KR20080065575A - 슬라이드 적층 챔버 - Google Patents

Abstract

본 발명은 세포 적층 챔버 및 챔버를 이용하여 현미경 슬라이드 상에 생물학적 샘플을 적층하기 위한 방법에 관한 것이다. 챔버는 슬라이드 상의 샘플 수용 영역 상에 제거가능하게 밀봉되며 슬라이드 표면으로부터의 샘플의 흡입을 허용하도록 밀봉가능한 개구를 갖는다. 챔버는 피펫에 의한 슬라이드 표면의 모든 영역의 흡입을 허용하도록 구성되며 챔버는 반전될 때 완전히 배수된다. 챔버는 챔버를 재사용가능하게 만들기 위해 일회용 라이너로 피팅될 수 있다.

적층 챔버, 현미경 슬라이드, 생물학적 샘플, 피펫, 라이너

Description

슬라이드 적층 챔버 {SLIDE DEPOSITION CHAMBER}

본 발명은 현미경 슬라이드에 생물학적 물질을 적층(deposit)시키는 것에 관한 것이다. 좀 더 상세하게, 본 발명은 적층 챔버를 이용하여 현미경 슬라이드에 다양한 물질을 적층시키기 위한 장치 및 방법에 관한 것이다. 챔버는 일회용(disposal), 또는 본 발명의 실시예에서 설명된 바와 같이 재사용 가능한 비일회용(nondisposal)일 수 있다.

실험실에서 수행되는 진단 과정은 환자로부터 생물학적 물질 표본을 수집함으로써 시작하는 것이 공통적이다. 표본은 혈액, 타액, 소변, 상피 조직 도말(epithelial smear), 정액 등을 포함할 수 있지만, 이들로 제한되지는 않는다. 면역 세포 화학(immunocytochemical), 면역 형광법(immunofluorescence) 또는 FISH(형광동소보합법-Fluorescence In Situ Hybridization) 착색 및 후속하는 현미경 분석을 목적으로 부유액으로부터 고정된 세포 또는 세포 핵(cell nuclei)의 형태인 이러한 표본을 현미경 슬라이드 상에 적층시키는 방법이 존재한다. 적층 방법은 용도에 따라 변경된다.

예를 들어, 현미경 분석을 위해 슬라이드 위에 혈액 샘플을 적층시키기 위해 도말 표본 작업(smear)이 이용될 수 있다. 도말 표본 작업은 수 마이크로리터의 응고 방지 처리된 혈액 한 방울을 슬라이드의 일 단부에 위치시키고, 다른 깨끗한 슬라이드를 이용하여 한번에 혈액을 도말 표본 작업하는 것을 포함한다. 적절하게 수행되면, 도말 표본 작업은 대부분의 슬라이드 표면을 덮는 비교적 고른 단층의 혈액 세포를 형성한다. 그런 다음, 슬라이드는 대기 상태에서 건조될 수 있다. 건조 과정은 우선 세포를 유리 슬라이드에 부착시킨다. 혈액 도말을 준비하는 것은 사용자에 따라 크게 좌우되는 공정일 수 있다. 도말 표본 작업은 전혈 슬라이드를 준비하는데 사용될 수 있다. 이러한 과정을 자동화하려는 시도는 대부분은 성공하지 못했다.

다른 접근 방법은 "적하(dropping)" 방법이다. 적하는 양수, 혈액, 골수 천자액을 포함하여 다양한 원천(origin)의 세포로부터 FISH 분석을 위해 고정된 핵을 준비하기 위한 공통적인 방법이다. 이러한 세포는 샘플이나 배양된 세포로부터의 1차 세포일 수 있다. 샘플은 카노이 고정액(Carnoy fixative; 메탄올:아세트산이 3:1) 등의 유기 용매에 부유될 수 있다.

고정된 핵의 부유액은 소정 높이(보통 15 내지 20 cm)로부터 유리 슬라이드에 하나의 방울로 적하될 수 있다. 슬라이드 상으로의 적하로 인한 충격 때문에, 부유액은 동심으로 퍼져서, 슬라이드의 폭을 덮을 수 있으며, 이러한 폭은 부유액이 적하되는 높이에 따라 결정된다. 그런 다음, 용매가 증발되어 유리에 제공된 슬라이드에 부착된 세포핵이 깨끗하고 적절하게 처리된다. 하지만, 적층의 패턴과 위치는 예측 불가능하고, 적층된 샘플의 양만 부분적으로 제어될 수 있다. 세포의 분배 및 슬라이드의 최종 밀도는 일반적으로 예측 불가능하다. 그러나 만약 세포 핵의 양자화 및 체계적인 스캐닝을 원하지 않을 경우, 이러한 방법은 대부분의 경우 적절하다.

적층 패턴을 더 잘 제어하고 샘플 적층 과정을 자동화하기 위해서, 슬라이드에 세포나 세포핵을 위치시키는 원심력을 이용하는 방법이 개발되었다. 슬라이드에 세포를 위치시키기 위해 적절한 힘을 이용하는 원심 분리로 인해 일부 샘플 타입은 부착될 수 있지만, 그렇지 않은 경우 샘플 타입은 슬라이드 표면에 부착되지 않는다. 전용 원심 분리기의 현미형 슬라이드에 물질을 적층시키기 위해 설계된 사이토스핀(Cytospin)이라고 칭하는 원심 분리 장치는 샨돈 코포레이션(Shandon Corporation)에서 제조되며, 도 1에 도시되었다.

사이토스핀(10)은 도 1에 도시된 바와 같이 슬라이드(30)를 받아들이고 홀더/브래킷(40) 상으로 장착 가능한 챔버(20)를 포함한다. 챔버는 슬라이드가 약간 경사지고 샘플 부유액이 피펫(pipette;60)의 도움으로 개구 또는 포트(50)를 통해 로딩되는 위치에 놓여질 수 있다.(도 2a) 부유액(70)은 부유 세포(75)를 포함한다. 부유 세포는 공지된 스톡스 방정식의 변량에 의해 예상될 수 있는 침강 속도로 즉시 침전하기 시작한다. 따라서, 세포(75)를 포함하는 초기 펠릿이 도 2a에 도시된 바와 같이 사이토스핀 챔버의 바닥에 형성되고, 그 크기는 챔버 로딩 및 원심분리 시작 사이의 시간에 비례한다. 다음으로, 전체 사이토스핀 조립체(10)(챔버(20), 슬라이드(30), 홀더(40))는 (도시되지 않은) 원심분리기(80)에 놓인다. 원심분리기를 가속하면, 액체(70)는 원심력(80)의 영향을 받아서 도 2b에 도시된 바와 같은 수직 위치로 점진적으로 상승한다. 원심분리 도중에, 부유액은 슬라이 드(30)에 대해 압축되고 세포는 도 2c에서 도시된 바와 같이 슬라이드 상으로 가압된다. 원심분리기가 정지하면, 세포(75)는 슬라이드(30)에 부착된 채로 있고 나머지 표면에 뜨는 부유액(70)은 도 2d에 도시된 바와 같이 챔버(20)의 원래 위치로 복귀 유동한다.

