KR20080081062A

KR20080081062A - 고리형 항균 펩타이드

Info

Publication number: KR20080081062A
Application number: KR1020087017946A
Authority: KR
Inventors: 데보라 오닐
Original assignee: 노바바이오틱스 리미티드
Priority date: 2005-12-22
Filing date: 2006-12-21
Publication date: 2008-09-05
Also published as: RU2463308C2; EP2348039A3; AU2006327973A1; IL240686A; EP2357190A2; MX2008008291A; JP2009520794A; WO2007072037A1; ZA200806329B; US8324154B2; PL1976863T3; NO20083245L; US20090023641A1; IL240686A0; EP2357191A3; EP1976863A1; CY1113770T1; HK1121462A1; CA2655448C; JP6199797B2

Abstract

본 발명은 고리형 양이온 펩타이드 및 균의 의한 감염에 대한 치료용도에 관한 것이다.

Description

고리형 항균 펩타이드{CYCLIC ANTIMICROBIAL PEPTIDES}

항미생물 펩타이드(AMP)는 진핵 생물 면역의 토대를 형성하고 미생물에 의한 피부 및 점막의 파손에 대항하는 제 1의 방어선을 제공한다. 자연계 AMP는, 예를 들어, 디펜신(defensin) 및 펩타이드의 카텔리시딘(cathelicidine) 군(family)을 포함한다. 이 AMP들은 길이, 배열 및 구조에서 이종(heteogeneous)이지만, 대부분 공통적으로 작은 크기, 순 양이온성 및 양 친매성(amphipathic) 구조를 가진다. 이 작고 양이온의 항미생물 펩타이드는 또한 다른 많은 세균류, 균류, 식물, 무척추 동물 및 척추 동물로부터 분리되어 왔고, 따라서 원핵 생물의 방어에 있어서도 유용함을 보인다.

자연계 AMP는 그램 양성 및 음성의 세균류, 효모, 균류 및 외피보유 바이러스에 대한 광역 항미생물 스펙트럼을 나타낸다. 미생물 병원체은 이들 양이온 펩타이드 등에 대한 저항력을 가지지 못하는 것으로 보이며, 따라서 AMP는 생체 선천성 면역 숙주 방어 분자(vital innate immune host defense molecules)로서 오랜 진화 속에서 보존되어 왔다. 따라서, AMP는 당연하게도 광범위한 감염 치료법들 등의 잠 재적인 목표의 하나로서 관계되어 왔다. 하지만, 자연계 AMP는 그의 기술적 어려움 및 유전자 재조합 시스템상의 생산의 비용 문제와, 강력한 화학 주성 및 염증성 생물학적 기능으로 인해 치료법을 위한 사용에 배제되어 왔다.

본 출원인에 의한 공동출원중인 발명은 리신 및 아르기닌과 같이 특정 염기성 잔기를 다량 보유한 선형 펩타이드ll는 항미생물 작용을 가지며, 특히 항진균 작용을 가진다. 하지만 이 외에 미생물 감염에 대한 방지 및 치료에 사용될 수 있는 약제의 발명이 필요하다.

본 발명의 제 1 측면에 따르면, 펩타이드는 고리형이며, 2 내지 약 200 D 및/또는 L 아미노산을 포함하며, 이때 D 및/또는 L 아미노산은 같을 수도 혹은 다를 수도 있으며, 아미노산은 소수성 아미노산 및/또는 양이온 아미노산을 포함하는 그룹에서 선택된 것이다. 상기 고리형 펩타이드는, 3 내지 약 100 D 및/또는 L 아미노산, 예를 들어 3 내지 50 D 및/또는 L 아미노산 및 4 내지 50 D 및/또는 L 아미노산을 포함할 수 있다.

본 발명의 상기 펩타이드는 미생물 감염의 방지 및 치료에 유용하다.

본 발명의 상기 고리형 펩타이드는 치료법으로 매우 바람직한데 이는 상기 고리형 펩타이드의 탁월한 효과, 단백질 가수 분해적 안정성, 염에 대한 무반응성, 비간독성, 비용혈성 및 합성의 용이함 때문이다.

본 발명의 상기 펩타이드의 양이온 전하는 상기 펩타이드와 미생물 막 조직의 극성 헤드그룹(head-group)의 조합을 유용하게 한다. 고리화에 의한 더욱 밀집된 입체형태의 전하 그룹의 안정화는 이러한 조합을 더욱 향상시키고, 따라서 펩타이드의 항미생물 효과를 향상시킨다.

본 발명의 다른 측면에 따르면, 펩타이드는 제시된 화학식 Ⅰ에 따른 아미노산을 포함한다.

((X)₁(Y)_m)_n (Ⅰ)

이때, l과 m은 0 내지 10 사이의 정수이며 동시에 0은 아니다. n은 1 내지 10 사이의 정수이다. X와 Y는 같을 수도 혹은 다를 수도 있으며 소수성 아미노산 및/또는 양이온 아미노산을 포함하는 그룹에서 선택되었고 제약의 용도로 선택되었으며, 이때 펩타이드는 고리형이다.

상기 펩타이드는 2 내지 50 아미노산, 예를 들어 3, 4, 5, 6, 또는 7에서 50까지의 아미노산을 포함하며 3, 4, 5, 6, 또는 7에서 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 또는 50까지의 아미노산을 포함한다.

본 발명의 한 바람직한 측면에 따르면, 상기 펩타이드는 2 내지 15 아미노산, 예를 들어 3 내지 15 아미노산을 포함한다. 더 바람직하게는 펩타이드가 5 내지 13 아미노산을 함유함이 바람직하다. 이때 펩타이드가 3 내지 7 아미노산, 예를 들어 7 아미노산을 함유한다.

당업자에 알려진 바와 같이, 아미노산은 각각 다르게 분류될 수 있는데, 이는 각 아미노산의 아미노산 곁사슬의 화학적, 그리고 물리적 특성에 주로 근거한다. 예를 들어, 일부 아미노산은 소수성 아미노산 또는 극성 아미노산 등으로 일반적으로 분류되며, 다른 아미노산은 소수성 또는 비 극성 아미노산으로 분류된다. 소수성 아미노산은 글리신, 류신 페닐알라닌, 프롤린, 알라닌. 트립토판, 발린, 이소루신, 메치오닌, 티로신 그리고 트레오닌을 포함하는 그룹에서 선택된다. 양이온 아미노산은 오르니틴, 히스티딘, 아르기닌 및 리신 등을 포함하는 그룹에서 선택된다. 여기서, "소수성" 및 "양이온"은, Fauchere and Pliska Eur. J. Med Chem. 10:39(1983)에 설명된 바와 같이, -1.10 이상의 소수성 그리고/또는 순전하가 0 이상인 아미노산을 가리킬 수 있다. 소수성 또는 비 극성 아미노산은 곁사슬이 생화학 pH에서 무전하인, 비 극성이며 일반적으로 수용액에 섞이지 않는 아미노산을 나타낸다. 상기 아미노산은 자연적으로 발생하거나 합성될 수 있다.

본 발명의 한 바람직한 측면에 따르면, X 및/또는 Y 는 히스티딘, 오르니틴 아르기닌 그리고 리신을 포함하는 그룹에서 선택된 아미노산일 수 있다. X 및/또는 Y가 아르기닌 또는 리신 임이 바람직하다.

X 및/또는 Y 는, 예를 들어 D 또는 L 아미노산과 같이, 소수성 또는 양이온 아미노산의 광학 이성질체일 수 있다. X 및/또는 Y가 D 아미노산임이 바람직하다.

본 발명의 한 바람직한 측면에 따르면, 상기 화학식Ⅰ의 펩타이드는 적어도 90%의 이상의 D 아미노산을 함유한다. 예를 들어, 적어도 95% 또는 97-99% 또는 100%.

본 발명의 한 바람직한 측면에 따르면, 상기 화학식Ⅰ의 펩타이드는 적어도 90% 이상의 L 아미노산을 함유한다. 예를 들어, 적어도 95%, 또는 97-99% 또는 100%.

본 발명은 또한 이미 알려진 이성체(구조적, 스테레오, 입체구조적(conformational) & 상대 배치적(configurational)), 펩티도미메틱(Peptidomimetic), 상기 아미노산의 구조적 상사기관, 그리고 인산화, 당화, 술폰화 및/또는 하이드록실화를 포함하는, 하지만 꼭 이에 제한되지 않는, 자연적(e.g. 전사후 변형) 또는 화학적으로 변형된 것들을 포함한다.

일반적으로, 본 발명의 상기 펩타이드는 아스파르트산, 글루타민산, 아스파라긴, 글루타민 또는 세린을 포함하지 않지만, 본 발명의 특정 펩타이드는 상기 아미노산들의 존재에도 활동을 보일 수 있다.

본 발명의 다른 바람직한 측면에 따르면, X와 Y는 동일하다. 바람직하게는, X와 Y가 동일하며 리신 또는 아르기닌이다.

상기 화학식Ⅰ의 펩타이드에서, 1 그리고 m 은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 일 수 있고, n은 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 일 수 있다.

상기 화학식Ⅰ의 펩타이드에서, l 은 1 일 수 있고, 그리고 n 은 1일 수 있고, m 은 4 내지 9 일수 있다. 예를 들어, m 은 3, 4, 5, 6, 7, 8, 또는 9 일 수 있다.

상기 화학식Ⅰ의 펩타이드에서, l,n 및/또는 m 은 1에서 5 사이 일 수 있다. 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 또는 5 일 수 있다.

상기 화학식Ⅰ의 펩타이드에서, 1 그리고 m 은 0에서 7 사이의 정수 일 수 있고, n은 1과 10 사이의 정수 일 수 있다.

상기 화학식Ⅰ의 펩타이드에서, 1 그리고 m 은 0,1 또는 2 일 수 있고, n 은 1에서 10 사이의 정수 일 수 있다.

상기 화학식Ⅰ의 펩타이드에서, X와 Y는 동일할 수 있고, 1 은 0, 그리고 m은 1일 수 있고, n 은 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 또는 10 일 수 있다.

상기 화학식Ⅰ의 펩타이드에서, X와 Y는 동일할 수 있고, 1 그리고 m 은 1 일 수 있고, n 은 2, 3, 4, 또는 5 일 수 있다.

상기 화학식Ⅰ의 펩타이드에서, X와 Y는 동일할 수 있고, 1 은 1, m 은 2, n 은 1, 2, 3, 또는 4 일 수 있다.

상기 화학식Ⅰ의 펩타이드에서, X와 Y는 동일할 수 있고, 1 그리고 m 은 2, n 은 1, 2, 3, 또는 4 일 수 있다.

본 발명의 다른 한 측면에 따르면, 고리형 펩타이드는 화학식Ⅱ에 따른 아미노산을 포함할 수 있다.

(X)_n (Ⅱ)

이때, X 그리고 n 은 상술한 바와 같다. X는 리신, 아르기닌 또는 오르니틴 임이 바람직하며, n 은 3 내지 15의 정수인 것이 바람직하다.

본 발명의 한 실시예에 따르면, X 는 아르기닌이다.

본 발명의 다른 한 실시예에 따르면, X 는 리신이다.

본 발명의 또 다른 한 실시예에 따르면, X 는 오르니틴이다.

본 발명의 상기 펩타이드는 적어도 하나 이상의 시스테인 잔기를 포함한다. 예를 들어, 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6, 최고 6 시스테인 잔기를 포함한다.

