KR20090047501A - 화학요법에 의해 유발된 신경병증의 치료에 기여하는 방법 및 약학 제제 - Google Patents

Abstract

본 발명은 화학요법에 의해 유발된 신경병증의 치료에 기여하기 위해 레테프리님 현탁액을 사용하는 방법 및 약학 제제에 관한 것이다.

Description

화학요법에 의해 유발된 신경병증의 치료에 기여하는 방법 및 약학 제제{METHODS AND PHARMACEUTICAL PREPARATIONS FOR CONTRIBUTING TO THE TREATMENT OF CHEMOTHERAPY-INDUCED NEUROPATHY}

본 발명은 화학요법에 의해 유발된(예를 들어, 시스플라틴에 의해 유발된) 신경병증의 치료에 기여하는 방법 및 약학 제제에 관한 것이다.

화학요법제는 암 치료에 매우 중요하지만, 그 사용은, 적어도 신체 감각의 부분적 상실을 초래할 수 있는 신경병증과 같은 부작용으로 인해 제한될 수 있다. 그러한 화학요법제 중 한 가지의 예로 시스플라틴이 있는데, 이것은 방광, 고환 및 난소 종양을 비롯한 몇 종의 암의 치료에 광범위하게 사용되고 있다[Williams et al., (1979) Br. Med. J. 1: 1689-1691]. 시스플라틴은 암 치료에 유익한 효과를 제공할 수 있지만, 투여될 수 있는 총량은 말초 신경계에 미치는 독성 효과로 인해 제한되고 있다[Mollman, (1990) N. Engl. J. Med. 322: 126-127]. 구체적으로, 시스플라틴으로 치료한 환자의 병리학적 검사를 통해, 거대 감각 신경 섬유의 선택적 손상 또는 손실이 드러났고, 이는 신체의 다양한 부분에서 감각 상실을 초래할 수 있다[Thompson et al., (1984) Cancer 54: 1269-1275]. 이러한 신경 손상으로부터의 회복은 일정치 않아서, 시스플라틴 치료를 받은 암 환자 생존자 중 다수가 지속 적인 신경 손상 및 감각 상실로 고통받고 있다[Cavaletti et al., (1994) Anticancer Res. 14: 1287-1292].

임상 시험에서 다양한 제제가 시스플라틴에 의해 유발된 신경 손상에 대한 신경 보호제로서 유효한 활성을 보였다. 이러한 제제들 중 몇 종을 예로 들면 성장 인자 활성을 갖는 ACTH 4-9 단편(ORG2766)[Gerritsen et al., (1990) N. Engl. J. Med. 322: 89-94]과, 티올 아미포스틴[Kemp et al., (1996) J. Clin. Oncol. 14: 2101-2112] 및 글루타티온[Pirovano et al., (1992) Tumori 78: 253-257]이 있다. 임상전 연구에서, 신경 성장 인자[Apfel et al., (1992) Ann. Neurol. 31: 76-80], 뉴로트로핀-3[Gao et al., (1995) Ann. Neurol. 38(1): 30-37] 및 글루타메이트[Boyle et al., (1999) J. Neuro-Oncol. 41: 107-116]와 같은 화합물들은 시스플라틴에 의해 유발된 신경 손상의 예방에 기여하는 능력을 보였다. 이러한 제제들 모두 시스플라틴에 의해 유발된 신경 손상의 예방에 기여할 가능성을 보였지만, 이러한 기능을 수행할 수 있는 추가적인 제제도 요구되고 있다. 본 발명은 이러한 제제를 제공한다.

[발명의 개요]

본 발명은 레테프리님(레테프리님의 염 및 산을 비롯한 다양한 형태 중 임의의 형태)을 포함하는 조성물 및 암 환자에서 화학요법에 의해 유발된(예를 들어, 시스플라틴에 의해 유발된) 신경 손상을 예방하는 데 기여하는 그 용도에 관한 것이다. 본 발명은 또한 화학요법에 의해 유발된 신경병증의 완화를 촉진하기 위해 레테프리님 및 레테프리님 제제를 투여하는 방법을 제공한다. 따라서, 본 발명은 화학요법에 의해 유발된(예를 들어, 시스플라틴에 의해 유발된) 신경 손상의 예방에 기여하는 데 이용될 수 있는 방법 및 약학 제제를 포함한다.

구체적으로, 본 발명에 따른 일 실시형태는 레테프리님(SPI-082)을 환자에게 투여함으로써 화학요법에 의해 유발된 신경병증의 치료에 기여하는 것을 포함하는 방법을 포함한다. 본 발명에 따른 또 다른 일 실시형태는 레테프리님(SPI-082)을 환자에게 투여함으로써 시스플라틴에 의해 유발된 신경병증의 치료에 기여하는 것을 포함하는 방법을 포함한다. 본 발명에 따른 또 다른 방법은 화학요법제(예를 들어, 시스플라틴)를 투여하여 암 치료에 기여하고, 레테프리님을 투여함으로써 화학요법제에 의해 유발된(예를 들어, 시스플라틴에 의해 유발된) 신경병증의 치료에 기여하는 것을 포함한다. 본 발명에 따른 또 다른 방법은 시스플라틴을 투여하여 암 치료에 기여하고, 레테프리님을 투여함으로써 시스플라틴에 의해 유발된 신경병증의 치료에 기여하는 것을 포함한다.

본 발명에 따르면, 레테프리님 투여를 화학요법제(예를 들어, 시스플라틴)를 사용한 치료 개시에 앞서 행할 수 있거나 또는 레테프리님 투여를 화학요법제(예를 들어, 시스플라틴)를 사용한 치료 개시 후에 시작할 수 있다. 특정 실시형태에 있어서, 레테프리님은 주 단위로 1일 1회 미만[즉, 1주(7일)에 6회 이하], 더 바람직하게는 주 2회[즉, 1주(7일)에 2회] 투여될 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 화학요법제는 임의의 유효량 내지 독성량까지 투여될 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 예를 들어, 시스플라틴은 주 2회 투여될 수 있다. 레테프리님 및 화학요법제(예를 들어, 시스플라틴) 투여는 실질적으로 동시에 행해질 수도 있다. 투여가 실질적으로 동시에 행해질 경우, 레테프리님 및 화학요법제(예를 들어, 시스플라틴)는 상이한 약학 제제의 구성 요소 또는 동일한 약학 제제의 구성 요소일 수 있다. 적정량의 레테프리님은 약 25 mg/kg∼약 100 mg/kg, 예를 들어, 약 50 mg/kg을 포함할 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 일 실시형태에 있어서, 레테프리님과, 경우에 따라, 또 다른 활성 물질(들)은, 현탁액으로서, 경우에 따라, 완충 현탁액으로서 제제화될 수 있다.

