF

Info

Publication number
KR20090076536A
KR20090076536A KR1020080002544A KR20080002544A KR20090076536A KR 20090076536 A KR20090076536 A KR 20090076536A KR 1020080002544 A KR1020080002544 A KR 1020080002544A KR 20080002544 A KR20080002544 A KR 20080002544A KR 20090076536 A KR20090076536 A KR 20090076536A
Authority
KR
South Korea
Prior art keywords
lotus
essential oil
extract
hexane
skin diseases
Prior art date
Application number
KR1020080002544A
Other languages
Korean (ko)
Inventor
이애영
김난형
Original Assignee
동국대학교 산학협력단
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by 동국대학교 산학협력단 filed Critical 동국대학교 산학협력단
Priority to KR1020080002544A priority Critical patent/KR20090076536A/en
Publication of KR20090076536A publication Critical patent/KR20090076536A/en

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K36/00Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
    • A61K36/18Magnoliophyta (angiosperms)
    • A61K36/185Magnoliopsida (dicotyledons)
    • A61K36/62Nymphaeaceae (Water-lily family)
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C11ANIMAL OR VEGETABLE OILS, FATS, FATTY SUBSTANCES OR WAXES; FATTY ACIDS THEREFROM; DETERGENTS; CANDLES
    • C11BPRODUCING, e.g. BY PRESSING RAW MATERIALS OR BY EXTRACTION FROM WASTE MATERIALS, REFINING OR PRESERVING FATS, FATTY SUBSTANCES, e.g. LANOLIN, FATTY OILS OR WAXES; ESSENTIAL OILS; PERFUMES
    • C11B9/00Essential oils; Perfumes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K2236/00Isolation or extraction methods of medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicine
    • A61K2236/30Extraction of the material
    • A61K2236/35Extraction with lipophilic solvents, e.g. Hexane or petrol ether

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Natural Medicines & Medicinal Plants (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Alternative & Traditional Medicine (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Medical Informatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)
  • Cosmetics (AREA)

Abstract

A Nelumbo nuficera extract having treatment effect on dermatitis is provided to promote melanogenesis, enhance tyrosinase activity and prevent and treat pigmentary disorder. A Nelumbo nuficera extract is isolated with n-hexane and have treatment effect on pigmentary disorder including vitiligo, white lentigo, depigmentation after inflammation, and photosensitive skin disorder. The Nelumbo nuficera is petals or stamens of Nelumbo nuficera. A Nelumbo nuficera extract essential oil is obtained by extracting and filtering the Nelumbo nuficera with n-hexane, evaporating at 40~60°C and removing hexane in vacuum. The essential oil comprises palmitic acid, linoleic acie, and their methyl ester. A therapeutic composition of pigmentary skin disorder comprises the essential oil of Nelumbo nuficera extract or palmitic acid methyl ester.

Description

피부병 치료 효과를 가지는 연꽃 추출물 및 그의 제조방법{Essential oil of lotus flower extract for treating dermatological diseases and method for preparing the same} Essential oil of lotus flower extract for treating dermatological diseases and method for preparing the same}

본 발명은 피부병 치료 효과를 가지는 연꽃 (Nelumbo nuficera) 추출물 및 그의 정유, 그들의 제조방법 그리고 피부병 치료제로서의 용도에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 연꽃을 헥산으로 추출하여 얻은 연꽃 추출물 및 그의 정유 (lotus flower essential oil) 및 (1) 연꽃의 꽃잎 또는 수술을 헥산으로 추출하고; (2) 여과하여 헥산을 제거한 다음; (3) 디메틸설포옥사이드에 녹이는; 과정으로 연꽃 추출물의 정유를 얻는 제조방법 그리고 이를 백반증 등을 포함하는 색소관련 피부질환의 예방 또는 치료에 사용하는 용도에 관한 것이다. The present invention is a lotus ( Nelumbo) having a skin disease treatment effect nuficera ) extract and its essential oils, methods for their preparation and use as a therapeutic agent for skin diseases, more specifically lotus extract obtained by extracting lotus flower with hexane and its essential oil (lotus flower essential oil) and (1) petals or stamens of lotus flower Extracted with hexane; (2) filtered to remove hexane; (3) dissolved in dimethylsulfooxide; The present invention relates to a method for obtaining essential oil of lotus extract as a process and to use the same for the prevention or treatment of pigment-related skin diseases including vitiligo and the like.

연꽃 (Nelumbo nuficera)은 노란색 꽃이 피는 다년생 수생 식물로서, 음식 재료로 널리 사용되고 있을 뿐만 아니라 아시아 동부지역 특히 중국에서 다양한 의약재로 사용되고 있다. 구체적으로, 연꽃의 씨앗은 조직 염증, 암 및 나병 치료 그리고 독약 등의 다양한 용도에 응용되고 있다. 또한, 연꽃의 배유아는 생체 내 (in vivo)에서 급성 염증을 완화시키고, 이의 근경은 항산화 효능을 가지는 것으로 보고되어 있다 (Jin-Tuarn L., Ying-Shu L., Chien-Jung L., Ann-Ru W., Food Chem. Tox., 45, 486-493 (2007); Dongmei et al., 2007). 또한 연꽃 잎은 지혈 작용을 가지는 전통 중국 의약품으로 사용되고 있고, 실험동물에서도 과지혈증을 완화시키는 것으로 알려져 있다 (la Cour et al., 1995). Lotus flower ( Nelumbo nuficera ) is a perennial aquatic plant with yellow flowers. It is not only widely used as a food ingredient but also as a medicinal herb in eastern Asia, especially in China. Specifically, the seed of the lotus has been applied to various uses such as tissue inflammation, cancer and leprosy treatment and poisons. In addition, lotus embryos have been reported to alleviate acute inflammation in vivo and their roots have antioxidant effects (Jin-Tuarn L., Ying-Shu L., Chien-Jung L., Ann-Ru W., Food Chem. Tox ., 45, 486-493 (2007); Dongmei et. al ., 2007). Lotus leaf is also used as a traditional Chinese medicine with hemostatic action and is known to relieve hyperlipidemia in experimental animals (la Cour et. al ., 1995).

이외에도 연꽃의 수술은 건조시키면 향기가 좋은 중국차 잎으로 만들어질 수 있고, 콩팥세포에서는 항산화 효과를 나타내는 것이 입증된 바 있다 (Jung et al., 2003). 또한, 베트남 등지에서는 연꽃의 꽃잎이 차잎의 향기를 돋우는 데 이용되기도 한다. 그러나 지금까지 연꽃이 멜라닌 형성에 영향을 미지는 것으로는 전혀 보고된 바가 없었다. In addition, the stamen of lotus flower can be made into fragrant Chinese tea leaves when dried, and has been shown to have antioxidant effect in kidney cells (Jung et al ., 2003). Also, in Vietnam, the petals of lotus flowers are used to enhance the aroma of tea leaves. However, until now, there has been no report that lotus affects melanin formation.

멜라닌세포 (melanocyte)는 멜라닌을 합성하여 피부표피세포 (keratinocyte)로 운반하는 과정을 통하여 태양광으로부터 피부를 보호하여 피부암을 예방하는 중요한 작용을 한다. 멜라닌은 티로시나제 (tyrosinase)를 포함하는 일련의 효소들에 의해 산화된 티로신으로부터 유래하고, 피부색을 결정하는 중요한 요소가 된다. 구체적으로, 멜라닌은 멜라닌 생산에 필요한 특이 효소들 (specific enzymes)을 포함하는 멜라노좀 (melanosomes) 내에서 합성되고, 이들 중 티로시나제 유전자 패밀리 (tyrosinase gene family)는 멜라닌 형성을 조절하는 데 중요한 역할을 수행한다. 이 티로시나제 유전자 패밀리에는 티로시나제, 티로시나제 관련 단백질 (TRP- 1), 마이크로프탈미아 관련 전사인자 M (MITF-M (microphthalmia-associated transcription factor M) 및 도파크롬 토토머라제 (dopachrome tautomerase) DCT 및 TRP-2 등이 포함되는 것으로 보고되어 있다. 먼저 티로시나제는 멜라닌 생합성 과정에서 속도를 조절 단계를 촉매하는 특이 효소이다. 또한 마이크로프탈미아 관련 전사인자 M 은 티로시나제 TRP-1 및 TRP-2의 발현을 조절하여 색소 침착 (pigmentation)에 관여하는 멜라닌세포 특이 전사인자이다 (Busca and Ballotti, 2000). Melanocytes play an important role in preventing skin cancer by protecting the skin from sunlight through the process of synthesizing melanin and transporting it to the skin epidermal cells (keratinocytes). Melanin is derived from tyrosine oxidized by a series of enzymes including tyrosinase and is an important factor in determining skin color. Specifically, melanin is synthesized in melanosomes containing specific enzymes necessary for melanin production, of which the tyrosinase gene family plays an important role in regulating melanin formation. do. This tyrosinase gene family includes tyrosinase, tyrosinase-related protein (TRP-1), microphthalmia-associated transcription factor M (MITF-M) and dopachrome tautomerase DCT and TRP-2. First, tyrosinase is a specific enzyme that catalyzes the rate regulation step in melanin biosynthesis, and microphthalmia-related transcription factor M also regulates the expression of tyrosinase TRP-1 and TRP-2. It is a melanocyte-specific transcription factor involved in pigmentation (Busca and Ballotti, 2000).

사람에게 있어서 기본적인 피부색은 유전적으로 결정되지만, 몇 가지 원인에 의해 피부색이 변화될 수도 있다. 피부색이 고르지 않는 것은 과다(hyper)색소 또는 과소색소로 인해 유발될 수 있는 데, 이는 많은 환자들에게 많은 스트레스를 줄 수 있다. 따라서, 이러한 과소 또는 과다 색소증을 예방하거나 치료하는 천연 의약품을 개발하는 것이 매우 필요한 실정이다. In humans, the basic skin color is genetically determined, but skin color can change for several reasons. Uneven skin color can be caused by hyper or underpigment, which can be very stressful for many patients. Therefore, it is very necessary to develop natural medicines for preventing or treating such under or hyperpigmentation.