추가적으로, 상기 펩타이드의 아미노산 배열은 변경될 수 있는데, 이는 상기 펩타이드 안의 적어도 하나 이상의 아미노산 잔기를 다른 아미노산 잔기로 치환(D 보다는 L 형식을 사용하는 치환을 포함하는) 을 포함하는 펩타이드 변형을 위함이다.

하나 또는 그 이상의 상기 잔기는 다른 잔기와 상기 펩타이드의 생물학적 활동의 변형, 강화 또는 보존을 위해 교환될 수 있다. 이런 변형체는, 예를 들어, 적어도 약 10%의 대응하는 비 변형 펩타이드의 생물학적 활동을 가질 수 있다. 보존성 아미노산(conservative amino acid), i.e. 비슷한 화학적 물리적 특성을 가진 아미노산의 치환, 이 종종 사용된다. 따라서, 예를 들어, 보존성 아미노산의 치환은 리신을 아르기닌, 오르니틴 또는 히스티딘 등으로 교환; 아르기닌을 리신 또는 이소루신으로, 오르니틴 을 히스티딘으로 교환; 하나의 소수성 아미노산을 다른 아미노산으로 교환하는 것을 포함한다. 치환후, 상기 변형체는 생물학적 활동을 위해 선별된다.

상기 용어 "펩타이드"는 여기에서, 일반적인 용어로, 펩타이드 본드(peptide bond)에 의해 결합된 복수의 아미노산 잔기를 뜻한다. 이는 폴리펩타이드 및 단백질과 같은 의미로 사용되었고 또 서로 바뀌어 사용될 수도 있다.

본 발명의 한 실시예에 따르면, 상기 고리형 펩타이드는;

K-K-K-K-K-K-K

R-R-R-R-R-R-R

을 포함하는 그룹에서 선택되었다.

본 발명의 상기 펩타이드는 일반적으로 합성 펩타이드이다. 상기 펩타이드는 분리된, 그리고 정제된 펩타이드 또는 시험관 내에서(생체 외에서, in vitro) 합성될 수 있는, 예를 들어 고체상 펩타이드 합성 방법, 효소 촉매 펩타이드 합성 방법 또는 DNA 재조합 기술의 도움에 의해 합성될 수 있는, 이의 변형된 형태 일 수 있다.

본 발명의 다른 측면에서는 본 발명에 따른 펩타이드의 제조의 과정이 제공된다. 이때 상기 제조 과정은 화학식Ⅰ 또는 화학식Ⅱ의 펩타이드를 커플링제(coupling agent)와의 반응을 통해 고리화하는 단계를 포함한다.

상기 커플링제는 펩타이드의 두 개의 아미노산 잔기 터미널(C 와 N 터미널)이 선형일때 그 사이에서, 예를 들어 두 개의 아미노산 주쇄(backbone) 또는 곁사슬(side chain) 사이에서, 펩타이드 본드를 형성할 수 있는 어떤 제재(agent)도 될 수 있다. 커플링제의 선택은 결합의 효율성에 영향을 줄 수 있으며, 따라서 펩타이드 고리화의 수율에도 영향을 미칠 수 있다. 표1은 상기 펩타이드 생산 과정에서 유용한 커플링제들을 보여주고 있지만, 그 종류는 이에 국한되지 않으며, 당업자는 이와 다른, 하지만 유용한 커플링제들을 알 수 있다. 상기 커플링제로는 HATU - 0 -(7-Azabenzotriazol-1-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluroniumhexafluorophosphate 이 바람직하다.

펩타이드와 커플링제의 반응은 염기의 존재하에 이뤄지는 것이 바람직하다. 상기 염기는 엔-메틸폴롤린{n-methylmorpholine(NMM)} 또는 디이소프로필-에틸아민{diispropyl-ethylamine(DIEA)} 포함할 수 있지만 이에 국한되지 않는다. 상기 반응은 알칼리 pH, 예를 들어 pH 8.5-9, 에서 이뤄지는 것이 바람직하다. 상기 펩타이드는 상기 커플링제와의 반응에 앞서 보호그룹(protecting group)을 포함하게 변형될 수 있다. 보호그룹은 Pbf(2,2,4,6,7-펜타메틸-디티드로벤조퓨란-5-술로닐{Pbf (2,2,4,6,7-pentamethyl-dithydrobenzofuran-5-sulfonyl)}, t-부틸-에테르{tBu (t-butyl-ether)}, Mtr(메톡시트리메틸벤젠 술포닐){Mtr (methoxytrimethylbenzene sulfonyl)}, Pmc(2,2,5,7,8-펜타메닐-크로만-6-술로닐 클로라이드){Pmc (2,2,5,7,8-pentamethyl-chroman-6-sulfonyl chloride)}, Mbh(4,4-디메틸옥시벤질하이드라이드){Mbh (4,4-dimethyloxybenzylhydride)}, Tmob(2,4,6-트리메톡시벤질){Tmob (2,4,6-trimethoxybenzyl)}, Aloc(알릴옥시카보닐){Aloc (allyloxycarbonyl)}, Fmoc(9-플로오르에닐메톡시카보닐){Fmoc (9-fluorenylmethoxycarbonyl)}, Boc(t-부틸옥시카보닐){Boc (t-butyloxycarbonyl)} 를 포함할 수 있다. 커플링제와의 반응 후, 상기 보호그룹은 약 산성에 의한 보호그룹의 분열, 예를 들어 트리플루오르아세트산{TFA(Trifluoroacetic Acid)}용액의 존재하에 제거될 수 있다.

펩타이드의 주쇄 고리화(backbone cyclisation) 중, 선형 펩타이드의 C 말단(C-terminal)에 있는 펩타이드는 커플링제의 활성화 그룹에 노출되고, 제조 과정이 진행됨 에 따라, 케토-에놀 중간체가 이 아미노산의 알파 탄소에 생성된다. 상기 에놀(또는 알케놀) 중간체는 따라서 상기 활성화 그룹이 인접한 탄소로부터 제거되고 펩타이드 본드가 형성되었을 때 두 개의 인엔티오머(enantiomer)의 생성으로 이어질 수 있다. 이 라세미화, 즉, 독립의 아미노산(예를 들어, 우선성(dextorotatory) 그리고 좌선성(levorotatory) 형태(i.e. 각각 d 그리고 l이성체)의 각각의 거울상체(enantiomers)와 펩타이드 전체의 부분입체이성질체(diaseteromer) 생성의 형성은, 사용된 커플링제에 의한 활성화에 따른 고리화 시 발생할 수 있다. 본 발명의 펩타이드가 거울상체적 불순물이 없는 것이 바람직함에 따라, 상기 부분입체이성질체의 원치 않는 생성은 감소 또는 방지되어야 한다. 상기 부분입체이성질체의 생성을 방지 또는 감소시키고, 부분입체이성질체로부터 깨끗한 펩타이드의 생성을 위해, 본 발명의 상기 펩타이드는 펩타이드의 고리화 중 라세미화를 방지하는 비카이랄성 모이어티(achiral moiety)를 포함하도록 변형될 수 있다.

따라서, 본 발명의 다른 바람직한 측면에 따르면, 본 발명의 펩타이드, 또는 본 발명의 과정에서 정의된 펩타이드는 고리화 시 펩타이드 부분입체이성질체의 형성을 방지하는 모이어티를 포함하도록 변형된다. 여기서부터 사용된 '라세믹(Racemic) 펩타이드'는 아미노산 각각의 광학 이성체, 예를 들어 우선성 좌선성 형태(i.e. 각각 d 그리고 l이성체), 의 양(전형적으로 동일한 양)을 펩타이드의 C 말단에 상기 펩타이드의 고리화 이전에 포함하는 펩타이드이다. 펩타이드에 적용된 상기 모이어티는 일반적으로 자연적으로 발생하는 또는 아미노산의 유사물인 비카이랄성 아미노산이다. 상기 비카이랄성 아미노산은 글리신,β-알라닌, 3-아미노프로판산, 4-아미노 부티르산, 5-아미노 펜탄산 및 6-아미노 헥사노익산(hexanoic acid)을 포함하는 그룹에서 선택된다. 본 발명의 한 실시예에서는 상기 펩타이드가 비카이랄성 아미노산, 예를 들어 글리신, 을 포함하도록 C 말단에서 변형된다.

본 발명의 펩타이드가 모이어티를 포함하도록, 여기에서 정의된 바와 같이 C- 말단에서, 변형하는 것과 더불어, 상기 펩타이드의 고리화 중 형성된 두 개의 거울상체의 비율은 사용된 용매, 배양시간 및 고리화(i.e. 커플링제와의 반응) 시의 온도, 그리고 고리화를 위한 활성화 그룹에 의해 결정된다.

본 발명은 더 나아가 본 발명의 과정에 의해 얻을 수 있는 고리형 펩타이드에 관한 것이다.

본 발명의 한 실시예에 따르면, 상기 고리형 펩타이드는;

K-K-K-K-K-K-K

R-R-R-R-R-R-R

O-O-O-O-O-O-O

_DR-_DR-_DR-_DR-_DR-_DR-_DR

_DO-_DO-_DO-_DO-_DO-_DO-_DO

_DK-_DK-_DK-_DK-_DK-_DK-_DK

등의 배열을 포함하는 그룹에서 선택된 아미노산을 포함한다.

포유류 세포에 대한 원치않는 독성을 전혀 가지고 있지 않거나 조금 가지고 있는 활성 펩타이드를 구별하기 위해, 독립적 펩타이드, 또는 라이브러리 펩타이드가 만들어질 수 있고, 그리고 상기 독립적 펩타이드 및 상기 라이브러리로부터의 펩타이드들은 항미생물 활동과 독성에 대해 선별될 수 있다. 항진균, 항균, 항바이러스, 항원충, 항기생충 작용 및 독성 또한, 하지만 이에 국한되지 않고, 선별될 수 있다.

본 발명의 펩타이드는 예를 들어 유리산(free acid), 유리 염기(free base), 에스터(esters) 및 다른 프로드러그(produg), 염 및 토오토머(tautomer) 등 여러 형태로 존재할 수 있고, 본 발명은 본 화합물의 모든 변형된 형태를 포함한다.

따라서, 본 발명은 상기 염, 또는 펩타이드의 프로드러그 또는 본 발명의 펩타이드 변형체 모두를 망라한다.

본 발명의 펩타이드는 제약적으로 허용가능한 염의 형태로 처리될 수 있다. 상기 본 발명의 제약적으로 허용가능한 염은 염기성 또는 산성 모이어티를 포함하는 모체 펩타이드로부터 통상의 화학적 방법으로 의해 합성될 수 있다. 일반적으로, 이런 염은 유리산 또는 펩타이드의 염기형태를 적당한 물 또는 유기성 용액 안의 염기 또는 산, 또는 이 둘의 조합(일반적으로 에테르, 에틸 아세테이트, 에탄올, 아이소프로파놀, 또는 아세토나이트릴 등의 수용성이 아닌 매질이 바람직하다. 적적한 염의 목록은 Remington's Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa, US, 1985, p.148에서 발견할 수 있으며 거기에 개시된 내용은 참조로서 본 출원 명세서에 포함된다. 또한, 염의 목록은o Stahl et a, Eds, "Handbook of Pharmaceutical Salts Properties Selection and Use", Verlag Helverica Chimica Acta and Wiley-VCH,2002)에서도 나타나 있다.

