KR20080014251A

KR20080014251A - 방선균 유래의 항암물질 추출방법과 이에 따른인돌알칼로이드계 화합물, 암세포 사멸유도제 및 항암용의약조성물

Info

Publication number: KR20080014251A
Application number: KR1020060075698A
Authority: KR
Inventors: 신희재; 이희승; 정현선; 김태식; 김환묵; 박성규
Original assignee: 한국해양연구원
Priority date: 2006-08-10
Filing date: 2006-08-10
Publication date: 2008-02-14

Abstract

본 발명은 방선균 유래의 항암물질 추출방법과 이에 따른 인돌알칼로이드계 화합물, 암세포 사멸유도제 및 항암용 의약조성물에 관한 것으로, 특히 스트렙토마이세스 속 방선균을 액체 배지에서 배양하고, 그 배양물로부터 균사체를 분리한 배양여액을 유기용매로 추출한 후 농축시킨 후, 그 농축물을 크로마토그래피로 분리 및 정제하여 얻어지는 하기 화학식 1로 표기되는 인돌알칼로이드계 화합물의 추출에 관한 것이다. 이러한 본 발명에 의하는 경우, 해양시료의 방선균으로부터 인체 암세포주에 독성을 갖는 인돌알칼로이드계 화합물을 얻어낼 수 있다.

[화학식 1]

(여기서, 상기 R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 각각 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 할로겐 원자, 수산기 또는 카르복실기이다.)

스트렙토마이세스 속, 방선균, 항암활성

Description

방선균 유래의 항암물질 추출방법과 이에 따른 인돌알칼로이드계 화합물, 암세포 사멸유도제 및 항암용 의약조성물{Method for Extracting Anticancer Substances from Actinomyces and Indole Alkaloid Compound, Apoptotic Inducer of Cancer Cell and Pharmaceutical Composition for Anticancer Using The Same}

도 1은 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따른 방선균 유래의 항암물질 추출방법의 순서를 나타내는 흐름도이다.

본 발명은 항암물질에 관한 것으로, 특히 방선균 유래의 항암물질 추출방법과 이에 따른 인돌알칼로이드계 화합물, 암세포 사멸유도제 및 항암용 의약조성물에 관한 것이다. 더욱 상세하게는 해양시료로부터 분리된 방선균을 이용하여 인체 암세포주에 독성을 갖는 인돌알칼로이드계 화합물을 얻어내는 것이다.

암은 현대사회에서 사망률 1위를 차지하는 주요 질병으로 현재까지 많은 연 구에도 불구하고 획기적인 치료법이 없는 실정이다. 암의 치료에 있어 항암제와 같은 화학요법제를 이용한 치료는 어느 정도 효과를 거두고는 있으나 암의 다양한 발병기작과 항암제 내성 발현으로 인하여 많은 연구가 요구되고 있다. 현재 임상에서 사용되고 있는 대표적인 항암제로 독소루비신(doxorubicin), 악티노마이신(actinomycin), 미토마이신(mitomycin)등을 들 수 있으며 이들은 방선균 특히, 스트렙토마이세스 (Streptomyces)에서 생산되는 세포독성물질들이다.

방선균은 항암물질 뿐만 아니라 항생제를 비롯한 생리활성물질의 주요원천으로 알려져있으며 현재에도 많은 연구자들이 방선균으로부터 생리활성물질 탐색을 실시하고 있다. 방선균에 생리 활성이 있는 여러 가지 신물질이 함유되어 있다는 것은 널리 알려진 사실로서, 이를 이용하여 의약품등 산업적으로 활발한 개발이 이루어지고 있다. 본 발명 역시 이러한 연구의 일환으로 방선균 유래의 신물질 개발과 관련하여 이루어진 것이다.

상술한 바와 같은 필요에 의해 본 발명은 스트렙토마이세스 속 방선균을 액체 배지에서 배양하고, 그 배양물로부터 균사체를 분리한 배양여액을 유기용매로 추출한 후 농축시킨 후, 그 농축물을 크로마토그래피로 분리 및 정제하는 것을 특징으로 하는 방선균 유래의 항암물질 추출방법을 제공하기 위한 것이다.