이에 본 발명자들은 새로운 피부병 치료제를 개발하기 위하여 노력을 계속한 결과, 연꽃 (Nelumbo nuficera)을 헥산 추출하여 얻은 연꽃 추출물 및 그의 정유가 멜라닌 형성을 촉진하고 티로시나제의 효소 활성을 증진시키며 MITF-M 단백질 및 티로시나제의 발현을 유도하고 또한 이로부터 분리한 팔미트산 메틸에스테르 등도 동일한 효과가 있어 이들이 색소관련 피부질환의 예방 또는 치료에 사용될 수 있는 점을 확인함으로써 본 발명을 성공적으로 완성하였다. Accordingly, the present inventors have continued efforts to develop new skin disease treatments, and as a result, lotus ( Nelumbo Lotus extract and essential oils obtained by hexane extraction of nuficera ) promote melanin formation, enhance enzymatic activity of tyrosinase, induce the expression of MITF-M protein and tyrosinase, and the palmitic acid methyl esters isolated from them. The present invention was successfully completed by confirming that they can be used for the prevention or treatment of pigment-related skin diseases.

상기 연구는 대한민국 과학기술부에 의해 지원되는 21세기 프런티어 연구 프 록그램 중 줄기세포연구센터로부터 지원된 기금 (코드: SC3270)에 의해서 수행되었다. The research was carried out by a fund (code: SC3270) from the Stem Cell Research Center of the 21st Century Frontier Research Program supported by the Ministry of Science and Technology.

REFERENCESREFERENCES

1) Jin-Tuarn L., Ying-Shu L., Chien-Jung L., Ann-Ru W., Food Chem . Tox., 45, 486-493 (2007).1) Jin-Tuarn L., Ying-Shu L., Chien-Jung L., Ann-Ru W., Food Chem . Tox ., 45, 486-493 (2007).

2) Dongmei Y., Qiushuang W., Leqin K., Jianmei j., Tiejin Y., Asia Pac . J. Clin . Nutr., 16, 158-163 (2007).2) Dongmei Y., Qiushuang W., Leqin K., Jianmei j., Tiejin Y., Asia Pac . J. Clin . Nutr ., 16, 158-163 (2007).

3) la Cour B, Mølgaard P, Yi Z., J. Ethnopharmacol., 46(2), 125-129 (1995).3) la Cour B, Molgaard P, Yi Z., J. Ethnopharmacol ., 46 (2), 125-129 (1995).

4) Borgi W., Bouraoui A., Chouchane N., J. Ethpharm., 112(2), 228-231 (2007).4) Borgi W., Bouraoui A., Chouchane N., J. Ethpharm ., 112 (2), 228-231 (2007).

5) Yanlan B., Guolong Y., Hong L., Genwang Z., Zheng G., J. Argic . Food Chem., 54, 7672-7677 (2006).5) Yanlan B., Guolong Y., Hong L., Genwang Z., Zheng G., J. Argic . Food Chem ., 54, 7672-7677 (2006).

7) Oka M., Ichihashi M., Chakraborty AK., J. Invest . Dermatol., 106(2), 377-378 (1996). 7) Oka M., Ichihashi M., Chakraborty AK., J. Invest . Dermatol ., 106 (2), 377-378 (1996).

8) Takahashi H., Parsons PG., J. Invest . Dermatol., 98(4), 481-487 (1992).8) Takahashi H., Parsons PG., J. Invest . Dermatol ., 98 (4), 481-487 (1992).

9) Englaro W., Rezzonico R., Durand-ClM., Lallemand D., Ortonne JP., Ballotti R., J. Biol . Chem., 270(41), 24315-24320 (1995).9) Englaro W., Rezzonico R., Durand-ClM., Lallemand D., Ortonne JP., Ballotti R., J. Biol . Chem ., 270 (41), 24315-24320 (1995).

10) Roser B., Robert B., Pigment Cell Res., 13, 60-69 (2000).10) Roser B., Robert B., Pigment Cell Res ., 13, 60-69 (2000).

11) Bertolotti A., Melot T., Acker J., Vigneron M., Delattre O., Tora L., Mol . Cell Biol., 11) Bertolotti A., Melot T., Acker J., Vigneron M., Delattre O., Tora L., Mol . Cell Biol .,

18(3), 1489-1497 (1998).18 (3), 1489-1497 (1998).

12) Nishizuka Y., Science, 258(5082), 607-614 (1992). 12) Nishizuka Y., Science , 258 (5082), 607-614 (1992).

13) Sugimoto Y., Ueyama T., Phytochemistry., Jul 24; [Epub ahead of print](2007). 13) Sugimoto Y., Ueyama T., Phytochemistry., Jul 24; Epub ahead of print (2007).

14) Pawelek JM., Murray M., Cancer Res., 46(2), 493-497 (1986). 14) Pawelek JM., Murray M., Cancer Res ., 46 (2), 493-497 (1986).

15) Jung HA., Kim JE., Chung HY., Choi JS., Arch Pharm Res., 26(4), 279-285 (2003). 15) Jung HA., Kim JE., Chung HY., Choi JS., Arch Pharm Res ., 26 (4), 279-285 (2003).

16) Setaluri V., Pigment Cell Res., 13, 128134 (2002). 16) Setaluri V., Pigment Cell Res ., 13, 128 134 (2002).

17) Furumura M., Solano F., Matsunaga N., Sakai C., Spritz R. A., and Hearing V. J., Biochem . Biophys . Res . Commun., 242, 579585 (1998). 17) Furumura M., Solano F., Matsunaga N., Sakai C., Spritz RA, and Hearing VJ, Biochem . Biophys . Res . Commun ., 242, 579585 (1998).

18) Solano F., Martinez-Liarte J. H., Jimenez-Cervantes C., Garcia-Borron J. C., and Lozano J. A., Biochem . Biophys . Res . Commun., 204, 12431250 (1994). 18) Solano F., Martinez-Liarte JH, Jimenez-Cervantes C., Garcia-Borron JC, and Lozano JA, Biochem . Biophys . Res . Commun ., 204, 12431250 (1994).

19) Solano F., Jimenez-Cervantes C., Martinez-Liarte J. H., Garcia-Borron J. C., Jara J. R., and Lozano J. A. Biochem . J., 313, 447453 (1996). 19) Solano F., Jimenez-Cervantes C., Martinez-Liarte JH, Garcia-Borron JC, Jara JR, and Lozano JA Biochem . J. , 313, 447453 (1996).

20) Tsukamoto K., Jackson I. J., Urabe K., Montague P. M., and Hearing V. J., EMBO J., 11, 519526 (1992). 20) Tsukamoto K., Jackson IJ, Urabe K., Montague PM, and Hearing VJ, EMBO J. , 11, 519526 (1992).

21) Pawelek J. M., and Murray M., Cancer Res., 46, 493497 (1986). 21.Pawelek JM, and Murray M., Cancer Res ., 46, 493497 (1986).

22)Fang D., Kute T., and Setaluri V., Pigment Cell Res., 14, 132139 (2001). Fang D., Kute T., and Setaluri V., Pigment Cell Res ., 14, 132139 (2001).

23)Hornyak T. J., Hayes D. J., and Ziff E. B., J. Invest . Dermatol., 115, 106112 (2000).23) Hornyak TJ, Hayes DJ, and Ziff EB, J. Invest . Dermatol ., 115, 106112 (2000).

본 발명은 피부병 치료 효과를 가지는 연꽃 (Nelumbo nuficera) 추출물 및 그의 정유, 그들의 제조방법 그리고 그들의 피부병 치료제로 사용하는 용도를 제공하는 것을 목적으로 한다. The present invention is a lotus ( Nelumbo) having a skin disease treatment effect nuficera ) extract and its essential oils, their preparation and their use for the treatment of skin diseases.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 연꽃을 유기용매로 추출하여 얻은, 백반증, 흰점, 염증 후 탈색소, 백모, 광과민성 피부질환을 포함하는 색소관련 피부질환 치료효과를 가짐을 특징으로 하는 연꽃 추출물 (lotus flower extract)을 제공한다. 상기 유기용매로는 n-헥산을 사용하는 것이 바람직하고, 상기 연꽃은 건조된 형태의 연꽃 꽃잎 (petals) 또는 수술 (stamens)을 사용하는 것이 바람직하다. In order to achieve the above object, the present invention is a lotus extract, characterized in that it has a therapeutic effect on pigment-related skin diseases, including vitiligo, white spots, depigmentation after inflammation, white hair, photosensitivity skin diseases obtained by extracting the lotus flower with an organic solvent (lotus flower extract). It is preferable to use n-hexane as the organic solvent, and the lotus flower is preferably used in the dried petals (petals) or stamens (stamens).

또한, 본 발명은 연꽃을 n-헥산으로 추출하여 여과하고 헥산을 증발시킨 다음 다시 진공 상태에서 헥산을 완전히 제거하여 얻은, 백반증, 흰점, 염증후 탈색소, 백모, 광과민성 피부질환을 포함하는 색소관련 피부질환 치료효과를 가짐을 특징으로 하는 연꽃 추출물 정유 (essential oil of lotus flower extract)를 제공한다. 상기 연꽃은 건조된 형태의 연꽃 꽃잎 (petals) 또는 수술 (stamens)을 사용하 는 것이 바람직하다. 또한 상기 연꽃 추출물 정유는 팔미트산, 리놀레산, 팔미티올레산 및 리놀렌산 그리고 그들의 메틸 에스테르를 포함할 수 있다. In addition, the present invention is obtained by extracting the lotus flower with n-hexane, filtered and evaporated hexane and then completely removed hexane in vacuum, vitiligo, white spots, post-inflammatory depigmentation, white hair, pigments including photosensitive skin diseases It provides essential oil of lotus flower extract, which is characterized by having a therapeutic effect on skin diseases. The lotus is preferably used in the dried form of lotus petals (petals) or stamens (stamens). In addition, the lotus extract essential oil may include palmitic acid, linoleic acid, palmitoleic acid and linolenic acid and their methyl esters.