본 발명은 따라서, 본 발명의 펩타이드의 제약적으로 허용가능한 염을 포함하며, 이때 모체 화합물(parent compound)은 산 또는 염기 염을 생성함으로 인해 변형된다.(예를 들어 유기성 또는 무기성 염기 또는 산으로부터 형성된 통상적인 비 독성 염 또는 제 4기 암모늄염) 이러한 산이 추가된 염의 예로 아세테이트, 아디페이트(adipate), 알지네이트(alginate), 아스파라테이트(aspartate), 벤조에이트(benzoate), 벤젠설포네이트(benzenesulfonate), 비설포네이트(bisulfonate), 부티레이트(butyrate), 구인산염(citrate), 캠포레이트(camphorate), 캠포설포네이르(camphorsulfonate), 시클로펜타네프로피오네이트(cyclopentanepropionate), 디글루코네이트(digluconate), 도데실설페이트(dodecylsulfonate), 에탄술포네이트(ethanesulfonate), 푸마르산염(fumarate), 글루코헵타노에이트(glucoheptanoate), 인산글리세롤(glycerophosphate), 헤미설페이트(hemisulfate), 헥사노에이트(hexanoate), 하이드로클로라이드(hydrochloride), 하이드로브로마이드(hydrobromide), 하이드로아이오다이드(hydroiodide), 2-하이드록시에탄설포네이트(2-hydroxyethanesulfonate), 락테이드(lactate), 말레이에이트(maleate), 말로네이트(malonate), 메탄설포네이트(methansulfonate), 2-나프탈렌설포네이트(2-naphthalenesulfonate), 니코티네이트(nicotinate), 옥살산염(oxalate), 펙트산염(pectinate), 팔마산(palmoate), 과황산염(persulfate), 3-페닐프로피오네이트(3-phenylpropionate), 피크르산염(picrate), 피발레이트( pivalate), 프로피온산염(propionate), 숙신산염(succinate), 주석산염(tartrate), 티오시아산염(thiocyanate), 토실산염(tosylate), 언데카노에이트(undecanoate)를 포함한다. 염기 염은 암모늄염, 알칼리금속염(나트륨 및 칼륨염), 알칼리토금속염(칼슘 및 마그네슘염), 유기성 염기를 가진 염(dicyclohezylamine salts, N-methyl-D-glutamine), 아미노산을 가진 염(아르기닌, 리신 등)을 포함한다. 또한, 염기성 질소를 가지는 그룹은 하급 할로겐화 알킬(메틸, 에틸, 프로필, 부틸 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드), 황산화 디알킬(디메틸, 디에틸, 디부틸), 황산화 디아밀, 긴사슬 할로겐(데실기, 라우릴, 미리스틸,염화 스테아릴) 브로마이드, 아이오다이드, 할로겐 아랄킬(벤질), 페네틸 브로마이드 등을 포함한다.

본 발명의 펩타이드 혹은 펩타이드 변형체의 카르복실 그룹의 염은 펩타이드를 하나 또는 그 이상의 상응하는 염기와 접촉시키는 일반적인 방법에 의해 생성될 수 있다. 이때 하나 또는 그 이상의 상응하는 염기는, 예를 들어, 금속성 수산화 염기, e.g. 수산화 나트륨; 탄산염화 금속, 중탄산염화 금속(예를 들어, 탄산염화 나트륨 또는 중탄산염화 나트륨); 아민 염기(예를 들어, 트리에틸아민(triethylamine), 트리에타놀아민(triethanolamine)등)을 포함한다.

본 발명은 설명된 펩타이드의 활성 제약적 종(active pharmaceutical species)을 위한 프로드러그(produg) 예를 들어, 생체 내에서 유리산(free acid)으로 변환할 수 있는 카르복실산의 에스터의 경우나, 유리 아미노기(free amino group)으로 변환할 수 있는 보호된 아민의 경우처럼, 보호되거나(protected) 유도되지만(derivatised) 생체 내에서 기능기(functional group)로 변환될 수 있는 하나 또는 그 이상의 작용기를 포함할 수 있다. 여기서 사용된 용어 '프로드러그'는 그 구조가 생체에서, 예를 들어 혈액 내에서 가수분해에 의해, 급격하게 그 모체 구조로 변하는 특정한 구조를 뜻한다.

본 발명의 다른 측면은 제약적으로 효과적인 양의 본 발명의 펩타이드 또는 두개 혹은 그 이상의 다른 본 발명의 펩타이드를 포함하는 제약적 조성물을 제공한다.

상기 조성물은 제약적으로 허용가능한 캐리어(carrier), 첨가제 또는 희석액을 포함한다. 여기에서 사용된 '제약적으로 허용가능한'이란, 분명한 의학적 판단 범위 안에 있으며, 인간 또는 때로는 동물의 피부에 사용될 때 독성을 띄지 않고 자극성 염증을 일으키지 않으며 알레르기 반응이 없고, 합리적인 효과/리스크 비율을 나타내는 화합물, 물질, 조성물, 및/또는 투약체를 뜻한다.

본 발명의 펩타이드는 무엇보다도, 항균 펩타이드, 예를 들어, 세균, 진균, 효모, 기생충, 원충 및 바이러스에 대한 항균 펩타이드로 유용하다. '항균 펩타이드'는 여기에서 미생물 및/또는 마이크로 바이스테틱 활동을 가진 펩타이드, 그리고 항세균, 항진균, 항기생충, 항원충, 항바이러스, 항염증, 항감염성 및/또는 살균, 살조류, 살아메바, 살세균, 살진균, 살기생충, 살원충의 특성이 있는 펩타이드를 모두 망라하여 뜻한다.

본 발명의 바람직한 측면에 있어서, 본 발명은 미생물 감염의 치료를 위한 제약의 제조의 발명에 따른 펩타이드의 용도를 제공한다.

"미생물 감염"은 박테리아, 기생 동물, 원생 동물, 바이러스 또는 이스트를 포함하는 균류를 의미한다. "병원체(pathogen)"는 일반적으로 질병을 일으키는 유기체로 정의된다.

박테리아 병원체는 포도알균(Staphylococcus spp. 예를 들어, 황색 포도알균(staphylococcus aureus (예를 들어, staphylococcus aureus NCTC 10442))), 표피 포도상구균 (staphylococcus epidermidis); 클라미디아(Chlamydia spp.), 예를 들어, 클라미디아 트라코마티스 ( Chlamydia trachomatis ); 폐렴 클라미디아( Chlamydia pneumoniae ), 클라미디아 피타시 ( chlamydia psittaci ); 장내구균( Enterococcus spp.), 예를 들어, 엔터로코쿠스 파이칼리스균( Enterococcus faecalis); 화농연쇄구균 ( Streptococcus pyogenes ); 리스테리아 ( Listeria spp.); 녹농균( Pseudomonas spp.); 미코박테륨 ( Mycobacterium spp.), 예를 들어, 결핵균( Mycobacterium tuberculosis); 엔테로박터( Enterobacter spp.); 캄필로박터( Campylobacter spp.); 살모넬라( Salmonella spp.); 스트렙토콕쿠스( Streptococcus spp.), 예를 들어, 스트렙토콕쿠스 A 또는 B 군(Streptococcus Group A or B), 폐렴사슬알균 ( Streptococcus pneumoniae ); 헬리코박터( Helicobacter spp.), 예를 들어, 헬리코박터 파일로리 ( Helicobacter pylori ); 나이세리아( Neisseria spp.), 예를 들어, 임균( Neisseria gonorrhea ), 수막염균( Neisseria meningitidis ); 보렐리아 버그도펠리 ( borrelia burgdorferi ); 시겔라( Shigella spp.), 예를 들어, 시겔라 프렉스네리질균 ( Shigella flexneri ); 대장균( Escherichia coli (E.coli O157:H7 NCTC12900); 헤모필루스(Haemophilus spp.)예를 들어, 헤모필루스 인플루엔자( Haemophilus influenza ); 프란시셀라 툴라렌지스( Francisella tularensis ); 바실루스 ( Bacillus spp.), 예를 들어, 탄저 균( Bacillus anthracis ); 클로스트리디아 ( Clostridia spp.), 예를 들어, 클로스트 리디엄 보튤리눔 ( Clostridium botulinum ); 예르시니아 ( Yersinia spp.), 예를 들어, 페스트균( Yersinia pestis ); 트레포네마( Tremonema spp.); 부르콜데리 아( Burkholderia spp.); 예를 들어, 부르콜데리아 세파시아( Burkholderia cepacia), 부르콜데리아 말레이(B. mallei ) 및 부르콜데리아 슈도말레이(B pseudomallei)로 이루어지는 그룹에서 선택된 박테리아종으로부터 파생될 수 있으나, 이에 의해 한정되지 않는다.

본 발명에 따른 바람직한 용도에 있어서, 박테리아 병원체은 스타필로쿠스오레우스(Staphyloccusaureus ) 또는 대장균(E. Coli)이다.

바이러스성 병원체는 인간 면역결핍성 바이러스 (Human immunodificiency Virus, HIV1&2); 인간 티 세포 백혈병 바이러스(Human T Cell Leukaemia Virus, HTLV 1&2); 에볼라 바이러스(Ebola virus); 인간 유두종 바이러스(Human papilloma virus, e.g. HPV-2, HPV-5, HPV-8, HPV-16, HPV-18, HPV-31, HPV-33, HPV-52, HPV-54 및 HPV-56); 파포바바이러스(papovavirus); 리노바이러스(rhinovirus);폴리오바이러스(poliovirus); 포진성 바이러스(herpesvirus); 아데노바이러스(adenovirus); 엡스타인바바이러스(Epstein Barr virus); 인플루엔자 바이러스(influenza virus); B형 및 C형 간염 바이러스; 두창 바이러스(Variola virus); 로타바이러스(roravirus) 또는 사스 코로나바이러스(SARS coronavirus)로 이루어진 그룹으로부터 선택된 바이러스로부터 파생될 수 있으나, 이에 의해 한정되지 않는다.

기생 병원체는 파동편모충( Trypanosoma spp., 크루스파동편모충( Tripanosoma cruzi), 브루스파동편모충 ( Tripanosoma brucei )), 리슈만편모충 ( Leishmania spp.), 람플편모충( Giardia spp.), 트리고모나스 ( Trichomonas spp.), 이질아메바( Entamoeba spp.), 자유아메바( Naegleria spp.), 가시아메바( Acanthamoeba spp.), 주혈흡충( Schistosoma spp.), 열원충 ( Plasmodium spp.), 크립토스포리디움( Crytosporidium spp.), 등포자충( Isospora spp.), 발란티듐 ( Balantidium spp.), 로아사상충( Loa Loa ), 회충( Ascaris lumbricoides ), 개사상충( Dirofilaria immitis), 톡소플라스마( Towoplasma ssp., 예를 들어, 톡소플라스마 곤디이( Toxoplasma gondii )로 이루어지는 그룹에서 선택된 기생충으로부터 파생될 수 있으나, 이에 의해 한정되지 않는다.

본 발명에 따른 바람직한 용도에 있어서, 미생물 감염은 균류 감염이다.

