KR20070102484A - 과일 과수원의 코들링 나방을 억제하기 위한 작용제 - Google Patents

과일 과수원의 코들링 나방을 억제하기 위한 작용제 Download PDF

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에팔 케미스트리 인더스트리즈 리미티드
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Abstract

본 발명은 식물 조직 추출물에 대한 글루코시다제의 작용에 의해 이의 비휘발성 글리코사이드로부터 방출되는 휘발성 곤충 퇴치제 및/또는 유인제의 식별 방법을 제공한다. 상기 방법에 의해, 게라니올이 코들링 나방 퇴치제로서 식별되었고, 메틸 살리실레이트, (2R,5R)-테아스피란, 및 (2S,5R)-테아스피란, 및 약한 정도로 리날룰 및 벤질 알콜이 코들링 나방 유인제로서 식별되었다. 본 발명은 상기 퇴치제 및 유인제를 포함하는 조성물, 및 과일, 바람직하게는 사과 과수원에서 코들링 나방을 억제하는 방법을 제공한다.

Description

과일 과수원의 코들링 나방을 억제하기 위한 작용제{AGENTS FOR CONTROL OF CODLING MOTH IN FRUIT ORCHARDS}
본 발명은 곤충 퇴치제 및 유인제의 식별 방법 및 과일 과수원에서 코들링 나방(codling moth)의 완전 억제를 위한 특정 곤충 퇴치제 및 유인제의 용도에 관한 것이다.
코들링 나방 유충은 매우 해로운 해충이다. 코들링 나방 성충은 날개 폭이 1/2 ∼ 3/4 인치로 작으며, 약 집파리의 크기이다. 이들의 회색 얼룩 무늬 외관은 나무껍질과 섞여서 이를 발견하기가 어렵다. 성충을 포획하는 경우, 코들링 나방은 이들의 암갈색 날개 끝이 빛나는 구릿빛 점을 갖는 것에 의해 과일 나무에 붙어 있는 다른 나방과 구별할 수 있다. 알은 하나씩 과일, 나무 열매 또는 근처 잎에 낳는다. 배에서, 알을 잎 송이의 바닥에도 낳을 수 있다. 사과 및 배에서, 유충은 과일을 투과하여 과심까지 뚫고 들어가 과일에 갈색의 구멍을 남기며, 이는 배설물(유충 배설물)로 가득찬다. 자두, 및 때때로 기타 핵과에서, 코들링 나방은 과일의 씨에까지 뚫고 들어간다.
코들링 나방(CM) 시디아 포모넬라 (L.)(Cydia pomonella (L.))는 전세계적인 사과 경작에 경제적으로 가장 중요한 곤충이다. 이는 사과 뿐만 아니라 일부 다른 식물과 생태적으로 밀접하게 연관되어 있다 (Shel'deshova, 1967). Bengtsson 등은 풍동(wind tunnel)에서 녹색 과일의 유무 하에 사과 가지에 대한 코들링 나방 성충의 거동적 반응을 관측하였고, 사과의 녹색 과일 및 잎 모두가 단독으로 암컷 코들링 나방을 유인한다는 것을 발견하였다 (Bengtsson 등, 2001). 상기 연합은 대부분 숙주 식물에서 방출되는 일부 휘발성 유인제에 의해 매개된다는 것이 공지되어 있다 (Bengtsson 등, 2001 ; Sutherland and Hutchins, 1972; Yan 등, 1999; Knight and Light, 2001; Light 등, 2001). (E,E)-α-파네센(farnesene) (Sutherland and Hutchins, 1972; Wearing and Hutchins, 1973), 리날룰(linalool), 및 β-카리오필렌(caryophyllene) (Bengtsson 등, 2001)이 코들링 나방 성충 또는 신생 유충에 대한 유인제로서 식별되었다 (Knight and Light, 2001 ; Light 등, 2001). 그러나, 이들 화합물 중 일부는 다양한 비-숙주 식물의 휘발물 프로파일에도 존재한다. 따라서, 숙주 식물의 휘발성 조성물을 변경하는 것은 이들과 코들링 나방 곤충의 연합을 변화시킬 수 있다고 가정하는 것이 논리에 맞을 것이다.