본 발명의 실시형태는 또한 레테프리님을 포함하는 약학 제제를 포함하며, 이때 상기 약학 제제는 화학요법제에 의해 유발된(예를 들어, 시스플라틴에 의해 유발된) 신경병증의 치료에 기여하기 위해 상기 약학 제제의 투여를 지시하는 지시 정보(instructional information)와 함께 판매된다. 특정 실시형태에 있어서, 상기 지시 정보는 전술한 방법들 중 하나 이상의 방법으로 상기 레테프리님의 투여를 지시한다. 이러한 지시 정보에 수반되는 약학 제제는 레테프리님을 단독 활성 성분으로서 포함하거나 또는 1종 이상의 다른 활성 물질(예를 들어, 시스플라틴과 같은 화학요법제)을 추가로 포함할 수 있다. 이러한 약학 제제는 또한 다른 활성 또는 비활성 성분을 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 약학 제제는 또한 화학요법제(예를 들어, 시스플라틴) 및 레테프리님을 포함하는 약학 제제를 포함할 수 있으며, 이때 상기 약학 제제 중 상기 화학요법제는 암 치료에 기여하도록 의도된 것이고 상기 레테프리님은 시스플라틴에 의해 유발된 신경병증의 치료에 기여하도록 의도된 것이다.

[도면의 간단한 설명]

도 1은 시스플라틴에 의해 유발된 체중 변화에 레테프리님이 미치는 효과를 도시한다.

도 2는 핫 플레이트 패러다임으로 측정시 시스플라틴에 의해 유발된 감각 지각에 있어서의 변화에 레테프리님이 미치는 효과를 도시한다.

도 3 및 4는 각각 H파 진폭 및 잠시(latency)에 있어서 시스플라틴에 의해 유발된 변화에 레테프리님이 미치는 효과를 도시한다.

도 5는 시스플라틴에 의해 유발된 감각 신경 전도 속도(SNCV)의 변화에 레테프리님이 미치는 효과를 도시한다.

도 6은 시스플라틴에 의해 유발된 축색 직경의 변화에 레테프리님이 미치는 효과를 도시한다.

도 7은 시스플라틴에 의해 유발된 g 비의 변화에 레테프리님이 미치는 효과를 도시한다.

도 8은 시스플라틴 투여 후 변성 섬유 대 비변성 섬유의 비율에 있어서의 변화에 레테프리님이 미치는 효과를 도시한다.

[상세한 설명]

I. 정의

지시 정보: 본원에서 사용되는 "지시 정보"란 용어는 약학 제제를 투여하는 방법의 설명을 제공하는 약학 제제에 첨부된 자료를 의미한다. 이 지시 정보는 일반적으로 약학 제제의 "라벨"로서 간주된다. 지시 정보는 약학 제제에 관한 정보를 포함하는 종이 삽입물, 씨디롬 또는 웹 사이트 안내서를 비롯한 다수의 형태일 수 있으나 이에 한정되지 않는다.

전구약물: 본원에서 사용되는 "전구약물"이란 용어는, 예를 들어 가수분해에 의해, 생체내에서 본 발명에 유용한 화합물로 신속하게 전환되는 화합물을 의미한다. 전구약물에 관한 충분한 고찰은 문헌[Higuchi et al., Prodrugs as Novel Delivery Systems, Vol. 14, of the A.C.S.D. Symposium Series, and in Roche(ed.), Bioreversible Carriers in Drug Design, American Pharmaceutical Association and Pergamon Press, 1987]에 제공되어 있다.

실질적으로 동시에: 본원에서 사용되는 "실질적으로 동시에"란 표현은 2종의 약학 제제(즉, 레테프리님 및 시스플라틴)가 동시에 투여되는 것을 의미한다. 이 정의에 따르면, "동시에"란 정확히 동시에와 약 10분 내를 포함하는 것으로 해석되어야 한다.

치료하는, 치료 및 치료에 기여하는: 본원에서 사용되는 "치료하는", "치료" 및 "치료에 기여하는"이란 표현들은 시스플라틴 투여 후의 신경 손상의 발달을 예방하거나, 억제하거나, 늦추거나 또는 부분적으로 또는 완전히 역행시키는 것을 의미한다. 암과 관련하여 이 표현들은 고형 종양을 비롯한 암의 진행 또는 성장을 예방하거나 저지하거나 암을 축소시키거나 제거하는 것을 포함한다. 따라서, 이러한 표현들은 적절하다면 의학적인 치료적 및/또는 예방적 투여를 둘 다 포함한다.

본원에서 사용되는 "주 2회"란 표현은 약학 제제를 7일의 기간 내에 2회 투여하는 것을 의미한다. 일반적으로, 이러한 투여는 7일의 기간에 걸쳐 균등한 간격을 두고 행해지나 이러한 특징이 필수적인 것은 아니며, 7일의 기간에 걸쳐 서로 간에 임의의 간격을 두고 2회의 투여가 행해질 수 있다.

본원에서 사용되는 "레테프리님"이란 용어는 N-4-카복시페닐-3-(6-옥소하이드로퓨린-9-일)프로판아미드 및 이의 다양한 형태들(예를 들어, 레테프리님 산 및 염 형태)을 의미한다. 레테프리님은 또한 AIT-082, SPI-082 및 SPI-205와 같이 다양한 명칭으로 알려져 있다.

본 발명의 상기 레테프리님 조성물 및 방법은 임의의 화학요법제(들)의 투여와 적어도 부분적으로 관련된 말초 신경병증을 치료하는 데 사용될 수 있다. 대표적인 화학요법제류에는 포도필로톡신, 테르페노이드(예를 들어, 탁산 및 빈카 알칼로이드), 대사길항물질, 안트라사이클린, 알킬화제(예를 들어, 플라틴) 및 기타 항종양제를 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 빈카 알칼로이드는, 특히, 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈 및 빈데신을 포함한다. 다른 대표적인 화학요법제로는 에토포사이드, 테니포사이드, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 도세탁셀, 수라민, 알트레타민, 클로람부실, 사이타라빈, 다카바진, 도세탁셀, 에토포사이드, 플루다라빈, 메스나와 병용되는 이포스파마이드, 타목시펜, 테니포사이드 및 티오구아닌을 들 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 종양 용해성 약물의 투여와 관련된 말초 신경병증은 문헌[C. M. Haskell, "Cancer Treatment" (5.sup.th Ed., W.B. Saunders, Philadelphia, 2001), Ch. 10, pp. 104-214]에 기재되어 있다. 일 실시형태에 있어서, 본 발명은 빈카 알칼로이드(예를 들어, 빈크리스틴), 탁산(예를 들어, 파클리탁셀/탁솔

), 또는 알킬화제(예를 들어, 시스플라틴)의 투여와 관련된 약물에 의한 말초 신경병증을 치료하는 것에 관한 것이다. 또 다른 실시형태에 있어서, 본 발명은 시스플라틴의 투여와 관련된 약물에 의한 말초 신경병증을 치료하는 것에 관한 것이다.