균류 병원체는 칸디다균(Candida spp .), 표피사상균 ( Epidermophyton spp .), 엑소피알라( Exophiala spp .), 소포자균 ( Microsporum spp .), 백선균( Trichophyton spp.), 티네아 ( Tinea spp .), 아스페르길루스( Aspergillus spp .), 블라스토마이세스( Blastomyces spp .), 블라스토스치조마이세스 ( Blastoschizomyces spp .), 콕시디오이테스(Coccidioides spp .), 크립토코크스 ( Cryptococcus spp .), 히스토플라즈마( Histoplasma spp .), 파라콕시디오마이세스 ( Paracoccidiomyces spp .), 스포로트 릭스( Sporotrix spp .), 아브시디아 ( Absidia spp .), 클라도피알로포라( Cladophialophora spp .), 폰세카에아 ( Fonsecaea spp .), 피알로포라( Phialophora spp.), 라카지아 ( Lacazia spp .), 아르트로그라피스 ( Arthrographis spp .), 아크레모니움(Acremonium spp .), 악티오마두라 ( Actinomadura spp .), 아포피소마이세스( Apophysomyces spp .), 에몬시아 ( Emmonsia spp .), 바시디오볼루스( Basidiobolus spp.), 보베리아 ( Beauveria spp .), 크리소스포리움 ( Chrysosporium spp .), 코니디오볼루스( Conidiobolus spp .), 쿤닝하멜라 ( Cunninghamella spp .), 푸사륨( Fusarium spp.), 지오트리쿰 ( Geotrichum spp .), 그라피움 ( Graphium spp .), 렙토스페리아( Leptosphaeria spp .), 말라세지아 ( Malassezia spp .), 무코르 ( Mucor spp .), 네오테스투디나( Neotestudina spp .), 노카르디오푸시스 ( Nocardiopsis spp .), 파에실로마이세스( Paecilomyces spp .), 포마 ( Phoma spp .), 피에드라이아 ( Piedraia spp .), 뉴모시스티스( Pneumocystis spp .), 슈달레스케리아 ( Pseudallescheria spp .), 피레노하에타( Pyrenochaeta spp .), 리조무코르 ( Rhizomucor spp .), 리조푸스( Rhizopus spp.), 로도토룰라 ( Rhodotorula spp .), 사카로마이세스 ( Saccharomyces spp .), 스케도스포리움( Scedosporium spp .), 스코풀라이옵시스 ( Scopulariopsis spp .), 스포로볼로마이세스( Sporobolomyces spp .), 신세팔라스트룸 ( Syncephalastrum spp .), 트리코데르마( Trichoderma spp .), 트리코스포론 ( Trichosporon spp .), 울로클라디움( Ulocladium spp .), 우스틸라고 ( Ustilago spp .), 베르티킬리움( Verticillium spp.), 왕기엘라 ( Wangiella spp .) 에서 선택된 진균류(이스트(yeast)를 포함하는)에서 파생될 수 있으나 이에 의해 한정되지 않는다.

본 발명에 따른 바람직한 용도에 있어서, 균류 병원체은 트리코피톤(Trichophyton spp.) 또는 크립토코크스(Cryptococcus spp.) 이다. 예를 들어, 균류 병원체은 균류 병원체는 적색백선균 ( Trichophyton rubrum ), 지간 백선균( Trichophyton interdigitale ) 또는 크립토코크스 네오포르만( Cryptococcus neoformans)일 수 있다. 균류 감염은 침투성(systemic), 피하기생성(subcutaneous), 피부(cutaneous) 또는 점액상(mucosal)의 감염일 수 있다.

손발톱 및 피부의 국부적인 균류 감염은 이스트 같은 몇몇 비 피부 기생균도 피부 감염을 일으킬 수 있으나, 일반적으로 피부 사상균(dermatophytes)에 의해 야기된다. 피부 사상균 감염은 수염 백선균(Tinea barbae), 머리 백선균(Tinea capitis), 몸 백선균(Tinea corporis), 고환 백선균(Tinea cruris), 피부 백선균(Tinea faciei), 손 백선균(Tinea manuum), 발 백선균(Tinea pedis), 손발톱 백선균(Tinea unguium), 어루러기 백선균(Tinea versicolor,(비강진(Pityriasis)), 잠행성 백선균(Tinea incognito) 또는 흑색 백선균(Tinea nigra)을 예로써 포함하는 백선균 감염을 포함한다. 상기 감염은 표피사상균( Epidermophyton ), 소포자균( Microsporum ) 및 트리코피톤( Trichophyton spp., 예를 들어, 적색백선균( Trichophyton rubrum ), 지간백선균 ( trichophyton interdigitale ) 속의 균류에서 유래될 수 있다.

피부 기생감염은 피부, 판(lamina), 조직층 , 손발톱 또는 머리카락의 감염일 수 있다. 개개의 언급은 트리코피톤 ( Trichophyton ), 표피사상균( Epidermophyton ) 또는 소포자균 ( Microsporum ) 속의 피부사상균으로부터 야기된 피부 감염이다. 예시적인 피부사상균은 유모 표피사상균( Epidermophyton floccosum), 개소포자균 ( Microsporum canis), 오두앵소포자균( Microsporum audouinii), 석고상소포자균 ( Microsporum gypseum ), 난장이소포자균( Microsporum nanum), 철함소포자균 ( Microsporum ferrugineum), 디스트로듐소포자균 ( Microsporum distortum ), 풀븀소포자균( Microsporum fulvum ), 적색소포자균 ( Trichophyton rubrum ), 트리코피톤 멘타그로파이트 바르 인터디지타르( Trichophyton mentagrophytes var . interdigitale ), 트리코피톤 멘타그로파이트 바르 노두라르( mentagrophytes var . nodulare ), 트리코피톤 톤수란스( Trichophyton tonsurans), 트리코피톤 사우다네즈 ( Trichophyton soudanese ), 트리코피톤 바이올라세움( Trichophyton violaceum ), 트리코피톤 메그니니 ( Trichophyton megnini ), 트 리코피톤 쉔라이니 ( Trichophyton schoenlenii ), 트리코피톤 갈레니아( Trichophyton gallinea), 트리코피톤 크라즈데니 ( Trichophyton krajdenii ), 트리코피톤 야운데이( yaoundei ), 트리코피톤 이퀴넘 ( Trichophyton equinum ), 트리코피톤 에리나세이( Trichophyton erinacei ) 및 트리코피톤 베루코숨(Trichophyton verrucosum)을 포함하는 트리코피톤 속(genera)의 피부사상균에 의해 야기되는 피부사상균감염을 말한다.

본 발명의 특정 실시예에 있어서, 피부사상균은 조갑진균증(onychomycosis)일 수 있다. "조갑진균증"은 조갑진균증의 말단의 좌우의 손발톱 밑, 표면의 백선(superficial white), 근위 백선 조갑하(proximal white subungual), 2차 이영양성(secondary dystrophic), 1차 이영양성(primary dystrophic), 내막성(endonyx), 칸디다설염(candidal, 예를 들어, 조갑박리증(onycholysis) & 만성 점박 피부증(chronic mucocutaneous disease))형 및 손발톱 백선증을 포함하나, 이에 의해 한정되지 않는다.

조갑진균증과 연관되는 비-피부사상성 균은 아스퍼길러스 ( Aspergillus spp.) 세파로스포룸( Cephalosporum spp.), 푸자리움 옥시포룸 ( Fusarium oxyporum ), 스코 푸라리스 브레비카우리스 ( Scopularis brevicaulis ), 스키타리디움( Scytalidium spp.)을 포함한다.

본 발명의 펩타이드들은 다양한 종류의 발병 유기물들에 대한 강력한 항균성 펩타이드들이다. 그러나, 상기 발명의 펩타이드들은, 점막 감염(mucosal insfection)과 관련된 질병들, 예를 들어, 낭포성 섬유증(cystic fivrosis), 위장(gastrointestinal) 감염, 생식기(urogenital) 감염, 비뇨기(urinary; 예를 들어, 신장 감염(kidney infection) 또는 방광염(cystitis)) 감염 또는 호흡기(respiratory) 감염과 같은 질병들을 포함하는 다른 질병들(conditions)을 치료하는데 유용할 수도 있다.

또한, 본 발명의 펩타이드들은 피부와 관련된 감염들, 그 중에서도 특히, 상처(wound), 궤양(ulcer) 및 정신적 상해(lesions), 예를 들어, 베인 상처(cut) 또는 피부 화상(burns)과 같은 피부의 상처 및 이와 관련된 질병들을 포함하는 질병들의 치료 또는 예방에 유용할 수 있다.

본 발명에서 펩타이드들은 박테리아의 피부 감염 또는 농피증(pyodermas)의 치료에 유용하다.

"치료"라는 용어는, 감염에 의한 질병으로 고통 받는 환자들에게 이익을 나누어 주는 것에 대해 기재된 펩타이드의 효과들에 대한 것으로, 환자 상태의 완화 또는 병의 진행의 지연시키는 것을 포함한다.

본 명세서에서 사용되는 "상처의 치료"는 상처의 치유, 관련된 조건들 및 조직들의 치유를 촉진, 증가 또는 가속화시키는 요법(therapy)을 포함할 수 있으며, 상처 자국의 수술, 피부 화상, 궤양, 건선(psotiasis), 조직 리모델링의 가속, 예를 들어, 정형 외과 및 장기 이식(organ transplantation)을 포함할 수 있다.

따라서, 본 발명은 본 발명의 펩타이드가 적용 또는 부착된 기질(substrate)을 제공하는 데 있다. 바람직하게, 기질은 상처에 적용 또는 상처 지점에 전달하는데 적합하다. 바람직하게, 기질은, 기질로부터 상처 베드(wound bed)로 본 발명의 펩타이드들의 항생 효과를 전달하도록 한다. 예를 들어, 상처 붕대와 같이, 기질은 드레싱(dressing)일 수 있다. 드레싱은 섬유질 또는 유사-콜라겐(collagen-like) 물질을 포함할 수 있다.

본 발명의 펩타이드들은 소독제로 적용될 수도 있다. 이러한 점에서, 본 발명의 펩타이드 또는 제약 성질은, 소독 약품과 조합되거나 단독으로 치료되는 표면에 적용될 수 있다. 본 명세서에서 사용되는 "치료되는 표면"은 본 명세서에 기재된 또는 의료 장치의 기질일 수 있다.

나아가, 본 발명에 따른 펩타이드의 치료상 효과적인 양을 투여하는 것을 포함하는 기술적 과제에서, 본 발명은 미생물 감염의 치료 또는 예방 방법을 제공한다.

본 발명의 방법에서, 미생물 감염은 진균 감염(fungal infection)이다. 본 발명의 방법에서 펩타이드는 피부 또는 손발톱에 적용된다.

포유류, 조류, 및 다른 동물들은 펩타이드들, 합성물들 또는 본 명세서에 기재된 방법에 의해 치료될 수 있다. 포유류 및 조류는 인간, 개, 고양이 및 말, 소, 양, 염소, 닭 및 칠면조와 같은 가축들을 포함한다. 나아가, 식물들 또한 본 명세서에 기재된 방법에 의해 치료될 수 있다.

동물들에서, 본 발명의 방법은 손발톱과 같은 생김새에 적용될 수 있으며, 발굽을 가진 동물, 갈고리 발톱 및 양과 돼지 등의 발을 배제하지 않는다.

펩타이드 치료에 더하여, 본 발명의 방법은 손톱으로 펩타이드의 침투를 강화시킬 수 있는 치료들을 포함한다. 이것은 화학적 또는 물질적 수단들에 의해 촉진될 수 있다. 손발톱의 등 부분(dorsal layer)을 채우거나 손발톱의 부식과 같은, 물리적 치료들은 본 발명의 펩타이드들의 침투성을 향상시킬 수 있다. 본 발명의 펩타이드들의 손발톱 침투의 화학적 강화는, 손발톱의 플레이트 케라틴(keratin) 내에 물리적 또는 화학적 결합을 끊어 달성될 수 있다. 손발톱 소프트닝 약품들은 요소 및 살리실산(salicylic acid)을 포함하며, 손발톱의 수분을 증가시켜 손톱의 강도를 떨어뜨린다. 이에 따라 본 발명의 펩타이드들의 침투를 증가시킨다. 설프히드릴(sulfhydryl) 그룹들을 포함하는 합성물들은 손발톱 케라틴에서 디술파이드(disulohide) 결합들을 깨뜨리며, 약물의 침투를 증가시키고, 불안정화를 초래할 수 있다.

