KR20090021542A - Ｄｄｘ41 및 ａｓｃｃ2 유전자의 신규한 용도 - Google Patents

Abstract

본 발명은 DDX41 유전자 또는 DDX41 유전자로부터 발현된 단백질을 포함하는 암 진단용 또는 항암제 스크리닝용 조성물, 및 ASCC2 유전자 또는 ASCC2 유전자로부터 발현된 단백질에 대한 항체를 포함하는 암 진단용 또는 항암제 스크리닝용 조성물, 상기 유전자의 억제제 또는 상기 유전자로부터 발현된 단백질의 억제제 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 암 치료용 조성물, DDX41 유전자 및 ASCC2 유전자, 또는 이들로부터 발현된 단백질 중 하나 이상을 포함하는 암 진단용 키트를 제공한다. 본 발명의 DDX41, ASCC2 유전자는 특정 암 세포에 다량 발현되고 정상세포의 증식 속도를 증가시키므로, 이들 유전자의 발현을 저해시키면 암세포의 성장을 억제시키는 작용 효과를 가져온다. 따라서 DDX41 및 ASCC2 유전자는 각종 암의 진단 또는 치료제의 표적 유전자로 활용될 수 있다.

DDX41, ASCC2, 암

Description

ＤＤＸ41 및 ＡＳＣＣ2 유전자의 신규한 용도{Novel use of DDX41 and ASCC2 genes}

본 발명은 DDX41 유전자 또는 DDX41 유전자로부터 발현된 단백질을 포함하는 암 진단용 또는 항암제 스크리닝용 조성물, 및 ASCC2 유전자 또는 ASCC2 유전자로부터 발현된 단백질에 대한 항체를 포함하는 암 진단용 또는 항암제 스크리닝용 조성물, 상기 유전자의 억제제 또는 상기 유전자로부터 발현된 단백질의 억제제 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 암 치료용 조성물, DDX41 유전자 및 ASCC2 유전자, 또는 이들로부터 발현된 단백질 중 하나 이상을 포함하는 암 진단용 키트를 제공한다.

인간 유전체 프로젝트 연구 결과, 인체의 질환을 분자 수준에서 이해하고 새로운 질환 관련 표적을 발굴하고 이를 이용한 신약을 개발하고자 하는 신개념의 바이오 생명공학 기술의 시대가 열리고 있다. 이에 따라, 유전적 환경이 다른 환자 개개인에 맞추어 각종 다양한 질병을 진단, 치료, 예측하는 맞춤의학 시대가 현실로 다가오고 있다. 맞춤의학에는 유전체 진단용 바이오마커의 발굴, 표적화 치료기술, 질병 특이적 약물작용점의 발굴, 표적 치료용 신약, 정확한 임상 정보, 환자의 유전체 정보, 유전체적 역학결과, 그리고 이들을 분석 통합할 수 있는 바이오인포매틱스 등이 상호보완적으로 구성된 약물 유전체기술 개발이 수반되어야 한다. 특히, 맞춤의학에서 경쟁력을 갖추기 위해서는 질환과 개인에 대한 약물 예측 시스템, 진단 바이오마커 발굴, 새로운 표적유전자 및 단백질을 발굴하는 기초연구 및 이를 이용한 치료제의 개발이 중요하다.

최근, 전 세계적으로 난치병인 암의 생성 및 치료와 관련된 유전자의 기능 연구를 통해 치료용 표적을 발굴하고 이들을 진단 및 치료제 개발에 이용하기 위한 치열한 경쟁이 불붙고 있다. 게놈 연구의 활성화와 함께 인간 유전자 DNA 칩 또는 프로테옴 분석 연구가 활발하게 이루어지고 암과 관련된 유전자가 대량 발굴됨에 따라 많은 유전자들의 목록과 관련 데이터베이스는 구축되어 있으나 대부분 이들 유전자들에 대한 세포 내에서의 구체적 생물학적 기능 및 암 관련성은 아직 연구되지 않았거나 불확실하여 실제 암 관련성 또는 진단 및 표적 유전자로 활용하기에 상당한 어려움이 있다.

한편, 수많은 인간 유전자들의 기능에 대한 연구의 필요성이 부각됨에 따라 단순한 기능 및 형태 연구가 가능한 모델 생물체에 대한 활용도 및 관심은 더욱 높아지고 있다. 이에, 세포 내에서 일어나는 기본적이고 진화적으로 잘 보존되어 있는 기작을 이해하기 위하여 오랫동안 여러 분야에서 사용되어 왔던 모델 생물체 (model organism)를 암 진단 또는 치료용 타겟 발굴에 이용하는 연구가 진행되고 있다.

이들 모델 생물체 중 하나로 이용되고 있는 분열 효모 S.pombe는 유전자가 4,824개로 가장 적지만 43%의 유전자가 인트론(intron)을 함유하고 있다 (Wood V. et al., Nature. 45:871-880, 2002). S. pombe에는 세포 주기 조절, 단백질 분해(proteolysis), 단백질 인산화(protein phosphorylation), RNA 스플라이싱(RNA splicing) 등 진핵 세포내에서 중요한 관련 유전자들이 매우 잘 보존되어 있다. S. pombe를 포함하는 효모류는 진핵 세포 중 가장 간단한 모델 세포로써 저렴한 비용으로 배양이 가능하며 유전학적인 연구 및 조작이 용이하고 생화학적, 생리적 기능 분석 시스템의 확립이 잘 이루어져 있어 인간의 질병을 유발하는 유전자의 기능 연구 및 약물 개발을 위한 모델 세포로 이용되고 있다 (Lum, P.K. et al., Cell., 116:121-137, 2004). 특히, 분열효모는 세포 주기 및 신호 전달과 관련된 유전자가 결손되거나 세포 내에 대량 발현되면 신호전달 체계 조절에 이상이 초래됨에 따라 세포주기 조절 이상 또는 대사 이상에 의한 세포의 생장 속도 저해 및 형태학적 변화가 초래된다. 따라서 이러한 표현형의 변화를 탐색하여 해당 유전자의 기능을 유추할 수 있다.

한편, 암세포에서 대량 발현된 유전자에 대해 RNAi (RNA interference) 실험 기법을 이용하면 치료용 암 타겟으로의 사용 가능성을 확실히 확인할 수 있다. RNAi는 다양한 형태의 올리고 이중 리보핵산 (miRNA, expressed dsRNA, synthetic siRNA)을 이용하여 세포 내에서 특이적으로 해당 염기서열의 mRNA의 분해를 유도하여 유전자의 기능이 나타나지 못하도록 하는 기법이다. 이렇게 유전자의 발현이 저해된 세포의 표현 현상을 관찰함으로써 해당 유전자의 기능 연구 및 신호전달 경로 (pathway) 분석이 가능하여 암 표적으로서의 검증 (target validation) 등을 통 한 신약 개발 연구가 수행되고 있다.

