KR20090060410A - 인간 내인성 레트로바이러스 폴리펩타이드 조성물 및 이들의 사용 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 분리된 HERV 폴리펩타이드; 및 HERV 폴리펩타이드를 포함하는 면역원성 조성물을 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 HERV 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산을 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 면역원성 조성물은 렌티바이러스 펩타이드에 대한 T 세포 면역 반응을 자극하기에 유용하다. 본 발명은 개체 내에서 레트로바이러스- 또는 렌티바이러스-감염 세포에 대한 면역 반응을 자극하는 방법을 추가로 제공한다. 본 발명은 HERV 폴리펩타이드를 발현하는 암을 치료하는 방법을 추가로 제공한다. 또한 HERV 폴리펩타이드에 대한 면역 반응을 감소시키는 질환을 치료하는 방법을 제공한다.

HERV 폴리펩타이드, 면역원성 조성물, T 세포 면역 반응.

Description

인간 내인성 레트로바이러스 폴리펩타이드 조성물 및 이들의 사용 방법{HUMAN ENDOGENOUS RETROVIRUS POLYPEPTIDE COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF}

상호 참조

본 출원은 본원에 일체성을 지니고 참고자료로서 포함된, 미국 가특허출원 제60/832,465호(2006. 7. 21)의 우선권을 향유한다.

인간 내인성 레트로바이러스 서열은 초벌 인간 게놈의 8.29%를 구성한다. 이들의 유병률은 생식계에 침투된 숙주 세포와 휴전 상태에 있는 과거의 레트로바이러스 감염원의 축적에 기인한다. 내인성 레트로바이러스로부터 숙주에 의하여 선택된 유전자는 마우스 내에서 Fv1 및 Fv4에 의한 바이러스 방어, 및 신시틴(syncitin)을 통하여 매개되는 인간 태반 발생에 있어서의 세포 융합을 포함하는 일부 세포 프로세스 내에서 능동적으로 관여하는 것으로 알려져 있다. HERV 전사체가 T 세포를 포함하는 정상 및 암성 조직 모두에서 검출되지만, 정상 세포 기능 및 발암에 있어서 이들의 역할은 아직 분명하지 않다. HERV 전사를 촉진하는 세포 상태는 잘 알려져 있지 않으나, APOBEC가 내인성 레트로바이러스의 조절에 일정한 역할을 하는 것으로 알려져 있다.

문헌

Griffiths (2001) Genome Biology 2:1017.1-1017.5; Muller and De Boer (2006) PLoS Pathogens 2:0149; Nelson et al. (2003) J. Clin. Pathol: Mol. Pathol. 56: 11-18; Contreras-Galindo et al. (2007) AIDS Res. Human Retrovir. 23:116-122; 미국 공개 특허. 2005/0118573; Rakoff-Nahoum et al. (2006) AIDS Res. Human Retrovir. 22:52-56; Schiavetti et al. (2002) Cancer Res. 62:5510-5516; Buscher et al. (2005) Cancer Res. 65:4172; Clerici et al. (1999) J. Neuroimmunol 99:173.

발명의 개요

본 발명은 분리된 HERV 폴리펩타이드; 및 HERV 폴리펩타이드를 포함하는 면역원성 조성물을 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 HERV 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산을 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 면역원성 조성물은 렌티바이러스 펩타이드에 대한 T 세포 면역 반응을 자극하는 데 유용하다. 본 발명은 레트로바이러스- 또는 렌티바이러스-감염 세포에 대한 개체의 면역 반응을 자극하는 방법을 추가로 제공한다. 본 발명은 HERV 폴리펩타이드를 발현하는 암의 치료 방법을 추가로 제공한다. 또한 HERV 폴리펩타이드에 대한 면역 반응을 감소시키는 질환을 치료하는 방법도 제공한다.

도 1A 및 2B는 HIV 양성 및 음성 개체의 원형질 내에서 HERV-K 전사체의 발 현을 도시한다.

도 2는 HIV HXB-2의 HERV/HIV 아미노산 정렬 및 Gag의 일부와 역전사효소 단백질을 나타내는 다양한 HERV 삽입을 도시한다.

도 3은 HIV 양성 및 음성 개체 내에서의 HERV 및 HIV 항원에 대한 ELISPOT T 세포의 반응을 도시한다.

도 4는 항-HERV T 세포 반응과 HIV-1 원형질 바이러스 부하(load) 사이의 반비례 관계를 도시한다.

도 5는 HERV-L IQ10-특이적 CD8⁺ T 세포의 세포독성을 측정하기 위한 ⁵¹Cr 방출 분석의 결과를 도시한다.

도 6은 HERV-K 역전사효소의 아미노산 서열을 도시한다.

도 7A는 HERV-L 역전사효소의 아미노산 서열을 도시한다.

도 7B는 HERV-L 역전사효소를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 도시한다.

도 8A는 HERV-H 외피(envelope)의 아미노산 서열을 도시한다.

도 8B는 HERV-L 외피를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 도시한다.

정의

"생물학적 시료"는 개체로부터 획득한 다양한 시료 유형을 포괄하며, 진단 또는 모니터링 분석에 사용될 수 있다. 본 정의는 혈액 및 생물학적 기원의 기타 액체 시료, 고체 조직 시료, 예컨대, 생검 시료 또는 조직 배양물 또는 이들로부터 유도된 세포 및 이들의 자손을 포괄한다. 본 정의는 또한 획득 후 어떠한 방식, 예 컨대 시약 처리; 세척; 또는 특정 세포 집단, 예컨대 CD4⁺ T 림프구, CD8⁺ T 림프구, 아교 세포, 대식세포, 종양 세포, 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 등의 집단의 강화에 의하여 조작된 시료를 포함한다. 용어 "생물학적 시료"는 임상적 시료를 포괄하며, 배양물 내의 세포, 세포 상청, 조직 시료, 장기, 골수, 혈액, 원형질, 혈청, 뇌척수액, 등을 포함한다.

용어 "레트로바이러스"가 당해 기술 분야에 공지되어 있으며, 예컨대, 감마레트로바이러스 속(genus)(예컨대, 뮤린 유선 종양 바이러스); 입실론레트로바이러스 종; 알파레트로바이러스 종(예컨대, 조류 백혈증 바이러스); 베타레트로바이러스 속; 델타레트로바이러스 속(예컨대, 보빈 백혈병 바이러스; 인간 T-림프구친화성 바이러스(HTLV)); 렌티바이러스 속; 및 스푸마바이러스 속을 포함하는 단일-가닥, 양성 센스, 외피 RNA 바이러스를 포함한다. 본원에 사용되는 용어 "렌티바이러스"는 레트로비리데(Retroviridae) 과(family)의 바이러스 속이며, 인간 면역결핍 바이러스-1(HIV-1); 인간 면역결핍 바이러스-2(HIV-2); 원숭이 면역결핍 바이러스(SIV); 및 고양이 면역결핍 바이러스(FIV)를 포함한다.

"유전자 전달 운반체"는 숙주 세포 내에서 하나 이상의 유전자(들) 또는 뉴클레오타이드 서열(들)을 전달하거나, 일부 실험에서는 이들을 발현할 수 있는 구조를 말한다. 이러한 운반체의 대표적인 예는 바이러스 벡터, 핵산 발현 벡터, 네이키드 DNA, 및 특정 진핵 세포(예컨대, 생산자 세포)를 포함한다.

"작동가능하게 연결된" 이란 구성 요소의 정렬을 의미하며, 여기서 이와 같 이 설명된 요소가 일반적인 기능을 수행하도록 구성되는 것을 말한다. 따라서, 암호화 서열에 작동가능하게 연결된 조절 요소는 암호화 서열의 발현에 영향을 미칠 수 있다. 조절 요소는 이들이 이들의 발현을 조절하는 한 암호화 서열과 인접할 필요는 없다. 따라서, 예를 들어, 개입하는 미번역되었으나 전사된 서열은 프로모터 서열과 암호화 서열 사이에 존재할 수 있으며, 프로모터 서열은 암호화 서열에 "작동가능하게 연결된" 것으로 간주될 수 있다.

본원에 사용되는 용어 "분리된"은 자연 발생적인 폴리뉴클레오타이드, 폴리펩타이드, 또는 세포와 다른 환경에 존재하는 폴리뉴클레오타이드, 폴리펩타이드, 또는 세포를 설명하는 것을 의미한다. 분리된 유전적으로 변형된 숙주 세포는 유전적으로 변형된 숙주 세포의 혼합된 집단 내에 존재할 수 있다. 분리된 폴리펩타이드는 일 실시 상태에서 합성될 수 있다. "합성 폴리펩타이드"는 아미노산으로부터 조립되며, 당해 기술 분야의 숙련자에게 알려진 절차를 사용하여, 예컨대, 무세포 화학 합성 등으로 시험관 내에서 화학적으로 합성될 수 있다.

"정제된" 이라는 것은 대상 화합물(예컨대, 폴리펩타이드)이 자연상에서 수반되는 성분과 분리된 것을 의미한다. "정제된"이란 제조시 (예컨대, 화학 합성에서) 수반될 수 있는 성분으로부터 분리된 화합물을 언급할 때 사용될 수 있다. 일 실시 상태에서, 자연적으로 결합되거나 또는 제조시 결합되는 유기 분자가 결핍되어 중량부로 최소한 50% 내지 60%인 경우 화합물은 실질적으로 순수하다. 일 실시 상태에서, 제조물은 중량부로 대상 화합물의 최소한 75%, 최소한 90%, 최소한 95%, 또는 최소한 99%이다. 실질적으로 순수한 화합물은, 예를 들어, 천연 공급원(예컨 대, 박테리아)으로부터 추출하거나, 화합물을 화학적으로 합성하므로써, 또는 정제 및 화학적 변형의 조합으로써 확보할 수 있다. 실질적으로 순수한 화합물은, 예를 들어, 대상 항체에 결합하는 화합물을 보유하는 시료를 강화함으로써 확보할 수 도 있다. 순도는, 예컨대, 크로마토그래피, 질량 분광법, 고속 액체 크로마토그래피 분석, 등의 모든 적절한 방법에 의하여 측정할 수 있다.

HERV 폴리펩타이드에 관하여 본원에 사용되는 용어 "이종유래"는, HERV 폴리펩타이드 융합 단백질이 HERV 폴리펩타이드 및 이종유래 폴리펩타이드를 포함하는 경우, HERV 폴리펩타이드이 아닌 폴리펩타이드, 예컨대, HERV 폴리펩타이드와 정상적으로 관련되지 않은 폴리펩타이드를 의미한다. 예를 들어, 이종유래 폴리펩타이드는 HERV 항원 폴리펩타이드와 일치하는 유의미한 아미노산 서열을 보유하지 않으며, 예컨대, 이종유래 폴리펩타이드는 약 50% 이하, 약 40% 이하, 약 30% 이하, 또는 약 20% 이하로 HERV 항원 폴리펩타이드과 일치하는 아미노산 서열을 보유한다.

"항원"은 본원에서 항체 분자에 의하여 특이적으로 결합될 수 있는 모든 물질을 포함한다. "면역원"은 림프구 활성화를 개시하여 항원-특이적 면역 반응을 유도할 수 있는 항원이다.

"에피토프"는 B 세포 및/또는 T 세포 반응에 특이적인 항원 상의 부위를 의미한다. 이 용어는 "항원 결정" 또는 "항원 결정 부위"와 호환하여 사용가능하다. 단백질, 다당류, 또는 기타 생체고분자 상의 B 세포 에피토프 부위는 폴딩에 의하여 접합되는 마크로분자의 다른 일부로부터의 모이어티로 구성될 수 있다. 이러한 유형의 에피토프는 입체구조 또는 불연속적 에피토프로 언급되며, 이 부위가 선형 서열 내에서 불연속적이나, 접힌 입체구조(들) 내에서는 연속적인 고분자의 부분으로 구성되어 있기 때문이다. 생체고분자 또는 기타 분자의 단일 부분으로 구성된 에피토프는 계속적인 또는 선형 에피토프라 한다. T 세포 에피토프는 일반적으로 선형 펩타이드이다. 동일한 에피토프를 인식하는 항체는 다른 항체가 표적 항원과 결합하는 것을 차단하는 일 항체의 능력을 나타내는 단순한 면역분석법으로 확인할 수 있다.

용어 "암," "신생물," 및 "종양"은 상대적인 자가 증식을 나타내어, 세포 증식의 조절을 현저하게 상실하는 것을 특징으로 하는 비이상적 성장 표현형을 나타내는 세포를 의미하는 것으로서 본원에서 혼용가능하다. 본원에서 치료하기 위한 대상 세포는 전암성, 악성, 전전이성, 전이성, 및 비전이성 세포, 및 상피내암종을 포함한다.

"암성 표현형"은 일반적으로 암성 세포의 특성을 지닌 다양한 생물학적 현상을 의미하며, 이러한 현상은 암의 유형에 따라 달라질 수 있다. 암성 표현형은 일반적으로, 예를 들어, 세포 성장 또는 증식(예컨대, 조절불가능한 성장 또는 증식), 세포 주기의 조절, 세포 이동성, 세포-세포 상호작용, 또는 전이, 등의 비이상성에 의하여 확인된다.

용어 "대상체," "개체," "숙주," 및 "환자"는 포유류로서, 이에 한정되지 않으나, 뮤린(레트, 마우스), 고양이, 비-인간 영장류(예컨대, 원숭이), 인간, 개, 유제류, 등을 포함하는 것과 혼용할 수 있다.

용어 "치료," "치료하는," "치료하다," 등은 일반적으로 바람직한 약리 및/ 또는 생리학적 효과를 얻을 수 있는 것을 의미한다. 이 효과는 질병 또는 이들의 증상을 완전하게 또는 부분적으로 예방한다는 의미에서 예방적이되거나 및/또는 질병 및/또는 질병에 기인한 부작용의 부분적 또는 완전한 안정화 또는 치료의 관점에서 치료적이 될 수 있다.

본원에 사용된 "치료"는 포유류, 특히 인간 내의 질병의 치료를 포함하며: (a) 질병 또는 증상의 소인이 있으나 아직 발병으로 진단되지 않은 대상체 내에서 발생하는 질병 또는 증상의 예방; (b) 질병 증상의 억제, 즉, 발달의 정지; 또는 (c) 질병 증상의 경감, 즉, 질병 또는 증상의 퇴화의 유도를 포함한다.

본 발명을 더 설명하기 전에, 본 발명은 설명된 특정 실시상태에 제한되지 않으며, 변형될 수 있다는 것을 이해하여야 한다. 본 발명의 범위는 첨부한 청구의 범위에 의하여만 제한되기 때문에, 본원에 사용되는 용어정의는 특정 실시상태를 설명하기 위한 것일 뿐이며, 제한을 위한 것이 아니라는 사실을 이해하여야 한다.

값의 범위를 제시하는 경우, 각각의 중간 값, 달리 적시하지 않는다면 10 단위의 하한값에서, 그 범위 및 달리 적시한 범위의 상한 및 하한 사이의 또는 언급한 범위의 중간 값은 본 발명에 포함된다. 이러한 작은 범위의 상한 및 하한은 독립적으로 더 작은 범위에 포함될 수 있으며, 언급된 범위에서 특이적으로 배제된 한계값이라면, 이들 또한 본 발명에 포함된다. 언급된 범위가 하나 또는 모든 한계값을 포함하는 경우, 이러한 포함된 한계 중의 하나 또는 모두를 배제하는 범위도 또한 본 발명에 포함된다.

달리 정의하지 않는다면, 모든 기술적 및 과학적 용어는 본원에서 당해 기술 분야의 숙련자가 일반적으로 이해하는 것과 동일한 의미를 갖는다. 본원의 방법 및 물질과 유사하거나 또는 동등한 모든 것을 본 발명의 실시 또는 시험에 사용할 수 있으나, 본 원에서 설명된 방법 및 물질이 바람직하다. 본원에서 언급하고 있는 모든 문헌은 그 문헌이 인용하는 방법 및/또는 물질을 설명하거나 개시하는 참고자료로서 본원에 포함되어 있다.

본 명세서 및 첨부한 청구항에서 사용된 바와 같이, 단수 형태의 "하나의" "및," 및 "그것"은 문맥상 분명하게 달리 적시하지 않는 한 복수 형태를 포함한다는 사실을 유의하여야 한다. 따라서, 예를 들어, "인간 내인성 레트로바이러스 폴리펩타이드"는 이러한 폴리펩타이드의 복수를 포함하며 "면역원성 조성물"에는 하나 이상의 면역원성 조성물을 포함하고, 당해 기술 분야의 숙련자에게 공지된 이들의 동등물을 포함한다. 청구항은 선택적 요소를 배제할 수 있다는 것을 유의하여야 한다. 이와 같이, 이러한 청구항 요소의 언급과 관련하여 "단지," "뿐" 등의 배타적 용어의 사용, 또는 "음성" 제한의 사용을 위한 선핸 기초로서 사용되는 것으로 의도된다.

본원에서 논의되는 문헌은 모두 본 출원의 출원일 전에 공개된 것이다. 선행 발명에 의하여 본 발명이 이러한 문헌보다 선행하는 것이 아니라는 승인으로 해석되어서는 아니된다. 추가적으로, 출판일은 개별적으로 확인된 실제 출판일과 다를 수도 있다.

발명의 상세한 설명

본 발명은 분리된 HERV 폴리펩타이드; 및 HERV 폴리펩타이드를 포함하는 면 역원성 조성물을 포함하는 조성물을 제공한다. 본 발명은 HERV 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산을 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 면역원성 조성물은 렌티바이러스 펩타이드에 대한 T 세포 면역 반응의 자극에 유용하다. 본 발명은 개체 내에서 레트로바이러스- 또는 렌티바이러스-감염 세포에 대한 면역 반응을 자극하는 방법을 추가로 제공한다. 본 발명은 암성 세포에 의하여 HERV 폴리펩타이드가 발현되는 암을 치료하는 방법을 추가로 제공한다. 또한 HERV 폴리펩타이드에 대한 면역 반응을 저하시키는 질환을 치료하는 방법을 제공한다.

일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물은 렌티바이러스-감염 세포, 예컨대, 인간 면역결핍 바이러스(HIV)- 감염 세포에 대한 특이적 T 세포 면역 반응을 유도한다. HERV 폴리펩타이드에 의하여 디스플레이되는 에피토프는 에피토프에 대한 T 세포 면역 반응을 자극하거나 또는 촉진한다. HERV 에피토프도 렌티바이러스-감염 세포의 표면상에 존재하는 경우라면, 렌티바이러스-감염 세포에 대한 T 세포 반응이 발생한다. "T 세포 면역 반응"은 하나 이상의: 1) HERV 에피토프에 특이적인 CD4⁺ T 세포의 숫자 및/또는 활성의 증가; 2) HERV 에피토프에 특이적인 CD8⁺ T 세포의 숫자 및/또는 활성(예컨대, 세포독성)의 증가; 및 3) Th2-타입 면역 반응을 유도하거나 또는 이의 지표인 사이토카인의 분비를 포함한다. Th2 면역 반응을 유도하거나 또는 이의 지표인 사이토카인은 인터페론-감마(IFN-γ), IL-2, 및 종양 괴사 인자-알파(TNF-α)를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 본원의 면역원성 조성 물에 의하여 자극되는 T 세포 면역 반응은 점막 T 세포 면역 반응 및 전신성 T 세포 면역 반응을 유도한다.

본원의 면역원성 조성물은 다양한 방법으로 제형화될 수 있으며, 정맥 투여, 피하 투여, 또는 기타 비경구 경로의 투여에 적합한 제형; 점막 조직 투여에 적합한 제형; 등을 포함한다. 본 발명은 본원의 면역원성 조성물을 포함하는 약학적 제형을 제공한다.

본 발명은 렌티바이러스 감염(예컨대, HIV 감염)의 치료에 대한 환자의 반응의 모니터링에 사용하기 적합한 HERV 폴리펩타이드 조성물을 추가로 제공한다. 따라서, 본 발명은 렌티바이러스 감염(예컨대, HIV 감염)의 치료에 대한 환자의 반응을 모니터링하기 위한 방법을 추가로 제공한다.

분리된 HERV 폴리펩타이드

본 발명은 분리된 HERV 폴리펩타이드, 및 HERV 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 제공한다. 분리된 HERV 폴리펩타이드는, 예컨대, (예컨대, 개체 내에서의 HERV 폴리펩타이드에 대한 면역 반응을 강화하기 위한) 면역원성 조성물의 생성; (예컨대, 개체 내에서 HERV 폴리펩타이드에 대한 면역 반응을 저하시키기 위한) 면역조절 조성물의 생성; 치료, 예컨대, 렌티바이러스 감염의 치료에 대한 환자의 반응의 모니터링; 질병의 병기의 판단; 질병의 검출; 및 입인 전달법을 위한 CD8⁺ T 세포의 생성을 위한 용도로 사용된다.

HERV 폴리펩타이드

HERV 폴리펩타이드는 어떠한 HERV 클래스 또는 군, 예컨대, HERV-W, HERV-H, HERV-K, HERV-L, 및 HERV-S, 및 이들의 아군(subgroup)에 의하여 암호화된 폴리펩타이드를 포함한다. HERV 클래스, 군, 및 아군은 당해 기술 분야에 공지되어 있다. 예컨대, 문헌 Griffiths (2001) Genome Biology 2:1017.1-1017.5를 참조한다.

일 실시 상태에서, 본원의 분리된 HERV 폴리펩타이드는, HERV-암호화 폴리펩타이드의 아미노산 서열과 최소한 약 50%, 최소한 약 60%, 최소한 약 70%, 최소한 약 75%, 최소한 약 80%, 최소한 약 85%, 최소한 약 90%, 최소한 약 95%, 최소한 약 98%, 최소한 약 99%, 또는 100% 일치하는 아미노산 서열을 보유하는 아미노산 서열의 약 9, 10, 11, 12, 13-15, 15-17, 17-20, 20 내지 25, 25 내지 50, 50 내지 75, 75 내지 100, 100 내지 150, 150 내지 200, 200 내지 250, 250 내지 300, 300 내지 350, 또는 350 내지 400, 또는 그 이상의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다. HERV-암호화 폴리펩타이드는 Gag-Pro-Pol 영역에 의하여 암호화된 폴리펩타이드, 및 HERV의 env 영역에 의하여 암호화된 폴리펩타이드를 포함한다.

일 실시 상태에서, 본원의 분리된 HERV 폴리펩타이드는 HIV-암호화 단백질 내에서 동일한 길이의 신장(stretch)과 최소한 약 35%, 최소한 약 40%, 최소한 약 45%, 최소한 약 50%, 최소한 약 55%, 최소한 약 60%, 최소한 약 65%, 최소한 약 70%, 최소한 약 75%, 최소한 약 80%, 최소한 약 85%, 최소한 약 90%, 최소한 약 95%, 최소한 약 98%, 최소한 약 99%, 또는 100% 일치하는 아미노산 서열을 보유하는 약 9, 10, 11, 12, 13-15, 15-17, 17-20, 또는 20 내지 25, 또는 그 이상의 인접 아미노산의 신장을 포함한다.