나아가, 본 발명에 따른 펩타이드의 치료상 효과적인 양 또는 기질을 상처에 적용하는 것을 포함하는 기술적 과제에서, 본 발명은 상처의 치료 방법을 제공한다.

원하는 효과들을 달성하기 위해, 펩타이드들, 그것의 변형 또는 그것의 조합들은, 다른 투약량이 유익한 효과들을 제공한다 하더라도, 1회 또는 나누어진 투약량으로 투여될 수 있다. 예를 들어, 몸무게의 적어도 0.01mg/kg 내지 500~750 mg/kg, 적어도 0.01 mg/kg 내지 300~500 mg/kg, 적어도 0.1 mg/kg 내지 100~300 mg/kg 또는 1 mg/kg 내지 50~100 mg/kg, 또는 1 mg/kg 내지 20 mg/kg으로 달라질 수 있다. 투여된 양은 질병, 무게, 물리적 상태, 건강 및 나이와 같은 다양한 요인들 선택된 펩타이드 및 그것의 임상적 효과에 따라, 예방의 목적인지 치료의 목적인지에 따라 그리고 펩타이드가 화학적으로 변형되었는지에 따라 결정될 것이다.

본 발명에 따른 치료 약품의 투여는 환자의 생리 상태, 투여목적이 치료상 또는 예방상인지, 그리고 당업자에게 알려진 다른 요인들에 따라 1회, 수회, 계속적 또는 간헐적 방법일 수 있다. 본 발명의 펩타이드들의 투여는 미리 선택된 기간 동안 필수적으로 계속될 수 있거나, 간격을 둔 용량이 연속적일 수 있다. 국소적 및 침투적 투여가 모두 고려된다.

합성물을 준비하기 위해, 펩타이드들이 합성되거나, 필수적 또는 선택적으로 정화되거나 다른 방법으로 얻어지고 나서, 동결 건조되고 안정화된다. 그리고 나서, 펩타이드는 적절한 농도로 조절되고, 선택적으로 다른 약품과 조합될 수 있다. 단위 용량에 포함된 주어진 펩타이드의 절대적 중량은 폭 넓게 달라질 수 있다. 예를 들어, 약 0.01g 내지 2g 또는 0.01g 내지 500mg 또는 특정 세포형에 대한 특별한 다수의 펩타이드들이 투여될 수 있다. 또한, 1회 투약량은 약 0.01g~50g, 약 0.01g~35g, 약 0.1g~25g, 약 0.5g~12g, 약 0.5g~8g, 약 0.5g~4g 또는 약 0.5g~2g으로 달라질 수 있다.

본 발명의 치료용 펩타이드들을 포함하는 하나 혹은 그 이상의 적당한 단위량 형태들이 경구의, 모체의(피하(皮下), 정맥 내, 근육 내 그리고 복막 내를 포함하는), 직장의, 피부의, 경피의(transdermal), 흉부 내의, 폐 내의 그리고 코 내의(호흡기의) 경로들을 포함하는 다양한 경로들에 의해 투여될 수 있다. 치료용 펩타이드들은 또한 액체 제형물 또는 지속되는 방출물을 위해 제형될 수 있다(예를 들면, 마이크로캡슐화(microencapsulation)을 사용하여, WO 94/07529, 및 US 특허 4,962,091 참조). 제형물들은 적당한 경우, 편리하게 이산된 단위량(discrete unit dosage) 형태로 존재될 수 있으며, 제약 분야에 잘 알려진 방법들 중 어떠한 것에 의해 준비될 수 있다. 그러한 방법들은 치료용 약품을 액체의 캐리어들, 고체의 모체들, 반고체(semi-solid) 캐리어들, 미세하게 분리된 고체의 캐리어들 또는 그들의 혼합체들과 혼합하고, 그리고 나서, 필요하다면, 제품을 원하는 운반 시스템으로 도입하거나 형상화하는 단계를 포함할 수 있다.

본 발명의 치료용 펩타이드들이 경구 투여를 위해 준비될 때, 그것들은 제약적으로 인정 가능한 캐리어, 희석액 또는 첨가물과 일반적으로 결합되어 제약 제형물, 또는 단위량 형태를 형성한다. 경구 투여를 위해, 펩타이드들은 가루, 과립 형태, 물약, 부유물, 유제(乳劑) 또는 츄잉 껌으로부터의 활성 성분들의 섭취를 위한 자연의 또는 합성의 폴리머나 수지로 존재될 수 있다. 활성 펩타이드들은 큰 환약, 연약 또는 고약으로도 존재할 수 있다. 본 발명의 경구적으로 투여되는 치료용 펩타이드들은 또한 지속되는 방출물을 위해 제형될 수 있다. 예를 들면, 펩타이드들은 코팅되고, 마이크로-인캡슐화되거나 그러지 않으면 지속되는 운반 디바이스 내에 위치될 수 있다. 그러한 제형물들에서 전체 활성 성분들은 제형물의 무게의 0.1부터 99.9%까지 포함한다.

본 발명의 치료용 펩타이드들을 포함하는 제약 제형물들은 잘 알려진 그리고 쉽게 이용할 수 있는 성분들을 사용하여 기술 분야에서 알려진 방법들에 의해 준비될 수 있다. 제약 제형물은 본 발명이 속하는 기술분야에 알려진 과정 및 점차 이용할 수 있는 성분에 의해 준비될 수 있다. 예를 들어, 펩타이드는 공통의 첨가제(excipoents), 희석제(diluents), 또는 캐리어(carrier)와 함께 제형될 수 있으며, 알약(tablet), 캡슐(capsule), 용액, 현탁물(suspension), 가루(powder), 에어로졸(aerosol)로 형성될 수 있다. 이런 제형물들에 적절한 첨가제, 희석제, 및 캐리어들의 예는 녹말, 셀룰로오즈, 당, 매니톨(mannitol), 및 규소 유도체들(silicic derivatives) 등과 같은 완충제, 필러, 및 확장기들을 포함한다. 결합제는 또한 카르복시메틸 셀룰로오즈(carboxymethyl cellulose), 히드록시메틸셀룰로오즈(hydroxymethylcellulose), 히드록시프로필(hydroxypropyl) 메틸셀룰로오즈, 및 기타 셀룰로오즈 유도체들, 알지네이트(alginates), 젤라틴, 및 폴리비닐피롤리돈(polyvinyl pyrrolidone) 등을 포함할 수 있다. 보습제는 글리세롤 등을 포함할 수 있고, 분해제는 칼슘 카보네이트 및 나트륨 바이카보네이트 등을 포함할 수 있다. 분해를 늦추는 약제들은 파라핀 등을 포함할 수 있다. 4차 암모니아 화합물 등과 같은 재흡수 가속제를 더 포함할 수 있다. 세틸 알콜(cetyl alcohol) 및 글리세롤 모노스테아레이트(glycerol monostearate) 등과 같은 계면활성제도 포함할 수 있다. 카올린(kaolin) 및 벤토나이트(bentonite) 등과 같은 흡착성 캐리어를 포함할 수 있다. 탈크, 칼슘, 및 마그네슘 스테아레이트, 및 고체 폴리에틸 글리콜 등의 윤활제들을 또한 포함할 수 있다. 보존제를 더 추가할 수 있다. 본 발명의 조성물들은 셀룰로오즈 및/또는 셀룰로오즈 유도체들 등의 농축제들을 포함할 수 있다. 잔탄(xanthan), 구아(guar) 또는 카보 검(carbo gum) 또는 아라비아검 등의 검(gums), 또는 선택적으로 폴리에틸렌 글리콜, 벤톤(bentones) 및 몬트모릴로나이트(montmorillonites) 등을 포함할 수 있다.

예를 들면, 본 발명에 따른 펩타이드를 포함하는 정제 또는 캡플릿들은 칼슘 카보네이트, 산화 마그네슘, 및 마그네슘 카보네이트 등의 완충제들을 포함한다. 적절한 완충제들은 또한 아세트산염(acetic acid in a salt), 구연산염, 붕산염, 및 인산염 등을 포함할 수 있다. 캡플릿 및 정제들은 또한 셀룰로오즈, 젤라틴화된 녹말(pregelatinized starch), 실리콘 다이옥사이드, 히드록실 프로필 메틸 셀룰로오즈, 마그네슘 스테아레이트, 마이크로크리스탈린 셀룰로오즈, 녹말, 탈크, 티타늄 다이옥사이드, 벤조산, 구연산, 옥수수 녹말, 미네랄 오일, 폴리프로필렌 글리콜,인산 나트륨, 아연 스테아레이트, 등의 비활성 성분들을 포함할 수 있다. 본 발명의 적어도 하나의 펩타이드를 포함하는 단단한 또는 연한 젤라틴 캡슐들은 젤라틴, 마이크로크리스탈린 셀룰로오즈, 나트륨 로릴 설페이트(sodium lauryl sulphate), 녹말, 탈크, 및 티타늄 다이옥사이드, 등의 비활성 성분들과 폴리에틸렌 글리콜(PEGs) 및 식물성 기름 등의 액체 캐리어들을 포함할 수 있다. 나아가, 본 발명의 한 가지 이상의 펩타이드를 포함하는 창자도착알약들(enteric-coated caplets)은 위에서 분해되지 않고 십이지장의 중성 또는 알칼리성 환경에서 분해되도록 설계되었다.

본 발명의 치료용 펩타이드들은 편리한 경구 투약용 엘릭시르 또는 용액 또는 예를 들어, 근육 내, 피하, 복막 내, 또는 정맥 내 경로 등의 비경구적 투여를 위한 용액의 형태로 제형될 수 있다. 본 발명에 따른 치료용 펩타이드들의 약학적 제형물들은 수성 또는 무수의 용액(anhydrous solution) 또는 분산(dispersion), 또는 선택적으로 이멀젼, 현탁액 또는 고약의 형태를 가질 수 있다.

따라서, 상기 치료용 펩타이드들은 비경구적 투여용(예, 일시 주사 또는 지속적 주입 등과 같은 주사로)으로 제형될 수 있고 앰플, 기충전된 주사, 작은 용량의 주입용 용기 또는 다수의 도즈(dose)의 용기의 형태의 일회분 단위의 형태로 제공될 수 있다. 상기 활성 펩타이드 및 기타 성분들은 현탁액, 용액, 또는 유성 또는 수성 캐리어 내에 이멀젼을 형성할 수 있고, 현탁제, 안정제 및/또는 분산제들과 같은 제형용제(formulatory agents)를 포함할 수 있다. 선택적으로, 상기 활성 펩타이드 및 기타 성분들은, 사용 전에 예를 들어, 멸균, 발열원이 없는 물(pyrogen-free water) 등의 적절한 캐리어와 함께 사용하기 위해, 멸균 고체에서 무균으로 분리하거나 용액에서 동결건조(loyphilization)하여 얻은 분말 형태일 수 있다.