RNAi 기법에 사용 가능한 올리고 이중 리보핵산 중 최근 각광을 받고 있는 siRNA (small interfering RNA)를 이용한 기법은 2002년 Science Journal에서 "breakthrough of the year"라고 선정할 정도로 획기적인 방법이다. siRNA는 짧은 19-23개의 이중 리보핵산쇄로 세포내 도입하면 비특이적 저해(non-specific inhibition) 없이 특정 유전자의 발현만을 억제하는 효과를 나타내므로 암의 생성을 촉진, 세포사멸을 억제하는 유전자에 대한 siRNA는 세포 내에서 해당 유전자 작용을 억제시켜 암세포를 죽이는 효과를 나타내며 이를 이용하여 치료용 표적유전자를 검증할 수 있다. 따라서 최근 질병에 대한 표적 유전자 발굴, 표적 유전자 검증, 치료제 개발을 위한 siRNA 연구가 매우 활발하다.

한편, DDX41(GenBank 등록번호: NM_016222) 및 ASCC2(GenBank 등록번호: NM_032204) 유전자의 암 관련성에 대해서는 아직까지 보고된 바 없다.

본 발명은 DDX41 유전자 및 ASCC2 유전자의 신규한 용도를 제공하는 것을 목적으로 한다.

보다 구체적으로, 본 발명은 DDX41 유전자 또는 DDX41유전자로부터 발현된 단백질을 포함하는 암 진단용 또는 항암제 스크리닝용 조성물, ASCC2 유전자 또는 ASCC2 유전자로부터 발현된 단백질에 대한 항체를 포함하는 암 진단용 또는 항암제 스크리닝용 조성물, 상기 유전자의 억제제 또는 상기 유전자로부터 발현된 단백질의 억제제 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 암 치료용 조성물, DDX41 유전자, ASCC2 유전자 또는 이들로부터 발현된 단백질 중 하나 이상을 포함하는 암 진단용 키트를 제공하고자 한다.

본 발명은 DDX41 유전자를 포함하는 암 진단용 조성물, 및 ASCC2 유전자를 포함하는 암 진단용 조성물을 제공한다.

본 발명에 있어서, 'DDX41 유전자' 또는 'ASCC2 유전자'는 이들 유전자의 DNA 또는 mRNA를 말하며, DNA 또는 mRNA의 전부 또는 일부를 모두 포함하는 개념이다.

본 발명의 조성물은 상기 유전자 외에도 핵산의 구조를 안정하게 유지시키는 증류수 또는 완충액을 포함할 수 있다.

하기 실시예 1 내지 3으로부터 확인할 수 있는 바와 같이, DDX41, ASCC2 유전자는 암세포에서 특이적으로 발현이 증가한다. 따라서 DDX41, ASCC2 유전자의 과발현 여부를 조사하면 암을 진단할 수 있다.

그러므로 본 발명은 또한 상기 유전자들의 암 진단 용도 및 상기 조성물과 대상체로부터 얻은 시료 간의 반응을 확인하여 암을 진단하는 방법을 제공한다.

본 발명의 진단 방법에서 상기 유전자를 포함하는 조성물과 시료 간의 반응의 확인은 DNA-DNA, DNA-RNA, DNA-단백질 간의 반응 여부를 확인하는데 사용되는 통상적인 방법들, 예컨대 DNA 칩, 단백질 칩, 중합효소 연쇄반응 (PCR), 노던 블롯팅, 서던 블롯팅, ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent assay), 효모 이중 혼성법(yeast two-hybrid), 2-D 겔 분석 및 시험관 내 결합 에세이 (in vitro binding assay) 등을 이용할 수 있다. 예컨대 상기 유전자의 전부 또는 일부를 프로브로 사용하여 대상자의 체액으로부터 분리한 핵산과 하이브리드화한 후 당분야에 공지된 다양한 방법, 예컨대 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcription polymerases chain reaction), 써던블로팅(southern blotting), 노던 블롯팅(Northern blooting) 등으로 이를 검출함으로써 대상자에서 상기 유전자가 고발현된 상태인지 조사하면 암의 발생 여부를 판단할 수 있다. 상기 프로브를 방사선 동위원소 또는 효소 등으로 표지하면 용이하게 유전자의 존재를 확인할 수 있다.

본 발명은 또한 DDX41 유전자로부터 발현된 단백질을 포함하는 암 진단용 조성물, 및 ASCC2 유전자로부터 발현된 단백질을 포함하는 암 진단용 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은 상기 단백질 외에도 단백질의 구조를 안정하게 유지시키는 증류수 또는 완충액을 포함할 수 있다.

앞서 언급한 바와 같이 DDX41, ASCC2 유전자는 암세포에서 특이적으로 발현이 증가하므로 상기 유전자들로부터 발현된 단백질을 이용하여 DDX41, ASCC2 유전자 또는 단백질의 과발현 여부를 조사하면 암을 진단할 수 있다.

따라서 본 발명은 또한 상기 단백질들의 암 진단 용도 및 상기 조성물과 대 상체로부터 얻은 시료 간의 반응을 확인하여 암을 진단하는 방법을 제공한다.

본 발명의 진단 방법에서 상기 단백질을 포함하는 조성물과 시료 간의 반응의 확인은 DNA-단백질, RNA-단백질, 단백질-단백질 간의 반응 여부를 확인하는데 사용되는 통상적인 방법들, 예컨대 DNA 칩, 단백질 칩, 중합효소 연쇄반응 (PCR), 노던 블롯팅, 서던 블롯팅, 웨스턴 블롯팅, ELISA(Enzyme Linked Immunosorbent assay), 특이적 면역염색(histoimmunostaining), 효모 이중 혼성법(yeast two-hybrid), 2-D 겔 분석 및 시험관 내 결합 에세이 (in vitro binding assay) 등을 이용할 수 있다. 예컨대 상기 유전자들로부터 발현된 단백질의 전부 또는 일부를 프로브로 사용하여 대상자의 체액으로부터 분리한 핵산 또는 단백질과 하이브리드화한 후 당분야에 공지된 다양한 방법, 예컨대 역전사 중합효소 연쇄반응(reverse transcription polymerases chain reaction), 웨스턴 블로팅(western blotting) 등으로 이를 검출함으로써 대상자에서 상기 유전자가 고발현된 상태인지 조사하면 암의 발생 여부를 판단할 수 있다. 상기 프로브를 방사선 동위원소 또는 효소 등으로 표지하면 용이하게 유전자의 존재를 확인할 수 있다.

