KR20070122497A - Ｃｄ20 항체로 치매 또는 알츠하이머병을 치료하는 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 알츠하이머병 (AD) 이외의 임의의 자가면역 질병 또는 B-세포 악성 종양을 앓고 있지 않은 환자에서 CD20 항체를 사용하여 알츠하이머병 (AD) 또는 치매를 치료하는 방법을 기술한다. 본 발명은 또한 상기 방법에서 사용하기 위한 제품을 기술한다.

자가면역 질병, 알츠하이머병, Ｂ-세포 악성 종양, 네이키드 ＣＤ20 항체.

Description

ＣＤ20 항체로 치매 또는 알츠하이머병을 치료하는 방법{METHOD FOR TREATING DEMENTIA OR ALZHEIMER'S DISEASE WITH A CD20 ANTIBODY}

본원은 35 USC §119하에 2005년 4월 22일 출원된 가출원 번호 제 60/674,028호 (상기 가출원 전체의 내용은 본원에서 참조로 인용된다)에 대한 우선권을 주장하는 정규출원이다.

본 발명은 CD20 항체를 사용하여 인간 대상에서 AD 또는 치매를 치료하는 방법, 및 그러한 사용 설명서를 포함하는 제품에 관한 것이다.

알츠하이머병 (AD)은 오늘날의 건강관리에서 주요 관심사이고, 과거 10년간까지는 공지의 유익한 치료법이 없었다. 뇌의 가장 보편적인 신경변성 질환인 AD가 모든 치매 사례중 대략 70％를 차지한다. 이러한 치매는 일반적으로 기억, 혼돈, 시-공간, 계산, 판단, 및 가능하게는 망상 및 환각상의 문제로서 나타난다. 본 질병의 초기에서 치매의 행동상의 소견은 종종 간과될 만큼 미비하다. 본 질병의 중기동안 환자는 여전히 독립적으로 작업을 수행할 수 있지만, 복잡한 작업을 위해서는 종종 도움을 필요로 한다. 말기에는, 씹고 삼키는 능력, 장 및 방광 조절, 및 호흡 작용과 같은 보통의 신체 작용까지도 잃게 되고, 환자는 종종 몸져눕 게 된다. 전형적으로, 본 질병이 발병된 후 약 5-10년째에는 사망하게 된다. 현재 미국에서는 AD가 사망 원인중 4위를 차지하고 있다.

AD에서는 진행성 신경변성이, 기저핵, 해마, 편도, 내후각뇌피질의 상대적으로 선택적인 병발, 및 최종적으로는 측두, 전두, 및 마루 부위의 고차 연합 피질을 비롯한, 뇌의 여러 부위에서 발생한다. 신경세포 손상 및 수반된 시냅스 밀도 손실은 학습과 기억 회복에 필수적인 수개의 신경계를 무력화시킨다.

산발성 AD로서 언급되는, 가장 보편적인 형태의 AD는 모든 진단 사례중 대략 90％를 차지한다. 이러한 형태의 AD는 가족성 AD의 유전적 원인으로만 한정되지 않기 때문에 일반적으로 산발성이라 명명된다. 유전적 위험 요소는 이러한 형태의 질병에서 여전히 중요한 역할을 할 수 있다.

랄(Lal)과 포스터(Forster)는 자가면역 및 연령-관련 인지 저하에 대하여 검토하고, C57BL/6 마우스에서 뇌 반응성 항체 (BRA)의 존재를 논의하였다 (문헌 [Lal and Forster, Neurobiology of Aging, 9: 733-742 (1988)]). 토로(Toro) 등은, 프리세닐린-1 유전자 (PS-1)의 E280A 돌연변이를 수반하는 알츠하이머 환자의 혈청으로부터 유래된 카디오리핀 및 베타-아밀로이드에 대한 자가항체의 수준을 연구하였다 (문헌 [Toro et al. Rev . Neurol. 29(12):1104-7(1999)]). AD에서의 자가항체는 문헌 [Terryberry et al. Neurobiology of Aging 19(3): 205-216 (1998)]; [Singh et al. Neurosci . Lett 147(1): 25-28 (1992)]; [Davydova et al. Bull Exp. Biol. Med . 134(1): 23-25 (2002)]; [Capsoni et al. Mol . Cell . Neurosci. 21(1): 15-28 (2002)]; [Evseev et al. Bull Exp . Biol . Med. 131(4):305-308 (2001)]; [Appel et al. Ann . N. Y. Acad . Sci . 747: 183-194 (1994)]; [D'Andrea, M. Brain Res . 982(1): 19-30 (2003)]; [Mruthinti et al. Neurobiol Aging . 25(8): 1023-1032 (2004)]; [Nath et al. Neuromolecular Med. 3(1):29-39 (2003)]; [Weksler and Goodhardt Exp Gerontol. 37:971-979 (2002)]; 및 [Furlan et al. Brain 126(Pt 2):285-291 (2003)]을 비롯한 다른 문헌들에 의해서도 평가되었다.

또한, AD 요법과 관련해서는 문헌 [Keimowitz, R. Arch Neurol. 54(4):485-8 (1997)]; [Aisen et al. Neurology. 54(3):588-93 (2000)]; 및 [Aisen et al. Dementia. 7(4):201-6 (1996)]도 참조한다.

AD를 치료하는 것에 대하여 5개의 처방약이 미국 식품 의약품 안전청 (FDA)에 의해 승인받았다. 경증(mild) 내지 중간 정도의 AD 치료를 위해 승인받은 4개의 약물은 콜린에스테라제 저해제: 갈란타민, (레미닐(REMINYL)®), 리바스티그민 (엑셀론(EXELON)®), 도네페질 (아리셉트(Aricept)®), 및 타크린 (코그넥스(COGNEX)®)이다. 다섯번째로 승인받은 약물은 중간 내지 중증 AD의 요법용으로 승인받은 것으로서, 메만틴 (나멘다(Namenda)®)으로 명명되는 N-메틸 D-아스파테이트 (NMDA) 길항제이다.

CD20 항체 및 이를 사용하는 요법

림프구는 다양한 유형의 백혈구 중 하나로, 혈액 생성 과정 중 골수에서 생성된다. 림프구에는 2가지 주요 집단이 있는데, B 림프구 (B 세포)와 T 림프구 (T 세포)가 그것이다. 본원에서 특히 관심의 대상이 되는 림프구는 B 세포이다.

B 세포는 골수에서 성숙하여, 골수를 떠나면서 세포 표면에서 항원-결합 항체를 발현시킨다. 면역반응을 겪지 않은(naive) B 세포가 최초로 막-결합 항체에 특이적인 항원과 만났을 때, 이 세포는 빠르게 분열하기 시작해서 그 자손들이 기억 B 세포, 및 "플라즈마 세포"로 불리는 효과기 세포로 분화한다. 기억 B 세포는 생존 기간이 보다 길고, 원래의 모세포와 동일한 특이성을 갖는 막-결합 항체를 계속하여 발현시킨다. 플라즈마 세포는 막-결합 항체를 생산하지 않지만, 대신에 분비될 수 있는 형태의 항체를 생산한다. 분비된 항체는 체액성 면역의 주요한 효과기 분자이다.

CD20 항원 (인간 B-림프구-제한 분화 항원, Bp35로도 불림)은 전-B 림프구 및 성숙 B 림프구상에 위치하는, 분자량이 대략 35 kD인 소수성 막횡단 단백질이다 (문헌 [Valentine et al. J. Biol . Chem. 264(19):11282-11287 (1989)]; 및 [Einfeld et al. EMBO J. 7(3):711-717 (1988)]). 이 항원은 또한 90％ 초과의 B 세포 비-호지킨 림프종(NHL)에서 발현되지만 (문헌 [Anderson et al. Blood 63(6):1424-1433 (1984)]), 조혈 줄기 세포, 전-B 세포, 정상 플라즈마 세포 또는 다른 정상 조직에서는 발견되지 않는다 (문헌 [Tedder et al. J. Immunol. 135 (2): 973-979 (1985)]). CD20은 세포 주기 시작 및 분화에 대한 활성 과정에서 초기 단계(들)를 조절하고 (Tedder et al. 상기 참조), 칼슘 이온 채널로서 작용할 수 있다 (문헌 [Tedder et al. J. Cell . Biochem . 14D:195 (1990)]).

CD20이 B 세포 림프종에서 발현된다는 점에서, 이 항원은 그러한 림프종의 "표적화"를 위한 후보로서 작용할 수 있다. 본질적으로, 그러한 표적화는 하기와 같이 일반화될 수 있다: B 세포의 CD20 표면 항원에 대해 특이적인 항체를 환자에게 투여한다. 이들 항-CD20 항체는 (표면상으로) 정상 B 세포와 악성 B 세포 양자 모두의 CD20 항원에 특이적으로 결합하고; CD20 표면 항원에 결합한 항체는 신생물성 B 세포를 파괴하고 고갈시킬 수 있다. 추가로, 종양을 파괴시킬 수 있는 잠재능을 갖는 화학 물질 또는 방사선 표지는 그러한 물질이 신생물성 B 세포로 특이적으로 "전달"되도록 항-CD20 항체에 접합될 수 있다. 접근법에 상관없이, 1차 목적은 종양을 파괴시키는 것이고; 특이적 접근법은 사용되는 특정 항-CD20 항체에 의해 결정될 수 있는 바, CD20 항원을 표적화하기 위해 이용가능한 접근법은 상당히 다양할 수 있다.

리툭시마브 (리툭산(RITUXAN)®) 항체는 유전공학적으로 처리된, CD20 항원에 대한 키메라 뮤린/인간 단일클론 항체이다. 리툭시마브는 1998년 4월 7일자로 허여된 미국 특허번호 제5,736,137호 (Anderson et al.)에서 "C2B8"로 명명된 항체이다. 리툭시마브는 재발성 또는 난치성인 저급 또는 여포성의 CD20-양성 B 세포 비-호지킨 림프종을 앓는 환자의 치료용으로 처방된다. 시험관내에서, 리툭시마브가 보체-의존성 세포독성 (CDC) 및 항체-의존성 세포성 세포독성(ADCC)을 매개하고, 아포프토시스를 유도한다는 것이 증명되었다 (문헌 [Reff et al. Blood 83(2):435-445 (1994)]; [Maloney et al, Blood 88:637a (1996)]; [Manches et al, Blood 101:949-954 (2003)]). 리툭시마브와 화학요법 및 독소 사이의 시너지 효과도 실험적으로 관찰되었다. 특히, 리툭시마브는 약물-내성 인간 B 세포 림프종 세포주를 독소루비신, CDDP, VP-16, 디프테리아 독소 및 리신의 세포독성 효과에 대 해 감작시킨다 (문헌 [Demidem et al. Cancer Chemotherapy ＆ Radiopharmaceuticals 12(3): 177-186 (1997)]). 생체내 전-임상 연구 결과, 리툭시마브가 사이노몰거스 원숭이의 말초 혈액, 림프절 및 골수로부터 B 세포를 고갈시키는 것으로 밝혀졌다 (문헌 [Reff et al. Blood 83(2):435-445 (1994)]).

리툭시마브는 또한, B 세포 및 자가항체가 질병의 병태생리에서 중요한 역할을 하는 것으로 보여지는 다양한 비-악성 자가면역 질환에서도 연구되었다 (문헌 [Edwards et al, Biochem Soc . Trans. 30:824-828 (2002)]). 리툭시마브는 예를 들면, 류마티스 관절염 (RA) (문헌 [Leandro et al, Ann . Rheum . Dis . 61:883-888 (2002)]; [Edwards et al, Arthritis Rheum ., 46 (Suppl. 9): S46 (2002)]; [Stahl et al, Ann . Rheum . Dis., 62 (Suppl. 1): OP004 (2003)]; [Emery et al, Arthritis Rheum. 48(9): S439 (2003)]), 루푸스 (문헌 [Eisenberg, Arthritis. Res . Ther. 5:157-159 (2003)]; [Leandro et al, Arthritis Rheum. 46: 2673-2677 (2002)]; [Gorman et al, Lupus, 13: 312-316 (2004)]), 면역 혈소판감소 자색반 (문헌 [D'Arena et al, Leuk . Lymphoma 44:561-562 (2003)]; [Stasi et al, Blood , 98: 952-957 (2001)]; [Saleh et al, Semin . Oncol., 27 (Supp 12):99-103 (2000)]; [Zaia et al, Haematolgica, 87: 189-195 (2002)]; [Ratanatharathorn et al, Ann . Int . Med., 133: 275-279 (2000)]), 진정 적혈구계 무형성증 (문헌 [Auner et al, Br . J. Haematol, 116: 725-728 (2002)]); 자가면역성 빈혈 (문헌 [Zaja et al, Haematologica 87: 189-195 (2002) (erratum appears in Haematologica 87:336 (2002)]), 저온 응집병 (문헌 [Layios et al, Leukemia , 15: 187-8 (2001)]; [Berentsen et al, Blood , 103: 2925-2928 (2004)]; [Berentsen et al, Br . J. Haematol, 115: 79-83 (2001)]; [Bauduer, Br. J. Haematol, 112: 1083-1090 (2001)]; [Damiani et al, Br . J. Haematol, 114: 229-234 (2001)]), B형 중증 인슐린 저항 증후군 (문헌 [Coll et al, N. Engl . J. Med., 350: 310-311 (2004)]), 혼합 한랭글로불린혈증 (문헌 [DeVita et al, Arthritis Rheum. 46 Suppl. 9:S206/S469 (2002)]), 중증 근육무력증 (문헌 [Zaja et al, Neurology, 55: 1062-63 (2000)]; [Wylam et al, J. Pediatr ., 143:674-677 (2003)]), 베게너 육아종 (문헌 [Specks et al, Arthritis & Rheumatism 44: 2836-2840 (2001)]), 난치성 심상성 천포창 (문헌 [Dupuy et al, Arch Dermatol, 140:91-96 (2004)]), 피부근육염 (문헌 [Levine, Arthritis Rheum., 46 (Suppl. 9):S1299 (2002)), 쇼그렌 증후군 (문헌 [Somer et al, Arthritis & Rheumatism , 49: 394-398 (2003)]), 활성 II형 혼합 한랭글로불린혈증 (문헌 [Zaja et al, Blood, 101: 3827-3834 (2003)]), 심상성 천포창(문헌 [Dupay et al, Arch . Dermatol, 140: 91-95 (2004)]), 자가면역 신경병증 (문헌 [Pestronk et al, J. Neurol Neurosurg . Psychiatry 74:485-489 (2003)]), 부신생물성 안간대－간대성근경련증 증후군 (문헌 [Pranzatelli et al Neurology 60(Suppl. 1) PO5.128:A395 (2003)]), 및 재발－완화형 다발경화증(RRMS) (문헌 [Cross et al. (abstract) "Preliminary results from a phase II trial of rituximab in MS" Eighth Annual Meeting of the Americas Committees for Research and Treatment in Multiple Sclerosis, 20-21 (2003)])의 징후 및 증상을 잠재적으로 완화시킨다고 보고되었다.

제II상 연구 (WA16291)를 류마티스성 관절염 (RA) 환자에게서 수행하여, 리툭시마브의 안전성과 효능에 관한 48주 추적 데이터를 제공하였다 (문헌 [Emery et al. Arthritis Rheum 48(9):S439 (2003)]; [Szczepanski et al. Arthritis Rheum 48 (9):S121 (2003)]). 총 161명 환자를 균등하게 무작위로 분류하여 다음 4가지 처리군으로 나누었다: 메토트렉세이트, 리툭시마브 단독, 리툭시마브 + 메토트렉세이트, 및 리툭시마브 + 사이클로포스파미드 (CTX). 리툭시마브의 치료 섭생은 1일 및 15일째에 1g을 정맥내 투여하는 것이다. 리툭시마브를 대부분의 RA 환자에게 주입하는 것에 대해 대부분의 환자들은 내성을 나타내었고, 이러한 제1 주입 동안 환자의 36％가 하나 이상의 유해 사례를 경험하였다 (위약을 투여한 환자의 경우에는 30％가 경험하였다). 전반적으로 대다수의 유해 사례들은 중증도 면에서 약하거나 적당한 (중간) 수준인 것으로 간주되며, 모든 처리군들 간에 균형이 잘 이루어졌다. 48주 동안 상기 4가지 처리군에 대해 총 19개의 중증의 유해 사례가 발생하였는데, 이는 리툭시마브/CTX 처리군에서 약간 더 자주 발생하였다. 감염 발생률은 모든 처리군 간에 균형이 잘 이루어졌다. 이러한 RA 환자 집단에서의 평균 중증 감염률은 매년 환자 100명당 4.66명인데, 이는 지역 밀착형 역학적 연구에서 보고된 RA 환자들 중에 입원을 요하는 감염률 (매년 환자 100명당 9.57명) 보다는 낮다 (문헌 [Doran et al., Arthritis Rheum. 46: 2287-2293 (2002)]).

자가면역성 신경병증 [Pestronk et al., 상기 참조], 안간대－간대성근경련증 증후군 [Pranzatelli et al., 상기 참조] 및 RRMS [Cross et al., 상기 참조]를 포함한, 소수의 신경 장애 환자에게서 보고된 리툭시마브의 안전성 프로파일은 종 양학 또는 RA에서 보고된 바와 유사하였다. 현재 진행 중인 연구자들의 후원 하에 RRMS [Cross et al., 상기 참조] 환자에게서 리툭시마브를 인터페론-베타 (IFN-β) 또는 글라티라머 아세테이트와 병용한 시험 (IST)에서는, 치료받은 환자 10명 중의 1명이, 리툭시마브를 처음 주입한 후 적당한 수준의 발열과 경직을 경험한 후에 밤새 관찰하기 위해 입원시킨 반면, 나머지 9명의 환자들은 4회 주입 섭생을 완료하였는데, 유해 사례는 전혀 보고되지 않았다.

CD20 항체 및 CD20-결합성 분자에 관한 특허 및 특허 공개공보에는 다음이 포함된다: 미국 특허번호 제5,776,456호, 제5,736,137호, 제5,843,439호, 제6,399,061호 및 제6,682,734호 뿐만 아니라, US 2002/0197255, US 2003/0021781, US 2003/0082172, US 2003/0095963, US 2003/0147885 (앤더슨(Anderson) 등); 미국 특허번호 제6,455,043호, US 2003/0026804, 및 WO 2000/09160 (그릴로-로페즈, A.(Grillo-Lopez, A)); WO 2000/27428 (그릴로-로페즈 및 화이트(White)); WO 2000/27433 및 US 2004/0213784 (그릴로-로페즈 및 레오나드(Leonard)); WO 2000/44788 (브라슬라브스키(Braslawsky) 등); WO 2001/10462 (라스테터, W.(Rastetter, W.)); WO01/10461 (라스테터 및 화이트); WO 2001/10460 (화이트 및 그릴로-로페즈); US 2001/0018041, US 2003/0180292, WO 2001/34194 (한나(Hanna) 및 하리하란(Hariharan)); US 2002/0006404 및 WO 2002/04021 (한나 및 하리하란); US 2002/0012665 및 WO 2001/74388 (한나, N.); US 2002/0058029 (한나, N.); US 2003/0103971 (하리하란 및 한나); US 2002/0009444 및 WO 2001/80884 (그릴로-로페즈, A.); WO 2001/97858 (화이트, C); US 2002/0128488 및 WO 2002/34790 (레 프(Reff), M.); WO 2002/060955 (브라슬라브스키 등); W0 2002/096948 (브라슬라브스키 등); W0 2002/079255 (레프 및 데이비스(Davies)); 미국 특허번호 제6,171,586호 및 WO 1998/56418 (람(Lam) 등); WO 1998/58964 (라주, S.(Raju, S.)); WO 1999/22764 (라주, S.); WO 1999/51642, 미국 특허번호 제6,194,551호, 미국 특허번호 제6,242,195호, 미국 특허번호 제6,528,624호 및 미국 특허번호 제6,538,124호 (이두소기에(Idusogie) 등); WO 2000/42072 (프레스타, 엘.(Presta, L.)); WO 2000/67796 (커드(Curd) 등); WO 2001/03734 (그릴로-로페즈 등); US 2002/0004587 및 WO 2001/77342 (밀러(Miller) 및 프레스타); US 2002/0197256 (그루얼, L(Grewal, L)); US 2003/0157108 (프레스타, 엘.); WO 04/056312 (로우맨(Lowman) 등); US 2004/0202658 및 WO 2004/091657 (베니운네스, K.(Benyunes, K.)); WO 2005/000351 (찬, A.(Chan, A.)); US 2005/0032130A1 (Beresini et al); US 2005/0053602A1 (브루네타, P.(Brunetta, P.)); 미국 특허번호 제6,565,827호, 제6,090,365호, 제6,287,537호, 제6,015,542호, 제5,843,398호, 및 제5,595,721호, (카민스키(Kaminski) 등); 미국 특허번호 제5,500,362호, 제5,677,180호, 제5,721,108호, 제6,120,767호, 및 제6,652,852호 (로빈슨(Robinson) 등); 미국 특허번호 제6,410,391호 (라우비츠테크(Raubitschek) 등); 미국 특허번호 제6,224,866호 및 WO00/20864 (바르베라-길렘, E.(Barbera-Guillem, E.)); WO 2001/13945 (바르베라-길렘, E.); US2005/0079174A1 (바르베라-길렘 등); WO 2000/67795 (골덴버그(Goldenberg)); US 2003/0133930 및 WO 2000/74718 (골덴버그 및 한센(Hansen)); US 2003/0219433 및 WO 2003/68821 (한센 등); WO2004/058298 (골덴버그 및 한센); WO 2000/76542 (골레이(Golay) 등); WO 2001/72333 (울린(Wolin) 및 로젠블럿(Rosenblatt)); 미국 특허번호 제6,368,596호 (게티에(Ghetie) 등); 미국 특허번호 제6,306,393호 및 US 2002/0041847 (골덴버그, D.); US 2003/0026801 (와이너(Weiner) 및 하트만(Hartmann)); WO 2002/102312 (잉글만, E.(Engleman, E.)); US 2003/0068664 (알비타르(Albitar) 등); WO 2003/002607 (렁, S.(Leung, S.)); WO 2003/049694, US2002/0009427, 및 US 2003/0185796 (울린 등); WO 2003/061694 (싱(Sing) 및 시에갈(Siegall)); US 2003/0219818 (보헨(Bohen) 등); US 2003/0219433 및 WO 2003/068821 (한센 등); US 2003/0219818 (보헨 등); US2002/0136719 (세노이(Shenoy) 등); WO 2004/032828 (왈(Wahl) 등); WO 2002/56910 (헤이든-레드베터(Hayden-Ledbetter)); US 2003/0219433 A1 (한센 등); WO 2004/035607 (틸링(Teeling) 등); US 2004/0093621 (시타라(Shitara) 등); WO 2004/103404 (왓킨스(Watkins) 등); WO 2005/000901 (테더(Tedder) 등); US 2005/0025764 (왓킨스 등); WO2005/016969 및 US 2005/0069545 A1 (카르(Carr) 등); 및 WO 2005/014618 (창 등). 미국 특허번호 제5,849,898호 및 EP 330,191 (시드(Seed) 등); EP 332,865 A2 (마이어(Meyer) 및 바이스(Weiss)); 미국 특허번호 제4,861,579호 (마이어 등); US 2001/0056066 (부젤스키(Bugelski) 등); 및 WO 1995/03770 (바트(Bhat) 등)도 참조한다.

US2005/0079184 A1, US2004/0018557 A1, WO2005/016241 A2, WO2005/009539 A2, WO2004/105684 A2, WO2004/080387 A2, WO2004/074434 A2, WO2004/060911 A2, WO2004/045512 A2, WO2004/032828 A2, 및 WO2003/043583 A2도 참조한다.