본원의 분리된 HERV 폴리펩타이드는 9개의 아미노산에서 자연 발생적인 HERV 폴리펩타이드의 길이까지 될 수 있으며, 예컨대, HERV 폴리펩타이드는 9개의 아미노산(aa), 10 aa, 11 aa, 12-15 aa, 15-20 aa, 20-25 aa, 25-30 aa, 30-40 aa, 40-50 aa, 50-100 aa, 또는 100 아미노산 이상, 예컨대, 100 aa 내지 150 aa, 150 aa 내지 200 aa가 될 수 있다.

예시적이며, 비제한적인 예의 HERV-암호화 폴리펩타이드는 GenBank 승인 번호 AAD51797 (HERV-K Gag-Pro-Pol 단백질); AAD51798 (HERV-K env 단백질); CAA13576; AJ233632; AF108843; 등에서 찾을 수 있다.

일 실시 상태에서, 본원의 분리된 HERV 폴리펩타이드는

SEQ ID NO:26에 나타낸 아미노산 서열:

IIIDLKDCFFTIPLAEQDCEKFAFTIPAINNKEPATRFQWKVLPQGMLNSPTICQT

FVGRALQPVREKFSDCYIIHCIDDILCAAET (SEQ ID NO:26)

과 최소한 약 50%, 최소한 약 60%, 최소한 약 70%, 최소한 약 75%, 최소한 약 80%, 최소한 약 85%, 최소한 약 90%, 최소한 약 95%, 최소한 약 98%, 최소한 약 99%, 또는 100% 일치하는 아미노산 서열을 보유하는 아미노산 서열의 약 9, 10, 11, 12, 13-15, 15-17, 17-20, 20 내지 25, 25 내지 50, 50 내지 75, 75 내지 80, 또는 80 내지 87 개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다.

일 실시 상태에서, 본원의 분리된 HERV 폴리펩타이드는

SEQ ID NO:27에 나타낸 아미노산 서열:

AAIDLANAFFSIPVHKAHKKQFAFTICVYCPASGVYQQSSFVS (SEQ ID NO:27)

과 최소한 약 50%, 최소한 약 60%, 최소한 약 70%, 최소한 약 75%, 최소한 약 80%, 최소한 약 85%, 최소한 약 90%, 최소한 약 95%, 최소한 약 98%, 최소한 약 99%, 또는 100% 일치하는 아미노산 서열을 보유하는 아미노산 서열의 약 9, 10, 11, 12, 13-15, 15-17, 17-20, 20 내지 25, 25 내지 30, 30 내지 35, 35 내지 40, 또는 40 내지 43 개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다.

일 실시 상태에서, 본원의 분리된 HERV 폴리펩타이드는

SEQ ID NO:28에 나타낸 아미노산 서열:

FAFRWQGQQYSFTVLSQGYINSPALCHNLIQRELDHFLLLQDIILVHYIDDIMLIGSS(SEQ ID NO:28)

과 최소한 약 50%, 최소한 약 60%, 최소한 약 70%, 최소한 약 75%, 최소한 약 80%, 최소한 약 85%, 최소한 약 90%, 최소한 약 95%, 최소한 약 98%, 최소한 약 99%, 또는 100% 일치하는 아미노산 서열을 보유하는 아미노산 서열의 9, 10, 11, 12, 13-15, 15-17, 17-20, 20 내지 25, 25 내지 30, 30 내지 35, 35 내지 40, 40 내지 45, 45 내지 50, 50 내지 55, 또는 55 내지 58 개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다.

일 실시 상태에서, 본원의 분리된 HERV 폴리펩타이드는

SEQ ID NO:29에 나타낸 아미노산 서열:

KLRLPPGYFGLLLHLSQQAMKGVTVLAGVIDLDYQDEISLLLHNRGKEEYAWNTGDP

LGCLLVLPCPVIKV (SEQ ID NO:29).

과 최소한 약 50%, 최소한 약 60%, 최소한 약 70%, 최소한 약 75%, 최소한 약 80%, 최소한 약 85%, 최소한 약 90%, 최소한 약 95%, 최소한 약 98%, 최소한 약 99%, 또는 100% 일치하는 아미노산 서열을 보유하는 아미노산 서열의 약 9, 10, 11, 12, 13-15, 15-17, 17-20, 20 내지 25, 25 내지 30, 30 내지 35, 35 내지 40, 40 내지 45, 45 내지 50, 50 내지 55, 55 내지 60, 60 내지 65, 또는 65 내지 71 개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다.

일 실시 상태에서, 본원의 분리된 HERV 폴리펩타이드는

SEQ ID NO:30에 나타낸 아미노산 서열:

YTHDRAQAVPEGTSKLHEEVAQMPMVSTPATLSLP (SEQ ID NO:30)

과 최소한 약 50%, 최소한 약 60%, 최소한 약 70%, 최소한 약 75%, 최소한 약 80%, 최소한 약 85%, 최소한 약 90%, 최소한 약 95%, 최소한 약 98%, 최소한 약 99%, 또는 100% 일치하는 아미노산 서열을 보유하는 아미노산 서열의 약 9, 10, 11, 12, 13-15, 15-17, 17-20, 20 내지 25, 25 내지 30, 또는 30 내지 35 개의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩타이드를 포함한다.

일 실시 상태에서, 본원의 분리된 HERV 폴리펩타이드는, 예컨대, 각각 도 6, 7A, 및 8 A에 도시한 SEQ ID NO:31, 32, 및 34 중의 하나에서 나타낸 아미노산 서열과 최소한 약 50%, 최소한 약 60%, 최소한 약 70%, 최소한 약 75%, 최소한 약 80%, 최소한 약 85%, 최소한 약 90%, 최소한 약 95%, 최소한 약 98%, 최소한 약 99%, 또는 100% 일치하는 아미노산 서열을 보유하는 아미노산 서열의 약 9, 10, 11, 12, 13-15, 15-17, 17-20, 20 내지 25, 25 내지 30, 30 내지 35, 35 내지 50, 또는 50 내지 100, 또는 그 이상의 인접 아미노산을 포함하는 폴리펩타이드를 포함 한다.

일 실시 상태에서, 본원의 분리된 HERV 폴리펩타이드는 하나 이상의 다음의 아미노산 서열을 포함한다:

SQGYINSPAL (SEQ ID NO:1);

ILVHYIDDI (SEQ ID NO:2);

LQDIILVHY (SEQ ID NO:3);

PMVSTPATL (SEQ ID NO:4);

AAIDLANAF (SEQ ID NO:5);

IPVHKAHKKQ (SEQ ID NO:6);

SSGLMLMEF (SEQ ID NO:7);

KIRLPPGYF (SEQ ID NO:8);

DSIEGQLILK (SEQ ID NO:9);

FAFTIPAI (SEQ ID NO:10);

GIPYNSQGQ (SEQ ID NO:11);

FEGLVDTGAD (SEQ ID NO:12);

FLQFKTWWI (SEQ ID NO:13);

VPLTKEQVR (SEQ ID NO:14);

LDLLTAEKGGLCI (SEQ ID NO:15);

TLEPIPPGE (SEQ ID NO:16);

DPLAPLQLL (SEQ ID NO:17);

KLLGDINWI (SEQ ID NO:18);

LPHSTVKTF (SEQ ID NO:19);

GPGYCSKAF (SEQ ID NO:20);

IPTRHLKFY (SEQ ID NO:21);

VPSFGRLSY (SEQ ID NO:22);

PPTVEARYK (SEQ ID NO:23);

PPESQYGYP (SEQ ID NO:24); 및

YPQPPTRRL (SEQ ID NO:25).

특정 실시상태에서, 다음의 펩타이드는 특이적으로 배제된다: FLQFKTWWI (SEQ ID NO:13); PPESQYGYP (SEQ ID NO:24); 및 PTVEARYK (SEQ ID NO:23).

융합 단백질

일 실시 상태에서, 본원의 분리된 HERV 폴리펩타이드는 융합 단백질이며, 예컨대, HERV 융합 단백질은 이종유래 단백질에 공유 결합된 HERV 폴리펩타이드를 포함하며, 여기서, 이종유래 단백질은 "융합 파트너"로서 언급될 수 있다. 일 실시 상태에서, 융합 파트너는 HERV 단백질의 N-말단에 부착되며, 예컨대, NH₂-융합 파트너-HERV-COOH가 된다. 다른 실시상태에서, 융합 파트너는 HERV 단백질의 C-말단에 부착되어, 예컨대, NH₂-HERV-융합 파트너-COOH가 된다. 다른 실시상태에서, 융합 파트너는 HERV 단백질에 내장되어, 예컨대, NH₂-(HERV)₁-FP-(HERV₂-COOH)₂가 되고, 여기서 FP는 융합 파트너이고, HERV1 및 HERV2는 각각 HERV의 N-말단 및 C-말단 영역 이다.

적합한 융합 파트너는, 면역학적 태그, 예컨대 이에 한정되는 것은 아니나 적혈구응집소, FLAG, myc, 등을 포함하는 에피토프 태그; 이에 한정되는 것은 아니나, 형광 단백질, 효소 (예컨대, β-갈락토시다아제, 루시페라아제, 홍당무 과산화효소, 알카라인 인산효소, 등.), 등을 포함하는 검출가능한 신호를 제공하는 단백질; 융합 단백질의 정제 또는 분리를 촉진하는 폴리펩타이드, 예컨대, 금속 이온 결합 폴리펩타이드 예컨대 6His 태그, 글루타티온-S-전이효소, 등; 세포하 국소화를 위하여 제공되는 폴리펩타이드; 및 세포로부터의 분비를 제공하는 폴리펩타이드를 포함하나 이에 한정되지 않는다. 검출가능한 신호를 위하여 제공되는 융합 파트너는 또한 "수용체"라 한다. 일 실시 상태에서, 융합 파트너는 HERV 폴리펩타이드, 예컨대, 항원, 사이토카인, 등이 아닌 면역조절 폴리펩타이드이다.

다량체화 HERV 폴리펩타이드

일 실시 상태에서, 본원의 분리된 HERV 폴리펩타이드는 다량체화되어, 예컨대, 2 이상의 HERV 폴리펩타이드가 텐덤 내에서 연결되어 있다. 다량체는 이량체, 3량체, 4량체, 5량체 등을 포함한다. 단량체 HERV 폴리펩타이드는 서로 직접적으로 또는 링커를 통하여 연결된다. 따라서, 일 실시 상태에서, 본원의 HERV 폴리펩타이드는 화학식 (X₁-(Y)_0-40-X₂-(Y)_0-40)_n를 보유하며, 여기서, X₁ 및 X₂는 HERV 폴리펩타이드, Y는 링커이며, n은 1 내지 약 10 (예컨대, n = 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10)의 정수이다. 링커가 사용되는 경우, Y는 하나 이상의 아미노산이거나, 또 는 다른 연결기이다. X₁ 및 X₂는 동일하거나 또는 다를 수 있으며, 예컨대, 동일한 아미노산 서열을 보유하거나, 또는 아미노산 서열이 서로 다를 수 있다. 따라서, 예컨대, 본원의 HERV 폴리펩타이드는 화학식 X₁-(Y)_0-4O-X₂를 보유하며, 예컨대, 여기서 HERV 폴리펩타이드는 이량체이다. 다른 예로써, 본원의 HERV 폴리펩타이드는 화학식 X₁-(Y)_0-40-X₂-(Y)_0-40-X₃를 보유하며, 예컨대, HERV 폴리펩타이드는 삼량체이다.

Y가 스페이서 펩타이드인 경우, 다른 화학적 결합이 배제되지 않았음에도 일반적으로 유연성이 있다. 현재, 가장 유용한 링커 서열은 일반적으로 약 2 내지 약 40 아미노산 길이, 예컨대, 약 2 아미노산 내지 약 10 아미노산, 약 10 아미노산 내지 약 20 아미노산, 또는 약 6 아미노산 내지 약 25 아미노산 길이의 펩타이드가 될 것이다. 이러한 링커는 일반적으로 단백질과 결합하기 위한 합성, 링커-암호화 올리고뉴클레오타이드를 사용하여 제조된다.

일정 정도의 유연성을 지닌 펩타이드 링커가 일반적으로 사용될 것이다. 결합 펩타이드는 사실상 어떠한 아미노산 서열을 보유할 수 있으며, 바람직한 링커는 일반적으로 유연한 펩타이드가 되는 서열을 보유한다는 것에 유의하여야 한다. 소형 아미노산, 예컨대 글리신 및 알라닌을 사용하는 것은 유연성 펩타이드를 생성하기 위함이다. 예시적인 펩타이드 링커는 (Gly)_2-40, (Ser)_2-40, 및 (Ala)_2-40를 포함한다. 이러한 서열의 생성은 당해 기술 분야의 숙련자에게는 일상적인 작업이다. 다양한 다른 링커를 구득할 수 있으며, 본 발명에 따라 사용되기에 적합한 것으로 고려된다. 그러나, 일반적으로 약 2 아미노산 내지 약 40 아미노산 사이, 예컨대, 약 6 아미노산 내지 약 10 아미노산 길이의 유연성 링커가 사용된다. 링커는 일반적으로 유연성 펩타이드가 되는 사실상 모든 서열을 구비할 수 있다.

동종- 또는 이종-고분자 또는 담체와 커플링을 위한 결합은 다양한 방법으로 제공된다. 예를 들어, 시스테인 잔기는 아미노- 및 카르복실-말단 모두에 첨가될 수 있으며, 이 경우 펩타이드는 시스테인 잔기의 조절된 산화를 통하여 공유 결합된다. 또한 일 기능기에 이황화 결합을 생성하고 다른 쪽에 펩타이드 결합을 생성하는 다수의 이종이중작용제를 사용할 수 있으며, N-석시디미딜-3-(2-피리딜디티오)프로피오네이트(SPDP)를 포함한다. 이 시약은 하나의 단백질 내에서 자신과 시스테인 잔기 사이의 이황화 결합을 생성하며, 라이신 상의 아미노기 또는 다른 것 내의 유리 아미노기를 통한 아미드 결합을 생성한다. 다양한 이러한 이황화/아미드 형성제가 공지되어 있다. 예를 들어, 문헌 Immun. Rev. 62:185 (1982)를 참조한다. 기타 이중기능성 커플링제는 이황화 결합보다는 티오에테르를 형성한다. 다수의 이러한 티오에테르 형성제를 구득할 수 있으며, 6-말레이미도카프로산, 2 브로모아세트산, 2-요오드아세트산, 4-(N-말레이미도-메틸) 시클로헥산-1-카르복실산 등의 불활성 에스테르를 포함한다. 카르복실기는 이들과 석신이미드 또는 1-히드록시-2-니트로-4-술폰산, 나트륨염을 혼합하여 활성화될 수 있다. 특히 바람직한 커플링제는 석신이미딜 4-(N-말레이미도메틸)시클로헥산-1-카르복실레이트(SMCC)이다. 물론, 결합은 이들의 의도한 용도, 예컨대, 면역원으로서의 용도를 위한 기능을 하는 각각의 결합된 기를 실질적으로 방해하여서는 아니된다는 것을 이해하여야 한다.

담체

일 실시 상태에서, 본원의 분리된 HERV 폴리펩타이드는 담체에 결합된다. 용어 "커플링된"과 혼용되는 본원에 사용된 용어 "결합된"은 근접 결합을 의미하며, 예컨대, HERV 폴리펩타이드 및 담체는 밀접한 공간적 근접성이 있다. 일 실시 상태에서, 결합은 공유 결합이다. 다른 실시상태에서, 결합은 비공유 결합이다. 일 실시 상태에서, HERV 폴리펩타이드는 담체에 직접 결합된다. 다른 실시상태에서, HERV 폴리펩타이드는 예컨대, 링커 분자를 통하여 간접적으로 결합된다.

예시적인 적합한 담체는 대형의, 저속 대사형 마크로분자, 예컨대: 단백질; 다당류, 예컨대 세파로스, 아가로스, 셀룰로스, 셀룰로스 비드 등; 중합체형 아미노산, 예컨대 폴리글루탐산, 폴리라이신, 등; 아미노산 공중합체; 불활성화 바이러스 입자; 불활성화 박테리아 독소, 예컨대 디프테리아, 파상풍, 콜레라, 류코톡신 분자로부터 유래된 톡소이드; 리포좀; 불활성화 박테리아; 수지상 세포; 등을 포함한다. 담체는 이하에서 추가로 설명한다.

적합한 담체는 당해 기술 분야에 공지되어 있으며, 예컨대, 티로글로블린, 알부민 예컨대 인간 혈청 알부민, 파상풍 톡소이드; 디프테리아 톡소이드; 폴리아미노산, 예컨대 폴리(D-라이신:D-글루탐산); 로타바이러스의 VP6 폴리펩타이드; 인플루엔자 바이러스 적혈구응집소, 인플루엔자 바이러스 핵단백질; B형 간염 바이러스 코어 단백질, B형 간염 바이러스 표면 항원; 미코박테리움 투베르큘로시스(Mycobacterium tuberculosis)의 투베르쿨린의 정제된 단백질 유도체(PPD); 불활성화 슈도모나스 아에루시로사(Pseudomonas aeruginosa) 엑소톡신 A(독소 A); 열쇄구멍 삿갓조개 헤모시아닌(KLH); 보르데텔라 페르튜시스(Bordetella pertussis)의 필라멘트형 적혈구응집소(FHA); 파상풍 톡소이드(TT)의 T 헬퍼 세포(Th) 에피토프 및 바실러스 칼메트-구에린(Bacillus Calmette-Guerin (BCG)) 세포벽; 엠. 레프라에(M. leprae) 또는 엠. 투베르큘로시스(M. tuberculosis) 유래의 재조합 10 kDa, 19 kDa 및 30-32 kDa 단백질, 또는 이러한 단백질의 모든 조합; 등을 포함한다. 예컨대, 펩타이드를 담체에 접합하는 담체 방법을 설명하는 미국 특허 제6,447,778호를 참조한다.

슈도모나스 아에루기로사(Pseudomonas aeruginosa) 엑소톡신 A(독소 A)는 접합 백신 내에서 담체로서 효과적으로 사용되어 왔다. 슈도모나스 아에루기로사(Pseudomonas aeruginosa) 엑소톡신 A는 슈도모나스 아에루기로사(Pseudomonas aeruginosa) PA 103의 발효기-성장 배양물의 상청으로부터 정제될 수 있다. 독소 A는 동물 내에서의 결과를 기초로 한 초항원으로 분류되었다. 독소 A는 4 탄소 스페이서 분자인 아디프산 디하이드라지드(ADH)에 공유 커플링되어 완전하게 및 가역적으로 제독될 수 있다. 이 단계는 독소 분자의 ADPR-전이효소 활성을 파괴하며, 이로써 무독성을 부여한다. 비반응성 하이드라지드기는 폴리펩타이드와 독소 A의 공유적 커플링에 사용될 수 있다. 독소 A는 카보디이미드 시약을 사용하여 폴리펩타이드에 커플링될 수 있다.

PPD-펩타이드 접합체는 커플링제인 글루타르알데히드로 용이하게 제조된다. 예컨대, 문헌 Rubinstein et al. (199S) AIDS 9:243-51를 참조한다.

대상체 폴리펩타이드가 담체와 접합하는 방법은 C 말단 펩타이드 시스테인 결합을 통한 이황화 결합, 2 시간 동안 글루타르알데히드 용액과의 커플링, 티로신 과의 커플링, 또는 수용성 카보디이미드와의 커플링을 포함한다.

일 실시 상태에서, 본원의 분리된 HERV 폴리펩타이드는 지방화되었다. 지방화는 지방에 결합된 펩타이드와 세포독성 T 세포(CTL) 반응을 증가시킨다. 지방 잔기, 예컨대 팔미트산 또는 이와 유사한 것들은 펩타이드의 아미노 말단에 부착된다. 지방은 직접적으로 또는, 결합을 통하여, 예컨대 Ser-Ser, Gly, Gly-Gly, Ser 결합 등을 통하여 간접적으로 펩타이드에 부착될 수 있다. 또 다른 예로서, 이. 콜리(E. coli) 지질단백, 예컨대 트리팔미토일-S-글리세릴시스테이닐-세릴-세린(P₃ CSS)은, 펩타이드에 공유 부착되는 경우, 프라임 특이적 CTL에 사용될 수 있다. 문헌 Deres et al., Nature 342:561-564 (1989)를 참조한다. HERV 폴리펩타이드는 아세트산에서 스테아르산 및 적합한 카르복실산 무수물을 통하여 음성으로 대전된 석시닐 잔기에 이르는 서로 다른 사슬 길이 및 불포화도의 무전하 지방산 잔기와 접합을 할 수 있다. 예컨대, 미국 특허 제 6,419,931호를 참조한다.

본원의 분리된 HERV 폴리펩타이드는 직접적으로 또는 예컨대, 링커 분자를 통하여 간접적으로 담체와 접합될 수 있다. 매우 다양한 링커 분자가 공지되어 있으며 접합체로 사용될 수 있다. 펩타이드와 담체의 결합은 펩타이드 반응성 측쇄, 또는 펩타이드의 N- 또는 C-말단을 통하여 달성될 수 있다. 링커는 유기, 무기, 또는 반유기(semi-organic) 분자가 될 수 있으며, 유기 분자, 무기 분자의 중합체, 또는 무기 및 유기 분자 모두를 포함하는 공중합체가 될 수 있다.

이들이 존재하는 경우라면, 링커 분자는 일반적으로 HERV 폴리펩타이드 및 결합된 담체가 HERV 폴리펩타이드와 담체 사이의 일정한 유연성 운동을 허용하도록 하는 충분한 길이가 될 것이다. 링커 분자는 일반적으로 약 6-50 원자의 길이이다. 링커 분자는 또한, 예를 들어, 2-10 단량체 유닛, 디아민, 이가산, 아미노산, 또는 이들의 조합을 포함하는 아릴 아세틸렌, 에틸렌 글리콜 올리고머가 될 수 있다. 본원에 견지에서 폴리펩타이드에 결합할 수 있는 다른 링커 분자도 사용할 수 있다.

조성물

본 발명은 본원의 분리된 HERV 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 제공한다. HERV 폴리펩타이드를 포함하는 조성물은 하나 이상의: 염, 예컨대, NaCl, MgCl, KCl, MgSO₄, 등.; 완충제, 예컨대, 트리스 완충제, N-(2-히드록시에틸)피페라진-N'-(2-에탄술폰산)(HEPES), 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산(MES), 2-(N-모르폴리노)에탄술폰산 나트륨염(MES), 3-(N-모르폴리노)프로판술폰산(MOPS), N-트리스[히드록시메틸]메틸-3- 아미노프로판술폰산(TAPS), 등; 가용화제; 세정제, 예컨대, 비이온성 세정제, 예컨대 트윈(Tween)-20, 등; 프로테아제 억제제; 등을 포함할 수 있다. 일 실시 상태에서, 이하에서 더욱 상세히 설명하는 바와 같이, 본원의 HERV 조성물은 면역원성 조성물이다. 다른 실시상태에서, 이하에서 더욱 상세히 설명하는 바와 같이, 본원의 HERV 조성물은 약학적 조성물, 예컨대, HERV 폴리펩타이드를 포함하는 조성물 및 약학적으로 허용가능한 부형제이다.