시스플라틴은 다수의 일반적인 난치성 종양의 치료에 널리 사용되고 있는 항종양제이다. 시스플라틴은 세포 분열을 방해하는 DNA 합성 억제제로서의 그 효과에 기인하여 항암제로서 유용하다. 현재, 신경병증(즉, 신경 손상)은 용량 제한 독성이 있는 것으로 인정되고 있으며, 누적 용량이 약 300 mg/m²를 초과하면 증상이 발현된다. 시스플라틴 신경병증은 주로 거대 섬유 감각 뉴런에 악영향을 미치고, 일반적으로 감각 신경의 신호 진폭 감소와 관련되어 있어서, 심각한 감각 기능 장애를 초래한다. 이러한 신경병증은 시스플라틴 치료 중단 후에도 계속 진행될 수 있다. 본 발명은 레테프리님이 시스플라틴에 의해 유발된 신경 손상의 치료 또는 예방에 기여할 수 있음을 보여준다.

해당되는 개별 피험체의 특정 요구 사항에 따라, 본 발명의 레테프리님 조성물은 효과적인 치료를 제공할 수 있도록 다양한 용량 및 투여 계획으로 투여될 수 있다. 선택된 레테프리님 조성물의 유효량을 정하는 것은, 화학요법 화합물의 활성, 환자의 생리학적 특성, 환자의 질병 또는 상태 및 레테프리님 및/또는 화학요법제(들)의 투여 방법/빈도/방식을 비롯한 요인들에 따라 달라질 수 있으나 이에 한정되지 않는다. 초기에는, 특정 환자의 최적 투여량을 결정하기 위해 투여량 및 투여 계획을 조정할 수 있다.

화학요법제에 의해 유발된 신경병증을 완화하는 데 유효한 최소 레테프리님 투여 농도(약물 중량 대 환자 중량)는 약 25 mg/kg, 약 30 mg/kg, 약 35 mg/kg, 약 40 mg/kg 또는 약 45 mg/kg이다. 화학요법제에 의해 유발된 신경병증을 완화하는 데 유효한 최대 투여 농도는 약 100 mg/kg, 75 mg/kg, 약 65 mg/kg, 약 60 mg/kg 또는 약 55 mg/kg이다. 화학요법제에 의해 유발된(예를 들어, 시스플라틴에 의해 유발된) 신경병증을 완화하는 데 유효한 투여 농도 중 하나는 약 50 mg/kg이다. 상기 레테프리님 조성물은 1주(7일) 기준으로 매주 1일 1회 미만(예를 들어, 주 3회 내지 6회) 또는 주 2회 투여될 수 있다. 투여 계획에 관계없이, 투여 시간 간격은 동일할 필요는 없으나 동일해도 좋다.

상기 레테프리님 조성물은 경구, 국소, 경피, 복강내, 피하 또는 정맥내 경로를 비롯하여 다종 다양한 경로를 이용하여 투여할 수 있다. 유효량의 화합물을 뇌척수액으로의 주사를 통해 또는 뇌로 바로 주입하여 투여할 수도 있다. 일 실시형태에 있어서, 투여 방식은 피하 투여이다.

본 발명의 방법은 레테프리님을 단독으로 또는 약학 제제로서 환자(예를 들어, 치료를 요하는 포유동물)에게 투여함으로써 실시될 수 있다. 또한, 상기 레테프리님은 약학적으로 허용되는 부형제 및 담체 물질, 예컨대 비활성 고체 희석제, 수용액 또는 비독성 유기 용매와 병용될 수 있다. 필요에 따라, 이러한 약학 제제는 또한 활성 성분의 유효성을 향상시키는 보존제 및 안정제 등과 소량의 보조 물질, 예컨대 습윤제 또는 유화제와, pH 완충제 등을 함유할 수 있다. 상기 약학적으로 허용되는 담체는 인간 혈청 알부민, 이온 교환 물질, 덱스트로스, 알루미나, 레시틴, 완충 물질, 예컨대 포스페이트, 글리신, 소르브산, 소르브산칼륨, 프로필렌 글리콜, 폴리에틸렌 글리콜 및 염 또는 전해질, 예컨대 황산프로타민, 염화나트륨 또는 염화칼륨을 비롯하여 당업계에 일반적으로 알려진 것들로부터 선택될 수 있으나 이들에 한정되지 않는다. 그 밖의 담체도 사용될 수 있다. 액체 조성물은 또한 물에 더하여 또는 물을 제외하고 액상을 함유할 수 있다. 이같은 추가 액상의 예로는 글리세린, 식물유, 예컨대 면실유, 유기 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 물-오일 에멀션이 있다. 일 실시형태에 있어서, 상기 레테프리님 제제는 경우에 따라 완충된 소수성 현탁액일 수 있다. 또 다른 실시형태에 있어서, 상기 레테프리님 제제는 경우에 따라 완충된 지질 현탁액일 수 있다. 상기 제제는 통상의 완충제(예를 들어, 산 또는 염)로 완충시킬 수 있다. 또 다른 실시형태에 있어서, 상기 제제는, 예를 들어, 레테프리님의 염 또는 산 형태(예를 들어, 레테프리님의 칼륨염 형태)로 완충시킨다. 또 다른 실시형태에 있어서, 상기 레테프리님 제제는 레테프리님의 칼륨염 형태로 완충시킨 지질 현탁액이다.

재료 및 방법

1. 동물

10 주령의 암컷 다크 아구티 래트(Janvier, Le Genest-St-Isle, France)를 5개의 실험군으로 무작위로 분배하였다: (a) 레테프리님 산 현탁액 위약 처리를 피하(s.c.) 투여로 실시하는 대조군(n=17); (b) 레테프리님 염(0.9% NaCl) 위약 처리를 피하 투여로 실시하는 대조군(n=17); (c) 시스플라틴 단독 처리군(n=17); (d) 50 mg/kg/d의 레테프리님 산 현탁액 처리를 피하 투여로 실시하는 시스플라틴 처리군(n=17); 및 (e) 50 mg/kg/d의 레테프리님 K 염 용액 처리를 피하 투여로 실시하는 시스플라틴 처리군(n=17). 동물들을 우리마다 2 마리씩 넣고 온도 제어실(21∼22℃)에서 뒤바뀐 명암 주기(12 시간/12 시간)로 사료와 물을 자유롭게 먹을 수 있도록 하면서 사육하였다. 모든 실험은 기관이 정한 가이드라인에 따라 수행하였다.