리툭시마브를 사용하는 요법과 관련된 공개문헌에는 다음 문헌이 포함된다: (문헌 [Perotta and Abuel, "Response of chronic relapsing ITP of 10 years duration to rituximab" Abstract # 3360 Blood 10(1)(part 1-2): p. 88B (1998)]; [Perotta et al, "Rituxan in the treatment of chronic idiopathic thrombocytopenic purpura (ETP)", Blood, 94: 49 (abstract) (1999)]; [Matthews, R., "Medical Heretics" New Scientist (J April, 2001)]; [Leandro et al, "Lymphocyte depletion in rheumatoid arthritis: early evidence for safety, efficacy and dose response" Arthritis and Rheumatism 44(9): S370 (2001)]; [Leandro et al, "An open study of B lymphocyte depletion in systemic lupus erythematosus", Arthritis and Rheumatism, 46:2673-2677 (2002)] (여기서, 2주의 기간 동안에 각 환자에게 리툭시마브 500-mg 주입 2회, 사이클로포스파미드 750-mg 주입 2회 및 고투여량의 경구 코르티코스테로이드 투여를 실시하였고, 치료받는 환자 중 2명에서는 각각 제7개월 및 제8개월째 재발하였으며, 이들은 다른 프로토콜을 이용한 재치료를 받았다); [Weide et al, "Successful long-term treatment of systemic lupus erythematosus with rituximab maintenance therapy" Lupus, 12: 779-782 (2003)] (여기서, 환자에게 리툭시마브 치료 (375 mg/㎡ x 4, 1주 간격으로 반복)를 실시하고 추가의 리툭시마브 투여를 5 내지 6개월마다 실시한 후에 리툭시마브 375 mg/㎡을 사용한 유지 요법을 3개월마다 실시하였으며, 또다른 무반응 SLE 환자에게는 리툭시마브를 이용한 치료가 성공적이었고, 매 3개월마다 유지 요법을 실시하였다; 두 환자 모두가 리툭시마브 요법에 잘 반응하였다); [Edwards and Cambridge, "Sustained improvement in rheumatoid arthritis following a protocol designed to deplete B lymphocytes" Rheumatology 40:205-211 (2001)]; [Cambridge et al, "B lymphocyte depletion in patients with rheumatoid arthritis: serial studies of immunological parameters" Arthritis Rheum., 46 (Suppl. 9): S 1350 (2002)]; [Edwards et al, "Efficacy and safety of rituximab, a B-cell targeted chimeric monoclonal antibody: A randomized, placebo controlled trial in patients with rheumatoid arthritis. Arthritis and Rheumatism 46(9): S 197 (2002)]; [Pavelka et al., Ann . Rheum. Dis. 63: (S1):289-90 (2004)]; [Emery et al, Arthritis Rheum. 50 (S9):S659 (2004)]; [Levine and Pestronk, "IgM antibody-related polyneuropathies: B-cell depletion chemotherapy using rituximab" Neurology 52: 1701-1704 (1999)]; [DeVita et al, "Efficacy of selective B cell blockade in the treatment of rheumatoid arthritis" Arthritis & Rheum 46:2029-2033 (2002)]; [Hidashida et al. "Treatment of DMARD-refractory rheumatoid arthritis with rituximab." Presented at the Annual Scientific Meeting of the American College of Rheumatology; Oct 24- 29; New Orleans, LA (2002)]; [Tuscano, J. "Successful treatment of infliximab-refractory rheumatoid arthritis with rituximab" Presented at the Annual Scientific Meeting of the American College of Rheumatology; Oct 24-29; New Orleans, LA (2002)]; ["Pathogenic roles of B cells in human autoimmunity; insights from the clinic" Martin and Chan, Immunity 20:517-527 (2004)]; [Silverman and Weisman, "Rituximab Therapy and Autoimmune Disorders, Prospects for Anti-B Cell Therapy", Arthritis and Rheumatism, 48: 1484-1492 (2003)]; [Kazkaz and Isenberg, "Anti B cell therapy (rituximab) in the treatment of autoimmune diseases", Current opinion in pharmacology, 4: 398-402 (2004)]; [Virgolini and Vanda, "Rituximab in autoimmune diseases", Biomedicine & pharmacotherapy, 58: 299-309(2004)]; [Klemmer et al., "Treatment of antibody mediated autoimmune disorders with an anti-CD20 monoclonal antibody Rituximab", Arthritis and Rheumatism, 48(9):S624-S624 (2003)]; [Kneitz et al., "Effective B cell depletion with rituximab in the treatment of autoimmune diseases", Immunobiology, 206:519-527 (2002)]; [Arzoo et al., "Treatment of refractory antibody mediated autoimmune disorders with an anti-CD20 monoclonal antibody (rituximab) "Annals of the Rheumatic Diseases, 61(10):922-4 (2002)]; [Looney, R, "Treating human autoimmune disease by depleting B cells" Ann Rheum Dis. 61(10): 863-866 (2002)]; [Lake and Dionne, "Future Strategies in Immunotherapy" Burger's Medicinal Chemistry and Drug Discovery (2003 by John Wiley & Sons, Inc.) Article Online Posting Date: January 15, 2003 (Chapter 2 " Antibody-Directed Immunotherapy")]; [Liang and Tedder, Wiley Encyclopedia of Molecular Medicine, Section: CD20 as an Immunotherapy Target, article online posting date: 15 January, 2002 entitled "CD20"; Appendix 4A entitled "Monoclonal Antibodies to Human Cell Surface Antigens" by Stockinger et al., eds: Coligan et al, in Current Protocols in Immunology (2003 John Wiley & Sons, Inc) Online Posting Date: May, 2003; [Print Publication Date: February, 2003]; [Penichet and Morrison, "CD Antibodies/molecules: Definition]; Antibody Engineering" in Wiley Encyclopedia of Molecular Medicine Section: Chimeric, Humanized and Human Antibodies; posted online 15 January, 2002; Specks et al. "Response of Wegener's granulomatosis to anti-CD20 chimeric monoclonal antibody therapy" Arthritis & Rheumatism 44:2836-2840 (2001)]; [online abstract submission and invitation Koegh et al., "Rituximab for Remission Induction in Severe ANCA-Associated Vasculitis: Report of a Prospective Open-Label Pilot Trial in 10 Patients", American College of Rheumatology, Session Number: 28-100, Session Title: Vasculitis, Session Type: ACR Concurrent Session, Primary Category: 28 Vasculitis, Session 10/18/2004 (http://www.abstractsonline.com/viewer/SearchResults.asp)]; [Eriksson, "Short-term outcome and safety in 5 patients with ANCA-positive vasculitis treated with rituximab", Kidney and Blood Pressure Research, 26: 294 (2003)]; [Jayne et al., "B-cell depletion with rituximab for refractory vasculitis" Kidney and Blood Pressure Research, 26: 294 (2003)]; [Jayne, poster 88 (11^th International Vasculitis and ANCA workshop), 2003 American Society of Nephrology]; [Stone and Specks, "Rituximab Therapy for the Induction of Remission and Tolerance in ANCA-associated Vasculitis", in the Clinical Trial Research Summary of the 2002-2003 Immune Tolerance Network, http://www.immunetolerance.org/research/autoimmune/trials/stone.html]; 및 [Leandro et al., "B cell repopulation occurs mainly from naitive B cells in patient with rheumatoid arthritis and systemic lupus erythematosus" Arthritis Rheum., 48 (Suppl 9): S 1160 (2003)]).

발명의 요약

제1 측면에서, 본 발명은 알츠하이머병을 치료하는데 유효한 양으로 네이키드(naked) CD20 항체를 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 대상에서 알츠하이머병을 치료하는 방법을 제공한다.

제2 측면에서, 본 발명은 치매를 치료하는데 유효한 양으로 네이키드 CD20 항체를 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 대상에서 치매를 치료하는 방법에 관한 것이다.

본 발명은 추가로,

(a) 네이키드 CD20 항체를 내부에 포함하는 용기; 및

(b) 대상에서 알츠하이머병을 치료하는 것에 관한 설명서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 제품에 관한 것이다.

도 1A는 뮤린 2H7 (서열번호: 1), 인간화된 2H7.v16 변이체 (서열번호: 2), 및 인간 카파 경쇄 서브그룹(subgroup) I (서열번호: 3) 각각의 경쇄 가변 도메인 (V_L)의 아미노산 서열을 비교하는 서열 배열이다. 2H7 및 hu2H7.v16의 V_L의 CDR은 하기와 같다: CDR1 (서열번호: 4), CDR2 (서열번호: 5), 및 CDR3 (서열번호: 6).

도 1B는 뮤린 2H7 (서열번호: 7), 인간화된 2H7.v16 변이체 (서열번호: 8) 각각의 중쇄 가변 도메인 (V_H), 및 중쇄 서브그룹 III의 인간 공통(consensus) 서열 (서열번호: 9)의 아미노산 서열을 비교하는 서열 배열이다. 2H7 및 hu2H7.v16의 V_H의 CDR은 하기와 같다: CDR1 (서열번호: 10), CDR2 (서열번호: 11), 및 CDR3 (서열번호: 12).

도 1A 및 도 1B의 각 쇄에서 CDR1, CDR2 및 CDR3은 표시된 바와 같이, 프레임워크 영역, FR1-FR4 측면에 위치하고, 괄호 안에 표시되어 있다. 2H7은 뮤린 2H7 항체를 언급한다. 배열된 2개의 서열 사이의 별표는 양 서열에서 상이한 위치를 나타낸다. 잔기 번호부여는 문헌 [Kabat et al. Sequences of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]을 따르고, 삽입부는 a, b, c, d, 및 e로 나타낸다.

도 2는 카베트(Kabat) 가변 도메인 잔기 번호부여 및 Eu 불변 도메인 잔기 번호부여를 포함하여 성숙한 2H7.v16 및 2H7.v511 경쇄 (각각 서열번호: 13 및 15)의 배열을 나타낸다.

도 3은 카베트 가변 도메인 잔기 번호부여 및 Eu 불변 도메인 잔기 번호부여 를 포함하여 성숙한 2H7.v16 및 2H7.v511 중쇄 (각각 서열번호: 14 및 16)의 배열을 포함한다.

바람직한 실시태양의 상세한 설명

I. 정의

"치매"는 기질적 또는 심리적 요인에 기인한 것으로서, 지남력장애, 기억, 판단 및 지력 장애, 및 얕은 유동 정동(shallow labile affect) 등을 특징으로 하는 일반적인 정신 퇴화를 언급한다. 본원에서 치매는 혈관 치매, 허혈성 혈관 치매 (IVD), 전측두엽 치매 (FTD), 레비소체(Lewy body) 치매, 알츠하이머 치매 등을 포함한다. 노인에게 있어 가장 보편적인 치매 형태는 알츠하이머병 (AD)이다.

"알츠하이머병 (AD)"은 기억 상실, 혼돈, 및 지남력장애의 징후로 나타나는 것으로서, 일반적으로 노년기에 발생되고, 통상 5-10년 후에는 사망에 이르게 하는 진행성 정신 퇴화를 언급한다. 알츠하이머병은 신경전문의 또는 전문 임상의에 의해 진단받을 수 있다. 하나의 실시태양에서, AD를 앓는 대상은 개연적(probable) AD이 존재에 대한, 국립 신경 전염성 질병 및 뇌졸중 연구소 및 알츠하이머의 병과 관련된 질환에 관한 기관(National Institute of Neurological and Communicative Disorders and Stroke/Alzheimer's Disease and Related Disorders Association)(NINCDS/ADRDA)의 기준을 충족시켜야 한다.

"경증 내지 중간 정도의" 또는 "조기 단계의" AD라는 표현은 본원에서 동의어로서 사용되며, 이는 진행되지 않고, 질병의 징후 또는 증상이 중증이 아닌 AD를 언급하기 위하여 사용된다. 경증 내지 중간 정도의 또는 조기 단계의 AD를 앓는 대상은 신경전문의 또는 전문 임상의에 의해 확인받을 수 있다. 하나의 실시태양에서, 경증 내지 중간 정도의 AD를 앓는 대상은 간이정신상태 검사(Mini-Mental State Examination)(MMSE)를 사용하여 확인을 받게 된다.

본원에서, "중간 정도 내지 중증의" 또는 "말기의" AD는 진행성이고, 질병의 징후 또는 증상이 뚜렷한 AD를 언급한다. 그러한 대상은 신경전문의 또는 전문 임상의에 의해 확인받을 수 있다. 이러한 형태의 AD를 앓는 대상은 콜린에스테라제 저해제를 사용하는 요법에 대해서는 더이상 반응하지 않을 수 있고, 수준이 현저히 감소된 아세틸콜린을 가질 수 있다. 하나의 실시태양에서, 중간 정도 내지 중증의 AD를 앓는 대상은 간이정신상태 검사(MMSE)를 사용하여 확인을 받게 된다.

"간이정신상태 검사"(MMSE)는 기억상의 문제를 호소하기 위해, 또는 치매 진단을 고려해 볼 때 가장 보편적으로 사용되는 시험이다. 점수가 12 내지 26점인 대상은 경증 내지 중간 정도의 치매 또는 AD인 것으로 간주될 수 있다. 12점 미만인 대상은 중증의 치매 또는 AD인 것으로 간주될 수 있다. MMSE는 일련의 질문과 시험을 포함하며, 이들 각각은 정답 제출시에 점수가 가해진다. 모두 정답을 맞출 경우의 가능한 최대 점수는 30점이다. 알츠하이머병을 앓는 사람의 점수는 26점 이하이다. 완전한 시험의 복사본은 사이코로지칼 어세스먼트 리소스(Psychological Assessment Resources)(PAR)의 웹사이트 http://www.parinc.com으로부터 이용가능하다.

"가족성 AD"는 유전적 결함에 의해 유발된 유전적 형태의 AD이다.

"산발성 AD"는 환경적 요인과 유전적 요인, 예로서, Apo E4+ 유전자형의 조 합에 의해 유발된다고 여겨지는, 가장 보편적 형태의 AD이다. AD로 진단받은 전체 환자중 거의 90％는 산발성 형태의 질병을 앓는다.

"표준 의료용(standard-of care)" 약제는 AD 또는 치매를 치료하는데 가장 보편적으로 사용되는 하나 이상의 약제를 의미한다; 예를 들면, AD용 표준 의료용 약제는 콜린에스테라제 저해제 및/또는 NMDA 길항제일 수 있다.

AD 또는 치매의 "증상"은 대상이 겪게 되고, AD 또는 치매를 암시하는, 구조, 작용, 또는 감각에 있어서의 임의의 병적 현상 또는 정상으로부터의 이탈이다.

본원에서 "대상"은 인간 대상이다. 본원에서의 목적상, 대상은 AD 또는 치매 대상을 언급한다. 일반적으로, 대상은 AD 또는 치매의 치료에 적합하다. 본원에서의 목적상, 그러한 적합한 대상은 하나 이상의 AD 또는 치매 징후 또는 증상을 경험하고 있거나, 경험한 적이 있거나, 경험할 가능성이 있는 사람이다. AD 또는 치매 진단은, AD의 징후 및 증상이 허혈성 혈관 치매 (IVD)의 것과 함께 존재하는 혼합형 치매 (MIX)의 진단을 포함할 수 있다. 하나의 실시태양에서, 대상은 AD 이외의 자가면역 질병은 앓고 있지 않다. AD 또는 치매를 앓고 있거나, 앓을 수 있는 위험성이 있는 대상은 임의로 혈청, 뇌척수액 (CSF) 및/또는 노인성 반점(들)내 CD20-양성 B 세포 수준이 상승한 것으로 선별된 대상으로서 확인될 수 있다. 별법으로, 또는 추가로, 대상은 자가항체를 검출하는 분석법을 사용하여 선별될 수 있고, 정성 및 바람직하게는, 정량적으로 평가될 수 있다. 그러한 자가항체는 예를 들면, ELISA에 의해 대상의 혈청, 뇌척수액 (CSF), 및/또는 노인성 반점(들)에서 검출될 수 있다.

"자가항체"는 대상에 의해 유발되고, 대상 본인의 항원에 대한 항체이다. AD 또는 치매와 관련된 예시적인 자가항체는 뇌-반응성 항체 (BRA), 및 베타-아밀로이드, 카디오리핀, 튜불린, 신경교섬유산 단백질, 신경세사 단백질 (NFL), 강글리오시드, 세포골격 단백질, 수초 염기성 단백질 (MBP), 세로토닌, 도파민, 프리세닐린, 아밀로이드 베타-펩티드 (Abeta), 진행성 당화 최종 산물에 대한 수용체 (RAGE), 신경 성장 인자 (NGF) 등에 대한 항체를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다.

"비정형(atypical)" 자가항체 수준은 정상 수준을 초과하는 자가항체 수준을 의미한다. 그러한 정상 또는 정형 자가항체 수준은 정상인 대상, 또는 AD 또는 치매를 앓고 있지 않은 대상으로부터 유래된 생체 샘플에서 발견되는 수준일 수 있다. 생체 샘플은 혈청, CSF, 또는 노인성 반점일 수 있다.

"뇌-반응성 항체" 또는 "BRA"는 대상의 혈청, 뇌척수액 (CSF), 및/또는 뇌조직에 존재하는, 임의의 특발성 인간 항체 군집으로서, 이는 다른 정상인 인간 조직과 반응하는 경우보다도 더욱 큰 특이성으로 인간 뇌 및/또는 인간 중추신경계 (CNS)와 반응할 수 있다.

본원에서 대상의 "치료"는 치유적 치료 및 예방 또는 사전 방지적 조치를 모두 의미한다. 치료가 필요한 대상으로는 이미 AD 또는 치매를 앓는 대상 뿐만 아니라, AD 또는 치매가 예방되어야 하는 대상도 포함된다. 따라서, 대상은 AD 또는 치매를 앓는 것으로 진단받을 수 있거나, 또는 AD 또는 치매에 대한 소양이 있거나 AD 또는 치매에 걸리기 쉬울 수 있다. 본원에서 사용되는 바, 용어 "치료하는", " 치료하다" 또는 "치료"는 사전 방지 (예로서, 예방), 완화 및 치유 치료를 포함한다.

"유효량"이란 표현은 치매 또는 AD를 사전 방지, 호전 또는 치료하는데 효과적인 항체 (다른 약물)의 양을 의미한다. 그러한 유효량은 일반적으로 치매 또는 알츠하이머병의 징후 또는 증상을 개선시킬 것이며, 예를 들면, 인지 작용 (예를 들면, 기억, 언어, 비판적 사고, 읽기 및/또는 쓰기 능력)을 유지시키고; 질병의 진행 속도를 늦추고; 발병을 지연시키거나 질병을 함께 사전에 방지하고; 질병과 관련된 행동상의 문제를 관리하고; 우울증 및/또는 무감정을 치료하고; 예로서, 공격 및/또는 불안과 같은 행동을 치료하고; 예로서, 의식주와 같은 일상 생활 능력의 상실 속도를 늦추고; 자가항체 수준(들)을 감소시키고; CD20 양성 B-세포 갯수 (예를 들면, 혈청, CNS 및/또는 노인성 반점내의 것)를 감소시킬 것이다.

"콜린에스테라제 저해제"는 아세틸콜린 및/또는 부티릴콜린의 분해를 차단하거나 방해하는 제제 또는 조성물이다. 콜린에스테라제 저해제의 일례는 갈란타민, (레미닐®), 리바스티그민 (엑셀론®), 도네페질 (아리셉트®), 타크린 (코그넥스®), 및 휴프린 X(HUPRINE X)™을 포함한다.

본원에서 "N-메틸 D-아스파테이트 (NMDA) 길항제"는 NMDA를 차단하거나 방해하고/하거나 과량의 글루타메이트 및/또는 글루타메이트 활성화를 조절하는 제제 또는 조성물이다. 예시적인 NMDA 길항제는 메만틴 (나멘다®) 및 네라멕산을 포함한다.

본원에서 사용되는 바, 보조 치료를 위한 "면역억제제"라는 용어는 본원에서 치료받을 대상의 면역계를 억제시키거나 차폐시키는 작용을 하는 물질을 언급한다. 이들 물질로서 사이토카인 생산을 억제시키는 물질, 자가-항원 발현을 하향-조절하거나 억제시키는 물질, 또는 MHC 항원을 차폐시키는 물질을 포함한다. 그러한 물질의 예로서 2-아미노-6-아릴-5-치환된 피리미딘 (미국 특허번호 제 4,665,077호 참조); 비-스테로이드계 항염증성 약물 (NSAID); 강사이클로비르, 타크롤리무스, 글루코코르티코이드, 예를 들면, 코르티솔 또는 알도스테론; 항염증제, 예를 들면, 사이클로옥시게나제 저해제, 5-리폭시게나제 저해제, 또는 류코트리엔 수용체 길항제; 퓨린 길항제, 예를 들면, 아자티오프린 또는 미코페놀레이트 모페틸 (MMF); 알킬화제, 예를 들면, 사이클로포스파미드; 브로모크립틴; 다나졸; 다프손; 글루타르알데히드 (미국 특허번호 제4,120,649호에 기재된 바와 같이, MHC 항원을 은폐시킴); MHC 항원 및 MHC 단편에 대한 항-개체특이형 항체; 사이클로스포린; 6 머캅토퓨린; 스테로이드, 예를 들면, 코르티코스테로이드 또는 글루코코르티코스테로이드 또는 글루코코르티코이드 유사체, 예를 들면, 프레드니손, 솔루-메드롤(SOLU-MEDROL)^® 메틸프레드니솔론 숙신산나트륨을 비롯한 메틸프레드니손, 및 덱사메타손; 디히드로폴레이트 리덕타제 저해제, 예를 들면, 메토트렉세이트 (경구 또는 피하); 항말라리아제, 예를 들면, 클로로퀸 및 히드록사이클로로퀸; 설파살라진; 레플루노미드; 항-인터페론-알파, -베타, 또는 -감마 항체, 항종양 괴사 인자 (TNF)-알파 항체 (인플릭시마브 (레미카드(REMICADE)® 또는 아달리무마브), 항-TNF-알파 면역부착인자 (에탄에르셉트), 항-TNF-베타 항체, 항-인터루킨-2 (IL-2) 항체 및 항-IL-2 수용체 항체, 항-인터루킨-6 (IL-6) 수용체 항체 및 길항제를 비롯한 사이토킨 또는 사이토킨 수용체 항체 또는 길항제; 항-CD11a 및 항-CD18 항체를 비롯한 항-LFA-1 항체; 항-L3T4 항체; 이종 항-림프구 글로불린; 범(pan)-T 항체, 바람직하게는, 항-CD3 또는 항-CD4/CD4a 항체; LFA-3 결합 영역을 함유하는 가용성 펩티드 (1990년 7월 26일자로 공개된 WO 90/08187); 스트렙토키나제; 전환 성장 인자-베타 (TGF-베타); 스트렙토도르나제; 숙주로부터의 RNA 또는 DNA; FK506; RS-61443; 클로람부실; 데옥시스페르구알린; 라파마이신; T-세포 수용체 (미국 특허번호 제5,114,721호 (코헨(Cohen) 등)); T-세포 수용체 단편 (문헌 [Offner et al., Science, 251: 430-432 (1991)]; WO 1990/11294; [Ianeway, Nature, 341: 482 (1989)]; 및 WO 91/01133); BAFF 길항제, 예로서, BAFF 또는 BR3 항체 또는 면역부착인자 및 zTNF4 길항제 (검토를 위해서는 문헌 [Mackay and Mackay, Trends Immunol, 23:113-5 (2002)]을 참조하고, 또한 이하의 정의를 참조한다); CD40-CD40 리간드에 대한 차단 항체를 비롯한, T 세포 헬퍼 시그날을 방해하는 생물학적 치료제, 예로서, 항-CD40 수용체 또는 항-CD40 리간드 (CD 154) (예로서, 문헌 [Durie et al., Science , 261: 1328-30 (1993)]; [Mohan et al, J. Immunol, 154: 1470-80 (1995)]) 및 CTLA4-Ig (문헌 [Finck et al, Science, 265: 1225-7 (1994)]); 및 T-세포 수용체 항체 (EP 340,109), 예로서, T10B9를 포함한다.

본원에서 사용되는 바, "세포 독성제"라는 용어는 세포의 기능을 저해하거나 저지시키고/시키거나 세포를 파괴시키는 물질을 언급한다. 상기 용어는 방사성 동 위원소 (예를 들면, At²¹¹, I¹³¹, I¹²⁵, Y⁹⁰, Re¹⁸⁶, Re¹⁸⁸, Sm¹⁵³, Bi²¹², P³² 및 Lu의 방사성 동위원소), 화학 요법제 및 독소, 예로서, 세균, 진균, 식물 또는 동물 기원의 소분자 독소 또는 효소 활성 독소, 또는 그의 단편을 포함하고자 한다.