일 실시 상태에서, 본원의 조성물은 단일 유형(또는 "종")의 HERV 폴리펩타이드를 포함하며, 예컨대, 일 실시 상태에서, 본원의 조성물 내의 HERV 폴리펩타이 드는 모두 실질적으로 동일한 아미노산 서열을 포함한다. 다른 실시상태에서, 본원의 면역원성 조성물은 2 이상의 서로 다른 HERV 폴리펩타이드를 포함하며, 예컨대, 조성물은 HERV 폴리펩타이드의 집단을 포함하며, 이 집단의 구성원은 아미노산 서열이 다를 수 있다. 본원의 조성물은 2 에서 약 20 개의 서로 다른 HERV 폴리펩타이드를 포함할 수 있으며, 예컨대, 본원의 조성물은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11-15, 또는 15-20개의 서로 다른 HERV 폴리펩타이드를 포함할 수 있으며, 이들 각각은 다른 HERV 폴리펩타이드의 아미노산 서열과는 다른 아미노산을 구비한다. 예를 들어, 일 실시 상태에서, 본원의 조성물은 제1 아미노산 서열을 구비한 제1 HERV 폴리펩타이드; 및 최소한 제2 아미노산 서열을 구비한 제2 HERV 폴리펩타이드를 포함하며, 여기서 제2 아미노산 서열은 제1 아미노산 서열과 다르다. 또 다른 예시로서, 일 실시 상태에서, 본원의 조성물은 제1 아미노산 서열을 보유한 제1 HERV 폴리펩타이드; 제2 아미노산 서열을 보유한 제2 HERV 폴리펩타이드, 여기서, 제2 아미노산 서열은 제1 아미노산 서열과 다르며; 및 최소한 제3 아미노산 서열을 보유한 제3 HERV 폴리펩타이드, 여기서 제3 아미노산 서열은 제1 및 제2 아미노산 서열 모두와 다르다. 다른 실시상태에서, 본원의 조성물은 전술한 바와 같이 다량체화 HERV 폴리펩타이드를 포함한다.

HERV 폴리펩타이드의 생산

본원의 HERV 폴리펩타이드는 다양한 방법에 의하여 생산할 수 있으며, 예컨대, 화학적 합성, 여기서, HERV 폴리펩타이드는 "합성" 폴리펩타이드이고; 자연 발생적인 공급원으로부터의 분리 및 정제; 및 재조합 수단을 포함하며, 여기서, HERV 폴리펩타이드는 "재조합" 폴리펩타이드이다. HERV 폴리펩타이드를 생산하는 재조합 수단은 당해 기술분야에 공지되어 있으며, 숙주 세포를 HERV 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열를 포함하는 폴리뉴클레오타이드로 유전적으로 변화시키는 단계, 적합한 시간 동안 조건 하에서 시험관 내에서 숙주 세포를 배양하여 유전적으로 변형된 세포에 의하여 HERV 폴리펩타이드가 생산되도록하는 단계, 및 유전적으로 변형된 세포에 의하여 생산된 HERV 폴리펩타이드를 분리하는 단계를 포함한다.

면역원성 HERV 폴리펩타이드를 포함하는 조성물

본 발명은 HERV 폴리펩타이드, 예컨대, 인간 내인성 레트로바이러스(HERV) 폴리펩타이드로부터 유도되거나 또는 이와 유관된 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩타이드를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 본원의 면역원성 조성물에 포함되기 적합한 HERV 폴리펩타이드는 전술한 바와 같다.

일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물은 렌티바이러스-감염 세포의 표면상에 제시되는 경우, 렌티바이러스-감염 세포, 예컨대, 인간 면역결핍 바이러스(HIV)-감염 세포에 특이적인 T 세포 면역 반응을 유도하는 하나 이상의 T 세포 에피토프를 포함하는 HERV 폴리펩타이드를 포함한다. "T 세포 면역 반응"은 하나 이상의: 1) HERV 에피토프에 특이적인 CD4⁺ T 세포의 숫자 및/또는 활성의 증가; 2) HERV 에피토프에 특이적인 CD8⁺ T 세포의 숫자 및/또는 활성의 증가; 및 3) Th2-타입 면역 반응을 유도하거나 또는 그 지표인 사이토카인의 분비를 포함한다. Th2 면 역 반응을 유도하거나 또는 그 지표인 사이토카인은, 이에 한정되는 것은 아니나, 인터페론-감마(IFN-γ), IL-2, 및 종양 괴사 인자-알파(TNF-α)를 포함한다.

본원의 HERV 폴리펩타이드를 포함하는 본원의 면역원성 조성물은, 이하에서 더욱 상세히 설명하는 바와 같이 다양한 방법으로 제형화 될 수 있다. 일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물은 단일 종의 HERV 폴리펩타이드를 포함하며, 예컨대, 면역원성 조성물은 HERV 폴리펩타이드의 집단을 포함하며, 실질적으로 이들 모두는 동일한 아미노산 서열을 보유한다. 다른 실시상태에서, 본원의 면역원성 조성물은 2 이상의 서로 다른 HERV 폴리펩타이드를 포함하며, 예컨대, 면역원성 조성물은 HERV 폴리펩타이드의 집단을 포함하며, 이 집단의 구성원은 아미노산 서열이 다를 수 있다. 본원의 면역원성 조성물은 2 내지 약 20 개의 서로 다른 HERV 폴리펩타이드를 포함할 수 있으며, 예컨대, 본원의 면역원성 조성물은 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11-15, 또는 15-20 개의 서로 다른 HERV 폴리펩타이드를 포함할 수 있으며, 각각은 다른 HERV 폴리펩타이드의 아미노산 서열과 다른 아미노산을 보유한다. 예를 들어, 일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물은 제1 아미노산 서열을 보유한 제1 HERV 폴리펩타이드; 및 최소한 제2 아미노산 서열을 보유한 제2 HERV 폴리펩타이드를 포함하며, 여기서, 제2 아미노산 서열은 제1 아미노산 서열과 다르다. 또 다른 예시로서, 일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물은 제1 아미노산 서열을 보유한 제1 HERV 폴리펩타이드; 제2 아미노산 서열을 보유한 제2 HERV 폴리펩타이드, 여기서, 제2 아미노산 서열은 제1 아미노산 서열과 다르다; 및 최소한 제3 아미노산 서열을 보유한 제3 HERV 폴리펩타이드를 포함하며, 여기서 제3 아미 노산 서열은 제1 및 제2 아미노산 서열 모두와 다르다. 다른 실시상태에서, 본원의 면역원성 조성물은 전술한 바와 같이 다량체화 HERV 폴리펩타이드를 포함한다.

보조제

투여되는 면역원성 조성물은 약학적으로 허용가능한 희석제 예컨대, 수성 용액, 예컨대, 식염수 용액, 반-고체 형태(예컨대, 겔), 또는 분말 형태로 제공된다. 이러한 희석제는 본원의 HERV 조성물이 보조제를 포함하더라도 불활성이다. 인간에 사용되는 공지의 적합한 보조제의 예는, 이에 반드시 한정되는 것은 아니나, 백반, 인산 알루미늄, 수산화 알루미늄, MF59(4.3% w/v 스쿠알렌, 0.5% w/v 트윈 80, 0.5% w/v 스판 85), CpG-함유 핵산(사이토신이 탈메틸화되는 경우), QS21, MPL, 3DMPL, 아퀼라 추출물, ISCOMS, LT/CT 돌연변이, 폴리(D,L-락타이드-co-글리콜라이드) (PLG) 미소입자, Quil A, 인터류킨, 등을 포함한다. 비인간 동물(예컨대 척추동물 적용; 실험적 비인간 동물)에 있어서, 프로인트 보조제, N-아세틸-무라밀-L-트레오닐-D-이소글루타민(thr-MDP), N-아세틸-노르-무라밀-L-알라닐-D-이소글루타민(CGP 11637, 노르-MDP), N-아세틸무라밀-L-알라닐-D-이소글루타미닐-L-알라닌-2-(1'-2'-디팔미토일-sn-글리세로-3-히드록시포스포릴옥시)-에틸아민(CGP 19835A, MTP-PE), 및 박테리아, 모노포스포릴 지질 A, 트레할로스 디마이콜레이트 및 세포벽 골격(MPL+TDM+CWS)의 2% 스쿠알렌/트윈 80 에멀젼으로부터 추출한 3 성분을 함유한 RIBI를 사용할 수 있다. 보조제의 효능은 면역원성 항원에 직접 대응하는 항체의 양을 측정함으로써 결정될 수 있다.

조성물의 효능을 강화하는 추가의 예시적인 보조제는, 이에 한정되는 것은 아니나 다음을 포함한다: (1) 수중유 에멀젼 제형(특이적 면역자극제 예컨대, 무라밀 펩타이드(하기 참조) 또는 박테리아 세포벽 성분 등과 함께 또는 제외하고), 예컨대 예를 들어 (a) MF59™ (W090/14837; Chapter 10 in Vaccine design: the subunit and adjuvant approach, eds. Powell & Newman, Plenum Press 1995), 이는 5% 스쿠알렌, 0.5% 트윈 80 (폴리옥시에틸렌 소르비탄 모노-올레이트), 및 0.5% 스판 85 (소르비탄 트리올레이트) (선택적으로 디팔미토일 포스파티딜에탄올아민(MTP-PE)에 공유 결합된 무라밀 트리-펩타이드를 함유)를 함유하며, 미소유화장치를 사용하여 서브마이크론 입자로 제형화되었고, (b) SAF, 이는 10% 스쿠알란, 0.4% 트윈 80, 5% 플루론-차단 고분자 L121, 및 thr-MDP를 함유하며, 이들은 서브마이크론 에멀젼으로 미소유화되거나 또는 대형 입자 크기 에멀젼을 생성하기 위하여 와동되고, 및 (c) REBFM 보조제 시스템(RAS), (Ribi Immunochern, Hamilton, MT), 이는 2% 스쿠알렌, 0.2% 트윈 80, 및 하나 이상의 박테리아 세포벽 성분 예컨대 모노포스포릴지질 A (MPL), 트레할로스 디마이콜레이트(TDM), 및 세포벽 골격(CWS), 바람직하게는 MPL + CWS(DETOX™)를 포함하고; (2) 사포닌 보조제, 예컨대 QS21 또는 STIMULON™ (Cambridge Bioscience, Worcester, MA)가 사용될 수 있으며 또는 예컨대 ISCOMs(면역자극 복합체)로부터 생성된 입자로서, ISCOMS는 추가적인 세정제를 제외할 수 있다(예컨대 WO00/07621); (3) 완전 프로인트 보조제 보조제(CFA) 및 불완전 프로인트 보조제 보조제(BFA); (4) 사이토카인, 예컨대 인터류킨(예컨대 IL-1, IL-2, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-12 (WO99/44636), 등.), 인터페론(예컨대 감마 인터페론), 대식세포 집락 자극 인자(M-CSF), 종양 괴사 인 자(TNF), 등; (5) 모노포스포릴 지질 A (MPL) 또는 3-O-데아실화 MPL (3 dMPL) 예컨대 GB-2220221, EP-A-0689454, 폐렴구균 당류에 사용되는 경우 선택적으로 백반이 실질적으로 부재, 예컨대 WO00/56358; (6) 3dMPL과, 예를 들어, QS21 및/또는 수중유 에멀젼과의 조합, 예컨대 EP-A-0835318, EP-A-0735898, EP-A-0761231; (7) CpG 모티프를 포함하는 올리고뉴클레오타이드 [Krieg Vaccine 2000, 19, 618-622; Krieg CurropinMol Ther 2001 3:15-24; Roman et al, Nat. Med., 1997, 3, 849-854; Weiner et al., PNAS USA, 1997, 94, 10833-10837; Davis et al, J. Immunol, 1998, 160, 870-876; Chu et al., J. Exp Med, 1997, 186, 1623-1631; Lipford et al, Ear. J. Immunol, 1997, 27, 2340-2344; Moldoveami et al, Vaccine, 1988, 16, 1216-1224, Krieg et al, Nature, 1995, 374, 546-549; Klinman et al, PNAS USA, 1996, 93, 2879-2883; Ballas et al, J. Immunol, 1996, 157, 1840-1845; Cowdery et al, J. Immunol, 1996, 156, 4570-4575; Halpern et al, Cell Immunol, 1996, 167, 72-78; Yamamoto et al, Jpn. J. Cancer Res., 1988, 79, 866-873; Stacey et al, J. Immunol, 1996, 157,2116-2122; Messina et al, J. Immunol, 1991, 147, 1759-1764; Yi et al, J. Immunol, 1996, 157,4918-4925; Yi et al, J. Immunol, 1996, 157, 5394-5402; Yi et al, J. Immunol, 1998, 160, 4755-4761; 및 Yi et al, J. Immunol, 1998, 160, 5898-5906; 국제 특허 출원 WO96/02555, W098/16247, WO98/18810, WO98/40100, WO98/55495, WO98/37919 및 WO98/52581] 즉, 사이토신이 탈메틸화되는 경우 최소한 하나의 CG 디뉴클레오타이드를 함유한다; (8) 폴리옥시에틸렌 에테르 또는 폴리옥시에틸렌 에스테르 예컨대 WO99/52549; (9) 옥트옥사놀 (WO01/21207) 또는 폴리옥시에틸렌 알킬 에테르와 조합하는 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르 계면활성제 또는 최소한 하나의 부가적인 비이온성 계면활성제 예컨대 옥트옥사놀(WO01/21152)과 조합하는 에스테르 계면활성제; (10) 사포닌 및 면역자극성 올리고뉴클레오타이드(예컨대 CpG 올리고뉴클레오타이드) (WO00/62800); (11) 면역자극제 및 금속 염 입자, 예컨대 WO00/23105; (12) 사포닌 및 수중유 에멀젼, 예컨대 WO99/11241 ; (13) 사포닌(예컨대 QS21) + 3dMPL + IM2(선택적으로 + 스테롤), 예컨대 WO98/57659; (14) 조성물의 효능을 강화하는 면역자극제로서 작용하는 다른 물질. 무라밀 펩타이드는 N-아세틸-무라밀-L-트레오닐-D-이소글루타민(thr-MDP), N-25 아세틸-노르무라밀-L-알라닐-D-이소글루타민 (노르-MDP), N-아세틸무라밀-L-알라닐-D-이소글루타니닐-L-알라닌-2-(1'-2'-디팔미토일-sn-글리세로-3-하이드록시포스포릴옥시)-에틸아민 MTP-PE), 등.

면역원성 조성물은 통상적인 약학적으로 허용가능한 부형제, 예컨대 약학적 등급의 만니톨, 락토오스, 전분, 스테아르산 마그네슘, 나트륨 사카린, 활석, 셀룰로스, 글루코스, 슈크로스, 마그네슘, 카보네이트, 등과 조합될 수 있다. 조성물은 대략적인 생리학적 조건에 필요한 약학적으로 허용가능한 보조 물질, 예컨대 pH 조절 및 완충제, 독성 조절제 등, 예를 들어, 아세트산 나트륨, 염화 나트륨, 염화 칼륨, 염화 칼슘, 락트산 나트륨 등을 함유할 수 있다. 이러한 제형 내의 항원의 농도는 매우 다양하며, 1차적으로 선택된 특정 투여 방법 및 환자의 요구에 따른 유체부피, 점도, 체중 등에 기초하여 선택된다. 결과 조성물은 용액, 현탁액, 타블렛, 알약, 캡슐, 분말, 겔, 크림, 로션, 연고, 에어로졸 등의 형태가 될 수 있다.

약학적 제형 내에서 본원의 면역원성의 단백질 농도는 달라질 수 있으며, 즉 중량부로 약 0.1 % 이하, 또는 최소한 약 2%에서 20% 내지 50% 또는 그 이상이 될 수 있으며, 선택된 특정 투여 방법에 따른 유체부피, 점도에 의하여 1차적으로 선택된다.

일 실시 상태에서, HERV 폴리펩타이드는 하나 이상의 지방과 함께 제형화된다. 예를 들어, 다양한 크기의 리포좀을 제조할 수 있다. 형성된 소형 리포좀 또는 소포체는 단층(단층)이며, 약 20 내지 400 나노미터의 크기 범위이고, 다층 소포에 초음파를 가하거나, 정의된 크기의 공극을 지닌 막을 통하여 압력으로 압출하거나, 또는 고압 균질화를 통하여 생산할 수 있다. 약 0.1 내지 1 μm 크기 범위의 직경을 지닌 대형 단층 리포좀은 지방을 유기 용매 또는 세정제 내에서 가용화하고, 가용화된 약제를 각각 증발 또는 투석을 통하여 제거하여 획득할 수 있다. 특정 지방 또는 엄격한 탈수-수화 조건을 필요로하는 방법에 의한 더 작은 단층 리포좀의 융합은 세포 만큼 또는 그보다 큰 단층 도관을 생성할 수 있다.

리포좀은 하나 이상의 양이온성 지방, 예컨대, DDAB, 디메틸디옥타데실 암모늄 브로마이드; N-[1-(2,3-디올로일옥시)프로필]-N,N,N-트리메틸암모늄 메틸설페이트; 1,2-디아실-3-트리메틸암모늄-프로판, (디올레오일(DOTAP), 디미리스토일, 디팔미토일, 디세아로일을 포함하나 이에 한정되지 않음); 1,2-디아실-3-디메틸암모늄-프로판, (디올레오일, 디미리스토일, 디팔미토일, 디세아로일을 포함하나 이에 한정되지 않음) DOTMA, N-[1-[2,3-비스(올레오일옥시)]프로필]-N,N,N-트리메틸염화 암모늄; DOGS, 디옥타데실아미도글리실스퍼민; DC-콜레스테롤, 3β-[N-(N',N'-디메 틸아미노에탄)카바모일] 콜레스테롤; DOSPA, 2,3-디올레오일옥시-N-(2(스퍼민카르복시아미도)-에틸)-N,N-디메틸-1-프로판암모늄 트리플루오로아세테이트; 1,2-디아실-sn-글리세로-3-에틸포스포콜린(디올레오일(DOEPC), 디라우로일, 디미리스토일, 디팔미토일, 디스테아로일, 팔미토일-올레오일을 포함하나 이에 한정되지 않음); β-알라닐 콜레스테롤; CTAB5 세틸 트리메틸 암모늄 브로마이드; 디C14-아미딘, N-t-부틸-N'-테트라데실-3-테트라데실아미노프로피온아미딘; 14Dea2, O,O'-디테트라데카놀일-N-(트리메틸암모니오아세틸) 디에탄올아민 클로라이드; DOSPER, 1,3-디올레오일옥시-2-(6-카르복시-스퍼밀)-프로필아미드; N,N,N',N'-테트라메틸-N,N'-비스(2-히드록시에틸)-2,3-디올레오일옥시-1,4-부탄디암모늄 아이오다이드; 1-[2-아실옥시)에틸]2-알킬(알케닐)-3-(2-히드록시에틸)이미다졸륨 클로라이드 유도체, 예컨대 1-[2-(9(Z)-옥타디세노일옥시)에틸]-2-(8(Z)-헵타디세닐-3-(2-히드록시에틸)이미다졸륨 클로라이드 (DOTIM), 1-[2-(헥사데카노일옥시)에틸]-2-펜타데실-3-(2-히드록시에틸)이미다졸륨 클로라이드(DPTIM); 1-[2-테트라데카노일옥시)에틸]-2-트리데실-3-(2-히드록시에틸)이미다졸륨 클로라이드(DMTIM)-문헌 Solodin et al. (1995) Biochem. 43:13537-13544에 설명; 4차 아민 상의 히드록시알킬 모이어티를 함유하는 2,3-디알킬옥시프로필 4차 암모늄 화합물 유도체, 예컨대 1,2-디올레오일-3-디메틸-히드록시에틸 암모늄 브로마이드(DORI); 1,2-디올레일옥시프로필-3-디메틸-히드록시에틸 암모늄 브로마이드 (DORIE); 1,2-디올레일옥시프로필-3-디메틸-히드록시프로필 암모늄 브로마이드 (DORIE-HP); 1,2-디올레일옥시프로필-3-디메틸-히드록시부틸 암모늄 브로마이드 (DORIE-HB); 1,2-디올레일옥시프로필-3-디메틸-히드 록시펜틸 암모늄 브로마이드 (DORIE-HPe); 1,2-디미리스틸옥시프로필-3-디메틸-히드록시에틸 암모늄 브로마이드 (DMRIE); 1,2-디팔미토일옥시프로필-3-디메틸-히드록시에틸 암모늄 브로마이드 (DPRIE); 1,2-디스테릴옥시프로필-3-디메틸-히드록시에틸 암모늄 브로마이드 (DSRIE) (예컨대, 문헌 Feigner et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:2550-2561에 설명)를 포함한다. 다수의 전술한 지방은, 예컨대, Avanti Polar Lipids, Inc.; Sigma Chemical Co.; Molecular Probes, Inc.; Northerm Lipids, Inc.; Roche Molecular Biochemicals; 및 Promega Corp 사로부터 구득할 수 있다.

리포좀은 양이온성 지방을 단독으로, 또는 다른 지방, 특히 천연 지방, 예컨대: 콜레스테롤; 1,2-디아실-sn-글리세로-3-포스포에탄올아민(디올레오일(DOPE), 1,2-디아실-sn-글리세로-3-포스포콜린; 천연 난황 포스파티딜 콜린(PC), 등; 합성 모노- 및 디아실 포스포콜린 (예컨대, 모노아실 포스파티딜 콜린(MOPC)를 포함하나 이에 한정되지 않음) 및 포스포에탄올아민 등과 혼합하여 포함될 수 있다. 전술한 디아실 유도체를 위하여 비대칭 지방산, 합성 및 천연 모두, 및 혼합 제형을 포함한다.

다른 적합한 리포좀 조성물은 디미리스토일포스파티딜콜린(DMPC) 및 콜레스테롤을 포함한다. 이러한 리포좀은, 예컨대, 미국 특허 제5,916,588호에 설명되어 있다. 추가적인 적합한 리포좀 조성물, 및 이들의 제조 방법은 공지되어 있으며, 예컨대, 미국 특허 제4,241,046호 및 제6,355,267호를 포함하는 다양한 문헌에서 설명하고 있다.

HERV 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 면역원성 조성물

본 발명은 HERV 폴리뉴클레오타이드, 예컨대, HERV 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드를 포함하는 면역원성 조성물을 제공한다. 이들이 필요한 개체에 투여하는 경우, HERV 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 폴리뉴클레오타이드("HERV 폴리뉴클레오타이드")가 세포, 예컨대, 항원-제시 세포에 의하여 포획되며, 암호화된 HERV 폴리펩타이드는 세포 내에서 생산되고, HERV 폴리펩타이드는 MHC 분자와 결합하여 세포 표면상에 디스플레이하는 에피토프-디스플레이 폴리펩타이드 절편("에피토프 절편")으로 가공된다. 암호화된 HERV 폴리펩타이드는 세포 표면상에 현시된 에피토프(들)에 대한 T 세포 반응을 자극하거나 또는 강화한다. 또한 HERV 에피토프가 렌티바이러스-감염 세포 상에 존재하는 경우, 렌티바이러스-감염 세포에 대한 T 세포 반응이 발생한다.

