KR20080102939A

KR20080102939A - 실리빈 또는 이소실리빈을 유효성분으로 함유하는 피부미백용 조성물

Info

Publication number: KR20080102939A
Application number: KR1020070114222A
Authority: KR
Inventors: 유익동; 추수진; 류인자; 김영희; 배기환
Original assignee: 한국생명공학연구원
Priority date: 2007-11-09
Filing date: 2007-11-09
Publication date: 2008-11-26

Abstract

본 발명은 실리마린을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 엉겅퀴로부터 분리된 실리마린은 티로시나아제의 발현을 억제하여 멜라민의 생성을 조절할 수 있는 저해제 및 이의 용도를 제공한다.

본 발명에 따른 실리마린은 티로시나아제에 대해서 직접적인 억제효과를 나타내지는 않지만, 멜라닌 색소세포 내에서 티로시나아제의 단백질 발현을 억제함으로써 미백효과를 나타낼 수 있어서, 실리마린을 유효성분으로 함유하는 조성물은 피부 미백 화장품 소재로 유용하게 사용할 수 있다.

엉겅퀴, 실리마린, 미백, 실리빈, 이소실리빈

Description

실리빈 또는 이소실리빈을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물{Skin whitening composition containing silybin or isosilybin as active ingredient}

본 발명은 실리마린을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물에 관한 것이다.

멜라닌은 피부내 기저층에 존재하는 색소세포인 멜라노사이트에서 합성되는 검은 색소로서 외부 환경에 대해 피부세포를 보호해주는 역할을 하는 단백질 복합체이다. 그러나 자외선 노출 및 피부 노화로 인한 멜라닌의 과잉생성은 인체에 기미, 주근깨 등을 형성하고 심하게는 피부암을 유발하는 것을 알려져 있다. 이에, 강력한 멜라닌 생합성 저해활성 물질의 개발에 많은 연구가 이루어지고 있다.

멜라닌 합성에 가장 중요한 역할을 하는 효소는 티로시나아제(tyrosinase)라는 효소인데, 이 효소의 작용에 의해 멜라닌 생합성의 속도가 조절된다. 즉, 티로시나아제는 티로신(tyrosine)으로부터 도파(dopa)가 합성되는 단계와 도파로부터 도파퀴논(dopa-quinone)이 합성되는 단계를 촉진하여 멜라닌의 합성을 촉진하게 된 다. 기존에 피부 미백제로 사용되어 오던 코지산, 알부틴, 아스코르브산, 상백피 추출물, 감초 추출물 등이 이같이 티로시나아제의 작용을 직접 저해하여 미백 효과를 나타내는 것으로 알려져 있다.

하지만, 티로시나아제 저해제는 실제 멜라노사이트 세포 내로 침투가 용이하지 않거나, 침투하더라도 실제 멜라노사이트에서 멜라닌의 합성을 저해하는 효과가 극히 미약하여 미백제로 사용이 불가능한 경우가 많다.

한편 최근에는 각질세포에서 분비되는 여러 사이토카인(cytokine), 성장호르몬 등이 멜라노사이트에 존재하는 수용체에 결합하면서 전달되는 세포 신호들에 의해 멜라닌의 합성이 촉진된다는 보고가 이루어지고 있다(Hirobe T., Pigment Cell Res. 2004, 18:2-12). 즉 각질세포에서 분비되는 α-멜라노사이트 자극 호르몬(α-melanocyte stimulating hormone; α-MSH)이 멜라노사이트 세포막에 존재하는 멜라노코르틴 리셉터 1(melanocortin receptor-1; MC1R)이라는 수용체에 결합함으로써 멜라노사이트 내에서 티로시나아제의 발현에 관여하는 신호 전달 반응을 조절하여 멜라닌의 합성을 촉진시킨다. 이 외에도 각질세포에서는 엔도세린(endothelin; ET), 섬유아세포 성장 인자(basic fibroblast growth factor; bFGF) 등이 분비되어 멜라노사이트 내에서 각기 다른 세포 신호 전달 단계를 거쳐 멜라닌의 합성에 관여하게 된다.

상기와 같은 이론을 바탕으로, 멜라노사이트 내에서 세포 신호 전달 반응을 조절하여 멜라닌의 합성을 억제하는 효과를 나타내는 미백제 개발을 위한 연구가 활발히 진행되고 있다.