"화학요법제"는 암을 치료하는데 유용한 화학적 화합물이다. 화학요법제의 예에는 알킬화제, 예를 들면, 티오테파 및 사이클로포스파미드 (사이톡산(CYTOXAN)®); 알킬 설포네이트, 예로서, 부설판, 임프로설판 및 피포설판; 아지리딘, 예로서, 벤조도파, 카르보쿠온, 메투레도파, 및 우레도파; 알트레타민, 트리에틸렌멜라민, 트리에틸렌포스포르아미드, 트리에틸렌티오포스포르아미드 및 트리메틸롤로멜라민을 비롯한 에틸렌이민 및 메틸라멜라민; 아세토게닌 (특히, 불라타신 및 불라타시논); 델타-9-테트라하이드로칸나비놀 (드로나비놀, 마리놀(MARINOL)®); 베타-라파콘; 라파콜; 콜키신; 베툴린산; 캄프토테신 (합성 유사체 토포테칸 (하이캄틴(HYCAMTIN)®), CPT-11 (이리노테칸, 캄프토사르(CAMPTOSAR)®), 아세틸캄프토테신, 스코폴렉틴, 및 9-아미노캄프토테신 포함); 브리오스타틴; 칼리스타틴; CC-1065 (그의 아도젤레신, 카르젤레신 및 비젤레신 합성 유사체 포함); 포도필로톡신; 포도필린산; 테니포시드; 크립토피신 (특히 크립토피신 1 및 크립토피신 8); 돌라스타틴; 두오카르마이신 (합성 유사체 KW-2189 및 CB1-TM1 포함); 엘레우테로빈; 판크라티스타틴; 사르코딕티인; 스폰지스타틴; 질소 머스타드, 예로서, 클로람부실, 클로르나파진, 콜로포스파미드, 에스트라무스틴, 이포스파미드, 메클로르에타민, 메클로르에타민 옥시드 하이드로클로라이드, 멜팔란, 노벰비킨, 페네스테린, 프레드니무스틴, 트로포스파미드, 우라실 머스타드; 니트로스우레아, 예로서, 카르무스틴, 클로로조토신, 포테무스틴, 로무스틴, 니무스틴, 및 라님무스틴; 항생제, 예로서, 엔디인 항생제 (예로서, 칼리케아미신, 특히 칼리케아미신 감마1I 및 칼리케아미신 오메가I1 (문헌 [Agnew, Chem Intl . Ed . Engl. 33: 183-186 (1994)] 참조); 디네미신 (디네미신 A 포함); 에스페라미신; 뿐만 아니라 네오카르지노스타틴 발색단 및 관련 색단백질 엔디인 항생제 발색단), 아클라시노마이신, 악티노마이신, 아우트라마이신, 아자세린, 블레오마이신, 칵티노마이신, 카라비신, 카르미노마이신, 카르지노필린, 크로모마이시니스, 닥티노마이신, 다우노루비신, 데토루비신, 6-디아조-5-옥소-L-노르루이신, 독소루비신 (아드리아마이신(ADRIAMYCIN)®, 모르폴리노-독소루비신, 시아노모르폴리노-독소루비신, 2-피롤리노-독소루비신, 독소루비신 HCl 리포좀 주사체 (독실(DOXIL)®) 및 데옥시독소루비신 포함), 에피루비신, 에소루비신, 이다루비신, 마르셀로마이신, 미토마이신 (예로서, 미토마이신 C), 미코페놀산, 노갈라마이신, 올리보마이신, 페플로마이신, 포트피로마이신, 푸로마이신, 쿠엘라마이신, 로도루비신, 스트렙토니그린, 스트렙토조신, 투베르시딘, 우베니멕스, 지노스타틴, 조루비신; 항대사제, 예로서, 메토트렉세이트, 젬시타빈 (젬자(GEMZAR)®), 테가푸르 (우프토랄(UFTORAL)®), 카페시타빈 (젤로다(XELODA)®), 에포틸론 및 5-플루오로우라실 (5-FU); 엽산 유사체, 예로서, 데노프테린, 메토트렉세이트, 프테로프테린, 트리메트렉세이트; 퓨린 유사체, 예로서, 플루다라빈, 6-머캅토퓨린, 티아미프린, 티오구아닌; 피리미딘 유사체, 예로서, 안시타빈, 아자시티딘, 6-아자우리딘, 카르모푸르, 시타라빈, 디데옥시우리딘, 독시플루리딘, 에노시타빈, 플록수리딘; 항부신제, 예로서, 아미노글루테티미드, 미토탄, 트릴로스탄; 엽산 보충물, 예로서, 프롤린산; 아세글라톤; 알도포스파미드 글리코시드; 아미노레불린산; 에닐우라실; 암사크린; 베스트라부실; 비산트렌; 에다트락세이트; 데포파민; 데메콜신; 디아지쿠온; 엘포르니틴; 엘리프티늄 아세테이트; 에토글루시드; 질산갈륨; 하이드록시우레아; 렌티난; 로니다이닌; 마이탄시노이드, 예로서, 마이탄신 및 안사미토신; 미토구아존; 미톡산트론; 모피단몰; 니트라에린; 펜토스타틴; 페나메트; 피라루비신; 로속산트론; 2-에틸히드라지드; 프로카르바진; PSK® 다당류 복합체 ((오리곤주 유진에 소재하는 JHS 내츄럴프로덕츠(JHS NaturalProducts); 라족산; 리족신; 시조피란; 스피로게르마늄; 테누아존산; 트리아지쿠온; 2,2',2"-트리클로로트리에틸아민; 트리코테센 (특히, T-2 독소, 베라쿠린 A, 로리딘 A 및 안구이딘); 우레탄; 빈데신 (엘디신(ELDISINE)®, 필데신(FILDESIN)®); 다카르바진; 만노무스틴; 미토브로니톨; 미토락톨; 피포브로만; 가시토신; 아라비노시드 ("Ara-C"); 티오테파; 탁소이드, 예로서, 파클리탁셀 (탁솔(TAXOL)®), 파클리탁셀 (아브락산(ABRAXANE)™)의 알부민-공학적으로 처리된 나노입자 제형 및 독세탁셀 (택소티어(TAXOTERE)®); 클로람부실; 6-티오구아닌; 머캅토퓨린; 메토트렉세이트; 백금 유사체, 예로서, 시스플라틴 및 카르보플라틴; 빈블라스틴 (벨반(VELBAN)®); 백금; 에토포시드 (VP-16); 이포스파미드; 미톡산트론; 빈크리스틴 (온코빈(ONCOVIN)®); 옥살리플라틴; 류코보빈; 비노렐빈 (나벨빈(NAVELBINE)®); 노반트론; 에다트렉세이트; 다우노마이신; 아미노프테린; 이반드로네이트; 토포이소머라제 저해제 RFS 2000; 디플루오로메틸오르니틴 (DMFO); 레 티노이드 (예: 레티노산); 및 상기 언급된 임의의 것의 약제학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체 뿐만 아니라 상기의 2가지 이상의 병용물, 예를 들면, CHOP (이는 사이클로포스파미드, 독소루비신, 빈크리스틴 및 프레드니솔론의 병용 요법에 대한 약어임), 및 FOLFOX (이는 5-FU 및 류코보빈과 병용된 옥살리플라틴 (엘록사틴(Eloxatin)™)을 이용한 치료 섭생에 대한 약어임)을 포함한다.

상기 정의에는 또한, 암의 성장을 증진시킬 수 있는 호르몬의 효과를 조절, 감소, 차단 또는 저해시키는 작용을 하고, 종종 전신성, 또는 온몸 치료 형태인 항-호르몬제가 포함된다. 이들은 호르몬 자체일 수 있다. 일례로 항-에스트로겐제 및 선택적 에스트로겐 수용제 조절제 (SERM)가 포함되는데, 예로서, 타목시펜 (놀바덱스(NOLVADEX)® 타목시펜 포함), 랄록시펜 (에비스타(EVISTA)®), 드롤록시펜, 4-하이드록시타목시펜, 트리옥시펜, 케옥시펜, LY117018, 오나프리스톤 및 토레미펜 (파레스톤(FARESTON)®); 항-프로게스테론; 에스트로겐 수용체 하향 조절제 (ERDs); 에스트로겐 수용체 길항제, 예를 들면, 풀베스트란트 (파스로덱스(FASLODEX)®); 난소를 억제시키거나 난소의 활동을 정지시키는 작용을 하는 작용제, 예로서, 황체형성 호르몬 방출 호르몬 (LHRH) 효현제(agonist), 예로서, 류프롤리드 아세테이트 (루프론(LUPRON)® 및 엘리가드(ELIGARD)®), 고세렐린 아세테이트, 부세렐린 아세테이트 및 트리프테렐린; 항-안드로겐제, 예로서, 플루타미드, 닐루타미드 및 비칼루타미드; 및 부신에서의 에스트로겐 생성을 조절하는 효소 아로마타제를 억제하는 아로마타제 억제제, 예를 들면, 4(5)-이미다졸, 아미노글루테티미드, 메게스트롤 아세테이트(메가제(MEGASE)®), 엑세메스탄 (아로마 신(AROMASIN)®), 포르메스탄, 파드로졸, 보로졸 (리비소르(RIVISOR)®), 레트로졸 (페마라(FEMARA)®) 및 아나스트로졸 (아리미덱스(ARIMIDEX)®)을 포함한다. 또한, 상기 화학요법제의 정의에는 비스포스포네이트, 예로서, 클로드로네이트 (예로서, 보네포스(BONEFOS)® 또는 오스타크(OSTAC)®), 에티드로네이트 (디드로칼(DIDROCAL)®), NE-58095, 졸레드론산/졸레드로네이트 (조메타(ZOMETA)®), 알렌드로네이트 (포사맥스(FOSAMAX)®), 파미드로네이트 (아레디아(AREDIA)®), 틸루드로네이트 (스케리드(SKELID)®), 또는 리세드로네이트 (악토넬(ACTONEL)®); 뿐만 아니라 트록사시타빈 (1,3-디옥솔란 뉴클레오시드 시토신 유사체); 안티센스 올리고뉴클레오티드, 특히, 비정상적인 세포 증식과 관련된 신호전달 경로에서 유전자 발현을 저해하는 것, 예로서, PKC-알파, Ralf 및 H-Ras, 및 상피성장인자수용체(EGF-R); 백신, 예를 들면, 테라토프(THERATOPE)® 백신 및 유전자 요법 백신, 예로서, 알로백틴(Allovectin)® 백신, 류벡틴(LEUVECTIN)® 백신 및 박시드(VAXID)® 백신; 토포이소머라제 1 억제제 (루르토테칸(LURTOTECAN)®); rmRH (예: 아바레릭스(ABARELIX)®); 라파티니브 디토실레이트 (ErbB-2 및 EGFR 이중 티로신 키나제 소분자 저해제, GW572016으로도 공지되어 있음); 및 상기 언급된 임의의 것의 약제학적으로 허용가능한 염, 산 또는 유도체를 포함한다.

용어 "사이토킨"은 또다른 세포 상에서 세포간 매개인자로서 작용하는 하나의 세포 집단에 의해 방출되는 단백질에 대한 일반적 용어이다. 이러한 사이토킨의 일례는 림포카인, 모노카인; 인터루킨 (IL), 예로서면, IL-1, IL-1α, IL-2, IL-3, IL-4, IL-5, IL-6, IL-7, IL-8, IL-9, IL-11, IL-12, IL-15 (프로루 킨(PROLEUKIN)® rIL-2, 및 인간 IL-4, 및 인간 IL-4의 돌연변이체, 예로서, IL-2R 감마에 결합하는 것에 관여하는 IL-4 부위에서의 돌연변이를 함유하는 돌연변이체, 예로서, Arg 21이 Glu 잔기로 변경된 돌연변이체 포함); 종양 괴사 인자, 예를 들면, TNF-α 또는 TNF-β; 및 LIF 및 kit 리간드 (KL)를 비롯한 다른 폴리펩티드 인자이다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 사이토킨에는 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질, 및 본래-서열 사이토킨의 생물학적 활성 등가물, 예를 들면, 합성적으로 생성된 소-분자 실재물 및 그의 약제학적으로 허용가능한 유도체 및 염이 포함된다.

용어 "호르몬"은 관을 지닌 선상 기관에 의해 일반적으로 분비되는 폴리펩티드 호르몬을 언급한다. 이러한 호르몬에 포함되는 것은 예를 들면, 성장 호르몬, 예로서, 인간 성장 호르몬, N-메티오닐 인간 성장 호르몬, 및 소의 성장 호르몬; 부갑상선 호르몬; 티록신; 인슐린; 프로인슐린; 렐락신; 에스트라디올; 호르몬-대체 요법; 안드로겐, 예로서, 칼루스테론, 드로모스타놀론 프로피오네이트, 에피티오스타놀, 메피티오스탄, 또는 테스토락톤; 프로렐락신; 당단백질 호르몬, 예로서, 난포 자극 호르몬 (FSH), 갑상선 자극 호르몬 (TSH), 및 황체형성 호르몬 (LH); 프롤락틴; 태반 락토겐; 마우스 생식샘자극호르몬-관련 펩티드; 생식샘자극호르몬-방출성 호르몬; 인히빈; 악티빈; 뮐러-저해성 물질; 및 트롬보포이에틴이다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 호르몬에는 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질, 및 본래 서열 호르몬의 생물학적 활성 등가물, 예를 들면, 합성적으로 생성된 소분자 실재물 및 그의 약제학적으로 허용가능한 유도체 및 염이 포함된다.

용어 "성장 인자"는 성장을 증진시키는 단백질을 언급하고, 이에는, 예를 들면, 간 성장 인자; 섬유아세포 성장 인자; 혈관 내피 성장 인자; 신경 성장 인자, 예로서, NGF-β; 혈소판-유래된 성장 인자; 전환 성장 인자 (TGF), 예로서, TGF-α 및 TGF-β; 인슐린-양 성장 인자-I 및 -II; 에리트로포이에틴 (EPO); 골유도성 인자; 인터페론, 예로서, 인터페론-α, -β 및 -γ; 및 집락 자극 인자 (CSF), 예로서, 대식세포-CSF (M-CSF); 과립구-대식세포-CSF (GM-CSF); 및 과립구-CSF (G-CSF)가 포함된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 성장 인자에는 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터의 단백질, 및 본래 서열 성장 인자의 생물학적 활성 등가물, 예를 들면, 합성적으로 생성된 소분자 실재물 및 그의 약제학적으로 허용가능한 유도체 및 염이 포함된다.

용어 "인테그린"은 세포가 세포외 기질과 결합할 수 있도록 하고, 세포외 기질과 반응할 수 있도록 하는 수용체 단백질을 언급하고, 이는 다양한 세포 작용, 예로서, 상처 치유, 세포 분화, 종양 세포의 귀소, 및 아포프토시스에 관여한다. 이들은 세포-세포외 기질 및 세포-세포 상호 작용에 관여하는 세포 부착 수용체 계열의 일부이다. 기능성 인테그린은 비-공유적으로 결합되는, 알파 및 베타로 언급되는 2개의 막관통 당단백질 소단위체로 이루어진다. 알파 소단위체는 모두, 서로에 대한 몇몇 상동성을 공유하고 있는데, 이는 베타 소단위체에 대해서도 마찬가지이다. 상기 수용체는 항상 1개의 알파 쇄와 1개의 베타 쇄를 함유하고 있다. 이의 예에는 알파6베타1, 알파3베타1, 알파7베타1, LFA-1 등이 포함된다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "인테그린"에는 천연 공급원 또는 재조합 세포 배양물로부터 의 단백질, 및 본래 서열 인테그린의 생물학적 활성 등가물, 예를 들면, 합성적으로 생성된 소분자 실재물 및 그의 약제학적으로 허용가능한 유도체 및 염이 포함된다.

본원에서의 목적상, "종양 괴사 인자-알파 (TNF-알파)"는 (문헌 [Pennica et al., Nature , 312: 721 (1984)] 또는 [Aggarwal et al., JBC, 260: 2345 (1985)])에 기재된 바와 같은 아미노산 서열을 포함하는 인간 TNF-알파 분자를 언급한다.

본원에서의 "TNF-알파 저해제"는 일반적으로 TNF-알파와의 결합과 그의 활성 중화를 통하여, TNF-알파의 생물학적 작용을 어느 정도 저해시키는 작용제이다. 본원에서 특히 주시되는 TNF 저해제의 예는 에탄에르셉트 (엔브렐(Enbrel)®), 인플릭시마브 (레미케이드(remicade)®), 및 아달리무마브 (휴미라(Humira)™)이다.

"질환-개질 항-류마티스 약물" 또는 "DMARD"의 예에는 하이드록사이클로로퀸, 설파살라진, 메토트렉세이트, 레플루노미드, 에탄에르셉트, 인플릭시마브, 아자티오프린, D-페니실라민, 금 염 (경구), 금 염 (근육내), 미노사이클린, 사이클로스포린 A 및 국소 사이클로스포린을 비롯한 사이클로스포린, 스타필로코쿠스성 (staphylococcal) 단백질 A (문헌 [Goodyear and Silverman, J. Exp. Med., 197, (9), pi 125-39 (2003)])와 그들의 염 및 유도체를 비롯한 것들을 포함한다.

"비-스테로이드계 소염 약물" 또는 "NSAID"의 예는 아스피린, 아세틸살리실산, 이부프로펜, 나프록센, 인도메타신, 설린닥, 톨메틴, COX-2 저해제, 예로서, 셀레콕시브 (셀레브렉스(CELEBREX)®; 4-(5-(4-메틸페닐)-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-1-일) 벤젠설폰아미드 및 발데콕시브 (벡스트라(BEXTRA)®), 및 멜록시 캄 (모빅(MOBIC)®)과 그들의 염 및 유도체를 비롯한 것들을 포함한다.

본원에서의 "인테그린 길항제 또는 항체"의 예에는 LFA-1 항체, 예로서, 제넨테크(Genentech)로부터 상업적으로 구입가능한 에팔리주마브 (랩티바(Raptiva)®), 또는 알파 4 인테그린 항체, 예로서, 바이오켄(Biogen)으로부터 상업적으로 구입가능한 나탈리주마브 (안테그린(Antegren)®), 또는 디아자사이클릭 페닐알라닌 유도체 (WO 2003/894100, 페닐알라닌 유도체 (WO 2003/70709, WO 2002/28830, WO 2002/16329 및 WO 2003/53926), 페닐프로피온산 유도체 (WO 2003/10135), 엔아민 유도체 (WO 2001/79173), 프로파노산 유도체 (WO 2000/37444), 알카노산 유도체 (WO 2000/32575), 치환된 페닐 유도체 (미국 특허번호 제6,677,339호 및 제6,348,463호), 방향족 아민 유도체 (미국 특허번호 제6,369,229호), ADAM 디스인테그린 영역 폴리펩티드 (US 2002/0042368), 알파v베타3 인테그린에 대한 항체 (EP 633945), 아자-브릿지된 바이사이클릭 아미노산 유도체 (WO 2002/02556 참조) 등이 포함된다.

"코르티코스테로이드"는 자연발생된 코르티코스테로이드의 효능을 모사하거나 증강시키는 스테로이드계의 일반 화학 구조를 갖는 수개의 합성적 또는 자연발생된 물질 중 임의의 것을 언급한다. 합성 코르티코스테로이드의 예로는 프레드니손, 프레드니솔론 (메틸프레드니솔론, 예로서, 솔루-메드롤(SOLU-MEDROL)^® 메틸프레드니솔론 숙신산나트륨 포함), 덱사메타손 또는 덱사메타손 트리암시놀론, 하이드로코르티손, 및 베타메타손을 포함한다. 본원에서 바람직한 코르티코스테로이드 는 프레드니손, 메틸프레드니솔론, 하이드로코르티손, 또는 덱사메타손이다.

"B-세포"는 골수 내에서 성숙하는 림프구로서, 타고난 본래의 B-세포, 기억 B-세포, 또는 효과기 B-세포 (혈장 세포)를 포함한다. 본원에서의 B-세포는 정상 또는 비-악성 B-세포일 수 있다.

본원에서의 "B-세포 표면 마커" 또는 "B-세포 표면 항원"은 이와 결합하는 길항제 또는 항체를 이용하여 표적화될 수 있는 B-세포의 표면 상에 발현되는 항원이다. 예시되는 B-세포 표면 마커에는 CD10, CD19, CD20, CD21, CD22, CD23, CD24, CD37, CD40, CD53, CD72, CD73, CD74, CDw75, CDw76, CD77, CDw78, CD79a, CD79b, CD80, CD81, CD82, CD83, CDw84, CD85 및 CD86 백혈구 표면 마커를 포함한다 (이에 대한 설명은 문헌 [The Leukocyte Antigen Facts Book, 2^nd Edition. 1997, ed. Barclay et al. Academic Press, Harcourt Brace ＆ Co., New York]을 참조한다). 다른 B-세포 표면 마커에는 RP105, FcRH2, B-세포 CR2, CCR6, P2X5, HLA-DOB, CXCR5, FCER2, BR3, Btig, NAG14, SLGC16270, FcRH1, IRTA2, ATWD578, FcRH3, IRTA1, FcRH6, BCMA, 및 239287이 포함된다. 특히 관심의 대상이 되는 B-세포 표면 마커는 대상의 다른 비-B-세포 조직과 비교해서 B-세포 상에 우선적으로 발현되고, 전구체 B-세포와 성숙한 B-세포, 양자 모두에서 발현될 수 있다.

"CD20" 항원, 또는 "CD20"은 말초혈 또는 림프계 기관으로부터 90％ 초과의 B 세포의 표면상에서 발견되는, 약 35kD의 비-당화 인단백질이다. CD20은 정상 B 포 뿐만 아니라, 악성 B 세포 상에도 존재하지만, 줄기 세포 상에서는 발현되지 않 는다. 당 문헌에 보고된 CD20에 대한 다른 명칭으로는 "B-림프구-제한된 항원" 및 "Bp35"를 포함한다. CD20 항원은, 예를 들면, 문헌 [Clark et al. Proc . Natl . Acad. Sci. (USA) 82: 1766 (1985)]에 기재되어 있다.

"B-세포 표면 마커 길항제"는 B-세포 상의 B-세포 표면 마커와의 결합시, 대상 내의 B-세포를 파괴 또는 고갈시키고/시키거나, 예를 들면, B 세포에 의해 유발된 체액성 반응을 저하 또는 방지함으로써 하나 이상의 B 세포 작용을 방해하는 분자이다. 길항제는 바람직하게, 이들로 처리된 대상에서 B 세포를 고갈시킬 수 있다 (즉, 순환성 B 세포 수준을 감소시킬 수 있음). 이러한 고갈은 다양한 기전, 예를 들면, 항체-의존성 세포-매개된 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체-의존성 세포독성 (CDC), B 세포 증식 저해, 및/또는 B 세포 사멸 유도 (예를 들어, 아포프토시스를 통하여 이루어짐)를 통하여 달성될 수 있다. 본 발명의 범주 내에 포함되는 길항제에는 세포독성제와 임의로 접합 또는 융합되는, B-세포 표면 마커, 예로서, CD20과 결합하는 소분자 길항제, 항체, 합성 또는 본래 서열 펩티드, 및 면역부착인자가 포함된다. 바람직한 길항제는 항체를 포함한다.

본원에서의 "CD20 항체 길항제"는 B 세포 상의 CD20과의 결합시, 대상 내의 B 세포를 파괴 또는 고갈시키고/시키거나, 예를 들면, B 세포에 의해 유발된 체액성 반응을 저하 또는 방지함으로써 하나 이상의 B 세포 작용을 방해하는 항체이다. 항체 길항제는 바람직하게, 이들로 처리된 대상에서 B 세포를 고갈시킬 수 있다 (즉, 순환성 B 세포 수준을 감소시킬 수 있음). 이러한 고갈은 다양한 기전, 예를 들면, 항체-의존성 세포-매개된 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체-의존성 세포독성 (CDC), B-세포 증식 저해, 및/또는 B-세포 사멸 유도 (예를 들어, 아포프토시스를 통하여 이루어짐)를 통하여 달성될 수 있다.

본원에서의 용어 "항체"는 가장 광범위한 의미로 사용되고, 구체적으로는 모노클로날 항체, 폴리클로날 항체, 2개 이상의 본래 항체로부터 형성된 다중-특이적 항체 (예: 이중-특이성 항체), 및 목적하는 생물학적 활성을 나타내는 항체 단편이 포함된다.

"항체 단편"은 바람직하게는, 그의 항원 결합 부위를 포함하는, 본래 항체의 일부를 포함한다. 항체 단편의 예에는 Fab, Fab', F(ab')₂, 및 Fv 단편; 디아바디 (diabody); 선형 항체; 단일-쇄 항체 분자; 및 항체 단편(들)으로부터 형성된 다중-특이성 항체가 포함된다.

본원에서 "본래 항체"는 2개의 항원 결합 부위, 및 Fc 영역을 포함하는 것이다. 바람직하게, 본래 항체는 작용성 Fc 영역을 갖는다.