2. 시스플라틴 신경병증의 유도, 약리학적 치료 및 모니터링 및 테스트 계획

0.1 mg/ml의 시스플라틴 용액(Sigma, L'Isle d'Abeau-Chesnes, France)을 주사당 2 mg/kg의 용량으로 4주 동안 주 2회 복강내(i.p.) 주사하여 신경병증을 유도하였다. 연구 종반(7주)까지 시스플라틴 투여 첫날부터 매일 단위로 레테프리님 처리를 실시하였다. 시스플라틴 및 레테프리님 K 염은 멸균 0.9% NaCl 용액(염수)에 용해시켰다. 레테프리님 산 현탁액 및 그 위약 형태는 5% 글루코스 용액 중에서 조제하였다. 레테프리님 산 현탁액 및 그 위약 및 레테프리님 K 염 용액은 매일 새로 조제하였다. 체중 및 생존율을 매일 기록하였다. 핫 플레이트 및 근전도 검사(EMG) 테스트는 주 1회 수행하였다. 조직학적 분석을 위해 5주째 각 군마다 5 마리 동물로부터 좌골 신경을 적출하였다.

3. 감각 테스트: 핫 플레이트

52℃로 가열된 핫 플레이트(Medite OTS 40, Microm, Francheville, Rhone, France) 위의 유리 실린더(높이: 17 cm; 직경: 21 cm) 안에 래트를 개별적으로 배치하였다. 동물의 거동, 특히 발 핥기 및 순응된 도약(열을 피하기 위한 도약)을 관찰하고 기록하였다. (핥기와 도약으로 확인되는) 열통을 느끼는 데 걸리는 시간은 열 감수성과 관련이 있으며 열 감수성이 감소될 때 증가하는 경향이 있다.

4. 근전도 검사

뉴로매틱(Neuromatic) 2000M 근전도 검사(EMG)(Dantec, Les Ulis, France)를 이용하여 전기생리학적 기록을 행하였다. 60　mg/kg의 케타민 염화수화물(Imalgene 500, Rhone Merieux, Lyon, France) 및 4 mg/kg의 하이알린(Rompum 2%, Bayer Pharma, Kiel, Germany)을 복강내 주사하여 래트를 마취시켰다. 열 램프를 이용하여 정상 체온을 30℃로 유지하고 꼬리 표면에 배치한 접촉 온도계(Quick, Bioblock Scientific, Illkirch, France)로 조절하였다.

좌골 신경을 자극한 후 뒷발바닥 근육의 H파 반사를 기록하였다. 기준 전극 및 그라운드 바늘을 래트의 아랫등에 배치하였다. 초최대 강도의 단일 0.2 ms 펄스로 좌골 신경을 자극하였다. H파의 진폭(mV) 및 잠시를 기록하였다.

감각 신경 전도 속도(SNCV) 역시 기록하였다. 꼬리 피부 전극은 다음과 같이 배치하였다: 꼬리 밑둥에 기준 바늘을 삽입하고 기준 바늘로부터 꼬리 끝부분 쪽으로 30 mm 떨어진 곳에 애노드 바늘을 배치하였다. 그라운드 바늘 전극은 애노드 바늘과 기준 바늘 사이에 삽입하였다. 12.8 mA의 강도로 일련의 20회 펄스(0.2 ms로)로 미골 신경을 자극하였다. 속도는 m/s 단위로 표시하였다.

5. 형태학적 분석

연구 종반에, 50 mg/kg의 레테프리님이, 시스플라틴에 의해 유발된 병리학적 변화에 미치는 효과를 평가하기 위해 군당 5 마리의 동물을 조직학적 분석에 할당하였다. 이 동물들에게 100 mg/kg의 Imalgene 500을 복강내 주사하여 동물들을 마취시켰다. 조직 검사를 위해 5 mm의 좌골 신경 절편을 절제하였다. 이 조직을 인산염 완충액(pH 7.4) 중 4% 글루타르알데히드(Sigma, L'Isle d'Abeau-Chesnes, France) 용액으로 밤새 고정하고 사용시까지 +4℃에서 30% 수크로스에 보존하였다. 이 신경 샘플을 인산염 완충액 중 1% 사산화오스뮴(Sigma, L'Isle d'Abeau-Chesnes, France) 용액에서 2 시간 동안 후고정하고 일련의 알코올 용액에서 탈수한 후 에폰(Epon)에 포매하였다. 그 후 포매된 조직을 +70℃에서 3일 동안 두어 조직 왁스의 중합이 일어나게 하였다. 마이크로톰으로 1.5 ㎛의 횡단 절편을 절단하고 1% 톨루이딘 블루 용액(Sigma, L'Isle d'Abeau-Chesnes, France)으로 2분 동안 염색한 후 탈수하고 유키트(Eukitt)에 마운팅하였다.

광학 현미경(Nikon, Tokyo, Japan)을 사용하여 각각의 좌골 신경 샘플로부터 얻은 1개의 절편을 관찰하였다. 반자동 디지털 이미지 분석 소프트웨어(Biocom, France)를 이용하여 절편의 전체 표면을 분석하였다. 각각의 섬유에 대해, 축색 및 미엘린 크기를 자동 계산하여 표면적(㎛²)으로 기록하였다. 이 두 가지 파라미터를 이용하여, 상대적 수초(미엘린초) 두께의 지표인, 각 섬유의 g 비(축색 직경/섬유 직경)의 등가 면적(즉, [A/(A+M)]0.5, A = 축색 면적, M = 미엘린 면적)을 계산하였다. 미엘린 두께는 g 비에 반비례한다.

그 후, 오퍼레이터(operator)를 사용하여 수작업으로 변성된 섬유의 수를 산출하였다. 축색이 없는 유수 섬유, 과다한 미엘린을 가진 섬유 및 축색 직경에 비해 두께가 너무 두꺼운 수초를 가진 섬유는 변성 과정이 진행중인 섬유로 간주하였다.

6. 데이터 분석

실험이 진행되는 동안 이원 분산 분석(ANOVA)으로 체중을 비교하였다. 거동 데이터, 전기생리학적 데이터 및 조직학적 데이터를 각각의 개별 시점에 대해 ANOVA로 분석한 후, 사후 검정(PLSD)으로서 피셔의 보호된 최소 유의차 검정을 행하였다. 유의 수준은 p<0.05로 설정하였다. 결과는 평균±평균의 표준 오차(s.e.m.)로서 표시된다.