다르게는 본 발명의 조성물은 상기 단백질 대신 상기 단백질에 대한 특이적 항체를 포함할 수 있다. 암 세포에서는 DDX41, ASCC2 유전자가 과발현되어 상기 유전자로부터 발현된 단백질의 양 또한 증가하게 된다. 따라서 상기 유전자로부터 발현된 단백질에 대한 항체를 이용하는 경우, 항원-항체 반응을 통해 상기 단백질을 검출해 내어 암을 진단할 수 있다.

상기 단백질에 대한 모노클로날 항체는 당업계에 통상적인 모노클로날 항체 제작 방법을 통해 제작되어 사용될 수도 있고, 시판되는 것을 사용할 수 있다. 상기 단백질에 대한 모노클로날 항체는 일반적으로 알칼라인 포스파타아제(alkaline phosphatase, AP) 또는 호올스래디쉬 퍼록시다제(horseradish peroxidase, HRP) 등의 효소가 컨쥬게이션된 2차 항체 및 이들의 기질을 사용하여 발색반응시킴으로써 정량 분석할 수도 있고, 아니면 직접 상기 단백질에 대한 모노클로날 항체에 AP 또는 HRP 효소 등이 컨쥬게이션된 것을 사용하여 정량분석할 수도 있다. 또한, 모노클로날 항체 대신에 상기 단백질을 인식하는 폴리클로날 항체를 사용할 수도 있고 이는 당업계에 통상적인 항혈청 제작 방법을 통해 제작되어 사용될 수도 있다.

본 발명은 또한 DDX41 유전자를 포함하는 항암제 스크리닝용 조성물, 및 ASCC2 유전자를 포함하는 항암제 스크리닝용 조성물을 제공한다. 또한 본 발명은 상기 조성물의 항암제 스크리닝용 용도 및 상기 조성물을 표적물질로 이용하여 시험대상물질을 접촉시키고, 표적물질과 시험대상물질 간의 반응을 확인하여, 시험대상물질이 상기 유전자의 발현을 증진시키는 활성 또는 억제하는 활성을 나타내는지를 결정하는 것을 포함하는 항암제 스크리닝 방법을 제공한다.

본 발명의 스크리닝 방법에서 상기 유전자를 포함하는 조성물과 시험대상물질 간의 반응 확인은, DNA-DNA, DNA-RNA, DNA-단백질, DNA-화합물 간의 반응 여부를 확인하는데 사용되는 통상적인 방법들을 사용할 수 있다. 예를 들면, 생체 외부에서(in vitro) 상기 유전자와 시험대상물질 사이의 결합 여부를 확인하기 위한 혼성화 시험, 포유류세포와 시험대상물질을 반응시킨 후 노던 분석, 정량적 PCR, 정량적 실시간 PCR 등을 통한 상기 유전자의 발현율 측정 방법, 또는 상기 유전자에 리포터 유전자를 연결시켜 세포 내로 도입한 후 시험대상물질과 반응시키고 리포터 단백질의 발현율을 측정하는 방법 등을 사용할 수 있다. 이러한 경우 본 발명의 조성물은 상기 유전자 외에도, 핵산의 구조를 안정하게 유지시키는 증류수 또는 완충액을 포함할 수 있다.

또한, 본 발명은 DDX41 유전자로부터 발현된 단백질을 포함하는 항암제 스크리닝용 조성물, 및 ASCC2 유전자로부터 발현된 단백질을 포함하는 항암제 스크리닝용 조성물을 제공한다. 본 발명은 또한 상기 조성물의 항암제 스크리닝용 용도 및 상기 조성물을 표적물질로 이용하여 시험대상물질을 접촉시키고, 표적물질과 시험대상물질 간의 반응을 확인하여, 시험대상물질이 상기 단백질의 기능을 증진시키는 활성 또는 억제하는 활성을 나타내는지를 결정하는 것을 포함하는 단계를 포함하는 항암제 스크리닝 방법을 제공한다.

본 발명의 스크리닝 방법에서 상기 단백질을 포함하는 조성물과 시험대상물질 간의 반응 확인은, 단백질-단백질, 단백질-화합물 간의 반응 여부를 확인하는데 사용되는 통상적인 방법들을 사용할 수 있다. 예를 들면, 상기 단백질과 시험대상물질을 반응시킨 후 활성을 측정하는 방법, 효모 이중 혼성법(yeast two-hybrid), 상기 단백질에 결합하는 파지 디스플레이 펩티드 클론(phage-displayed peptide clone)의 검색, 천연물 및 화학물질 라이브러리(chemical library) 등을 이용한 HTS(high throughput screening), 드럭 히트 HTS(drug hit HTS), 세포 기반 스크리 닝(cell-based screening), 또는 DNA 어레이(DNA array)를 이용하는 스크리닝법 등을 사용할 수 있다. 이러한 경우 본 발명의 조성물은 상기 단백질 외에도, 단백질의 구조 또는 생리 활성을 안정하게 유지시키는 완충액 또는 반응액을 포함할 수 있다. 또한 본 발명의 조성물은 생체 내 (in vivo) 실험을 위해, 상기 단백질을 발현하는 세포, 또는 전사율을 조절할 수 있는 프로모터 하에 상기 단백질을 발현하는 플라스미드를 함유하는 세포 등을 포함할 수 있다.

본 발명의 스크리닝 방법에서, 시험대상물질은 통상적인 선정방식에 따라 항암제로서의 가능성을 지닌 것으로 추정되거나 또는 무작위적으로 선정된 개별적인 핵산, 단백질, 기타 추출물 또는 천연물, 화합물 등이 될 수 있다.

본 발명의 스크리닝 방법을 통해 얻은, 유전자 발현을 증진시키거나 단백질의 기능을 증진시키는 활성을 나타내는 시험대상물질 및 반대로 유전자 발현을 억제시키거나 단백질의 기능을 억제시키는 활성을 나타내는 시험대상물질은, 전자의 경우, 항암제 후보물질이 될 수 있고, 후자의 경우는 시험대상물질에 대한 억제제를 개발함으로써 항암제 후보물질이 될 수 있다. 이와 같은 항암제 후보물질은 이후의 항암제 개발과정에서 선도물질(leading compound)로서 작용하게 되며, 선도물질이 상기 유전자 또는 그로부터 발현되는 단백질의 기능 억제효과를 나타낼 수 있도록 그 구조를 변형시키고 최적화함으로써, 새로운 항암제를 개발할 수 있다.

본 발명은 또한 DDX41 유전자에 대한 억제제와 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 암 치료용 조성물, 및 ASCC2 유전자에 대한 억제제와 약제학적으로 허 용되는 담체를 포함하는 암 치료용 조성물을 제공한다.