CD20 항체의 예에는 현재 "리툭시마브"("리툭산®")로 불리우는 "C2B8" (미국 특허번호 제5,736,137호); IDEC 파마슈티칼즈 인코포레이티드(IDEC Pharmaceuticals, Inc.)로부터 상업적으로 구입가능한 "Y2B8" 또는 "이브리투모마브 티욱세탄" (제발린(ZEVALIN)®)으로 명명되는 이트륨-[90]-표지된 2B8 뮤린 항체 (미국 특허번호 제5,736,137호; 1993년 6월 22일자로 기탁 번호 HB11388로 ATCC에 기탁된 2B8); 코리사(Corixa)로부터 상업적으로 구입가능한 "131I-B1" 또는 "요오드 I131 토시투모마브" 항체 (벡사르(BEXXAR)™)를 생성시키기 위해 131I로 임의 로 표지시킨, "토시투모마브"로도 불리우는 뮤린 IgG2a "B1" (미국 특허번호 제5,595,721호]; 뮤린 모노클로날 항체 "1F5" (문헌 [Press et al. Blood 69 (2): 584-591 (1987)]) 및 "프레임워크 패치된" 또는 인간화된 인간화된 1F5를 비롯한 그의 변이체 (W0 03/002607, [Leung, S.; ATCC 기탁번호 HB-96450]); 뮤린 2H7 및 키메라 2H7 항체 (미국 특허번호 제5,677,180호); 인간화된 2H7 (WO 2004/056312, [로우맨 등] 및 하기 기재되는 것); B-세포의 세포막 중의 CD20 분자를 표적으로 한 완전한 인간 고-친화성 항체인 2F2 (HuMax-CD20) (덴마크 소재 젠마브(젠마브); (예를 들면, 문헌 [Glennie and van de Winkel, Drug Discovery Today 8: 503-510 (2003)] 및 [Cragg et al, Blood 101: 1045-1052 (2003)]; WO 2004/035607; US2004/0167319 참조); WO 2004/035607 및 US2004/0167319 (틸링 등)에 기재된 인간 모노클로날 항체; US 2004/0093621 (시타라 등)에 기술된, 복합-N-글리코시드-연결 당 쇄가 Fc 영역에 결합되어 있는 항체; 모노클로날 항체 및 CD20에 결합하는 항원-결합 단편 (WO 2005/000901 (테터 등), 예로서, HB20-3, HB20-4, HB20-25, 및 MB20-11; CD20 결합 분자, 예로서, AME 시리즈의 항체, 예로서, WO 2004/103404 및 US2005/0025764에 기재되어 있는 것과 같은 AME 33 항체 (문헌 [Watkins et al, Eli Lilly/Applied Molecular Evolution, AME]); CD20 결합 분자, 예로서, US 2005/0025764에 기술되어 있는 것 (왓킨스 등); A20 항체 또는 그의 변이체, 예로서, 키메라 또는 인간화된 A20 항체 (각각 cA20, hA20) (US 2003/0219433, 이뮤노메딕스(Immunomedics)); US 2005/0069545 A1 및 WO 2005/16969에서와 같이, 임의로 IL-2와 접합된, 에피토프-고갈된 Leu-16, 1H4, 또는 2B8을 비롯한 CD20-결합 항체 [Carr et al.]; CD22 및 CD20에 결합하는 이중 특이적 항체, 예를 들면, hLL2xhA20 (WO2005/14618 (창 등)); 인터내셔널 류코사이트 타이핑 워크샵(International Leukocyte Typing Workshop)으로부터 입수가능한 모노클로날 항체 L27, G28-2, 93-1B3, B-C1 또는 NU-B2 (문헌 [Valentine et al, In: Leukocyte Typing III (McMichael, Ed., p. 440, Oxford University Press (1987)]); 1H4 (문헌 [Haisma et al. Blood 92: 184 (1998)])를 포함한다. 본원에서 바람직한 CD20 항체는 키메라, 인간화된, 또는 인간 CD20 항체이고, 더욱 바람직하게는, 리툭시마브, 인간화된 2H7, 2F2 (Hu-Max-CD20) 인간 CD20 항체 (젠마브), 및 인간화된 A20 항체 (이뮤노메딕스)이다.

본원에서 용어 "리툭시마브" 또는 "리툭산®"은 CD20 항원에 대하여 유도되고, 미국 특허번호 제5,736,137호에서 "C2B8"로 명명된, 유전공학적으로 처리된 키메라 뮤린/인간 모노클로날 항체, 및 CD20과 결합할 수 있는 능력을 보유하고 있는 그의 단편을 언급한다.

순전히 본원의 목적을 위해, 그리고 달리 지시되지 않는 한, "인간화된 2H7"은 뮤린 2H7 항체의 인간화된 변이체이며, 항체는 생체내에서 순환성 B 세포를 감소시키는데 효과가 있다.

하나의 실시태양에서, 인간화된 2H7 항체는 하기의 CDR 서열 중 1, 2, 3, 4, 5, 또는 6개를 포함한다:

CDR L1 서열 RASSSVSYXH (여기서, X는 M 또는 L이다) (서열번호: 21), 예를 들면, 서열번호: 4 (도 1A),

서열번호: 5 (도 1A)의 CDR L2 서열,

CDR L3 서열 QQWXFNPPT (여기서, X는 S 또는 A이다) (서열번호: 22), 예를 들면, 서열번호: 6 (도 1A),

서열번호: 10 (도 1B)의 CDR H1 서열,

CDR H2 서열 AIYPGNGXTSYNQKFKG (여기서, X는 D 또는 A이다) (서열번호: 23), 예를 들면 서열번호: 11 (도 1B), 및

CDR H3 서열 VVYYSXXYWYFDV (여기서, 6번 위치의 X는 N, A, Y, W 또는 D이고, 7번 위치의 X는 S 또는 R이다) (서열번호: 24), 예를 들면 서열번호: 12 (도 1B).

상기 CDR 서열은 일반적으로 인간 가변 경쇄 및 가변 중쇄 프레임워크 서열, 예로서, 실질적으로 인간 경쇄 카파 서브그룹 I (V_LκI)의 인간 공통 FR 잔기, 및 실질적으로 인간 중쇄 서브그룹 III (V_HIII)의 인간 공통 FR 잔기내에 존재한다. WO 2004/056312 (로우맨 등)을 참조한다.

가변 중쇄 영역은 본래 서열 및 변이체 불변 영역을 비롯한, 예를 들면, IgG1 또는 IgG3일 수 있는 인간 IgG 쇄 불변 영역에 연결될 수 있다.

바람직한 실시태양에서, 상기 항체가 56번, 100번 및/또는 100a번 위치에서 하나 이상의 아미노산 치환(들), 예를 들면, 가변 중쇄 도메인 중의 D56A, N100A, 또는 N100Y, 및/또는 S1OOaR; 및 32번 및/또는 92번 위치에서 하나 이상의 아미노산 치환(들), 예를 들면, 가변 경쇄 도메인 중의 M32L 및/또는 S92A를 임의로 포함 하는, 서열 2의 가변 경쇄 도메인 서열 (ν16, 도 1A에 도시된 바와 같음)을 또한 임의로 포함하는, 서열번호: 8의 가변 중쇄 도메인 서열 (ν16, 도 1B에 도시된 바와 같음)을 포함한다. 바람직하게는, 상기 항체가 서열번호: 13 또는 15의 경쇄 아미노산 서열과, 서열번호: 14, 16, 17, 또는 20의 중쇄 아미노산 서열을 포함하는 본래 항체이다.

바람직한 인간화된 2H7 항체는 오크렐리주마브 (제넨테크)이다.

본원의 항체는 Fc 영역 내에, ADCC 활성을 개선시키는 하나 이상의 아미노산 치환을 추가로 포함할 수 있는데, 예를 들면, 아미노산 치환이 중쇄 잔기의 Eu 번호부여를 이용하여 298번, 333번, 및 334번 위치에서 이루어진 것인데, 바람직하게는, S298A, E333A, 및 K334A이다. 미국 특허번호 제6,737,056B1호 (프레스타)를 또한 참조한다.

이들 항체 모두는 Fc 영역 내에, FcRn 결합성 또는 혈청 반감기를 개선시키는 하나 이상의 치환을 포함할 수 있는데, 예를 들면, 중쇄 434번 위치에서의 치환, 예를 들면, N434W를 포함한다. 미국 특허번호 제6,737,056B1호 (프레스타)를 또한 참조한다.

이들 항체 모두는 Fc 영역 내에, CDC 활성을 증가시키는 하나 이상의 아미노산 치환을 추가로 포함할 수 있는데, 예를 들면, 326번 위치에서의 하나 이상의 치환, 바람직하게는, K326A 또는 K326W를 포함할 수 있다. 미국 특허번호 제 6,528,624호 (이두소기에 등)를 또한 참조한다.

몇몇 바람직한 인간화된 2H7 변이체는 서열번호: 2의 가변 경쇄 도메인 및 서열번호: 8의 가변 중쇄 도메인을 포함하는 것인데, 이에는 Fc 영역 (존재한다면)에서의 치환을 수반하거나 수반하지 않는 것, 및 N1OOA; 또는 D56A 및 N100A; 또는 D56A, N100Y, 및 S100aR의 서열번호: 8에서의 변경을 수반한 가변 중쇄 도메인과, M32L; 또는 S92A; 또는 M32L 및 S92A의 서열번호: 2에서의 변경을 수반한 가변 경쇄 도메인을 포함하는 것이 포함된다.

2H7.v16의 가변 중쇄 중의 M34는 항체 안정성의 잠재적 공급원으로서 확인되었고, 이는 치환을 위한 또다른 잠재적 후보이다.

본 발명의 다양한 몇몇 바람직한 실시태양을 요약해 보면, 2H7.v16에 기초한 변이체의 가변 영역은 하기 표 1에 나타낸 아미노산 치환 위치를 제외하고는, ν16의 아미노산 서열을 포함한다. 달리 지시되지 않는 한, 2H7 변이체는 ν16과 동일한 경쇄를 가질 것이다.

표 1

예시적인 인간화된 2 H7 항체 변이체

하나의 바람직한 인간화된 2H7은 2H7.v16 가변 경쇄 도메인 서열:

및 2H7.v16 가변 중쇄 도메인 서열:

을 포함한다.

인간화된 2H7.v16 항체가 본래 항체인 경우, 이는 경쇄 아미노산 서열:

및 서열번호: 14의 중쇄 아미노산 서열, 또는 하기 중쇄 아미노산 서열:

을 포함할 수 있다.

또다른 바람직한 인간화된 2H7 항체는 2H7.v511 가변 경쇄 도메인 서열:

및 2H7.v511 가변 중쇄 도메인 서열:

을 포함한다.

인간화된 2H7.v511의 항체가 본래 항체인 경우, 이는 경쇄 아미노산 서열:

및 서열번호: 16의 중쇄 아미노산 서열, 또는 하기 중쇄 아미노산 서열:

을 포함할 수 있다.

"성장 저해성" 항체는 이러한 항체와 결합하는 항원을 발현하는 세포의 증식을 방지 또는 저하시키는 것이다. 예를 들면, 이러한 항체는 시험관내 및/또는 생체내에서 B 세포의 증식을 방지 또는 저하시킬 수 있다.

"아포프토시스를 유도시키는" 항체는 표준 아포프토시스 분석법, 예를 들면, 아넥신 V의 결합, DNA의 단편화, 세포 수축, 내형질 세망의 확장, 세포 단편화 및/또는 막 소포 (아포프토시스체로 불리움)의 형성에 의해 결정된 바와 같이, 예를 들면, B-세포의 프로그램된 세포 사멸을 유도시키는 것이다.

"본래 항체"는 일반적으로 2개의 동일한 경쇄 (L)와 2개의 동일한 중쇄 (H)로 구성된, 약 150,000 달톤의 이종-사량체 당단백질이다. 각 경쇄는 하나의 공유 디설파이드 결합에 의해 중쇄에 연결되는 반면, 디설파이드 연쇄 수는 상이한 면역글로불린 동종형의 중쇄들 간에 다양하다. 각 중쇄 및 경쇄는 또한, 규칙적으로 이격된 쇄내 디설파이드 브릿지를 갖는다. 각 중쇄는 하나의 말단에 가변 도메인 (V_H)에 이어 다수의 불변 도메인을 갖는다. 각 경쇄는 하나의 말단에 가변 도메인 (V_L)을 갖고, 그의 다른 말단에는 불변 도메인을 갖고; 경쇄의 불변 도메인은 중쇄의 제1 불변 도메인과 정렬되고, 경쇄 가변 도메인은 중쇄의 가변 도메인과 정렬된다. 특정한 아미노산 잔기가 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인 간의 계면을 형성하는 것으로 여겨진다.

용어 "가변"은 가변 도메인의 특정 부분이 항체들 간의 서열에 있어 광범위하게 상이하고, 이러한 부분은 특정한 각 항체가 그의 특정한 항원에 대한 특이성과 결합을 위해 사용된다는 사실을 언급한다. 그러나, 가변성이 항체의 가변 도메인 전반에 걸쳐 균등한 수준으로 분포되지는 않는다. 이는 경쇄 가변 도메인과 중쇄 가변 도메인, 양자 모두 내에 초가변 영역으로 불리는 3개의 세그먼트에 집중되어 있다. 보다 고도로 보존된 가변 도메인중의 부분이 프레임워크 (FR)로 언급된다. 본래 중쇄 및 경쇄의 가변 도메인은 각각 4개의 FR을 포함하는데, 이는 β-시트 구조를 연결하고 몇몇 경우에는 이러한 β-시트 구조의 일부를 형성하는 루프를 형성하는, 3개의 초가변 영역에 의해 연결된 β-시트 입체 배치를 상당 부분 채택하고 있다. 각 쇄내의 초가변 영역은 상기 FR에 의해 아주 근접하게 함께 결합되어 있고, 다른 쇄로부터의 초가변 영역은 항체의 항원 결합 부위 형성에 기여한다 (문헌 [Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)] 참조). 불변 도메인은 항원에 대한 항체 결합에 직접적으로 관여하지 않지만, 다양한 효과기 작용, 예를 들면, 항체-의존성 세포성 세포독성 (ADCC)에 있어서의 항체 참여를 나타낸다.

항체를 파파인 분해시키면, "Fab" 단편으로 불리우는 2개의 동일한 항원-결합성 단편 (각각은 단일 항원-결합 부위를 가짐)과 잔류성 "Fc" 단편 (이의 명칭은 용이하게 결정화될 수 있는 그의 능력을 반영함)이 생성된다. 펩신 처리하면, 2개의 항원-결합 부위를 갖고 항원과 여전히 가교 결합할 수 있는 F(ab')₂ 단편이 생성된다.

"Fv"는 완전한 항원-인식 및 항원-결합 부위를 함유하는 최소 항체 단편이다. 이러한 부위는 1개의 중쇄 가변 도메인과 1개의 경쇄 가변 도메인이 단단하게 비공유적으로 연합된 이량체로 이루어진다. 이러한 입체 배치에서는, 각 가변 도메인의 3개의 초가변 영역이 V_H-V_L 이량체 표면 상에 항원 결합 부위를 명백히 규정하도록 상호 작용한다. 집합적으로, 6개의 초가변 영역이 항체에 항원 결합 특이성을 부여해 준다. 그러나, 전체 결합 부위 보다는 친화도가 낮지만, 심지어 단일 가변 도메인 (또는 항원에 대해 특이적인 3개의 초가변 영역만을 포함하는 Fv의 절반)도 항원을 인식하고 결합할 수 있는 능력을 지니고 있다.

Fab 단편은 또한, 경쇄의 불변 도메인과, 중쇄의 제1 불변 도메인 (CH1)을 함유한다. Fab' 단편은 항체 힌지 부위로부터의 하나 이상의 시스테인을 포함한 중쇄 CH1 영역의 카복시 말단에 수개의 잔기를 부가한다는 점에서 Fab 단편과 상이하다. Fab'-SH는 불변 도메인의 시스테인 잔기(들)가 1개 이상의 유리 티올기를 보유하고 있는, Fab'에 대한 본원에서의 명칭이다. F(ab')₂ 항체 단편은 본래에는, 그들 사이에 힌지 시스테인을 갖는 Fab' 단편 쌍으로서 생성되었다. 항체 단편의 다른 화학적 커플링물 또한 공지되어 있다.

모든 척추동물 종으로부터의 항체 (면역글로불린)의 "경쇄"는 그들의 불변 도메인의 아미노산 서열에 기초하여, 카파 (κ) 및 람다 (λ)로 지칭되는, 2가지 명백한 별개 유형중의 하나로 지정될 수 있다.

그들 "중쇄"의 불변 도메인의 아미노산 서열에 따라 (존재한다면) 항체는 상이한 부류로 지정될 수 있다. 5가지 주요 부류의 본래 항체: IgA, IgD, IgE, IgG, 및 IgM이 있고, 이들 중의 몇 가지는 하위부류 (동종형), 예를 들면, IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA, 및 IgA2로 추가로 분류될 수 있다. 상이한 부류의 항체에 상응하는 중쇄 불변 도메인은 각각 α, δ, ε, γ 및 μ로 명명된다. 상이한 부류의 면역글로불린의 소단위체 구조 및 3차원적 입체 배치는 널리 공지되어 있다.

달리 지시되지 않는 한, 면역글로불린 중쇄중 잔기의 번호부여는 카베트 등의 문헌 [Kabat et al, Sequences of Proteins of Immunological Interest , 5 th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD (1991)] (본원에서 참고 문헌으로서 인용됨)에서의 것과 같은 EU 인덱스이다. "카 베트 등의 상기 문헌에서의 것과 같은 EU 인덱스"는 인간 IgG1 EU 항체의 잔기 번호부여에 대한 것을 언급한다.

본원에서 용어 "Fc 영역"은 본래 서열 Fc 영역 및 변이체 Fc 영역을 비롯한, 면역글로불린 중쇄의 C-말단 부위를 정의하기 위하여 사용된다. 면역글로불린 중쇄의 Fc 영역의 경계는 다양할 수 있지만, 인간 IgG 중쇄 Fc 영역은 일반적으로 Cys226번 위치, 또는 Pro230번 위치의 아미노산 잔기에서부터 그의 카복실-말단까지에 이르는 것으로 정의된다. Fc 영역의 C-말단의 리신 (EU 번호부여 시스템에 따른 447번 잔기)는 예를 들면, 항체를 생산하는 동안 또는 정제하는 동안 제거될 수 있거나, 항체의 중쇄를 코딩하는 핵산을 재조합적으로 공학 처리함으로써 제거될 수 있다. 따라서, 본래 항체의 조성물은 K447 잔기 모두가 제거된 항체 집단, 어떤 K447 잔기도 제거되지 않은 항체 집단, 및 K447 잔기를 포함하는 항체 및 K447 잔기를 포함하지 않는 항체의 혼합물을 갖는 항체 집단을 포함할 수 있다.

"작용성 Fc 영역"은 본래 서열 Fc 영역의 "효과기 작용을 갖는다. 예시적인 "효과기 작용"은 C1q 결합성; 보체 의존성 세포독성; Fc 수용체 결합; 항원-의존성 세포-매개된 세포독성 (ADCC); 식작용; 세포 표면 수용체 (예로서, B 세포 수용체; BCR)의 하향조절 등을 포함한다. 그러한 효과기 작용은 일반적으로 결합 영역 (예로서, 항체 가변 도메인)과 결합되는 Fc 영역을 필요로 하고, 예를 들면, 본원에 개시된 다양한 분석법들을 사용함으로써 평가될 수 있다.

"본래 서열 Fc 영역"은 천연 Fc 영역의 아미노산 서열과 일치하는 아미노산 서열을 포함한다. 본래 서열 인간 Fc 영역은 본래 서열 인간 IgG1 Fc 영역 (비-A 및 A 동종이형); 본래 서열 인간 IgG2 Fc 영역; 본래 서열 인간 IgG3 Fc 영역; 및 본래 서열 인간 IgG4 Fc 영역; 뿐만 아니라, 상기중 임의의 것의 자연발생된 변이체를 포함한다.

"변이체 Fc 영역"은 1개 이상의 아미노산 변형, 바람직하게, 하나 이상의 아미노산 치환(들)에 의해 본래 서열 Fc 영역의 것과 상이한 아미노산 서열을 포함한다. 바람직하게, 변이체 Fc 영역은 본래 서열 Fc 영역, 또는 모체 폴리펩티드의 Fc 영역과 비교할 때, 1개 이상의 아미노산 치환, 예로서, 본래 서열 Fc 영역, 또는 모체 폴리펩티드의 Fc 영역에서 약 1개 내지 약 10개의 아미노산 치환, 바람직하게, 약 1개 내지 약 5개의 아미노산 치환을 갖는다. 본원에서 변이체 Fc 영역은 바람직하게 본래 서열 Fc 영역, 또는 모체 폴리펩티드의 Fc 영역과 적어도 약 80％의 상동성을, 가장 바람직하게는, 그와 적어도 약 90％의 상동성을, 더욱 바람직하게는, 그와 적어도 약 95％의 상동성을 가질 것이다.

"항체-의존성 세포-매개된 세포독성" 및 "ADCC"는 Fc 수용체 (FcR)를 발현시키는 비특이적 세포독성 세포 (예로서, 천연 살해 (NK) 세포, 호중구, 및 대식 세포)가 표적 세포 상의 결합된 항체를 인식한 후, 이러한 표적 세포의 용해를 유발시키는 세포-매개된 반응을 언급한다. ADCC를 매개하는데 있어 주요 세포인 NK 세포는 FcγRIII 만을 발현시키는 반면, 단핵구는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII를 발현시킨다. 조혈 세포 상에서의 FcR 발현은 문헌 [Ravetch and Kinet, Annu . Rev . Immunol 9: 457-92 (1991)]의 464면의 표 3에 요약되어 있다. 관심의 대상이 되는 분자의 ADCC 활성을 평가하기 위해, 시험관내 ADCC 분석법, 예를 들면, 미국 특허 번호 제5,500,362호 또는 제5,821,337호에 기재된 분석법을 수행할 수 있다. 이러한 분석법에 유용한 효과기 세포에는 말초혈 단핵 세포 (PBMC) 및 천연 살해 (NK) 세포가 포함된다. 별법으로, 또는 추가로, 관심의 대상이 되는 분자의 ADCC 활성은 생체내에서, 예를 들면, 문헌 [Clynes et al. PNAS (USA) 95: 652-656 (1998)]에 기재된 바와 같이 동물 모델에서 평가할 수 있다.

"인간 효과기 세포"는 하나 이상의 FcR을 발현시키고 효과기 작용을 수행하는 백혈구이다. 바람직하게는, 세포가 적어도 FcγRIII를 발현시키고 ADCC 효과기 작용을 수행한다. ADCC를 매개하는 인간 백혈구의 예에는 말초혈 단핵 세포 (PBMC), 천연 살해 (NK) 세포, 단핵구, 세포독성 T 세포 및 호중구가 포함되는데, PBMC 및 NK 세포가 바람직하다.

용어 "Fc 수용체" 또는 "FcR"은 항체의 Fc 영역과 결합하는 수용체를 설명하기 위해 사용된다. 바람직한 FcR은 본래-서열 인간 FcR이다. 더욱이, 바람직한 FcR은 IgG 항체와 결합하는 것이고 (감마 수용체), 이에는 FcγRI, FcγRII 및 FcγRIII 아부류의 수용체가 포함되는데, 이에는 이들 수용체의 대립 유전자성 변이체 및 대체 스플라이싱된 형태 또한 포함된다. FcγRII 수용체에는 FcγRIIA ("활성화 수용체") 및 FcγRIIB ("저해성 수용체")가 포함되는데, 이는 그의 세포질성 부위에 있어서 주로 상이한 유사한 아미노산 서열을 갖는다. 활성화 수용체 FcγRIIA는 그의 세포질성 부위 내에 면역수용체 티로신-기재 활성화 모티프 (ITAM)를 함유한다. 저해성 수용체 FcγRIIB는 그의 세포질성 부위 내에 면역수용체 티로신-기재 저해 모티프 (ITIM)를 함유한다 (문헌 [Daeron, Annu . Rev . Immunol. 15:203-234 (1997)]). FcR은 문헌 [Kinet, Annu. Rev . Immunol 9:457-492 (1991)]; [Capel et al., Immunomethods 4:25-34 (1994)]; 및 [de Haas et al, J. Lab. Clin . Med. 126:330-341 (1995)]에 검토되어 있다. 추후 확인되는 것을 비롯한 다른 FcR도 본원의 용어 "FcR"에 포함된다. 상기 용어에는 또한, 모계 IgG를 태아에게 전달하는 작용을 하고 면역글로불린 항상성에 대한 작용을 하는 신생아 수용체 FcRn이 포함된다 (문헌 [Guyer et al., J. Immunol. 117: 587 (1976)] 및 [Kim et al., J. Immunol. 24: 249 (1994)]).

"보체 의존성 세포독성" 또는 "CDC"는 보체의 존재하에서 표적을 용해시킬 수 있는 분자의 능력을 언급한다. 보체 활성화 경로는 보체 시스템의 제1 성분 (C1q)을, 동족 항원과 복합체를 형성한 분자 (예: 항체)와 결합시킴으로써 개시된다. 보체 활성화를 평가하기 위해, 예를 들면, 문헌 [Gazzano-Santoro et al., J. Immunol. Methods 202: 163 (1996)]에 기재된 바와 같은 CDC 분석법을 수행할 수 있다.

"단일-쇄 Fv" 또는 "scFv" 항체 단편은 항체의 V_H 및 V_L 영역을 포함하는데, 이들 영역은 단일 폴리펩티드 쇄 내에 존재한다. 바람직하게, Fv 폴리펩티드는 scFv가 항원 결합을 위해 원하는 구조를 형성할 수 있게 해주는, V_H 및 V_L 영역 사이에 폴리펩티드 링커를 추가로 포함한다. scFv의 검토를 위해서는 문헌 [Plueckthun in The Pharmacology of Monoclonal Antibodies , vol. 113, Rosenburg and Moore eds., Springer-Verlag, New York, pp. 269-315 (1994)]을 참조한다.

용어 "디아바디"는 2개의 항원-결합 부위를 갖는 작은 항체 단편을 언급하는데, 이들 단편은 동일한 폴리펩티드 쇄 내에 경쇄 가변 도메인 (V_L)와 연결된 중쇄 가변 도메인 (V_H)을 포함한다 (V_H-V_L). 동일한 쇄에서 2개의 도메인 사이의 페어링이 발생하지 않을 만큼 짧은 링커를 사용함으로써, 도메인은 또다른 쇄의 상보적 도메인과 페어링하여 2개의 항원-결합 부위를 형성시킨다. 디아바디는 예를 들면, (EU 제404,097호; WO 93/11161; 및 문헌 [Hollinger et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 90:6444-6448 (1993)])에 보다 상세히 기술되어 있다.