원심분리 분석될 표본에 고정액과 같은 처리액을 가하기 위해 원심분리기를 사용하는 장치 및 방법은 더블유. 제이. 헤이즈(W.J. Hages)에게 허여된 미국 특허 제5,942,129호에 개시되어 있다. 표본 재료가 검사를 위해 슬라이드로 원심분리되도록, 현미경 슬라이드와 결합하기 위한 장착 플랜지를 구비한 원심분리 샘플 챔버가 제공된다. 샘플 챔버는 상부 공간과, 유체 통로에 의해 연결된 하부 표본 보유 부분을 가진다. 표본 보유 부분은 원심분리 전에 표본을 보유하기 위해 하향 연장하는 하부 레그를 가지는 하부 공동을 포함한다. 상부 공동과 연통하는 상부 중공 레그부는 챔버가 원심분리 전에 정지되어 있는 동안에 처리액을 보유한다. 원심분리가 시작되면, 챔버는 상부 및 하부 레그가 경사지도록 기울어져서, 처리액은 원심력에 의해 상부 공동 안으로 유입되어 그 안에서 보유된다. 원심력은 동시에 표본이 하부 레그부로부터 하부 공동 및 배출 포트를 통과해서 현미경 슬라이드로 유동하도록 작용한다. 원심분리가 멈추면, 챔버는 중력에 의해 정지 위치로 복귀하여서, 처리액은 중력에 의해 상부 공동으로부터 상기 통로를 통과해서 하부 레그 내로 떨어진다. 원심분리가 재시작되면, 챔버는 하부 레그가 경사지도록 기울어지고, 원심력은 처리액이 하부 레그부로부터 원심력을 가하기 위한 배출 포트를 통해 현미경 슬라이드 상의 표본으로 유동시킨다.

원심력에 의해 슬라이드 유리 상에 고체 물질을 위치시키기 위한 또 다른 장치는 엠. 토야(M. Toya)에게 허여된 미국 특허 제4,853,188호에 개시되어 있다. 이 장치는 원심 분리기 내에서 회전한다. 상기 특허에 따르면, 원심 분리기는 합성 수지를 형성하는 몰드에 의해 일체로 형성되어 일회용일 수 있다. 장치의 일부를 형성하는 기부판은 보유되는 홀더 상에 제공된 칼라와 쉽게 결합하도록 탄성을 가진다.

다른 접근법으로서, 에이. 이. 로린쯔(A.E. Lorincz)에게 허여된 미국 특허 제6,567,214호에는 생물학적 유체 및 조직 샘플에서 세포를 착색하고 관찰하는, 현장 수집을 위해 설계된 현미경 슬라이드가 개시되어 있다. 상기 특허에 따르면, 상기 슬라이드는 감염체의 존재에 대해 미량의 임의의 생물학적 유체 또는 조직 샘플을 포인트-오브-케어(point-of-care) 스크리닝 가능하게 하고, 그 후 슬라이드는 배양 및/또는 최종 인증을 위해 중앙 실험실로 운반될 수 있다.

본 명세서에서 인용된 모든 참조 문헌은 추가의 또는 대안적인 세부 사항, 특징, 및/또는 기술적 배경을 교시하기 위해 적합한 부분에서 참조되어 합체된다. 재료 표본을 현미경 슬라이드 상에 적층하기 위한 기존의 다양한 방법에 단점이 있다는 것을 알 수 있다. 세포 화학 착색 및 상이한 세포 계수를 위해 도말 표본 작업이 임상 혈액학에서 일상적으로 사용되지만, 그것을 자동화하기는 어렵다. 가장 대중적인 적하(dropping) 방법과 관련하여, 슬라이드 상에서 세포의 분포 및 최종 밀도는 예상이 불가능하다. 앞서 설명된 사이토핀 기술에 있어서, 슬라이드(30) 상의 적층 주위에서 부유액의 초기 침전 및 이동(도 2a 내지 도 2d에서 70)은 동질 의 층을 형성하는 것을 방해할 수 있고, 이것은 바람직하지 못하다. 또한, 부유액(70)의 이동은 미약하게 부착된 세포를 슬라이드의 표면으로부터 세척할 수 있다.

사이토스핀의 불규칙적인 침전 문제를 피하기 위해, 사이토버킷(Cytobucket) 기술이 또한 존재한다. 사이토버킷은 일반적으로 연구 환경에서 고정된 세포 또는 핵을 슬라이드 상에 적층하기 위해서만 사용된다[예를 들어, 크라이더(Krider) 등에게 허여된 미국 특허 제5,985,595호 참조]. 사이토버킷은 소정의 범용 원심분리기 및 재사용 가능한 챔버에 맞도록 만들어진 원심분리기 캐리어로 구성된다. 사용자가 선택하는 통상의 슬라이드는 조립체를 완성시키고, 챔버의 바닥을 형성한다. 캐리어는 스윙아웃형(swing-out type)의 로터를 장착한다. 표본은 수평 상태로 조립체(챔버-슬라이드-홀더) 내에 로딩되며, 세포 부유액이 슬라이드 상의 적층 영역 위에 직접 분배된다. 세포 침전 패턴은 처음에는 원심 분리의 개시 전에 0의 기준 중력에서 분배된 부유액 내의 세포 분포를 반영할 수 있다. 초기의 부유액 분포가 적절한 혼합으로 불규칙해지면, 슬라이드 상에 불규칙한 세포 분포가 달성된다. 조립체가 가속되면, 캐리어는 원심력으로 인해 점차적으로 수직이 된다. 측방향 가속이 높지 않은 한, 세포는 대체로 최초에 착지된 곳에 부착된 상태로 유지된다. 또한, 캐리어 액체의 메니스커스가 크지 않은 한, 메니스커스는 교란되지 않으며 원심분리기가 감속됨에 따라 세포를 이탈시킬 것이다. 따라서, 사이토버킷 기술은 자동화된 스캐닝을 위한 세포의 최적 적층의 능력을 갖지만, 상기 단점들은 본 발명의 실시예들에서 더 설명되는 바와 같이 해소된다.

본 발명은 주문 제작 현미경 슬라이드 상에 재료를 적층하기 위한 장치에 관한 것이다. 이 장치는 슬라이드에 밀봉 가능하게 부착되고 또한 슬라이드로부터 제거될 수 있는 적층 챔버를 포함하며, 적층 챔버는 일회용이거나 재사용 가능하다. 이 장치는 시험관 진단 시험 환경에 사용될 수 있으며, 원심분리에 적합하다.