이러한 본 발명에 의하여, 해양시료로부터 분리된 방선균으로부터 인체 암세포주에 독성을 갖는 인돌알칼로이드계 화합물을 얻어내고자 하는 것이 본 발명의 목적이다. 또한, 본 발명에 따라 인체의 유방암과 폐암 등의 암세포에 대하여 강한 독성을 나타내는 것으로, 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) 방선균의 배양여액으로부터 추출하여 얻어지는 인돌알칼로이드계 화합물(4-chloro-5-(3-indolyl)oxazole)을 이용하여, 이를 포함하는 암세포 사멸유도제 및 항암용 의약조성물을 제공하고자 한다.

상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명에 따른 방선균 유래의 항암물질 추출방법은 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.)에 속하는 방선균을 액체배지에서 배양하여 얻은 배양여액을 유기용매로 추출해서 추출물을 얻고, 상기 추출물을 감압 하에서 증발 건조하여 얻은 농출물을 크로마토그래피로 분리 및 정제 함으로써, 항암활성을 가지는 하기의 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물을 추출하는 것을 특징으로 한다.

[화학식 1]

본 발명에서 방선균으로부터 상기 화학식 1의 화합물을 분리하는 방법은 방선균을 액체 배지에서 배양하고, 균사체로부터 분리된 배양액을 유기용매로 추출한 후 용매를 감압 하에서 증발시키며, 농축물을 크로마토그래피를 이용하여 분리 및 정제하는 단계를 포함하는 것을 특징으로 한다. 즉, 본 발명은 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.)에 속하는 방선균으로부터 항암물질을 얻기 위하여, 상기와 같은 분리 추출방법을 이용하였고, 그렇게 함으로써, 상기와 같은 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물을 추출할 수 있었다.

본 발명에 따른 방선균 유래의 항암물질 추출방법은 더욱 구체적으로, ① 방선균인 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.)의 미분류 종을 액체배지에서 배양하는 단계; ② 배양물을 원심분리하여 균사체와 배양여액으로 분리하는 단계; ③ 배양여액을 EtOAc로 추출하는 단계; ④ 상기와 같이 추출하여 얻어진 조추출액을 감압 하에서 증발 건조하여 농축물을 얻는 단계; ⑤ 상기 농축물을 크로마토그래피로 분획하는 단계; ⑥ 각 분획을 감압 하에서 증발 건조하여 농축물을 얻는 단계; 및 ⑦ 상기 농축물을 크로마토그래피로 분리 정제하는 단계를 포함할 수 있다.

상기와 같은 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물에 있어서, R₁은 Cl, Br, F, I, COOH, CH₃, CH₂CH₃, CH₂CH₂CH₃, CH(CH₃)₂, (CH₂)₃CH₃ 또는 Isobutyl일 수 있고, R₂는 H, CH₃, CH₂CH₃, CH₂CH₂CH₃, CH(CH₃)₂, (CH₂)₃CH₃, Isobutyl 또는 CH₂Ph일 수 있으며, R₃는 H, OH, OCH₃, CH₃, CH₂CH₃, CH₂CH₂CH₃, CH(CH₃)₂, (CH₂)₃CH₃또는 Isobutyl일 수 있고, R₄는 H, OH, OCH₃, CH₃, CH₂CH₃, CH₂CH₂CH₃, CH(CH₃)₂, (CH₂)₃CH₃또는 Isobutyl일 수 있다. 더욱 바람직하게는, 상기 화학식 1에서 R₁= Cl 이고, R₂, R₃, R₄ 는 각각 수소 원자인 경우가 적합하며, 이 경우 상기 인돌알칼로이드계 화합물은 4-chloro-5-(3-indolyl)oxazole일 수 있다.

도 1은 본 발명의 바람직한 일 실시예에 따른 방선균 유래의 항암물질 추출방법의 순서를 나타내는 흐름도이고, 여기에 도시된 바와 같이, 본 발명에 따른 4-chloro-5-(3-indolyl)oxazole을 추출하는 방법을 상세하게 설명하면, 먼저 해양시료로부터 분리한 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.)에 속하는 방선균을 변형된 배넷(Bennett) 배지(해수 1L당 Glucose 5g, tryptone 1g, yeast extract 0.5g, beef extract 0.5g)에 배양하여 배양물을 얻는 단계(S110);를 거친다. 본 발명에서는 해양시료부터 분리된 방선균을 배양시키기 위해 상기와 같은 변형된 배넷 배지를 사용한 것이 특징이다.