본원에 사용되는 바, 용어 "모노클로날 항체"는 실질적으로 동질성인 항체 집단, 즉, 집단을 차지하고 있는 개개의 항체가, 모노클로날 항체 생성 동안 유발될 수도 있는 가능한 변이체 (이러한 변이체는 일반적으로 미량으로 존재함)를 제외하고는 동일하고/하거나 동일한 에피토프(들)와 결합하는 집단으로부터 수득한 항체를 언급한다. 그러한 모노클로날 항체는 전형적으로 표적에 결합하는 폴리펩티드 서열을 포함하는 항체를 포함하는데, 여기서, 표적-결합 폴리펩티드 서열은 다수의 폴리펩티드 서열로부터 1개의 표적 결합 폴리펩티드 서열을 선택하는 것을 포함하는 방법에 의해 수득하였다. 예를 들면, 선택 방법은 다수의 클론, 예로서, 하이브리도마 클론, 파지 클론 또는 재조합 DNA 클론 풀로부터 유일의 클론을 선택하는 것일 수 있다. 선택된 표적 결합 서열은, 예를 들면, 표적에 대한 친화성을 개선시키기 위해, 표적 결합 서열을 인간화시키기 위해, 세포 배양물중에서 그의 생산성을 개선시키기 위해, 생체내에서의 그의 면역원성을 감소시키기 위해, 다중- 특이성 항체를 생산하는 것 등을 위해 추가로 변경될 수 있고, 변경된 표적 결합 서열 또한 본 발명의 모노클로날 항체라는 것을 이해하여야 한다. 전형적으로 상이한 결정기 (에피토프)에 대하여 유도된 상이한 항체를 포함하는 폴리클로날 항체 제제와는 달리, 각각의 모노클로날 항체는 항원 상의 단일 결정기에 대하여 유도된다. 모노클로날 항체는 그의 특이성 이외에도, 전형적으로 면역글로불린에 의해 오염되지 않았다는 점에서 모노클로날 항체 제제는 유익하다. 수식어 "모노클로날"은 실질적으로 동질성인 항체 집단으로부터 수득된 것과 같은 항체의 특성을 지시하고, 임의의 특정 방법에 의해 항체를 생산할 것을 요구하는 것으로 해석되지 않는다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용하고자 하는 모노클로날 항체는, 예를 들면, 하이브리도마 방법 (예로서, 문헌 [Kohler et al, Nature, 256:495 (1975)]; [Harlow et al, Antibodies: A Laboratory Manual, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, 2nd ed. 1988)]; [Hammerling et al., in: Monoclonal and T-Cell Hybridomas 563-681, (Elsevier, N.Y., 1981)] 참조), 재조합 DNA 방법 (예로서, 미국 특허번호 제4,816,567호 참조), 파지 디스플레이 기술 (예로서, 문헌 [Clackson et al, Nature , 352:624-628 (1991)]; [Marks et al, J. Mol Biol, 222:581-597 (1991)]; [Sidhu et al, J. Mol Biol. 338(2):299-310 (2004)]; [Lee et al, J. Mol Biol . 340(5):1073-1093 (2004)]; [Fellouse, Proc. Nat . Acad . Sci . USA 101(34): 12467-12472 (2004)]; 및 [Lee et al. J. Immunol Methods 284(1-2): 119-132 (2004)] 참조), 및 인간 면역글로불린 유전자좌 또는 인간 면역글로불린 서열을 코딩하는 유전자중 일부 또는 그 모두를 갖는 인간 항체 또는 인 간-양 항체를 동물에서 생산하는 기술 (예로서, WO 1998/24893; WO 1996/34096; WO 1996/33735; WO 1991/10741; 문헌 [Jakobovits et al, Proc . Natl Acad . Sci . USA, 90:2551 (1993)]; [Jakobovits etal, Nature, 362:255-258 (1993)]; [Bruggemann et al, Year in Immuno., 7:33 (1993)]; 미국 특허번호 제5,545,806호; 제5,569,825호; 제5,591,669호 (모두 젠파마); 제5,545,807호; WO 1997/17852; 미국 특허번호 제5,545,807호; 제5,545,806호; 제5,569,825호; 제5,625,126호; 제5,633,425호; 및 제5,661,016호; [Marks et al, Bio / Technology, 10: 779-783 (1992)]; [Lonberg et al, Nature, 368:856-859 (1994)]; [Morrison, Nature, 368: 812-813 (1994)]; [Fishwild et al, Nature Biotechnology, 14: 845-851 (1996)]; [Neuberger, Nature Biotechnology, 14: 826 (1996)]; 및 [Lonberg and Huszar, Intern. Rev . Immunol, 13: 65-93 (1995)] 참조)를 비롯한 다양한 기법에 의해 제조할 수 있다.

본원에서의 모노클로날 항체에는 구체적으로, 중쇄 및/또는 경쇄 일부가 특별한 종으로부터 유래되거나 특별한 항체 부류 또는 아부류에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 이와 상동성인 반면, 나머지 쇄(들)은 또다른 종으로부터 유래되거나 또다른 항체 부류 또는 아부류에 속하는 항체 내의 상응하는 서열과 동일하거나 이와 상동성인 "키메라" 항체 (면역글로불린) 뿐만 아니라, 원하는 생물학적 활성을 나타내는 상기 항체의 단편이 포함된다 (미국 특허번호 제4,816,567호; 문헌 [Morrison et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA , 81: 6851-6855 (1984)]). 본원에서 관심의 대상이 되는 키메라 항체에는 비-인간 영장류 (예로 서, 구세계 원숭이, 예를 들면, 개코 원숭이, 붉은털 원숭이 또는 시노몰구스 원숭이)로부터 유래된 가변 도메인 항원-결합성 서열 및 인간 불변 도메인 서열을 포함하는 "영장류화된" 항체가 포함된다 (미국 특허번호 제5,693,780호).

"인간화된" 형태의 비-인간 (예: 뮤린) 항체는 비-인간 면역글로불린으로부터 유래된 최소 서열을 함유하는 키메라 항체이다. 대부분의 경우, 인간화된 항체는, 수용자의 초가변 영역으로부터의 잔기를 원하는 특이성, 친화성 및 능력을 보유하고 있는 비-인간 종 (공여자 항체), 예를 들면, 마우스, 랫트, 토끼 또는 비-인간 영장류의 초가변 영역으로부터의 잔기로 대체시킨 인간 면역글로불린 (수용자 항체)이다. 몇몇 경우에는, 인간 면역글로불린의 프레임워크 영역 (FR) 잔기를 상응하는 비-인간 잔기로 대체시킨다. 추가로, 인간화된 항체는 수용자 항체 또는 공여자 항체에서 발견되지 않는 잔기를 포함할 수 있다. 이들 변형은 항체 성능을 추가로 개량시키기 위해 만들어진다. 일반적으로, 인간화된 항체는 1개 이상, 전형적으로는 2개의 가변 도메인을, 실질적으로는 모두 포함할 것이며, 여기서 모든 또는 실질적으로 모든 초가변 루프는 비-인간 면역글로불린에 상응하고, 모든 또는 실질적으로 모든 FR은 인간 면역글로불린 서열의 것인데, 단, 상기 언급된 바와 같은 FR 치환(들)은 제외된다. 인간화된 항체는 임의로, 면역글로불린 불변 영역, 전형적으로는 인간 면역글로불린의 불변 영역의 적어도 일부를 포함할 것이다. 추가의 상세한 설명을 위해서는, 문헌 [Jones et al., Nature 321:522-525(1986)]; [Riechmann et al., Nature 332:323-329 (1988)]; 및 [Presta, Curr . Op . Struct . Biol. 2:593-596 (1992)]을 참조한다.

본원에서 사용될 때 용어 "초가변 영역"은 항원 결합을 일으키는 항체의 아미노산 잔기를 언급한다. 초가변 영역은 "상보성 결정 영역" 또는 "CDR"로부터의 아미노산 잔기 (예로서, 경쇄 가변 도메인 내의 잔기 24-34 (L1), 50-56 (L2) 및 89-97 (L3); 및 중쇄 가변 도메인 내의 잔기 31-35 (H1), 50-65 (H2) 및 95-102 (H3); 문헌 [Kabat et al. Sequences of Proteins of Immunological Interest, 5th Ed. Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991)]) 및/또는 "초가변 루프"로부터의 아미노산 잔기 (예로서, 경쇄 가변 도메인 내의 잔기 26-32 (L1), 50-52 (L2) 및 91-96 (L3); 및 중쇄 가변 도메인 내의 잔기 26-32 (H1), 53-55 (H2) 및 96-101 (H3); 문헌 [Chothia and Lesk, J. Mol . Biol. 196: 901-917 (1987)])를 포함한다. "프레임워크" 또는 "FR" 잔기는 본원에 정의된 바와 같은 초가변 영역 잔기 이외의 가변 도메인 잔기이다.

본원에서의 목적상, "네이키드 항체"는 예를 들면, 세포독성 부분 또는 방사성표지와 접합하고 있지 않은 항체이다.

"단리된" 항체는 그의 천연 환경의 성분으로부터 확인 및 분리 및/또는 회수된 것이다. 그의 천연 환경의 오염 성분은 항체에 대한 진단적 또는 치료적 용도를 방해할 수도 있는 물질인데, 이에는 효소, 호르몬, 및 다른 단백질성 또는 비-단백질성 용질이 포함될 수 있다. 바람직한 실시태양에서, 항체를 (1) 로리 (Lowry) 방법에 의해 측정된 바, 항체의 95 중량％ 초과, 가장 바람직하게는, 99 중량％ 초과로 정제시키거나, (2) 스피닝 컵 서열화기를 사용하여 N-말단 또는 내부 아미노산 서열의 15개 이상 잔기를 수득하기에 충분한 정도로 정제시키거나, (3) 쿠마시 블루, 또는 바람직하게는, 은 염색을 이용하여 환원성 또는 비환원성 조건하에 SDS-PAGE에 의해 균질하도록 정제할 것이다. 단리된 항체는 항체의 천연 환경의 적어도 하나의 성분이 존재하지 않을 것이기 때문에, 단리된 항체에는 재조합 세포 내의 계내 항체가 포함된다. 그러나, 통상적으로 단리된 항체는 1개 이상의 정제 단계에 의해 제조될 것이다.

"성숙한 친화성을 갖는" 항체는 변경(들)을 갖지 않는 모체 항체와 비교하여, 항원에 대한 항체의 친화성이 개선된, 하나 이상의 초가변 영역에 하나 이상의 변경을 갖는 것이다. 바람직한 성숙한 친화성을 갖는 항체는 표적 항원에 대하여 나노몰랄 또는 피코몰랄까지의 친화성을 가질 것이다. 성숙한 친화성을 갖는 항체는 당업계에 공지된 방법에 의해 생산된다. 문헌 [Marks et al. Bio / Technology 10:779-783 (1992)]에는 VH 및 VL 영역 셔플링에 의한 친화성 성숙화가 기재되어 있다. CDR 및/또는 프레임워크의 잔기무작위 돌연변이 유발은 문헌 [Barbas et al. Proc Nat . Acad . Sci , USA 91:3809-3813 (1994)]; [Schier et al. Gene 169:147-155 (1995)]; [Yelton et al. J. Immunol . 155:1994-2004 (1995)]; [Jackson et al., J. Immunol. 154(7):3310-9 (1995)]; 및 [Hawkins et al, J. MoI. Biol. 226:889-896 (1992)]에 기재되어 있다.

"항체 노출"은 약 1-20일 간에 걸쳐 투여되는 1회 이상의 용량으로 본원에서의 항체와 접촉하거나 이에 노출되는 것을 언급한다. 이들 용량은 1회로 제공하거나 또는 노출 기간에 걸쳐 고정되거나 불규칙적인 시간 간격으로 제공될 수 있다. 초기 및 후기 (예로서, 제2 또는 제3) 항체 노출은 본원에 상세히 기술되는 바와 같이 서로 일정 시간 간격을 둘 수 있다.

"패키지 삽입물"은 적응증, 용도, 투여량, 투여, 금기사항, 패키지된 제품과 병용될 다른 치료 제품, 및/또는 이러한 치료 제품의 사용과 관련한 경고에 관한 정보를 함유하고 있는, 치료 제품의 상업적 패키지에 통상적으로 포함되는 설명서를 언급하기 위해 사용된다.

II . AD 또는 치매의 치료

본 발명은 유효량의, B-세포 표면 마커 (바람직하게, CD20 항체)에 결합하는 길항제 (바람직하게, 항체)를 대상에게 투여하는 것을 포함하는, AD 또는 치매를 앓는 대상에서 AD 또는 치매를 치료하는 방법을 제공한다. 본원에서 치료하고자 하는 AD 또는 치매는 경증의, 중간 정도의, 중증의, 경증 내지 중간 정도의, 중간 정도 내지 중증의, 산발성의, 가족성의, 조발성의, 및 후발성의 AD 또는 치매이다.

예시적인 투여 프로토콜에 따라, 본 방법은 유효량의 네이키드 CD20 항체를 AD 또는 치매 대상에게 투여하여 약 0.5 내지 4g (바람직하게, 약 1.5 내지 2.5g)의 초기 항체 노출을 제공한 한 후, 약 0.5 내지 4g (바람직하게, 약 1.5 내지 2.5g)의 제2 항체 노출을 제공하는 것을 포함하며, 제2 항체 노출은 초기 항체 노출로부터 약 16주 내지 60주까지는 제공되지 않는 것을 포함한다. 본 발명의 목적상, 제2 항체 노출은 초기 항체 노출 후 대상을 CD20 항체로 치료하는 다음 차례이며, 초기 노출과 제2 노출 사이에는 어떠한 CD20 항체 치료나 노출도 개입되지 않는다.

초기 항체 노출과 제2 또는 후속 항체 노출 사이의 간격은 초기 항체 노출의 1차 또는 2차 투여로부터 측정될 수 있지만, 바람직하게는, 초기 항체 노출의 1차 투여로부터 측정될 수 있다.

본원의 바람직한 실시태양에서, 항체 노출은 대략 24주 또는 6개월의 간격을 두거나; 대략 48주 또는 12개월의 간격을 둔다.

하나의 실시태양에서, 제2 항체 노출은 초기 노출로부터 약 20주 내지 30주까지는 제공되지 않고, 임의로, 약 0.5 내지 4g (바람직하게, 약 1.5 내지 2.5g)의 제3 항체 노출로 이어지며, 초기 노출로부터 약 46주 내지 60주까지는 제3 노출은 투여되지 않고, 바람직하게는, 초기 노출로부터 적어도 약 70-75주까지는 추가로 항체 노출이 제공되지 않는다.

다른 실시태양에서, 제2 항체 노출은 초기 노출로부터 약 46주 내지 60주까지는 제공되지 않고, 존재할 경우, 후속 항체 노출은 이전 항체 노출로부터 약 46주 내지 60주까지는 제공되지 않는다.

본원에서 임의의 하나 이상의 항체 노출은 대상에게 단일 용량의 항체로서, 또는 2회분의 분리된 용량의 항체로서 (예로서, 제1회분 용량과 제2회분 용량으로 구성됨) 제공될 수 있다. 각 항체 노출에 사용되는 특정한 용량 수 (1회 또는 2회이든지 간에)는, 예를 들면, 치료받는 AD 유형, 사용되는 항체의 유형, 제2 약물의 사용 여부 및 사용되는 제2 약물의 유형, 투여 방법 및 투여 횟수에 좌우된다. 2회분의 분리된 용량을 투여하는 경우에는, 제2회분 용량을 제1회분 용량의 투여 시점으로부터 바람직하게는, 약 3일 내지 17일, 더욱 바람직하게는, 약 6일 내지 16일, 가장 바람직하게는, 약 13일 내지 16일 후에 투여한다. 2회분의 분리된 용량 을 투여하는 경우, 항체의 제1회분 및 제2회분의 용량은 바람직하게 약 0.5 내지 1.5g, 더욱 바람직하게는, 약 0.75 내지 1.3g이다.

하나의 실시태양에서, 대상에게 약 3회 이상, 또는 약 4회 이상의 항체 노출, 예를 들면, 약 3 내지 60회 노출, 더욱 바람직하게는, 약 3 내지 40회 노출, 가장 바람직하게는, 약 3 내지 20회 노출을 제공한다. 바람직하게는, 이러한 노출을 각각 약 24주 또는 6개월, 또는 48주 또는 12개월 간격으로 투여한다. 하나의 실시태양에서, 각 항체 노출을 단일 용량의 항체로서 제공한다. 그러나, 모든 항체 노출이 단일 용량 또는 2회분의 분리된 용량으로서 제공될 필요는 없다.

바람직한 실시태양에서, 본 발명은 약 200mg 내지 2000mg, 바람직하게, 약 500mg 내지 1500mg, 및 가장 바람직하게, 약 750mg 내지 1200mg 범위로 하나 이상의 용량을 투여하는 것을 포함한다. 예를 들면, 1회분 내지 4회분의 용량, 또는 단지 1회분 또는 2회분의 용량을 투여할 수 있다. 본 실시태양에 따라, 항체는 약 1개월의 기간 이내에, 바람직하게는, 약 2 내지 3주간의 기간 이내에, 및 가장 바람직하게는, 약 2주간의 기간 이내에 투여될 수 있다.

1회분 이상의 용량을 투여하는 경우, 후기 용량 (예를 들면, 제2 또는 제3회분 용량)은 이전분의 용량이 투여된 시점부터 바람직하게는, 약 1 내지 20일, 더욱 바람직하게 약 6 내지 16일, 및 가장 바람직하게 약 14 내지 16일에 투여된다. 분리된 용량은 바람직하게 약 1일 내지 4주 사이, 더욱 바람직하게는, 약 1 내지 20일 사이의 전 기간이내 (예로서, 6-18일의 기간 이내)에 투여된다. 각각의 분리된 항체 용량은 바람직하게, 약 200mg 내지 2000mg, 바람직하게, 약 500mg 내지 1500mg, 및 가장 바람직하게, 약 750mg 내지 1200mg이다.

대상은 1회 이상의 노출 또는 한 세트의 용량분을 제공받으로써, 예를 들면, 약 2회 이상의 길항제 또는 항체 노출, 예로서, 약 2회 내지 60회 노출, 및 더욱 특히, 약 2회 내지 약 40회 노출, 가장 특히, 약 2회 내지 20회 노출을 제공받으로써 길항제 또는 항체로 재치료받을 수 있다. 그러한 추가의 노출은 간헐적으로, 예를 들면, 상기 언급한 시간 간격으로 투여받을 수 있다.

바람직한 길항제는 항체이다. 본원에 기술된 방법에서, CD20 항체는 네이키드 항체이다. 바람직하게, 항체는 본래, 네이키드 항체이다. 본원에서 바람직한 CD20 항체는 키메라, 인간화된, 또는 인간 CD20 항체이고, 더욱 바람직하게는, 리툭시마브, 인간화된 2H7, 2F2 (HuMax-CD20) 인간 CD20 항체 (젠마브), 인간화된 A20 항체 (이뮤노메딕스)이다. 더욱더 바람직한 것은 리툭시마브 또는 인간화된 2H7이다.

하나의 실시태양에서, AD 또는 치매를 치료하기 위해 대상은 기존에 면역억제제와 같은 약물(들)로 치료받은 적이 결코 없고/없거나 기존에 B-세포 표면 마커에 대한 항체로 치료받은 적이 결코 없다 (예로서, 기존에 CD20 항체로 치료받은 적이 결코 없다). 바람직하게, 대상은 B-세포 악성 종양을 앓고 있지 않다. 하나의 실시태양에서, 대상은 AD 또는 치매 이외의 자가면역 질병은 앓고 있지 않다.

항체는 비경구, 국소, 피하, 복강내, 폐내, 비강내 및/또는 병변내 투여를 비롯한 임의의 적합한 수단에 의해 투여된다. 비경구 주입에는 근육내, 정맥내, 동맥내, 복강내 및 피하 투여가 포함된다. 뇌 간질 주입, 양쪽 정위 주사와 같이, 수막강내 투여 또한 고려된다 (CD20 항체의 수막강내 전달에 관해서 예를 들면, 미국 특허출원번호 제2002/0009444호 (그릴로-로페즈, A)를 참조한다. 바람직하게는, 정맥내 또는 피하 투여되고, 가장 바람직하게는, 정맥내 주입(들)된다.

하나의 실시태양에서, AD 또는 치매를 치료하기 위해 대상에 투여되는 유일한 약물은 CD20 항체이다.

그러나, 일반적으로, CD20 항체는 하나 이상의 제2 약제와 배합될 것이다. 예를 들면, 임의로 하나의 제2 약제, 예로서, 콜린에스테라제 저해제 (갈란타민 (레미닐®), 리바스티그민 경피용 패취제를 포함하는 리바스티그민 (엑셀론®), 도네페질 (아리셉트®), 타크린 (코그넥스®), 및 휴프린 X™를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다); N-메틸 D-아스파테이트 (NMDA) 길항제 (예를 들면, 메만틴 (나멘다®) 또는 네라멕산); NGF의 아데노-관련 바이러스 전달 (예로서, CERE-110); 베타-차단제; 항정신병제; 아세틸콜린 전구체; 니코틴성 또는 무스카린성 효현제 (예로서, 크사노멜린(XANOMELINE)™ 패취); 항-베타-아밀로이드 항체; 항-NGF 항체, 예로서, RA624; 백신, 예를 들면 인간 아밀로이드 백신; 아밀로이드 형성에 관여하는 효소(들), 베타 또는 감마 세크레타제의 활성을 차단하는 제제; 항-아밀로이드 요법; 세로토닌; 노르에피네프린; 소마토스타틴; APP의 아밀로이드-베타로의 전환 또는 노인성 반점 및 신경원섬유매듭의 형성을 방해하는 제제; 베타-부위의 아밀로이드-전구체-단백질 분해 효소, 베타-세크레타제 (BACE) 길항제; BASE1 길항제; BASE2 길항제; 감마-세크레타제 길항제; 프리세닐린-1 (PSEN-1) 길항제; 프리세닐린-2 (PSEN-2) 길항제; APO-E4 길항제; 항우울제; 항경련제; 세로토닌 재흡수 저해제; 설트랄린 (졸로프트(ZOLOFT)™); 트라조돈 (데시렐(DESYREL)™); 디발프로엑스 (데파코트(DEPAKOTE)™); 가바펜틴 (뉴로닌(NEURONIN)™); 리스페리돈 (리스페달(RISPERDAL)®); 올란자핀 (자이프렉사(ZYPREXA)™); 쿠에티아핀 (쎄로켈(SEROQUEL)™); 티오리다진 (멜라릴(MELLARIL)™); 콜레스테롤 강하 약물 또는 스타틴 (예로서, HMG-CoA 리덕타제 또는 심바스타틴); 면역조절제; 항산화제, 예로서, 비타민 E (알파-토코페롤), 어유 또는 알파 리포산; 카로틴; 니코틴; 은행 추출물; 셀레길린; 에르골로이드 메실레이트; 에스트로겐; 비-스테로이드계 항염증성 약물 (NSAIDs), 예로서, 아스피린, 이부프로펜, cox-2 저해제, 로페콕시브 (바이옥스 (VIOXX)®), 나프록센 (앨리브(ALEVE)®), 셀레콕시브 (셀레브렉스®), 또는 나프록센을 비롯한 항염증제; 은행잎(ginkgo biloba); PPI-1019; 후퍼진 A; 비타민, 예로서, 폴산염 (엽산), B6, B12, 비타민 C, 비타민 E; 셀레늄 (프릴어드바이스(PREADVISE)™); GABA(B) 수용체 길항제, 예로서, SGS742; NC-758 (알제메드(Alzhemed)™); C-1073 (미페프리스톤(mifepristone)™); FK962; 커큐민; ONO-2506PO; 라사길린 메실레이트; 발프로에이트; SR57746A (크살리프로덴(XALIPRODEN)™); NS 2330; MPC-7869; 인터페론, 예로서, 인터페론 알파, 단백질분해 베타 아밀로이드 경쇄 항체 단편; 세포 독성제 (상기 정의 참조); 화학요법제 (상기 정의 참조); 면역억제제 (상기 정의 참조); TNF-알파 저해제; DMARD; 인테그린 길항제 또는 항체; 코르티코스테로이드; 퓨린 하이포크산틴 유도체 (예로서, ATT-082) 등을 투여할 수 있다.

특히 AD 또는 치매가 경증 내지 중간 정도인 경우, 제2 약제는 콜린에스테라 제 저해제 (예로서, 갈란타민 (레미닐®), 리바스티그민 경피용 패취제를 포함하는 리바스티그민 (엑셀론®), 및 도네페질 (아리셉트®))인 것이 바람직하거나; 특히, AD 또는 치매가 중간 정도 내지 중증인 경우, 제2 약제는 N-메틸 D-아스파테이트 (NMDA) 길항제 (예를 들면, 메만틴 (나멘다®))인 것이 바람직하다.

제2 약제는 CD20 항체의 초기 노출 및/또는 후기 노출과 함께 투여될 수 있고, 그러한 병용 투여는 분리식 제형 또는 단일 약제학적 제형을 사용하는 공-투여, 및 순서와 무관한 연속 투여를 포함하고, 여기서, 활성제 양자 모두 (또는 모든 활성제)가 그들의 생물학적 활성을 동시에 발휘하는데는 일정 시간상의 기간이 존재한다.