실리마린(silymarin)은 국화과에 속하는 엉겅퀴(Silybum marianum)의 열매에서 추출한 플라보리그난(flavolignan) 계열의 화합물로써, 예로부터 간질환에 다양하게 사용해 오던 전통의약물이다. 엉겅퀴의 열매 추출물에서 추출할 수 있는 실리마린(silymarin)은 실리빈(silybin)을 비롯하여, 이소실리빈(isosilybin), 실리크리스틴(silychristin), 실리디아닌(silydianin) 등 다양한 플라보리그난 화합물이 존재하며 이들을 총칭하여 실리마린(silymarin)이라 칭한다.

실리마린은 간질환 치료의 보조요법제로 이용되고 있는데, 간세포막을 안정화시키고, 말론디알데히드(malondialdehyde)의 생성을 저해하며 유해물질의 차단을 억제하여 간의 기능을 회복시키는 효과를 나타낸다(Wellington K. and Jarwis B., BioDrugs 2001, 15:465-489). 또한 자유 라디칼이나 활성 산소를 제거하여 강력한 항산화 효과를 나타내는데 이러한 항산화 방어 기작은 잘 알려진 항산화제인 비타민 E보다 10배 이상 강력하다(Gazak R. et al., Bioorg. Med. Chem. 2004, 12:5667-5687). 이 외에도 실리빈은 상피세포암에 대해 항암효과를 나타낸다(Bhatia N. et al., Cancer Lett. 1999, 147:77-84).

한편, 실리마린은 피부암을 예방하고(Zhao J. Carcinogenesis 2000, 21:811-816), 쥐의 피부를 이용한 실험에서 중장파 자외선(ultraviolet-B, UVB)에 의한 DNA의 손상을 회복시키고(Tornaletti S., Bioessays 1996, 18:221-228), 피부 염증에도 관여하는 등(Zi X. et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 1997, 239:334-449) 피부세포를 보호하는 효과를 나타낸다.

최근 일본의 한 연구에 따르면, 실리마린은 각질세포의 분화와 노화를 억제하고 세포외 매트릭스 단백질(extracellular matrix protein, ECM protein)을 축적시켜 피부의 노화를 방지한다고 알려져 있다. 또한 실리마린을 처방한 사람의 피부에서 주름이 억제되는 효과가 밝혀졌다. 그러나 실리마린이 미백활성이 있다는 보고는 아직 없다.

종래에 엉겅퀴의 종실로부터 실리마린을 간편하고도 순수하게 제조하는 특허(대한민국 등록특허 제32699호 및 제19763호)가 있으며, 그 밖에도 간 질환 관련 특허로서는 특허(10-0198490, 1999), (10-0142656, 1998), (10-0113198, 1999), (10-0116295, 1997) 등이 등록되었다. 한편, 대한민국 공개특허 제2003-0022500호에는 피부미백용 건강식품조성물로 특허가 출원되었으나 본 특허는 대두이소플라본, 플라센타 추출물, 암라 추출물, 밀크씨슬 추출물 4종류를 종합하여 함유하는 기능성식품으로서의 기미, 노인성반점 등 색소 침착증 개선제 효과로 한정하였을 뿐, 실리마린 단독투여에 의한 미백효과에 대하여는 청구되어 있지 않다. 또한 밀크씨슬의 종실로부터 실리크리스틴아이소머를 비롯하여 실리빈, 이소실리빈 등의 플라보리그난 화합물을 분리 보고하였을 뿐 미백활성에 대하여는 보고된 적이 없다(Wendy A. Smith, Planta Medica 71:877-880, 2005).

이에 본 발명자들은 실리마린이 강력한 항산화 효과와 함께 멜라노사이트에서 세포 수준의 티로시나아제 발현을 저해하고 멜라닌 합성을 억제하여 미백효과를 나타냄을 확인함으로써 본 발명을 완성하였다.

본 발명의 목적은 실리마린을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물을 제공하는 데 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 실리마린을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.

본 발명은 실리마린을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.

상기 실리마린은 상업적으로 판매되는 것이나, 모든 식물에서 분리하여 사용할 수 있으며, 상기 실리마린이 분리되는 식물은 엉겅퀴가 바람직하다.