상기 제형물들은 기술 분야에서 잘 알려진 제약으로 적합한 캐리어, 운반제, 및 항원보강제들을 포함할 수 있다. 예를 들면, 생리학적인 관점에서 적합한 한 가지 이상의 유기용매(들)을 사용하여 용액들을 제제하는 것이 가능하다. 상기 유기용매들은 물과 더불어, 아세톤, 아세트산, 에탄올, 이소프로필 알콜, 디메틸 술폭사이드, "도와놀(Dowanol)"이라는 제품과 같은 글리콜 에테르, 폴리글리콜 및 폴리에틸렌 글리콜, 단쇄 산(short-chain acids)의 C₁-C₄ 알킬 에스테르들, 에틸 또는 이소프로필 젖산, "미글리올(Myglyol)"이라는 제품 등의 지방산 트리글리세라이드, 이소프로필 미트리세이트(isopropyl mytrisate), 동물성, 미네랄 및 식물성 기름 및 폴리실록산(phlysiloxanes) 등과 같은 용매들에서 선택할 수 있다.

본 발명의 펩타이드들을 포함하는 용매 또는 희석제들은 산 용액, 디메틸술폰, N-(2-메르캅토프로피오닐) 글리신, 2-n-노닐-1, 3-디옥솔란(3-dioxolane) 및 에틸 알콜을 포함할 수 있다. 바람직하게는 상기 용매/희석제는 예를 들어, 아세트산, 구연산, 붕산, 젖산, 프로피온산, 인산, 벤조산, 부티르산(butyric acid), 말릭산(malic acid), 말론산, 옥살산, 숙신산(succinic acid) 또는 타르타릭산(tartaric acid) 등의 산성 용매이다.

또한 염두에 둘 수 있는 것은 본 발명의 한 가지 이상의 펩타이드들과, 예를 들어, 암포테리신 B, 암포테리신 B 지방 콤플렉스 (ABCD), 리포좀 암포테리신 B(L-AMB), 및 리포좀 니스타틴(liposomal nystatin) 등과 같은 폴리엔들(polyenes), 보리코나졸(voriconazole), 플루코나졸(fluconazole), 케토코나졸(ketoconazole), 이트라코나졸(itraconazole), 포자코나졸(pozaconazole) 등의 아졸(azoles) 및 트리아졸들(triazoles) 등과 같은 한 가지 이상의 항미생물(antimicrobial) 또는 항진균제(antigfungal agents)와; 카스포풍긴(caspofungin), 미카풍긴 (micafungin; FK463), 및 V-에키노캔딘(V-echinocandin; LY303366) 등의 글루칸 신테이스 억제제들(glucan synthase inhibitors); 그리세오풀빈; 테르비나핀과 같은 알릴아민(allylamines); 플루시토신(flucytonsine) 또는 본 발명에 설명된 기타 항진균제 등을 포함하는 복합물 제품들이다. 추가로, 상기 펩타이드들은 시클로피록스 올라민(ciclopirox olamine), 할로프로긴(haloprogin), 톨나프테이트(tolnaftate), 운데실레네이트(undecylenate), 국소적 니사틴(nysatin), 아모롤핀, 부테나핀(butenafine), 나프티핀(naftifine), 테르비나핀, 및 기타 국소용제들 과 같은 국소적 항진균제와 혼합될 수 있다.

또한, 상기 펩타이드들은 지속적인 방출 도즈의 형태 및 유사한 형태로 제형될 수 있다. 상기 제형물들은, 일정 시간 동안, 예를 들면, 창자 또는 호흡기관의 특정 부위에 상기 활성 펩타이드를 방출하도록 구성될 수 있다. 예를 들면, 폴리랙티드-글리콜레이트(polylactide-glycolates), 리포좀, 마이트로이멀젼, 마이크로입자, 나노입자, 또는 왁스 등과 같은 폴리머 물질로, 코팅, 봉지, 및 보호 매트릭스 등을 만들 수 있다. 상기 코팅, 봉지, 및 보호 매트릭스들은 예를 들어, 부목, 카테터(catheter), 복막투석 튜브, 배출 장치 등과 같은 내재 장치들을 코팅하는데 유용하다.

국소 투여를 위해, 상기 활성제들은 기술 분야에서 잘 알려진 목표 부위에 직접적인 투여를 하기 위한 방법으로 제형될 수 있다. 국소 투여를 위한 주요 형태로는, 예를 들어, 크림, 밀크, 겔, 분말, 분산, 또는 마이크로이멀젼, 여러 농도로 농축된 로션, 포화된 패드, 연고 또는 스틱, 에어로졸 제형물(예, 스프레이 또는 폼), 비누, 세제, 로션 또는 비누 조각 등의 형태를 가질 수 있다. 상기 목적을 위한 다른 종래의 형태들은 상처 드레싱, 코팅된 밴드, 또는 기타 폴리머 덮개, 연고, 크림, 로션, 페이스트, 젤리, 스프레이, 및 에어로졸 등을 포함한다. 따라서, 본 발명의 상기 치료용 펩타이드들은 진피에의 도포를 위해 패치 또는 밴드를 통해 전달될 수 있다. 또는, 상기 펩타이드는 폴리아크릴레이트 또는 아크릴레이트/비닐 아세테이트 코폴리머 등과 같은 흡착성 폴리머의 일부로써 제형될 수 있다. 장 기간의 투여를 위해서는, 피부의 수화 또는 짓무름을 최소화하기 위하여, 미소공성(microporous) 및/또는 호흡이 가능한 지지 라미네이트를 사용하는 것이 바람직할 수 있다. 상기 지지층은 원하는 보호 및 지지 기능을 제공할 수 있는 어떤 적절한 두께도 가질 수 있다. 일반적인 적절한 두께는 약 10에서 200 미크론 사이일 것이다.

국소적 투여는 손발톱 코팅 또는 래커(lacquer)의 형태일 수 있다. 예를 들면, 상기 항진균성 펩타이드는 국소 투여를 위한 에틸 아세테이트(NF), 이소프로필 알콜(USP), 및 이소프로필 알콜 내 폴리[메틸비닐 에테르/말레산]의 부틸 모노에스테르 용액을 포함하는 용액 내에 제형될 수 있다.

국소 투여를 위한 제약용 제형물들은, 치료 대상의 증상 또는 질병에 특정된 본 발명의 한 가지 이상의 펩타이드의 예를 들어, 0.1 mg/ml에서 10mg/ml 사이와 같은, 약 0.001mg/ml에서 약 100 mg/ml 사이를 포함하는 생리학적으로 적합한 완충된 식염수를 포함할 수 있다.

연고 및 크림은, 예를 들면, 적절한 농축제 및/또는 겔화제를 추가하여, 수성 또는 유성(oily base)으로 제형될 수 있다. 로션은 수성 또는 유성을 바탕으로 제형될 수 있고, 일반적으로 한 가지 이상의 유화제, 안정제, 분산제, 현탁화제, 농축제, 또는 염색제를 또한 포함한다. 상기 활성 펩타이드는 예를 들어, 미국특허번호 4,140,122; 4,383,529, 또는 4,051,842에 공개된 이온삼투요법을 통해 전달될 수 있다. 국소적 제형물에 존재하는 본 발명의 치료용 약제의 중량의 백분율은 여러가지 요소에 따라 다르지만 일반적으로 제형물의 전체 중량의 0.01%에서 95%, 전형적으로는 중량의 0.1~85% 일 것이다.

아이드롭(eye drop) 또는 코 드롭(nose drops) 등의 방울 형태는 한 가지 이상의 분산제, 용해제 또는 현탁제를 또한 포함하는 수성 또는 비수성을 바탕으로 한 한 가지 이상의 상기 치료용 펩타이드들로 제형될 수 있다. 액체 스프레이는 펌프로 사용하거나, 압력 팩으로부터 편리하게 전달될 수 있다. 방울들은 단순한 안약 드롭퍼-뚜껑을 가진 병, 방울 형태로 액체 내용물을 전달하도록 된 플라스틱 병, 또는 특수한 모양의 봉합을 통해 전달될 수 있다.

상기 치료용 펩타이드는 또한 경구 또는 목으로 국소 투여하도록 제형될 수 있다. 예를 들면, 활성 성분들은 보통 설탕 및 아카시아 또는 트라가캔스(tragacanth) 등의 향을 첨가한 베이스를 더 포함하는 로젠지의 형태로, 젤라틴 및 글리세린 또는 설탕 및 아카시아 등의 비활성 베이스 내의 조성물을 포함하는 파스틸(pastilles) 형태로, 및 적절한 액체 캐리어 내에 본 발명의 조성물을 포함하는 구강세정제 등의 형태로 제형될 수 있다.

이에 한정되지 않는, 본 발명의 약제용 제형물에 유용한 특정 캐리어 및/또는 희석제의 예들은 물과, 인산으로 완충된 식염수 pH 7.0~8.0과 같은 생리적으로 적합한 완충된 식염수 등을 포함한다.

본 발명의 펩타이드들은 호흡 기관에 투여될 수 있다. 흡입 또는 통기법에 의한 투여에 있어서, 상기 조성물은 예를 들어, 락토오스 또는 녹말 등의 적절한 분말 베이스와 치료용 약제를 분말로 혼합하는 것과 같은 건조한 분말의 형태를 가질 수 있다. 본 발명의 치료용 펩타이드들은 또한 에어로졸 또는 흡입 형태로 투여되었을 때 수용액으로 투여될 수 있다. 따라서, 기타 에어로졸 약제용 제형물은, 치료 대상의 증상 또는 질병에 특정되는 본 발명의 한 가지 이상의 펩타이드들의, 0.5~50mg/ml, 0.5~20mg/ml, 0.5~10mg/ml, 0.5~5mg/ml 또는 1~5mg/ml 등과 같은, 예를 들어, 0.1~100mg/ml의, 대략 0.001mg/ml에서 약 100mg/ml을 포함하는 생리학적으로 적합한 완충된 식염수를 포함할 수 있다.

본 명세서의 상세한 설명과 청구항들 전반에서, "포함하는" 및 그 변형된 관련어들은, "포함하나 이에 한정되지 않는"이라는 것을 의미하고, 기타 모이어티, 첨가물, 구성요소, 정수 또는 단계들을 제외하려는 의도가 없고 제외하지 않는다.

본 명세서의 상세한 설명과 청구항들 전반에서, 문단 상에서 필요할 경우를 제외하고 단수는 복수를 포함한다. 특히, 부정관사가 사용되었을 때, 필요할 경우를 제외하고, 본 명세서는 복수와 단수를 모두 염두에 두고 이해되어야 할 것이다.

본 발명의 특정한 측면, 실시예 또는 예와 관련하여 설명된 특징, 정수, 성질, 복합물, 화학적 모이어티 또는 그룹들은, 함께 사용할 수 없는 경우를 제외하고, 여기에 설명된 모든 다른 측면, 실시예 또는 예에 적용될 수 있다는 것을 이해해야 한다.

재료 및 방법

실시예 1

7 아미노산 폴리리신 펩타이드(7 amino acid polylysine peptide)의 고리화는 1 eq(eq=equivalent volume)의 보호된 펩타이드를, 100mg/ml의 DMF(dimethylformamide) 내에서 HATU의 1 eq 에 용해시킴으로써 수행했다. pH를 증가시키기 위해서, 2.5 eq의 DIEA(diisopropylethylamine)을 추가하고 상기 반응에 이어 HPLC를 수행하였다. 후에, 상기 펩타이드는 물에 침전시키고 다른 물에 세척했다. 상기 펩타이드는, 후에 건조시키고 최종 고리형 펩타이드를 생성하기 위해서 불화 수소산으로 보호를 해제했다. 동결건조하기 전에, 불화 수소산을 아세트산으로 대체하기 위하여 이온-교환 크로마토그라피를 사용한다.