발현 벡터 및 전달 운반체

일 실시 상태에서, HERV 폴리뉴클레오타이드는 발현 벡터이다. 발현 벡터는 전사 및 번역 개시 영역을 제공하게 되며, 암호화 영역이 전사 개시 영역, 및 전사와 번역 종결 영역의 전사 조절하에서 작동가능하게 연결된 경우, 유도성이거나 또는 구성적일 수 있다.

발현 벡터는 일반적으로 프로모터 서열 부근에 위치한 편리한 제한 부위를 보유하여 이종유래 단백질을 암호화하는 핵산 서열의 삽입을 제공한다. 발현 숙주 내에서 작동하는 선택가능한 마커가 제공될 수 있다. 적합한 발현 벡터는, 이에 한 정되는 것은 아니나, 바이러스 벡터(예컨대, 백시니아 바이러스; 폴리오바이러스; 아데노바이러스에 기초한 바이러스 벡터(예컨대, Li et al., Invest Opthalmol Vis Sci 35:2543 2549, 1994; Borras et al., Gene Ther 6:515 524, 1999; Li and Davidson, PNAS 92:7700 7704, 1995; Sakamoto et al., H Gene Ther 5:1088 1097, 1999; WO 94/12649, WO 93/03769; WO 93/19191; WO 94/28938; WO 95/11984 및 WO 95/00655); 아데노-유관 바이러스(예컨대, AIi et al., Hum Gene Ther 9:81 86, 1998, Flannery et al., PNAS 94:6916 6921, 1997; Bennett et al., Invest Opthalmol Vis Sci 38:2857 2863, 1997; Jomary et al., Gene Ther 4:683 690, 1997, Rolling et al., Hum Gene Ther 10:641 648, 1999; AIi et al., Hum MoI Genet 5:591 594, 1996; Srivastava in WO 93/09239, Samulski et al., J. Vir. (1989) 63:3822-3828; Mendelson et al., Virol. (1988) 166:154-165; 및 Flotte et al., PNAS (1993) 90:10613-10617); SV40; 헤르페스 심플렉스 바이러스; 인간 면역결핍 바이러스(예컨대, Miyoshi et al., PNAS 94:10319 23, 1997; Takahashi et al., J Virol 73:7812 7816, 1999); 레트로바이러스 벡터 (예컨대, 뮤린 백혈병 바이러스, 비장 괴사 바이러스, 및 레트로바이러스에서 유도된 벡터, 예컨대 로우스 사르코마 바이러스, 하베이 사르코마 바이러스, 조류 백혈증 바이러스, 인간 면역결핍 바이러스, 골수증식 사르코마 바이러스, 및 유선 종양 바이러스); 등을 포함한다.

다양한 적합한 발현 벡터는 당해 기술 분야의 숙련자에게 공지되어 있으며, 그 중 다수를 구득할 수 있다. 다음의 벡터는 예시에 의하여 제공된다; 진핵 숙주 세포에 있어서는: pXT1, pSG5(Stratagene), pSVK3, pBPV, pMSG, 및 pSVLSV40(Pharmacia). 그러나, 숙주 세포와 적합성이 있는 한 어떠한 벡터도 사용할 수 있다.

사용하는 숙주/벡터 시스템에 따라, 구성적 및 유도성 프로모터, 전사 인헨서 요소, 전사 터미네이터, 등을 포함하는 어떠한 수의 적합한 전사 및 번역 조절 요소도 발현 벡터에 사용할 수 있다(예컨대, Bitter et al. (1987) Method in Enzymology, 153:516-544).

적합한 진핵 프로모터 (진핵 세포 내에서 기능성인 프로모터)의 비제한적 예는 CMV 즉 초기, HSV 티미딘 키나아제, 초기 및 말기 SV40, 레트로바이러스의 LTRs, 및 마우스 메탈로티오네인-I을 포함한다. 적합한 벡터 및 프로모터의 선택은 당해 기술 분야의 숙련자의 범위 내에 있다. 발현 벡터는 번역 개시 및 전사 터미네이터를 위한 리보솜 결합 부위를 포함할 수 있다. 발현 벡터는 발현을 증폭하기 위한 적합한 서열을 포함할 수 있다.

대상체 재조합 벡터는 일 실시 상태에서 하나 이상의 선택가능한 마커를 포함한다. 이와 아울러, 발현 벡터는, 많은 실시 상태에서, 하나 이상의 선택가능한 마커 유전자를 함유하여 형질전환된 숙주 세포의 선택을 위하여 표현형적 특성을 제공하게 되며, 예컨대 진핵 세포 배양물을 위하여 디하이드로폴레이트 환원효소 또는 네오마이신 내성이 있다.

기타 유전자 전달 운반체 및 방법을 사용할 수 있으며, 사멸 아데노바이러스에만 결합되거나 또는 결합되지 않은 다중양이온성 축합 DNA를 포함하고, 예를 들 어 Curiel (1992) Hum. Gene Ther. 3:147-154; 리간드 결합 DNA, 예를 들어 Wu (1989) J. Biol. Chem. 264:16985-16987; 진핵 세포 전달 운반체 세포; 광중합 수화겔 물질의 침전; 휴대용 유전자 전이 입자총(미국 특허 제5,149,655호); 이온화 조사(미국 특허 제5,206,152호 및 WO 92/11033); 핵 전하 중성화 또는 세포막과의 융합. 추가적인 접근법은 문헌 Philip (1994) Mol. Cell Biol. 14:2411-2418, 및 Woffendin (1994) Proc. Natl. Acad. Sd. 91:1581-1585에 설명되어 있다.

네이키드 DNA를 사용할 수 있다. 예시적인 네이키드 DNA 도입 방법은 WO 90/11092 및 미국 특허 제5,580,859호에 설명되어 있다. 포획 효능은 생분해성 라텍스 비드를 사용하여 행상될 수 있다. DNA 피복 라텍스 비드는 비드에 의한 세포내이입 개시 후 효과적으로 세포 내로 전달된다. 이 방법은 소수성을 향상시켜, 엔도솜의 파괴를 촉진하게 되고 DNA를 세포질로 방출하게 되는 비드의 처리에 의하여 추가로 향상될 수 있다. 유전자 전달 운반체로서 작용할 수 있는 리포좀은 미국 특허 제 5,422,120호, PCT WO 95/13796, WO 94/23697, 및 WO 91/14445, 및 EP 제524968호에 설명되어 있다.

리포좀 또는 지방 핵산 전달 운반체를 사용할 수도 있다. 유전자 전달을 위한 리포좀 복합체는, 예컨대, 미국 특허 제7,001,614호에 설명되어 있다. 예를 들어, 2.0 mM 내지 1O mM 범위의 몰비로 존재하는 DOTAP 및 최소한 하나의 콜레스테롤 및/또는 콜레스테롤-유도체를 포함하는 리포좀은 예컨대, DOTAP와 콜레스테롤의 몰비가 1:1 내지 3:1인 경우 효과적인 전달 시스템을 제공한다. 양이온성 지방 N-[(2,3-디올레오일옥시)프로필]-L-라이신아미드(LADOP)는 HERV 폴리뉴클레오타이드 의 전달을 위한 조성물에 사용될 수 있으며, LADOP-함유 리포좀은, 예컨대, 미국 특허 제7,067,697호에 설명되어 있다. 전달감염을 촉진할 수 있는 극성 머리기 및 지방 성분을 구비한 양친매성 지방을 포함하는 리포좀 제형이 사용에 적합하며, 예컨대, 미국 특허 제6,433,017호에 설명되어 있다.

사용에 적합한 추가적인 비-바이러스 전달은 기계적 전달 시스템을 포함하며, 예컨대 이러한 방법은 문헌 Woffendin et al.(1994) Proc. Natl. Acad. Sd. USA 91:11581-11585에 설명되어 있다. 더욱이, 이들의 암호화 서열 및 발현 산물은 광중합 수화겔 물질의 침전을 통하여 전달될 수 있다. 암호화 서열의 전달에 사용될 수 있는 유전자 전달을 위한 기타 통상적인 방법은, 예를 들어, 휴대용 유전자 전이 입자 총의 사용(미국 특허 제5,149,655호); 전달된 유전자를 활성화시키기 위한 이온화 조사의 사용(미국 특허 제5,206,152호 및 PCT WO 92/11033)을 포함한다.

치료 방법

본 발명은 다양한 치료 방법을 제공하며, 이러한 방법은 본원의 HERV 폴리펩타이드 또는 본원의 HERV 조성물을 사용한다. 본원의 치료 방법은 예컨대, 레트로바이러스 감염(예컨대, 렌티바이러스 감염)의 치료, 암 치료 등을 위하여 개체 내에서 HERV 폴리펩타이드에 대한 면역 반응을 유도하는 방법, 및 HERV 폴리펩타이드에 대한 대상체의 면역 반응을 증진시키는 방법; 및 자가면역 질환, 정신분열증의 치료를 위하여 HERV 폴리펩타이드에 대한 대상체의 면역 반응을 저하시키는 방법을 포함한다.

레트로바이러스-감염 세포에 대한 면역 반응을 유도하거나 또는 강화하는 방 법

본 발명은 이들을 필요로하는 개체 내에서 레트로바이러스-감염 세포, 예컨대, HTLV-감염 세포에 대한 T 세포 면역 반응을 유발, 유도 또는 강화하는 방법을 제공한다. 방법은 일반적으로 본원의 면역원성 조성물의 유효량을 개체에 투여하는 단계를 포함한다.

일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 면역원성 조성물로 치료 전 개체 내의 바이러스 부하(load)에 비하여 개체 내의 레트로바이러스 부하가 최소한 약 5%, 최소한 약 10%, 최소한 약 20%, 최소한 약 25%, 최소한 약 50%, 최소한 약 75%, 최소한 약 85%, 또는 최소한 약 90% 감소하는 양이다.

일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 레트로바이러스-감염 세포 상에 제시되는 레트로바이러스 에피토프에 특이적인 T 세포의 수를 증가시키는 양이다. 일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 면역원성 조성물로 치료 전 레트로바이러스 에피토프에 특이적인 T 세포의 수에 비하여, 레트로바이러스-감염 세포 상에 제시되는 레트로바이러스 에피토프에 특이적인 T 세포의 수가 최소한 약 25%, 최소한 약 50%, 최소한 약 100% 또는 2배, 최소한 약 5배, 최소한 약 10배, 또는 최소한 약 100배, 또는 그 이상의 증가를 나타내는 양이다.

일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은 개체에 하나 이상 의 투여용량을 투여하는 경우 레트로바이러스-감염 세포 상에 제시되는 레트로바이러스 에피토프에 특이적인 CD8⁺ T 세포의 수를 증가시키는 양이다. 일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 면역원성 조성물로 치료 전 레트로바이러스 에피토프에 특이적인 CD8⁺ T 세포의 수에 비하여, 레트로바이러스-감염 세포 상에 제시되는 레트로바이러스 에피토프에 특이적인 CD8⁺ T 세포의 수가 최소한 약 25%, 최소한 약 50%, 최소한 약 100% 또는 2배, 최소한 약 5배, 최소한 약 10배, 또는 최소한 약 100배, 또는 그 이상의 증가를 나타내는 양이다.

일 실시 상태에서, 예컨대, 면역원성 조성물을 미경험 개체(즉, 레트로바이러스 예컨대 HTLV에 감염되지 않은 개체)에 투여하는 경우, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은, 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 개체가 후에 레트로바이러스 예컨대 HTLV로 감염되었을 때, 레트로바이러스 감염에 의한 질병 증상을 발달시킬 가능성을 감소시키는 양이다. 일 실시 상태에서, 예컨대, 면역원성 조성물을 미경험 개체(즉, 레트로바이러스로 감염되지 않은 개체)에 투여하는 경우, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은, 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 개체가 후에 레트로바이러스 예컨대 HIV로 감염되었을 때, 레트로바이러스 감염을 제한 및/또는 제거할 가능성을 증가시키는 양이다.

렌티바이러스-감염 세포에 대한 면역 반응을 유도하거나 또는 강화시키는 방법

본 발명은 이들이 필요한 개체 내에서 렌티바이러스-감염 세포, 예컨대, HIV-감염 세포에 대한 T 세포 면역 반응을 유발, 유도 또는 강화하는 방법을 제공한다. 방법은 일반적으로 본원의 면역원성 조성물의 유효량을 개체에 투여하는 단계를 포함한다.

일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은, 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 면역원성 조성물로 치료하기 전의 개체 내의 바이러스 부하에 비하여, 개체 내의 바이러스 부하를 최소한 약 5%, 최소한 약 10%, 최소한 약 20%, 최소한 약 25%, 최소한 약 50%, 최소한 약 75%, 최소한 약 85%, 또는 최소한 약 90% 감소시키는 양이다.

일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은, 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 개체 내에서 CD4⁺ T 림프구 수준 및 기능(들)을 증가시키는 양이다. 일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은, 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 면역원성 조성물로 치료하기 전 개체 내의 CD4⁺ T 림프구의 수준에 비하여 최소한 약 25%, 최소한 약 50%, 최소한 약 100% 또는 2배, 최소한 약 5배, 최소한 약 10배, 또는 최소한 약 100배, 또는 그 이상으로 증가시키는 양이다. 일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은, 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 정상 범위 내의 CD4⁺ T 림프구의 수가 되도록 하는 양이며, 여기서, 인간의 정상 범위는 ㎣ 혈액당 약 600 내지 약 1500 CD4⁺ T 림프구이다.

일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은, 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 렌티바이러스-감염 세포상에 제시되는 렌티바이러스 에피토프에 특이적인 T 세포의 수를 증가시키는 양이다. 일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은, 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 렌티바이러스-감염 세포상에 제시되는 렌티바이러스 에피토프에 특이적인 T 세포의 수를 면역원성 조성물로 치료하기 전 개체 내의 렌티바이러스 에피토프 특이적 T 세포의 수에 비하여 최소한 약 25%, 최소한 약 50%, 최소한 약 100% 또는 2배, 최소한 약 5배, 최소한 약 10배, 또는 최소한 약 100배, 또는 그 이상으로 증가시키는 양이다.

일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은, 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 렌티바이러스-감염 세포상에 제시되는 렌티바이러스 에피토프 특이적 CD8⁺ T 세포의 수를 증가시키는 양이다. 일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은, 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 렌티바이러스-감염 세포상에 제시되는 렌티바이러스 에피토프에 특이적인 CD8⁺ T 세포의 수를, 면역원성 조성물로 치료하기 전 개체 내의 렌티바이러스 에피토프 특이적 CD8⁺ T 세포의 수에 비하여 최소한 약 25%, 최소한 약 50%, 최소한 약 100% 또는 2배, 최소한 약 5배, 최소한 약 10배, 또는 최소한 약 100배, 또는 그 이상 증가시 키는 양이다.

일 실시 상태에서, 예컨대, 면역원성 조성물을 미경험 개체(즉, 렌티바이러스 예컨대 HIV로 감염되지 않은 개체)에 투여하는 경우, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은, 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 개체가 후에 렌티바이러스 예컨대 HIV에 감염되었을 때, 렌티바이러스 감염에 의한 질병 증상을 발달시킬 가능성을 감소시키는 양이다. 일 실시 상태에서, 예컨대, 면역원성 조성물을 미경험 개체(즉, 렌티바이러스 예컨대 HIV로 감염되지 않은 개체)에 투여하는 경우, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은, 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 개체가 후에 렌티바이러스 예컨대 HIV에 감염되었을 때, 렌티바이러스 감염을 제한 및/또는 제거할 가능성을 증가시키는 양이다.

병용 요법

본원의 면역원성 조성물은 렌티바이러스 감염의 치료, 또는 렌티바이러스 감염(예컨대, 박테리아 감염, 진균 감염, 등)에 수반되는 질환의 치료를 위한 하나 이상의 치료제와 함께 투여될 수 있다. 치료제는 베타-락탐 항생제, 테트라사이클린, 클로람페니콜, 네오마이신, 그라미시딘, 바시트라신, 설폰아미드, 니트로푸라존, 날리딕스산, 코르티손, 하이드로코르티손, 베타메타손, 덱사메타손, 플루오코르톨론, 프레드니솔론, 트리암시놀론, 인도메타신, 술린닥, 아시클로비어, 아만타딘, 리만타딘, 재조합 가용성 CD4(rsCD4), 항수용체 항체 (예컨대, 리노바이러스용), 네비라핀, 시도포비어(Vistide™), 트리소듐 포스포노포르메이트(Foscarnet™), 팜사이클로비어, 펀사이클로비어, 발라사이클로비어, 핵산/복제 억제제, 인터 페론, 지도부딘(AZT, Retrovir™), 디다노신(디데옥시이노신, ddI, Videx™), 스타부딘(d4T, Zerit™), 잘시타빈(디데옥시사이토신, ddC, Hivid™), 네비라핀(Viramune™), 라미부딘(Epivir™, 3TC), 프로테아제 억제제, 사퀴나비어(Invirase™, Fortovase™), 리토나비어 (norvir™), 넬티나비어(Viracept™), 에파비렌즈(Sustiva™), 아바카비어(Ziagen™), 암프레나비어(Agenerase™) 인디나비어(Crixivan™), 간시클로비어, AzDU, 델라비르딘(Rescriptor™), 켈라트라, 트리지비르, 리팜핀, 클라티로마이신, 에리스로포이에틴, 집락 자극 인자(G-CSF 및 GM-CSF), 비-뉴클레오사이드 역전사효소 억제제, 뉴클레오사이드 억제제, 아드리아마이신, 플루오로우라실, 메토트렉세이트, 아스파라기나아제 및 이들의 조합을 포함하나 이에 한정되지 않는다.

암 치료 방법

본 발명은 암이 HERV의 발현과 관련된 경우, 개체 내의 암을 치료하는 방법을 추가로 제공한다. 이러한 암은, 이에 한정되는 것은 아니나, 난소암, 유방암, 흑색종, 전립선암, 고환종, 기형종, 및 고환암을 포함한다. 방법은 일반적으로 이들이 필요한 개체에 하나 이상의 HERV 폴리펩타이드를 포함하는 본원의 면역원성 조성물의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.

암을 치료하기 위한 본원의 방법은 하나 이상의 HERV 폴리펩타이드를 정상적으로 발현하는 세포를 포함하는 조직으로부터 유도된 암의 치료에 유용하다. 이러한 암은 난소암, 유방암, 흑색종, 전립선암, 고환종, 기형종, 및 고환암을 포함한다.

일 실시 상태에서, 암 치료의 관점에서, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은, 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 종양 크기, 암 세포 수, 및 암 세포 전이 중의 하나 이상을 최소한 약 10%, 최소한 약 20%, 최소한 약 30%, 최소한 약 40%, 최소한 약 50%, 최소한 약 60%, 최소한 약 70%, 최소한 약80%, 또는 최소한 약 90%를 종양의 완치에 이르기까지 감소시키는 양이다.

일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은, 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 암 세포상에서 제시되는 에피토프에 특이적인 T 세포의 수를 증가시키는 양이다. 일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은, 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 암 세포상에서 제시되는 에피토프에 특이적인 T 세포의 수를, 면역원성 조성물로 치료하기 전 개체 내의 암 세포 에피토프에 특이적인 T 세포의 수에 비하여, 최소한 약 25%, 최소한 약 50%, 최소한 약 100% 또는 2배, 최소한 약 5배, 최소한 약 10배, 또는 최소한 약 100배, 또는 그 이상으로 증가시키는 양이다.

일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은, 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 암 세포상에서 제시되는 에피토프에 특이적인 CD8⁺ T 세포의 수을 증가시키는 양이다. 일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물의 "유효량"은, 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 암 세포상에서 제시되는 에피토프에 특이적인 CD8⁺ T 세포의 수를, 면역원성 조성물로 치료하기 전 개체 내의 암 세포 에피토프에 특이적인 CD8⁺ T 세포의 수에 비하여, 최소한 약 25%, 최소 한 약 50%, 최소한 약 100% 또는 2배, 최소한 약 5배, 최소한 약 10배, 또는 최소한 약 100배, 또는 그 이상으로 증가시키는 양이다.

일 실시 상태에서, 본원의 면역원성 조성물은 표준 암 치료법에 대한 보조 치료법으로서 투여될 수 있다. 표준 암 치료법은 외과적 수술 (예컨대, 암성 조직의 외과적 절제), 방사선 치료, 골수 이식, 화학치료제 치료, 생물학적 반응 변형제 치료, 및 전술한 것의 특정 조합을 포함한다.

방사선 치료는, 이에 한정되는 것은 아니나, 외부에서 조사되는 공급원 예컨대 빔(beam), 또는 소형 방사성 공급원의 이식을 통하여 전달되는 x-선 또는 감마선을 포함한다.

화학치료제는 암 세포의 증식을 감소시키는 비펩타이드형(즉, 비단백질성) 화합물이며, 세포독성제 및 세포증식 억제제를 포괄한다. 화학치료제의 비제한적 실시예는 알킬화제, 니트로소우레아, 항대사제, 항종양 항생제, 식물성(빈카) 알카로이드, 및 스테로이드 호르몬을 포함한다.

세포 증식을 감소시키는 작용을 하는 약제는 공지되어 있으며 널리 사용되고 있다. 이러한 약제는 알킬화제, 예컨대 니트로겐 머스타드, 니트로소우레아, 에틸렌이민 유도체, 알킬 설포네이트, 및 트리아젠 등을 포함하며, 이에 한정되는 것은 아니나, 메클로레타민, 사이클로포스파미드(Cytoxan™), 멜팔란(L-사르코라이신), 카무스틴(BCNU), 로무스틴(CCNU), 세무스틴(메틸-CCNU), 스트렙토조신, 클로로조토신, 우라실 머스타드, 클로르메틴, 이포스파미드, 클로람부칠, 피포브로만, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌티오포스포라민, 부설판, 다카르바진, 및 테모졸로마이드를 포함한다.

항대사제는 엽산 유사체, 피리미딘 유사체, 퓨린 유사체, 및 아데노신 데아미나아제 억제제를 포함하며, 이에 한정되는 것은 아니나, 사이타라빈(CYTOSAR-U), 사이토신 아라비노사이드, 플루오로우라실(5-FU), 플록스우리딘(FudR), 6-티오구아닌, 6-머캅토퓨린 (6-MP), 펜토스타틴, 5-플루오로우라실(5-FU), 메토트렉세이트, 10-프로파르길-5,8-디데아자폴레이트(PDDF, CB3717), 5,8-디데아자테트라하이드로엽산(DDATHF), 류코보린, 플루다라빈 포스페이트, 펜토스타틴, 및 갬시타빈을 포함한다.