멜라닌은 피부내 기저층에 존재하는 색소세포인 멜라노사이트에서 합성되는 검은 색소로서 외부 환경에 대해 피부세포를 보호해주는 역할을 하는 단백질 복합체이다. 그러나 자외선 노출 및 피부 노화로 인한 멜라닌의 과잉생성은 인체에 기미, 주근깨 등을 형성하고 심하게는 피부암을 유발하는 것을 알려져 있다. 이에, 상기 실리마린은 멜라닌을 생성하는 티로시나아제의 발현을 억제하여 멜라닌의 생성을 줄일 수 있어서, 멜라닌 생성에 따른 기미, 주근깨, 피부암과 같은 질환의 예방과 피부 미백제로서 유용하게 사용될 수 있다(Seo-Hyoung Park et al., A New melanogenesis inhibitor and its mechanism, Cellular and Molecular Life Sciences. 61 : 2878-2885, 2004).

버섯에서 분리된 티로시나아제 및 Mel-Ab 멜라닌 색소세포내 티로시나아제에 대한 저해활성을 알아보기 위하여 실리마린 및 표준 미백제인 코지산을 처리한 경우, 코지산은 버섯의 티로시나아제의 활성을 농도의존적으로 저해하는 반면, 실리마린은 티로시나아제를 직접적으로 저해하지는 않았다(도 4 참조). 또한, Mel-Ab 멜라닌 색소세포에 처리한 코지산은 티로시나아제의 발현을 저해하는 것이 나타나지 않은 반면, 본 발명에 따른 실리마린은 농도의존적으로 티로시나아제의 발현을 억제함을 알 수 있다(도 5 참조). 더욱이, 상기 실리마린을 처리한 Mel-Ab 멜라닌 색소세포내 티로시나아제의 단백질 양을 분석한 결과, 실리마린 처리농도 의존적으로 티로시나아제의 발현양이 줄어드는 것을 확인할 수 있었다(도 6 참조). 이로 보아, 실리마린은 동물세포내에 존재하는 티로시나아제의 발현양을 줄일 수 있음을 알 수 있다.

상기 결과들로 보아, 본 발명에 따른 실리마린은 티로시나아제 발현을 저해하여 멜라닌 합성을 억제할 수 있으며, 이로 인하여 피부 기저층에 침착되는 멜라닌의 양이 줄어들어 피부 미백 효과를 나타낼 수 있다.

본 발명의 실리마린을 유효성분으로 하는 피부 미백용 조성물은 화장료, 비누, 피부 외용연고의 형태로 제형화될 수 있다. 화장료 조성물로 제조되는 화장품은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 본 발명의 실리마린을 함유하는 화장품 이외에도 피부 과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

적합한 화장품의 제형으로는 예를 들면, 용액, 겔, 고체 또는 반죽 무수 생성물, 수상에 유상을 분산시켜 얻은 에멀젼, 현탁액, 마이크로에멀젼, 마이크로캡슐, 미세과립구 또는 이온형(리포좀), 비이온형의 소낭 분산제의 형태, 크림, 스킨, 로션, 파우더, 연고, 스프레이 또는 콘실 스틱(conceal stick)의 형태로 제공될 수 있다. 또한, 포말(foam)의 형태 또는 압축된 추진제를 더 함유한 에어로졸 조성물의 형태로도 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 실리마린에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전 제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파우더, 아이섀도 등의 제형을 포함한다.

또한, 본 발명은 하기 화학식 1로 표시되는 실리빈을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.

상기 화학식 1로 표시되는 실리빈은 상업적으로 판매되는 것이나, 모든 식물 에서 분리하여 사용할 수 있으며, 상기 실리빈이 분리되는 식물은 엉겅퀴가 바람직하다.

멜라닌은 피부내 기저층에 존재하는 색소세포인 멜라노사이트에서 합성되는 검은 색소로서 외부 환경에 대해 피부세포를 보호해주는 역할을 하는 단백질 복합체이다. 그러나 자외선 노출 및 피부 노화로 인한 멜라닌의 과잉생성은 인체에 기미, 주근깨 등을 형성하고 심하게는 피부암을 유발하는 것을 알려져 있다. 이에, 상기 실리빈은 멜라닌을 생성하는 티로시나아제의 발현을 억제하여 멜라닌의 생성을 줄일 수 있어서, 멜라닌 생성에 따른 기미, 주근깨, 피부암과 같은 질환의 예방과 피부 미백제로서 유용하게 사용될 수 있다(Seo-Hyoung Park et al., A New melanogenesis inhibitor and its mechanism, Cellular and Molecular Life Sciences. 61 : 2878-2885, 2004).