하기 실시예에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 유전자는 암 세포에서 다량 발현되므로, 상기 유전자의 억제제를 투여하여 상기 유전자의 발현을 저해시키면 암을 억제할 수 있다.

따라서 본 발명은 또한 상기 유전자의 억제제의 암 치료 용도 및 유효량의 상기 유전자의 억제제를 환자에게 투여하는 것을 포함하는 암 치료방법을 제공한다. 본 발명에 있어서 암 치료는 암의 예방 및 억제를 포함한다.

본 발명에 있어서, 상기 유전자에 대한 억제제는 상기 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드일 수 있다.

안티센스 올리고뉴클레오타이드는 생체 내 뿐만 아니라 생체 외에서도 유전자-특이적 억제를 달성하기 위해 성공적으로 사용되어 왔다. 안티센스 뉴클레오타이드는 특정 DNA 또는 RNA 타겟에 대해 안티센스(또는 상보)인 짧은 길이의 DNA 합성 가닥(또는 DNA 아날로그)이다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 타겟에 결합하고 전사, 번역 또는 스플라이싱의 단계에서 발현을 멈추게 함으로써 DNA 또는 RNA 타겟에 의해 인코드된 단백질의 발현을 막기 위해 제안되었다. 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 세포 배양 및 질병의 동물 모델에서도 성공적으로 이용되어 왔다(Hogrefe, 1999). 올리고뉴클레오타이드가 분해되지 않도록 더욱 안정하고 저항적이 되게 하기 위한 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 또다른 변형이 당업자에게 알려져 있고 이해된다. 여기서 사용된 안티센스 올리고뉴클레오타이드는 이중나선 또는 단일나선 DNA, 이중나선 또는 단일나선 RNA, DNA/RNA 하이브리드, DNA 및 RNA 아날로그 및 염기, 당 또는 백본 변형을 지닌 올리고뉴클레오타이드를 포함한다. 올리고뉴클레오타이드는 안정성을 증가시키고, 뉴클레아제 분해에 대한 저항성을 증가시키기 위해 당분야에 알려진 방법에 의해 변형된다. 이들 변형은 당분야에 알려져 있고 올리고뉴클레오타이드 백본의 변형, 당 모이어티의 변형 또는 염기의 변형을 포함하나 이에 한정적인 것은 아니다.

또한, 상기 유전자에 대한 억제제는 상기 유전자의 siRNA(Small Interfering RNA)일 수 있다.

siRNA는 상대적으로 낮은 농도로도 안티센스 올리고뉴클레오타이드에 의해 얻을 수 있는 효과와 동등하거나 높은 효과를 얻을 수 있기 때문에 안티센스 올리고뉴클레오타이드의 대안으로 제시되고 있다(Thompson, 2002). siRNAs의 이용은 질병의 동물 모델에 있어서 유전자 발현을 저해하는 데 대중성을 나타내고 있다. siRNA는 세포 배양 및 생체 내에서 오래 지속되는 효과, 생체 내에서 세포를 트랜스펙션시키는 능력 및 혈청 내 분해에 대한 저항력의 측면에서 생체 내에서 특정한 유전자의 발현의 저해에 대해 매우 강한 약물이 되는 잠재력을 지닌다(Bertrand et al., 2002). siRNA의 전달 및 siRNA를 포함한 발현 컨스트럭트/벡터는 당업자에게 알려져 있다. 예를 들어, 미국 출원 제2004/106567 및 2004/0086884는 바이러스성 벡터, 비바이러스성 벡터, 리포솜 전달 운반체, 플라스미드 주입 시스템, 인공 바이러스 엔벨로프 및 폴리라이신 컨쥬게이트를 포함한 전달 메커니즘뿐만 아니라 많은 발현 컨스트럭트/벡터를 제공하고 있다.

당업자는 당해 기술 분야에 공지된 방법을 이용하여 원하는 방식대로 상기 안티센스 올리고뉴클레오타이드 및 siRNA를 합성하고 변형시킬 수 있다. (Andreas Henschel, Frank Buchholz1 and Bianca Habermann (2004) DEQOR: a web-based tool for the design and quality control of siRNAs. Nucleic Acids Research 32(Web Server Issue):W113-W120.) 또한 당업자는 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 siRNA를 지닌 발현 컨스트럭트/벡터에 유용한 조절 서열(예컨대, 구성적 프로모터, 유도성 프로모터, 조직-특이적 프로모터 또는 그의 결합)을 잘 이해하고 있다.

암 치료를 위해 사용되는 본 발명의 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 siRNA은 약제학적으로 허용되는 담체를 추가적으로 포함한 조성물의 형태로 투여될 수 있다. 적당한 약제학적으로 허용되는 담체는 예를 들어 하나 이상의 물, 식염수, 인산 완충 식염수, 덱스트린, 글리세롤, 에탄올뿐만 아니라 이들의 조합을 포함한다. 이러한 조성물은 투여 후 활성 성분의 빠른 방출, 또는 지속적이거나 지연된 방출을 제공하도록 제제화될 수 있다.

상기 유전자의 저해제는 안티센스 올리고뉴클레오타이드 또는 siRNA 외에도 상기 유전자의 발현을 억제하는 물질이면 어떤 것이든 가능하다. 따라서 종래 당해 기술 분야에서 상기 유전자의 저해제로 알려진 화합물 또한 이용가능하다.

본 발명은 또한 DDX41 유전자로부터 발현된 단백질에 대한 억제제와 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 암 치료용 조성물, 및 ASCC2 유전자로부터 발현된 단백질에 대한 억제제와 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 암 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명의 유전자를 억제하면 그에 따른 단백질의 발현이 억제되어 암이 억제되는 것이므로, 상기 유전자의 단백질을 저해하면 암을 억제할 수 있다.

따라서 본 발명은 상기 단백질에 대한 억제제의 암 치료 용도 및 유효량의 상기 단백질의 억제제를 환자에게 투여하는 것을 포함하는 암 치료방법을 제공한다. 본 발명에 있어서 암 치료는 암의 예방 및 억제를 포함한다.

상기 단백질에 대한 억제제는 핵산, 화합물, 천연물 또는 단백질 등일 수 있다. 예를 들어, 상기 단백질에 대한 억제제는 본 발명의 유전자로부터 발현된 단백질에 대한 항체일 수 있다. 상기 단백질에 대한 모노클로날 항체는 당업계에 통상적인 모노클로날 항체 제작 방법을 통해 제작되어 사용될 수도 있고, 시판되는 것을 사용할 수 있다. 또한, 모노클로날 항체 대신에 상기 단백질을 인식하는 폴리클로날 항체를 사용할 수도 있고 이는 당업계에 통상적인 항혈청 제작 방법을 통해 제작되어 사용될 수도 있다.