적합한 천연 산물 및 이들의 유도체(예컨대, 빈카 알카로이드, 항종양 항생제, 효소, 림포카인, 및 에피포도필로톡신)는, 이에 한정되는 것은 아니나, Ara-C, 파크리탁셀(탁솔®), 도세탁셀(Taxotere®), 데옥시코포르마이신, 미토마이신-C, L- 아스파라기나아제, 아자티오프린; 브레퀴나르; 알카로이드, 예컨대 빈크레스틴, 빈블라스틴, 바이노르엘빈, 빈데신, 등; 포도필로톡신, 예컨대 에토포사이드, 테니포사이드, 등.; 항생제, 예컨대 안트라사이클린, 다우노르우비신 하이드로클로라이드 (다우노마이신, 루비도마이신, 세루비딘), 이다루비신, 독소루비신, 에피루비신 및 모르폴리노 유도체, 등; 페녹시존 비스시클로펩타이드, 예컨대 닥티노마이신; 염기성 글리코펩타이드, 예컨대 블레오마이신; 안트라퀴논 글리코사이드, 예컨대 플리카마이신 (미트라마이신); 안트라센디온, 예컨대 미톡산트론; 아지르이노피롤 인돌디온, 예컨대 미토마이신; 마크로시클릭 면역억제제, 예컨대 시클로스포린, FK-506(타크로리무스, 프로그라프), 라파마이신, 등; 등을 포함한다.

기타 항증식성 세포독성제는 나벨벤, CPT-11, 아나스트라졸, 레트라졸, 카페시타빈, 레록사핀, 시클로포스파미드, 이파사미드, 및 드로록사핀이다.

항증식성 활성을 보유한 미소관 영향제도 사용에 적합하고, 이에 한정되는 것은 아니나, 알로콜히친(NSC 406042), 할리콘드린 B(NSC 609395), 콜히친(NSC 757), 콜히친 유도체(예컨대, NSC 33410), 돌스타틴 10(NSC 376128), 메이탄신(NSC 153858), 리족신(NSC 332598), 파크리탁셀 (탁솔®), 탁솔® 유도체, 도세탁셀 (Taxotere®), 티오콜히친(NSC 361792), 트리틸 시스테린, 빈블라스틴 설페이트, 빈크레스틴 설페이트 및, 에옵틸론 A, 에포틸론 B, 디스코더모라이드; 에스트라무스틴, 노코다졸, 등을 포함하나 이에 한정되지 않는 천연 및 합성 에포틸론을 포함한다.

사용에 적합한 호르몬 조절제 및 스테로이드(합성 유사체 포함)는, 이에 한정되는 것은 아니나, 아드레노코르티코스테로이드, 예컨대 프레드니손, 덱사메타손, 등; 에스트로겐 및 프리게스틴, 예컨대 히드록시프로게스테론 카프로에이트, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 메그에스트롤 아세테이트, 에스트라디올, 클로미펜, 타목시펜; 등.; 및 아드레노코르티칼 억제제, 예컨대 아미노글루타티미드; 17α-에티닐에스트라디올; 디에틸스틸베스트롤, 테스토스테론, 플루옥심에스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 테스토락톤, 메틸프레드니솔론, 메틸-테스토스테론, 프레드니솔론, 트리암시놀론, 클로로트리아니센, 히드록시프로게스테론, 아미노글루타티미드, 에스트라무스틴, 메드록시프로게스테론 아세테이트, 류프로라이드, 플루타미드(Drogenil), 토레미펜(Fareston), 및 Zoladex®를 포함한다. 에스트 로겐은 증식 및 분화를 자극한다; 따라서, 에스트로겐 수용체와 결합하는 화합물은 이러한 활성을 차단한다. 코르티코스테로이드는 T 세포 증식을 억제한다.

기타 화학치료제는 금속 복합체, 예컨대 시스플라틴(cis-DDP), 카르보플라틴, 등; 우레아, 예컨대 히드록시우레아; 및 히드라진, 예컨대 N-메틸히드라진; 에피도피롤톡신; 토포이소머라아제 억제제; 프로카바잔; 미톡산트론; 류코보린; 테가푸르; 등을 포함한다. 기타 항증식제는 면역억제제, 예컨대 미코페놀산, 탈리도마이드, 데속시스퍼구알린, 아자스포린, 레플루노마이드, 미조리빈, 아자스피란(SKF 105685); Iressa® (ZD 1839, 4-(3-클로로-4-플로로페닐아미노)-7-메톡시-6-(3-(4-모르폴리닐)프로폭시)퀴아졸린); 등을 포함한다.

"탁산(Taxanes)"은 파크리탁셀, 및 모든 활성 탁산 유도체 또는 전구약물을 포함한다. "파크리탁셀" (여기에는 유사체, 제형, 및 유도체 예컨대, 예를 들어, 도세탁셀, 탁솔™, TAXOTERE™ (도세탁셀의 제형), 파크리탁셀의 10-데스아세틸 유사체 및 파크리탁셀의 3'N-데스벤조일-3'N-t-부톡시카르보닐 유사체를 포함하는 것으로 이해한다)은 당해 기술 분야의 숙련자에게 공지된 기법을 사용하여 용이하게 제조하거나(WO 94/07882, WO 94/07881, WO 94/07880, WO 94/07876, WO 93/23555, WO 93/10076; 미국 특허 5,294,637; 5,283,253; 5,279,949; 5,274,137; 5,202,448; 5,200,534; 5,229,529; 및 EP 590,267), 또는 상업적 제조 공급원 예를 들어, Sigma Chemical Co., St. Louis, Mo. (T7402는 Taxus brevifolia에서; 또는 T- 1912는 Taxus yannanensis 에서)으로부터 구득할 수 있다.

파크리탁셀은 파크리탁셀의 화학적으로 가능한 일반적인 형태 뿐만아니라, 유사체 및 유도체(예컨대, 전술한 Taxotere™ 도세탁셀) 및 파크리탁셀 접합체(예컨대, 파크리탁셀-PEG, 파크리탁셀-덱스트란, 또는 파크리탁셀-자일로스)를 의미하는 것으로 이해하여야 한다.

용어 "탁산"에는 친수성 유도체, 및 소수성 유도체를 모두 포함하는 다양한 공지의 유도체가 포함된다. 탁산 유도체는, 이에 한정되는 것은 아니나, 갈락토오스 및 만노스 유도체(국제 특허 출원 WO 99/18113); 피페라지노 및 다른 유도체(WO 99/14209); 탁산 유도체(WO 99/09021, WO 98/22451, 및 미국 특허 제5,869,680호); 6-티오 유도체(WO 98/28288); 설펜아미드 유도체(미국 특허 제5,821,263호); 및 탁솔 유도체(미국 특허 제5,415,869호). 이들은 파크리탁셀의 전구약물(이에 한정되는 것은 아니나, WO 98/58927; WO 98/13059; 및 미국 특허 제5,824,701호에서 설명)을 추가로 포함한다.

본 발명의 방법의 사용에 적합한 생물학적 반응 변형제는, 이에 한정되는 것은 아니나, (1) 티로신 키나아제 (RTK) 활성의 억제제; (2) 세린/트레오닌 키나아제 활성의 억제제; (3) 종양-유관 항원 길항제, 예컨대 종양 항원에 특이적으로 결합하는 항체; (4) 세포자멸 수용체 작용제; (5) 인터류킨-2; (6) IFN-α; (7) IFN-γ (8) 집락-자극 인자; 및 (9) 혈관형성 억제제를 포함한다.

자가면역 질환의 치료 방법

본 발명은 개체 내의 자가면역 질환의 치료 방법을 제공하며, 본 방법은 일반적으로 이들이 필요한 개체에 HERV 폴리펩타이드에 대한 대상체의 면역 반응을 감소시킬 정도로 효과적인 양의 본원의 HERV 폴리펩타이드를 투여하여, 자가면역 질환을 치료하는 단계를 포함한다. 본원의 방법으로 치료가능한 자가면역 질환은, 이에 한정되는 것은 아니나, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 전신성 홍반성 루푸스, 및 타입 1 당뇨병을 포함한다.

일 실시 상태에서, 본원의 HERV 폴리펩타이드의 유효량은 HERV 폴리펩타이드에 대한 대상체의 면역 반응을, 본원의 HERV 폴리펩타이드로 치료하지 않는 HERV 폴리펩타이드에 대한 대상체의 면역 반응에 대한 수준에 비하여, 최소한 약 10%, 최소한 약 15%, 최소한 약 20%, 최소한 약 25%, 최소한 약 30%, 최소한 약 35%, 최소한 약 40%, 최소한 약 45%, 최소한 약 50%, 또는 50% 이상 감소시키기에 유효한 양이다.

일 실시 상태에서, 본원의 방법은 자가활성을 감소시키기에 효과적이며, 여기서 "자가활성의 감소"는 자가활성 세포의 수의 감소; 자가활성 세포의 활성을 감소; 및 자가활성 항체의 수준의 감소 중의 하나 이상을 포함한다. 자가활성은 T 림프구, B 세포, 자연 살상(NK) 세포 및 수지상 세포를 포함하나 이에 한정되지 않는 백혈구 세포의 수의 상호작용에 달려있다. T 림프구는 CD4⁺ T 림프구 및 CD8⁺ 림프구를 포함한다. B 세포는 항원 제시 세포 및 조직을 표적화할 수 있는 자가항체의 생산자로서 모두 기능할 수 있다. 일 실시 상태에서, 본원의 방법은 다양한 자가면역 반응성에 관계된 세포의 활성 또는 수를 변화시킬 수 있다. 일 실시 상태에서, 본원의 방법은 개체 내의 자가활성 세포의 숫자 및/또는 활성을, HERV 폴리펩타이드를 처리하지 않은 개체 내의 자가활성 세포의 수 및/또는 수준에 비하여 최소한 약 5%, 최소한 약 10%, 최소한 약 25%, 최소한 약 30%, 최소한 약 40%, 최소한 약 50%, 최소한 약 60%, 최소한 약 70%, 최소한 약 80%, 또는 최소한 약 90%, 또는 그 이상으로 감소시키기에 효과적이다.

일 실시 상태에서, 본원의 방법은 자가활성 T 림프구의 숫자 및/또는 활성을 감소시키기에 효과적이다. 따라서, 일 실시 상태에서, HERV 폴리펩타이드의 유효량은 개체 내의 자가활성 T 림프구의 숫자 및/또는 활성을, HERV 폴리펩타이드를 처리하지 않은 개체 내의 자가활성 T 림프구의 수 및/또는 수준에 비하여, 최소한 약 5%, 최소한 약 10%, 최소한 약 25%, 최소한 약 30%, 최소한 약 40%, 최소한 약 50%, 최소한 약 60%, 최소한 약 70%, 최소한 약 80%, 또는 최소한 약 90%, 또는 그 이상 감소시키는 양이다.

일 실시 상태에서, 본원의 방법은 자가활성 B 세포의 숫자 및/또는 활성을 감소시키기에 효과적이다. 따라서, 일 실시 상태에서, HERV 폴리펩타이드의 유효량은 개체 내의 자가활성 B 세포의 숫자 및/또는 활성을, HERV 폴리펩타이드를 처리하지 않은 개체 내의 자가활성 B 세포의 수 및/또는 수준에 비하여, 최소한 약 5%, 최소한 약 10%, 최소한 약 25%, 최소한 약 30%, 최소한 약 40%, 최소한 약 50%, 최소한 약 60%, 최소한 약 70%, 최소한 약 80%, 또는 최소한 약 90%, 또는 그 이상 감소시키기에 효과적인 양이다.

자가활성 T 림프구의 활성은, 이에 한정되는 것은 아니나, "자기" 세포에 대한 세포용해 활성; 사이토카인(들)의 분비; 케모카인(들)의 분비; 케모카인(들)에 대한 반응성; 및 트레피킹을 포함한다. 일 실시 상태에서, HERV 폴리펩타이드의 유 효량은 개체 내의 자가활성 T 림프구의 하나 이상의 활성을 감소시키기에 효과적인 양이다.

HERV 폴리펩타이드가 개체 내의 자가활성 T 림프구의 숫자 및/또는 활성의 감소에 효과적인지 여부는 공지의 분석법을 사용하여 손쉽게 결정할 수 있다. 예를 들어, 자가활성 T 림프구가 자가항원에 특이적인 경우, 자가항원-특이적 T 림프구의 숫자 및 활성 수준은, 예컨대, 혼합 림프구 반응을 사용하여 결정하며, 여기서 세포질 내에 검출가능한 라벨을 포함하고, 자가항원을 디스플레이하는 방사선조사된 세포는 개체의 림프구와 혼합된다. 자가항원-디스플레이 세포의 세포질로부터 검출가능한 라벨의 방출은 자가활성 림프구의 개체 내의 존재을 나타낸다. 타입 1 당뇨병에 관련된 자가활성 T 림프구를 검출하는 방법은 공지되어 있으며; 및 이러한 모든 방법을 사용할 수 있다. 예컨대, 타입 1 당뇨병에 관련된 자가활성 T 림프구를 검출하는 방법을 논의하는 미국 특허 제6,022,697호를 참조한다.

일 실시 상태에서, HERV 폴리펩타이드의 유효량은 자가면역 질병의 하나 이상의 증상의 중증도를 감소시키기에 효과적인 양이다. 예를 들어, 일 실시 상태에서, HERV 폴리펩타이드의 유효량은 자가면역 질환의 하나 이상의 증상의 중증도를, HERV 폴리펩타이드로 처리하지 않은 개체의 증상의 중증도에 비하여, 최소한 약 5%, 최소한 약 10%, 최소한 약 25%, 최소한 약 30%, 최소한 약 40%, 최소한 약 50%, 최소한 약 60%, 최소한 약 70%, 최소한 약 80%, 또는 최소한 약 90%, 또는 그 이상 감소시키기에 효과적인 양이다.

자가면역 질환과 관련된 증상은 공지되어 있다. 예컨대, "Textbook of the autoimmune Diseases" R.G. Lahita, Ed. (2000) Lippincott Williams & Wilkins, 1st ed을 참조한다. 다음은 비제한적 예이다.

다발성 경화증은 완화 및 재발성 악화를 지닌 다양한 증상 및 중추 신경계(CNS) 장애의 신호에 의하여 특정된다. 가장 일반적으로 제시되는 증상은 하나 이상의 사지, 몸체, 또는 안면의 일 측면의 감각 이상; 발 또는 손의 약화 또는 조절이상; 또는 시각 장애, 예컨대 부분적 실명 및 일 안구의 통증(구후시신경염), 시야의 침침함, 또는 암점이다. 기타 일반적인 초기 증상은 안구 마비로서 이중 시야(복시)가 되며, 하나 이상의 사지의 일시적 약화, 사지의 약간의 경직성 또는 비정상적 피로, 보행의 장애, 방광 조절의 장애, 현기증, 및 가벼운 감정 장애이다.

당뇨병은 인슐린 분비 및/또는 인슐린 작용의 절대적 또는 상대적 장애에 기인한 고혈당증에 의하여 특정된다. 어떠한 연령대에도 나타날 수 있지만, 타입 I DM는 일반적으로 소아기 또는 청소년기에 발달하며, 30 세 이전에 우세하게 진단되는 DM의 유형이다. 이러한 타입의 당뇨병은 DM의 모든 사례의 10 내지 15%를 차지하며, 고혈당증에 의하여 임상적으로 특정된다.

병용 요법

일 실시 상태에서, 본원의 치료 방법은 이들을 필요로 하는 개체에 HERV 폴리펩타이드의 유효량; 및 자가면역 질환의 치료에 효과적인 최소한 하나의 부가적인 약제를 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시 상태에서, 최소한 하나의 부가적인 약제는 HERV 폴리펩타이드가 아닌 것이다.

당해 기술 분야의 숙련자는 (HERV 폴리펩타이드가 아닌) 자가면역 질환을 치 료하기에 적합한 약제를 인식하고 있다. 예를 들어, 타입 1 당뇨병 치료에 적합한 약제는 자연 발생적 인슐린, 인슐린 유사체, 등을 포함하는 인슐린을 포함한다.

본원에 사용하기 적합한 인슐린은, 이에 한정되는 것은 아니나, 정상 인슐린, 세미렌테, NPH, 렌테, 프로타민 아연 인슐린(PZI), 울트라렌테, 인슐린 글라긴, 인슐린 아스파르트, 아실화 인슐린, 일지형(monomelic) 인슐린, 초반응성 인슐린, 간선택성 인슐린, 및 기타 인슐린 유사체 또는 유도체, 및 전술한 것들의 혼합물을 포함한다. 본원에 적합한 인슐린은, 이에 한정되는 것은 아니나, 미국 특허 4,992,417; 4,992,418; 5,474,978; 5,514,646; 5,504,188; 5,547,929; 5,650,486; 5,693,609; 5,700,662; 5,747,642; 5,922,675; 5,952,297; 및 6,034,054; 및 공개 PCT 출원 WO 00/121197; WO 09/010645; 및 WO 90/12814에서 개시된 인슐린 형태이다. 인슐린 유사체는, 이에 한정되는 것은 아니나, 초반응성 인슐린 유사체, 일지형 인슐린, 및 간특이적 인슐린 유사체를 포함한다.

정신분열증의 치료 방법

본 발명은 정신분열증을 치료하는 방법을 추가적으로 제공하며, 방법은 일반적으로 이들을 필요로 하는 개체에 HERV 폴리펩타이드의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다.

이러한 실시 상태에서, HERV 폴리펩타이드의 "유효량"은, 이들을 필요로 하는 개체에 하나 이상의 투여용량을 투여하는 경우, 정신분열증의 최소한 하나의 증상을, HERV 폴리펩타이드로 치료하지 않은 개체 내에서 증상의 수준 또는 중증도의 수준에 비하여, 최소한 약 10%, 최소한 약 15%, 최소한 약 20%, 최소한 약 25%, 최 소한 약 30%, 최소한 약 35%, 최소한 약 40%, 최소한 약 45%, 최소한 약 50%, 또는 그 이상 감소시키는 양이다.

정신분열증의 증상은 공지되어 있으며, 예컨대, "양성" 증상(예컨대, 망상, 환각, 언어 와해, 이상 와해 또는 긴장성 행동); 및 "음성" 증상(예컨대, 운동성 실어증, 감정 둔화, 무의지증)을 포함한다.

제형

HERV 폴리펩타이드는, 전술한 바와 같이, 이들을 필요로 하는 개체에 투여하기 위하여 다양한 방식으로 제형화될 수 있다. 본 발명은 HERV 폴리펩타이드를 포함하는 약학적 제형을 제공한다. 면역원성 HERV 폴리펩타이드를 포함하는 조성물을 전술하였다. 부가적인 제형을 이하 후술한다.

HERV 폴리펩타이드를 포함하는 본원의 제형은 일반적으로 하나 이상의 부형제(예컨대, 슈크로스, 전분, 만니톨, 소르비톨, 락토오스, 글루코스, 셀룰로스, 활석, 칼슘 포스페이트 또는 칼슘 카보네이트), 결합제(예컨대, 셀룰로스, 메틸셀룰로스, 히드록시메틸셀룰로스, 폴리프로필피롤리돈; 폴리바이닐피롤리돈, 젤라틴, 검 아라빅, 폴리에틸렌글리콜, 슈크로스 또는 전분), 붕괴제(예컨대, 전분, 카르복시메틸셀룰로스, 히드록시프로필전분, 저치환 히드록시프로필셀룰로스, 나트륨 바이카보네이트, 칼슘 포스페이트 또는 칼슘 시트레이트), 윤활제(예컨대, 마그네슘 스테아레이트, 경성 무수 규산, 활석 또는 나트륨 라우릴 설페이트), 향미제(예컨대, 시트르산, 멘톨, 글리신 또는 오렌지 분말), 보존제(예컨대, 나트륨 벤조에이트, 나트륨 비스설페이트, 메틸파라벤 또는 프로필파라벤), 안정화제(예컨대, 시트 르산, 나트륨 시트레이트 또는 아세트산), 현탁제(예컨대, 메틸셀룰로스, 폴리바이닐피롤리돈 또는 알루미늄 스테아레이트), 분산제(예컨대, 히드록시프로필메틸셀룰로스), 희석제 (예컨대, 물), 및 기초 왁스(예컨대, 코코아 버터, 화이트 바세린 또는 폴리에틸렌 글리콜)을 포함한다.

활성제를 포함하는 타블렛은 적합한 막형성제, 예컨대, 히드록시프로필메틸 셀룰로스, 히드록시프로필 셀룰로스 또는 에틸 셀룰로스 등으로 피복될 수 있으며, 여기에 적합한 부형제를 선택적으로 첨가할 수 있다. 예컨대, 연화제 예컨대 글리세롤, 프로필렌 글리콜, 디에틸프탈레이트, 또는 글리세롤 트리아세테이트; 충진재 예컨대 슈크로스, 소르비톨, 자일리톨, 글루코스, 또는 락토오스; 착색제 예컨대 수산화 티타늄; 등이다.

적합한 부형제 운반체는, 예를 들어, 물, 식염수, 덱스트로스, 글리세롤, 에탄올, 등, 및 이들의 조합을 포함한다. 이와 아울러, 필요한 경우, 운반체는 소량의 보조 물질 예컨대 습윤제 또는 유화제 또는 pH 완충제 등을 포함할 수 있다. 이러한 투약 형태를 제조하는 실제 방법은 공지되어 있거나 또는 당해 기술 분야의 숙련자에게 명백하다. 예컨대, Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack Publishing Company, Easton, Pa., 17th edition, 1985를 참조한다. 투여할 조성물 또는 제형은, 어떠한 경우에도, 치료할 대상체의 바람직한 상태를 달성하기에 적합한 일정량의 약제를 함유한다. 약학적으로 허용가능한 부형제, 예컨대 운반체, 보조제, 담체 또는 희석제는 공개적으로 구득할 수 있다. 더욱이, 약학적으로 허용가능한 보조 물질, 예컨대 pH 조절제 및 완충제, 등장성 조절제, 안정화제, 습윤제 등은 쉽게 구득할 수 있다.

일 실시 상태에서, 예컨대, 렌티바이러스에 대한 면역 반응을 유도 또는 강화하기 위하여 사용하는 경우, HERV 폴리펩타이드는 질 전달용으로 제형화된다. 본원의 질내 투여용 제형은 질내 생체접착성 타블렛, 질내 생체접착성 미소입자, 질내 크림, 질내 로션, 질내 폼, 질내 연고, 질내 페이스트, 질내 용액, 또는 질내 겔로 제형화된다.

투여용량

일회 또는 수회 투여시, 원하는 효과(예컨대, 렌티바이러스에 대한 T 세포 면역 반응의 증가; 암 세포에 대한 면역 반응의 증가; 자가면역 반응의 감소; 등)를 나타내는 HERV 폴리펩타이드의 적합한 투여용량은 다양한 인자에 따라 달라질 수 있으며, 일반적으로 약 1 μg 내지 약 100 mg의 범위, 예컨대, 일화 투여 또는 수회 투여를 나누어 투여하는 경우, 약 1 μg 내지 약 5 μg, 약 5 μg 내지 약 10 μg, 약 10 μg 내지 약 25 μg, 약 25 μg 내지 약 50 μg, 약 50 μg 내지 약 100 μg, 약 100 μg 내지 약 500 μg, 약 500 μg 내지 약 1 mg, 약 1 mg 내지 약 10 mg, 약 10 mg 내지 약 50 mg, 또는 약 50 mg 내지 약 100 mg이 될 것이다.