일 실시예는 생물학적 샘플(세포, 세포기관, 세포외 물질 및 세포내 물질, 이들의 혼합체를 포함함)를 현미경 슬라이드 상에 적층하기 위한 장치 또는 도구에 관한 것이다. 현미경 슬라이드는 생물학적 샘플을 위한 수용 영역을 갖는다. 챔버는 상부, 중간부 및 바닥부를 갖는다. 바닥부는 현미경 슬라이드의 수용 영역 위에 끼워지도록 구성된 풋프린트(footprint)를 갖는다. 중간부는 4개의 평면을 포함하는 절두형 다면체를 포함할 수 있다. 상부는 원통형 개구 또는 구멍을 구비하여 생물학적 표본이 슬라이드 표면의 모든 영역으로 주입되거나 또는 모든 영역으로부터 흡입될 수 있게 한다. 본 발명은 구멍을 폐쇄하고 밀봉하기 위한 클로져 또는 스토퍼를 포함하지만 이에 제한되지 않는 수단과, 챔버의 바닥부를 슬라이드에 부착하기 위한 접착 재료 또는 고정 구조체를 포함하지만 이에 제한되지 않는 기타 수단을 제공한다.

일 실시예에서, 챔버는 접착제를 사용하여 현미경 슬라이드에 제거 가능하게 고정된다. 다른 실시예에서, 챔버에는 슬리브형 플랜지가 끼워지고, 상기 플랜지는 챔버를 슬라이드에 대해 제거 가능하게 밀봉하기 위해 현미경 슬라이드의 수용 영역 상에 가압된다.

일 실시예에서, 챔버는 챔버 위로 끼워지는 쉘(shell)을 통해 현미경 슬라이드 상에 가압된다. 챔버 및 현미경 슬라이드를 둘러싸는 쉘은 원심분리기 버킷 내로 스냅결합된다. 다른 태양에서는, 압축판이 세포 적층 챔버 위에 위치되어, 원심분리기 버킷 내의 스프링 장전식 레버 핸들에 의해 작동된다.

더욱 구체적으로, 일 실시예는 현미경 슬라이드 상의 수용 영역 위에 끼워지도록 구성된 풋프린트를 갖는 챔버로서, 상부, 중간부 및 바닥부를 구비하고, 상부는 현미경 슬라이드의 표면상에 생물학적 샘플이 적층 가능하도록 구성된 개구를 형성하는 챔버와, 개구를 폐쇄 및 밀봉하기 위한 폐쇄 구조체를 포함하는 장치에 관한 것이다. 본 발명의 일 태양은 접착 재료로 처리되는 수용 영역에 관한 것이며, 접착 재료는 챔버를 현미경 슬라이드에 대해 부착 및 제거하는 것을 허용한다. 본 발명의 다른 태양은 챔버의 내측 벽과 일치하고 그것에 끼워지는 라이너와, 챔버의 개구에 제거가능하게 부착되는 네크 부분과, 챔버의 바닥 부분의 에지에 제거가능하게 부착되는 상기 라이너의 플랜지 부분과, 챔버의 외측 벽과 일치하고 그 위에 끼워지는 쉘과, 플랜지를 수용 영역에 대하여 밀봉하기 위해 쉘 상에 가압함으로써 챔버를 현미경 슬라이드 상의 수용 영역 위에 고정하는 수단을 포함한다.

다른 실시예는 세포 적층 챔버에 생물학적 물질을 적층하기 위한 방법을 제공한다. 이 방법은 생물학적 샘플의 적층을 위해 수용 영역을 갖춘 현미경 슬라이드 및 수용 영역에 끼워 맞춤되도록 구성된 풋프린트를 갖춘 세포 적층 챔버를 제공하는 단계를 포함한다. 현미경 슬라이드는 소수성 물질을 포함하는 화학적 배킹(backing)으로 처리된다.

일 태양에서, 실시예는 생물학적 샘플을 위한 수용 영역을 갖는 현미경 슬라이드 및 수용 영역에 끼워 맞춤되도록 구성된 풋프린트를 갖추고 개구를 갖춘 세포 적층 챔버를 제공하며, 화학적 배킹으로 현미경 슬라이드를 처리하는 단계와, 챔버의 개구 위로 끼워 맞춤되는 네크부 및 챔버의 바닥부 에지 위로 끼워 맞춤되는 플랜지를 갖는 라이너로 챔버를 끼워 맞춤하는 단계와, 수용 영역 위에 챔버를 위치시키고 현미경 슬라이드 상에 챔버를 고정시키는 단계와, 적층 챔버 상의 개구를 통해 현미경 슬라이드로 생물학적 물질을 주입하는 단계와, 챔버의 상부 포트를 폐쇄 및 밀착시키는 단계와, 생물학적 샘플의 시험관 진단 시험을 수행하는 단계와, 포트를 개방시키는 단계와, 포트를 통해 생물학적 샘플의 상청액을 흡입하는 단계의 방법을 제공한다.

다른 실시예에서, 방법은 상청액을 흡입시킨 후에 챔버의 상부 포트를 폐쇄 및 밀착시키는 단계와, 챔버 위로 압축판을 위치시키는 단계와, 현미경 슬라이드 상의 수용 영역으로 챔버를 밀착시키기 위해 압축판을 가압하는 핸들을 작동시키는 단계를 더 포함한다.

도 1은 종래 기술에 따라, 원심 분리 동안 슬라이드 상의 시료 적층에 사용되는 챔버, 슬라이드 및 홀더 브래킷의 조립체를 도시한 사이토스핀 장치의 사시도이다.

도 2a는 도 1의 사이토스핀의 측면도로서, 종래 기술에 따라, 샘플 표본을 사이토스핀 챔버로 투여하는 것을 도시한다.

도 2b는 종래 기술에 따른 도 2a의 사이토스핀의 원심 분리 동안의 측면도이다.

도 2c는 도 2b의 원심 분리 동안의 사이토스핀의 측면도로서, 종래 기술에 따른 상청액 표본으로부터의 세포 분리를 도시한다.

도 2d는 도 2c의 사이토스핀의 측면도로서, 종래 기술에 따른 원심 분리의 영향으로 슬라이드에 세포가 적층되는 것을 도시한다.

도 3a는 본 발명에 따라, 시험관 진단 시험용 샘플 표본을 위치시키기 위해 사각 수용부 및 봉쇄 영역을 갖는 현미경 슬라이드의 평면도 및 측면도이다.

도 3b는 본 발명에 따라, 시험관 진단 시험용 샘플 표본을 위치시키기 위해 직사각 수용부 및 봉쇄 영역을 갖는 현미경 슬라이드의 평면도 및 측면도이다.

도 4a는 본 발명에 따라, 또한 본 발명의 현미경 슬라이드에 부착된 사각 풋프린트를 갖춘 세포 적층 챔버를 도시한 본 발명의 실시예의 일 태양의 평면도 및 측면도이다.

도 4b는 본 발명에 따라, 또한 본 발명의 현미경 슬라이드에 부착된 직사각 풋프린트를 갖춘 세포 적층 챔버를 도시한 본 발명의 실시예의 다른 태양의 평면도 및 측면도이다.

도 5a는 도 4a의 세포 적층 챔버의 사시도로서, 본 발명에 따라, 현미경 슬라이드에 사각 풋프린트를 갖춘 챔버의 조립체를 도시한다.