본 발명의 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용되는 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다. 본 발명의 단백질에 대한 억제제가 항체일 경우 약제학적으로 허용되는 담체는 결합 단백질의 저장 수명 또는 유효성을 증가시키는 습윤제 또는 유화제, 방부제 또는 완충액과 같은 최소량의 보조 물질로 구성될 수 있다.

또한 본 발명의 암 치료용 조성물은 하나 또는 그 이상의 항암제와 함께 사용될 수 있다. 본 발명의 암 치료용 조성물은 예를 들어 당업자에게 잘 알려진 화학요법약제(chemotherapeutic agent), 예컨대, 사이클로포스파마이드, 아지리딘, 알킬알콘설포네이트, 나이트로소우레아, 다카르바진, 카르보플라틴, 시스플라틴 등과 같은 알킬화제(alkylating agent), 마이토마이신 C, 안트라사이클린, 독소루비신(아드리아마이신) 등과 같은 항생제, 메토트렉세이트, 5-플루오로우라신, 시타라빈 등과 같은 항대사제(antimetabolitic agent), 빈카 알칼로이드와 같은 식물유래 약제 및 호르몬 등을 추가로 포함할 수 있다.

본 발명의 암 치료용 조성물은 상기 유효 성분 외에도 약제학적으로 적합하고 생리학적으로 허용되는 보조제를 포함할 수 있으며, 이러한 보조제로는 부형제, 붕해제, 감미제, 결합제, 피복제, 팽창제, 윤활제, 활택제, 가용화제 등이 있다.

또한 본 발명의 조성물은 투여를 위해서 상기 기재한 유효 성분 이외에 추가로 약제학적으로 허용되는 담체를 1종 이상 포함하여 약제학적 조성물로 바람직하게 제제화할 수 있다.

액상 용액으로 제제화되는 조성물에 있어서 허용되는 약제학적 담체로는, 멸균 및 생체에 적합한 것으로서, 식염수, 멸균수, 링거액, 완충 식염수, 알부민 주사용액, 덱스트로즈 용액, 말토 덱스트린 용액, 글리세롤, 에탄올 및 이들 성분 중 1 성분 이상을 혼합하여 사용할 수 있으며, 필요에 따라 항산화제, 완충액, 정균제 등 다른 통상의 첨가제를 첨가할 수 있다. 또한 희석제, 분산제, 계면활성제, 결합제 및 윤활제를 부가적으로 첨가하여 수용액, 현탁액, 유탁액 등과 같은 주사용 제형, 환약, 캡슐, 과립 또는 정제로 제제화할 수 있다. 더 나아가 해당분야의 적절한 방법으로 Remington's Pharmaceutical Science, Mack Publishing Company, Easton PA에 개시되어 있는 방법을 이용하여 각 질환에 따라 또는 성분에 따라 바 람직하게 제제화할 수 있다.

본 발명의 조성물의 약제 제제 형태는 과립제, 산제, 피복정, 정제, 캡슐제, 좌제, 시럽, 즙, 현탁제, 유제, 점적제 또는 주사 가능한 액제 및 활성 화합물의 서방출형 제제 등이 될 수 있다.

본 발명의 조성물은 정맥내, 동맥내, 복강내, 근육내, 동맥내, 복강내, 흉골내, 경피, 비측내, 흡입, 국소, 직장, 경구, 안구내 또는 피내 경로를 통해 통상적인 방식으로 투여할 수 있다.

본 발명의 치료 방법에 있어서, "유효량"은 암을 억제하는 효과를 이루는데 요구되는 양을 의미한다. 따라서, 본 발명의 유효 성분의 "유효량"은 질환의 종류, 질환의 중증도, 조성물에 함유된 유효 성분 및 다른 성분의 종류 및 함량, 제형의 종류 및 환자의 연령, 체중, 일반 건강 상태, 성별 및 식이, 투여 시간, 투여 경로 및 조성물의 분비율, 치료 기간, 동시 사용되는 약물을 비롯한 다양한 인자에 따라 조절될 수 있다. 성인의 경우, 상기 유전자 또는 단백질의 억제제를 1일 1회 내지 수회 투여시, siRNA일 경우 0.01ng/kg~10㎎/kg, 상기 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드인 경우 0.01ng/kg~10㎎/kg, 화합물일 경우 0.1ng/kg~10㎎/kg, 상기 단백질에 대한 모노클로날 항체일 경우 0.1ng/kg~10㎎/kg의 용량으로 투여하는 것이 바람직하다.

추가로, 본 발명은 DDX41 유전자, ASCC2 유전자 또는 이들로부터 발현된 단백질 중 하나 이상을 포함하는 암 진단용 키트를 제공한다.

상기 암 진단용 키트는 본 발명의 진단용 조성물 외에도 상기 조성물과 시료 간의 반응을 파악하는데 사용되는 예컨대 DNA 칩, 단백질 칩 등의 적용을 위한 재료를 포함할 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 DDX41 유전자는 서열번호 1의 염기서열 또는 상기 염기서열 중 하나 이상의 염기가 결실, 치환 또는 삽입된 염기서열을 가질 수 있다.

또한 본 발명에 있어서, 상기 ASCC2 유전자는 서열번호 2의 염기서열 또는 상기 염기서열 중 하나 이상의 염기가 결실, 치환 또는 삽입된 염기서열을 가질 수 있다.

본 발명에 있어서, 상기 DDX41 유전자의 siRNA는 서열번호 3의 센스 서열 및 서열번호 4의 안티센스 서열을 가질 수 있다.

또한 본 발명에 있어서, 상기 ASCC2 유전자의 siRNA는 서열번호 5의 센스 서열 및 서열번호 6의 염기서열을 가질 수 있다.

상기한 DDX41 유전자, ASCC2 유전자 이들에 대한 siRNA의 서열은 예시일 뿐 이에 한정되는 것은 아님은 당업자에게 자명하다. 상기 서열들에 대해 실질적인 서열 동일성 또는 실질적인 서열 상동성을 지닌 서열 또한 본 발명의 범주에 포함된다. 여기서 사용된 "실질적인 서열 동일성" 또는 "실질적인 서열 상동성"이라는 용어는 서열이 또 다른 서열과의 실질적인 구조적 또는 기능적 동일성을 나타냄을 표현하는 사용된다. 이러한 차이는 예를 들어 다른 종 간의 코돈 용법의 고유의 변이에 기인한다. 2 이상의 다른 서열 사이의 유의적인 양의 서열 중복 또는 유사성이 있는 경우 이들 서열의 길이 또는 구조가 다르더라도 유사한 물리적 특성을 지니는 경우 구조적 차이는 무시할만한 정도가 된다.