일 실시 상태에서, 투여당 HERV 폴리펩타이드의 양은 체중 기초로 측정되었다. 예를 들어, 일 실시 상태에서, HERV 폴리펩타이드는 투여당 약 0.5 mg/kg 내지 약 100 mg/kg의 양으로 투여되며, 예컨대, 약 0.5 mg/kg 내지 약 1 mg/kg, 약 1 mg/kg 내지 약 2 mg/kg, 약 2 mg/kg 내지 약 3 mg/kg, 약 3 mg/kg 내지 약 5 mg/kg, 약 5 mg/kg 내지 약 7 mg/kg, 약 7 mg/kg 내지 약 10 mg/kg, 약 10 mg/kg 내지 약 15 mg/kg, 약 15 mg/kg 내지 약 20 mg/kg, 약 20 mg/kg 내지 약 25 mg/kg, 약 25 mg/kg 내지 약 30 mg/kg, 약 30 mg/kg 내지 약 40 mg/kg, 약 40 mg/kg 내지 약 50 mg/kg, 약 50 mg/kg 내지 약 60 mg/kg, 약 60 mg/kg 내지 약 70 mg/kg, 약 70 mg/kg 내지 약 80 mg/kg, 약 80 mg/kg 내지 약 90 mg/kg, 또는 약 90 mg/kg 내지 약 100 mg/kg, 또는 약 100 mg/kg 이상이다.

당해 기술 분야의 숙련자는 투여용량 수준이 특이적 화합물의 기능, 증상의 중증도 및 부작용에 대한 대상체의 감수성에 따라 달라질 수 있다는 사실을 이해할 수 있다. 주어진 화합물의 바람직한 투여 용량은 다양한 수단으로 당해 기술 분야의 숙련자에 의하여 용이하게 결정할 수 있다.

일 실시 상태에서, 수회 투여용량의 HERV 폴리펩타이드를 투여하였다. HERV 폴리펩타이드의 투여 빈도는, 예컨대, 증상의 중증도 등의 다양한 인자에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, 일 실시 상태에서, HERV 폴리펩타이드를 월 1회, 월 2회, 월 3회, 매주마다(qow), 주 1회(qw), 주 2회(biw), 주 3회(tiw), 주 4회, 주 5회, 주 6회, 격일로(qod), 매일 (qd), 일일 2회(qid), 또는 일일 3회(tid) 투여한다.

HERV 폴리펩타이드의 투여 지속시간, 예컨대, HERV 폴리펩타이드를 투여하는 기간은 다양한 인자, 예컨대, 환자 반응, 등에 따라 달라질 수 있다. 예를 들어, HERV 폴리펩타이드는 약 1 일 내지 약 1 주, 약 2 주 내지 약 4 주, 약 1 개월 내지 약 2 개월, 약 2 개월 내지 약 4 개월, 약 4 개월 내지 약 6 개월, 약 6 개월 내지 약 8 개월, 약 8 개월 내지 약 1 년, 약 1 년 내지 약 2 년, 또는 약 2 년 내 지 약 4 년, 또는 그 이상의 범위의 기간 동안 투여될 수 있다.

투여 경로

종래 및 약학적으로 허용가능한 투여 경로는 비강내, 근육내, 기관내, 종양내, 경피, 피하, 진피내, 국부 도포, 정맥, 질, 코, 및 기타 비경구 투여 경로를 포함한다. 적합한 투여 경로는 또한 구강 및 직장 경로를 포함한다. 투여 경로는, 필요한 경우, 병용되거나 또는 약제 및/또는 바람직한 효과에 따라 조절될 수 있다. 조성물은 단일 투여용량 또는 수회 투여용량으로 투여될 수 있다.

본원의 HERV 조성물은 전신성 또는 국부 경로를 포함하는 종래의 약물의 전달에 적합한 모든 통상적 방법 및 경로를 사용하여 숙주에 투여될 수 있다. 일반적으로, 본 발명에서 고려되는 투여 경로는, 이에 반드시 한정되는 것은 아니나, 경구, 비경구, 또는 흡입 경로를 포함한다.

흡입 투여 이외의 비경구 경로의 투여는, 이에 반드시 한정되는 것은 아니나, 국부, 질, 경피, 피하, 근육내, 안와내, 포내(intracapsular), 척수강내, 흉골내, 종양내, 종양주변, 및 정맥 경로, 즉, 소화관을 제외한 모든 투여 경로를 포함한다. 비경구 투여는 약제의 전신 또는 국소 전달에 영향을 미치도록 전달된다. 전신 전달이 바람직한 경우, 투여는 일반적으로 침습적이거나 또는 전신 흡수 국부용 또는 점막 투여용의 약학적 제품과 관련있다.

본원의 HERV 조성물은 경구 투여에 의하여 대상체에 전달될 수 있다. 경구 투여는, 이에 반드시 한정되는 것은 아니나, 구강 및 직장(예컨대, 좌약) 전달을 포함한다.

본원의 HERV 조성물은 점막 조직, 예컨대, 질 조직, 직장 조직, 등에 전달될 수 있다.

HERV-특이적 CTL을 생산하는 방법

본 발명은 HERV-특이적 CD8⁺ T 세포의 집단을 시험관 내에서 생산하는 방법을 제공한다. 방법은 일반적으로 CD8⁺ T 세포, 또는 이들의 전구체와 항원-제시 플렛폼과 결합된 HERV 폴리펩타이드를 접촉하는 단계를 포함하며, 여기서 접촉은 시험관 내에서 수행된다. 이 방법은 HERV 폴리펩타이드-특이적 CD8⁺ T 세포의 집단을 생산하는데 유용하며, 차례로, 질환 예컨대 렌티바이러스 감염 (예컨대, HIV 감염) 및 암의 치료 방법에 유용하다.

일 실시 상태에서, CD8⁺ T 세포는 개체에서 확보하였으며, 시험관 내에서 항원-제시 플렛폼과 결합된 HERV 폴리펩타이드와 접촉한다. 일 실시 상태에서, CD8⁺ T 세포를 포함하는 혼합 세포 집단은 개체로부터 확보하며; 및 CD8⁺ T 세포는 미자극 CD8⁺ T 세포 집단을 생성하는 혼합 집단에서 분리된다. 그 다음 미자극 CD8⁺ T 세포 집단은 시험관 내에서 항원-제시 플렛폼과 결합된 HERV 폴리펩타이드와 접촉된다. 접촉 단계는 미자극 CD8⁺ T 세포 집단의 최소한 일부를 활성화시켜 HERV 폴리펩타이드에 특이적이 되도록 한다.

CD8⁺ T 세포를 포함하는 혼합 세포 집단의 공급원은, 예컨대, 전혈이 될 수 있다. 혼합 세포 집단은 하나 이상의 방법 또는 단계에서, 예컨대, 적혈구 세포를 제거하거나; CD8⁺ T 세포를 선택하거나; 및/또는 CD4⁺ T 세포 또는 기타 비-CD8⁺ 세포 집단에 대하여 선택하도록 조작될 수 있다. 미자극 CD8⁺ 세포의 수는 약 10² 세포 내지 약 10⁹ 세포, 예컨대, 약 10² 세포 내지 약 10³ 세포, 약 10³ 세포 내지 약 10⁴ 세포, 약 10⁴ 세포 내지 약 10⁵ 세포, 약 10 세포 내지 약 5 x 10⁵ 세포, 약 5 x 10⁵ 세포 내지 약 10⁶ 세포, 약 10⁶ 세포 내지 약 5 x 10⁶ 세포, 약 5 x 10⁶ 세포 내지 약 10⁷ 세포, 약 10⁷ 세포 내지 약 5 x 10⁷ 세포, 약 5 x 10⁷ 세포 내지 약 10⁸ 세포, 약 10⁸ 세포 내지 약 5 x 10⁸ 세포, 또는 약 5 x 10⁸ 세포 내지 약 10⁹ 세포의 범위가 될 수 있다.

항원-제시 플렛폼은 항원-제시 세포(APC)가 될 수 있다, 예컨대, APC는 HERV 펩타이드로 펄스(pulse) 처리하였으며, APC는 살아있거나 또는 불활성화될 수 있다. 일 실시 상태에서, 항원-제시 플렛폼은 비드(예컨대, 플라스틱 비드, 자석 비드, 등), 또는 HERV 펩타이드가 결합하는 다른 입자이다. 자연 발생적인 APC 이외의 항원-제시 플렛폼이 공지되어 있으며, 이에 한정되는 것은 아니나, 비드; 불활성화 표면-조작 바이러스(예컨대, Mosca et al. (2007) Retrovirol. 4:32); 인공 APC, 예컨대, 리포좀(미국 특허 공개 제2006/0034865호); 등을 포함한다.

항원-제시 플렛폼은, HERV 펩타이드와 함께, HERV-특이적 CD8⁺ T 세포 집단, 예컨대, MHC 클래스 I 분자(예컨대, HLA 클래스 I 분자), 등의 증식을 자극하기에 충분한 하나 이상의 표면 분자를 포함한다. 항원-제시 플렛폼은 하나 이상의 공동-자극 분자를 포함할 수 있으며, 적합한 공동-자극 분자는, 이에 한정되는 것은 아니나, 항-CD28 항체, 항-CD49d 항체, 등을 포함한다.

미자극 CD8⁺ T 세포는 시험관 내에서 항원-제시 플렛폼과 결합된 HERV 펩타이드와 접촉하며; HERV-특이적 CD8⁺ T 세포의 수가 증가한다. 방법은 HERV-특이적 CD8⁺ T 세포의 수를 10배 내지 10⁶배로 증가시키게 된다. 본원의 방법에 의하여 획득한 HERV-특이적 CD8⁺ 세포의 수는 약 10³ 내지 약 10⁹ 세포, 예컨대, 약 10³ 세포 내지 약 10⁴ 세포, 약 10⁴ 세포 내지 약 10⁵ 세포, 약 10⁵ 세포 내지 약 5 x 10⁵ 세포, 약 5 x 10⁵ 세포 내지 약 10⁶ 세포, 약 10⁶ 세포 내지 약 5 x 10⁶ 세포, 약 5 x 10⁶ 세포 내지 약 10⁷ 세포, 약 10⁷ 세포 내지 약 5 x 10⁷ 세포, 약 5 x 10⁷ 세포 내지 약 10⁸ 세포, 약 10⁸ 세포 내지 약 5 x 10⁸ 세포, 또는 약 5 x 10⁸ 세포 내지 약 10⁹ 세포의 범위가 될 수 있다.

본 발명은 HERV-특이적 CD8+ T 세포를 사용하는 치료 방법을 제공한다. 일 실시 상태에서, 이 방법은 HIV 감염을 치료하는 방법이다. 다른 실시상태에서, 방 법은 암을 치료하는 방법이다. 방법은 일반적으로 이들을 필요로 하는 개체에 HERV-특이적 CD8⁺ T 세포의 유효량을 투여하는 단계를 포함한다. 일 실시 상태에서, HERV-특이적 CD8⁺ T 세포는 자기의 것이며, 예컨대, HERV-특이적 CD8⁺ T 세포는 혼합 세포 집단을 얻은 개체와 동일한 개체에 투여된다(즉, 공여자 개체 및 수용자 개체가 동일하다). 다른 실시상태에서, HERV-특이적 CD8⁺ T 세포는 동종이형이며, 예컨대, HERV-특이적 CD8⁺ T 세포는 혼합 세포 집단을 얻은 개체(공여자 개체)와 유전적으로 일치하지 않는 개체(수용자 개체)에 투여된다.

일 실시 상태에서, HERV-특이적 CD8⁺ T 세포는 하나 이상의 투여용량에 약 10³ 내지 약 10⁹ 세포, 예컨대, 약 10³ 세포 내지 약 10⁴ 세포, 약 10⁴ 세포 내지 약 10⁵ 세포, 약 10⁵ 세포 내지 약 5 x 10⁵ 세포, 약 5 x 10⁵ 세포 내지 약 10⁶ 세포, 약 10⁶ 세포 내지 약 5 x 10⁶ 세포, 약 5 x 10⁶ 세포 내지 약 10⁷ 세포, 약 10⁷ 세포 내지 약 5 x 10⁷ 세포, 약 5 x 10⁷ 세포 내지 약 10⁸ 세포, 약 10⁸ 세포 내지 약 5 x 10⁸ 세포, 또는 약 5 x 10⁸ 세포 내지 약 10⁹ 세포의 양으로 수용자 개체에 투여된다.

진단 방법

본 발명은 다양한 진단 방법을 제공하며, 이 방법은 본원의 HERV 폴리펩타이 드 또는 본원의 HERV 조성물을 활용한다. 본원의 진단 방법은 치료에 대한 환자의 반응을 모니터링하는 방법; 질병의 단계를 확인하는 방법; 및 질병을 검출하는 방법을 포함한다.

일 실시 상태에서, 본원의 진단 방법은 HERV 폴리펩타이드를 생산하는 암 세포의 개체 내의 존재를 검출하는 단계를 포함한다. HERV 폴리펩타이드를 생산하는 암세포를 검출하는 방법은 면역학적 방법, 예컨대, HERV 폴리펩타이드 특이적 항체의 사용을 포함하며, 여기서, 면역학적 분석은, 예컨대, 면역조직학적 분석, 및 형광 활성화 세포 분석 (예컨대, 형광 활성화 세포 분류 분석, HERV 폴리펩타이드에 대한 형광적 표지 항체)를 포함한다.

다른 실시상태에서, 본원의 진단 방법은 일반적으로 개체에서 확보한 생물학적 시료 내의 HERV-특이적 CD8⁺ T 세포의 수를 검출하는 단계를 포함한다. HERV-특이적 CD8⁺ T 세포의 수는, 예컨대, ⁵¹Cr 방출 분석을 사용하여 측정할 수 있으며, 여기서, 표적 세포는 HERV 펩타이드로 펄스 처리되어, ⁵¹Cr로 표지되고 HERV-특이적 CD8⁺ T 세포를 함유할 수 있는 시험 시료와 접촉한다. HERV-특이적 CD8⁺ T 세포의 수는 표적 세포의 ⁵¹Cr 방출의 측정에 의하여 결정할 수 있다.

다른 실시상태에서, 본원의 진단 방법은 개체의 혈청 또는 원형질 (또는 다른 생물학적 유체) 내에서 HERV 폴리펩타이드를 검출하는 단계를 포함한다. 개체에서 확보한 생물학적 체액에서 HERV 폴리펩타이드의 검출은, 예컨대, HERV 폴리펩타 이드에 특이적인 항체를 사용하는 면역학적 분석을 사용하여 수행할 수 있다. 적합한 면역학적 분석은, 이에 한정되는 것은 아니나, 효소-연결 면역측정법(ELISA), 방사선면역분석(RIA), 단백질 블롯("웨스턴 블롯") 분석, 면역침전 분석, 등을 포함한다.

HERV-특이적 항체

적시한 바와 같이, 일 실시 상태에서, 본원의 진단 분석은 HERV 폴리펩타이드에 특이적인 항체("항-HERV 항체")를 사용한다. 적합한 항-HERV 항체는 전체 항체의 어떠한 아이소타입; 항-HERV 항체의 에피토프-결합 절편; 다클론 항체; 단클론 항체; 인공 항체; 단일 사슬 항체; 등을 포함한다.

단클론 항체는 종래의 기법을 사용하여 생산할 수 있다. 일반적으로, 면역화된 숙주 동물의 비장 및/또는 림프절은 원형질 세포의 공급원을 제공한다. 원형질 세포는 골수종 세포와 융합에 의하여 무한증식하여 하이브리도마 세포를 생산한다. 개체 하이브리도마의 배양물 상청은 원하는 특이성을 지닌 항체를 생산하는 것을 확인하기 위한 표준 기법을 사용하여 선별된다. 단클론 항체 생산에 적합한 동물은 마우스, 레트, 햄스터, 기니아피그, 레빗, 등을 포함한다. 항체는 종래의 기법, 예컨대 불용성 지지체인, 단백질 A 세파로스, 등에 결합한 단백질을 사용하는 친화도 크로마토그래피 등에 의하여 하이브리도마 세포 상청 또는 복수(ascites fluid)로부터 정제될 수 있다.

항체는 정상 다량체 구조 대신 단일 사슬로서 생산될 수 있다. 단일 사슬 항체는 Jost et al. (1994) J.B.C. 269:26267-73, 및 기타에서 설명하고 있다. 중쇄 의 가변 영역 및 경쇄의 가변 영역을 암호화하는 DNA 서열은 글리신 및/또는 세린을 포함하는 소형 천연 아미노산 중의 최소한 약 4 아미노산을 암호화하는 스페이서에 결찰된다. 이 융합에 의하여 암호화되는 단백질은 원 항체의 특이성 및 친화도를 보유하는 기능성 가변 영역의 조립을 가능하게 한다.

적합한 항-HERV 항체는 또한 "인공" 항체, 예컨대, 시험관 내에서 생산되고 선택된 항체 및 항체 절편을 포함한다. 일 실시 상태에서, 이러한 항체는 박테리오파지의 표면 또는 기타 바이러스 입자 상에 디스플레이 된다. 많은 실시 상태에서, 이러한 인공 항체는 이에 한정되는 것은 아니나, M13 유전자 III 단백질을 포함하는 바이러스 또는 박테리오파지 구조 단백질과 융합 단백질로서 제시된다. 이러한 인공 항체를 생산하는 방법은 당해 기술분야에 공지되어 있다. 예컨대, 미국 특허. 5,516,637; 5,223,409; 5,658,727; 5,667,988; 5,498,538; 5,403,484; 5,571,698; 및 5,625,033를 참고한다.

항체 절편, 예컨대 Fv, F(ab')2 및 Fab는 예컨대, 프로테아제 또는 화학적 분해에 의하여 무손상 단백질의 분해에 의하여 제조될 수 있다. 대안적으로, 절두(truncated) 유전자가 설계되었다. 예를 들어, F(ab')2 절편의 일부를 암호화하는 키메라 유전자는 CH1 도메인 및 H 사슬의 힌지 영역을 암호화하는 DNA 서열을 포함하며, 이후 번역 종결 코돈에 의하여 절두 분자를 산출한다.

항-HERV 항체는 일 실시 상태에서, 예컨대, 방사성동위원소, 검출가능한 산물을 생성하는 효소, 형광 단백질, 색소 단백질, 등으로 검출가능하게 표지된다. 항-HERV 항체는 다른 모이어티, 예컨대 특이적 결합 짝의 구성원, 예컨대, 바이오 틴(바이오틴-아비딘 특이적 결합짝의 구성원), 등에 추가적으로 접합될 수 있다. 항-HERV 항체는, 이에 한정되는 것은 아니나, 폴리스티렌 플레이트 또는 비드, 자석 비드, 검사대, 막 등을 포함하는 고체 지지체에 결합된다.

HERV 폴리펩타이드에 특이적인 항체는 직접적으로 또는 간접적으로 표지될 수 있다. 직접 표지는 방사성동위원소(예컨대, ¹²⁵I; ³⁵S, 등); 산물을 검출가능한 효소(예컨대, 루시페라아제, β-갈락토시다아제, 홍당무 과산화효소, 알카라인 인산효소, 등); 형광 표지(예컨대, 플루오레세인 이소티오시아네이트, 로다민, 피코에리스린, 등); 금속 킬레이팅기 예컨대 EDTA를 통하여 항체에 부착되는 형광 방출 금속, 예컨대, ¹⁵²Eu, 또는 란탄족의 원소; 화학발광 화합물, 예컨대, 루미놀, 이소루미놀, 아크리디늄염, 등; 생체발광 화합물, 예컨대, 루시페린; 형광 단백질(예컨대, 녹색 형광 단백질, 황색 형광 단백질, 등.); 등을 포함한다. 간접 표지는 HERV-특이적 항체에 특이적인 제2 항체를 포함하며, 여기서, 제2 항체는 전술한 바와 같이 표지되며; 특이적 결합 짝, 예컨대, 바이오틴-아비딘, 등의 구성원이다.

일 실시 상태에서, 항-HERV 항체는, 항체에 공유결합되어 있으며, 검출가능한 신호를 제공하는 단백질을 포함한다. 적합한 단백질은, 이에 한정되는 것은 아니나, 형광 단백질 및 효소(예컨대, β-갈락토시다아제, 루시페라아제, 홍당무 과산화효소, 알카라인 인산효소, 등.)을 포함한다. 적합한 형광 단백질은, 이에 한정되는 것은 아니나, 애쿼리아 빅토리아(Aequoria victoria)에서 유도한 GFP 또는 이들의 유도체, 다수의 구득가능한 것; 종 예컨대 레닐라 리포르미니(Renilla reniformis), 레닐라 뮬레리(Renilla mulleri), 또는 피티로사르쿠스 구에르니(Ptilosarcus guernyi)의 GFP(예컨대, WO 99/49019 및 Peelle et al. (200I) J. Protein Chem. 20:507-519; 안토조안(Anthozoan) 종의 모든 다양한 형광 및 색조 단백질(예컨대, Matz et al. (1999) Nature Biotechnol 17:969-973, 미국 공개 특허 2002/0197676, 또는 미국 공개 특허 2005/0032085); 등을 포함하는 녹색 형광 단백질(GFP)을 포함한다.

렌티바이러스 감염의 치료에 대한 환자 반응의 모니터링

일 실시 상태에서, 본원의 HERV 폴리펩타이드 조성물은 렌티바이러스 감염, 예컨대, HIV 감염의 치료에 대한 환자의 반응을 모니터링하기에 유용하다. 따라서, 본 발명은 렌티바이러스 감염, 예컨대, HIV 감염의 치료에 대한 환자의 반응을 모니터링하는 방법을 추가로 제공한다. 방법은 일반적으로 환자의 백혈구 세포(WBC)를 시험관 내에서 본원의 HERV 폴리펩타이드와 접촉시키는 단계; 및 HERV 폴리펩타이드와 접촉하는 반응에서 WBC에 의하여 분비된 사이토카인을 검출하는 방법을 포함한다. HERV 폴리펩타이드와 접촉하는 반응에서 WBC에 의한 사이토카인 생산의 감소는 치료가 렌티바이러스 감염의 치료에 효과적인라는 것을 나타낸다(예컨대, 바이러스 부하의 감소의 달성, CD4⁺ T 림프구 수준 (HIV 감염의 경우), 등의 증가의 달성). 적합한 WBC는, 이에 한정되는 것은 아니나, 말초 혈액 단핵 세포(PBMC), 분리된 T 림프구, 분리된 CD4⁺ T 림프구, 분리된 CD8⁺ T 림프구, 자연 살상(NK) 세포, 자연 살상 T 림프구(NKT, 예컨대, NKL1.1⁺ T 림프구), 등을 포함한다.

본원의 모니터링 방법에 사용되는 HERV 폴리펩타이드는 9 아미노산, 10 아미노산, 11 아미노산, 12 아미노산, 12-15 아미노산, 15-18 아미노산, 18-20 아미노산, 또는 20-25 아미노산 길이이거나, 또는 그 이상의 길이 일 수 있다. 적합한 HERV 폴리펩타이드는 전술한 HERV 폴리펩타이드의 하나를 포함한다. 일 실시 상태에서, HERV 폴리펩타이드는 SEQ ID NO: 1-25 중의 하나에 나타낸 아미노산 서열을 포함한다.