실시예 2

7 아미노산 폴리아르기닌 펩타이드(7 amino acid polyarginine peptide)의 고리화는 1 eq의 보호된 펩타이드를, 28.5mg/ml의 DMF 내에 용해된 5 eq의 NaHCO₃ (나트륨 바이카보네이트) 및 2 eq의 PyBOP와 혼합함으로써 수행했다. 상기 반응 후에 TLC를 수행하고 그 후, 상기 펩타이드는 물에 침전시키고 다른 물에 세척했다. 상기 펩타이드는 후에 건조시키고 최종 고리형 펩타이드를 생성하기 위해서 불화 수소산으로 보호를 해제했다. 동결건조하기 전에, 불화 수소산을 아세트산으로 대체하기 위하여 이온-교환 크로마토그라피를 사용한다.

실시예 3

7 아미노산 폴리아르기닌 펩타이드의 고리화:

용액 1: 57mg의 HBTU (Mwt=379.3, 0.15 mmole) 또는 57mg의 HATU (M=380.3, 0.15 mmole) 및 60μl의 0.92mg/ml NMM (n-methylmorpholine, Mwt=101.2, 0.55 mmole)을 2.86ml의 DMF에 용해시켰다.

용액 2: 288mg의 H-[Arg(Pbf)]₇-OH (Mwt=2877.6, 0.1 mmole)(7 아미노산 폴리아르기닌 펩타이드)를 0.71ml의 DMF에 용해시켰다.

용액 2를 30분에 걸쳐 용액에 방울 형태로 추가했다. pH는 젖은 pH 종이로 체크하고 반드시 8.5~9 사이여야 한다. 상기 반응 혼합물은 하룻밤에 걸쳐 실내온도에서 교반했다*. 상기 혼합물을 진공 상태에서 농축시켰다. NaHCO3(5%)의 용액을 추가했다. 보호된 고리펩타이드의 침전물을 여과하고 물에 세척했다. 150~200mg를 얻었다. Pbf 그룹의 분할(cleavage)는 TFA/물 (95/5, v/v)(1g의 보호된 고리펩타이드 당 10ml)에서 수행하였다. 상기 혼합물을 농축하고 원액 제품에 침전시키기 위하여 IPE를 추가했다. cycloArg 원액의 100~110mg을 얻었다.

(*HATU를 사용한 결합은 5시간 후에 완성되었다. NMM의 양은 H-[Arg(Pbf)]₇-OH 내에 TFA의 초과량에 따라 달라진다.)

상기 고리형 펩타이드들은 이성질체(enantiomerically) 상으로 적어도 95% 정제되도록 합성되고, 97~99% 사이에서 변할 수 있다. 이들은 상기 방법으로 합성하여 이성질체(enantiomerically) 상으로 적어도 95% 정제된다.

액체배지 희석물(Broth Dilution)의 항진균( antifungal ) 감수성 테스트

고리화된 펩타이드들에 대한 관련 진균 균주(fungal strains)들의 감수성은 Clinical Laboratory Standard Institute (CLSI; 구 NCCLS)에서 승인된 표준을 사용하여 결정했다. 진균의 감수성은 "필라멘트형 진균의 액체배지 희석물의 항진균 감수성 테스트를 위한 표준 방법(Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Filamentous Fungi); 승인된 표준 M38-P)을 사용하여 테스트했고, 효모(yeast) 감수성은 "효모의 액체배지 희석물의 항진균 감수성 테스트를 위한 표준 방법(Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts); 승인된 표준- 제2판 M27-A)"를 사용하여 테스트했다.

액체배지 희석물(Broth Dilution)의 항박테리아 ( antibacterial ) 감수성 테스트

고리화된 펩타이드들에 대한 관련된 박테리아 균주(bacterial strains)들의 감수성은 Clinical Laboratory Standard Institute (CLSI; 구 NCCLS)에서 승인된 표준을 사용하여 결정했다. 균의 감수성은 "무산소로 배양되는 박테리아의 희석물의 항미생물의 감수성 테스트를 위한 방법(Method for Dilution Antimicrobial Susceptibility Tests for Bacteria That Grow Anaerobically); 승인된 표준- 제 7판 M7-A7)"을 사용하여 테스트했다.

용혈 분석( Haemolysis assays )

상기 실험된 펩타이드는 원하는 농도로 부분표본 3개를 눙크(Nunc) 96 웰 플 레이트에 준비하고, 일련의 1:1 희석액(100μl)들을 만든다. 세척된(50ml HBSS로 3번 세척) 100μl의 사람의 적혈구 세포들(RBC)(1x10⁸ RBC/ml)을 실험 웰에 넣고 3시간 동안 37℃에서 배양했다. 배양한 후, 100μl의 HBSS를 상기 웰들에 추가하고 상기 플레이트를 하룻밤 동안 4℃에서 배양했다. 상청액의 100μl을 제거한 후 Sunrise 플레이트 측정기(Tascam)로 450/620nm로 측정된 새로운 마이크로티터 플레이트(microtitre plate)에 놓는다. 완충제 만으로 된 대조군 웰(4개), 완충제 및 RBC들, 및 물 및 RBC를 또한 포함시켰다. 상기 데이터는 플롯으로 작성하고 그래프 패드(Graph Pad;Prism software)를사용하여 통계를 분석했다.

결과

고리화 펩타이드의 서열

분석된 상기 펩타이드들의 서열은 다음과 같다:

펩타이드 1: 고리화-K-K-K-K-K-K-K

펩타이드 2: 고리화-R-R-R-R-R-R-R

펩타이드 3: 고리화-K-K-K-K-K-K-K-G

펩타이드 4: 고리화-R-R-R-R-R-R-R-G

펩타이드 5: 고리화-O-O-O-O-O-O-O-G

펩타이드 6: 고리화-_DR-_DR-_DR-_DR-_DR-_DR-_DR-G

펩타이드 7: 고리화-_DO-_DO-_DO-_DO-_DO-_DO-_DO-G

펩타이드 8: 고리화-_DK-_DK-_DK-_DK-_DK-_DK-_DK-G

앞의 "D-"는 아미노산의 D-아이소머(D-isomer)를 뜻하고 펩타이드의 합성에서 사용되었다. "O"는 비자연적 아미노산 오르니틴(ornithine)을 대표한다. 3,5,9,11,13,또는 15 아르기닌 또는 리신 아미노산으로 구성되는 고리화 펩타이드들은 합성된 것이고 그 활성이 결정되었다(데이터 미도시).

고리화 펩타이드들의 항박테리아 ( antibacterial ) 활동

E. coli 및 스타필로코쿠스 아우레우스(Staphylococcus aureus)의 배양들을 펩타이드 1에 노출시켰고, 37℃에서 16시간 동안 상기 두 가지 유기체들이 MIC 후 성장되도록 1mM에 두었다 (표 2). 펩타이드 1은 상기 농도에서 E.coli 및 스타필 로코쿠스 아우레우스 둘 다의 성장을 완전히 억제했다.

상기 실험을 펩타이드 2로 반복했다. 펩타이드 2의 E. coli에 대한 MIC는 0.1mM이었고, 펩타이드 2의 S. aureus에 대한 MIC는 1.0mM이었다. 이것은 박테리아의 활동에 고리화 펩타이드가 매우 현저한 영향을 준다는 것을 의미한다.

그 크기가 펩타이드 1과 2에 대응하는 선형 펩타이드(linear peptide)는 각각 펩타이드 1 및 2보다 현저히 낮은 활성을 보였다.

고리화 펩타이드 대 적색백선균 ( Trichophyton rubrum )의 항진균( antifungal ) 활성

펩타이드 1-8에 대한 T. rubrum 감수성이 테스트되었다. 펩타이드 1은 T.rubrum에 대응하는 0.1mM의 MIC로 표시되었다(Table 2). 펩타이드 2는 T. rubrum의 배양에 대응하는 0.25mM의 MIC로 표시되었다.

펩타이드 3에서 8은 고리형 펩타이드 링 내로 도입된 단 하나의 글리신 잔기를 보유했다. 따라서, 펩타이드 3에서 8은 그 길이가 펩타이드 1과 2의 7 아미노산과 비교할 때, 8 아미노산 길이다. 펩타이드 3에서 6은 T. rubrum에 대해 모두 항진균성 활동을 보였다(각각 MIC(mM)4.0, 2.0, 4.0, 1.0). 펩타이드 7에서 8은 실험 상의 최대의 농도(4mM)에서 T. rubrum에 대해 항진균 활성을 보이지 않았다.

펩타이드 3에서 6은 항진균 활성을 보였으나 비양이온의 아미노산 글리신을 도입하자 항진균 활성이 현저히 감소했다. 예를 들면, 이것은 펩타이드 4(글리신 추가; MIC=2.0mM)와 비교할 때 펩타이드 2(글리신 없음; MIC-0.2mM)의 활동에서 볼 수 있다. 상기 데이터는 길이 7 및 8 아미노산의 고리형 펩타이드들에서 항진균 활동이 있지만, 감소된 양이온의 펩타이드들은 T. rubrum에 대한 항진균이 적다는 것을 보여준다.

고리형 펩타이드들에 의한 지간 백선균 ( Trichophyton interdigitale ) 의 억제

펩타이드 2에서 8에 대한 T. interdigitale의 감수성을 테스트했다. T. interdigitale에 대한 펩타이드 2에서 8의 항진균성 활동은 표 2에 나타나 있다. 펩타이드 2,4, 및 6은 T. interdigitale에 대해 활성화된다.

고리형 펩타이드들에 의한 크립토코쿠스 네오포르만스( Cryptococcus neoformans) 의 억제

펩타이드 6에서 8에 대한 C. neoformans의 감수성은 "효모에 대한 액체배지 희석물의 항진균 감수성 테스트를 위한 표준 방법(Reference Method for Broth Dilution Antifungal Susceptibility Testing of Yeasts); 승인된 표준- 제2판 M27-A)"를 사용하여 테스트했다.

표 2는 양이온 고리형 펩타이드 4 및 6에서 8은 병원균 효모인 C. neoformans에 대해 항진균성을 가진다는 것을 보여준다 (각각 MICs = 1.0 mM, 0.5 mM, 2.0 mM 및 0.5 mM).

선택된 미생물 병원균들에 대한 펩타이드 2의 항미생물성 ( antimicrobial ) 활동

60 개의 선택된 미생물 병원균들에 대한 펩타이드 2의 항미생물성 활동은 표 3에 나와 있다. 보이는 바와 같이, 가장 큰 항미생물성 활동(즉, 가장 낮은 MICs)은 진균, 특히, 피부사상균(dermatophytes)인 Scopulariopsis , brevicaulis , Malassezia-furfur, 비- 알비칸 칸디다 spp , 및 박테리아 E. coli 등에서 지속적으로 나타났다.

고리형 펩타이드 내에서의 이성질체( enantiomeric ) 아미노산 사용의 효과

모두 -L을 가지는 및 모두 -D를 가지는 고리형 양이온 펩타이드들의 억제 효과의 비교는 표 2에 나와 있다. 펩타이드 4 및 6은 아미노산 아르기닌(7 aa) 및 글리신 (1 aa)을 포함하는 모두 -L 및 모두 -D에 동등한 고리형 양이온 펩타이드이다. T. rubrum에 대한 항진균성 활동은 모두 -L 버전보다 모두 -D 버전에서 더 높게 나타난다(각각 MIC = 1.0 및 2.0 mM). T. interdigitale에 대한 항진균성 활동은 모두 -L 버전보다 모두 -D 버전에서 더 높게 나타난다(각각 MIC = 0.25 및 0.5 mM). 효모 C. neoformans에 대한 항진균성 활동은 모두 -L 버전보다 모두 -D 버전에서 더 높게 나타난다(각각 MIC = 0.5 및 1.0 mM). 이것은 상기 펩타이드의 모두 -D 버전은 모두 -L 버전보다 더 활성화된다는 것을 의미한다.