결과

1. 체중

연구 전반에 걸쳐 점진적인 체중 증가를 보이는 대조군 래트와는 달리, 시스플라틴을 투여한 모든 동물들은 시스플라틴을 투여한 바로 다음 날 현저한 체중 감소를 나타내었다(p≤0.001, 이원 ANOVA)(도 1 참조). 시스플라틴 투여 3주째 및 4주째에 가장 심한 체중 감소가 관찰되었다. 시스플라틴 처리를 중단한 후, 래트는 점진적인 체중 증가를 보였으나 대조군 수준보다는 낮은(약 20%) 상태였다. 이러한 결과들은 레테프리님 산 또는 레테프리님 K 염의 처리가 성장 지연 발생을 예방하지는 못하였으나 시스플라틴 단독 처리군에 비해 개선된(시스플라틴 단독 처리군보다 약 10% 높은) 성장 프로필과 관련이 있었음을 입증한다.

2. 감각 테스트: 핫 플레이트

도 2는, 2주째부터, 시스플라틴 단독 처리군의 래트가 대조군에 비해 역치 잠시 스코어에 유의적인 증가를 나타내었음을 보여준다(p≤0.05, 피셔의 PLSD 검정). 4주째(시스플라틴 투여 마지막 주) 가장 심한 기능 장애가 관찰되었으며, 이때 시간 스코어는 대조군보다 약 30% 높았다. 연구 종반에서도, 시스플라틴 단독 처리군의 동물들은 대조군 동물들의 거동 수준으로 회복하지 못하였다.

역시 도 2에서 알 수 있는 바와 같이, 레테프리님 산 또는 레테프리님 K 염을 사용한 처리는 시스플라틴 처리 래트의 핫 플레이트 거동을 유의적으로 개선시켰다(p≤0.05, 피셔의 PLSD 검정). 3주부터 7주까지 유의적인 효과가 관찰되었다. 가장 심각한 시스플라틴 기능 장애가 관찰되었던 4주째에, 레테프리님 산 또는 레테프리님 K 염을 처리한 시스플라틴 래트는 대조군 값보다 단지 약 15% 높은 시간 스코어를 나타내었다. 연구 종반(7주)에, 레테프리님 산 또는 레테프리님 K 염을 투여한 시스플라틴 처리 래트의 거동은 대조군 래트의 거동과 유사하였다. 이러한 결과들은 레테프리님이 시스플라틴 처리와 관련된 발병의 예방에 기여할 수 있음을 입증한다.

3. 전기생리학적 측정

a. H파의 진폭

도 3에 도시된 바와 같이, 시스플라틴 투여 개시 후 1주째에 시스플라틴 단독 처리군에서 H파 진폭의 유의적인 감소가 관찰되었다. H파 진폭에 있어서 가장 현저한 감소는 4주째 발생하였으며, 이때 감소는 대조군 수준의 45%를 초과하였다. 시스플라틴 처리 중단 후(시스플라틴 처리 후 시점) 회복이 시작되어 7주째(연구 종반)에 완료되었다.

레테프리님 산 또는 레테프리님 K 염을 처리한 시스플라틴 래트는 시스플라틴 단독 처리군과 비교할 때 개선된 H파 거동을 나타내었다. 이러한 차이는 2주째에 벌써 명백하였다. 시스플라틴 단독 처리군에서 H파 진폭의 감소가 최대였던 4주째에, 레테프리님을 투여한 시스플라틴 래트는 대조군 값보다 단지 약 20% 낮은 H파 진폭을 나타내었다. 5주경에, 레테프리님을 처리한 시스플라틴 래트는 대조군 래트의 H파 스코어로 회복되었다. 이러한 결과들은 또한 레테프리님이 시스플라틴 투여와 관련된 생리학적 변화를 예방 또는 완화하는 데 도움이 될 수 있음을 입증한다.

b. H파의 잠시

도 4는, 대조군 래트와 비교할 때, 2주째부터 시작된 시스플라틴 단독 처리군의 H파 잠시의 유의적인 연장을 보여준다(p≤0.05, 피셔 검정). 가장 심한 변화는 잠시 스코어가 약 12% 연장된 4주째에 관찰되었다. 이 측정에서 시스플라틴 단독 처리 래트는 7주경에 완전히 회복되었다.

레테프리님 산 또는 레테프리님 K 염을 사용한 처리는 시스플라틴에 의해 유발된 H파 잠시 변화를 유의적으로 감소시켰다(p≤0.05, 피셔 검정). 시스플라틴 단독 처리군에서 변화가 최대였던 4주째에, 레테프리님을 처리한 시스플라틴 군에서는 잠시 스코어가 (대조군 값에 비해) 단지 약 4% 연장된 것이 관찰되었다.

c. 감각 신경 전도 속도

시스플라틴 군에서 1주째부터 시작하여 SNCV의 점진적인 감소가 관찰되었다(p≤0.05, 피셔 검정)(도 5). 가장 심각한 기능 장애는 4주째 관찰되었으며, 이때 스코어는 대조군 값보다 약 15% 낮았다. 회복은 5주경에 시작되었으나 거동은 대조군 수준까지 회복되지 않았다.

레테프리님 처리는 시스플라틴 처리 래트의 SNCV 거동을 현저히 개선시켰다. 시스플라틴 단독 처리군에서 SNCV 기능 장애가 최대였던 4주째에, 레테프리님을 투여한 시스플라틴 래트와 관련된 기능 장애는 대조군 값보다 고작 7% 적었다. 7주째, 레테프리님을 처리한 시스플라틴 래트의 거동은 대조군 래트의 거동과 비슷하였다.

4. 형태학적 분석

a. 축색 직경

시스플라틴 단독 처리 래트로부터 적출한 신경 섬유의 축색 직경이 다른 군의 직경보다 약간 더 크긴 했지만, 군 간에 통계적 차이는 없었다(p>0.05, ANOVA)(도 6). 레테프리님 처리는 시스플라틴 처리 래트의 축색 크기를 유의적으로 변화시키지 않았다.

b. 미엘린 두께

신경 섬유의 수초 두께와 관련하여 군 간에 통계적 차이는 없었다(p>0.05, ANOVA)(도 7).

c. 변성된 섬유의 비율

도 8에 도시된 바와 같이, 시스플라틴 단독 처리군의 좌골 신경에서의 변성된 섬유의 비율은 대조군 래트의 비율보다 유의적으로 더 높았다(p≤0.05, 피셔 검정). 또한, 레테프리님 처리는 시스플라틴 처리 래트의 좌골 신경에서의 변성된 섬유의 비율을 유의적으로 감소시켰다.