그리고는, 상기 배양물을 원심분리하여 균사체와 배양여액으로 분리하는 단계(S120); 상기 분리된 배양여액을 EtOAc로 추출하는 단계(S130); 상기 추출한 조추출액을 감압 하에서 증발 건조하여 농축물을 얻는 단계(S140); 상기 얻은 농축물을 크로마토그래피로 분획하는 단계(S150); 상기 분획한 분획물을 감압 하에서 증발 건조시킨 후, 필터로 여과하여 불용성 물질이 제거된 농축물을 얻는 단계(S160);를 거친다. 이러한 단계는 최종적으로 역상 HPLC로 분리 정제하기 전에, 농축물을 크로마토그래피로 분획한 후 불용성 물질이 제거된 농축물을 얻고자 한 것이다.

그후에는, 상기 불용성 물질이 제거된 농축물을 C18 역상 HPLC [C18 reversed-phase HPLC, Column: YMC-ODS-A 입자직경 5㎛, 10×250㎜(내경×길이), 이동상 물/Methanol(4.5/5.5), 용출속도 1.5㎖/min, RI detector]로 분리 정제하는 단계(S170)를 거치었다. 이와 같이, 불용성 물질이 제거된 농축물을 C18 역상 HPLC로 분리 정제하면, 본 발명에 따라 항암활성을 가지는 하기의 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물이 추출되는 것이다.

이외에, 본 발명의 다른 목적을 달성하기 위한 본 발명의 또 다른 실시예는 상기한 바와 같은 방선균 유래의 항암물질 추출방법에 의해 추출된 것을 특징으로 하는 상기 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물이나 이것의 약학적으로 허용되는 산 또는 염기의 부가생성물을 포함한다. 나아가, 본 발명은 상기 화합물을 항암제 로 사용하는 신규한 용도를 제공한다. 즉, 상기와 같은 인돌알칼로이드계 화합물을 포함하는 암세포 사멸 유도제이거나 항암용 의약조성물일 수 있다. 본 발명에 따라 방선균으로부터 추출된 상기 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물이 항암활성을 가지기 때문에, 이를 포함하는 다양한 항암물질 등으로 제공될 수 있다.

이하에서는 본 발명의 바람직한 하나의 실시형태를 첨부된 도면을 참조하여 상세하게 설명하기로 한다. 본 발명은 하기의 실시예에 의하여 보다 더 잘 이해 될 수 있으며, 하기의 실시예는 본 발명의 예시 목적을 위한 것이며, 첨부된 특허청구범위에 의하여 한정되는 보호범위를 제한하고자 하는 것은 아니다.

실시예 1: 스트렙토마이세스 속 방선균의 배양

2004년 동해에서 채취한 해양 유래의 시료들로부터 분리한 스트렙토마이세스 속 미분류 방선균을 멸균된 해수와 glycerol 혼합용액에 현탁 시켜 튜브에 보관하였다. 튜브 안의 방선균을 백금이에 묻혀 배지에 접종하여 배양하였다. 이 종균(seed culture)을 대량배양을 위해 2L Fernbach flask에 10ml씩 가한 후 종균과 동일한 배지(800ml×20)에서 배양하였다. 배지는 변형된 Bennett's 으로써 성분은 (해수 1L당 Glucose 5g, tryptone 1g, yeast extract 0.5g, beef extract 0.5g)이다. 배양조건은 Shaking incubator에서 32℃로 분당 회전 속도 150으로 14일간 배 양하였다.

실시예 2: 4-chloro-5-(3-indolyl)oxazole의 분리 정제

상기한 실시예 1에서 얻은 배양액을 고속원심분리기(ultracentrifuge 9000rpm 15분)을 사용하여 배양여액과 균사체로 분리하였다. 분리된 배양 여액은 동일한 양의 EtOAc로 2번 추출하였다. 이 추출액을 감압 하에서 증발 건조하여 추출물 190㎎을 얻었다. 이 추출물을 역상 진공 플래쉬 크로마토그래피(reversed-phase vacuum flash chromatography)로 분획하였다. 용리 용매는 80%물 / 20%Methanol로 시작하여 Methanol을 20%씩 증가시켰으며, 마지막은 디클로로메탄으로 잔류물질을 세척하였다. 40%물 / 60%Methanol의 분획물을 감압하에서 증발 건조시킨 후 21mg의 농축물을 얻었고, 45%물 / 55%Methanol에 녹인 후 SPARTAN filter로 여과하여 불용성 물질을 제거하였다. 이 농축물을 C18 역상 HPLC [C18 reversed-phase HPLC, Column: YMC-ODS-A 입자직경 5㎛, 10×250㎜(내경×길이), 이동상 물/Methanol(4.5/5.5), 용출속도 1.5㎖/min, RI detector]로 분리하여 물질이 보유시간 53분에서 용출되었다. 최종적으로 분리된 물질의 양은 4㎎ 이었다.