상기 연꽃 추출물 정유는 멜라닌 합성을 유도하고, 티로시나제의 효소 활성을 증가시키며, 또한 티로시나제 효소의 발현을 증진시키는 작용을 나타내므로, 특히, 멜라닌의 형성을 필요로 하는 백반증의 예방 또는 치료에 유용하다. 또한, 백반증 이외에도 티로시나제의 효소 활성을 증가시키거나 티로시나제 효소의 발현을 증진시키는 과정이 필요한 다양한 색소관련 피부질환들의 예방 또는 치료에 사용될 수 있다. 이러한 색소관련 피부질환에는, 흰점, 염증후 탈색소, 백모, 광과민성 피부질환을 포함할 수 있다. 상기 연꽃 추출물 정유에는 유효 성분으로서 팔미트산, 리놀레산, 파미토레산 및 리놀렌산 그리고 그들의 메틸 에스테르 중 선택된 하나 이상이 포함된다. The lotus extract essential oil induces melanin synthesis, increases the enzymatic activity of tyrosinase, and also enhances the expression of tyrosinase enzyme, and thus is particularly useful for the prevention or treatment of vitiligo, which requires the formation of melanin. In addition to vitiligo, it can be used for the prevention or treatment of various pigment-related skin diseases that require a process of increasing the enzyme activity of tyrosinase or enhancing the expression of tyrosinase enzyme. Such pigment related skin diseases may include white spots, post-inflammatory depigmentation, white hair, and photosensitive skin diseases. The lotus extract essential oil includes, as an active ingredient, one or more selected from palmitic acid, linoleic acid, palmitoleic acid and linolenic acid and their methyl esters.

또한, 본 발명은 (1) 연꽃을 n-헥산으로 추출하고; (2) 여과하여 헥산을 증발시킨 다음; (3) 다시 진공 상태에서 헥산을 완전히 제거하는; 과정으로 상기 연꽃 추출물 정유를 얻는 제조방법을 제공한다. In addition, the present invention (1) the lotus is extracted with n-hexane; (2) filtration to evaporate hexane; (3) completely removing hexane again in a vacuum; It provides a process for obtaining the lotus extract essential oil as a process.

상기 연꽃으로는 건조된 형태의 연꽃 꽃잎 또는 수술을 사용하는 것이 바람직하다. 또한, 상기 (1) 과정에서 n-헥산은 48 시간 내외로 상온에서 추출하는 것이 바람직하고, 상기 (2) 과정에서 n-헥산은 40-60℃ 에서 증발시키는 것이 바람직 하며, 상기 (3) 과정에서 n-헥산은 30분 내외 동안 진공 상태로 제거하는 것이 바람직하다. 또한, 상기 (3)과정을 거친 후, 상기 연꽃 추출물 정유는 디메틸설포옥사이드 (DMSO)에 녹이는 것이 바람직하고 필터링하여 사용하는 것이 바람직하다. As the lotus flower, it is preferable to use dried flower petals or stamens. In addition, n-hexane in the process (1) is preferably extracted at room temperature for about 48 hours, n-hexane in the process (2) is preferably evaporated at 40-60 ℃, process (3) N-hexane is preferably removed under vacuum for about 30 minutes. In addition, after the process (3), the lotus extract essential oil is preferably dissolved in dimethyl sulfooxide (DMSO) and is preferably used by filtering.

또한, 본 발명은 상기 연꽃 추출물 (lotus flower extract)을 유효 성분으로 함유하는 백반증, 흰점, 염증후 탈색소, 백모, 광과민성 피부질환을 포함하는 색소관련 피부질환 치료용 조성물을 제공한다. In addition, the present invention provides a composition for treating pigment-related skin diseases, including vitiligo, white spots, post-inflammatory depigmentation, white hair, photosensitivity skin diseases containing the lotus flower extract (lotus flower extract) as an active ingredient.

또한, 본 발명은 상기 연꽃 추출물 정유 (essential oil of lotus flower extract)를 유효 성분으로 함유하는, 백반증, 흰점, 염증후 탈색소, 백모, 광과민성 피부질환을 포함하는 색소관련 피부질환 치료용 조성물을 제공한다. In addition, the present invention provides a composition for treating pigment-related skin diseases, including vitiligo, white spots, post-inflammatory depigmentation, white hair, photosensitive skin diseases, containing the essential oil of lotus flower extract as an active ingredient. do.

본 발명은 상기 연꽃 추출물 또는 상기 연꽃 추출물 정유로부터 순수 분리한, 백반증, 흰점, 염증후 탈색소, 백모, 광과민성 피부질환을 포함하는 색소관련 피부질환 치료 효과를 가지는 팔미트산 및 그의 메틸 에스테르를 제공한다. The present invention provides palmitic acid and its methyl ester having a therapeutic effect on pigment-related skin diseases, including vitiligo, white spots, post-inflammatory depigmentation, white hair, photosensitive skin diseases, purely isolated from the lotus extract or the lotus extract essential oil. do.

또한, 본 발명은 상기 연꽃 추출물 또는 상기 연꽃 추출물 정유로부터 순수 분리한 팔미트산 및 그의 메틸 에스테르를 유효성분으로 함유하는 백반증, 흰점, 염증후 탈색소, 백모, 광과민성 피부질환을 포함하는 색소관련 피부질환 치료용 조성물을 제공한다. In addition, the present invention is a pigment-related skin containing vitiligo, white spots, depigmentation after inflammation, white hair, photosensitive skin diseases containing palmitic acid and its methyl ester as an active ingredient purely isolated from the lotus extract or the lotus extract essential oil Provided are compositions for treating diseases.

본 발명의 연꽃 추출물 또는 상기 연꽃 추출물 정유를 유효성분으로 함유하 는 피부질환 치료용 조성물은 해당 용도에 따라 약학적으로 허용 가능한 담체 또는 부형제와 함께 독립적으로 또는 약품 첨가제로 사용되거나 사람에게 투여하기 적합한 기타 모든 형태로 사용될 수 있다. 본 발명의 피부병 치료제용 약학적 조성물에 함유될 수 있는 담체로는 증량제, 고섬유 첨가제, 캡슐화제 및 지질 등이 포함될 수 있으며, 이러한 담체들의 예는 당업계에 충분히 공지되어 있다.The composition for treating skin diseases containing the lotus extract or the lotus extract essential oil of the present invention as an active ingredient may be used independently or as a pharmaceutical additive with a pharmaceutically acceptable carrier or excipient according to the intended use or suitable for administration to humans. It can be used in all other forms. Carriers that may be included in the pharmaceutical composition for treating dermatological diseases of the present invention may include extenders, high fiber additives, encapsulating agents, lipids, and the like, and examples of such carriers are well known in the art.

본 발명의 연꽃 추출물 또는 상기 연꽃 추출물 정유를 유효성분으로 함유하는 피부질환 치료제는 질환의 진행 정도, 나이, 성별, 신체 상태, 투여 기간, 투여 방법, 환자의 체중, 식사, 배출 속도 등에 따라 용량을 달리하여 투여될 수 있다. The therapeutic agent for skin diseases containing the lotus extract or the lotus extract essential oil of the present invention as an active ingredient may be administered according to the degree of disease progression, age, sex, physical condition, administration period, administration method, patient's weight, meal, discharge rate, and the like. It may be administered differently.

또한, 상기 연꽃 추출물 또는 상기 연꽃 추출물 정유로부터 순수 분리한 본 발명의 팔미트산 및 그의 메틸 에스테르 등을 유효성분으로 함유하는 피부질환 치료용 조성물도 상기 기술한 내용과 동일하게 사용되고 투여될 수 있다.In addition, the composition for treating skin diseases containing palmitic acid and its methyl ester of the present invention purely isolated from the lotus extract or the lotus extract essential oil as an active ingredient may be used and administered in the same manner as described above.

본 발명은 (1) 연꽃의 꽃잎 또는 수술을 헥산으로 추출하고; (2) 여과하여 헥산을 제거한 다음; (3) 디메틸설포옥사이드에 녹이는; 과정으로 연꽃 추출물의 정유를 제조하여, 상기 연꽃 추출물의 정유 및 이로부터 순수분리한 팔미트산 메틸에스테르 등은 멜라닌 형성 (melanogenesis)을 촉진시키고 티로시나제의 효소 활성을 증진시키며 관련 단백질들의 발현을 유도하여 멜라닌 함유량을 조절할 수 있으므로, 백반증을 포함한 각종 색소관련 피부질환들을 예방 또는 치료하는 데 효과적으로 사용될 수 있다. The present invention (1) extract the petals or stamens of the lotus with hexane; (2) filtered to remove hexane; (3) dissolved in dimethylsulfooxide; In the process of preparing the essential oil of the lotus extract, the essential oil of the lotus extract and palmitic acid methyl ester purified from it to promote melanogenesis (melanogenesis), enhance the enzymatic activity of tyrosinase and induce the expression of related proteins Since the melanin content can be adjusted, it can be effectively used to prevent or treat various pigment-related skin diseases including vitiligo.

이하, 실시예에 의하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples.

단, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐, 본 발명의 내용이 하기 실시예에 의해 한정되는 것은 아니다. However, the following examples are merely to illustrate the invention, but the content of the present invention is not limited by the following examples.