도 5b는 도 4b의 세포 적층 챔버의 사시도로서, 본 발명에 따라, 현미경 슬라이드에 직사각 풋프린트를 갖춘 챔버의 조립체를 도시한다.

도 6은 본 발명에 따라, 챔버의 상청액이 피펫에 의해 흡입되는 것을 나타낸 것으로서, 본 발명의 세포 적층 챔버 및 현미경 슬라이드의 조립체의 도면이다.

도 7은 본 발명에 따라, 운반 및/또는 원심 분리의 목적으로 캐리어에 로딩된 본 발명의 다중 세포 적층 챔버 조립체를 도시한 도면이다.

도 8a 및 도 8b는 챔버 위로 끼워지는 쉘에 의해 챔버를 슬라이드 표면에 가압함으로 라이너의 플랜지가 현미경 슬라이드에 밀착되는 곳에서 세포 적층 챔버와 함께 사용되는 본 발명의 일회용 슬리브형 라이너의 예를 도시한 도면이다.

도 9는 스프링 하중 레버 또는 핸들에 의해 슬라이드에 챔버를 가압하는 압축판을 사용해서 현미경 슬라이드에 본 발명의 세포 적층 챔버가 장착되는 것을 도시한 다른 실시예의 도면이다.

도면들을 참조하면, 도 3a는 전체적으로 도면부호 100으로 지시된 현미경 슬라이드를 도시한다. 도 3a에는 직사각형 형상으로 도시되어 있으나, 슬라이드는 용도에 따라 다른 형상일 수 있다. 슬라이드는 플라스틱 또는 유리로 제조될 수 있다. 슬라이드는 본 기술분야의 당업자에게 널리 공지된 통상적인 길이, 폭 및 두께를 가진다. 도 4a 및 도 4b는 도 3a 및 도 3b의 슬라이드에 각각 밀봉식으로 장착 가능한 본 발명의 셀 적층 챔버를 도시한다. 챔버는 본 발명의 실시예에 추가 설명된 바와 같이 접착식으로 또는 기계적 수단 만에 의해 장착될 수 있다. 또한, 용도에 따라, 표본은 슬라이드 상에 챔버를 장착하기 전에 또는 후에 슬라이드 상에 도입될 수 있다.

통상의 사용시에, 수성(aqueous) 또는 비수성(non-aqueous) 액체, 액상 시약, 생물학적 유체 및/또는 생물학적 조직 섹션(들)을 포함하는 샘플 표본은 슬라이드의 일부에 도입된다. 현미경 또는 다른 기술을 이용하여 샘플 표본에 대한 분석을 수행하기 전에, 육안에 의한 대략적인 분석을 포함하여, 광, 전자 또는 형광 현미경 사용에 의해 향상된 시각화를 위한 처리 전 슬라이드 또는 플레이트 상의 샘플은 건조되거나, 고정액에 의해 배치되거나, 처리되지 않은 상태일 수 있다. 샘플은 자연 상태로 분석되거나 또는 시각화를 개선하기 위하여 1 이상의 액체 염료들에 의한 처리를 필요로 할 수도 있다. 또한, 분자 생물학적 기술에 의한 처리는, 예를 들면 단일 클론, 다클론성 항체, 분자 탐침에 의한 조직내핵산교잡법(in-situ hybridization), 및/또는 이들의 액체 검출 시약에 의한 처리를 포함할 수 있다. 슬라이드의 조작 또는 루틴 분석 중에, 샘플 또는 액체 시약은 슬라이드로부터 유출 또는 슬라이드의 다른 부분으로 흐르거나 이동될 수 있으며, 또는 슬라이드가 다른 대상과 접촉하게 되면 "위크 오프(wick off)"될 수 있기 때문에, 액체 샘플 또는 시약의 전부 또는 일부가 손실될 수 있다. 이런 의도되지 않은 유출, 또는 원치않는 혼합, 또는 다른 샘플 또는 액체 시약의 오염이 억제되는 것이 바람직하다. 이하에서 설명되는 본 발명의 실시예들은 슬라이더에서 액체 또는 액체 샘플의 이동을 방지하기 위해 경계부에 의해 형성되는 봉쇄 영역과, 예를 들면 슬라이드가 운반되거나 슬라이드 상의 샘플에 있는 세포의 적층을 위해 슬라이드에 원심력이 가해질 때 샘플이 유출되는 것을 방지하도록 봉쇄 경계부에 걸쳐 부착된 챔버를 제공한다. 본 발명의 챔버는 이하의 실시예에 설명되는 바와 같이 용도에 따라 일회용이거나 일회용이 아닐 수 있다.

도 3a에 도시된 실시예에서, 슬라이드(100)는 동일한 도 3a에 도시된 슬라이드의 측면도에서 확인할 수 있는 바와 같이 상부면(110) 및 하부면(120)을 가진다. 직사각형, 원형, 삼각형, 사다리꼴 등과 같은 임의의 다른 형상일 수 있지만 사각형 형상을 갖는 액체 봉쇄 경계부(130)가 상부면(110)의 일부에 배치된다. 예를 들면, 도 3b는 직사각형 액체 봉쇄 경계부(130')가 준비된 동일한 슬라이드(100)를 도시하고 있다. 샘플 표본을 수용하는 봉쇄 영역의 형상이 본 명세서의 도면에 도시된 형상에 제한되지 않는다는 것을 본 기술분야의 당업자는 이해할 것이다. 예를 들면, 형상은 원형 또는 다각형일 수 있다. 대응 챔버는 봉쇄 경계부와 일치하는 풋프린트를 가진다. 챔버는 슬라이더 상에 표본(들)의 샘플을 적층하기 위해, 또는 슬라이드에 이미 배치되어 있는 표면(들)에 영향을 미치는 작용제를 도입하기 위해 사용될 수 있다.

도 3a 또는 도 3b의 봉쇄 경계부(130 또는 130') 각각은 슬라이드(100)의 상부면(110)의 수용 및 봉쇄 영역(140 또는 140') 각각을 둘러싼다. 봉쇄 경계부(130, 130')는 봉쇄 영역(140, 140')의 주위에 액체 차단부를 형성한다. (도시되지 않은) 액체 또는 액체 샘플이 분석을 위해 슬라이드(100)의 봉쇄 영역(140, 140')으로 도입되면, 봉쇄 경계부(130, 130')는 봉쇄 영역(140, 140')으로부터 액체 또는 액체 샘플의 확산, 누설 또는 이동을 억제하여, 샘플이 슬라이드(100)에서 별개의 한정 위치에 유지되도록 한다. 본 명세서에서 사용된 액체 또는 액체 샘플이라는 용어는 슬라이드에 위치되도록 구현된 액체 재료 또는 액체의 생물학적 샘 플(예를 들면, 혈액, 소변, 혈장, 또는 뇌척수액)을 지시한다.

도 3a 및 도 3b에 도시된 실시예에서, 슬라이드(100)는 표지(label)를 부착하기 위한 또는 기록하기 위한 특정 마킹 영역(150)을 추가로 갖는다. 마킹 영역이 형성된 슬라이드의 부분은 "프로스팅(frosted)", 즉 에칭 또는 연마되거나, 다른 실시예에서는 불투명 에폭시 또는 페인팅된 코팅일 수도 있다. 마킹 표면을 형성하는 다른 수단은 당해 기술 분야의 숙련자에게 명백할 것이다.