대상에게 항체를 투여하는 것 이외에도, 본 출원은 유전자 요법에 의해 항체를 투여하는 것을 고려하고 있다. 항체를 코딩하는 핵산을 투여하는 것은 "유효량"의 항체를 투여한다는 표현에 포함된다. 세포내 항체를 생성하기 위해 유전자 요법을 사용하는 것과 관련해서는, 에를 들면, 1996년 3월 14일 공개된 WO96/07321을 참조한다.

핵산 (임의로는 벡터내에 함유되어 있는 핵산)을 대상의 세포내로 도입시키는 주된 접근법에는 생체내 접근법 및 생체외 접근법, 2가지가 있다. 생체내 전달의 경우, 일반적으로는 핵산이 필요시 되는 부위에 직접 대상에게 핵산을 주사한다. 생체외 치료법의 경우, 대상의 세포를 제거하고, 핵산을 이들 단리된 세포내로 도입시키고, 변형된 세포를 직접 대상에게 도입시키거나, 예를 들면, 대상내로 이식되는 다공성 막 내부에 캡슐화시킨다 (미국 특허번호 제4,892,538호 및 제 5,283,187호 참조). 생육성 세포내로 핵산을 도입시키는데 이용될 수 있는 기법은 다양하게 존재한다. 그러한 기법은 핵산을 시험관내에서 배양된 세포내로 전달하는지, 또는 생체내에서 의도하는 숙주의 세포내로 전달하는지에 따라 달라진다. 시험관내에서 포유동물 세포내로 핵산을 전달하기에 적합한 기법은 리포좀의 사용, 전기천공, 미세주입, 세포융합, DEAE-텍스트란, 인산칼슘 침전법 등을 포함한다. 유전자의 생체외 전달에 통상적으로 사용되는 벡터는 레트로바이러스이다.

현재 바람직한 생체내 핵산 전달 기법에는 바이러스 벡터 (예로서, 아데노바이러스, 헤르페스 심플렉스 I 바이러스 또는 아데노-관련 바이러스)를 사용한 형질 감염 및 지질-기재 시스템 (유전자의 지질-매개 전달에 유용한 지질은 예를 들면, DOTMA, DOPE 및 DC-Chol이다)을 포함한다. 몇몇 상황하에서, 세포막 단백질 또는 표적 세포에 특이적인 항체, 표적 세포상의 수용체에 대한 리간드 등과 같은, 표적 세포를 표적화하는 물질과 함께 핵산 공급원을 제공하는 것이 바람직하다. 리포좀이 사용되는 경우, 예를 들면, 특정 세포 유형에 친화적인 캡시드 단백질 또는 그의 단편, 재순환에서 내재화되는 단백질에 대한 항체, 및 세포내 국소화를 표적으로 하여 세포내 반감기를 증진시키는 단백질과 같이, 엔도사이토시스와 관련된 세포 표면 막 단백질에 결합하는 단백질이 표적화에 사용되고/되거나 유입을 용이하게하는데 사용될 수 있다. 수용체-매개 엔도사이토시스의 기법은 예를 들면, 문헌 [Wu et al., J. Biol . Chem . 262:4429-4432 (1987)]; 및 [Wagner et al., Proc . Natl. Acad . Sci . USA 87:3410-3414(1990)]에 기재되어 있다. 현재 공지된 유전자 표지 및 유전자 요법 프로토콜에 대한 검토를 위해서는, 문헌 [Anderson et al., Science 256:808-813 (1992)]을 참조한다. WO 93/25673 및 본원에 언급된 참조 문헌도 참조할 수 있다.

III . 항체 생산

본 발명의 방법 및 제품은 B-세포 표면 마커와 결합하는 항체, 특히 CD20과 결합하는 항체를 바람직하게는 사용하거나, 이를 혼입시킬 수 있다. 따라서, 이러한 항체의 생산 방법이 본원에 기재된다.

항체들의 생산을 위해 또는 항체들의 선별을 위해 사용되는 B 세포 표면 마커는 예를 들면, 원하는 에피토프를 함유하는 가용성 형태의 마커 또는 그의 일부일 수 있다. 별법으로, 또는 추가로, 그들의 세포 표면에 마커를 발현시키는 세포를 사용하여 항체들을 생산하거나, 이에 대해 선별할 수 있다. 항체를 생산하는데 유용한 다른 형태의 B 세포 표면 마커는 당업자에게 자명할 것이다.

하기 설명은 본 발명에 따라 사용되는 항체를 생산하기 위한 기법을 예시한 것이다.

(i) 폴리클로날 항체

폴리클로날 항체는 관련 항원 및 애주번트를 수회 피하 (sc) 또는 복강내 (ip) 주사함으로써 동물에게 생산하는 것이 바람직하다. 이관능성 또는 유도체화제, 예를 들면, 말레이미도벤조일 설포숙신이미드 에스테르 (시스테인 잔기를 통한 접합), N-하이드록시숙신이미드 (리신 잔기를 통함), 글루타르알데히드, 숙신산 무수물, SOCl₂ 또는 R¹N=C=NR (여기서, R 및 R¹은 상이한 알킬기이다)를 사용하여, 면 역화시키고자 하는 종에서 면역원성인 단백질, 예를 들면, 키홀 림펫 헤모시아닌(keyhole limpet hemocyanin), 혈청 알부민, 소 티로글로불린 또는 대두 트립신 저해제에 관련 항원을 접합시키는 것이 유용할 수 있다.

예를 들어, (각각, 토끼 또는 마우스에 대한) 100㎍ 또는 5㎍의 단백질 또는 접합체를 3 용적의 프로인트 완전 애주번트와 배합하고, 이 용액을 다중 부위에 피부내로 주사함으로써, 동물을 항원, 면역원성 접합체 또는 유도체에 대하여 면역화시킨다. 1개월 후, 프로인트 완전 애주번트 중의 펩티드 또는 접합체 본래 양의 1/5 내지 1/10을 다중 부위에 피하 주사함으로써 상기 동물을 추가 면역화시킨다. 7 내지 14일 후에, 상기 동물을 채혈하고, 혈청을 대상으로 하여 항체 역가에 대해 분석한다. 역가가 일정한 수준에 도달할 때까지 동물을 추가 면역화시킨다. 바람직하게는, 동일한 항원의 접합체이긴 하지만, 상이한 단백질과 접합되고/되거나 상이한 가교결합 시약을 통하여 접합된 접합체를 사용하여 동물을 추가 면역화시킨다. 접합체를 재조합 세포 배양물 내에서 단백질 융합물로서 제조할 수도 있다. 또한, 백반 등의 응집제를 적합하게 사용하여 면역 반응을 증강시킨다.

( ii ) 모노클로날 항체

모노클로날 항체는 실질적으로 동질성인 항체 집단, 즉, 집단을 차지하고 있는 개개의 항체가, 모노클로날 항체 생성 동안 유발될 수도 있는 가능한 변이체 (이러한 변이체는 일반적으로 미량으로 존재함)를 제외하고는 동일하고/하거나 동일한 에피토프와 결합하는 집단으로부터 수득한다. 따라서, 수식어 "모노클로날"은 항체의 특징이 별개의 또는 폴리클로날 항체의 혼합물이 아니라는 것을 시사한 다.

예를 들어, 모노클로날 항체는 (문헌 [Kohler et al., Nature, 256: 495 (1975)])에 최초로 기재된 하이브리도마 방법을 사용하여 제조할 수 있거나, 또는 재조합 DNA 방법 (미국 특허번호 제4,816,567호)에 의해 제조될 수 있다.

하이브리도마 방법에서는, 마우스 또는 다른 적절한 숙주 동물, 예를 들면, 햄스터를 상기 언급된 바와 같이 면역화시켜 면역화에 사용되는 단백질과 특이적으로 결합하는 항체를 생산하거나 생산할 수 있는 림프구를 유도한다. 별법으로, 림프구를 시험관내에서 면역화시킬 수 있다. 이어서, 적합한 융합제, 예로서, 폴리에틸렌 글리콜을 사용하여, 림프구를 골수종 세포와 융합시켜 하이브리도마 세포를 형성시킨다 (문헌 [Goding, Monoclonal Antibodies : Principles and Practice , pp. 59-103 (Academic Press, 1986)]).

이로써 제조된 하이브리도마 세포를 시딩하고, 바람직하게는 융합되지 않은 모 골수종 세포의 성장 또는 생존을 저해하는 하나 이상의 물질을 함유하는 적합한 배양 배지에서 성장시킨다. 예를 들어, 모 골수종 세포에 효소 하이포크산틴 구아닌 포스포리보실 트랜스퍼라제 (HGPRT 또는 HPRT)가 결여된 경우에는, 하이브리도마에 대한 배양 배지가 전형적으로, HGPRT-결핍성 세포의 성장을 방지시키는 물질인 하이포크산틴, 아미노프테린 및 티미딘 (HAT 배지)를 포함할 것이다.

바람직한 골수종 세포는 효율적으로 융합시켜 주고, 선별된 항체-생산 세포에 의한 안정한 고수준의 항체 생성을 뒷받침해주며, HAT 배지 등의 배지에 민감한 세포이다. 이들 중에서, 바람직한 골수종 세포주는 뮤린 골수종 세포주, 예를 들 면, 미국 캘리포니아주 샌디에고에 소재하는 솔크 인스티튜트 셀 디스트리뷰션 센터(Salk Institute Cell Distribution Center)로부터 입수 가능한 MOPC-21 및 MPC-11 마우스 종양으로부터 유래된 것, 및 미국 메릴랜드주 로크빌에 소재하는 아메리칸 타입 컬쳐 컬렉션(American Type Culture Collection)으로부터 입수 가능한 SP-2 또는 X63-Ag8-653 세포이다. 인간 골수종 및 마우스-인간 이종골수종 세포주 또한, 인간 모노클로날 항체를 생산하는 것으로 기재되어 있다 (문헌 [Kozbor, J. Immunol., 133: 3001 (1984)]; [Brodeur et al., Monoclonal Antibody Production Techniques and Applications, pp. 51-63 (Marcel Dekker, Inc., New York, 1987)]).

하이브리도마 세포가 성장하고 있는 배양 배지를 대상으로 하여, 항원에 대하여 유도된 모노클로날 항체의 생산에 대해 분석한다. 바람직하게는, 하이브리도마 세포에 의해 생산된 모노클로날 항체의 결합 특이성은 면역침전법, 또는 시험관내 결합 분석법, 예를 들면, 방사성 면역분석법 (RIA) 또는 효소 결합 면역흡착 분석법 (ELISA)에 의해 측정한다.

모노클로날 항체의 결합 친화성은, 예를 들면, 문헌 [Munson et al., Anal . Biochem., 107: 220 (1980)]의 스캐챠드(Scatchard) 분석에 의해 측정할 수 있다.

원하는 특이성, 친화성, 및/또는 활성의 항체를 생산하는 하이브리도마 세포를 확인한 후, 제한 희석 방법에 의해 클론을 서브클로닝시킨 후, 표준 방법에 의해 성장시킬 수 있다 (문헌 [Goding, Monoclonal Antibodies : Principles and Practice, pp. 59-103 (Academic Press, 1986)]). 이러한 목적에 적합한 배양 배 지에는, 예를 들면, D-MEM 또는 RPMI-1640 배지가 포함된다. 추가로, 하이브리도마 세포를 동물 중에서 복수 종양으로서 생체내에서 성장시킬 수 있다.

상기 서브클론에 의해 분비된 모노클로날 항체를, 통상적인 면역글로불린 정제 방법, 예를 들면, 단백질 A-세파로스, 하이드록실아파타이트 크로마토그래피, 겔 전기영동, 투석 또는 친화 크로마토그래피에 의해 배양 배지, 복수액 또는 혈청으로부터 적합하게 분리시킨다.

모노클로날 항체를 코딩하는 DNA는 통상적인 방법을 사용하여 (예로서, 뮤린 항체의 중쇄 및 경쇄를 코딩하는 유전자와 특이적으로 결합할 수 있는 올리고뉴클레오티드 프로브를 사용함으로써) 용이하게 단리되고 서열화된다. 하이브리도마 세포는 이러한 DNA의 바람직한 공급원으로서 제공된다. 일단 단리되면, DNA를 발현 벡터 내로 위치시킨 후, 숙주 세포, 예를 들면, 이. 콜라이 (E. coli) 세포, 원숭이 COS 세포, 중국산 햄스터 난소 (CHO) 세포, 또는 골수종 세포 (이들은 면역글로불린 단백질을 생산하지 않는다) 내로 형질감염시켜 재조합 숙주 세포에서 모노클로날 항체의 합성을 수득할 수 있다. 항체를 코딩하는 DNA를 세균 내에서 재조합 발현시키는 것에 관한 검토 논문에는 문헌 [Skerra et al., Curr . Opinion in Immunol., 5: 256-262 (1993)] 및 [Pluckthun, Immunol . Revs ., 130: 151-188 (1992)]이 포함된다.

추가의 실시태양에서, 항체 또는 항체 단편을 문헌 [McCafferty et al., Nature, 348:552-554 (1990)]에 기재된 기술을 사용하여 생성된 항체 파지 라이브러리로부터 분리시킬 수 있다. 문헌 [Clackson et al., Nature, 352: 624-628 (1991)] 및 [Marks et al., J. Mol . Biol., 222: 581-597 (1991)]에는 파지 라이브러리를 사용하여 뮤린 및 인간 항체를 각각 단리시키는 방법이 기재되어 있다. 후속 공개 문헌에는 매우 큰 파지 라이브러리를 작제하기 위한 전략으로서 조합 감염 및 생체내 재조합 (문헌 [Waterhouse et al., Nuc . Acids . Res ., 21: 2265-2266 (1993)]) 뿐만 아니라 연쇄 셔플링 (문헌 [Marks et al., Bio/Technology, 10: 779-783 (1992)])에 의해 고 친화성 (nM 범위) 인간 항체를 생성시키는 방법이 기재되어 있다. 따라서, 이들 기법은 모노클로날 항체를 단리시키기 위한 전통적인 모노클로날 항체 하이브리도마 기술에 대한 하나의 실행 가능한 대체 방안이다.

DNA는, 예를 들어, 상동성 뮤린 서열 대신 인간 중쇄 및 경쇄 불변 도메인을 코딩 서열로 치환시키거나 (미국 특허번호 제4,816,567호; 문헌 [Morrison, et al., Proc. Natl Acad. Sci. USA, 81: 6851 (1984)]), 또는 면역글로불린 코딩 서열에 비-면역글로불린 폴리펩티드에 대한 코딩 서열의 전부 또는 일부를 공유 결합시킴으로써 변형시킬 수도 있다.

전형적으로, 이러한 비-면역글로불린 폴리펩티드를 항체의 불변 도메인 대신 사용하거나, 또는 항체의 하나의 항원 결합 부위의 가변 도메인 대신 사용하여, 항원에 대한 특이성을 지닌 하나의 항원 결합 부위와, 상이한 항원에 대한 특이성을 지닌 또다른 항원 결합 부위를 포함하는 키메라 2가 항체를 생성시킨다.

(iii) 인간화된 항체

비-인간 항체를 인간화시키는 방법이 당업계에 보고되었다. 바람직하게는, 인간화된 항체가 비-인간 공급원으로부터 도입된 하나 이상의 아미노산 잔기를 갖 는다. 이들 비-인간 아미노산 잔기는 종종 "유입 (import)" 잔기로서 언급되는데, 이는 전형적으로 "유입" 가변 도메인으로부터 얻어진다. 인간화는 인간 항체의 상응하는 서열을 초가변 영역 서열로 대체함으로써, 윈터(Winter)와 동료들의 방법 (문헌 [Jones et al., Nature, 321: 522-525 (1986)]; [Riechmann et al., Nature, 332: 323-327 (1988)])에 따라서 본질적으로 수행될 수 있다. 따라서, 이러한 "인간화" 항체는 실질적으로 덜한 본래의 인간 가변 도메인을 비-인간 종으로부터의 상응하는 서열로 대체시킨 키메라 항체 (미국 특허번호 제4,816,567호)이다. 실제로, 인간화된 항체는 전형적으로, 몇몇 초가변 영역 잔기와 가능하게는 몇몇 FR 잔기를 설치류 항체 내의 유사한 부위로부터의 잔기로 대체시킨 인간 항체이다.

인간화된 항체를 제조하는데 사용될, 경쇄 및 중쇄의 인간 가변 도메인의 선택이 항원성을 저하시키는데 있어 매우 중요하다. 소위 "최량 적합 (best-fit)" 방법에 따르면, 설치류 항체의 가변 도메인 서열을 공지된 인간 가변-영역 서열의 전체 라이브러리에 대하여 선별한다. 이어서, 설치류의 서열에 가장 근접한 인간 서열을 인간화된 항체에 대한 인간 프레임워크 영역 (FR)으로서 허용한다 (문헌 [Sims et al., J. Immunol., 151: 2296 (1993)]; [Chothia et al., J. Mol . Biol., 196: 901 (1987)]). 또다른 방법은 경쇄 또는 중쇄 가변 부위의 특정한 서브그룹의 모든 인간 항체의 공통 서열로부터 유래된 특정의 프레임워크 영역을 사용한다. 동일한 프레임워크를 수개의 상이한 인간화된 항체에 사용할 수 있다 (문헌 [Carter et al., Proc. Natl . Acad . Sci . USA, 89:4285 (1992)]; [Presta et al., J. Immunol ., 15-1 :2623 (1993)]).

항원에 대한 고 친화성과 다른 바람직한 생물학적 특성을 유지하고 있는 항체로 인간화시키는 것이 추가로 중요하다. 이러한 목적을 달성하기 위한 바람직한 방법에 따라, 모체 서열과 인간화된 서열의 3차원적 모델을 이용하여 모체 서열과 각종 개념적 인간화된 산물의 분석 공정에 의해 인간화된 항체를 제조한다. 3차원적 면역글로불린 모델은 시판되고 있으며, 당업자에게 널리 알려져 있다. 선택된 후보 면역글로불린 서열의 추정상의 3차원적 입체 형태 구조를 예시하고 디스플레이하는 컴퓨터 프로그램도 입수 가능하다. 이들 디스플레이를 검사하여, 후보 면역글로불린 서열의 기능에 있어 잔기의 예상 역할을 분석할 수 있는데, 즉, 후보 면역글로불린이 그의 항원과 결합할 수 있는 능력에 영향을 미치는 잔기를 분석할 수 있다. 이러한 방식으로, FR 잔기를 선별하고, 이를 수용자로부터 유입 서열과 조합하여, 원하는 항체 특징, 예를 들면, 표적 항원(들)에 대한 증가된 친화성을 달성하도록 한다. 일반적으로, 초가변 영역 잔기는 항원 결합성에 영향을 미치는데 있어 직접적이면서도 가장 실재적으로 관여한다.

( iv ) 인간 항체

인간화에 대한 대체 방안으로서, 인간 항체를 생산할 수 있다. 예를 들어, 면역화시 내인성 면역글로불린 생산의 부재 하에 완전한 레퍼토리의 인간 항체를 생산할 수 있는 트랜스제닉 동물 (예: 마우스)을 생산하는 것이 현재 가능하다. 예를 들어, 키메라 및 생식세포계 돌연변이체 마우스에서 항체 중쇄 연결 영역 (J_H) 유전자의 동형접합성 결실로 인해, 내인성 항체 생성이 완전히 저해된 것으로 보고 되었다. 이러한 생식세포계 돌연변이체 마우스에서 인간 생식세포계 면역글로불린 유전자 어레이를 전달하면, 항원 시험감염시 인간 항체가 생산될 것이다 (예를 들면, 문헌 [Jakobovits et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 90: 2551 (1993)]; [Jakobovits et al., Nature, 362: 255-258 (1993)]; [Bruggermann et al., Year in Immuno., 7: 33 (1993)]; 및 미국 특허번호 제5,591,669호, 제5,589,369호 및 제5,545,807호 참조).

별법으로, 파지 디스플레이 기술 (문헌 [McCafferty et al., Nature 348: 552-553 (1990)])을 사용하여, 면역화시키지 않은 공여자로부터의 면역글로불린 가변 (V) 도메인 유전자 레퍼토리로부터 인간 항체 및 항체 단편을 시험관내에서 생산할 수 있다. 이러한 기법에 따르면, 항체 V 도메인 유전자를 필라멘트상 박테리오파지, 예로서, M13 또는 fd의 주요 또는 소수의 외피 단백질 유전자 내로 동일 프레임 내에서 클로닝시키고, 파지 입자 표면 상에서 작용상의 항체 단편으로서 디스플레이한다. 필라멘트상 입자는 파지 게놈의 단일 가닥 DNA 카피를 함유하기 때문에, 항체의 작용상의 성질을 기준으로 하여 선별하게 되면, 이들 성질을 나타내는 항체를 코딩하는 유전자를 선별할 수 있다. 따라서, 파지는 B 세포의 특성들 중의 몇 가지 성질을 모사한다. 파지 디스플레이는 각종 포맷으로 수행할 수 있으며, 이들에 대하여 검토하기 위해서는 예를 들면 문헌 [Johnson, Kevin S. and Chiswell, David J., Current Opinion in Structural Biology 3: 564-571 (1993)]을 참조할 수 있다 . V-유전자 절편의 몇 가지 공급원을 파지 디스플레이를 위해 사용할 수 있다. 문헌 [Clackson et al., Nature, 352 : 624-628 (1991)]에서는 면역화시킨 마우스의 비장으로부터 유래된 V 유전자의 작은 무작위 조합 라이브러리로부터 항옥사졸론 항체의 다양한 어레이를 단리시켰다. 면역화시키지 않은 인간 공여자로부터의 V 유전자 레퍼토리를 작제할 수 있고, 다양한 항원 (자가 항원 포함) 어레이에 대한 항체는 본질적으로, 문헌 [Marks et al., J. Mol . Biol. 222: 581-597 (1991)] 또는 [Griffith et al., EMBO J. 12: 725-734 (1993)]에 기재된 기법에 따라 분리될 수 있다. 미국 특허번호 제5,565,332호 및 제5,573,905호 또한 참조한다.

인간 항체는 시험관내 활성화 B-세포에 의해 생산될 수 있다 (미국 특허번호 제5,567,610호 및 제5,229,275호 참조).

(v) 항체 단편

항체 단편을 생성시키기 위한 다양한 기법이 개발되었다. 전통적으로, 이들 단편은 본래의 항체를 단백질 분해적으로 분해시킴으로써 유도되었다 (예를 들면, 문헌 [Morimoto et al., Journal of Biochemical and Biophysical Methods 24: 107-117 (1992)] 및 [Brennan et al., Science, 229: 81 (1985)] 참조). 그러나, 이들 단편은 현재, 재조합 숙주 세포에 의해 직접적으로 생산할 수 있다. 예를 들어, 항체 단편은 상기 논의된 항체 파지 라이브러리로부터 단리될 수 있다. 별법으로, Fab'-SH 단편을 이. 콜라이로부터 직접 회수하고, 이를 화학적으로 커플링시켜 F(ab')₂ 단편을 형성시킬 수 있다 (문헌 [Carter et al., Bio / Technology 10: 163-167 (1992)]). 또다른 접근법에 따르면, F(ab')₂ 단편을 재조합 숙주 세포 배 양물로부터 직접적으로 분리시킬 수 있다. 항체 단편을 생성시키기 위한 다른 기법은 당업자에게 자명할 것이다. 다른 실시태양에서, 선택된 항체는 단일 쇄 Fv 단편 (scFv)이다. WO 93/16185; 미국 특허번호 제5,571,894호; 및 제5,587,458호를 참조한다. 항체 단편은 예를 들어, 미국 특허번호 제5,641,870호에 기재된 바와 같은 "선형 항체"일 수도 있다. 이러한 선형 항체 단편은 단일-특이적 또는 이중-특이성일 수 있다.

( vi ) 이중-특이성 항체

이중-특이성 항체는 적어도 2개의 상이한 에피토프에 대한 결합 특이성을 지닌 항체이다. 예시되는 이중-특이성 항체는 B 세포 표면 마커의 2개의 상이한 에피토프와 결합할 수 있다. 이러한 다른 항체는 B 세포 표면 마커와 결합할 수 있고, 제2의 상이한 B-세포 표면 마커와 추가로 결합할 수 있다. 별법으로, 항-B 세포 표면 마커 결합성 암(arm)을, B 세포에 대한 세포성 방어 기전에 집중하도록, 백혈구 상의 촉발성 분자, 예를 들면, T-세포 수용체 분자 (예로서, CD2 또는 CD3), 또는 IgG에 대한 Fc 수용체 (FcγR), 예로서, FcγRI (CD64), FcγRII (CD32) 및 FcγRIII (CD16)와 결합하는 암과 조합시킬 수 있다. 이중-특이성 항체를 사용하여 세포독성제를 B-세포에 국재화시킬 수도 있다. 이들 항체는 B 세포 표면 마커-결합성 암과, 세포독성제 (예로서, 사포린, 항인터페론-α, 빈카 알카로이드, 리신 A 쇄, 메토트렉세이트 또는 방사성 동위원소 합텐)와 결합하는 암을 보유하고 있다. 이중-특이성 항체는 전장의 항체 또는 항체 단편 (예로서, F(ab')₂ 이중-특이성 항체)로서 제조될 수 있다.