실험예 1: 분리된 물질의 분석

상기와 같은 실시예에 따라 분리된 물질의 분자 구조는 핵자기 공명(NMR), 적외선 및 자외선 분광자료, 고해상도 질량 분석의 분광학적 방법으로 규명하였다. 핵자기 공명 스펙트럼에서 수소 핵자기 공명(¹H-NMR) 시그널과 탄소 핵자기공명(¹³C-NMR) 시그널에 대한 위치지정(assignment)은 COSY(COrrelation SpectroscopY), 구배 HSQC(Gradient Heteronuclear Single Quantum Coherence), 구배 HMBC(Gradient Heteronucleat Multiple Bond Coherence)의 이차원 핵자기공명 실험을 통하여 규명하였다. 이와 같이 하여 얻어진 4-chloro-5-(3-indolyl)oxazole의 화학식, 물리적 특성 및 분광학적 특성은 아래와 같다.

(1) 분자식

C₁₁H₇ClN₂O

(2) 분자량

218

(3) 성상

노란색의 무정형 고체

(4) optical rotation

[α]²⁵ _D= 5.1°( c 0.055 MeOH)

(5) 적외선 흡수대(MeOH)

λ max 1627.67, 1456.96, 1431.89, 1244.83, 1193.72, 1126.23, 1056.8, 927.59, 744.39 ㎝^-1

(6) 자외선 흡수대(MeOH)

λ max 215(ε 12300) 271(ε 4900) 287.5(ε 4800)

(7) ¹H 및 ¹³C NMR 화학이동(Chemical shift) 지정

하기의 표 1에 나타나 바와 같이 ¹H와 ¹³C의 값들은 메탄올 d-4용매에서 각각 500㎒와 125㎒에서 측정한 NMR스펙트럼의 결과이다. 화학이동(Chemical shift) 값인 δ 또는 ppm은 내부 기준 물질(internal reference)인 TMS(tetramethylsilane)를 기준(δ=0ppm)으로 사용했을 때, 기준 물질에 대한 상대적인 값을 나타낸다.

[표 1: NMR 화학이동 지정]

상기의 표 1에 나타난 바와 같이, 5개의 방향족 수소 [δ 8.01 (d, H-4), δ 7.16 (t, H-5), δ 7.23 (t, H-6), δ 7.47 (d, H-7), δ 7.83 (s, H-2)]값과 이들이 결합된 탄소 [δ 121.37 (CH, C-4), δ 121.73 (CH, C-5), δ 123.89 (CH, C-6), δ 112.95 (CH, C-7), δ 125.42 (CH, C-2)]값의 각각에 결합된 탄소는 HSQC를 통해 알 수 있다. 방향족 수소 중 δ 8.01 (d, H-4)과 δ 7.47 (d, H-7)는 ortho-coupled doublet으로 나타났고, δ 7.16 (t, H-5), δ 7.23 (t, H-6)의 수소는 triplet으로 splitting되었다. 이는 4a,7a-disubstituted benzene ring의 존재를 나타낸다. 그리고 δ 7.83 (s, H-2)의 singlet의 수소의 존재로 δ 121.73 (C, C-3)부분이 치환된 인돌임을 알 수 있다. 그리고 수소 δ 8.19 (s H-11)와 이에 결합된 탄소 δ 150.1 (CH, C-11), 그리고 δ 121.6 (C, C-9), δ 145.3 (C, C-8)값은 Heteroaromatic ring으로 oxazole이 존재함을 확인 할 수 있다. 마지막으로 Long-range correlation을 알 수 있는 HMBC를 통해 δ 7.83 (s, H-2)와 δ 145.3 (C, C-8)의 연결을 확인할 수 있다. 그러므로 이 물질은 indole의 C-3위치와 oxazole의 C-8위치가 연결된 구조를 이루고 있음이 규명되었다.

실험예 2: 4-chloro-5-(3-indolyl)oxazole의 활성측정실험

(1) MTT방법

본 발명에 따른 4-chloro-5-(3-indolyl)oxazole의 암세포에 대한 저해 활성(ED₅₀)은 대사과정이 온전한 암세포의 미토콘드리아 효소는 MTT(3-[4,5-dimethylthiazol-2-yl]-2,5-diphen-yl tetrazolium bromide)를 환원시켜 formazan을 형성시킬 수 있음을 근거로 formazan의 농도를 측정함으로써 생존한 세포 수를 간접적으로 측정한다.