<< 실시예Example 1>  1>

연꽃 추출물 및 그의 정유 제조Manufacture of Lotus Extract and Its Essential Oils

본 발명에서는 꽃잎과 수술을 포함하는 연꽃 (Nelumbo nuficera)을 경기도 일산지역의 재래시장에서 구입하였다. 상기 연꽃은 건조되어 잘게 부서진 형태로 87 g 을 2 L 의 n-헥산을 사용하여 상온에서 48시간 동안 추출하고 다시 여과하였다. 이로부터 얻은 여과물은 50℃에서 헥산을 증발시킨 다음 상온의 진공 (in vacuo) 상태에 30분 동안 두어 헥산을 완전히 제거하였다. 그 결과, 노란색을 띠는 정유를 깨끗한 상태로 1.2 g을 얻었다. 이와 같이 얻은 연꽃 정유는 멜라닌 세포에 처리하기 전 디메틸설포옥사이드(DMSO)에 10 mg/ml 농도로 녹인 다음, 0.2 μm 주사기 필터를 사용하여 여과시켰다.In the present invention, the lotus flower including petals and stamens ( Nelumbo nuficera ) was purchased at a traditional market in Ilsan, Gyeonggi-do. The lotus was dried and crushed in 87 g of 2 g of n-hexane at room temperature for 48 hours and filtered again. Obtained from which the filtrate was completely removed in a vacuum for a couple of hexane of room temperature, and then evaporating the hexane in 50 ℃ (in vacuo) condition for 30 minutes. As a result, 1.2 g of yellow essential oil was obtained in a clean state. The lotus essential oil thus obtained was dissolved in dimethylsulfooxide (DMSO) at a concentration of 10 mg / ml before being treated with melanocytes, and then filtered using a 0.2 μm syringe filter.

<< 실시예Example 2> 2>

연꽃 추출물에 포함된 정유 성분 분석 (Analysis of Essential Oils Containing Lotus Extracts ( GCGC /Of MSMS 분석) analysis)

본 발명에서는 연꽃 추출물에 포함된 정유 성분들을 정성적 및 정량적으로 분석하기 위하여, 가스 크로마토그래피 및 질량 분석 (GC/MS)을 다음과 같이 실시하였다. 먼저 휴렛 팩커드 5890 기기 (Hewlett Packard 5890 series Ⅱ instrument)를 자동 질량 측정기 (Automass 50 (JEOL))에 연결하여 사용하였다. In the present invention, in order to qualitatively and quantitatively analyze the essential oil components included in the lotus extract, gas chromatography and mass spectrometry (GC / MS) were performed as follows. First, a Hewlett Packard 5890 series II instrument was used in connection with an automatic mass meter (Automass 50 (JEOL)).

작동 조건으로 컬럼은 실리카 모세관 컬럼이 융합되고 TC-왁스 (휴렛 팩커드)에 크기 60 m x 0.25 mm, 필름 두께 0.25 μm 인 것을 사용하고, 컬럼 온도는 150℃까지는 분당 5℃씩 올리고 300℃까지는 분당 15℃올려서 5분 동안 300℃에 이르도록 40 내지 300℃ 범위로 조정하였다. 또한, 주입기 180℃, 운반 가스 30 cm/s 유속의 질소, 컬럼 헤드 압력 180kPa, 주입 부피 0.5 ml, 이온화에너지 70eV, 이온 소스 온도 200℃ 등의 조건을 분석을 실시하였다. 이로부터 얻은 화학성분들은 MS 데이터 라이브러리 (NBS library)를 통해 보유시간 및 질량 스펙트럼을 비교하여 분석하였다. 각 성분의 상대 정량은 TIC 크로마토그램의 피크 면적을 계산하여 결정하였다. The operating conditions are that the column is fused with a silica capillary column and uses TC-wax (Hewlett Packard) with a size of 60 mx 0.25 mm and a film thickness of 0.25 μm, and the column temperature is increased to 5 ° C. per minute up to 150 ° C. and 15 per minute up to 300 ° C. The temperature was adjusted to 40-300 ° C. to raise to 300 ° C. for 5 minutes. In addition, the conditions of the injector 180 degreeC, the nitrogen of a carrier gas 30 cm / s flow rate, the column head pressure 180 kPa, the injection volume 0.5 ml, the ionization energy 70eV, the ion source temperature 200 degreeC, etc. were analyzed. The chemicals obtained were analyzed by comparing retention time and mass spectra with MS data library (NBS library). Relative quantification of each component was determined by calculating the peak area of the TIC chromatogram.

<< 실시예Example 3>  3>

연꽃 추출물 정유가 멜라닌 형성이 미치는 효과 조사Investigation of the effects of lotus extract essential oil on melanin formation

본 발명은 연꽃 추출물로부터 얻은 정유가 세포 배양된 인간 멜라닌세포에 미치는 효과를 MTT 분석법을 사용하고 멜라닌 함유량 등을 측정하여 조사하였다.In the present invention, the effect of essential oil obtained from lotus extract on human melanocytes cultured by cells was investigated by measuring the melanin content and the like using MTT assay.

(1) 인간 피부 (1) human skin 멜라닌세포의Melanocyte 배양 culture

본 발명에서는 인간 멜라닌세포를 얻기 위하여, 제왕절제 및 낙태 수술 시 떼어낸 피부 시료를 세포 배양에 사용하였다. 이 세포는 254 배지 (#M-254-500; Cascade Biologics, Portland, OR, US)에 소 뇌하수체 추출물, 우태아 혈청, 소 인슐린, 하이드로코티졸, bFGF 및 소 트랜스페린 (bovine transferrin; #S-001-5; Cascade Biologics, Portland, OR, USA), 헤파린, 포볼-12-미리스테이트 13-아세테이트 (phorbol-12-myristate 13-acetate; #S-002-5; Cascade Biologics, Portland, OR, USA)를 보충하여 만들고 여기에 상기 세포를 현탁시켰다. In the present invention, in order to obtain human melanocytes, skin samples removed during cesarean section and abortion surgery were used for cell culture. These cells were treated with bovine pituitary extract, fetal calf serum, bovine insulin, hydrocortisol, bFGF and bovine transferrin (# S-001-) in 254 medium (# M-254-500; Cascade Biologics, Portland, OR, US). 5; Cascade Biologics, Portland, OR, USA), heparin, pobol-12-myristate 13-acetate (phorbol-12-myristate 13-acetate; # S-002-5; Cascade Biologics, Portland, OR, USA) Supplemented and suspended cells therein.

(2) (2) MTTMTT 분석법 Method

본 발명에서는 멜라닌세포의 증식 여부를 조사하기 위하여, MTT 분석 키트(R & D Systems, Minneapolis, MN, USA)를 사용하고 각 시료의 흡광도를 파장 570 nm 에서 측정하였다. 상기에서 얻은 연꽃 추출물 정유를 멜라닌세포에 처리하고 이와 동시에 각 정유성분들 및 포스콜린 (forskolin) 10μM 처리군들 그리고 음성 대조군으로 나누어 MTT 분석을 실시하였다.In the present invention, in order to examine the proliferation of melanocytes, using the MTT assay kit (R & D Systems, Minneapolis, MN, USA) and the absorbance of each sample was measured at a wavelength of 570 nm. The lotus extract essential oil obtained above was treated with melanocytes, and at the same time, MTT analysis was performed by dividing each essential oil component, forskolin 10 μM treatment group, and a negative control group.

(3) 멜라닌 함유량 측정(3) melanin content measurement

상기에서 배양한 멜라닌세포의 멜라닌 함유량은 오카 등의 방법 (Oka et al., 1996)에 따라 측정하였다. 구체적으로, 세포 펠렛은 1 M NaOH 에 넣어 80℃ 로 가열하여 2시간 동안 녹이고 색의 변화를 파장 475 nm 에서 분석하였다. 동일한 수의 세포로부터 형성된 멜라닌의 실제 양을 구하기 위해 각 펠렛의 전체 멜라닌 양을 멜라닌세포의 수로 나누어 계산하였다. The melanin content of the melanocytes cultured above was measured according to the method of Oka et al. (Oka et al., 1996). Specifically, the cell pellet was dissolved in 1 M NaOH, heated to 80 ° C. for 2 hours, and analyzed for color change at wavelength 475 nm. To determine the actual amount of melanin formed from the same number of cells, the total melanin amount in each pellet was divided by the number of melanocytes.

(4) 연꽃 추출물 정유의 효과(4) Effect of Lotus Extract Essential Oil

본 발명의 연꽃 추출물 정유 (10μg/ml)를 처리하는 경우 멜라닌세포는 진한 갈색을 띠게 되고 이는 멜라닌의 형성이 증가되는 것과 상관 관계를 가지는 것을 조사하였다 (도 1A, lane 2 참조). 이러한 색소 침착은 아데닐 사이클라제 (adenylate cyclase)의 활성인자인 포스콜린 10μM을 처리한 효과와 유사하고 (Englaro et al., 1995), cAMP 경로는 멜라닌 형성에 있어 가장 주축이 되는 신호 전달 경로 중 하나이다. 그러나 포스콜린 또는 정유를 각각 처리한 경우 세포 펠렛의 크기에는 차이가 있어서, 포스콜린을 처리한 세포가 연꽃 추출물 정유를 처리한 세포보다 펠렛의 크기가 큰 것으로 관찰되었다 (도 1A). 따라서, 연꽃 추출물 정유는 멜라닌 함유량을 증가시킬 수 있지만 멜라닌세포의 수에는 전혀 영향을 미치지 않는 것을 알 수 있었다. Melanocytes became dark brown when treated with lotus extract essential oil (10 μg / ml) of the present invention, which was correlated with increased melanogenesis (see FIG. 1A, lane 2). This pigmentation is similar to the effect of treatment with 10 μM of phoscholine, an activator of adenyllate cyclase (Englaro et. al ., 1995), the cAMP pathway is one of the most important signaling pathways in melanin formation. However, when treated with phospholine or essential oil, there was a difference in the size of the cell pellet, it was observed that the cells treated with phospholine pellets larger than the cells treated with the lotus extract essential oil (Fig. 1A). Therefore, the lotus extract essential oil can increase the melanin content, but did not affect the number of melanocytes at all.