이중-특이성 항체의 제조 방법은 당업계에 공지되어 있다. 전장의 이중-특이성 항체의 전통적인 생산 방법은 2개의 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍을 공발현시키는 것에 기초하는데, 상기 2개의 쇄는 상이한 특이성을 갖는다 (문헌 [Millstein et al., Nature, 305: 537-539 (1983)]). 면역글로불린 중쇄 및 경쇄의 무작위 분류로 인해, 이들 하이브리도마 (쿠아드로마 (quadromas))는 10개의 상이한 항체 분자의 잠재적 혼합물을 생산하는데, 이들 중에서 1개 만이 정확한 이중-특이성 구조를 갖는다. 친화 크로마토그래피 단계에 의해 통상 수행되는, 상기 정확한 분자의 정제는 다소 번거로운 과정이며, 산물 수율도 낮다. 유사한 방법이 (WO 93/08829, 및 [Traunecker et al., EMBO J., 10: 3655-3659 (1991)])에 기재되어 있다.

상이한 접근법에 따르면, 원하는 결합 특이성 (항체-항원 결합 부위)을 지닌 항체 가변 도메인을 면역글로불린 불변 도메인 서열과 융합시킨다. 이러한 융합은 바람직하게, 힌지, CH2, 및 CH3 부위의 적어도 일부를 포함하는, 면역글로불린 중쇄 불변 도메인과 이루어진다. 융합물 중의 적어도 하나에 존재하는, 경쇄 결합에 필요한 부위를 함유하는 제1 중쇄 불변 영역 (CH1)을 갖는 것이 바람직하다. 면역글로불린 중쇄 융합물과, 원하는 경우, 면역글로불린 경쇄를 코딩하는 DNA를 별개의 발현 벡터 내로 삽입하고, 적합한 숙주 유기체 내로 공-형질감염시킨다. 이는 작제에 사용된 3개의 폴리펩티드 쇄의 불균등한 비율이 최적의 수율을 제공해주는 경우의 실시태양에서, 3개의 폴리펩티드 단편의 상호 비율을 조정하는데 있어서 큰 유연성을 제공해준다. 그러나, 2개 또는 3개 모두의 폴리펩티드 쇄를 균등한 비율 로 발현시키는 것이 고 수율을 가져다주거나, 또는 이들 비율이 특별한 의미를 갖지 않은 경우에, 2개 또는 3개 모두의 폴리펩티드 쇄에 대한 코딩 서열을 하나의 발현 벡터에 삽입하는 것이 가능하다.

상기 접근법의 바람직한 실시태양에서, 이중-특이성 항체가 하나의 암 중에 제1의 결합 특이성을 지닌 하이브리드 면역글로불린 중쇄와, 다른 암 중에 하이브리드 면역글로불린 중쇄-경쇄 쌍 (제2의 결합 특이성을 제공한다)으로 구성된다. 이러한 비대칭 구조가 원하는 이중-특이성 화합물을 불필요한 면역글로불린 쇄 조합물로부터 격리시키는 것을 촉진시키는데, 이는 이중-특이성 분자의 단지 절반에만 면역글로불린 경쇄가 존재하는 것이 용이한 격리 방식을 제공해주기 때문이다. 이러한 접근법은 WO 94/04690에 기재되어 있다. 이중-특이성 항체를 생산하는 것에 대한 추가의 상세한 설명을 위해서는, 예를 들면, 문헌 [Suresh et al., Methods in Enzymology, 121: 210 (1986)]을 참조할 수 있다.

미국 특허번호 제5,731,168호에 기재된 또다른 접근법에 따르면, 한 쌍의 항체 분자 간의 계면을 공학적으로 처리하여, 재조합 세포 배양물로부터 회수되는 이종-이량체의 비율 (％)을 최대화할 수 있다. 바람직한 계면은 항체 불변 도메인의 CH₃ 영역의 적어도 일부를 포함한다. 이러한 방법에서는, 제1 항체 분자의 계면으로부터의 하나 이상의 작은 아미노산 측쇄를 보다 큰 측쇄 (예로서, 티로신 또는 트립토판)으로 대체시킨다. 큰 측쇄(들)와 동일하거나 유사한 크기의 대상성 "강(cavity)"은, 큰 아미노산 측쇄를 보다 작은 것 (예로서, 알라닌 또는 트레오닌) 으로 대체시킴으로써 제2 항체 분자의 계면 상에서 일어난다. 이는 다른 원치않는 최종 산물, 예를 들면, 동종-이량체에 비해 이종-이량체의 수율을 증가시켜 주는 기전을 제공한다.

이중-특이성 항체에는 가교결합되거나 "이종접합체" 항체가 포함된다. 예를 들어, 이종-접합체 내의 항체들 중의 하나를 아비딘에 커플링시킬 수 있고, 다른 것은 바이오틴에 커플링시킬 수 있다. 이러한 항체는, 예를 들면, 면역계 세포를 원치않는 세포에 대해 표적화시키고 (미국 특허번호 제4,676,980호), HIV 감염을 치료하는 것으로 제안되었다 (WO 91/00360, WO 92/200373, 및 EP 03089). 이종접합체 항체는 용이한 모든 가교결합 방법을 사용하여 제조할 수 있다. 적합한 가교결합제는 당업계에 잘 공지되어 있고, 다수의 가교결합 기법과 함께 미국 특허번호 제4,676,980호에 개시되어 있다.

항체 단편으로부터 이중-특이성 항체를 생산하는 기법 또한 당업계의 문헌에 보고되었다. 예를 들어, 이중-특이성 항체는 화학적 연결을 이용하여 제조할 수 있다. 문헌 [Brennan et al, Science , 229: 81 (1985)]에는 본래의 항체를 단백질 분해적으로 절단시켜 F(ab')₂ 단편을 생산하는 방법이 기재되어 있다. 이들 단편을 디티올 착화제 나트륨 아비산염의 존재하에 환원시켜 근접한 디티올을 안정화시키고 분자간 디설파이드 형성을 막는다. 이어서, 생성된 Fab' 단편을 티오니트로벤조에이트 (TNB) 유도체로 전환시킨다. 이어서, 머캅토에틸아민으로 환원시킴으로써, Fab'-TNB 유도체들 중의 하나를 Fab'-티올로 재전환시키고, 이를 등몰량의 다 른 Fab'-TNB 유도체와 혼합하여 이중-특이성 항체를 형성시킨다. 이로써 생성된 이중-특이성 항체를, 효소를 선택적으로 고정화시키기 위한 제제로서 사용할 수 있다.

재조합 세포 배양물로부터 이중-특이성 항체 단편을 직접적으로 제조 및 단리하기 위한 다양한 기법 또한 보고되었다. 예를 들어, 루이신 지퍼를 사용하여 이중-특이성 항체를 생산하였다 (문헌 [Kostelny et al., J. Immunol ., 148 (5): 1547-1553 (1992)]). Fos 및 Jun 단백질로부터의 루이신 지퍼 펩티드를 유전자 융합에 의해 2개의 상이한 항체의 Fab' 부분에 연결시켰다. 항체 동종이량체를 힌지 부위에서 환원시켜 단량체를 형성시킨 후, 다시 산화시켜 항체 이종이량체를 형성시켰다. 이러한 방법은 항체 동종이량체의 생산을 위해 사용될 수도 있다. 문헌 [Hollinger et al., Proc . Natl . Acad . Sci . USA, 90: 6444-6448 (1993)]에 기재된 "디아바디" 기술은 이중-특이성 항체 단편을 제조하기 위한 대체 기전을 제공하였다. 이러한 단편은 동일한 쇄에서 2개의 영역 사이의 페어링이 발생하지 않을 만큼 짧은 링커에 의해 경쇄 가변 도메인 (V_L)에 연결된 중쇄 가변 도메인 (V_H)을 포함한다. 따라서, 하나의 단편의 V_H 및 V_L 영역을 또다른 단편의 상보적 V_L 및 V_H 영역과 페어링시킴으로써, 2개의 항원-결합 부위를 형성한다. 단일-쇄 Fv (sFv) 이량체를 사용함으로써 이중-특이성 항체 단편을 제조하는 또다른 전략법 또한 보고되었다 (문헌 [Gruber et al., J. Immunol, 152: 5368 (1994)]).

2 원자가 이상을 갖는 항체가 고려된다. 예를 들어, 삼중 특이적 항체를 제 조할 수 있다 (문헌 [Tutt et al. J. Immunol. 147: 60 (1991)]).

IV . 항체의 다른 변형

항체의 아미노산 서열 변형(들)이 고려된다. 예를 들면, 항체의 결합 친화성 및/또는 다른 생물학적 특성을 개선시키는 것이 바람직할 수 있다. 항체의 아미노산 서열 변이체는 적절한 뉴클레오티드 변화를 항체 핵산 내로 도입하거나, 또는 펩티드 합성에 의해 제조된다. 이러한 변형에는, 예를 들면, 항체의 아미노산 서열 내의 잔기로부터의 결실, 및/또는 잔기 내로의 삽입 및/또는 잔기의 치환이 포함된다. 모든 결실, 삽입 및 치환의 조합물을 통해 최종 작제물을 제조하게 되며, 단, 이러한 최종 작제물은 원하는 특징을 보유하고 있어야 한다. 아미노산 변화를 통해 항체의 해독 후 프로세스를 변경시킬 수 있으며, 예를 들면, 당화 부위의 수 또는 위치를 변화시킬 수 있다.

돌연변이를 위한 바람직한 위치인 항체의 특정 잔기 또는 부위를 확인하는데 유용한 방법은 문헌 [Cunningham and Wells, Science 244: 1081-1085 (1989)]에 기재된 바와 같은 "알라닌 스캐닝 돌연변이 유발"인데, 여기서는, 잔기, 또는 표적 잔기 군을 확인하고 (예로서, arg, asp, his, lys, 및 glu 등의 전하를 띤 잔기), 이를 중성 또는 음전하를 띤 아미노산 (가장 바람직하게는, 알라닌 또는 폴리알라닌)으로 대체시켜, 상기 아미노산과 항원 간의 상호 작용에 영향을 준다. 이어서, 이러한 치환에 대한 작용성의 민감도를 입증하는 아미노산 위치는 치환 부위에 추가의 또는 다른 변이체를 도입함으로써 개량시킨다. 따라서, 아미노산 서열 변이를 도입하기 위한 부위가 예정되긴 하였지만, 돌연변이 자체의 특성이 예정될 필요 는 없다. 예를 들어, 소정의 부위에서의 돌연변이의 성능을 분석하기 위해, ala 스캐닝 또는 무작위 돌연변이 유발을 표적 코돈 또는 부위에서 수행하고, 발현된 항체 변이체를 원하는 활성에 대해 선별한다.

아미노산 서열 삽입물에는 단일 또는 다중 아미노산 잔기의 서열내 삽입물 뿐만 아니라 1개 잔기부터 수 백개 잔기를 함유하는 폴리펩티드까지 길이의 아미노- 및/또는 카복실-말단 융합물이 포함된다. 말단 삽입물의 예에는 N-말단 메티오닐 잔기를 수반한 항체, 또는 세포독성 폴리펩티드와 융합된 항체가 포함된다. 항체 분자의 다른 삽입형 변이체에는 항체의 N-또는 C-말단과 효소, 또는 항체의 혈청 반감기를 증가시키는 폴리펩티드와의 융합물이 포함된다.

또다른 유형의 변이체는 아미노산 치환형 변이체이다. 이들 변이체에서는 항체 분자 내의 1개 이상의 아미노산 잔기를 상이한 잔기로 대체시킨다. 항체의 치환형 돌연변이 유발을 위한 가장 관심의 대상이 되는 부위에는 초가변 영역이 포함되지만, FR 변경물도 또한 고려된다. 보존적 치환이 "바람직한 치환"이란 표제 하에 표 1에 제시되어 있다. 이러한 치환으로 인해 생물학적 활성 상의 변화가 이루어진다면, 표 2에서 "예시 치환"로 명명되거나 아미노산 부류와 관련하여 하기에 추가로 기재되는 바와 같은 보다 실재적인 변화를 도입하고 생성물을 선별할 수 있다.

표 2

항체의 생물학적 특성 면에 있어서의 실질적인 변형은 (a) 치환 부위에서 폴리펩티드 주쇄의 구조를, 예를 들면, 시트 또는 나선 입체 형태로 유지시키는데 대한 그의 효과, (b) 표적 부위에서 분자의 전하 또는 소수성을 유지시키는데 대한 그의 효과, 또는 (c) 측쇄의 벌크를 유지시키는데 대한 그의 효과 면에서 상당히 상이한 치환을 선택함으로써 달성된다. 아미노산은 그들의 측쇄 특성 면에서의 유 사성에 따라서 분류될 수 있다 (문헌 [A. L. Lehninger, in Biochemistry, second ed., pp. 73-75, Worth Publishers, New York (1975)]):

(1) 비-극성: Ala (A), Val (V), Leu (L), Ile (I), Pro (P), Phe (F), Trp (W), Met (M)

(2) 전하를 띠지 않은 극성: Gly (G), Ser (S), Thr (T), Cys (C), Tyr (Y), Asn (N), Gln (Q)

(3) 산성: Asp (D), Glu (E)

(4) 염기성: Lys (K), Arg (R), His (H)

별법으로, 자연 발생적 잔기는 공통의 측쇄 특성에 기초하여 하기의 군들로 분류될 수 있다:

(1) 소수성: 노르류신, Met, Ala, Val, Leu, Ile;

(2) 중성 친수성: Cys, Ser, Thr, Asn, Gln;

(3) 산성: Asp, Glu;

(4) 염기성: His, Lys, Arg;

(5) 쇄 배향에 영향을 주는 잔기: Gly, Pro;

(6) 방향족: Trp, Tyr, Phe.

비-보존적 치환은 이들 부류 중의 하나의 구성원을 또다른 부류의 구성원으로 교환시키는 것을 수반할 것이다.

항체의 적당한 입체 형태를 유지하는데 관여하지 않는 시스테인 잔기는 일반적으로 세린으로 치환시켜 분자의 산화적 안정성을 개선시키고, 비정상적인 가교결 합을 방지할 수도 있다. 역으로, 시스테인 결합(들)을 항체에 가하여 그의 안정성을 개선시킬 수 있다 (특히, 항체가 Fv 단편 등의 항체 단편인 경우).

특히 바람직한 유형의 치환형 변이체는 모체 항체의 하나 이상의 초가변 영역 잔기를 치환시키는 것을 포함한다. 일반적으로, 이로써 생성된 추가의 개발을 위해 선택된 변이체(들)는, 이들을 생성시킨 모체 항체와 비교해서 개선된 생물학적 특성을 지닐 것이다. 이러한 치환형 변이체를 생성시키기 위한 편리한 방식은 파지 디스플레이를 사용하는 친화성 돌연변이 방법이다. 간략하게 언급하면, 몇 가지 초가변 영역의 부위 (예를 들어, 6 내지 7개 부위)를 돌연변이시켜 각 위치에 가능한 모든 아미노산 치환을 생성시킨다. 이로써 생성된 항체 변이체를, 각 입자 내에 패키지된 M13의 유전자 III 생성물에 대한 융합물로서 필라멘트상 파지 입자로부터 1가 방식으로 디스플레이한다. 이어서, 이와 같이 파지-디스플레이된 변이체를 본원에 기재된 바와 같은 그들의 생물학적 활성 (예: 결합 친화성)에 대해 선별한다. 변형시키기 위한 후보 초가변 영역의 부위를 확인하기 위해, 알라닌 스캐닝 돌연변이 유발을 수행하여 항원 결합성에 상당히 기여하는 초가변 영역 잔기를 확인할 수 있다. 별법으로, 또는 추가로, 항원-항체 복합체의 결정 구조를 분석하여 항체와 항원간의 접촉점을 확인하는 것이 유리할 수 있다. 이러한 접촉 잔기 및 이와 이웃하는 잔기는 본원에서 상세히 설명된 기술에 따라서 치환시키기 위한 후보이다. 이러한 변이체가 일단 생성되면, 변이체 패널을 본원에 기재된 바와 같이 선별하고, 하나 이상의 관련된 분석법에서 탁월한 특성을 지닌 항체를 추가 개발을 위해 선별할 수 있다.

항체의 또다른 유형의 아미노산 변이체는 항체의 본래의 당화 패턴을 변경시킨다. 이러한 변경에는 항체에서 발견된 하나 이상의 당질 부분을 결실시키고/시키거나, 항체에 존재하지 않는 하나 이상의 당화 부위를 첨가하는 것이 포함된다.

폴리펩티드의 당화는 전형적으로, N-연결 또는 O-연결된다. N-연결된다는 것은 당질 부분을 아스파라긴 잔기의 측쇄에 부착시킨 것을 언급한다. 트리펩티드 서열 아스파라긴-X-세린 및 아스파라긴-X-트레오닌 (여기서, X는 프롤린을 제외한 모든 아미노산이다)은 당질 부분을 아스파라긴 측쇄에 효소적으로 부착시키기 위한 인식 서열이다. 따라서, 이들 트리펩티드 서열 중의 어느 하나가 폴리펩티드에 존재하는 것이 잠재적 당화 부위를 형성한다. O-연결된 당화는 당 N-아세틸갈락토사민, 갈락토스 또는 크실로스 중의 하나를 하이드록시아미노산, 가장 통상적으로는 세린 또는 트레오닌에 부착시키는 것을 언급하지만, 5-하이드록시프롤린 또는 5-하이드록시리신을 사용할 수도 있다.

당화 부위를 항체에 부가하는 것은 상기 언급된 트리펩티드 서열 중의 하나 이상를 함유하도록 아미노산 서열을 변경시킴으로써 용이하게 수행된다(N-연결된 당화 부위의 경우에는). 이러한 변경은 또한 하나 이상의 세린 또는 트레오닌 잔기를 본래의 항체 서열에 부가하거나, 또는 이들 잔기에 의해 치환시킴으로써 이루어질 수 있다 (O-연결된 당화 부위의 경우).

항체가 Fc 영역을 포함하는 경우에는, 이에 부착된 당질을 변경시킬 수 있다. 예를 들어, 항체의 Fc 영역에 부착된 푸코스가 결여된 성숙한 당질 구조를 지닌 항체가 문헌 미국 특허 출원 제2003/0157108호 (프레스타, 엘.)에 기재되어 있 다. 또한, US 2004/0093621 (교와 하꼬 고교 가부시키가이샤(Kyowa Hakko Kogyo Co., Ltd.))을 참조할 수 있다. 항체의 Fc 영역에 부착된 당질 내에 이등분 N-아세틸글루코사민 (GlcNAc)을 갖는 항체가 WO 2003/011878 (쟝-메레(Jean-Mairet) 등) 및 미국 특허번호 제6,602,684호 (유마나(Umana) 등)에 인용되어 있다. 항체의 Fc 영역에 부착된 올리고당류 내에 하나 이상의 갈락토스 잔기를 갖는 항체가 WO 1997/30087 (파텔(Patel) 등)에 보고되었다. 그의 Fc 영역에 부착된 변경된 당질을 수반한 항체에 관해서 WO 1998/58964 (라주, S.) 및 WO 1999/22764 (라주, S.) 또한 참조할 수 있다.

항체의 아미노산 서열 변이체를 코딩하는 핵산 분자는 당업계에 공지된 각종 방법에 의해 제조한다. 이들 방법에는 천연 공급원으로부터의 분리 방법 (자연 발생적 아미노산 서열 변이체의 경우), 또는 앞서 제조된 변이체 또는 항체의 비-변이체 버전을 올리고뉴클레오티드-매개된 (또는 부위-지시된) 돌연변이 유발, PCR 돌연변이 유발 및 카세트 돌연변이 유발시킴으로써 제조하는 방법이 포함되지만, 이에 제한되지 않는다.

예로서, 항체의 항원-의존성 세포-매개된 세포독성 (ADCC) 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)을 증진시키도록 효과기 작용 측면에서 본 발명의 항체를 변형시키는 것이 바람직할 수 있다. 이는 항체의 Fc 영역에 하나 이상의 아미노산 치환을 도입함으로써 달성될 수 있다. 별법으로, 또는 추가로, 시스테인 잔기를 Fc 영역 내로 도입함으로써, 이러한 부위 내에 쇄간 디설파이드 결합을 형성시킬 수 있다. 이로써 생성된 동종-이량체성 항체는 개선된 내재화 능력 및/또는 증가된 보체-매개성 세포 사멸 및 항체-의존성 세포성 세포독성 (ADCC)을 지닐 수 있다. 문헌 [Caron et al., J. Exp Med . 176: 1191-1195 (1992)] 및 [Shopes, B. J. Immunol. 148: 2918-2922 (1992)]을 참조한다. 항종양 활성이 증진된 동종-이량체성 항체는 문헌 [Wolff et al., Cancer Research 53: 2560-2565 (1993)]에 기재된 바와 같이 이종-이관능성 가교 결합제를 사용하여 제조할 수도 있다. 별법으로, 이중 Fc 영역을 갖도록 항체를 공학적으로 처리함으로써 증진된 보체 용해성과 ADCC 능력을 지니도록 할 수 있다. 문헌 [Stevenson et al., Anti - Cancer Drug Design 3:219-230 (1989)]을 참조한다.

WO 2000/42072 (프레스타, 엘.)에는 인간 효과기 세포의 존재하에 ADCC 작용이 개선된 항체가 기재되어 있는데, 이러한 항체는 그의 Fc 영역에 아미노산 치환을 포함한다. 바람직하게는, 개선된 ADCC를 수반한 항체가 Fc 영역의 298번, 333번, 및/또는 334번 위치에 치환을 포함한다. 바람직하게는, 변경된 Fc 영역이, 이들 위치 중의 1개, 2개 또는 3개에서의 치환을 포함하거나 이로 이루어진 인간 IgG1 Fc 영역이다.

C1q 결합성 및/또는 보체 의존성 세포독성 (CDC)이 변경된 항체가 WO 1999/51642, 미국 특허번호 제6,194,551B1호, 제6,242,195B1호, 제6,528,624B1호 및 제6,538,124호 (이두소기에 등)에 기재되어 있다. 이 항체는 그의 Fc 영역의 아미노산 270번, 322번, 326번, 327번, 329번, 313번, 333번, 및/또는 334번 위치중의 하나 이상의 위치에 아미노산 치환을 포함한다.

항체의 혈청 반감기를 증가시키기 위해, 예를 들면, 미국 특허번호 제 5,739,277호에 기재된 바와 같이, 구제(salvage) 수용체 결합성 에피토프를 항체 (특히, 항체 단편) 내로 혼입시킬 수 있다. 본원에 사용된 바와 같은 용어 "구제 수용체 결합성 에피토프"는 IgG 분자의 생체내 혈청 반감기를 증가시키는데 관여하는 IgG 분자 (예: IgG₁, IgG₂, IgG₃, 또는 IgG₄)의 Fc 영역의 에피토프를 언급한다. 그의 Fc 영역에 치환을 갖고 혈청 반감기가 증가된 항체가 또한 WO 2000/42072 (프레스타, 엘.)에 기재되어 있다.

3개 이상 (바람직하게는, 4개)의 작용상의 항원-결합 부위를 갖는, 공학적으로 처리된 항체 또한 고려된다 (미국 출원번호 US 2002/0004587 A1 (밀러 등)).

V. 약제학적 제형

본 발명에 따라서 사용된 항체의 치료적 제형은, 원하는 순도를 갖는 항체를 임의의 약제학적으로 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제 (문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)])와 혼합하여, 동결건조된 제형 또는 수성 용제 형태로 저장하기 위해 제조한다. 허용가능한 담체, 부형제 또는 안정화제는 사용되는 투여량 및 농도에서 수혜자에게 비독성이고, 이에는 완충제, 예로서, 인산염, 시트레이트 및 다른 유기 산; 아스코르브산 및 메티오닌을 비롯한 항산화제; 방부제 (예로서, 옥타데실디메틸벤질 암모늄 클로라이드; 헥사메토늄 클로라이드; 벤즈알코늄 클로라이드; 벤즈에토늄 클로라이드; 페놀, 부틸 또는 벤질 알코올; 알킬 파라벤, 예로서, 메틸 또는 프로필 파라벤; 카테콜; 레소르시놀; 사이클로헥산올; 3-펜탄올; 및 m-크레졸); 저분자 (약 10개 미만의 잔 기) 폴리펩티드; 단백질, 예로서, 혈청 알부민, 젤라틴 또는 면역글로불린; 친수성 중합체, 예로서면, 폴리비닐피롤리돈; 아미노산, 예로서, 글리신, 글루타민, 아스파라긴, 히스티딘, 아르기닌 또는 리신; 단당류, 이당류 및 다른 당질, 예로서, 글루코스, 만노스, 또는 덱스트린; 킬레이트제, 예로서, EDTA; 당, 예로서, 수크로스, 만니톨, 트레할로스 또는 소르비톨; 염-형성 반대-이온, 예로서, 나트륨; 금속 착물 (예로서, Zn-단백질 착물); 및/또는 비-이온성 계면활성제, 예로서, 트윈(TWEEN)™, 플루로닉스(PLURONICS)™ 또는 PEG가 포함된다.