전술한 결과들은 화학요법제(이 경우, 시스플라틴) 투여가 H파 신호의 변화(진폭 감소 및 잠시 연장) 및 SNCV의 변화뿐만 아니라 열에 대한 반응성 지연으로 나타나는 현저한 신경 기능 장애를 유도한다는 것을 보여준다. 감각 신경병증의 이러한 징후는, 손상된 섬유(감각 또는 운동 섬유)의 성질은 확인되진 않았지만, 축색 변성의 특징을 나타내는 좌골 신경 섬유 비율에 있어서의 유의적인 증가를 확인해 주는 조직 검사 결과에 의해 뒷받침되었다.

전술한 결과들은 또한 레테프리님 처리가 화학요법제에 의해 유발된(이 경우, 시스플라틴에 의해 유발된) 신경 기능 장애를 현저히 완화시킬 수 있으며 이러한 장애로부터의 회복을 촉진할 수 있음을 입증하였다. 이러한 개선은 조사된 파라미터(H파 진폭 및 잠시, SNCV 및 축색 변성) 대부분에서 명백하였으며, 핫 플레이트 테스트에서 관찰된 개선과 우수한 상관관계가 있는 것으로 나타났다.

조직 검사 결과들은 시스플라틴 단독 처리군의 축색 직경이 약간 증가하였음을 보여주었다. 이것은 발생중인 래트 뇌에서 시스플라틴 투여 결과로서 관찰되는 현상인 축색 변성에 해당하는 것일 수 있다[Rzeski et al., (2004) Ann. Neurol. 56 :351-360]. 레테프리님 처리는 이러한 축색 팽창을 완전히 예방하는 것으로 보였다. 요약하면, 전술한 결과들은 레테프리님을 매일 처리하는 것이 시스플라틴과 관련된 감각 신경병증을 개선시킬 수 있다는 것을 보여준다.

전술한 활성 성분을 함유하는 약학 제제는 인간 또는 다른 포유동물에게 투여하기에 적합하다. 일반적으로, 상기 약학 제제는 멸균 상태이며, 투여시 해로운 반응을 유발하는 독성, 발암성 또는 돌연변이성 화합물을 함유하지 않는다. 상기 약학 제제는 화학요법제 투여 개시 전, 중 또는 후에 투여될 수 있다.

본 발명의 방법은 전술한 것과 같은 활성 성분, 또는 이의 생리학적으로 허용되는 염, 유도체, 전구약물 또는 용매화물을 이용하여 수행할 수 있다. 상기 활성 성분은 순수한 화합물로서, 또는 어느 하나 또는 양 물질을 함유하는 약학 제제로서 투여될 수 있다.

상기 약학 제제는 활성 성분들이 그 의도된 목적을 달성하는 데 유효한 양으로 투여되는 약학 제제를 포함한다. 보다 구체적으로, "치료 유효량"은 고형 종양의 발달을 예방하거나 고형 종양을 제거하거나 그 진행을 저지하거나 그 크기를 감소시키는 데 효과적인 양을 의미한다. 치료 유효량을 결정하는 것은, 특히 본원에 제공된 상세한 설명을 참고할 때, 충분히 당업자의 능력 범위 내에 있다.

"치료 유효 용량"은 원하는 효과를 얻을 수 있는 활성 성분의 양을 의미한다. 그러한 활성 성분의 독성 및 치료 효능은 세포 배양 또는 실험 동물을 이용하여 표준 약학 절차로, 예를 들어 LD₅₀(집단의 50%에서 치사적인 용량) 및 ED₅₀(집단의 50%에서 치료 효과가 있는 용량)을 측정함으로써 결정할 수 있다. 독성 효과와 치료 효과 간의 용량비는 LD₅₀과 ED₅₀ 간의 비로서 표현되는 치료 지수이다. 치료 지수가 높은 것이 바람직하다. 얻어진 데이터는 인간에게 사용하기 위한 투여량 범위를 조정하는 데 이용될 수 있다. 활성 성분의 투여량은 독성이 거의 없거나 없는 ED₅₀을 포함하는 순환 농도 범위 내에 있는 것이 바람직하다. 투여량은 이용되는 제형 및 이용되는 투여 경로에 따라 상기 범위 내에서 달라질 수 있다.

정확한 제제 및 투여량은 환자의 상태를 고려하여 개별 의사가 결정한다. 투여량 및 투여 간격은 치료 또는 예방 효과를 유지하기에 충분한 활성 성분 수준을 제공하도록 개별적으로 조정될 수 있다.

약학 제제의 투여량은 치료 대상 피험체, 피험체의 중량, 질병의 중증도, 투여 방식 및 처방 의사의 판단에 따라 달라질 수 있다.

활성 성분은 단독으로 투여되거나 의도된 투여 경로 및 표준 제약 관행을 고려하여 선택된 약학 담체와의 혼합물로 투여될 수 있다. 따라서 본 발명에 따라 사용하기 위한 약학 제제는, 약학적으로 사용될 수 있는 제제로의 활성 성분의 가공을 용이하게 하는 부형제 및 보조제를 포함하는 1종 이상의 생리학적으로 허용되는 담체를 사용하여, 통상적인 방식으로 제제화할 수 있다.

치료 유효량의 활성 성분을 투여할 경우, 제제는 발열 물질 비함유의 비경구적으로 허용되는 수용액의 형태일 수 있다. pH, 등장성, 안정성 등을 적당히 고려한 그러한 비경구적으로 허용되는 용액의 제제는 당업자의 기술 범위 내에 있다. 정맥내 주사용으로 바람직한 제제는 일반적으로 등장성 비이클을 함유하나, 이러한 특징이 필수적인 것은 아니다.

수의학적 용도의 경우, 활성 성분은 표준 수의학적 관행에 따라 적절히 허용 가능한 제제로서 투여된다. 수의사는 특정 동물에게 가장 적절한 투여 계획을 용이하게 결정할 수 있다.

본 발명의 범위 및 사상으로부터 벗어나지 않도록, 본원에 구체적으로 기재된 것과 달리 실시될 수 있는 상기 실시형태들의 다양한 변경 및 변형이 가능하고 이용될 수 있다. 전술한 설명은 예시를 위한 것으로서 한정을 의도한 것이 아니다. 본 발명의 범위는 청구의 범위에 의해서만 결정될 수 있다.