본 발명에서 유전공학적 기술과 관련된 사항은 샘브룩 등의 문헌(Sambrook, et al. Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor laboratory Press, Cold Spring Harbor, N. Y. (2001)) 및 프레드릭 등의 문헌 (Frederick M. Ausubel et al., Current protocols in Molecular Biology volume 1, 2, 3, John Wiley & Sons, Inc. (1994))에 개시되어 있는 내용에 의해 보다 명확하게 된다.

본 발명의 DDX41, ASCC2 유전자는 암 세포에 다량 발현되고 정상세포의 증식 속도를 증가시키므로, 이들 유전자의 발현을 저해시키면 암세포의 성장을 억제시키는 작용 효과를 가져온다. 따라서 DDX41, ASCC2 유전자는 각종 암의 진단 또는 치료제의 표적 유전자로 활용될 수 있다. 따라서, 본 발명은 암 표적 유전자에 특이적인 치료제와 같이 부작용이 적은 바이오 신약 및 맞춤형 항암제의 개발에 크게 활용될 것이다. 또한 새로운 암 관련 기전 경로 연구의 기반을 닦는 원천 기술 개발에 기여할 것이다.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되 는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.

<실시예 1> 인간 DDX41, ASCC2 유전자의 S. pombe 발현 벡터 클로닝

분열효모는 세포 주기 및 신호 전달과 관련된 유전자가 결손되거나 세포 내에 과량 발현되면 신호전달 체계 조절에 이상이 초래되어 세포주기 조절 이상 또는 대사 이상에 의한 세포의 생장 속도 저해 및 형태학적 변화를 나타낸다. 따라서 본 발명에서는 암 관련성이 있을 것으로 예측되는 인간 유전자 DDX41, ASCC2 를 분열효모 내에서 과량 발현시켜 세포의 생장 속도 저해 및 형태학적 변화를 탐지함으로써 이들 유전자의 암 관련성을 추정하고자 하였다.

DDX41, ASCC2 유전자를 분열효모에서 다량으로 쉽게 발현시키기 위해 Gateway^TM 시스템(Invitrogen, USA)을 이용하고, 티아민의 존재 유무에 따라 유전자의 발현을 조절하는 nmt1 프로모터가 있는 유전자 발현 벡터를 사용하였다. 또한, 인간 유전자 각각을 S. pombe 발현벡터 시스템에 맞게 클로닝해야 하는 번거로움을 줄이기 위해 전환 카세트가 삽입된 p173DES 벡터(기탁번호:KCTC 10757BP)를 사용하였다. 인간 유전자 DDX41, ASCC2이 클론된 엔트리 벡터(entry vector)를 p173DES 벡터와 in vitro 상에서 융합 반응시킨 후 인간 유전자들이 발현되는 분열효모 유전자 발현 벡터를 제조하였다 (도 1).

<실시예 2> 인간 DDX41, ASCC2 유전자의 S. pombe 과발현 효과 확인

p173DES 벡터에 클론된 유전자들의 과발현시 나타나는 세포 형질 변화와 표현형의 변화를 관찰하기 위하여 인간 유전자 DDX41, ASCC2가 각각 클로닝된 플라스미드를 S. pombe의 정상 반수체(haploid) 균주인 ED665(h-)에 리튬 아세테이트(lithium acetate) 형질전환 방법으로 형질 전환하였다.

형질전환체들의 선택 배지는 분열 효모 플라스미드인 pDES173의 마커(marker)인 우라실(uracil)과 균주의 영양 요구성을 고려하여 EMM 배지 (Edinburgh Minimal Media)에 아데닌(adenine)과 류신(leucine)을 첨가시켜 준 배지 (이후 EMM+AL로 표기함)를 사용하였다.

암 관련 인간 유전자들을 ED665 균주에서 발현시키기 위해 프로모터의 리프레서(repressor)인 티아민(thiamine, 이하 Thia로도 표기)을 2uM 첨가해준 EMM+AL+Thia와 첨가해주지 않은 EMM+AL을 각각 사용하였다. 티아민을 첨가하지 않으면 유전자는 과량 발현된다. 대조군으로 인간 유전자가 들어있지 않은 pDES173를 함께 발현시켰다. 30℃에서 3일간 배양한 후, EMM+AL 고체 배지와 EMM+AL+Thia 고체 배지에 자란 콜로니를 비교하여 세포 성장의 저해 여부를 관찰하였다. 그 결과, 티아민이 없는 EMM+AL고체 배지에서 배양하면 암 관련 유전자가 도입된 균주들은 도 2 및 3에서 나타낸 바와 같이 DDX41(도 2a), ASCC2(도 3a)를 과량 발현하는 균주의 성장 저해 현상으로 콜로니 형성이 억제된다.

또한 세포 형질 변화를 확인하기 위해 EMM+AL+Thia 고체배지에서 배양한 세포를 멸균한 증류수로 3번 세척해 티아민을 완전히 제거시킨 후, EMM+AL 액체 배지 와 EMM+AL+Thia (2uM) 액체 배지 각각 10ml 에 다시 O.D₆₀₀ 값이 0.3 되도록 접종하였다. 6-8시간 동안 30℃에서 배양 후 다시 각각 동일한 배지에 O.D₆₀₀ 값을 0.1로 되도록 희석하여 16시간 배양하였다. 이렇게 얻어진 세포들을 광학 현미경으로 관찰하여 인간 유전자가 과발현 되었을 때 나타나는 세포 형질 변화를 정상 세포의 형질과 비교 분석하여, 인간 유전자가 S. pombe에 과발현 되었을 때 형태 변화를 관찰하였다. 도 2 및 3에 나타난 바와 같이, DDX41 과발현은 길고 비대해진 형태(도 2b), ASCC2의 과발현은 세포를 둥근형태, 비대 및 비정형 형태 (도 3b)로 S. pombe의 세포 형질을 변화시켰다.

<실시예 3> DDX41 및 ASCC2 유전자의 암 세포주에서의 발현양 변화 확인

유전자의 암 관련성을 추정하는 간단한 방법은 암조직 또는 암세포주에서의 해당 유전자의 발현양의 변화를 비교하는 것이다. 정상 세포에 비해 암세포주에서 다량 발현되어 있는지 또는 감소되어 있는지 비교하여 암 생성 및 진행에 따른 발현량과의 관계를 조사하여야 한다. 이를 위해서는 암세포주에서 실제 해당 유전자의 발현이 어떻게 나타나고 있는지 암 세포주에서 총 RNA를 추출한 후 해당 유전자의 올리고뉴클레오타이드를 사용하여 RT-PCR을 수행하여 각 유전자의 양을 정상 세포주와 비교하여 유전자의 세포 내 발현양을 확인하게 된다.