Mel-Ab 멜라닌 세포에 표준 미백원료인 코지산(kojic acid) 및 실리빈을 여러 농도로 처리한 후, 멜라닌 생성양은 비교하였다. 코지산의 경우, 처리 농도가 증가하여도 멜라닌 합성을 약하게 억제함이 나타난 반면에 실리빈은 농도의존적으로 멜라닌 합성을 억제함을 알 수 있었다(도 7 참조).

상기 결과들로 보아, 본 발명에 따른 실리빈은 티로시나아제 발현을 저해하여 멜라닌 합성을 억제할 수 있으며, 이로 인하여 피부 기저층에 침착되는 멜라닌의 양이 줄어들어 피부 미백 효과를 나타낼 수 있다.

본 발명의 실리빈을 유효성분으로 하는 피부 미백용 조성물은 화장료, 비누, 피부 외용연고의 형태로 제형화될 수 있다. 화장료 조성물로 제조되는 화장품은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 본 발명의 실리빈을 함유하는 화장품 이외에도 피부 과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 실리빈에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

또한, 본 발명은 하기 화학식 2로 표시되는 이소실리빈을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물을 제공한다.

상기 화학식 2로 표시되는 이소실리빈은 상업적으로 판매되는 것이나, 모든 식물에서 분리하여 사용할 수 있으며, 상기 실리빈이 분리되는 식물은 엉겅퀴가 바람직하다.

멜라닌은 피부내 기저층에 존재하는 색소세포인 멜라노사이트에서 합성되는 검은 색소로서 외부 환경에 대해 피부세포를 보호해주는 역할을 하는 단백질 복합 체이다. 그러나 자외선 노출 및 피부 노화로 인한 멜라닌의 과잉생성은 인체에 기미, 주근깨 등을 형성하고 심하게는 피부암을 유발하는 것을 알려져 있다. 이에, 상기 이소실리빈은 멜라닌을 생성하는 티로시나아제의 발현을 억제하여 멜라닌의 생성을 줄일 수 있어서, 멜라닌 생성에 따른 기미, 주근깨, 피부암과 같은 질환의 예방과 피부 미백제로서 유용하게 사용될 수 있다(Seo-Hyoung Park et al., A New melanogenesis inhibitor and its mechanism, Cellular and Molecular Life Sciences. 61 : 2878-2885, 2004).

Mel-Ab 멜라닌 세포에 표준 미백원료인 코지산(kojic acid) 및 이소실리빈을 여러 농도로 처리한 후, 멜라닌 생성양은 비교하였다. 코지산의 경우, 처리 농도가 증가하여도 멜라닌 합성을 약하게 억제함이 나타난 반면에 이소실리빈은 농도의존적으로 멜라닌 합성을 억제함을 알 수 있었다(도 8 참조).

상기 결과들로 보아, 본 발명에 따른 이소실리빈은 티로시나아제 발현을 저해하여 멜라닌 합성을 억제할 수 있으며, 이로 인하여 피부 기저층에 침착되는 멜라닌의 양이 줄어들어 피부 미백 효과를 나타낼 수 있다.

본 발명의 이소실리빈을 유효성분으로 하는 피부 미백용 조성물은 화장료, 비누, 피부 외용연고의 형태로 제형화될 수 있다. 화장료 조성물로 제조되는 화장품은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 유화 제형의 화장품으로는 영양화장수, 크림, 에센스 등이 있으며, 가용화 제형의 화장품으로는 유연화장수가 있다. 또한, 본 발명의 이소실리빈을 함유하는 화장품 이외에도 피부 과학적으로 허용 가능한 매질 또는 기제를 함유함으로써 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 국소적용 또는 전신 적용할 수 있는 보조제 형태로 제조될 수 있다.

또한, 본 발명의 화장료 조성물은 이소실리빈에 추가로 지방 물질, 유기 용매, 용해제, 농축제 및 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온 봉쇄제 및 킬레이트화제, 보존제, 비타민, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 지질 소낭 또는 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 함유할 수 있다. 그리고, 상기의 성분들은 피부 과학 분야에서 일반적으로 사용되는 양으로 도입될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물의 구체적인 제형으로서는 스킨로션, 스킨 소프너, 스킨토너, 아스트린젠트, 로션, 밀크로션, 모이스처 로션, 영양로션, 맛사지크림, 영양크림, 모이스처 크림, 핸드크림, 에센스, 영양에센스, 팩, 비누, 샴푸, 클렌징폼, 클렌징로션, 클렌징크림, 바디로션, 바디클렌저, 유액, 프레스파우더, 루스파 우더, 아이섀도 등의 제형을 포함한다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예 및 실험예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

< 실시예 1> 실리마린의 제조

실리마린은 시중에서 구입(시그마-알드리치)하거나, 국화과의 엉겅퀴(Silybum marianum)의 추출물로부터 분리한 것을 사용하였다.