또한, 연꽃 추출물 정유가 멜라닌 형성 과정에 미치는 효과를 조사하기 위하여, 멜라닌세포를 각기 다른 4가지 농도 (1.25, 2.5, 5 및 10 μg/ml)로 처리하였다. 그 결과 멜라닌 함유량이 연꽃 추출물 정유를 처리함에 따라 용량 의존적으로 증가하는 것을 알 수 있었다 (도 1B) . 실제로 상기 정유 10 μg/ml 농도에서 각 세포의 멜라닌 함유량은 음성 대조군과 비교하여 2.1배에 달하였고, 이를 포스콜린 을 처리한 결과와 비교하더라도 더 높은 것을 확인할 수 있었다 (도 1B). 또한 모든 농도 하에서 세포수는 정유 처리에 따라 변화가 없었으나, 포스콜린을 처리하는 경우는 대조군과 비교하여 세포수가 증가하였다 (도 1B). 그 결과, 연꽃 추출물 정유는 멜라닌 형성을 증진시키지만 세포 증식에는 전혀 영향을 미치지 않는 것을 확인할 수 있었다. In addition, to investigate the effect of the lotus extract essential oil on the melanogenesis process, melanocytes were treated at four different concentrations (1.25, 2.5, 5 and 10 μg / ml). As a result, the melanin content was found to increase dose-dependently as the lotus extract essential oil was treated (FIG. 1B). In fact, the melanin content of each cell at the concentration of the essential oil 10 μg / ml reached 2.1 times compared to the negative control, it was confirmed that even higher compared to the result of treatment with forskolin (Fig. 1B). In addition, the cell number under all concentrations did not change according to the essential oil treatment, but when treated with phoscholine cell number increased compared to the control (Fig. 1B). As a result, it was confirmed that the lotus extract essential oil enhances melanin formation but does not affect cell proliferation at all.

<< 실시예Example 4> 4>

연꽃 추출물 정유가 Lotus extract essential oils 멜라닌세포의Melanocyte 특이 효소 발현에 미치는 효과 조사 Investigate effect on specific enzyme expression

본 발명의 연꽃 추출물 정유가 멜라닌 형성이 미치는 효과를 MITF, 티로시나제, TRP-1 및 TRP-2 단백질의 발현 정도를 웨스턴 블럿 및 RT-PCR 기술을 이용하여 측정하고 평가하였다. The effect of the melanin formation of the lotus extract essential oil of the present invention was measured and evaluated the expression level of MITF, tyrosinase, TRP-1 and TRP-2 protein using Western blot and RT-PCR technique.

RTRT -- PCRPCR

멜라닌세포의 전체 RNA는 QuickGene RNA cultured cell HC 키트 (Life Science, Minato-ku, Tokyo, Japan)를 이용하여 분리하였다. cDNA는 전체 RNA로부터 First Strand cDNA Synthesis Kit for RTPCR (AMV; Boehringer Mannheim, Germany)을 이용하여 합성하였다. Human glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH)가 대조군 유전자로 사용되었다.Total RNA of melanocytes was isolated using QuickGene RNA cultured cell HC kit (Life Science, Minato-ku, Tokyo, Japan). cDNA was synthesized from total RNA using First Strand cDNA Synthesis Kit for RTPCR (AMV; Boehringer Mannheim, Germany). Human glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) was used as a control gene.

MITF-M의 프라이머 서열은 포워드 프라이머: 5'-ATGCTGGAAATGCTAGAATATAAT-3', 리버스 프라이머: 5'-ATCATCCATCTGCATACAG-3'이고,   The primer sequence of MITF-M is forward primer: 5'-ATGCTGGAAATGCTAGAATATAAT-3 ', reverse primer: 5'-ATCATCCATCTGCATACAG-3',

TrP-1에 대한 프라이머 서열은 포워드 프라이머: 5'-TGGCAAAGCGCACAACTCACCC-3', 리버스 프라이머:5'-AGTGCAACCAGTAACAAAGCGCC-3이고,'  The primer sequence for TrP-1 is forward primer: 5'-TGGCAAAGCGCACAACTCACCC-3 ', reverse primer: 5'-AGTGCAACCAGTAACAAAGCGCC-3,

TrP-2에 대한 프라미어 서열은 포워드 프라이머: 5'-GCACACATGTAACCTCTGTG-3', 리버스 프라이머: 5'-TCATATAAGCAGGCTTGGCC-3'이고,   Primer sequence for TrP-2 is forward primer: 5'-GCACACATGTAACCTCTGTG-3 ', reverse primer: 5'-TCATATAAGCAGGCTTGGCC-3',

티로시나제에 대한 프라이머 서열은 포워드 프라이머: 5'-TTGGCATAGACTCTTCTTGT TGCGG-3', 리버스 프라이머: 5'-CAAGGAGCCATGACCAGATCCG-3'이고,   The primer sequence for tyrosinase is forward primer: 5'-TTGGCATAGACTCTTCTTGT TGCGG-3 ', reverse primer: 5'-CAAGGAGCCATGACCAGATCCG-3',

GAPDH에 대한 프라이머 염기서열은 포워드 프라이머: 5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3'이고, 리버스 프라이머: 5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3'이다.  The primer sequence for GAPDH is forward primer: 5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3 'and reverse primer: 5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3'.

피시알 증폭은 40 ul였으며, 그 구성은 10X버퍼, 2.5m MgCl2, 250 M dNTPs, 100 ng each PCR primer, 0.5 U Taq DNA polymerase, and 20-50 ng DNA와 같고, Thermal Cycler 9600 (Applied Biosystems, Foster city, CA, USA)을 이용하여 94도에서 1분, 55℃~62℃에서 1분, 72도에서 1분, 이렇게 하여 35-40 싸이클을 실시하였다. PCR에 의해서 증폭된 디엔에이 절편은 2% 아가로스겔 으로 전기영동하여 분리하였다.The apial amplification was 40 ul, and the composition was 10X buffer, 2.5m MgCl 2 , 250 M dNTPs, 100 ng each PCR primer, 0.5 U Taq DNA polymerase, and 20-50 ng DNA, and Thermal Cycler 9600 (Applied Biosystems , Foster city, CA, USA) was used for 1 minute at 94 degrees, 1 minute at 55 ° C to 62 ° C, 1 minute at 72 ° C, and thus 35-40 cycles were performed. The DNA fragments amplified by PCR were separated by electrophoresis on 2% agarose gel.

PCR 증폭 염기 서열PCR amplification sequences genegene forwardforward reversereverse size (bp)size (bp) Ta (Ta ( cyclecycle MITF-MMITF-M 5'-ATGCTGGAAATGCTAGAATATAAT-3' (서열번호 1)5'-ATGCTGGAAATGCTAGAATATAAT-3 '(SEQ ID NO: 1) 5'-ATCATCCATCTGCATACAG-3' (서열번호 2)5'-ATCATCCATCTGCATACAG-3 '(SEQ ID NO: 2) 300300 5858 4040 tyrosinasetyrosinase 5'-TTGGCATAGACTCTTCTTGTTGCGG-3' (서열번호 3)5'-TTGGCATAGACTCTTCTTGTTGCGG-3 '(SEQ ID NO: 3) 5'-CAAGGAGCCATGACCAGATCCG-3' (서열번호 4)5'-CAAGGAGCCATGACCAGATCCG-3 '(SEQ ID NO: 4) 812812 6262 4040 TRP1TRP1 5'-TGGCAAAGCGCACAACTCACCC-3' (서열번호 5)5'-TGGCAAAGCGCACAACTCACCC-3 '(SEQ ID NO: 5) 5'-AGTGCAACCAGTAACAAAGCGCC-3' (서열번호 6)5'-AGTGCAACCAGTAACAAAGCGCC-3 '(SEQ ID NO: 6) 10271027 5555 3535 TRP2TRP2 5'-GCACACATGTAACCTCTGTG-3' (서열번호 7)5'-GCACACATGTAACCTCTGTG-3 '(SEQ ID NO: 7) 5'-TCATATAAGCAGGCTTGGCC-3' (서열번호 8)5'-TCATATAAGCAGGCTTGGCC-3 '(SEQ ID NO: 8) 711711 5757 4040 GAPDHGAPDH 5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3' (서열번호 9)5'-TCCACCACCCTGTTGCTGTA-3 '(SEQ ID NO: 9) 5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3' (서열번호 10)5'-ACCACAGTCCATGCCATCAC-3 '(SEQ ID NO: 10) 400400 5555 3535

웨스턴Weston 블랏Blot 분석 analysis

BV 또는 포스콜린을 처리, 억제자를 처리 또는 비처리하여 배양한 멜라닌 세포를 50 mM Tris-base (pH 7.4), 150 mM NaCl, 10 mM EDTA, 0.1 % Tween-20 및 프로테아제 억제자를 포함하는 얼음같이 찬 균질화 완충용액에서 균질화 시켰다. 추출한 단백질(30 g)과 동일한 양을 10% SDS-PAGE를 통하여 용해시키고, 니트로세룰로스 멤브레인으로 이동시켰다. 10 mM Tris (pH 7.6), 150 mM NaCl 및 0.1% Tween-20를 포함하는 Tris-buffered saline (TTBS)에서 5% nonfat dry milk의 차단용액에서 배양한 후에, 멤브레인은 4℃에서 항-포스포-MAPK, MAPK, CREB, 포스포-CREB(rabbit polyclonal; Cell Signaling Technology, Beverly, MA), MITF(mouse monoclonal; Abcam, Cambridge, UK) 또는 티로시나제(rabbit polyclonal; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) 항체와 함께 밤새도록 배양하고, 차단용액에서 1:1000의 비율로 희석하였다. 멤브레인은 그리고나서 anti-rabbit 또는 anti-mouse horseradish peroxidase-conjugated antibody (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA)와 함께 더 배양되고, 향상된 화학발광용액(ECL kit; Amersham Life Science, Buckinghamshire, England)으로 처리하였다. 그리고나서, 신호는 Image Reader (LAS-3000; Fuji Photo Film, Tokyo, Japan)상에 포착되었다. 각 레인(lane)에 로드된 단백질 량을 모니터하기 위하여, 멤브레인은 mouse monoclonal anti-actin antibody (Sigma, St. Louis, MO, USA)로 재탐지(reprobe)되었고, 상기한 방식으로 진행하였다. 단백질 밴드는 농도계측기(densitometry)를 통하여 분석하였다. Cultured melanocytes treated with BV or forskolin, treated or untreated with inhibitors were like ice containing 50 mM Tris-base (pH 7.4), 150 mM NaCl, 10 mM EDTA, 0.1% Tween-20 and protease inhibitors. Homogenized in cold homogenization buffer. The same amount as the extracted protein (30 g) was dissolved via 10% SDS-PAGE and transferred to nitrocellulose membrane. After incubation in a blocking solution of 5% nonfat dry milk in Tris-buffered saline (TTBS) containing 10 mM Tris (pH 7.6), 150 mM NaCl and 0.1% Tween-20, the membrane was anti-phospho at 4 ° C. -MAPK, MAPK, CREB, phospho-CREB (rabbit polyclonal; Cell Signaling Technology, Beverly, MA), MITF (mouse monoclonal; Abcam, Cambridge, UK) or tyrosinase (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) overnight with antibodies and diluted 1: 1000 in blocking solution. The membrane is then further incubated with anti-rabbit or anti-mouse horseradish peroxidase-conjugated antibody (Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, CA, USA) and enhanced chemiluminescent solution (ECL kit; Amersham Life Science, Buckinghamshire, England) Treated with. The signal was then captured on an Image Reader (LAS-3000; Fuji Photo Film, Tokyo, Japan). To monitor the amount of protein loaded in each lane, the membranes were rerobed with mouse monoclonal anti-actin antibody (Sigma, St. Louis, MO, USA) and proceeded in the manner described above. Protein bands were analyzed by densitometry.