예시되는 항-CD20 항체 제형은 W0 98/56418에 기재되어 있다. 이러한 공개공보에는 2 내지 8℃하의 저장시 최소 2년의 저장 수명을 갖는, 40mg/ml 리툭시마브, 25mM 아세테이트, 150mM 트레할로스, 0.9％ 벤질 알코올, 0.02％ 폴리소르베이트 20 (pH 5.0)를 포함하는 액상의 다중투여용 제형이 기재되어 있다. 관심의 대상이 되는 또다른 항-CD20 제형은 9.0mg/ml 염화나트륨 중의 10mg/ml 리툭시마브, 7.35mg/ml 구연산나트륨 이수화물, 0.7mg/ml 폴리소르베이트 80, 및 주사용 멸균수 (pH 6.5)를 포함한다.

피하 투여용으로 적합화된 동결건조된 제형은 미국 특허번호 제6,267,958호 (안디아(Andya) 등)에 기재되어 있다. 이러한 동결건조된 제형은 적합한 희석제를 사용하여 고농도의 단백질로 재구성될 수 있고, 이와 같이 재구성된 제형은 본원에서 치료하고자 하는 포유동물에게 피하 투여될 수 있다.

결정형의 항체 또는 항체 또한 고려된다. 예를 들면, US 2002/0136719A1 (세노이 등)를 참조한다.

본원의 제형은 또한 치료하는 특정 징후를 위해 필요에 따라 하나 이상의 활성 화합물, 바람직하게는, 서로 부작용이 없이 상보성 활성을 갖는 것을 포함할 수 있다. 예를 들면, 상기 II의 치료 부분에서 논의된 바와 같은, 제2 약제를 추가로 제공하는 것이 바람직할 수 있다. 이러한 약물의 유형과 유효량은, 예를 들면, 제형내 존재하는 항체의 양, 치료하고자 하는 AD 또는 치매의 유형, 및 대상의 임상 파라미터에 좌우된다. 이들은 일반적으로 앞서 사용된 것과 동일한 투여량 및 투여 경로로 사용되거나 앞서 사용된 투여량의 약 1 내지 99％로 사용된다.

활성 성분을, 예를 들면, 액적형성 (coacervation) 기법 또는 계면 중합화에 의해 제조된 미소캡슐, 예를 들면, 하이드록시메틸셀룰로스 또는 젤라틴 미소캡슐 및 폴리-(메틸메타크릴레이트) 미소캡슐 각각, 콜로이드상 약물 전달 시스템 (예를 들어, 리포좀, 알부민 미소구, 마이크로에멀젼, 나노-입자 및 나노-캡슐); 또는 매크로에멀젼 내에 포획시킬 수도 있다. 이러한 기술은 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences 16th edition, Osol, A. Ed. (1980)]에 개시되어 있다.

지효성-방출 제제를 제조할 수 있다. 지효성-방출 제제의 적합한 예에는 상기 항체를 함유하는 고형 소수성 중합체의 반투과성 매트릭스가 포함되는데, 이러한 매트릭스는 성형품, 예를 들면, 필름 또는 미소캡슐 형태이다. 지효성-방출 매트릭스의 예에는 폴리에스테르, 하이드로겔 (예를 들면, 폴리(2-하이드록시에틸-메타크릴레이트) 또는 폴리(비닐알코올)), 폴리락티드 (미국 특허번호 제3,773,919호), L-글루탐산과 γ에틸-L-글루타메이트의 공중합체, 비-분해성 에틸렌-비닐 아세테이트, 분해성 락트산-글리콜산 공중합체, 예로서, 루프론 데포트(LUPRON DEPOT)™ (락트산-글리콜산 공중합체 및 루프롤라이드 아세테이트로 구성된 주사용 미소구), 및 폴리-D-(-)-3-하이드록시부티르산이 포함된다.

AD 또는 치매에서 혈액뇌장벽이 파괴될 수 있거나, 그의 투과성 또는 수송에 있어서 변경될 수 있지만, 투과성을 증가시키고/시키거나 가로지르는 치료제를 수송하는 제제 또는 방법은 본 항체와 함께 제형화될 수 있다. 예를 들면, 친유성 벡터, 예로서, 프로카르바진을 사용하여 혈액뇌장벽을 투과하고/하거나 뇌로 치료제를 운반할 수 있다. 면역리포좀, 항체-지향성 리포좀, 및 생체분자 친유성 복합체 또한 혈액뇌장벽을 가로지르는 운반체로서 사용될 수 있다. 이들은 바람직하게 지방산 예로서, 오메가-3 시리즈 또는 상기 시리즈의 지질 유도체를 포함한다. 추가로 친유성 분자는 탄소수 18-46개의 다중-불포화 탄화수소를 수반하는 것을 포함하는, 다른 지방산, 리소-인지질, 디아실 인지질, 디아실 글리세롤, 콜레스테롤, 스테로이드를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 추가로 생체중합체가 사용될 수 있다. 이들은 폴리(알파)-아미노산, 인간 혈청 알부멘 또는 인간 알부멘, 아미노덱스트란, 및 카제인에 결합하거나 연결되는 제제를 포함하지만, 이에 제한되지는 않는다. 바람직하게, 그러한 운반체는 전달 시스템으로서 사용하기 위한 적절한 생체적합성 및 약동학을 갖는다. 예를 들면, 미국 특허번호 제5,716,614호를 참조한다. 혈액뇌장벽의 투과성을 증가시킬 수 있는 제제의 또다른 일례는 트랜스페린 수용체 항체이다. 트랜스페린 수용체는 뇌의 모세관 내피 세포상에서 검출가능하다. 그러한 항체의 몇몇 예는 B3/25, OKT-9, OX-26, Tf6/14, L5.1, 5E-9, T58/30, 및 RI7 217을 포함하며, 미국 특허번호 제5,182,107호를 참조한다. 추가 로, 혈액뇌장벽은 삼투압적으로 파괴될 수 있다.

생체내 투여를 위해 사용되는 제형은 멸균성이어야 한다. 이는 멸균성 여과 막을 통해 여과됨으로써 용이하게 달성된다.

VI . 제품

본 발명의 또다른 실시태양에서, 상기 언급된 AD 또는 치매 치료에 유용한 물질을 함유하는 제품이 제공된다. 바람직하게, 제품은 (a) B 세포 표면 항원 길항제 (예로서, CD20 항체) 및 약제학적으로 허용가능한 담체 또는 희석제를 포함하는 조성물을 내부에 포함하는 용기; 및 (b) AD 또는 치매를 앓는 대상에게 조성물을 투여하는 것에 관한 설명서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함한다.

이러한 제품은 용기와, 이러한 용기상의 라벨 또는 패키지 삽입물 또는 이러한 용기와 연합되어 있는 라벨 또는 패키지 삽입물을 포함한다. 적합한 용기에는, 예를 들면, 병, 바이알, 주사기 등을 포함한다. 이러한 용기는 유리 또는 플라스틱과 같은 다양한 재료로부터 형성될 수 있다. 상기 용기는 AD 또는 치매를 치료하는데 효과적인 조성물을 보유하거나 함유하며, 멸균성 유입 포트를 가질 수 있다 (예를 들어, 상기 용기는 피하 주사 바늘에 의해 뚫을 수 있는 마개를 갖는 정맥내 용제 봉지 또는 바이알일 수 있다). 이러한 조성물중 1개 이상의 활성제는 항체이다. 라벨 또는 패키지 삽입물은 항체 및 제공되는 다른 약물의 투여량과 투여 간격에 관한 구체적인 지침과 함께, 본 조성물이 AD 또는 치매를 앓는 대상에서 AD 또는 치매를 치료하기 위하여 사용된다는 것을 나타낸다. 본 제품은 약제학적으로 허용가능한 희석 완충제, 예를 들면, 제균성 주사용 수 (BWFI), 인산염 완충 식염 수, 링거액 및/또는 덱스트로스 용액을 포함하는 부가의 용기를 추가로 포함할 수 있다. 본 제품은 상업적 및 사용자 측면에서 바람직한 다른 물질, 예를 들면, 다른 완충제, 희석제, 충진제, 바늘 및 주사기를 추가로 포함할 수 있다.

임의로, 본원의 제품은 치료용 항체 이외의 제제를 내부에 담고 있고, 상기 제제, 일례로 상기 II의 치료 부분에서 논의된 바 있는 제2 약제로 포유동물을 치료하는 것에 관한 설명서를 추가로 포함하는 제2 용기를 추가로 포함한다.

본 발명의 상세한 설명은 하기 비제한적 실시예에 의해 설명된다. 명세서에서 인용된 모든 문헌의 개시 내용은 본원에서 참고 문헌으로서 인용된다.

실시예 1

경증 내지 중간 정도의 알츠하이머병 치료

본 실시예에서는 경증 내지 중간 정도의 AD를 앓는 대상을 CD20 항체로 치료한다.

NDSTCDS/ADRDA 기준 (문헌 [McKhann et al. "Clinical diagnosis of Alzheimer's disease: report of the NINCDS-ADRDA Work Group under the auspices of Department of Health and Human Services Task Force on Alzheimer's disease." Neurology 34, 939-944 (1984)])에 의해 측정된 바, 알츠하이머병을 앓는 50-80세의 남성 또는 여성의 대상들을 본원에서 치료할 것이다. 상기 대상은 간이정신상태 검사 (MMSE)를 사용하여 측정된 바, 경증 내지 중간 정도의 AD를 앓고 있을 것이며, 예를 들면, MMSE 점수는 16점 내지 24점 범위일 수 있다. 대상 은 바람직하게 CD20 항체를 사용하는 요법을 받기 이전 3개월동안 AD용의 표준 의료용 약제 (즉, 아세틸콜린에스테라제 저해제)를 사용하고 있었다. 더욱이, 대상은 신경심리학적 검사을 받을 수 있을 만큼의 충분한 시력과 청력을 가질 것이다.

제넨테크로부터 상업적으로 구입가능한 리툭시마브를 9.0mg/ml 염화나트륨, 0.7mg/ml 폴리소르베이트 80, 7.35mg/ml 구연산나트륨 이수화물, 및 주사용 멸균수 (pH 6.5)중에서 IV 투여용 멸균 제품으로서 제조한다. 별법으로, 본래 인간화된 2H7.v16 또는 본래 인간화된 2H7.v511을 포함하는 제형을 투여할 것이다.

1차 치료 과정은 1일째 및 15일째 각각 1g의 투여량으로 CD20 항체를 정맥 (IV) 투여하는 것으로 구성될 것이다. 대상은 각각을 주입하기 30-60분 전에 경구를 통해 아세트아미노펜 (1g)과 디펜히드라민 HCl (50mg)을 투여받을 것이다.

후속 치료 과정에서는 24주 (169일), 48주 (337일), 및 72주 (505일)째를 출발로 하여 투여받을 것이다. 1차 주입 후 14±1일째 후속 치료 과정에서의 2차 주입이 이루어질 것이다.

본원에 기술된 바와 같이 CD20 항체를 투여함으로써 인지 작용은 유지되고, 질병은 느리게 진행되고, 질병과 관련된 행동상의 문제는 관리되고, 일상 생활 능력은 느리게 상실되고/되거나 재순환 CD20 양성 B-세포는 감소하게 될 것이다. 예를 들면, CD20 항체를 투여함으로써 MMSE 점수는 동일하게 유지되거나, 4점 미만으로 감소될 수 있다 (비처리군의 경증 내지 중간 정도의 AD에서 MMSE 점수는 매년 2-4점씩 떨어질 것으로 예측된다). 이러한 개선된 결과는 표준 의료용 약제만을 사용하여 달성된 것보다 더욱 우수할 것이다.

실시예 2

중간 정도 내지 중증의 알츠하이머병의 치료

본 실시예는 CD20 항체를 사용하는 중간 정도 내지 중증의 AD에 대한 요법을 설명한다. 중간 정도 내지 중증의 AD를 앓는 50세를 초과하는 남성 또는 여성의 대상들을 본 실시예에서 치료한다. 상기 대상은 NPI의 불안/공격 영역에서 4점 이상의 점수를 갖는 중간 정도 내지 중증의 AD를 앓고 있다. 대상은 적어도 3개월동안 고정적으로 메만틴을 투여받고 있다.

제넨테크로부터 상업적으로 구입가능한 리툭시마브를 9.0mg/ml 염화나트륨, 0.7mg/ml 폴리소르베이트 80, 7.35mg/ml 구연산나트륨 이수화물, 및 주사용 멸균수 (pH 6.5)중에서 IV 투여용 멸균 제품으로서 제조한다. 별법으로, 본래 인간화된 2H7.v16 또는 본래 인간화된 2H7.v511을 포함하는 제형을 투여할 것이다.

1차 치료 과정은 1일째 및 15일째 각각 1g의 투여량으로 CD20 항체를 정맥 (IV) 투여하는 것으로 구성될 것이다. 대상은 각각을 주입하기 30-60분 전에 경구를 통해 아세트아미노펜 (1g)과 디펜히드라민 HCl (50mg)을 투여받을 것이다.

후속 치료 과정에서는 24주 (169일), 48주 (337일), 및 72주 (505일)째를 출발로 하여 투여받을 것이다. 1차 주입 후 14±1일째 후속 치료 과정에서의 2차 주입이 이루어질 것이다.

대상의 기능 용량을 측정하기 위하여 사용되는 일련의 종합적인 ADL 질문들을 포함하는 일상 생활 능력 (ADL) 목록을 사용하여 그날그날의 기능을 평가할 수 있다. 각 ADL 항목은 최고 수준의 독립 수행부터 완전 상실까지로 등급화되어 있 다. 전문 임상의는 대상의 행동에 대하여 잘 알고 있는 의료인과 인터뷰함으로써 목록을 작성한다.

중간 정도 내지 중증의 치매를 앓는 환자의 인지 기능 평가에 대하여 인증받은 다-항목 기구를 사용하여 인지 수행을 평가할 수 있다. 예를 들면, 상기 기구는 집중력, 지남력, 언어, 기억, 시각공간능, 구성 행위, 행동, 및 사회적 상호작용의 요소들을 비롯한, 인지 수행의 선택된 측면을 검사할 수 있다. 예를 들면, 중증 장애 배터리(Severe Impairment Battery)(SIB)를 사용할 수 있으며, 이는 점수 범위가 0부터 100이고, 점수가 낮을수록 인지 장애 정도는 더욱 크다.

본원에 기술된 바와 같이 CD20 항체를 투여함으로써 인지 작용은 유지되고, 질병은 느리게 진행되고, 질병과 관련된 행동상의 문제는 관리되고, 일상 생활 능력은 느리게 상실되고/되거나 재순환 CD20 양성 B-세포는 감소하게 될 것이다. CD20 항체를 투여함으로써 위약을 사용하여 달성된 것보다 더욱 우수한 ADL 점수를 얻거나, CD20 항체를 메만틴과 병용한 경우에도 메만틴만을 사용하여 달성된 것보다 더욱 우수한 ADL 점수를 얻을 것이다.

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Arg Gly Arg Val Gly Tyr Ser Leu 95 100 105 Tyr Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser 110 115 <210> 10 <211> 10 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 10 Gly Tyr Thr Phe Thr Ser Tyr Asn Met His 5 10 <210> 11 <211> 17 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 11 Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 1 5 10 15 Lys Gly <210> 12 <211> 13 <212> PRT <213> Mus musculus <400> 12 Val Val Tyr Tyr Ser Asn Ser Tyr Trp Tyr Phe Asp Val 5 10 <210> 13 <211> 213 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> sequence is synthesized <400> 13 Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Leu Ser Ala Ser Val 1 5 10 15 Gly Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser 20 25 30 Tyr Met His Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Pro 35 40 45 Leu Ile Tyr Ala Pro Ser Asn Leu Ala Ser Gly Val Pro Ser Arg 50 55 60 Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser 65 70 75 Ser Leu Gln Pro Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Trp 80 85 90 Ser Phe Asn Pro Pro Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile 95 100 105 Lys Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser 110 115 120 Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu 125 130 135 Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp 140 145 150 Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln 155 160 165 Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu 170 175 180 Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val 185 190 195 Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg 200 205 210 Gly Glu Cys <210> 14 <211> 452 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> sequence is synthesized <400> 14 Glu Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Leu Val Gln Pro Gly 1 5 10 15 Gly Ser Leu Arg Leu Ser Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr 20 25 30 Ser Tyr Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu 35 40 45 Glu Trp Val Gly Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Asp Thr Ser Tyr 50 55 60 Asn Gln Lys Phe Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Val Asp Lys Ser 65 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sequence is synthesized <220> <221> Xaa <222> 9 <223> Xaa is M or L <400> 21 Arg Ala Ser Ser Ser Val Ser Tyr Xaa His 5 10 <210> 22 <211> 9 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> sequence is synthesized <220> <221> Xaa <222> 4 <223> Xaa is S or A <400> 22 Gln Gln Trp Xaa Phe Asn Pro Pro Thr 5 <210> 23 <211> 17 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> sequence is synthesized <220> <221> Xaa <222> 8 <223> Xaa is D or A <400> 23 Ala Ile Tyr Pro Gly Asn Gly Xaa Thr Ser Tyr Asn Gln Lys Phe 1 5 10 15 Lys Gly <210> 24 <211> 13 <212> PRT <213> Artificial sequence <220> <223> sequence is synthesized <220> <221> Xaa <222> 6 <223> Xaa is N, A, Y, W or D <220> <221> Xaa <222> 7 <223> Xaa is S or R <400> 24 Val Val Tyr Tyr Ser Xaa Xaa Tyr Trp Tyr Phe Asp Val 5 10

Claims (31)

1. 알츠하이머병을 치료하는데 유효한 양으로 네이키드(naked) CD20 항체를 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 대상에서 알츠하이머병을 치료하는 방법.
2. 제1항에 있어서, 대상이 B-세포 악성 종양을 앓고 있지 않은 방법.
3. 제1항 또는 제2항에 있어서, 대상이 알츠하이머병 이외의 자가면역 질병을 앓고 있지 않은 방법.
4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 대상이 경증(mild) 내지 중간 정도의 알츠하이머병을 앓는 방법.
5. 제4항에 있어서, 콜린에스테라제 저해제를 대상에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
6. 제5항에 있어서, 콜린에스테라제 저해제가 갈란타민, 리바스티그민 및 도네페질로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
7. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, 대상이 중간 정도 내지 중증의 알츠하이머병을 앓는 방법.
8. 제7항에 있어서, N-메틸 D-아스파테이트 (NMDA) 길항제를 대상에게 투여하는 것을 추가로 포함하는 방법.
9. 제8항에 있어서, NMDA 길항제가 메만틴인 방법.
10. 제1항 내지 제9항 중 어느 한 항에 있어서, 대상이 비정형(atypical) 자가항체 수준을 갖는 방법.
11. 제10항에 있어서, 자가항체가 베타-아밀로이드, 카디오리핀, 튜불린, 신경교섬유산단백질, 신경세사 단백질 (NFL), 강글리오시드, 세포골격 단백질, 수초 염기성 단백질 (MBP), 세로토닌, 도파민, 신경 성장 인자 (NGF), 프리세닐린, 아밀로이드 베타-펩티드 (Abeta), 진행성 당화 최종 산물에 대한 수용체 (RAGE)에 대한 항체; 또는 뇌 반응성 항체 (BRA)인 방법.
12. 제1항 내지 제11항 중 어느 한 항에 있어서, 알츠하이머병을 치료하는데 유효한 양으로 제2 약제를 대상에게 투여하는 것을 추가로 포함하며, CD20 항체는 제1 약제인 방법.
13. 제12항에 있어서, 제2 약제가 콜린에스테라제 저해제, 갈란타민, 리바스티그민, 리바스티그민 경피용 패취제, 도네페질, 타크린, N-메틸 D-아스파테이트 (NMDA) 길항제, 메만틴, 네라멕산, NGF의 아데노-관련 바이러스 전달, CERE-110, 베타-차단제, 항정신병제, 아세틸콜린 전구체, 니코틴성 또는 무스카린성 효현제(agonist), 항-베타-아밀로이드 항체, 항-NGF 항체, RA624, 백신, 인간 아밀로이드 백신, 아밀로이드 형성에 관여하는 베타 또는 감마 세크레타제의 활성을 차단하는 제제, 항-아밀로이드 요법, 세로토닌, 노르에피네프린, 소마토스타틴, APP의 아밀로이드-베타로의 전환 또는 노인성 반점 및 신경원섬유매듭의 형성을 방해하는 제제, 베타-부위의 아밀로이드-전구체-단백질 분해 효소 길항제, 베타-세크레타제 (BACE) 길항제, BASE1 길항제, BASE2 길항제, 감마-세크레타제 길항제, 프리세닐린-1 (PSEN-1) 길항제, 프리세닐린-2 (PSEN-2) 길항제, APO-E4 길항제, 항우울제, 항경련제, 세로토닌 재흡수 저해제, 설트랄린, 트라조돈, 디발프로엑스, 가바펜틴, 리스페리돈, 올란자핀, 쿠에티아핀, 티오리다진, 콜레스테롤 강하 약물 또는 스타틴, HMG-CoA 리덕타제, 심바스타틴, 면역조절제, 항산화제, 비타민 E, 어유, 알파 리포산, 카로틴, 니코틴, 은행 추출물, 셀레길린, 에르골로이드 메실레이트, 에스트로겐, 항염증제, 비-스테로이드계 항염증성 약물 (NSAID), 아스피린, 이부프로펜, cox-2 저해제, 로페콕시브, 나프록센, 셀레콕시브, 나프록센, 은행잎(ginkgo biloba), PPI-1019, 후퍼진 A, 비타민, 폴산염, B6, B12, 비타민 C, 비타민 E, 셀레늄, GABA(B) 수용체 길항제, SGS742, NC-758, C-1073, FK962, 커큐민, ONO-2506PO, 라사길린 메실레이트, 발프로에이트, SR57746A, NS 2330, MPC-7869, 인터 페론, 인터페론 알파, 단백질분해 베타 아밀로이드 경쇄 항체 단편, 세포 독성제, 화학요법제, 면역억제제, TNF-알파 저해제, 질환-개질 항-류마티스 약물 (DMARD), 인테그린 길항제 또는 항체, 코르티코스테로이드, 및 퓨린 하이포크산틴 유도체로 구성된 군으로부터 선택되는 방법.
14. 제1항 내지 제13항 중 어느 한 항에 있어서, 대상이 기존에 CD20 항체로 치료받은 적이 없는 방법.
15. 제1항 내지 제14항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 키메라, 인간 또는 인간화된 항체인 방법.
16. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 리툭시마브를 포함하는 방법.
17. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 인간화된 2H7을 포함하는 방법.
18. 제1항 내지 제15항 중 어느 한 항에 있어서, 항체가 2F2 (huMax-CD20)를 포함하는 방법.
19. 제1항 내지 제18항 중 어느 한 항에 있어서, 항체를 정맥내, 피하 또는 수막강내 투여하는 방법.
20. 제19항에 있어서, 항체를 정맥내 투여하는 방법.
21. 제20항에 있어서, 약 1개월의 기간 이내에 약 1회 내지 4회의 투여 횟수로 약 200mg 내지 2000mg 범위의 용량으로서 항체를 투여하는 것을 포함하는 방법.
22. 제21항에 있어서, 용량이 약 500mg 내지 1500mg 범위인 방법.
23. 제22항에 있어서, 용량이 약 750mg 내지 1200mg 범위인 방법.
24. 제20항 내지 제23항 중 어느 한 항에 있어서, 항체를 1회분 또는 2회분의 용량으로 투여하는 방법.
25. 제24항에 있어서, 1회분 또는 2회분의 용량이 약 2주 내지 3주의 기간 이내에 투여되는 방법.
26. 제1항에 있어서, CD20 항체가 알츠하이머병을 치료하기 위해 대상에게 투여되는 유일한 약제인 방법.
27. 제1항에 있어서, AD를 치료하기 위해 CD20 항체, 및 콜린에스테라제 저해제 및 N-메틸 D-아스파테이트 (NMDA) 길항제로 구성된 군으로부터 선택되는 제2 약제를 대상에게 투여하는 것으로 본질적으로 구성된 방법.
28. 치매를 치료하는데 유효한 양으로 네이키드 CD20 항체를 대상에게 투여하는 것을 포함하는, 대상에서 치매를 치료하는 방법.
29. (a) 네이키드 CD20 항체를 내부에 포함하는 용기, 및

    (b) 대상에서 알츠하이머병 또는 치매를 치료하는 것에 관한 설명서를 포함하는 패키지 삽입물을 포함하는 제품.
30. 제29항에 있어서, 제2 약제를 내부에 포함하는 또다른 용기를 더 포함하고 제2 약제로 대상을 치료하는 것에 관한 설명서를 패키지 삽입물상에 추가로 포함하며, CD20 항체가 제1 약제인 제품.
31. 제30항에 있어서, 제2 약제가 콜린에스테라제 저해제 또는 N-메틸 D-아스파테이트 (NMDA) 길항제인 제품.

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