< 실험예 1> 실리마린에 대한 세포독성 실험

실리마린에 대한 세포독성을 측정하기 위하여, Mel-Ab 멜라닌 색소 세포를 이용하여 하기와 같은 실험을 진행하였다.

Mel-Ab 멜라닌 색소 세포는 5%의 CO₂, 37 ℃ 하에서 10%의 태아 소혈청 (FBS), 100 nM PMA(phorbol 12-myristate 13-acetate), 1 nM의 콜레라 독소(cholera toxin), 50 ㎍/㎖의 스트렙토마이신 및 50 U/㎖의 페니실린을 첨가한 DMEM 배지에서 배양하였다.

상기와 같이 배양된 Mel-Ab 멜라닌 색소 세포에 실리마린을 0, 1, 5, 10, 20 및 50 ㎍/㎖의 농도별로 72 시간 동안 처리하여 배양하였다. 그 다음 배양배지를 제거하고 1 ㎖의 0.1% 크리스탈 바이올렛(crystal violet)을 사용하여 염색하고 Mel-Ab 멜라닌 색소세포에 미치는 영향을 측정하였다. 염색되지 않은 크리스탈 바이올렛은 수 회 증류수로 세척하여 제거하고, 세포에 잔존하는 크리스탈 바이올렛을 95% 에탄올 2 ㎖을 사용하여 추출하였다. 추출된 크리스탈 바이올렛의 흡광도는 엘라이자(ELISA) 리더를 사용하여 590 ㎚에서 측정하여 세포의 생존력 정도를 측정하고, 그 결과를 도 1에 나타내었다.

도 1에서 보는 바와 같이, 본 발명 실리마린은 50 μM의 농도까지 Mel-Ab 멜라닌 색소 세포에 독성을 보이지 않아 인체에 안전하게 사용할 수 있음을 확인할 수 있었다.

< 실험예 2> 실리마린 , 실리빈 및 이소실리빈의 멜라닌 합성 억제 실험

상기 실험예 1에서 배양된 Mel-Ab 멜라닌 세포에 표준미백원료인 코지산은 각각 0, 1, 5, 10, 20 및 50 μM로 처리하였고, 실리마린은 각각 0, 1, 5, 10, 20 및 50 ㎍/㎖의 농도별로 72 시간 동안 처리한 후, 멜라닌 생성량을 측정하였다. 즉 배지를 제거한 후 1 ㎖의 NaOH를 이용하여 생성된 멜라닌을 추출하여 400 ㎚에서 흡광도를 측정하여 멜라닌 생성량을 비교하고 그 결과를 도 2 및 3에 나타내었다.

도 2 및 3에 보는 바와 같이, 코지산은 농도의 증가에 따라 멜라닌 합성을 약하게 억제함을 나타난 반면에, 본 발명에 따른 실리마린은 농도의존적으로 멜라닌 합성을 억제함을 알 수 있었다. 이러한 실리마린이 우수한 미백활성을 나타내는 것은 실리마린의 주성분인 실리빈, 실리크리스틴, 이소실리빈, 디하이드로실리빈 등의 성분에 기인함을 알 수 있다.

이후, 동일한 방법으로 실리빈을 0, 1, 5, 10, 20 및 50 μM의 농도별로 72 시간 동안 처리한 후, 멜라닌 생성량을 측정하여 그 결과를 각각 도 7에 나타내었다. 또한, 이소실리빈을 0, 1, 2, 5, 10, 20 μM의 농도별로 72 시간 동안 처리한 후, 멜라닌 생성량을 측정하여 그 결과를 도 8에 나타내었다.

도 3, 도 7 및 도 8에 나타낸 바와 같이, 코지산의 경우에는 처리 농도가 증가하여도 멜라닌 합성을 약하게 억제함이 나타난 반면에 실리빈 및 이소실리빈은 농도의존적으로 멜라닌 합성을 억제함을 알 수 있었다.