이에 본 발명에서는 DDX41, ASCC2 유전자의 발현 정도를 인간 위암 세포주, 간암 세포주 및 정상 세포에서 RT-PCR을 실시하여 분석하였다. 위암 세포주로서 SNU620, SNU216, SSNU484, SNU601 및 SNU638(서울대학교 세포주 은행), 간암세포주로서 Huh7, SH-J1, Ck-1a(전남대학교 김대곤 박사에게서 분양), Chang(ATCC #CCL13), SNU790, SNU387 및 SNU354(서울대학교 세포주 은행)를 이용하였다. 정상 세포주로는 IMR90 (human fetal lung fibroblasts, ATCC #CCL-186)을 이용하였다. 본 실험의 RT-PCR은 one-step RT-PCR PreMix kit (iNtRON Biotechnology, INC)을 이용해 실시하였다. 이 키트는 cDNA의 합성 및 증폭이 한번에 이루어질 수 있도록 제작된 것으로, PreMix (OptiScriptTM RT, i-StarTaqTMDNA polymerase) 8㎕에 각 암세포의 RNA 주형 1㎍/reaction, 특이적 프라이머(specific primer), 3차 증류수를 넣어 총 20㎕로 부피를 맞춰 RT-PCR을 수행하였다. 상기 RT-PCR에서 사용한 특이적 프라이머는 다음과 같다.

	N-말단 프라이머	C-말단 프라이머
DDX41	서열번호 7 5'-GGATGTCATCCAGGAGGTAGA-3'	서열번호 8 5'-GCTGACCTGCTTGGTCTGCA-3'
ASCC2	서열번호 9 5'-CTGGAGTACTACCACTACGAC-3'	서열번호 10 5'-CACTGCTGTTGAGCTGTCATG-3'

RT-PCR을 수행한 결과, DDX41은 세포주에 따라 다르게 나타났으나, ASCC2은 정상 세포주와 비교하여 대부분의 인간 위암 및 간암 세포주에서 그 mRNA 정도가 확실히 증가됨을 확인할 수 있었다 (도 4).

<실시예 4> 암세포주로의 DDX41, ASCC2의 siRNA 도입에 따른 mRNA 발현 저하 확인 1

암세포 조직 또는 암세포주에서 다량 발현되는 유전자의 경우 siRNA 기법을 통해 유전자 발현을 억제하여 세포의 증식 속도에 변화가 있는지를 관찰할 수 있다. 이에 본 발명에서는 DDX41, ASCC2에 대한 각각의 siRNA를 디자인하여 위암 세포주 SNU638에 도입한 후 해당유전자 mRNA 발현 저하에 따른 암세포주의 성장 속도의 변화를 관찰하였다.

먼저 DDX41, ASCC2 및 GFP의 siRNA를 디자인하여 합성하였다 (삼천리 제약). 합성된 siRNA는 유전자 염기서열을 바탕으로 디자인된 19개 올리고뉴클레오타이드의 이중 리보핵산쇄에 단쇄의 2 염기가 매달린 구조로 이루어져 있다. GFP(Green Flourescence Protein)는 세포의 증식에 아무 영향을 미치지 않는 siRNA 실험의 음성 대조군으로 사용되었다.

위암 세포주 SNU638 세포주를 30% 컨플루언시로 배양 후 올리고펙타민 방법(Invitrogen Co.)으로 siDDX41(서열번호 3+4), siASCC2(서열번호 5+6), siGFP(서열번호 11+12)를 세포 내에 도입하여 형질 전환하였다. 5시간 후 PBS로 세포를 세척하고 새로운 배지로 교체하였고 72시간 동안 배양하였다. 각 세포에서 RNA를 추출하여 RT-PCR을 수행하여 해당 유전자 mRNA가 감소되었음을 확인하고 siRNA에 의한 유전자 발현 억제가 이루어졌음을 확인하였다 (도 5). 도 5에서 NT는 siRNA를 처리하지 않은 세포에서의 유전자 발현양을 나타내고, +는 siRNA 도입이 이루어졌는지 확인하는 +대조군인 MAPK 유전자의 발현양을 보여준다. 각 세포를 SRB (Sulfur rhodamine, Sigma Co.)로 염색하고 현미경을 통해 세포 성장에 큰 변화가 없는 콘트롤인 GFP siRNA를 처리한 세포주를 기준으로, SRB 분석하여 해당 유전자 siRNA를 도입한 세포의 성장 억제 정도를 비교하였다(도 6). SNU638 위암 세포주에 는 DDX41의 유전자 발현 억제가 세포 성장 억제를 강하게 유도하였고 ASCC2도 세포성장 억제효과를 나타내었다. 또한, SRB 염색한 세포의 사진을 관찰함으로써 세포의 성장 억제 정도 및 형태 변화를 알 수 있었다(도 7). 위 실험 결과, 4종 유전자 모두 siRNA 처리를 통해 SNU638 위암 세포주의 성장 억제를 유발할 수 있으므로 위암의 치료 타겟으로 활용 가능함을 제시하였다.

<실시예 5> 암세포주로의 DDX41, ASCC2의 siRNA 도입에 따른 mRNA 발현 저하 확인 2

DDX41, ASCC2의 siRNA를 처리한 폐암 세포주 A549, 간암세포주 Huh7, Snu387, 전립선암 세포주 PC3에서 세포의 성장 억제 정도를 조사하였다. 페암 세포주 A549, 간암세포주 Huh7, SNU387, 전립선암 세포주 PC3를 30% 컨플루언시로 배양 후 올리고펙타민 방법 (Invitrogen Co.)으로 siDDX41(서열번호 3+4), siASCC2(서열번호 5+6), siGFP(서열번호 11+12)를 각 세포 내에 도입하여 형질전환하였다. 5시간 후 PBS로 세포를 세척하고 새로운 배지로 교체 후 72시간 동안 배양하였다. SRB (Sulfur rhodamine, Sigma Co.)로 염색하여 세포의 성장 저해 정도를 대조군(siGFP)와 비교하고 유전자 발현 억제에 의한 세포성장 억제 정도를 비교하였다 (도 8). 그 결과, 이들 유전자의 siRNA 처리에 의해 2종의 세포주 모두에서 세포 성장 억제가 나타났으며, 유전자에 따라 세포주 민감도가 다르게 나타났다. 간암 세포주 Huh-7와 SNU387세포주에는 2종의 유전자의 siRNA가 세포 성장 억제 효과를 나타내었고 Huh-7에는 DDX41 유전자의 siRNA가, PC-3 세포주에는 ASCC2의 siRNA 처 리가 암세포주의 성장 억제를 유도하였다.

도 1은 인간 유전자가 삽입되어 있는 플라스미드(Entry clone)로부터 인간 유전자를 S. pombe 목적 벡터(destination vector)에 클로닝하는 모식도이다.