(1) (One) 티로시나제Tyrosinase 활성 분석 Activity analysis

티로시나제 활성은 기존의 타카하시 방법을 변형한 과정으로 DOPA 옥시다제 활성을 측정하여 분석하였다 (Takahashi et al., 1992). 먼저 세포를 PBS 완충용액으로 2번 세척하고 1% 트리톤 X-100 을 포함하는 인산완충용액으로 녹였다. 세포 추출물은 10,000 x g 로 10분 동안 원심분리하고 이로부터 맑은 상층액만을 분리하였다. 여기서 얻은 세포액은 단백질 수준을 브래드포드 방법으로 정량하여 분해 완충용액으로 농도를 조정한 다음, 각 분획 90μl을 96-웰 플레이트에 넣고 L-DOPA 용액 10μl을 첨가하였다. 그 결과 얻은 반응액은 37℃에서 반응시키고 ELISA 리더를 사용하여 적어도 1시간 이상 매 10분마다 475 nm 에서의 흡광도를 측정하였다.Tyrosinase activity was analyzed by measuring DOPA oxidase activity as a modification of the conventional Takahashi method (Takahashi et. al ., 1992). First the cells were washed twice with PBS buffer and dissolved in phosphate buffer containing 1% Triton X-100. The cell extract was centrifuged at 10,000 xg for 10 minutes and only the clear supernatant was separated therefrom. The cell solution obtained here was quantified by the Bradford method to adjust the concentration in the digestion buffer, and then 90 μl of each fraction was placed in a 96-well plate and 10 μl of L-DOPA solution was added. The resulting reaction solution was reacted at 37 ° C. and absorbance at 475 nm was measured every 10 minutes for at least 1 hour using an ELISA reader.

(2) 연꽃 추출물 정유가 멜라닌 형성에 미치는 효과 조사(2) Investigation of the effects of lotus extract essential oil on melanin formation

먼저 연꽃 추출물 정유를 10μg/ml 농도로 처리하는 경우, MITF-M 및 TRP-2 mRNA 발현이 2시간이 경과되는 시점까지 점진적으로 증가하는 반면 티로시나제 및 TRP-1 단백질의 발현은 거의 변화하지 않았다 (도 2B). 그러나 MITF-M 단백질 및 티로시나제 발현에 의한 단백질 수준은 배양 5일이 넘어서도 꾸준히 증가하였다 (도 2C). 따라서 MITF-M 단백질의 발현에 있어서는 mRNA 유도 및 단백질 발현이 상호 관련이 있고 티로시나제는 관련되지 않은 것을 알 수 있었다. First, when the lotus extract essential oil was treated at a concentration of 10 μg / ml, the expression of MITF-M and TRP-2 mRNA gradually increased until 2 hours, while the expression of tyrosinase and TRP-1 protein remained almost unchanged ( 2B). However, protein levels by MITF-M protein and tyrosinase expression increased steadily beyond 5 days of culture (FIG. 2C). Therefore, mRNA expression and protein expression correlated with the expression of MITF-M protein, and tyrosinase was not related.

또한, MITF-M 단백질의 발현을 조절하는 신호 전달 과정을 조사하여 이의 발현이 PKA 과 동시에 CREB 단백질 (cAMP response element binding protein)에 의해 상승 조절되는 것을 확인하였다 (Bertolotto et al., 1998a). 이외에도 CREB 단백질은 ERK 에 의해 활성화되는 것으로 보고되어 있다 (Englaro et al., 1995). 따라서, 인간 멜라닌세포에서 연꽃 추출물이 신호 전달 과정을 활성화하는지 여부를 조사하기 위하여, ERK 및 CREB 단백질의 인산화 정도를 인산특이 항체 (phosphospecific enzymes)를 사용하여 측정하였다. 이 때 멜라닌세포에는 연꽃 추출물에서 분리한 정유 10μg/ml을 처리하였다. In addition, by examining the signal transduction process that regulates the expression of MITF-M protein, it was confirmed that its expression is up-regulated by CREB protein (cAMP response element binding protein) simultaneously with PKA (Bertolotto et. al ., 1998a). In addition, CREB proteins have been reported to be activated by ERK (Englaro et. al ., 1995). Therefore, in order to investigate whether lotus extract activates signal transduction process in human melanocytes, phosphorylation degree of ERK and CREB proteins was measured using phosphospecific enzymes. At this time, the melanocytes were treated with essential oil isolated from lotus extract 10μg / ml.

그 결과, ERK 및 CREB 단백질의 인산화는 30분에 증가하고 이 수준이 상기 정유를 처리한지 2시간까지 유지되는 것을 알 수 있었다 (도 2A). 따라서 멜라닌세포에서 연꽃에 의해 유도된 MITF-M 단백질은 ERK 및 CREB 단백질의 활성화를 통해서 발현 유도되는 것을 확인하였다.As a result, it was found that phosphorylation of ERK and CREB proteins increased at 30 minutes and this level was maintained up to 2 hours after treatment with the essential oil (FIG. 2A). Therefore, it was confirmed that the MITF-M protein induced by lotus in melanocytes was expressed through activation of ERK and CREB proteins.

<< 실시예Example 5> 5>

연꽃 추출물 정유 내 성분 분석Analysis of Ingredients in Lotus Extract Essential Oil

본 발명에서는 멜라닌 형성에 영향을 미치는 주요 성분들을 조사하기 위하여, 연꽃 추출물 정유를 GC-MS 시스템을 사용하여 분석하였다. 하기 표 2에는 전체 정유함량의 약 0.7% 이상을 차지하는 9종의 화합물에 관하여 나타내고 있으며, 그 주요성분으로 메틸 헥사데카노에이트 (methyl hexadecanoate; palmitic acid methyl ester) 및 메틸 시스,시스,9,12-옥타데카디에노에이트 (methyl cis,cis, 9,12-octadeca dienoate; linoleic acid methyl ester)가 각각 22.66% and 11.16% 를 차지하는 것으로 분석되었다. 또한 포화지방산인 리놀레산 (linoleic acid)은 멜라노마 (melanoma) 세포 내에서 멜라닌 함량을 감소시키고, 불포화지방산인 팔미트산은 멜라닌 함량을 증가시키는 것으로 보고되어 있다 (Ando et al., 2004). 따라서 연꽃 추출물 정유에서 메틸기가 상기 지방산 모두에 부착하는 경우라도 팔미트산 메틸 에스테르가 많으면 멜라닌 형성이 증가될 수 있다.In the present invention, in order to investigate the main components affecting melanin formation, lotus extract essential oil was analyzed using the GC-MS system. Table 2 below shows nine compounds that occupy about 0.7% or more of the total essential oil content, the main components of which are methyl hexadecanoate (palmitic acid methyl ester) and methyl cis, cis, 9,12 Octadecadienoate (methyl cis, cis, 9,12-octadeca dienoate; linoleic acid methyl ester) accounted for 22.66% and 11.16%, respectively. Saturated fatty acid linoleic acid has been reported to reduce melanin content in melanoma cells, and palmitic acid as unsaturated fatty acid increases melanin content (Ando et al ., 2004). Therefore, even when the methyl group is attached to all of the fatty acids in the lotus extract essential oil, melanin formation may be increased when the palmitic acid methyl ester is large.

참고로, 팔미트산 메틸 에스테르 (methyl hexadecanoate)의 화학구조식은 다음과 같다.For reference, the chemical structural formula of methyl hexadecanoate is as follows.