상기 결과들로 보아, 본 발명에 따른 실리빈 및 이소실리빈은 티로시나아제 발현을 저해하여 멜라닌 합성을 억제할 수 있으며, 이로 인하여 피부 기저층에 침착되는 멜라닌의 양이 줄어들어 피부 미백 효과를 나타낼 수 있다.

< 실험예 3> 실리마린의 티로시나아제 활성

본 발명 실리마린의 버섯 티로시나아제 활성을 평가하기 위하여, 하기와 같은 실험을 진해하였다.

2000 U/ 버섯 티로시나아제 및 20 mM의 도파를 혼합하고, 이를 37 ℃에서 반응시켜 생성된 도파크롬을 475 ㎚에서 엘라이자(ELISA) 리더를 이용하여 측정하였다.

또한, Mel-Ab 멜라닌 세포에 실리마린과 표준 미백원료인 코지산을 농도별로 처리하여 72시간 배양한 후, Triton X-100이 포함된 세포용해 완충액을 이용하여 단백질을 추출한 후 37 ℃에서 20 mM 농도의 도파를 첨가하고, 이를 1시간 이상 반응시킨 후, 475 ㎚에서 흡광도를 측정하여 티로시나아제 활성을 평가하였다. 그 결과를 도 4 및 5에 나타내었다.

도 4에 나타낸 바와 같이, 코지산은 버섯의 티로시나아제의 활성을 농도의존적으로 저해하는 반면, 실리마린은 티로시나아제를 직접적으로 저해하지는 않았다.

그러나, 도 5에 나타난 바와 같이, 멜라노사이트에 처리한 코지산은 티로시나아제의 발현을 저해하지 않은 반면에, 본 발명에 따른 실리마린은 농도의존적으로 티로시나아제의 발현을 억제함을 알 수 있었다.

< 실험예 4> 실리마린의 티로시나아제 단백질 발현 저해 실험

실리마린의 티로시나아제 단백질 발현 저해를 평가하기 위하여, Mel-Ab 멜라닌 색소 세포의 티로시나아제 단백질 발현을 정도를 분석하기 위하여 하기와 같은 실험을 진행하였다.

Mel-Ab 멜라닌 색소세포에 실리마린을 0, 1, 2, 5, 10 및 20 ㎍/㎖의 농도로 72시간 동안 처리하고, 단백질을 추출하여 웨스턴 블럿을 실시하였다. 즉 세포를 단백질 용해 완충용액으로 용해시킨 후, 15000 rpm에서 10분간 원심분리하였다. 상등액을 이용하여 Bradford-Lowry법으로 단백질량을 계산한 후, 각 시료마다 동일한 단백질이 함유되도록 단백질 샘플을 제조한다. 이들 단백질을 웨스턴 블럿을 실시하여 티로시나아제 단백질의 발현을 ECL 방법으로 측정하고, 그 결과를 도 6에 나타내었다.

도 6에 나타낸 바와 같이, Mel-Ab 멜라닌 세포에 실리마린을 처리한 경우, 농도 의존적으로 티로시나아제 단백질의 발현이 저해됨을 관찰할 수 있었다. 이러한 결과는 도 2에서 실리마린이 세포 수준에서 멜라닌 함량을 낮추는 것과 큰 연관성을 갖는다. 상기 실리마린은 Mel-Ab 멜라닌 색소세포에서 멜라닌 생합성의 가장 중요한 효소인 티로시나아제의 합성을 억제하여 세포수준에서 효소 활성을 저해하여, 멜라닌 생성을 억제하는 것임을 알 수 있다.

하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.

< 제제예 1> 화장품의 제조

1-1. 유연 화장수의 제조

정제수에 부틸렌 글리콜, 글리세린, 폴리옥시에틸렌(60) 경화피마자유, 베타인, 구연산, 구연산나트륨 및 방부제를 첨가하여 교반한 후 용해시킨 다음, 에탄올에 향료를 넣어 용해시킨 혼합물을 첨가하였다. 여기에 본 발명에 따른 실리마린을 가하여 충분히 교반한 후, 숙성시켜 실리마린 함유 유연 화장수를 제조하였다. 하기 표 1에 각 성분의 함량을 나타내었다.