본 실험에서는 암세포주(leukemia cell-line , K-562 : 백혈병세포주)에 대하여 활성을 측정하였다.

활성 측정시 시료는 메탄올에 각 농도별로 적정량씩 녹여 1.5㎖ 에펜돌프 튜브(Eppendorp tube)에 분주한 후 사용하였다. 세포 배양을 위해서 실험에 사용될 암세포는 10%FBS(Fetal Bovine Serum)와 페니실린(penicillin)이 들어 있는 RPMΙ 1640배양액을 사용하여 25㎠의 표면적을 갖는 T 플라스크에서 37℃, 5% CO₂가 유지되는 배양기 내에서 배양하였다. 세포독성능 측정시에는 세포를 원심 분리하여 세척한 후 새로운 배양액에 2×10⁴ cell/㎖로 부유시켜 사용하였다. MTT 측정법은 다음과 같이 실시하였다. 대수기에 도달한 암세포 배양액을 24웰(well) 플레이트에 1㎖ 접종하고 시료 (4-chloro-5-(3-indol-yl)oxazole)를 각각 10배씩 연속 희석, 0.1㎖씩 첨가하여 최종부피가 1.1 ㎖가 되게 한 후, 37℃, 5% CO₂가 유지되는 배양기 내에서 4일간 배양하였다. 배양이 끝난 후 증류수에 녹인 MTT용액(1㎎/1㎖)을 각각의 웰에 200㎕씩 가해주고 4시간 동안 추가 배양하였다. 배양 상등액을 제거하고 살아있는 세포의 환원 효소에 의하여 형성된 포르마존(formazan)결정을 500㎕의 DMSO에 녹인 다음 540nm의 광학필터(optic filter)를 이용하여 마이크로플레이트 판독기 (microplate reader)로 측정하였다. 시료를 처리하지 않은 세포에서는 진한 보라색으로 나타나고 암세포주가 모두 죽은 경우에는 거의 투명한 용액으로 결과가 나타나, 흡광도에 따라 살아있는 세포의 수를 측정할 수 있다.

실험 결과, 세포 내 환원효소에 의한 MTT formazan농도에 따른 생세포수 측정방법으로 측정하였을 때, 본 발명의 4-chloro-5-(3-indolyl)oxazole는 1.051㎍/㎖의 저해활성(ED₅₀)을 나타내었다.

(2) SRB 방법

부유세포나 monolayer세포의 단백질 함량을 측정하여 세포 생존률을 측정한다. 배양세포를 trichloroacetic acid로 고정하고 1% acetic acid에 녹인 0.4%(w/v) sulforhodamine B(SRB)로 염색한 후 결합 안된 SRB를 1% acetic acid로 충분히 세척하여 단백질과 결합한 SRB를 강알칼리인 10mM unbuffered Tris base(tris(hydroxy-methyl)-aminomethane)로 추출하여 흡광도를 microplate reader로 측정한다. 본 실험은 서로 다른 장기유래 인체 암세포주 MDA-MB-231(Breast), HCT-15(Colon), PC-3(Prostate), NCI-H23(Lung), ACHN(Renal), NUGC-3(Stomach)에 대하여 활성을 측정하였다.

세포성장저해효과의 측정실험은 NCI protocol에 따라서 시행하였다. 세포주를 loading하는 농도는 세포주의 성장속도에 따라서 다르게 한다. 각각의 세포주는 0day에 loading을 한 후에 시료를 처리하는 날에 Time Zero Plate(Tz plate)를 만들어 계산시에 영점으로 한다. 4-chloro-5-(3-indolyl)oxazole을 희석하여 100, 10, 1, 0.1, 0.01(ug/ml)이 되도록 처리한다. 48시간 후에 4-chloro-5-(3-indolyl)oxazole을 처리한 plate를 50% TCA로 50㎕/well씩 넣어서 고정을 한다. 고정한 plate는 4℃에서 60분간 방치한 뒤 tap water로 4~5번 정도 세척을 한다. 세척한 plate는 건조한 후, 0.4% SRB(Sulforhodamine B) (0.1% acetic acid로 용해한 용액; 단백질의 염색 시약)을 100㎕/well을 가한다. 30분정도 방치한 후에 0.1% acetic acid로 세척을 하여 결합하지 않은 염색시약을 세척한다. 다시, plate를 건조한 후에 10mM Tris Base(pH 10.5)를 100㎕/well를 가하여 염색시약을 용해시키고, 540nm에서 흡광도를 측정한다.