Figure 112008001797411-PAT00001
Figure 112008001797411-PAT00001

연꽃 추출물 정유의 조성Composition of lotus extract essential oil 성분ingredient 머무름 시간(분)Retention time (minutes) 함량(%)content(%) HeptadecadieneHeptadecadiene 36.4736.47 1.231.23 8-Heptadecene8-Heptadecene 36.5736.57 1.131.13 HeptadecaneHeptadecane 36.8436.84 0.690.69 9-methylhexadecanoate (palmitioleic acid methyl ester)9-methylhexadecanoate (palmitioleic acid methyl ester) 39.0539.05 7.557.55 Methylhexadecanoate (palmitic acid methyl ester)Methylhexadecanoate (palmitic acid methyl ester) 39.1739.17 22.6622.66 Methyl cis,cis-9,12-octadecadienoate (Linoleic acid methyl ester)Methyl cis, cis-9,12-octadecadienoate (Linoleic acid methyl ester) 40.8540.85 11.1611.16 Methyl 9,12,15-octadecatrienoate (Linolenic acid methyl ester)Methyl 9,12,15-octadecatrienoate (Linolenic acid methyl ester) 40.9040.90 5.165.16 heneicosaneheneicosane 41.0541.05 5.555.55 MethyloctadecanoateMethyloctadecanoate 41.1441.14 1.041.04

<< 실시예Example 6> 6>

팔미트산 메틸 에스테르가 멜라닌 형성에 미치는 효과 조사 Investigation of the effects of palmitic acid methyl ester on melanin formation

본 발명에서는 티로시나제 활성과 발현에 영향을 미치는 주요 성분들인 팔미트산 메틸 에스테르 (palmitic acid methyl ester) 및 리놀레산 메틸 에스테르 (linoleic acid methyl est) 등이 멜라닌 형성이 미치는 효과를 다음과 같이 분석하였다. 먼저 팔미트산 메틸 에스테르 및 리놀레산 메틸 에스테르를 멜라닌세포에 각각 처리하고 그 결과들을 조사하여 서로 비교하였다. 실제로 리놀레산과 그의 메틸 에스테르는 티로시나제 발현, 티로시나제 활성 및 멜라닌 함유량을 용량 의존적으로 약간 감소시키는 것을 알 수 있었다 (Nishizuka Y., Science, 258(5082), 607-614 , 1992)(도 3 참조 ). 한편, 팔미트산과 그의 메틸 에스테르는 티로시나제 발현, 티로시나제 활성 및 멜라닌 함유량을 용량 의존적으로 상당한 증가를 유도하였다 (도 3 참조). 그러나 팔미트산 메틸 에스테르는 팔미트산에 의해 유도되는 멜라닌 형성을 지속적으로 개선시키는 것을 확인할 수 있었다. 또한 세포 독성에 있어서도, 이들 정유 성분은 각각의 자유 지방산이 나타내는 독성 정도보다 별로 크지 않은 독성을 나타내는 것을 알 수 있었다. 따라서, 이들 유도체 화합물의 기능적인 활성은 원래 화합물의 활성과 다소 다른 것으로 추정된다. In the present invention, the effects of melanin formation were analyzed as palmitic acid methyl ester and linoleic acid methyl est, which are the main components affecting tyrosinase activity and expression. First, palmitic acid methyl ester and linoleic acid methyl ester were treated with melanocytes, and the results were examined and compared with each other. Indeed, it was found that linoleic acid and its methyl ester slightly reduced tyrosinase expression, tyrosinase activity and melanin content (Nishizuka Y., Science , 258 (5082), 607-614, 1992) (see FIG. 3). On the other hand, palmitic acid and its methyl esters induced a dose-dependent significant increase in tyrosinase expression, tyrosinase activity and melanin content (see FIG. 3). However, palmitic acid methyl ester was found to continuously improve melanin formation induced by palmitic acid. Also in cytotoxicity, it was found that these essential oil components have a toxicity that is not much greater than that of each free fatty acid. Thus, the functional activity of these derivative compounds is presumed to be somewhat different from that of the original compounds.

도 1은 본 발명의 연꽃 추출물 및 그의 정유가 인간 멜라닌세포에서 멜라닌 형성에 미치는 효과를 조사하여 나타낸 것이다. 도 1A는 세포펠렛의 외관상 연꽃 추출물 정유의 효과를 나타낸 것으로 표시 1은 아무것도 처리하지 않은 것이고, 표시 2는 연꽃 추출물 정유를 10 μg/ml를, 표시 3은 10 μM 포스콜린을 5일동안 처리한 것이다. 도 1B는 아무것도 처리하지 않은 음성 대조군(왼쪽), 포스콜린(오른쪽) 및 연꽃 추출물 정유(1.25, 2.5, 5 및 10 μg/ml)와 함께 5일동안 배양한 멜라닌세포의 멜라닌 함량 및 세포 수를 나타낸 것이다. Figure 1 shows the effect of the lotus extract and essential oils of the present invention on melanin formation in human melanocytes. Figure 1A shows the effect of the essential oil lotus extract essential oil of the cell pellet, Display 1 is not treated anything, Display 2 is 10 μg / ml of the lotus extract essential oil, Display 3 is treated with 10 μM phospholine for 5 days will be. Figure 1B shows the melanin content and cell number of melanocytes cultured for 5 days with no treatment (left), forskolin (right) and lotus extract essential oils (1.25, 2.5, 5 and 10 μg / ml) without any treatment. It is shown.

도 2는 본 발명의 연꽃 추출물 및 그의 정유가 인간 멜라닌세포에서 MITF 단백질 및 티로시나제의 발현에 미치는 효과를 조사하여 나타낸 것이다. 도 2A는 연꽃 추출물 정유를 0.5, 1 또는 2시간동안 10 μg/ml로 처리한 경우, ERK 및 CREB 단백질의 인산화 정도를 나타낸 것이고, 도 2B는 연꽃 추출물 정유를 0.5, 1 또는 2시간동안 10 μg/ml로 처리한 경우, MITF-M, TRP-1, TRP-2, 티로시나제 및 GAPDH mRNA 의 발현을 나타낸 것이며, 도 2C는 연꽃 추출물 정유를 1, 3 또는 5일 동안 10 μg/ml로 처리한 경우 MITF 및 티로시나제, β-액틴 단백질의 발현을 나타낸 것이다. 단, C는 아무것도 처리하지 않은 멜라닌세포를 나타낸다.Figure 2 shows the effect of the lotus extract and essential oils of the present invention on the expression of MITF protein and tyrosinase in human melanocytes. Figure 2A shows the phosphorylation degree of ERK and CREB protein when the lotus extract essential oil is treated with 10 μg / ml for 0.5, 1 or 2 hours, Figure 2B shows 10 μg of lotus extract essential oil for 0.5, 1 or 2 hours When treated with / ml, it shows the expression of MITF-M, TRP-1, TRP-2, tyrosinase and GAPDH mRNA, Figure 2C treated with lotus extract essential oil at 10 μg / ml for 1, 3 or 5 days In case of MITF and tyrosinase, β-actin protein expression is shown. However, C represents melanocytes which did not process anything.

도 3은 본 발명의 연꽃 추출물 및 그의 정유의 주요 성분들이 티로시나제의 효소 활성 및 발현에 미치는 효과를 조사하여 나타낸 것이다. 단, LA는 리놀렌산을, mLA는 리놀렌산 메틸 에스테르를, PA는 팔미트산을, mPA는 팔미트산 메틸 에스테르를 나타낸다. Figure 3 shows the effects of the lotus extract of the present invention and the essential components of the essential oils on the enzymatic activity and expression of tyrosinase. However, LA represents linolenic acid, mLA represents linolenic acid methyl ester, PA represents palmitic acid, and mPA represents palmitic acid methyl ester.

<110> Dongguk University Industry-Academic Cooperation Foundation <120> Essential oil of lotus flower extract for treating dermatological disease and method for preparing the same <130> DP-2007-0182 <160> 10 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> foward primer for MITF-M <400> 1 atgctggaaa tgctagaata taat 24 <210> 2 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer for MITF-M <400> 2 atcatccatc tgcatacag 19 <210> 3 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer for tyrosinase <400> 3 ttggcataga ctcttcttgt tgcgg 25 <210> 4 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer for tyrosinase <400> 4 caaggagcca tgaccagatc cg 22 <210> 5 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> foward primer for TRP1 <400> 5 tggcaaagcg cacaactcac cc 22 <210> 6 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer for TRP1 <400> 6 agtgcaacca gtaacaaagc gcc 23 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer for TRP2 <400> 7 gcacacatgt aacctctgtg 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer for TRP2 <400> 8 tcatataagc aggcttggcc 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer for GAPDH <400> 9 tccaccaccc tgttgctgta 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer for GAPDH <400> 10 accacagtcc atgccatcac 20 <110> Dongguk University Industry-Academic Cooperation Foundation <120> Essential oil of lotus flower extract for treating dermatological          disease and method for preparing the same <130> DP-2007-0182 <160> 10 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 24 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> foward primer for MITF-M <400> 1 atgctggaaa tgctagaata taat 24 <210> 2 <211> 19 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer for MITF-M <400> 2 atcatccatc tgcatacag 19 <210> 3 <211> 25 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer for tyrosinase <400> 3 ttggcataga ctcttcttgt tgcgg 25 <210> 4 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer for tyrosinase <400> 4 caaggagcca tgaccagatc cg 22 <210> 5 <211> 22 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> foward primer for TRP1 <400> 5 tggcaaagcg cacaactcac cc 22 <210> 6 <211> 23 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer for TRP1 <400> 6 agtgcaacca gtaacaaagc gcc 23 <210> 7 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer for TRP2 <400> 7 gcacacatgt aacctctgtg 20 <210> 8 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer for TRP2 <400> 8 tcatataagc aggcttggcc 20 <210> 9 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> forward primer for GAPDH <400> 9 tccaccaccc tgttgctgta 20 <210> 10 <211> 20 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> reverse primer for GAPDH <400> 10 accacagtcc atgccatcac 20  

Claims (11)