본원에서 사용되었던 용어 및 표현은 한정이 아니라 설명을 위해 사용된 표현들로서, 그러한 용어 및 표현을 사용함에 있어서, 제시 및 기술된 특징들 또는 그 일부의 균등범위를 배제하려는 의도가 있는 것은 아니기 때문에, 다양한 변형예가 청구된 본 발명의 범위 내에서 가능한 것으로 인식되어야 한다. 또한, 본 발명의 임의의 실시형태의 임의의 하나 이상의 특징들은 본 발명의 범위로부터 벗어나지 않도록 본 발명의 임의의 다른 실시형태의 임의의 하나 이상의 다른 특징들과 조합될 수 있다.

달리 나타내지 않는다면, 명세서 및 청구의 범위에서 사용된, 성분의 양, 분자량과 같은 특성, 반응 조건 등을 표현하는 모든 수치는, 모든 경우에 있어서, "약"이라는 용어로 수식된 것으로 이해되어야 한다. 따라서, 적절치 않음을 명시하지 않는다면, 명세서 및 첨부된 청구의 범위에 개시된 수치 파라미터는 본 발명에 의해 얻을 수 있는 원하는 특성에 따라 달라질 수 있는 근삿값이다. 적어도, 청구의 범위에 대한 균등론의 적용을 제한하려는 시도로서가 아니라, 각각의 수치 파라미터는, 적어도, 기록된 유효 자릿수를 고려하고 통상의 반올림 기법을 적용하여 해석되어야 한다. 본 발명의 넓은 범위를 개시하는 수치 범위 및 파라미터는 근삿값이지만, 특정 예에 개시된 수치 값은 가능한 한 정확히 기록된 것이다. 그러나 임의의 수치 값에는 그 개개의 테스트 측정에서 발생하는 표준 편차에 기인하는 약간의 오차가 수반되기 마련이다.

본 발명을 기술하는 문맥에서 사용된 단수 형태의 지시사 및 유사한 지시사는 본원에서 달리 나타내거나 문맥상 명백히 모순되는 것이 아니라면 단수 형태와 복수 형태를 포괄하는 것으로 해석되어야 한다. 본원에서 값의 범위를 인용한 것은, 단지 그 범위에 속하는 개개의 값을 개별적으로 인용하기 위한 간편한 방법으로서 이용된 것이다. 본원에서 달리 나타내지 않는다면, 각각의 개별 값은 이 값이 본원에서 개별적으로 인용된 것처럼 명세서에 포함된다. 본원에 기재된 모든 방법들은 본원에서 달리 나타내거나 문맥상 명백히 모순되는 것이 아니라면 임의의 적절한 순서로 수행될 수 있다. 본원에 제시된 임의의 모든 예, 또는 예시적인 용어(예를 들어, "예컨대")의 사용은 단지 본 발명을 더 잘 설명하기 위한 것으로서 다르게 청구된 본 발명의 범위에 제한을 부과하려는 것은 아니다. 명세서 내의 어떠한 표현도 본 발명의 실시에 필수적인 임의의 비청구된 요소를 나타내는 것으로 해석되어서는 안된다.

본원에 개시된 본 발명의 택일적인 요소 또는 실시형태의 그룹화는 한정으로서 해석되어서는 안된다. 각 군의 구성원은 개별적으로 또는 본원에 개시된 그 군의 다른 구성원 또는 다른 요소와의 임의의 조합으로 인용되고 청구될 수 있다. 군의 하나 이상의 구성원은 편의상 및/또는 특허성을 위해 군에 포함될 수도 있고 군으로부터 삭제될 수 있을 것으로 생각한다. 임의의 이같은 포함 또는 삭제가 발생할 경우, 본원 명세서는 변형된 그 군을 포함함으로써 첨부된 청구의 범위에서 사용된 모든 마커쉬 그룹의 기재 사항을 충족시킨다고 생각한다.

본 발명자들이 알고 있는 본 발명의 실시를 위한 최선의 방식을 비롯하여 본 발명의 특정 실시형태를 본원에 기술하였다. 물론, 당업자라면 전술한 설명으로부터 이러한 특정 실시형태에 대한 변경예를 알 수 있을 것이다. 본 발명자들은 당업자가 필요에 따라 그러한 변경예를 이용할 것으로 기대하며, 본 발명자들은 본 발명이 본원에 구체적으로 기술된 것과 달리 실시될 수도 있다고 생각한다. 따라서, 본 발명은 적용법이 허용하는 한 본원에 첨부된 청구의 범위에서 인용된 주제의 모든 변형예 및 균등예를 포함한다. 또한, 가능한 모든 변경예에 있어서의 전술한 요소들의 임의의 조합은, 본원에서 달리 나타내거나 문맥상 명백히 모순되는 것이 아니라면, 본 발명에 포함된다.

또한, 본 명세서 전반에 걸쳐 다수의 특허 및 간행물이 인용되었다. 앞서 인용된 참고 문헌 및 간행물은 각각 그 전체가 참고 문헌으로서 본원에 개별적으로 포함된다.

마지막으로, 본원에 개시된 본 발명의 실시형태들은 본 발명의 원리를 예시하는 것으로서 이해되어야 한다.

이용될 수 있는 다른 변형예도 본 발명의 범위에 속한다. 그러므로, 비한정적인 예를 들면, 본 발명의 택일적인 구성이 본원의 교시에 따라 이용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 제시 및 기술된 바로 그것에만 한정되지 않는다.

Claims (44)