PBMC에서 분비되며, 본원의 환자 모니터링 방법에서 검출되는 사이토카인은, 이에 한정되는 것은 아니나, IFN-γ, TNF-α, 및 IL-2를 포함한다.

본원의 환자 모니터링 방법에 사용되는 분비된 사이토카인을 검출하는 방법은, 이에 한정되는 것은 아니나, 면역학적 분석, 예컨대, 효소-결합 면역측정법(ELISA), 방사선면역분석(RIA), 효소-결합 면역스폿(ELISPOT) 분석; 세포 분석; 등을 포함한다.

일 실시 상태에서, HERV 폴리펩타이드와 접촉하는 반응에서 WBC에 의하여 생산된 사이토카인의 최소한 약 10%, 최소한 약 20%, 최소한 약 30%, 최소한 약 40%, 최소한 약50%, 최소한 약 60%, 최소한 약 70%, 최소한 약 80%, 또는 최소한 약 90% 또는 그 이상 감소는 렌티바이러스 감염의 치료에 효능이 있다는 것을 적시한다.

WBC를 포함하는 환자 시료는 치료 전 및 후에; 또는 치료중의 다양한 시점에서 확보할 수 있으며, 및 사이토카인 생산의 수준은 제1 시점에서 채취한 시료와 제2 (후의) 시점에서 채취한 시료를 비교한다.

일 실시 상태에서, 환자의 PBMC를 하나 이상의 HERV 폴리펩타이드와 시험관 내에서 접촉시키며; 및 ELISPOT 분석을 사용하여 사이토카인 생산을 검출한다. ELISPOT 분석은 당해 기술 분야에 공지되어 있다. 예컨대, Lalvani et al. (1997) J. Exp. Med. 186:859; 및 미국 특허 제5,853,697호를 참조한다. 이러한 실시 상태에서, PBMC에서 생산된 사이토카인의 수준은 10⁶ PBMC 당 스폿-형성 유닛(SFU)의 수로 표현된다. SFU의 수의 감소는 렌티바이러스 감염의 치료가 효과적이라는 사실을 나타낸다.

암 치료에 대한 환자 반응의 모니터링

본 발명은 암 치료 요법에 대한 환자 반응을 모니터링하는 방법을 제공한다. 암에 관련된 HERV 폴리펩타이드의 수준을 치료 전, 치료시, 및 치료 후에 모니터링한다.

일 실시 상태에서, HERV 폴리펩타이드의 수준은, 예컨대, 혈청 내의, 특정 세포 집단의 표면 상에서 모니터링한다.

질병의 병기의 결정

본 발명은 개체 내의 질병의 병기를 결정하는 방법을 제공하며, HERV 폴리펩타이드의 수준이 병기 또는 질병의 중증도와 관련된 경우. 방법은 일반적으로 개체에서 확보한 생물학적 시료 내의 HERV 폴리펩타이드의 수준을 검출하는 단계를 포함한다. 생물학적 시료 내의 HERV 폴리펩타이드의 수준은 질병 또는 질환의 중증도와 연관있으며, 질병의 병기의 결정에 사용된다.

일 실시 상태에서, 본원의 질병의 병기를 결정하는 방법은 본원의 HERV 폴리 펩타이드에 특이적인 개체로부터 확보한 생물학적 시료 내의 CD8⁺ T 세포의 수를 검출하는 단계를 포함한다. 일 실시 상태에서, HERV-특이적 CD8⁺ T 세포의 수는 질병의 병기 결정의 지표이다.

질병의 검출

본 발명은 개체 내의 질병 예컨대 암을 검출하는 방법을 제공하며, 여기서 개체로부터 확보한 생물학적 시료 내의 HERV 폴리펩타이드의 존재 또는 수준은 생물학적 시료 (및 따라서 개체) 내의 암성 세포의 존재를 나타낸다. 방법은 일반적으로 개체로부터 확보한 생물학적 시료 내의 HERV 폴리펩타이드의 수준을 검출하는 단계를 포함한다. HERV 폴리펩타이드의 수준이 정상 세포의 수준보다 높은 경우, 이는 암성 세포의 시료 내의 존재를 나타낸다.

치료에 적합한 대상체

렌티바이러스 감염의 치료

본 발명의 방법은 렌티바이러스 감염된 개체; 렌티바이러스 감염될 위함이 있는 미감염 개체; 렌티바이러스 감염에 대한 치료를 하였으나 치료에 반응하지 않는 개체; 및 렌티바이러스 감염에 대한 치료를 하였으나 재발한 개체의 치료에 적합하다.

예를 들어, 본 발명의 방법은 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염된 개체; HIV 감염에 대해 미경험이나, HIV 감염될 위험이 있는 개체; 및 HIV 감염에 대한 치료를 하였으나 치료에 반응하지 않거나, 또는 초기에는 치료에 반응하였으나 후 에 재발한 개체의 치료에 적합하다. 이러한 개체는, 이에 한정되는 것은 아니나, 건강한, 무손상 면역 시스템을 지닌, HIV 감염의 위험이 있는("위험" 개체) 미감염 개체를 포함한다. 위험 개체는, 이에 한정되는 것은 아니나, 일반 집단의 HIV 감염 가능성보다 높은 가능성을 지닌 개체를 포함한다. HIV에 감염될 위험이 있는 개체는, 이에 한정되는 것은 아니나, HIV-감염 개체와의 성생활에 기인하여 HIV 감염의 위험이 있는 개체; 정맥 약물 사용자; HIV-감염 혈액, 혈액 산물, 또는 기타 HIV-오염 체액에 노출된 개체; 및 HIV-감염 모체에 의하여 육아되는 영아를 포함한다. 치료에 적합한 개체는 HIV-1 및/또는 HIV-2 및/또는 HIV-3, 또는 모든 이들의 변이체에 감염되었거나 또는 감염될 위험이 있는 개체를 포함한다.

HTLV 감염의 치료

상기 방법은 개체 내의 인간 T 세포 백혈병 바이러스(HTLV) 감염, 예컨대, HTLV-I 또는 HTLV-II 감염의 치료에 사용될 수 있다. 따라서, 본원의 방법은 HTLV로 감염된 개체; HTLV에 감염되지는 않았지만, HTLV에 감염될 위험이 있는 개체; 및 HTLV에 감염되지는 않았지만 향후 HTLV에 감염될 수 있는 개체의 치료에 적합하다.

암 치료

본 발명의 방법은 HERV의 발현과 관련된 암으로 진단된 개체를 치료하기에 적합하며, 여기서, 이러한 암은, 이에 한정되는 것은 아니나, 유방암, 난소암, 흑색종, 기형종, 고환종, 전립선암, 및 고환암을 포함한다. 본 발명의 방법은 유방암으로 진단된 개체; 난소암으로 진단된 개체; 및 고환암으로 진단된 개체를 치료하 기 적합하다. 본원의 암 치료 방법은 유방암, 난소암, 흑색종, 기형종, 고환종, 전립선암, 또는 고환암의 치료를 받은 개체, 및 치료의 반응이 없거나, 또는 초기에 반응이 있었으나 재발한 개체의 치료에 적합하다.

자가면역 질환의 치료

본 발명의 방법은 자가면역 질환으로 진단된 개체를 치료하기 적합하며, 여기서 이러한 자가면역 질환은, 이에 한정되는 것은 아니나, 다발성 경화증, 류마티스 관절염, 전신성 홍반성 루푸스, 및 타입 1 당뇨병을 포함한다. 본 발명의 방법은 자가면역 질환의 치료를 받은 개체, 및 치료에 반응이 없거나, 또는 초기에 반응했으나 재발한 개체의 치료에 적합하다.

다음의 실시예는 당해 기술 분야의 숙련자에게 본 발명의 완전한 공개 및 설명을 제공하기 위하여 제공되며, 발명의 범위를 제한하려하거나, 이하의 실험 또는 수행된 실험만을 제시하려는 의도가 아니다. 효과는 사용된 수(예컨대 양, 온도, 등.)에 의하여 정확성이 확보되며, 일정한 실험적 오류 및 편차가 허용된다. 달리 적시하지 않는다면, 부(parts)는 중량부이고, 분자량은 평균 분자량, 온도는 섭씨 온도, 및 압력은 대기압이거나 그 부근이다. 표준 약어가 사용되며, 예컨대, bp, 염기짝; kb, 킬로베이스; pi, 피코리터; s 또는 sec, 초; min, 분; h 또는 hr, 시간; aa, 아미노산(들); nt, 뉴클레오타이드(들); i.m., 근육내(적); i.p., 복막내(적); s.c, 피하내(적); 등 이다.

실시예 1 : HERV 펩타이드가 인간 PBMC 내에서 사이토카인 생산을 자극한다.

물질 및 방법

환자. 이 연구를 위하여 HIV-1 양성 지원자를 선택하였다. 이 연구는 임상시험 위원회의 승인을 받았으며, 대상체는 서면 승인을 받았다. 연구는 다양한 환자의 시점에서 저온보존된 PBMC 상에서 수행하였다.

펩타이드 선택. 후보 HERV 에피토프의 선택은 공지된 데이터베이스로부터 컴파일된 번역된 HERV 단백질 서열 데이터에 기초한다. HIV-1 펩타이드는 로스 알라모스 국립 HIV 면역학 연구소 데이터베이스 내에 열거된 공지된 HIV-1 에피토프의 서열로 설계되되었다. HERV 삽입의 항원 영역은 에피토프 예측 소프트웨어 [SYFPEITHI²⁹; SEQ ID NO:36]에 의한 HLA 제한부위 또는 대응하는 HIV-1 에피토프의 HLA 제한에 기초한다.

ELISPOT 분석. ELISPOT 분석을 전술한 바와 같이 수행하였다³⁴. 플레이트를 15-18 시간 동안 37℃로 배양하였다. HIV 및 HERV 펩타이드 반응 비교를 위하여 등량 항원 농도를 사용하였다. 분석은 단일 웰의 사용으로 지정된 저장된 시료의 세포 회수를 제외하고, 각각의 조건마다 두벌의 웰로 수행하였다. 플레이트를 AID ELISPOT 리더(Cell Technology)로 계수하였다. 두벌의 웰에 대한 총 스폿을 평균내었으며, 모든 스폿 수는 1 x 10⁶ PBMC 당 IFN-γ 스폿-형성 유닛(SFU)의 수로 정상화되었다. 대조구 배지 웰의 스폿 값은 각 펩타이드에 대한 반응을 결정하기 위하여 제하였다. 배지 감산 후 모든 결과 펩타이드 값 < 0는 추가의 분석에 대한 0 값으로 고정되었다.

HERV-K 발현 검출. 외피 전사에서 유도된 HERV-K의 발현 수준³⁵은 HIV-1 양성 1 ml 원형질 시료 및 HIV-1 음성 저-위험 대조구로 측정하였다. 원형질 시료는 저속으로 원심분리하였으며, 잔존 세포 오염원을 제거하기 위하여 RNA 수거전에 여과하였다. 트리졸 시약(Invitrogen)으로 RNA 분리를 하기 위하여 펠렛 입자에 고속 원심분리를 하였다. 시료를 DNAse로 선처리하여 증폭된 HERV 서열의 공급원으로서 게놈 DNA 오염을 제거하였다. RT-PCR은 RT 효소 없이 조절 증폭을 따라 시료 상에서 수행되었다. 측정 표준으로서, HERV의 세포 전사 발현 및 하우스키핑 조절 유전자 β-액틴은 2.5 x 10⁶ HIV-음성 공여자 PBMC로부터 제조된 cDNA로부터 측정된다. 정량화 표준은 세포성 cDNA의 순차 희석으로 제조된다. 대상 전사체에 특이적인 프라이머로 정량적 PCR을 ABI Prism 7900HT 서열 검출 시스템(Applied Biosystems)으로 SYBR-Green 검출을 사용하여 모든 시료에서 수행하였다. 발현 수준은 표준에서 유도된 PBMC에 대한 상대적 백분율로서 제시되며, 및 3벌 반응의 평균으로 제시된다. Gel 전기영동 및 PCR 산물의 용융점 분석은 산물 순도 및 정확한 앰플리콘 크기를 확정하기 위하여 가용되었다.

⁵¹ Cr 방출 분석

HERV-L IQ10 펩타이드에 반응하는 연구 참여자의 저온보존된 말초 혈액 단핵 세포(PBMC)를 펩타이드 또는 각 항원의 풀로 7일간 자극하였다. 자가, 조사된, 펩타이드-펄스된 공급자 세포를 7 일간 재자극하였다. 특이적 ⁵¹Cr 방출의 백분율로 측정함으로써 세포의 펩타이드-펄스된, 자가, EBV-형질전환된 B 세포주를 용해하는 능력을 시험하였다.

결과

HIV-1 양성 및 음성 대상체 내의 HERV 발현 수준 사이의 차이를 확인하기 위하여, RT-PCR 분석을 원형질 상에서 수행하여, 인간 게놈, HERV-K(도 1A) 내에서 내인성 레트로바이러스의 가장 어린 패밀리로부터 유도된 전사체를 정량화하였다. HERV-K 전사체의 발현을 HIV-1 양성 원형질 내에서 검출하였으며, HIV-1 음성 대조구에서는 검출되지 않았다. HIV-1 양성 개체의 원형질 내의 HERV-K 전사체의 양은 다른 비 비리온-유관 세포성 전사체(β-액틴)의 것과 비례하지 않았으며, 따라서 이러한 전사체에 대한 병인으로서 세포 잔해를 배제하였다. 추가의 개체의 데이터는 도 1B 내에서 제시되었으며, 이는 HIV-1-양성 및 HIV-1 -음성 개체의 원형질 내에서 HERV-K의 원형질 RNA 수준을 나타낸다.

도 1A 및 1B. HIV 양성 및 음성 개체의 원형질의 HERV-K 전사체의 발현, a. 외피 영역으로부터 유도된 HERV-K 전사체의 수준은 빈 막대로 나타낸 말초 혈액 세포 내에서 검출된 수준(비교를 위하여 100의 값으로 설정)에 상대적으로 측정되었다. 세포 조절 유전자(β-액틴)의 수준은 채워진 막대로 나타내었다. 말초 혈액 세포 내에서 측정된 대조구 유전자의 수준은 다른 시료와 비교하기 위하여 100으로 설정하였다, b. HIV-1 양성(폐쇄 원) 및 HIV-1-음성 개체(개방 원)의 원형질 내에서 측정된 HERV-K 전사체의 수준.

HERV이 발현하는 경우, 이러한 항원에 대한 면역 반응을 생성하는 가능성이 존재한다. 이러한 것이 또한 내인성 항원인 경우, 반응이 면역원성인지 또는 자연상 면역허용원성인지 불분명하다. HERV에 고도로 유사한 HIV-1의 영역으로 가정하면, HERV에 대한 내성은 HIV-1-특이적 면역 반응을 손상시킬 수 있다. 상호-내성은 자가-항원 카디오리핀으로 상호-재활성됨으로써 HIV-1를 중성화하는 항체를 생산하는 신체의 능력을 방해하는 기작으로서 제안되어 왔다¹⁸. HIV-1 및 내인성 레트로바이러스가 발생론적으로 별종이라하여도¹⁹, 이들 사이의 유사성은 T 세포 수용체의 관점에서 분석되었으며, T 세포 에피토프(8-12 아미노산)의 길이에 대응하는 고 유사성의 짧은 영역에 초점을 맞추었다. 이러한 유사성의 영역은 일반적으로 표준 계통발생학적 분석에서 배제되며, 이는 어떠한 유전적 관련성을 적시하지 않고 빈번하게 우연히 발생하기에 충분히 작기 때문이다. T 세포가 HLA 분자 상에 제시된 짧은 펩타이드 내의 단백질을 인식하기 때문에, 이러한 유사성 영역은 면역 반응에 중요성을 지닌다(도 2). 역전사효소는 고도로 보존된 단백질이기 때문에, 클러스터화되고, 분산된 아미노산 일치성을 기대하거나 관찰할 수 있다. 덜 보존된 단백질 예컨대 Gag는 1차적으로 클러스터화된 아미노산 일치성을 나타낸다.

도 2. HIV HXB-2의 HERV/HIV 아미노산 정렬 및 Gag 및 역전사효소 단백질의 일부를 나타내는 다양한 HERV 삽입(HERVd²⁸ 또는 NCBI 인증 번호로 확인). 일치하는 아미노산은 박스 안에 나타내었다. 정렬은 짧은 거의 정확한 매치 검색 설정인 BLAST³⁶ 로 확인된 유사성의 짧은 영역에 기초하여 고정되며, 두 아미노산 유사성 (미도시) 및 일치성을 포함한다.

31명의 HIV-1 양성 지원자 및 5명의 저-위험 HIV-1 음성 대조구는 각각에 대한 아미노산 서열 일치의 수준을 다르게 하는 HIV-1 단백질(표 1)에 대한 반응에 대한 ELISPOT에 의하여 선별하였다.

강한 인터페론 감마 특이적 T 세포 반응은 HIV-1 감염 지원자의 HERV 펩타이드에 대하여 검출되었으나 HIV-1 음성 대조구에서는 검출되지 않았다(도 3, Mann-Whitney, P <0.05). HIV-1 T 세포 반응의 크기는 HERV T 세포 반응의 크기와 직접적으로 유관된다.

도 3. 인터페론-감마 ELISPOT에 의하여 측정된 29명의 HIV-1 양성 및 13명의 저-위험 HIV-1 음성 개체 내의 HERV 및 HIV-1 항원에 대한 T 세포 반응. HERV 펩타이드는 이들의 HIV-1 펩타이드 서열에 대한 유사성에 따라 군으로 나누었으며, HIV-1 펩타이드와 3 또는 그 이하의 아미노산을 공유하는 '유일 HERV 펩타이드,' 및 HIV-1와 4 또는 그 이상 펩타이드를 공유하는 'HIV-1에 유사한 HERV 펩타이드'이다. 펩타이드의 서브세트는 각 환자 내에서 시험되었으며(n=6-23), HLA 타입에 따라 달라진다. 반응에 나타낸 값은 각 군 내에서 펩타이드당 정상화되었다(즉 시험된 모든 펩타이드에 대한 반응값의 합계를 각 환자의 시험된 펩타이드의 수로 나누었다). HIV-1 양성 개체 내의 반응은 폐쇄 원으로 나타내었으며, HIV-1 음성 개체는 개방 원으로 나타내었다. 모든 HERV 펩타이드에 대한 반응은 HCV+ 개체에 대하여 측정되었으며, 채워진 삼각형으로 나타내었다. P-값은 Mann-Whitney 시험으로 유도되었다.

이러한 유관성이 HERV 항원에 대한 HIV-1 특이적 T 세포 상호-반응을 나타낸다 하여도, 각 HERV 펩타이드 및 이들의 상대 HIV-1 펩타이드에 대한 반응의 빈도를 비교하였다. 각 HIV-1/HERV 펩타이드 짝에 있어서, 2 펩타이드 사이에 공유되는 아미노산의 가변 수가 존재한다. 높은 빈도의 HERV 펩타이드 반응은 HIV-1 펩타이드에 대한 낮은 수준의 아미노산 일치성으로 검출되며, 이는 HERV-특이적 반응이 독립적으로 생성된다는 것을 의미한다. 상호-반응 HIV-1-특이적 T 세포는 관찰된 HERV에 대한 반응에만 의존하지 않는다는 것으로 결론을 내린다.

도 4는 항-HERV T 세포 반응과 HIV-1 원형질 바이러스 부하 간의 반비례 관계를 설명한다. 치료하지 않은 20명의 HIV-1+ 개체의 PBMC를 HERV 반응에 대하여 ELISPOT으로 분석하였다. 시험된 모든 HERV 펩타이드에 대한 평균 반응(>50 SFU/million PBMC) 값은 HIV-1 원형질 바이러스 부하와 반비례하였으며(Spearman, 2-테일, r=0.49, P=O.03), 도에 나타낸 바와 같이 선형 감퇴(r²=0.39, P=0.003) 하였다.

살상에 의존하는 감염 세포의 제거에 의한 바이러스 부하를 조절하는 능력에 의하여, 이들의 표적 펩타이드를 제시하는 자가 B 세포를 사멸하는 HERV 특이적 CD8⁺ T 세포의 능력을 측정하였다. 일 대상체(OP841)의 PBMC은 반응성 CD8⁺ T 세포로 강화된 자극받은 펩타이드이다. 2-주의 펩타이드 자극 후, ^5lCr-방출 분석은 강화된 CD8⁺ T 세포가 인식 펩타이드를 제시하는 EBV-형질전환된 B 세포 표적을 살상하는 능력을 측정하기 위하여 시용되었다. HERV 펩타이드 자극에 의하여 강화된 CD8⁺ T 세포는 이들의 인식 펩타이드를 제시하는 B 세포 표적을 살상하나 비-인식 또는 펩타이드 없이 부하된 표적을 용해시키지 않는다(도 5).

도 5 는 표적 세포로부터 ⁵¹Cr 방출을 나타낸다. HERV-L IQ10-특이적 T 세포는 HERV-L IQ10 펩타이드(폐쇄 원), 대조구 펩타이드(개방 원) 또는 펩타이드 없음(폐쇄 삼각형)으로 펄스된 자가 B 세포에 대하여 시험하였다.

데이터는 HIV-1 감염 관련 HERV 펩타이드에 대한 HERV 전사체 발현 및 T 세포 반응을 증대시킴을 나타내었다. HIV-1-감염 개체 내의 HERV에 대한 자연-증가 T 세포 반응은 신규의 HIV-1 백신 패러다임으로서 감염, 또는 감염 위험이 있는 미감염 개체 내의 초기 반응을 유도할 가능성을 나타낸다. HIV-1 백신 개발의 어려움 중의 하나는 바이러스의 돌연변이성을 극복하는 것이며, 이는 백신이 유도하는 특이적 면역 반응을 회피할 수 있도록 한다. HERV는 게놈-암호화 성분이다; HERV 삽입의 탈-조절 전사에서 생산된 번역 산물은 HIV-1 단백질보다 덜 가변적이라고 기대된다. HERV 항원 생산 및 제시가 세포의 HIV-1 감염의 결과인 경우, HERV 산물은 면역 시스템에 HIV-1 감염 신호를 보내는 안정적인 인식가능한 대용 마커로서 작용한다. 면역화를 통하여 HERV 대용 마커를 인식하는 면역 시스템의 교육은 HIV-1-감염 세포의 살상을 유도하며, 고가변 HIV-1 항원을 인식할 필요성을 회피하게한다.

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본 발명은 이들의 특정 실시 상태에 관하여 설명되어 있으나, 당해 기술 분야의 숙련자라면 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고도 다양하게 변화시키거나 등가물로 치환할 수 있다는 것을 이해하여야 한다. 이와 아울러, 본 발명의 범위 및 사상에 비추어 특정 상황, 물질, 재료의 조성물, 공정, 공정 단계 또는 단계에 따라 다양한 변형이 가능하다. 이러한 모든 변형은 본원에 첨부된 청구항의 범위 내에 있다.