실험결과는 하기의 표 2에 나타난 바와 같다.

[표 2: 4-chloro-5-(3-indolyl)oxazole의 암세포주 성장억제 농도(GI₅₀)]

한편, 상기에서는 본 발명을 특정의 바람직한 실시예에 관련하여 도시하고 설명하였지만, 이하의 특허청구범위에 의해 마련되는 본 발명의 기술적 특징이나 분야를 이탈하지 않는 한도 내에서 본 발명이 다양하게 개조 및 변화될 수 있다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가진자에게 명백한 것이다.

상술한 바와 같이, 본 발명은 스트렙토마이세스 속 방선균을 액체 배지에서 배양하고, 그 배양물로부터 균사체를 분리한 배양여액을 유기용매로 추출한 후 농축시킨 후, 그 농축물을 크로마토그래피로 분리 및 정제하는 것을 특징으로 하는 방선균 유래의 항암물질 추출방법을 제공할 수 있다.

이러한 본 발명에 의하는 경우, 해양시료로부터 분리된 방선균으로부터 인체 암세포주에 독성을 갖는 인돌알칼로이드계 화합물을 얻어낼 수 있다. 또한, 본 발명에 따라 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.) 방선균의 배양여액으로부터 추출하여 얻어지는 인돌알칼로이드계 화합물(4-chloro-5-(3-indolyl)oxazole)은 인체의 유방암과 폐암 등의 암세포에 대하여 강한 독성을 나타내어, 이를 포함하는 암세포 사멸유도제 및 항암용 의약조성물로 제공되는 것도 가능하다.

Claims

스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.)에 속하는 방선균을 액체배지에서 배양하여 얻은 배양여액을 유기용매로 추출해서 추출물을 얻고, 상기 추출물을 감압 하에서 증발 건조하여 얻은 농출물을 크로마토그래피로 분리 및 정제 함으로써, 항암활성을 가지는 하기의 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물을 추출하는 방선균 유래의 항암물질 추출방법.

[화학식 1]

(여기서, 상기 R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 각각 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 할로겐 원자, 수산기 또는 카르복실기이다.)
해양시료로부터 분리한 스트렙토마이세스 속(Streptomyces sp.)에 속하는 방선균을 변형된 배넷(Bennett) 배지(해수 1L당 Glucose 5g, tryptone 1g, yeast extract 0.5g, beef extract 0.5g)에 배양하여 배양물을 얻는 단계;

상기 배양물을 원심분리하여 균사체와 배양여액으로 분리하는 단계;

상기 분리된 배양여액을 EtOAc로 추출하는 단계;

상기 추출한 조추출액을 감압 하에서 증발 건조하여 농축물을 얻는 단계;

상기 얻은 농축물을 크로마토그래피로 분획하는 단계;

상기 분획한 분획물을 감압 하에서 증발 건조시킨 후, 필터로 여과하여 불용성 물질이 제거된 농축물을 얻는 단계; 및

상기 불용성 물질이 제거된 농축물을 C18 역상 HPLC [C18 reversed-phase HPLC, Column: YMC-ODS-A 입자직경 5㎛, 10×250㎜(내경×길이), 이동상 물/Methanol(4.5/5.5), 용출속도 1.5㎖/min, RI detector]로 분리 정제하는 단계를 포함하여, 항암활성을 가지는 하기의 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물을 추출하는 방선균 유래의 항암물질 추출방법.

[화학식 1]

(여기서, 상기 R₁, R₂, R₃ 및 R₄는 각각 수소, 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, 이소부틸, 할로겐 원자, 수산기 또는 카르복실기이다.)
제1항 또는 제2항에 있어서, 상기 화학식 1로 표시되는 인돌알칼로이드계 화합물은,

상기 R₁이 Cl이고, R₂, R₃ 및 R₄는 각각 H 인 것을 특징으로 하는 방선균 유래의 항암물질 추출방법.
제3항에 따른 방선균 유래의 항암물질 추출방법에 의해 추출된 것을 특징으로 하는 인돌알칼로이드계 화합물.
제4항에 따른 인돌알칼로이드계 화합물을 포함하는 암세포 사멸유도제.
제4항에 따른 인돌알칼로이드계 화합물을 포함하는 항암용 의약조성물.