1. 레테프리님 현탁액을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 화학요법에 의해 유발된 신경병증의 치료에 기여하는 것을 포함하는 방법.
2. 제1항에 있어서, 상기 레테프리님 투여를 화학요법제를 사용한 치료 개시에 앞서 행하거나; 상기 레테프리님 투여를 상기 화학요법제를 사용한 치료 개시 후에 시작하거나; 상기 레테프리님 투여와 상기 화학요법제 투여를 실질적으로 동시에 행하는 것인 방법.
3. 제1항에 있어서, 상기 레테프리님을 주 6회 이하 투여하는 것인 방법.
4. 제1항에 있어서, 상기 레테프리님을 주 2회 투여하는 것인 방법.
5. 제2항에 있어서, 상기 레테프리님 투여와 상기 화학요법제 투여를 실질적으로 동시에 행하는 것인 방법.
6. 제5항에 있어서, 상기 레테프리님과 상기 화학요법제가 동일한 약학 제제의 구성 요소인 방법.
7. 제1항에 있어서, 상기 레테프리님 투여를 약 100 mg/kg 미만의 용량으로 행하는 것인 방법.
8. 제1항에 있어서, 상기 레테프리님 투여를 약 50 mg/kg의 용량으로 행하는 것인 방법.
9. 제2항에 있어서, 상기 화학요법제가 포도필로톡신, 테르페노이드, 대사길항물질, 안트라사이클린, 알킬화제, 다른 항종양제 및 이들의 조합으로부터 선택되는 것인 방법.
10. 제2항에 있어서, 상기 화학요법제가 빈크리스틴, 빈블라스틴, 비노렐빈, 빈데신, 에토포사이드, 테니포사이드, 시스플라틴, 카보플라틴, 옥살리플라틴, 파클리탁셀, 도세탁셀, 수라민, 알트레타민, 클로람부실, 사이타라빈, 다카바진, 도세탁셀, 에토포사이드, 플루다라빈, 메스나와 병용되는 이포스파마이드, 타목시펜, 테니포사이드, 티오구아닌 및 이들의 조합으로부터 선택되는 것인 방법.
11. 제2항에 있어서, 상기 화학요법제가 빈카 알칼로이드, 탁산, 알킬화제 및 이들의 조합으로부터 선택되는 것인 방법.
12. 제2항에 있어서, 상기 화학요법제가 빈크리스틴, 파클리탁셀, 시스플라틴 및 이들의 조합으로부터 선택되는 것인 방법.
13. 제2항에 있어서, 상기 화학요법제가 시스플라틴인 방법.
14. 제13항에 있어서, 상기 시스플라틴을 주 2회 투여하는 것인 방법.
15. 레테프리님의 현탁액을 포함하는, 화학요법에 의해 유발된 신경병증의 치료에 기여하는 약학 제제.
16. 제15항에 있어서, 상기 레테프리님이 약 100 mg/kg 미만의 용량을 포함하는 것인 약학 제제.
17. 제15항에 있어서, 상기 레테프리님이 약 50 mg/kg의 용량을 포함하는 것인 약학 제제.
18. 제15항에 있어서, 현탁액의 형태인 약학 제제.
19. 레테프리님 현탁액을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 시스플라틴에 의해 유발된 신경병증의 치료에 기여하는 것을 포함하는 방법.
20. 시스플라틴을 투여하여 암 치료에 기여하는 것; 및

    레테프리님 현탁액을 이를 필요로 하는 환자에게 투여함으로써 시스플라틴에 의해 유발된 신경병증의 치료에 기여하는 것

    을 포함하는 방법.
21. 제19항에 있어서, 상기 레테프리님 투여를 시스플라틴을 사용한 치료 개시에 앞서 행하거나 상기 레테프리님 투여를 시스플라틴을 사용한 치료 개시 후에 시작하는 것인 방법.
22. 제20항에 있어서, 상기 레테프리님을 매일 투여하는 것인 방법.
23. 제20항에 있어서, 상기 시스플라틴을 주 2회 투여하는 것인 방법.
24. 제20항에 있어서, 상기 레테프리님을 매일 투여하고 상기 시스플라틴을 주 2회 투여하는 것인 방법.
25. 제20항에 있어서, 상기 레테프리님 투여와 상기 시스플라틴 투여를 실질적으로 동시에 행하는 것인 방법.
26. 제25항에 있어서, 상기 레테프리님과 상기 시스플라틴이 동일한 약학 제제의 구성 요소인 방법.
27. 제19항에 있어서, 상기 레테프리님 투여를 약 100 mg/kg 미만의 용량으로 행하는 것인 방법.
28. 제27항에 있어서, 상기 레테프리님 투여를 약 50 mg/kg의 용량으로 행하는 것인 방법.
29. 레테프리님 현탁액을 포함하는 약학 제제로서, 이 약학 제제는 시스플라틴에 의해 유발된 신경병증의 치료에 기여하기 위해 상기 약학 제제를 이를 필요로 하는 환자에게 투여하는 것을 지시하는 지시 정보와 함께 판매되는 것인 약학 제제.
30. 제29항에 있어서, 상기 지시 정보는 상기 약학 제제 투여를 시스플라틴을 사용한 치료 개시에 앞서 행하거나 상기 약학 제제 투여를 시스플라틴을 사용한 치료 개시 후에 시작하는 것을 지시하는 것인 약학 제제.
31. 제29항에 있어서, 시스플라틴 치료와 상기 약학 제제 투여를 둘 다 시작했을 경우, 상기 지시 정보는 상기 약학 제제를 매일 투여할 것을 지시하는 것인 약학 제제.
32. 제29항에 있어서, 시스플라틴 치료와 상기 약학 제제 투여를 둘 다 시작했을 경우, 상기 지시 정보는 상기 시스플라틴을 주 2회 투여할 것을 지시하는 것인 약학 제제.
33. 제29항에 있어서, 시스플라틴 치료와 상기 약학 제제 투여를 둘 다 시작했을 경우, 상기 지시 정보는 상기 약학 제제를 매일 투여하고 상기 시스플라틴을 주 2회 투여할 것을 지시하는 것인 약학 제제.
34. 제29항에 있어서, 시스플라틴 치료와 상기 약학 제제 투여를 둘 다 시작했을 경우, 상기 지시 정보는 상기 약학 제제 투여와 상기 시스플라틴 치료를 실질적으로 동시에 행할 것을 지시하는 것인 약학 제제.
35. 제34항에 있어서, 상기 약학 제제는 시스플라틴을 더 포함하는 것인 약학 제제.
36. 제29항에 있어서, 상기 지시 정보는 약 100 mg/kg 미만의 레테프리님 용량을 송달하도록 하는 양으로 상기 약학 제제 투여를 행하는 것을 지시하는 것인 약학 제제.
37. 제29항에 있어서, 상기 지시 정보는 약 50 mg/kg의 레테프리님 용량을 송달 하도록 하는 양으로 상기 약학 제제 투여를 행하는 것을 지시하는 것인 약학 제제.
38. 시스플라틴과 레테프리님을 포함하는 약학 제제로서, 이 약학 제제 중 상기 시스플라틴은 암 치료에 기여하도록 의도된 것이고, 상기 레테프리님은 시스플라틴에 의해 유발된 신경병증의 치료에 기여하도록 의도된 것인 약학 제제.
39. 제15항에 있어서, 상기 제제가 피하 투여되는 것인 약학 제제.
40. 제1항, 제19항 또는 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 레테프리님이 피하 투여되는 것인 방법.
41. 제15항에 있어서, 상기 레테프리님이 산 형태의 레테프리님을 포함하는 것인 약학 제제.
42. 제1항, 제19항 또는 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 레테프리님이 산 형태의 레테프리님을 포함하는 것인 방법.
43. 제15항에 있어서, 상기 레테프리님이 염 형태의 레테프리님을 포함하는 것인 약학 제제.
44. 제1항, 제19항 또는 제20항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 레테프리님이 염 형태의 레테프리님을 포함하는 것인 방법.

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