봉쇄 경계부(130)를 형성하는 재료는 휘발성 용매 내에 용해되는 발액(liquid repellant) 화합물을 포함하는 혼합물일 수도 있다. 예컨대, 상기 혼합물은 당해 기술분야에 널리 공지된 방식으로 용매와 혼합되는 무기산 및 알킬 폴리실록산일 수도 있다. 유리 표면에 영구적으로 또는 적어도 사실상 영구적으로 접합하고 본 발명에 따라 작용할 수 있는 다른 폴리실록산, 실리콘 및 실리콘 유체가 사용될 수 있다.

또한, 봉쇄 경계부 재료는 원심 분리 중과 같은 운동 시와 안정 상태 모두에서 최적 셀 적층 특성을 제공하는 두께(t) 및 폭(w)을 갖는다. 경계부의 두께는 약 0.01 내지 약 0.2 밀리미터(㎜)이고, 폭은 약 1 내지 약 2.5 ㎜인 것이 바람직하다. 당해 기술분야의 숙련자는 부유액(suspension)이 봉쇄 영역 내에 위치될 때 슬라이드 상으로의 셀 침하(settle)의 최대 밀도를 갖는 것이 몇몇 실시예에서 바람직하다. 이 결과를 달성하기 위해, 부유액은 가능한 한 단층의 셀에 대해 폐쇄되도록 하는 두께이어야 한다. 부유액의 초과량은 슬라이드 상으로의 수직 침하 시에 서로 방해할 수도 있는 셀의 응괴(conglomeration)를 가져올 것이다. 실시예 의 일 태양은 슬라이드 상으로의 침하 시에 클러스터(cluster)를 형성하지 않으면서 셀을 서로 지나가도록 돕기 위해 슬라이드 상의 부유액 내에 샘플의 계량된 진동을 포함한다. 동시에, 봉쇄 영역 내의 부유액은 봉쇄 경계부의 두께에 의해 제공되는 댐의 높이를 넘쳐 유동하지 않도록 이러한 소정의 체적을 갖는다. 부유액 액체의 체적은 봉쇄 경계부의 두께 및 봉쇄 영역의 면적에 따라 좌우될 것이라는 것을 알게 된다.

본 발명의 현미경 슬라이드는 예컨대, 부가적인 진동 또는 원심 분리에 의한 g-힘(인공중력)의 추가 부과 없이 슬라이드 상에 적층될 때 안정 상태의 셀의 인-시츄(in-situ) 분석을 위해 사용될 수 있지만, 더 높은 셀의 밀도가 요구되는 원심 분리기 상의 슬라이드를 장착할 수 있는 것도 바람직하다. 이러한 목적을 위해, 또한 슬라이드를 취급하면서 누설 방지 커버를 제공하는 일반적인 목적을 위해, 실시예의 태양은 슬라이드 상에 밀봉 가능하게 장착되고 장착 해제될 수 있는 챔버를 포함한다. 2 개의 상이한 챔버가 도 4a 및 도 4b에 도시된다. 도 4a에 도시된 챔버는 사각형 풋프린트를 갖는 한편, 도 4b에 도시된 챔버는 직사각형 풋프린트를 가지며, 이들은 도 3a 및 도 3b에서의 2 개의 슬라이드 상의 봉쇄 영역에 각각 대응한다. 그러나 챔버들의 풋프린트는 설계되는 봉쇄 영역의 형상에 따라 변할 수 있다.

도 4a에 도시된 사각형계 챔버(160) 및 도 4b에 도시된 직사각형계 챔버(160')는 모두 상부 부분(170, 170'), 중앙 부분(180, 180') 및 하부 부분(190, 190')을 갖는다. 상부 부분은 원통형 형상을 갖는 포트 또는 개구를 갖는다. 중 앙 부분은 4개의 평면 표면을 갖는 절두형 다면체를 포함한다. 하부 부분은 각각의 슬라이드 상에 챔버를 접착시키기 위한 접착제를 갖는다. 챔버는 표본이 슬라이드의 봉쇄 영역 상으로 도입되기 전 또는 후에 접착식으로 또는 기계적 수단 만으로 각각의 슬라이드 상에 장착된다. 초기 시험 및 분석의 완료 후에, 챔버 내의 상청액이 제거된다. 실시예의 태양은 챔버 아래의 봉쇄 영역의 모든 영역이 파스퇴르 피펫 또는 유사한 흡입기 장치에 의해 흡입될 수 있도록 구성되는 각 챔버에 개구를 제공한다. 또한, 본 발명은 챔버 및 슬라이드를 포함하는 장치가 뒤집힐 때에도 장치에 누설 방지를 제공하도록 캡 또는 플러그를 포함하는 스토퍼와 같은 개구를 폐쇄하는 기구를 제공한다.

도 4a 및 도 4b에 도시된 세포 적층 장치의 개략도에서, 프로스팅된 마킹(frosted marking) 영역(150)을 구비하는 표준(76x25.5x1 mm)의 유리 슬라이드(100)가 사용된다. 이러한 형태의 표준 유리에 상응하며, 도 4a의 사각 챔버의 치수는 예컨대 일 측면 a에서 약 20부터 약 23 밀리미터까지를 포함할 수 있다. 스토퍼(미도시됨)의 상부까지의 챔버의 높이(b)는 예컨대, 약 15부터 약 20 밀리미터 사이일 수 있다. 도 4b에 도시된 실시예에 대한 대응 치수 c, d, e는 각각 예컨대 약 24부터 약 25 밀리미터까지, 약 55부터 약 58 밀리미터까지, 그리고 약 18부터 약 20 밀리미터까지일 수 있다. 그러나 전술한 대체예들은 본 발명을 이러한 실시예들에 한정하려고 의도된 것은 아니다. 반대로, 본 발명은 첨부된 청구항에 의해 정의된 것과 같은 본 발명의 사상과 범주 내에 포함될 수 있는 대체예, 개조 및 등가물을 포함하도록 의도되었다.