SEQUENCE LISTING <120> HUMAN ENDOGENOUS RETROVIRUS POLYPEPTIDE COMPOSITIONS AND METHODS OF USE THEREOF <130> UCAL-342WO <150> 60/832,465 <151> 2006-07-21 <160> 54 <170> FastSEQ for Windows Version 4.0 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 1 Ser Gln Gly Tyr Ile Asn Ser Pro Ala Leu 1 5 10 <210> 2 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 2 Ile Leu Val His Tyr Ile Asp Asp Ile 1 5 <210> 3 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 3 Leu Gln Asp Ile Ile Leu Val His Tyr 1 5 <210> 4 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 4 Pro Met Val Ser Thr Pro Ala Thr Leu 1 5 <210> 5 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 5 Ala Ala Ile Asp Leu Ala Asn Ala Phe 1 5 <210> 6 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 6 Ile Pro Val His Lys Ala His Lys Lys Gln 1 5 10 <210> 7 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 7 Ser Ser Gly Leu Met Leu Met Glu Phe 1 5 <210> 8 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 8 Lys Ile Arg Leu Pro Pro Gly Tyr Phe 1 5 <210> 9 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 9 Asp Ser Ile Glu Gly Gln Leu Ile Leu Lys 1 5 10 <210> 10 <211> 8 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 10 Phe Ala Phe Thr Ile Pro Ala Ile 1 5 <210> 11 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 11 Gly Ile Pro Tyr Asn Ser Gln Gly Gln 1 5 <210> 12 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 12 Phe Glu Gly Leu Val Asp Thr Gly Ala Asp 1 5 10 <210> 13 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 13 Phe Leu Gln Phe Lys Thr Trp Trp Ile 1 5 <210> 14 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> 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Phe Tyr 1 5 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 22 Val Pro Ser Phe Gly Arg Leu Ser Tyr 1 5 <210> 23 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 23 Pro Pro Thr Val Glu Ala Arg Tyr Lys 1 5 <210> 24 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 24 Pro Pro Glu Ser Gln Tyr Gly Tyr Pro 1 5 <210> 25 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 25 Tyr Pro Gln Pro Pro Thr Arg Arg Leu 1 5 <210> 26 <211> 87 <212> PRT <213> H. sapiens <220> <223> synthetic peptide <400> 26 Ile Ile Ile Asp Leu Lys Asp Cys Phe Phe Thr Ile Pro Leu Ala Glu 1 5 10 15 Gln Asp Cys Glu Lys Phe Ala Phe Thr Ile Pro Ala Ile Asn Asn Lys 20 25 30 Glu Pro Ala Thr Arg Phe Gln Trp Lys Val Leu Pro Gln Gly Met Leu 35 40 45 Asn Ser Pro Thr Ile Cys Gln Thr Phe Val Gly Arg Ala Leu Gln Pro 50 55 60 Val Arg Glu Lys Phe Ser Asp Cys Tyr Ile Ile His Cys Ile Asp Asp 65 70 75 80 Ile Leu Cys Ala Ala Glu Thr 85 <210> 27 <211> 43 <212> PRT <213> H. sapiens <220> <223> synthetic peptide <400> 27 Ala Ala Ile Asp Leu Ala Asn Ala Phe Phe Ser Ile Pro Val His Lys 1 5 10 15 Ala His Lys Lys Gln Phe Ala Phe Thr Ile Cys Val Tyr Cys Pro Ala 20 25 30 Ser Gly Val Tyr Gln Gln Ser Ser Phe Val Ser 35 40 <210> 28 <211> 58 <212> PRT <213> H. sapiens <400> 28 Phe Ala Phe Arg Trp Gln Gly Gln Gln Tyr Ser Phe Thr Val Leu Ser 1 5 10 15 Gln Gly Tyr Ile Asn Ser Pro Ala Leu Cys His Asn Leu Ile Gln Arg 20 25 30 Glu Leu Asp His Phe Leu Leu Leu Gln Asp Ile Ile Leu Val His Tyr 35 40 45 Ile Asp Asp Ile Met Leu Ile Gly Ser Ser 50 55 <210> 29 <211> 71 <212> PRT <213> H. sapiens <400> 29 Lys Leu Arg Leu Pro Pro Gly Tyr Phe Gly Leu Leu Leu His Leu Ser 1 5 10 15 Gln Gln Ala Met Lys Gly Val Thr Val Leu Ala Gly Val Ile Asp Leu 20 25 30 Asp Tyr Gln Asp Glu Ile Ser Leu Leu Leu His Asn Arg Gly Lys Glu 35 40 45 Glu Tyr Ala Trp Asn Thr Gly Asp Pro Leu Gly Cys Leu Leu Val Leu 50 55 60 Pro Cys Pro Val Ile Lys Val 65 70 <210> 30 <211> 35 <212> PRT <213> H. sapiens <400> 30 Tyr Thr His Asp Arg Ala Gln Ala Val Pro Glu Gly Thr Ser Lys Leu 1 5 10 15 His Glu Glu Val Ala Gln Met Pro Met Val Ser Thr Pro Ala Thr Leu 20 25 30 Ser Leu Pro 35 <210> 31 <211> 179 <212> PRT <213> H. sapiens <400> 31 Ser Pro Trp Asn Ser Pro Val Phe Val Ile Gln Lys Lys Ser Gly Lys 1 5 10 15 Trp Arg Met Leu Thr Asp Leu Arg Ala Val Asn Ala Val Ile Gln Pro 20 25 30 Met Gly Pro Leu Gln Pro Gly Leu Pro Ser Pro Ala Met Ile Pro Lys 35 40 45 Asp Trp Pro Leu Ile Ile Ile Asp Leu Lys Asp Cys Phe Phe Thr Ile 50 55 60 Pro Leu Ala Glu Gln Asp Cys Glu Lys Phe Ala Phe Thr Ile Pro Ala 65 70 75 80 Ile Asn Asn Lys Glu Pro Ala Thr Arg Phe Gln Trp Lys Val Leu Pro 85 90 95 Gln Gly Met Leu Asn Ser Pro Thr Ile Cys Gln Thr Phe Val Gly Arg 100 105 110 Ala Leu Gln Pro Val Arg Glu Lys Phe Ser Asp Cys Tyr Ile Ile His 115 120 125 Cys Ile Asp Asp Ile Leu Cys Ala Ala Glu Thr Lys Asp Lys Leu Ile 130 135 140 Asp Cys Tyr Thr Phe Leu Gln Ala Glu Val Ala Asn Ala Gly Leu Ala 145 150 155 160 Ile Ala Ser Asp Lys Ile Gln Thr Ser Thr Pro Phe His Tyr Leu Gly 165 170 175 Met Gln Ile <210> 32 <211> 109 <212> PRT <213> H. sapiens <400> 32 Arg Met Ile Val Asp Tyr Arg Lys Leu Asn Lys Gly Ser Thr Pro Thr 1 5 10 15 Ala Ala Ala Val Ser Asp Val Val Ser Leu Leu Glu Gln Ile Asn Thr 20 25 30 Ser Pro Asp Thr Trp Tyr Val Ala Thr Asp Leu Ala Asn Ala Phe Cys 35 40 45 Ser Ile Pro Val His Lys Ala His Gln Lys Gln Phe Ala Phe Gly Trp 50 55 60 Gln Gly Gln Glu Tyr Thr Phe Thr Val Leu Ser Gln Gly Tyr Ile Asn 65 70 75 80 Ser Pro Ala Leu Cys His Asn Leu Val Gln Arg Asp Leu Asp His Phe 85 90 95 Ser Leu Pro Gln Asp Ile Thr Leu Phe His Tyr Ile Asp 100 105 <210> 33 <211> 327 <212> DNA <213> H. sapiens <400> 33 agaatgatag tggattatcg taagcttaac aaagggtcta ctccaactgc agctgctgta 60 tcagatgtag tttcattgct tgagcaaatt aacacatctc ctgatacctg gtatgtggcc 120 actgacttgg caaatgcctt ttgctccatt cctgtccata aggcccacca gaagcaattt 180 gcatttggct ggcaaggcca ggaatatacc ttcactgtcc tatctcaggg gtatatcaac 240 tctccagctt tgtgtcataa tcttgttcag agagatcttg atcacttttc acttccacaa 300 gatatcacac tattccatta cattgat 327 <210> 34 <211> 584 <212> PRT <213> H. sapiens <400> 34 Met Ile Phe Ala Gly Lys Ala Pro Ser Asn Thr Ser Thr Leu Met Lys 1 5 10 15 Phe Tyr Ser Leu Leu Leu Tyr Ser Leu Leu Phe Ser Phe Pro Phe Leu 20 25 30 Cys His Pro Leu Pro Leu Pro Ser Tyr Leu His His Thr Ile Asn Leu 35 40 45 Thr His Ser Leu Leu Ala Ala Ser Asn Pro Ser Leu Val Asn Asn Cys 50 55 60 Trp Leu Cys Ile Ser Leu Ser Ser Ser Ala Tyr Thr Ala Val Pro Ala 65 70 75 80 Val Gln Thr Asp Trp Ala Thr Ser Pro Ile Ser Leu His Leu Arg Thr 85 90 95 Ser Phe Asn Ser Pro His Leu Tyr Pro Pro Glu Glu Leu Ile Tyr Phe 100 105 110 Leu Asp Arg Ser Ser Lys Thr Ser Pro Asp Ile Ser His Gln Gln Ala 115 120 125 Ala Ala Leu Leu Arg Thr Tyr Leu Lys Asn Leu Ser Pro Tyr Ile Asn 130 135 140 Ser Thr Pro Pro Ile Phe Gly Pro Leu Thr Thr Gln Thr Thr Ile Pro 145 150 155 160 Val Ala Ala Pro Leu Cys Ile Ser Trp Gln Arg Pro Thr Gly Ile Pro 165 170 175 Leu Gly Asn Leu Ser Pro Ser Arg Cys Ser Phe Thr Leu His Leu Arg 180 185 190 Ser Pro Thr Thr Asn Ile Asn Glu Thr Ile Gly Ala Phe Gln Leu His 195 200 205 Ile Thr Asp Lys Pro Ser Ile Asn Thr Asp Lys Leu Lys Asn Ile Ser 210 215 220 Ser Asn Tyr Cys Leu Gly Arg His Leu Pro Cys Ile Ser Leu His Pro 225 230 235 240 Trp Leu Ser Ser Pro Cys Ser Ser Asp Ser Pro Pro Arg Pro Ser Ser 245 250 255 Cys Leu Leu Ile Pro Ser Pro Glu Asn Asn Ser Glu Arg Leu Leu Val 260 265 270 Asp Thr Arg Arg Phe Leu Ile His His Glu Asn Arg Thr Phe Pro Ser 275 280 285 Thr Gln Leu Pro His Gln Ser Pro Leu Gln Pro Leu Thr Ala Ala Ala 290 295 300 Leu Ala Gly Ser Leu Gly Val Trp Val Gln Asp Thr Pro Phe Ser Thr 305 310 315 320 Pro Ser His Leu Phe Thr Leu His Leu Gln Phe Cys Leu Ala Gln Gly 325 330 335 Leu Phe Phe Leu Cys Gly Ser Ser Thr Tyr Met Cys Leu Pro Ala Asn 340 345 350 Trp Thr Gly Thr Cys Thr Leu Val Phe Leu Thr Pro Lys Ile Gln Phe 355 360 365 Ala Asn Gly Thr Glu Glu Leu Pro Val Pro Leu Met Thr Pro Thr Gln 370 375 380 Gln Lys Arg Val Ile Pro Leu Ile Pro Leu Met Val Gly Leu Gly Leu 385 390 395 400 Ser Ala Ser Thr Val Ala Leu Gly Thr Gly Ile Ala Gly Ile Ser Thr 405 410 415 Ser Val Met Thr Phe Arg Ser Leu Ser Asn Asp Phe Ser Ala Ser Ile 420 425 430 Thr Asp Ile Ser Gln Thr Leu Ser Val Leu Gln Ala Gln Val Asp Ser 435 440 445 Leu Ala Ala Val Val Leu Gln Asn Arg Arg Gly Leu Asp Leu Leu Thr 450 455 460 Ala Glu Lys Gly Gly Leu Cys Ile Phe Leu Asn Glu Glu Cys Cys Phe 465 470 475 480 Tyr Leu Asn Gln Ser Gly Leu Val Tyr Asp Asn Ile Lys Lys Leu Lys 485 490 495 Asp Arg Ala Gln Lys Leu Ala Asn Gln Ala Ser Asn Tyr Ala Glu Pro 500 505 510 Pro Trp Ala Leu Ser Asn Trp Met Ser Trp Val Leu Pro Ile Val Ser 515 520 525 Pro Leu Ile Pro Ile Phe Leu Leu Leu Leu Phe Gly Pro Cys Ile Phe 530 535 540 Arg Leu Val Ser Gln Phe Ile Gln Asn Arg Ile Gln Ala Ile Thr Asn 545 550 555 560 His Ser Ile Arg Gln Met Phe Leu Leu Thr Ser Pro Gln Tyr His Pro 565 570 575 Leu Pro Gln Asp Leu Pro Ser Ala 580 <210> 35 <211> 1755 <212> DNA <213> H. sapiens <400> 35 atgatctttg ctggcaaggc accctccaat acttccaccc tgatgaagtt ctattcttta 60 cttttatact cactcttatt ctcattccca ttcttatgtc atcctctacc tctccccagc 120 tatctccacc acactatcaa ccttacccat tctctcctag ccgcttctaa tccctcctta 180 gtgaacaact gctggctttg catttccctt tcttccagtg cctacacagc tgtccccgcc 240 ttacagacag actgggcaac atctcccatc tccctacacc tccgaacttc ctttaacagc 300 cctcaccttt accctcctga agaactcatt tactttctag acaggtccag caagacttcc 360 ccagacattt cacatcagca agctgccgcc ctccttcgca cttatttaaa aaacctttct 420 ccttatatca actctactcc ccccatatta ggacctctca caacacaaac tactattcct 480 gtggccgctc ctttgtgtat ctcttggcaa agacccactg gaattcccct aggtaatctt 540 tcaccttctc gatgttcctt tactcttcat ctccgaagtc caactacaaa catcaatgaa 600 acaattggag ccttccagct ccatattaca gacaagccct ctatcaatac tgacaaactt 660 aaaaacatta gcagtaatta ttgcttagga agacacttgc cctgtatttc actccatcct 720 tggctatctt ccccttgctc atcagactct cctcccaggc cctcttcttg tttacttata 780 cccagccccg aaaataacag tgaaagattg ctcgtagata ctcgacgttt tctcatacac 840 catgaaaatc gaaccttccc ctctacgcag ttaccccatc agtccccatt acaacctctg 900 acagctgccg ccctagctgg atccctagga gtctgggtac aagacacccc tttcagcact 960 ccttctcacc tttttacttt acatctccag ttttgcctcg cacaaggtct cttcttcctc 1020 tgtggatcct ctacctacat gtgcctacct gccaattgga caggcacatg tacactagtc 1080 ttccttaccc ccaaaattca atttgcaaat gggaccgaag agctccctgt tcccctcatg 1140 acaccgacac aacaaaaaag agttattcca ctaattccct tgatggtcgg tttaggactt 1200 tctgcctcca ctgttgctct cggtactgga atagcaggca tttcaacgtc tgtcatgacc 1260 ttccgtagcc tgtctaatga cttctctgct agcatcacag acatatcaca aactttatca 1320 gtcctccagg cccaagttga ctctttagct gcagttgtcc tccaaaaccg ccgaggcctt 1380 gacttactca ctgctgaaaa aggaggactc tgcatattct taaatgagga gtgttgtttt 1440 tacctaaatc aatctggcct ggtgtatgac aacattaaaa aactcaagga tagagcccaa 1500 aaacttgcca accaagcaag taattacgct gaaccccctt gggcactctc taattggatg 1560 tcctgggtcc tcccaattgt tagtccttta atacccattt ttctccttct tttatttgga 1620 ccttgtatct tccgtttagt ttctcaattc atccaaaacc gtatccaggc catcaccaat 1680 cattctatac gacaaatgtt tcttctaaca tccccacaat atcacccctt accacaagac 1740 ctcccttcag cttaa 1755 <210> 36 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 36 Ser Tyr Phe Pro Glu Ile Thr His Ile 1 5 <210> 37 <211> 87 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus <400> 37 Thr Val Leu Asp Val Gly Asp Ala Tyr Phe Ser Val Pro Leu Asp Glu 1 5 10 15 Asp Phe Arg Lys Tyr Thr Ala Phe Thr Ile Pro Ser Ile Asn Asn Glu 20 25 30 Thr Pro Gly Ile Arg Tyr Gln Tyr Asn Val Leu Pro Gln Gly Trp Lys 35 40 45 Gly Ser Pro Ala Ile Phe Gln Ser Ser Met Thr Lys Ile Leu Glu Pro 50 55 60 Phe Arg Lys Gln Asn Pro Asp Ile Val Ile Tyr Gln Tyr Met Asp Asp 65 70 75 80 Leu Tyr Val Gly Ser Asp Leu 85 <210> 38 <211> 88 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus <400> 38 Met Gly Ala Arg Ala Ser Val Leu Ser Gly Gly Glu Leu Asp Arg Trp 1 5 10 15 Glu Lys Ile Arg Leu Arg Pro Gly Gly Lys Lys Lys Tyr Lys Leu Lys 20 25 30 His Ile Val Trp Ala Ser Arg Glu Leu Glu Arg Phe Ala Val Asn Pro 35 40 45 Gly Leu Leu Glu Thr Ser Glu Gly Cys Arg Gln Ile Leu Gly Gln Leu 50 55 60 Gln Pro Ser Leu Gln Thr Gly Ser Glu Glu Leu Arg Ser Leu Tyr Asn 65 70 75 80 Thr Val Ala Thr Leu Tyr Cys Val 85 <210> 39 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 39 Lys Glu Ala Leu Leu Asp Thr Gly Ala Asp 1 5 10 <210> 40 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 40 Lys Ile Arg Leu Arg Pro Gly Gly Lys 1 5 <210> 41 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> synthetic peptide <400> 41 Ser Ser Gly Arg Met Ile Met Glu Lys 1 5 <210> 42 <211> 8 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus <400> 42 Thr Ala Phe Thr Ile Pro Ser Ile 1 5 <210> 43 <211> 9 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus <400> 43 Ile Pro Leu Thr Glu Glu Ala Glu Leu 1 5 <210> 44 <211> 9 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus <400> 44 Ser Leu Tyr Asn Thr Val Ala Thr Leu 1 5 <210> 45 <211> 9 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus <400> 45 Ser Phe Glu Pro Ile Pro Ile His Tyr 1 5 <210> 46 <211> 9 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus <400> 46 Leu Leu Gln Leu Thr Val Trp Gly Ile 1 5 <210> 47 <211> 9 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus <400> 47 Glu Ile Gln Lys Gln Gly Gln Gly Gln 1 5 <210> 48 <211> 13 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus <400> 48 Leu Ser His Phe Leu Lys Glu Lys Gly Gly Leu Glu Gly 1 5 10 <210> 49 <211> 9 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus <400> 49 Val Ile Tyr Gln Tyr Met Asp Asp Leu 1 5 <210> 50 <211> 9 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus <400> 50 Asn Pro Asp Ile Val Ile Tyr Gln Tyr 1 5 <210> 51 <211> 10 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus <400> 51 Gln Asn Ile Gln Gly Gln Met Val His Gln 1 5 10 <210> 52 <211> 9 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus <400> 52 Thr Val Leu Asp Val Gly Asp Ala Tyr 1 5 <210> 53 <211> 10 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus <400> 53 Val Pro Leu Asp Glu Asp Phe Arg Lys Tyr 1 5 10 <210> 54 <211> 10 <212> PRT <213> Human immunodeficiency virus <400> 54 Arg Tyr Gln Tyr Asn Val Leu Pro Gln Gly 1 5 10

Claims (22)

1. 인간 내인성 레트로바이러스(HERV) 폴리펩타이드 및 약학적으로 허용가능한 담체를 포함하는 면역원성 조성물.
2. 제1항에 있어서, HERV 폴리펩타이드는 SEQ ID NO:1-25 중의 하나에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 면역원성 조성물.
3. 제1항에 있어서, 조성물은 비경구 투여용으로 제형화되는 것을 특징으로 하는 면역원성 조성물.
4. 제1항에 있어서, 조성물은 점막 조직 투여용으로 제형화되는 것을 특징으로 하는 면역원성 조성물.
5. 제1항에 있어서, 보조제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 면역원성 조성물.
6. 제5항에 있어서, 보조제는 수산화 알루미늄, MF59, 또는 모노포스포릴 지질 A를 포함하는 것을 특징으로 하는 면역원성 조성물.
7. 인간 내인성 레트로바이러스(HERV) 폴리펩타이드를 암호화하는 뉴클레오타이드 서열을 포함하는 핵산을 포함하는 면역원성 조성물.
8. 제7항에 있어서, HERV 폴리펩타이드는 SEQ ID NO:1-25 중의 하나에 나타낸 아미노산 서열을 포함하는 것을 특징으로 하는 면역원성 조성물.
9. 제7항에 있어서, 조성물은 비경구 투여용으로 제형화되는 것을 특징으로 하는 면역원성 조성물.
10. 제7항에 있어서, 조성물은 점막 조직 투여용으로 제형화되는 것을 특징으로 하는 면역원성 조성물.
11. 제7항에 있어서, 핵산은 재조합 벡터인 것을 특징으로 하는 면역원성 조성물.
12. 제11항에 있어서, 재조합 벡터는 재조합 바이러스 벡터인 것을 특징으로 하는 면역원성 조성물.
13. 제1항 또는 제7항의 면역원성 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 개체 내에서 병원성 바이러스에 감염된 숙주 세포에 대한 T 림프구 반응을 유도하 는 방법.
14. 제13항에 있어서, T 림프구 반응은 CD8⁺ T 세포 반응 또는 CD4⁺ T 세포 반응을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
15. 제13항에 있어서, T 림프구 반응은 점막성 T 림프구 반응을 포함하는 것을 특징으로 하는 방법.
16. 제13항에 있어서, 병원성 바이러스는 인간 면역결핍 바이러스인 것을 특징으로 하는 방법.
17. 제13항에 있어서, 개체가 병원성 바이러스로 감염된 적이 없는 것을 특징으로 하는 방법.
18. 제13항에 있어서, 개체가 병원성 바이러스에 감염된 적이 있는 것을 특징으로 하는 방법.
19. 제1항 또는 제7항의 면역원성 조성물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 개체 내에서 HERV 발현을 보유하고, 암 세포의 표면 상에 HERV 에피토프를 현시하 는 암 세포에 대한 T 림프구 반응을 유도하는 방법.
20. 분리된 인간 내인성 레트로바이러스(HERV) 폴리펩타이드.
21. 분리된 인간 내인성 레트로바이러스(HERV) 폴리펩타이드를 포함하는 조성물.
22. 시험관 내에서 미자극 CD8⁺ T 세포의 집단을 항원-제시 플렛폼과 결합된 HERV 펩타이드와 접촉시키는 단계를 포함하며, 상기 접촉이 HERV 펩타이드-특이적 CD8⁺ T 세포의 집단의 생산을 제공하는, 인간 내인성 레트로바이러스(HERV) 펩타이드에 특이적인 CD8⁺ T 세포의 집단을 생산하는 방법.

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