펩타이드 3에서 8은 아미노산 리신(7 aa) 및 글리신(1 aa)을 포함하는 모두-L 및 모두-D에 동등한 고리형 양이온 펩타이드들이다. T. rubrum에 대한 항진균성 활동은 모두 -D 버전보다 모두 -L 버전에서 더 높게 나타난다(각각 MIC = 4.0 및 >4.0 mM). 두 가지 펩타이드는 모두 T. interdigitale에 대한 항진균성 활동을 보이지 않았다 (두 펩타이드들에서 MIC >4.0 mM).

고리형 펩타이드들에서의 용혈 활동

고리형 양이온 펩타이드들에서 용혈 활동은 (표 4), 항진균성 활동을 보이는 농도의 초과 농도에서는 무시해도 좋을 만큼 나타났다.

고리형 펩타이드들의 간독성

펩타이드 2, 9 및 10은 항진균성 활동을 보이는 유사한 농도에서는 간독성을 보이지 않는다.

표 1 - 결합제들

표 2: 선택된 미생물 병원균들에 대한 고리형 펩타이드의 항미생물성 활동 ( MIC ; mM )

표 3: 선택된 미생물 병원균들에 대한 펩타이드 2의 항미생물성 활동( MIC ; mM )

표 4: 적혈구 세포들에 대한 선택된 펩타이드들의 용혈 활동

Claims

하기 화학식 (I)에 따른 아미노산을 포함하고 제약으로 사용하기 위한 고리형 펩타이드 또는 그 변형체:

((X)_l(Y)_m)_n (I)

상기 화학식 (I)에서, l 및 m은 1 내지 10의 정수이고 l 및 m은 모두 0은 아니고, n은 1 내지 10의 정수이고,

X 및 Y는 동일하거나 서로 다르며, 양이온 아미노산으로 이루어진 그룹에서 선택된 아미노산.
제 1 항에 있어서,

상기 펩타이드는 2 내지 50 개의 아미노산을 포함하는 고리형 펩타이드.
제 2 항에 있어서,

상기 펩타이드는 3 내지 15개의 아미노산을 포함하는 고리형 펩타이드.
제 3 항에 있어서,

상기 펩타이드는 5 내지 13개의 아미노산을 포함하는 고리형 펩타이드.
제 1 항 내지 4 항 중 어느 한 항에 있어서,

X 및/또는 Y는 아르기닌(arginine), 리신(lysine) 또는 오르니틴(ornithine)인 고리형 펩타이드.
제 1 항 내지 제 5 항 중 어느 한 항에 있어서,

X 및 Y는 동일하고, 아르기닌 또는 리신인 고리형 펩타이드.
제 6 항에 있어서,

X 및 Y는 동일하고 아르기닌인 고리형 펩타이드.
제 1 항 내지 7 항 중 어느 한 항에 있어서,

X 및/또는 Y는 D-아미노산인 고리형 펩타이드.
제 1 항 내지 제 7 항 중 어느 한 항에 있어서,

X 및/또는 Y는 L-아미노산인 고리형 펩타이드.
제 1 항 내지 제 9 항 중 어느 한 항에 있어서,

ㅣ 및 m은 0 내지 7 사이의 정수이고 n은 1 내지 10 사이의 정수인 고리형 펩타이드.
제 1 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 펩타이드는 R-R-R-R-R-R-R인 고리형 펩타이드.
펩타이드의 2개의 말단 아미노산 잔기(terminal amino acid residues) 사이의 펩타이드 본드를 형성하게 할 수 있는 커플링제를 이용한 펩타이드의 반응에 의하여 화학식 (I)의 펩타이드를 고리화(cyclising)하는 단계를 포함하는 제1 내지 제 11 항 중 어느 한 항의 펩타이드 제조 공정.
제 12 항에 있어서,

상기 커플링제는 HATU - O -(7-아자벤조트리아졸-1-일)-N,N,N',N'-테트라메틸우로니움헥사플루오로포스페이트( HATU - O-(7- Azabenzotriazol-l-yl)-N,N,N',N'-tetramethyluroniumhexafluorophosphate)인 펩타이드 제조공정.
제 12 항 또는 제 13 항의 공정에 의해 얻어진 고리형 펩타이드(cyclised peptide).
제 1 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 의한 제약적으로 효과적인 양의 펩타이드, 제약적으로 적당한 캐리어, 첨가제 또는 희석제를 포함하는 조성물.
미생물 감염의 치료에 사용하는 제약의 생산에 있어서, 하기 화학식 (I)에 따른 아미노산을 포함하는 고리형 펩타이드 또는 그 변형체의 사용:

((X)₁(Y)_m)_n (I)

l 및 m은 0 내지 10의 정수이고 l 및 m 모두 0은 아니고, n은 1 내지 10의 정수이고, X 및 Y는 동일하거나 서로 다른, 양이온 아미노산으로 이루어진 그룹에서 선택된 아미노산.
제 16 항에 있어서,

상기 감염은 진균감염인 고리형 펩타이드 또는 그 변형체의 사용.
제 17 항에 있어서,

상기 진균감염은 칸디다균(Candida spp .), 표피사상균( Epidermophyton spp.), 엑소피알라 ( Exophiala spp .), 소포자균 ( Microsporum spp .), 백선균( Trichophyton spp .), 티네아 ( Tinea spp .), 아스페르길루스( Aspergillus spp.), 블라스토마이세스 ( Blastomyces spp .), 블라스토스치조마이세스( Blastoschizomyces spp .), 콕시디오이테스(Coccidioides spp.), 크립토코크스 ( Cryptococcus spp .), 히스토플라즈마 ( Histoplasma spp .), 파라콕시디오마이세스( Paracoccidiomyces spp .), 스포로트릭스 ( Sporotrix spp .), 아브시디아( Absidia spp .), 클라도피알로포라 ( Cladophialophora spp .), 폰세카에아( Fonsecaea spp .), 피알로포라 ( Phialophora spp .), 라카지아( Lacazia spp.), 아르트로그라피스 ( Arthrographis spp .), 아크레모니움(Acremonium spp .), 악티오마두라( Actinomadura spp .), 아포피소마이세스 ( Apophysomyces spp .), 에몬시아( Emmonsia spp .), 바시디오볼루스 ( Basidiobolus spp .), 보베리아( Beauveria spp.), 크리소스포리움 ( Chrysosporium spp .), 코니디오볼루스 ( Conidiobolus spp .), 쿤닝하멜라( Cunninghamella spp .), 푸사륨( Fusarium spp .), 지오트리쿰( Geotrichum spp.), 그라피움 ( Graphium spp .), 렙토스페리아 ( Leptosphaeria spp .), 말라세지아( Malassezia spp .), 무코르 ( Mucor spp .), 네오테스투디나( Neotestudina spp.), 노카르디오푸시스 ( Nocardiopsis spp .), 파에실로마이세스( Paecilomyces spp.), 포마 ( Phoma spp .), 피에드라이아 ( Piedraia spp .), 뉴모시스티스( Pneumocystis spp .), 슈달레스케리아 ( Pseudallescheria spp .), 피레노하에타( Pyrenochaeta spp .), 리조무코르 ( Rhizomucor spp .), 리조푸스( Rhizopus spp.), 로도토룰라 ( Rhodotorula spp .), 사카로마이세스 ( Saccharomyces spp .), 스케도스포리움( Scedosporium spp .), 스코풀라이옵시스 ( Scopulariopsis spp .), 스포로볼로마이세스( Sporobolomyces spp .), 신세팔라스트룸 ( Syncephalastrum spp .), 트리코데르마( Trichoderma spp .), 트리코스포론 ( Trichosporon spp .), 울로클라디움( Ulocladium spp .), 우스틸라고 ( Ustilago spp .), 베르티킬리움( Verticillium spp .), 왕기엘라 ( Wangiella spp .) 속의 진균류로부터 파생된 진균 병원체에 의해 일어나는 고리형 펩타이드 또는 그 변형체의 사용.
제 17 항에 있어서,

상기 진균감염은 피부사상균 감염(dermatophyte infection)인 고리형 펩타이드 또는 그 변형체의 사용.
제 19 항에 있어서,

상기 피부사상균 감염(dermatophyte infection)은 티네아 감염(Tinea infection)인 고리형 펩타이드 또는 그 변형체의 사용.
제 19 항에 있어서,

상기 피부사상균 감염(dermatophyte infection)은 백선균(Trichophyton), 표피사상균(Epidermophyton) 또는 소포자균(Microsporum) 속의 피부사상균에 의해 일어나는 고리형 펩타이드 또는 그 변형체의 사용.
제 21 항에 있어서,

상기 피부사상균(dermatophyte)은 백선균속(Trichophyton spp)인 고리형 펩타이드 또는 그 변형체의 사용.
제 22 항에 있어서, 상기 피부사상균(dermatophyte)은 지간 백선균( Trichophyton inter digitale )인 고리형 펩타이드 또는 그 변형체의 사용.
상기 피부사상균(dermatophyte)은 적색백선균(Trichophyton rubrum)인 고리형 펩타이드 또는 그 변형체의 사용.
제 17 항 내지 제 24 항 중 어느 한 항에 있어서,

상기 진균감염은 조갑진균증(onychomycosis)인 고리형 펩타이드 또는 그 변형체의 사용.
상처 치료를 위한 제약의 제조에 있어서, 하기 화학식 (I)에 따른 아미노산을 포함하는 고리형 펩타이드 또는 그 변형체의 사용:

((X)_l(Y)_m)_n (I)

l 및 m은 0 내지 10의 정수이고 l 및 m은 모두 0은 아니고, n은 1 내지 10의 정수이고, X 및 Y는 동일하거나 서로 다른, 양이온 아미노산으로 이루어진 그룹에서 선택된 아미노산.
하기 화학식 (I)에 따른 아미노산을 포함하는 치료적으로 유효한 양의 고리형 펩타이드 또는 그 변형체를 대상물에 투여하는 단계를 포함하는 미생물 감염을 방지 또는 치료하는 방법:

((X)_l(Y)_m)_n (I)

l 및 m은 0 내지 10의 정수이고 l 및 m은 모두 0은 아니고, n은 1 내지 10의 정수이고, X 및 Y는 동일하거나 서로 다른, 양이온 아미노산으로 이루어진 그룹에서 선택된 아미노산.
제 27 항에 있어서,

상기 미생물 감염은 진균감염인 미생물 감염을 방지 또는 치료하는 방법.
제 27 항 또는 제 28 항에 있어서,

상기 펩타이드 또는 펩타이드 변형체의 상기 치료적으로 유효한 양이 국소적으로(topically) 투여되는 미생물 감염을 방지 또는 치료하는 방법.
제 29 항에 있어서,

상기 펩타이드 또는 펩타이드 변형체의 상기 치료학적으로 유효한 양은 상기 대상물의 피부 또는 손톱에 국소적으로(topically) 투여되는 미생물 감염을 방지 또는 치료하는 방법.