본 발명의 세포 적층 장치의 3차원 해석이 도 5a 및 도 5b에 도시되는 것과 같이 묘사된다. 사각 챔버(200) 및 직사각 챔버(300) 모두는 표준 유리 슬라이드에 적용가능하다. 세포 적층 장치는 양수 또는 수용성 부유액으로부터의 다른 세포들을 상업적인 표준 유리 슬라이드(100) 상에 적층하기 위해 사용된다. 이 장치는 일회용이고, 오직 한 번 사용하기 위한 것일 수 있으며, 시험관 진단 시험에서 사용될 수 있다. 각각의 챔버는 전술한 바와 같은 수용/봉쇄 영역에 밀봉가능식으로 장착/장착해제된다. 실시예의 견지에서, 생체에 적합한 아크릴 접착제가 챔버를 각각의 슬라이드에 부착하도록 사용된다. 접착제는 챔버 내의 수용성 매체의 최대 액체 체적을 갖는 660g 스윙 버킷 원심 분리를 견디는 강도를 갖는다. 동시에, 접착제는 원심 분리 후에 손에 의해 또는 두 개로 갈라진 웨지형 제거 공구를 사용함에 의해 슬라이드로부터 챔버를 제거하는 것을 허용한다. 소수성이고 챔버의 풋프린트에 상응하는 형상을 갖는 화학적 배킹(backing)이 접착 기능을 보조하고 시약 소비를 최소화하기 위한 시약 댐을 형성하도록 경계부(250, 350)에서 슬라이드에 부착된다. 배킹 재료의 두께는 커버슬립(미도시됨)이 챔버 제거에 따르는 슬라이드에 부착될 때, 커버슬립과 슬라이드 표면 사이의 간극이 0.2 밀리미터를 초과하지 않도록 적용된다. 또한, 도 5a 및 도 5b에 도시된 각각의 챔버의 상부에서의 개구는 슬라이드 표면의 모든 영역이, 양호하게는 약 2 에서 2.5 밀리미터까지의 외경을 갖는 파스퇴르 피펫 또는 유사한 흡입기 장치에 의해 흡입될 수 있다. 원심 분리 후에 개방되기에 앞서, 챔버(300) 내의 흡입기(400)가 도 6에 도시된다. 도 7은 원심 분리 스테이션으로 수송되기 위해 캐리어(500) 상에 적재된 다수의 챔 버(300)를 도시한다.

작동시, 도 3a 및 도 3b에 도시된 바와 같이 특수 코팅을 하거나 또는 하지 않은 슬라이드(100)에는 소수성 배킹을 포함하는 봉쇄 경계부(130, 130')를 가진 적절한 봉쇄 영역(140, 140')이 준비된다. 다음으로, 수용 봉쇄 경계부와 동일한 형상인 풋프린트를 갖는 적층 챔버는 슬라이드면 상으로 낮춰지고 친생물학적인 아크릴 접착제로 경계부에 접착된다. 그 후, 셀, 또는 예를 들어 미토콘드리아 및 핵 부유액과 같이 전문화된 기능을 갖는 셀의 세포기관 미세 구조를 포함하는 샘플은 챔버의 상부의 개구(도 4a 및 도 4b의 170, 170')를 통해 피펫팅(pipetting)함으로써 챔버로 도입된다. 슬라이드면 상으로 셀의 침전이 슬라이드로의 부유액의 초기 적층(및 태핑 또는 진동)시 충분하다면, 이제 챔버 내부의 상청액(supernatant liquid)이 도 6에 도시된 바와 같이 피펫(400)에 의해 흡입된다. 이어서, 챔버의 상부에 도시된 원통 개구가 캡 또는 플러그와 같은 스토퍼(stopper)로 폐쇄될 수 있고, 필요하다면, 슬라이드 상의 샘플의 추가의 분석을 위해 조립체 장치는 다른 곳으로 수송될 수 있다. 예를 들어, 이런식으로 조립된 장치는 임의의 표준 원심분리기 상의 원심분리를 위해 준비될 수 있다. 분석의 시점에서, 챔버는 현미경을 이용하는 것과 같은 추가의 분석을 위해 슬라이드 상에 셀을 노출시키도록 손 또는 공구에 의해 제거될 수 있다.

상술된 바와 같이, 셀 적층 챔버는 원심력의 영향으로 수직 위치에 도달할 때까지 원심분리기 하우징에서 외향으로 스윙할 것이다. 부유액 내의 셀은 이제 수직 슬라이드 상의 봉쇄 영역에 수직으로 작용하는 원심력을 이용하여 봉쇄 영역 위에 상대적으로 균일하게 퍼지고 슬라이드면 상으로 적층될 것임이 본 기술분야의 당업자들에게 명백할 것이다. 소정 기간의 원심분리 후에, 장치는 원심분리기로부터 제거된다. 그 후, 챔버 상의 개구의 스토퍼는 제거되고, 임의의 상청액이 피펫의 도움으로 슬라이드의 표면으로부터 흡입된다. 본 발명의 셀 적층 챔버는 봉쇄 경계부 내의 모든 영역이 완전히 흡입되도록 피펫이 챔버의 모든 코너에 도달하게 한다는 것은 본 기술분야의 작업자들에 의해 이해될 것이다. 본 발명의 실시예가 현미경을 통한 셀의 선명한 관찰을 동시에 제공하면서, 가장 높은 가능 셀 밀도(2400cells/mm²)를 제공하는 것이 또한 이해될 것이다. 이것은, 봉쇄 영역이 잘 형성되고, 부유액의 부피가 사용된 특정 샘플과 정밀하게 같은 정도로 준비될 수 있고, 따라서 정확히 단일층 적층이 달성됨에 따라 셀의 선명한 관찰 및 밀도를 향상시키므로 가능하다.

일 태양에서, 도 4a 내지 도 7에 도시된 제거가능한 챔버는 챔버의 내벽이 샘플 표본(sample specimen)의 도입으로 오염되고 그것은 세척하기 어렵기 때문에 일회용, 즉 재사용가능하지 않은 것이다. 다른 태양에서, 본 발명은 추가의 제거가능한 구조 또는 라이너를 제공하고, 라이너는 라이너 및 그 챔버로부터 슬라이드의 분리 이후 각각의 사용 후에 라이너가 배치될 수 있도록 개시된 챔버의 내벽을 정렬시킨다.

도 8a 및 도 8b에 도시된 실시예에서, 라이너(600)가 제공된다. 라이너는 챔버(300)의 내부 윤곽과 일치하도록 만들어지고, 도 8a에 도시된 바와 같이 챔버 의 네크부(325)를 걸어 올리기(hook over) 위해 칼라(650)를 갖는다. 더욱이, 라이너(600)는, 칼라(650)와 플랜지(675)가 챔버 상에서 그들의 대응부분에 결합될 때 라이너가 챔버의 내부 벽을 따라 꼭 맞게 끼워지도록 챔버(300)의 하부 에지(375)를 걸어 올리는 플랜지 에지(675)를 갖는다. 라이너는 탄성 중합체 또는 폴리프로필렌이나 폴리스티렌을 포함하는 플라스틱 등의 일회용 재료로 만들어질 수 있다. 슬라이드(100) 상으로 하강될 때, 플랜지(675)는 슬라이드에 대항하는 압력 시일을 제공하도록 슬라이드(100) 상의 경계부(350)(도 5b도 참조)와 정합한다. 챔버-라이너 부-조립체를 슬라이드(100)에 대해 밀봉 가능하게 보유하기 위해 필요한 힘을 제공하도록, 쉘이 임의 개수의 방식으로 캐리어(500)와 결합될 수 있는 챔버(300)를 일치되게 둘러싸는 쉘(700)에 의해 압력이 제공된다. 예를 들어, 쉘(700)의 측면 상의 공동으로부터 부분적으로 돌출하는 스프링-장착 볼 베어링(725)이 캐리어(500)의 측벽 상의 오목부(550) 안으로 스냅 결합되어 챔버-라이너 부-조립체를 캐리어 내의 슬라이드 상에 보유하도록 만들어질 수 있다. 쉘은 조립체에 안정성을 제공하도록 그리고 슬라이드 위에 보유력을 제공하기도 하도록 충분히 강성인, 플라스틱 또는 금속으로 만들어질 수 있다.