연꽃을 n-헥산으로 추출하여 얻은, 백반증, 흰점, 염증후 탈색소, 백모, 광과민성 피부질환을 포함하는 색소관련 피부질환의 치료효과를 가짐을 특징으로 하는 연꽃 추출물 (lotus flower extract). Lotus flower extract (lotus flower extract) characterized by having a therapeutic effect of pigment-related skin diseases, including vitiligo, white spots, post-inflammatory depigmentation, white hair, photosensitive skin diseases, obtained by extracting the lotus with n-hexane. 제 1항에 있어서, The method of claim 1, 상기 연꽃은 건조된 형태의 연꽃 꽃잎 (petals) 또는 수술 (stamens)인 것을 특징으로 하는 연꽃 추출물.The lotus flower is a lotus extract, characterized in that the dried petals (petals) or stamens (stamens). 연꽃을 n-헥산으로 추출하여 여과하고 헥산을 증발시킨 다음 다시 진공 상태에서 헥산을 완전히 제거하여 얻은 것을 특징으로 하고, 백반증, 흰점, 염증후 탈색소, 백모, 광과민성 피부질환을 포함하는 색소관련 피부질환의 치료효과를 가짐을 특징으로 하는 연꽃 추출물 정유 (essential oil of lotus flower extract).It is obtained by extracting the lotus with n-hexane, filtering and evaporating the hexane, and then completely removing hexane in a vacuum state. Pigment-related skin including vitiligo, white spot, post-inflammatory depigmentation, white hair, and photosensitive skin disease Essential oil of lotus flower extract, characterized by the therapeutic effect of the disease. 제 3항에 있어서,The method of claim 3, wherein 상기 연꽃 추출물 정유는 팔미트산, 리놀레산, 파미토레산 및 리놀렌산 그리 고 그들의 메틸 에스테르를 포함하는 것을 특징으로 하는 연꽃 추출물 정유.The lotus extract essential oil is a lotus extract essential oil, characterized in that it comprises palmitic acid, linoleic acid, palmitole and linolenic acid and their methyl ester. (1) 연꽃을 n-헥산으로 추출하고; (2) 여과하여 헥산을 증발시킨 다음; (3) 다시 진공 상태에서 헥산을 완전히 제거하는; 과정으로 제 3항의 연꽃 추출물 정유를 얻는 제조방법. (1) extracting the lotus with n-hexane; (2) filtration to evaporate hexane; (3) completely removing hexane again in a vacuum; Process for obtaining the essential oil lotus extract of claim 3. 제 5항에 있어서,The method of claim 5, 상기 연꽃은 건조된 형태의 연꽃 꽃잎 또는 수술인 것을 특징으로 하는 제조방법.The lotus is a manufacturing method characterized in that the dried lotus petals or stamens. 제 5항에 있어서,The method of claim 5, 상기 (2) 과정에서 n-헥산은 40~60℃에서 증발시키는 것을 특징으로 하는 제조방법. N-hexane in the process (2) is 40 ~ 60 ℃ Method of producing a characterized in that the evaporation. 제 5항에 있어서,The method of claim 5, 상기 (3)과정을 거친 후, 상기 연꽃 추출물 정유를 디메틸설포옥사이드 (DMSO)에 녹이는 것을 특징으로 하는 제조방법.After the step (3), the method of producing a lotus extract essential oil, characterized in that in dimethylsulfooxide (DMSO) to dissolve. 제 1항의 연꽃 추출물을 유효 성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는, 백반증, 흰점, 염증후 탈색소, 백모, 광과민성 피부질환을 포함하는 색소관련 피부질환 치료용 조성물.Claim 1, characterized in that containing the lotus extract as an active ingredient, vitiligo, white spots, post-inflammatory depigmentation, white hair, photosensitive skin diseases, the composition for treating skin diseases. 제 3항의 연꽃 추출물 정유를 유효 성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는, 백반증, 흰점, 염증후 탈색소, 백모, 광과민성 피부질환을 포함하는 색소관련 피부질환 치료용 조성물.A composition for treating pigment-related skin diseases, including vitiligo, white spots, post-inflammatory depigmentation, white hair, and photosensitive skin diseases, comprising the lotus extract essential oil of claim 3 as an active ingredient. 제1항의 연꽃 추출물 및 제3항의 연꽃 추출물 정유로부터 순수분리한, 팔미트산 및 팔미트산 메틸 에스테르를 유효성분으로 함유하는 것을 특징으로 하는, 백반증, 흰점, 염증후 탈색소, 백모, 광과민성 피부질환을 포함하는 색소관련 피부질환 치료용 조성물.The lotus extract of claim 1 and the lotus extract of claim 3, palmitic acid and palmitic acid methyl ester, which is purely separated from essential oils, characterized by vitiligo, white spot, post-inflammatory depigmentation, white hair, photosensitive skin Pigment related skin disease treatment composition comprising a disease.
KR1020080002544A 2008-01-09 2008-01-09 Essential oil of lotus flower extract for treating dermatological diseases and method for preparing the same KR20090076536A (en)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020080002544A KR20090076536A (en) 2008-01-09 2008-01-09 Essential oil of lotus flower extract for treating dermatological diseases and method for preparing the same

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020080002544A KR20090076536A (en) 2008-01-09 2008-01-09 Essential oil of lotus flower extract for treating dermatological diseases and method for preparing the same

Publications (1)

Publication Number Publication Date
KR20090076536A true KR20090076536A (en) 2009-07-13

Family

ID=41333633

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
KR1020080002544A KR20090076536A (en) 2008-01-09 2008-01-09 Essential oil of lotus flower extract for treating dermatological diseases and method for preparing the same

Country Status (1)

Country Link
KR (1) KR20090076536A (en)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011046522A2 (en) * 2009-10-16 2011-04-21 Rached Smida Novel uses of reconstituted free testosterone
ITLI20110006A1 (en) * 2011-07-04 2013-01-05 Ivo Pera COMPOSITION FOR THE CARE OF VITILIGINE
KR101282280B1 (en) * 2011-08-12 2013-07-10 주식회사 웰스킨 Medical composition containing linolenic acid for treating vitiligo
KR20150057767A (en) * 2013-11-20 2015-05-28 주식회사 엘지생활건강 Cosmetic composition containing Oriental Herb Fragrance Active Component 8-heptadecene for Skin Benefit Ingredient
CN112481035A (en) * 2020-11-18 2021-03-12 河北中烟工业有限责任公司 Extraction method of fresh lotus essential oil
KR20220105105A (en) 2021-01-19 2022-07-26 (주)아모레퍼시픽 Composition for preventing gray hair, promoting black hair and preventing, improving or treating vitiligo or hypochromatism comprising fructose 1,6-bisphosphate or salt, solvate, stereoisomer or hydrate thereof as active ingredient

Cited By (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011046522A2 (en) * 2009-10-16 2011-04-21 Rached Smida Novel uses of reconstituted free testosterone
WO2011046522A3 (en) * 2009-10-16 2011-09-09 Rached Smida Novel uses of reconstituted free testosterone
ITLI20110006A1 (en) * 2011-07-04 2013-01-05 Ivo Pera COMPOSITION FOR THE CARE OF VITILIGINE
KR101282280B1 (en) * 2011-08-12 2013-07-10 주식회사 웰스킨 Medical composition containing linolenic acid for treating vitiligo
KR20150057767A (en) * 2013-11-20 2015-05-28 주식회사 엘지생활건강 Cosmetic composition containing Oriental Herb Fragrance Active Component 8-heptadecene for Skin Benefit Ingredient
CN112481035A (en) * 2020-11-18 2021-03-12 河北中烟工业有限责任公司 Extraction method of fresh lotus essential oil
KR20220105105A (en) 2021-01-19 2022-07-26 (주)아모레퍼시픽 Composition for preventing gray hair, promoting black hair and preventing, improving or treating vitiligo or hypochromatism comprising fructose 1,6-bisphosphate or salt, solvate, stereoisomer or hydrate thereof as active ingredient

Similar Documents

Publication Publication Date Title
Chiang et al. Hydroalcoholic extract of Rhodiola rosea L.(Crassulaceae) and its hydrolysate inhibit melanogenesis in B16F0 cells by regulating the CREB/MITF/tyrosinase pathway
US7740831B2 (en) Compositions for potentiating glutathione
Li et al. Baicalein inhibits melanogenesis through activation of the ERK signaling pathway
KR20090076536A (en) Essential oil of lotus flower extract for treating dermatological diseases and method for preparing the same
KR20110054022A (en) Skin-whitening agent, anti-aging agent, and skin-care cosmetic agent
KR101523820B1 (en) Pharmaceutical composition for preventing or treating obesity or metabolic disorders comprising Aster glehni extract as an active ingredient
KR20170023391A (en) Compositions for the prevention or treatment of metabolic syndrome or antioxidant containing extracts of black soybean leaves, flavonol glycosides as an active ingredient
Tseng et al. In vitro and in vivo protective effects of flavonoid-enriched lotus seedpod extract on lipopolysaccharide-induced hepatic inflammation
KR20120089407A (en) Composition For Improving Skin Condition Comprising Extract From Black Tea As Active Ingredient
CN105482129A (en) Anti-cancer extract and compounds
EP3407867A1 (en) Dermatological or cosmetic compositions containing a polyphenol-enriched extract of vitex negundo
KR100816774B1 (en) Cosmetic composition for preventing or improving skin diseases
US10391137B2 (en) Platelet-derived growth factor-BB production promotor, and mesenchymal stem cell production accelerator, stem cell stabilizer and dermal regenerator comprising the same
CN112089638B (en) Composition for inhibiting melanin synthesis
TWI419700B (en) Use of sweet potato trypsin inhibitor for treating inflammation and hyperalgesia
KR101532866B1 (en) use of Zingiber cassumunar Roxb extracts or compounds isolated therefrom for enhancing melanogenesis
KR101195117B1 (en) A composition for treating skin hyper-pigmented diseases and skin whitening containing a compound from Persicae Semen
Hu et al. Diarylheotanoid from Alnus hirsuta improves glucose metabolism via insulin signal transduction in human hepatocarcinoma (HepG2) cells
Chiang et al. Melanogenesis and natural hypopigmentation agents
TWI732967B (en) Skin-protection composition containing dendrobium-based ingredients
JP2022519330A (en) A composition for treating, preventing, or alleviating fatty liver containing sericin, and a method for producing the composition.
KR102606901B1 (en) A pharmaceutical composition for prevention or treatment of obesity comprising biochanin a or pharmaceutically accepted salts thereof as an effective component
TWI568442B (en) Lotus seedpod extract and its use for manufacturing compositions for whitening
JP7235233B2 (en) collagenase inhibitor
KR102560191B1 (en) Composition for skin whitening comprising Saururus chinensis white leaf extract

Legal Events

Date Code Title Description
A201 Request for examination
E902 Notification of reason for refusal
AMND Amendment
E601 Decision to refuse application
J201 Request for trial against refusal decision
AMND Amendment
B601 Maintenance of original decision after re-examination before a trial
J301 Trial decision

Free format text: TRIAL DECISION FOR APPEAL AGAINST DECISION TO DECLINE REFUSAL REQUESTED 20091230

Effective date: 20110321