원료	함량(w/w %)
본 발명에 따른 실리마린	50.0
부틸렌 글리콜	7.0
글리세린	5.0
폴리옥시에틸렌(60) 경화 피마자유	0.2
에탄올	5.0
베타인	2.0
구연산	0.02
구연산 나트륨	0.06
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

1-2. 영양화장수의 제조

본 발명에 따른 실리마린, 부틸렌 글리콜, 글리세린, 카르복시비닐폴리머, 아르기닌, 방부제 및 정제수를 70 내지 75 ℃에서 교반하면서 가열하였다. 여기에 75 내지 80 ℃에서 교반하여 가열시킨 스쿠알란, 부틸렌글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트, 소르비탄스테아레이트, 포리소르베이트 60, 글리세릴스테아레이트 및 스테아릴글리세레티네이트 혼합물을 가하여 유화시킨 후, 교반하면서 45 ℃정도로 냉각하면서 향료를 첨가하여 교반한 다음, 30 ℃까지 냉각한 후 숙성시켜 실리마린 함유 영양화장수를 제조하였다. 하기 표 2에 각 성분의 함량을 나타내었다.

원료	함량(w/w%)
본 발명에 따른 실리마린	40.0
부틸렌글리콜	8.0
글리세린	5.0
스쿠알란	10.0
부틸렌글리콜 디카프릴레이트/디카프레이트	5.0
소르비탄스테아레이트	1.5
폴리소르베이트 60	1.0
글리세릴스테아레이트	0.5
스테아릴글리시레티네이트	0.2
카르복시비닐폴리머	0.1
아르기닌	0.1
방부제	미량
항료	미량
정제수	잔량

1-3. 에센스의 제조

시토 시테롤, 폴리글리세릴 2-올레이트, 세라마이드, 세테아레스-4 및 콜레스테롤을 교반하여 혼합한 다음, 시토 시테롤, 폴리글리세릴 2-올레이트, 세라마이드, 세테아레스-4 및 콜레스테롤을 교반하여 혼합한 다음, 본 발명에 따른 실리마린, 디세틸포스페이트, 농글리세린 및 정제수 혼합 용액을 첨가하여 유화시킨 후, 교반하면서 45 ℃로 냉각되면 향료를 첨가하여 교반하고 30 ℃까지 냉각시켜 숙성시켰다. 여기에 카르복시비닐폴리머, 산탄검 및 방부제를 첨가하여 안정화시킨 후 숙성시켜 실리마린 함유 에센스를 제조하였다. 하기 표 3에 각 성분의 함량을 나타내었다.

원료	함량(w/w%)
본 발명에 따른 실리마린	10.0
시토 스테롤	1.7
폴리글리세릴 2-올레이트	1.5
세라마이드	0.7
세테아레스-4	1.2
콜레스테롤	1.5
디세틸포스페이트	0.4
농글리세린	5.0
카르복시비닐폴리머	0.2
산탄검	0.2
방부제	미량
향료	미량
정제수	잔량

도 1은 본 발명에 따른 실리마린의 세포독성 결과를 나타낸 도이다.

도 2는 본 발명에 따른 실리마린의 멜라닌 생성 억제 작용을 나타낸 도이다.

도 3은 표준 미백물질인 코지산의 멜라닌 생성 억제 작용을 나타내는 도이다.

도 4는 본 발명에 따른 실리마린의 버섯의 티로시나아제 활성을 나타낸 도이다.

도 5는 본 발명에 따른 실리마린의 세포 수준에서의 티로시나아제 활성을 나타낸 도이다.

도 6은 본 발명에 따른 실리마린의 티로시나아제 단백질 발현에 미치는 영향을 나타낸 도이다.

도 7은 본 발명에 따른 실리빈의 멜라닌 생성 억제 작용을 나타낸 도이다.

도 8은 본 발명에 따른 이소실리빈의 멜라닌 생성 억제 작용을 나타낸 도이다.

Claims

하기 화학식 1로 표시되는 실리빈을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물.

<화학식 1>
제1항에 있어서, 상기 실리빈은 티로시나아제 발현을 저해하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 실리빈은 멜라닌 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
하기 화학식 2로 표시되는 이소실리빈을 유효성분으로 함유하는 피부 미백용 조성물.

<화학식 2>
제4항에 있어서, 상기 이소실리빈은 티로시나아제 발현을 저해하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.
제4항에 있어서, 상기 이소실리빈은 멜라닌 생성을 억제하는 것을 특징으로 하는 피부 미백용 조성물.