도 2는 인간 유전자 DDX41가 S. pombe에서 과발현 되었을 때 나타나는 표현형의 변화를 보여주는 것으로, a는 세포성장억제, b는 세포의 형태학적 변화를 나타낸다.

도 3은 인간 유전자 ASCC2가 S. pombe에서 과발현 되었을 때 나타나는 표현형의 변화를 보여주는 것으로, a는 세포성장억제, b는 세포의 형태학적 변화를 나타낸다.

도 4는 인간 위암 세포주, 간암 세포주 및 정상 세포에서 DDX41 및 ASCC2유전자의 발현양의 변화를 RT-PCR을 통해 분석한 결과를 나타낸다. GAPDH는 대조 유전자이다.

도 5는 SNU638 위암 세포주에서 DDX41, ASCC2 유전자에 각 유전자의 siRNA를 처리시 mRNA의 양이 감소함을 RT-PCR로 확인한 사진이다.

도 6은 SNU638 위암 세포주에서 DDX41, ASCC2 유전자에 각 유전자의 siRNA를 처리시 세포의 성장 저해 정도를 SRB 염색으로 조사한 그래프이다.

도 7은 SNU638 위암 세포주에서 DDX41, ASCC2 유전자에 각 유전자의 siRNA를 처리시 세포의 변화를 찍은 사진이다.

도 8은 DDX41, ASCC2 유전자의 암 타겟 유전자의 가능성을 확인하기 위한 siRNA 실험 결과로서 위암, 폐암, 전립선암 및 간암 세포주에서의 세포 성장 저해 를 나타내는 그래프 사진이다.

<110> Korea Research Institute of Bioscience and Biotechnology <120> Novel use of DDX41 and ASCC2 genes <130> P07-025-KRI <160> 12 <170> KopatentIn 1.71 <210> 1 <211> 1869 <212> DNA <213> Homo sapiens <400> 1 atggaggagt cggaacccga acggaagcgg gctcgcaccg acgaggtgcc tgccggagga 60 agccgctccg aggcggaaga tgaggacgac gaggactacg tgccctatgt gccgttacgg 120 cagcgccggc agctactgct ccagaagctg ctgcagcgaa gacgcaaggg agctgcggag 180 gaagagcagc aggacagcgg tagtgaaccc cggggagatg aggacgacat cccgctaggc 240 cctcagtcca acgtcagcct cctggatcag caccagcacc ttaaagagaa ggctgaagcg 300 cgcaaagagt ctgccaagga gaagcagctg aaggaagaag agaagatcct ggagagtgtt 360 gccgagggcc gagcattgat gtcagtgaag gagatggcta agggcattac gtatgatgac 420 cccatcaaaa ccagctggac tccaccccgt tatgttctga gcatgtctga agagcgacat 480 gagcgcgtgc ggaagaaata ccacatcctg gtggagggag acggtatccc accacccatc 540 aagagcttca aggaaatgaa gtttcctgca gccatcctga gaggcctgaa gaagaaaggc 600 attcaccacc caacacccat tcagatccag ggcatcccca ccattctatc tggccgtgac 660 atgataggca tcgctttcac 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Artificial Sequence <220> <223> N-terminal primer for RT-PCR of ASCC2 <400> 9 ctggagtact accactacga c 21 <210> 10 <211> 21 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> C-terminal primer for RT-PCR of ASCC2 <400> 10 cactgctgtt gagctgtcat g 21 <210> 11 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> sense strand of siRNA for GFP <400> 11 guucagcgug uccggcgagu u 21 <210> 12 <211> 21 <212> RNA <213> Artificial Sequence <220> <223> antisense strand of siRNA for GFP <400> 12 cucgccggac acgcugaacu u 21

Claims (23)

1. DDX41 유전자를 포함하는 암 진단용 조성물.
2. DDX41 유전자로부터 발현된 단백질에 대한 항체를 포함하는 암 진단용 조성물.
3. DDX41 유전자를 포함하는 항암제 스크리닝용 조성물.
4. DDX41 유전자로부터 발현된 단백질을 포함하는 항암제 스크리닝용 조성물.
5. DDX41 유전자에 대한 억제제 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 암 치료용 조성물.
6. 제5항에 있어서, 상기 DDX41 유전자에 대한 억제제가 DDX41 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드인 암 치료용 조성물.
7. 제5항에 있어서, 상기 DDX41 유전자에 대한 억제제가 DDX41 유전자의 siRNA인 암 치료용 조성물.
8. 제7항에 있어서, 상기 siRNA가 서열번호 3의 센스 서열 및 서열번호 4의 안티센스 서열을 갖는 siRNA인 암 치료용 조성물.
9. DDX41 유전자로부터 발현된 단백질에 대한 억제제 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 암 치료용 조성물.
10. 제9항에 있어서, 상기 DDX41 유전자로부터 발현된 단백질에 대한 억제제가 상기 단백질에 대한 항체인 암 치료용 조성물.
11. 제1항 내지 제10항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DDX41 유전자는 서열번호 1의 염기서열을 갖는 암 치료용 조성물.
12. ASCC2 유전자를 포함하는 암 진단용 조성물.
13. ASCC2 유전자로부터 발현된 단백질에 대한 항체를 포함하는 암 진단용 조성물.
14. ASCC2 유전자를 포함하는 항암제 스크리닝용 조성물.
15. ASCC2 유전자로부터 발현된 단백질을 포함하는 항암제 스크리닝용 조성물.
16. ASCC2 유전자에 대한 억제제 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 암 치료용 조성물.
17. 제16항에 있어서, 상기 ASCC2 유전자에 대한 억제제가 ASCC2 유전자의 mRNA에 대한 안티센스 올리고뉴클레오타이드인 암 치료용 조성물.
18. 제16항에 있어서, 상기 ASCC2 유전자에 대한 억제제가 ASCC2 유전자의 siRNA인 암 치료용 조성물.
19. 제18항에 있어서, 상기 siRNA가 서열번호 5의 센스 서열 및 서열번호 6의 안티센스 서열을 갖는 siRNA인 암 치료용 조성물.
20. ASCC2 유전자로부터 발현된 단백질에 대한 억제제 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 암 치료용 조성물.
21. 제20항에 있어서, 상기 ASCC2 유전자로부터 발현된 단백질에 대한 억제제가 상기 단백질에 대한 항체인 암 치료용 조성물.
22. 제12항 내지 제21항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 ASCC2 유전자는 서열번호 2의 염기서열을 갖는 암 치료용 조성물.
23. DDX41 유전자, ASCC2 유전자 또는 이들로부터 발현된 단백질 중 하나 이상을 포함하는 암 진단용 키트.

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