도 9는 스프링-장착 핸들(875)을 갖는 캐리어(800) 내의 슬라이드(100) 상의 세포 적층 챔버(300)를 포함하는 조립체의 다른 실시예를 도시한다. 캐리어(800)는 챔버(300)와, 도 9에 도시된 바와 같이 관련 슬라이드(100)를 수납하도록 구성된다. 챔버(300)는 슬라이드(100)를 개재 가스켓(315)과 정합시키도록 하강된다. 가스켓(315)은 챔버와 슬라이드 사이의 쿠션을 제공하며 이와 동시에 챔버와 슬라 이드 사이의 밀봉 가능하지만 제거 가능한 조인트를 제공하는 탄성 중합체 재료를 포함한다. 밀봉을 위한 압력은, 조립체를 캐리어(800) 안쪽으로 결합하는 스프링-장착 핸들(875)에 의해 가스켓(315)의 주연부 위쪽에서 압축되는 챔버(850)를 갖는 압력판(825)에 의해 제공된다. 도 8a 및 도 8b에 도시된 두 실시예 모두가 전술한 임의 개수의 방식으로 연속적으로 마개가 씌워질 수 있는 개구(325)를 통해 조립 후에 슬라이드 상에 세포 적층을 제공하도록 구성될 수 있음을 알 수 있을 것이다. 도 8a 및 도 8b에서, 개구(325)로의 접근은 연속적으로 스토퍼(775)에 의해 마개가 씌워질 수 있는 쉘(700) 내의 다른 개구(750)에 의해 제공된다.

위 실시예들에서 기재된 바와 같은 재사용 가능한 챔버를 갖는 이점에 더하여 챔버를 슬라이드 상에 조립할 때 접착제를 갖지 않는다는 부가적인 이점도 있다는 것을, 본 기술 분야의 숙련된 자들이 이해할 것이다. 접착제가 없기 때문에, 세포 적층 챔버는 접착제계 유닛과 호환 가능하지 않을 다양한 용매 내의 샘플의 샘플들을 수용할 수 있다. 또한, 슬라이드가 챔버를 수납하기 위한 접착성 경계부를 가질 필요가 없기 때문에 특정 범위 내의 사용자 특정 슬라이드가 수용될 수 있다. 접착성 경계부로부터의 어떠한 간섭 없이 적층 표면이 수정될 수 있다.

또한, 고체 조직 샘플[예를 들어, 미립자, 세포 혼합물, 세포외 산물(extra-cellular product), 세포내 성분, 비균질 모집단]에 슬라이드가 이미 적층된 상황에서는, 샘플을 다른 용기로 전달하지 않으면서 본 발명의 챔버 내에서 분산 및 분해될 수 있다. 이것은 도 8b의 쉘(700) 기술을 이용한 슬라이드 위에 또는 도 9의 핸들 기구(875) 위에 적층 챔버(300)를 조립하고 챔버 내에서 조직 처리를 올바르 게 수행함으로써 달성된다. 처리는 예를 들어 해리 시약(예를 들어, 콜라겐분해효소 등의 단백분해효소 용액)을 챔버 내에 부가함으로써 달성될 수 있다. 해리 혼합물을 배양하고 최종적으로 해리 시약을 중화한 후, 결과로 생긴 부유액은 원심분리에 의해 슬라이드 상에 직접 적층될 수 있다. 그 다음 상청액은 제거될 것이며 챔버가 조립 해제될 것이다.

본 발명의 폐기 가능한 세포 적층 챔버는 세포계 분석물을 위한 플랫폼으로 사용될 수 있다. 이들은 적어도 이하의 형태의 분석물을 포함한다.

1. 슬라이드 챔버는 세포들을 둘러싸는 액체 매체로부터 분석물질을 얻을 가능성이 있는 세포를 수확하도록 사용된다. 분석은 분석될 살아있거나 고정된 세포를 용제와 함께 배양함으로서 실시된다. 세포들은 배양 후에 원심적으로 적층되거나 슬라이드에 부착된다. 이어서, 세포들은 면역 염색(immunostaining) 또는 분석 존재 형광체를 발생시키는 다른 수단에 뒤이어 형광 현미경 검사 또는 다른 수단에 의해 분석 내용에 따라 분석된다.

2. 슬라이드 챔버는 둘러싸는 매체 내에 존재하는 분석물질과 상호 작용할 수있는 세포를 수확하도록 사용된다. 상호 작용은 세포 내에 반응을 발생시킨다. 세포는 슬라이드 상에서 또는 현미경 기술, 즉 면역 형광 현미경 검사를 사용하여 반응물을 슬라이드 상에 적층시킨 후에 분석될 수 있다.

3. 세포 적층 챔버는 세포들의 표면에 존재하는 생화학적 구조에 좌우되는 세포들의 특정한 분류에 특정하게 결합하는 시약으로 코팅될 수 있다. 이 시약은 항체 또는 렉틴(lectin)일 수 있다. 이 경우에, 세포 부유액은 시약 코팅된 슬라 이드를 포함하는 챔버에 추가될 것이다. 세포 부유액은, 슬라이드에 대한 비특정 점착으로부터의 특정한 상호 작용에 의해 슬라이드에 부착되지 않는 이들 세포를 유지하기 위해서, 챔버가 흔들리는 동안 챔버 내에 고정되도록 허용될 것이다. 소정 시간 이후에, 비점착성 세포를 함유하는 상청액이 제거될 것이다. 이어서, 챔버 조립체는 (필요하다면) 원심분리되고 분해될 것이다.

4. 적층 챔버는 슬라이드를 환경적 샘플로부터 준비하여 사용될 수 있다. 분석물질은 세포보다는 미립자 물질, 예를 들어 토양 입자 또는 오염 입자로 구성할 수 있다.

5. 세포 적층 챔버는 미립자 샘플을 분석하도록 법의학적 샘플 준비로 사용될 수 있다.

개시된 장치 및 방법의 이들 수많은 세부사항이 본 발명의 이해를 제공하도록 본 명세서에 개시되었지만, 당업자라면, 이들 특정한 세부사항이 본 발명을 실시하는데 있어 반드시 채용되어야 하는 것은 아니라는 점을 알 수 있을 것이다. 동시에, 유사한 구성요소가, 예를 들어 임상적 과정 진단에서 사용되는 주지된 사이토스핀 장치와 같은, 인용하기에 너무나 많은 다른 유사한 장치에서 채용될 수도 있다는 것을 명확하게 알 수 있을 것이다. 도 8a 및 도 8b의 쉘(700)은 본 발명의 세포 적층 챔버를 사이토버킷(cytobucket)에 수용하도록 구성될 수 있다.

본 발명은 특정한 실시예를 참조하여 특정하게 도시되고 기술되었지만, 당업자라면 형태 및 세부사항에서의 다양한 변화가 본 발명의 기술적 사상 및 범위를 벗어나지 않고 이루어질 수도 있음을 이해할 것이다.

Claims (23)

1. 장치에 있어서,

   공간(void)이 형성되고, 현미경 슬라이드 상의 수용 영역에 대해 끼워 맞춤되도록 구성된 풋프린트(footprint)를 갖는 챔버로서, 상부 부분, 중간 부분 및 하부 부분을 갖고, 상기 상부 부분은 생물학적 샘플이 상기 현미경 슬라이드의 표면상에 적층되는 것을 허용하도록 상기 챔버의 개구를 형성하는 상기 챔버와,

   상기 개구를 폐쇄 및 밀봉하는 수단과,

   상기 현미경 슬라이드 상의 상기 수용 영역에 상기 챔버를 부착하는 수단을 포함하는 것을 특징으로 하는 장치.
2. 제 1 항에 있어서,

   상기 챔버는 다각형 풋프린트를 구비한 개방 하부를 갖는 것을 특징으로 하는 장치.
3. 제 1 항에 있어서,

   상기 풋프린트는 원형인 것을 특징으로 하는 장치.
4. 제 1 항에 있어서,

   상기 챔버의 상기 상부 부분은 원통 형상을 포함하는 것을 특징으로 하는 장 치.
5. 제 1 항에 있어서,

   상기 개구를 폐쇄 및 밀봉하는 상기 수단은 캡인 것을 특징으로 하는 장치.
6. 제 1 항에 있어서,

   상기 개구를 폐쇄 및 밀봉하는 상기 수단은 플러그인 것을 특징으로 하는 장치.
7. 제 1 항에 있어서,

   상기 챔버의 상기 중간 부분은 상기 생물학적 샘플이 상기 슬라이드면의 모든 영역으로부터 흡입되는 것을 허용하도록 절두 다면체(truncated polyhedron)를 포함하는 것을 특징으로 하는 장치.
8. 제 7 항에 있어서,

   상기 다면체는 4개의 평면을 포함하는 것을 특징으로 하는 장치.
9. 제 1 항에 있어서,

   접착 물질로 처리된 수용 영역을 더 포함하고,

   상기 접착 물질은 상기 현미경 슬라이드로부터 상기 챔버를 부착 및 제거 가 능하게 하는 것을 특징으로 하는 장치.
10. 제 9 항에 있어서,

    접착제는 친생물학적 아크릴 물질인 것을 특징으로 하는 장치.
11. 제 9 항에 있어서,

    상기 수용 영역은 접착 기능을 촉진하기 위해 소수성 배킹(hydrophobic backing)으로 처리되는 것을 특징으로 하는 장치.
12. 제 9 항에 있어서,

    상기 수용 영역은 시약 댐(reagent dam)을 형성하기 위해 소수성 배킹으로 처리되는 것을 특징으로 하는 장치.
13. 제 1 항에 있어서,

    상기 챔버의 내측 벽에 끼워 맞춤되도록 구성되고, 상기 챔버의 상기 개구에 제거 가능하게 부착되는 네크부 및 상기 챔버의 상기 하부 부분의 에지에 제거 가능하게 부착되는 플랜지부를 갖는 라이너(liner)와;

    상기 챔버의 외측 벽에 대해 일치되게 끼워 맞춤되는 쉘을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 장치.
14. 제 13 항에 있어서,

    상기 라이너는 일회용 폴리에틸렌인 것을 특징으로 하는 장치.
15. 제 13 항에 있어서,

    상기 쉘은 폴리에틸렌을 포함하는 것을 특징으로 하는 장치.
16. 제 13 항에 있어서,

    상기 수용 영역에 대해 상기 플랜지를 밀봉하기 위해 상기 쉘 상으로 가압함으로써 상기 챔버를 상기 현미경 슬라이드 상의 상기 수용 영역 상에 고정하는 수단을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 장치.
17. 제 16 항에 있어서,

    상기 챔버를 고정하는 수단은 상기 챔버 위에 위치된 압축판을 결합하는 핸들을 더 포함하는 것을 특징으로 하는 장치.
18. 세포 적층 챔버 내에 생물학적 물질을 적층하는 방법에 있어서,

    상기 챔버의 하부 부분에 풋프린트를 갖고 상기 챔버의 상부 부분에 개구가 형성된 세포 적층 챔버를 제공하는 단계와,

    상기 세포 적층 챔버의 풋프린트와 정합하도록 구성된, 생물학적 샘플용 수용 영역을 갖는 현미경 슬라이드를 제공하는 단계와,

    상기 현미경 슬라이드를 화학적 배킹으로 처리하는 단계와,

    상기 챔버의 상기 개구에 대해 끼워 맞춤되는 네크부 및 상기 챔버의 상기 하부 부분의 에지에 대해 끼워 맞춤되는 플랜지를 갖는 라이너와 상기 챔버를 끼워 맞춤하는 단계와,

    상기 수용 영역 위에 상기 챔버의 상기 풋프린트를 위치시키고, 상기 현미경 슬라이드 상에 상기 챔버를 고정하는 단계와,

    상기 적층 챔버의 상기 개구를 거쳐 상기 현미경 슬라이드 상으로 생물학적 물질을 주입하는 단계와,

    상기 개구를 폐쇄 및 밀봉하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 하는 생물학적 물질 적층 방법.
19. 제 18 항에 있어서,

    상기 생물학적 샘플은 부유액 내의 세포들을 포함하는 것을 특징으로 하는 생물학적 물질 적층 방법.
20. 제 18 항에 있어서,

    상기 생물학적 샘플은 부유액 내의 세포기관을 포함하는 것을 특징으로 하는 생물학적 물질 적층 방법.
21. 제 18 항에 있어서,

    상기 생물학적 샘플의 시험관 진단 시험(an in vitro diagnostic testing)을 수행하는 단계와;

    포트를 개방하는 단계와;

    상기 포트를 통해 상기 생물학적 샘플의 상청액(supernatant liquid)을 흡입하는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 생물학적 물질 적층 방법.
22. 제 21 항에 있어서,

    상기 상청액을 흡입한 후에 상기 챔버의 상부에서 상기 포트를 폐쇄 및 밀봉하는 단계와;

    상기 챔버 위에 압축판을 위치시키는 단계와;

    상기 챔버를 밀봉하기 위해 상기 현미경 슬라이드 상의 상기 수용 영역 상으로 상기 압축판을 가압하도록 핸들을 작동시키는 단계를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 생물학적 물질 적층 방법.
23. 제 22 항에 있어서,

    상기 핸들은 세포 원심 분리 버킷(cytocentrifugation bucket)에서 상기 슬라이드 상으로 상기 챔버를 밀봉하는 것을 특징으로 하는 생물학적 물질 적층 방법.

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