다수의 식물이 상당량의 글리코사이드 결합된 휘발물을 함유한다는 것이 잘 공지되어 있다. 보통, 식물 잎은 아글리콘의 변이성이 가장 크고, 이어서 꽃, 줄기 및 뿌리 순이다 (Stahl-Biskup 등, 1993). 사과 잎 및 과일 중 일부 글리코사이드 결합된 휘발성 화합물이 단리되고 확인되었다 (Schwab and Schreier, 1988; Stingl 등, 2002). 또한, β-글루코시다제의 외인성 사용에 의한 과일 주스 및 와인의 성공적 아로마 증진이 입증되었다 (Belancic 등, 2003; Shoseyov 등, 1990; Yanai and Sato, 1999).
코들링 나방은, 특히 이 집단이 한 계절 또는 두 계절에 걸쳐 늘어나도록 허용한 경우 처리하기가 매우 어려울 수 있다. 집단이 크고 많이 창궐된 나무가 근처에 있는 경우, 집단을 매우 작은 수준으로 감소시키기 위하여 살충제 도포가 필요할 것이다. 그러나, 살충제는 시기를 정확하게 맞추기가 매우 어렵고, 이용가능한 유일한 매우 효과적인 물질은 천적 및 꿀벌에게 독성이 있다. 따라서, 비화학적 방법이 바람직하다. 영리적 과수원에서 코들링 나방을 억제하는 것은 비화학적 수단, 예컨대 나무 및 과일의 정기 검사(스카우팅(scouting)이라 불림), 페로몬 트래핑(trapping), 및 기후 모니터링 및 온일도 모델의 사용에 의존할 수 있다. 과일 과수원에서 코들링 나방에 대하여 유용한 천연 무독성 화합물을 발견하는 것이 매우 바람직할 것이다.
다수의 방향유, 예컨대 장미 오일, 팔마로사, 시트로넬라, 레몬 그라스 등의 오일 중 발견되는 올레핀계 테르펜 알콜인 게라니올(geraniol)은 [The Merck Index (13th Edition, 2001, #4415)]에서 곤충 유인제로서 기재되어 있다. 그러나, 몇몇 문헌은 게라니올을 휘발성 곤충 퇴치제로서 기재한다.
US 4,774,081은 바퀴벌레 및 기타 해충류에 대한 접촉 곤충 퇴치제의 예로서 게라니올을 개시한다. [Chem.Abstracts, Vol. 105:204742q]은 월계수 (라우루스 노빌리스 L., Laurus nobilis L.)의 잎으로부터의 화합물이 트리볼리움 카스타 네움 (Tribolium castaneum, Herbst)에 유용한 퇴치제이며, 이들 화합물은 특히 50 ppm으로 존재하는 경우 게라니올을 포함한다. [Chem. Abstracts, Vol. 113:110945w (abstract of JP 02/67202)]은 특히 다공성 무기 마이크로캡슐로 도입하는 경우 리날룰, 게라니올, 시트로넬롤(citronellol) 및 네롤(nerol)이 바퀴벌레, 민달팽이, 개미 등을 퇴치한다는 점을 개시하였다.
US 5,227,406, US 5,346,922, US 5,648,398 및 US 5,621,013는 라임병을 옮기는 진드기 뿐만 아니라 무는 파리 및 트리아톰(triatome)(샤가스 곤충)을 퇴치하기 위한 인간 및 동물에 대한 곤충 퇴치제를 개시하며, 상기 퇴치제는 운반 매질 중 제공되는 활성제로서 테르피네올; 시트로넬라; 및 여분의 로디놀 및 게라니올 중 하나 또는 모두를 포함한다. 활성제는 소량, 예를 들어 0.01%, 바람직하게는 0.05 ∼ 0.08%, 및 바람직하게는 1% 미만으로 사용되나, 그래도 이는 특히 라임병을 옮기는 진드기에 대해 상승적으로 유효하다.
US 5,633,236은 본질적으로 50 ∼ 100%의 게라니올 또는 게라니올 전구체 (예를 들어, 게라닐옥시-1,3,2-디옥사보리난, 디게라닐옥시디메틸실란 및 게라닐 글리코사이드, 예를 들어 게라닐 6-O-(알파-L-람노피라노실)-베타-D-글루코피라노사이드)로 이루어지고, 조성물의 나머지(조성물이 100% 게라니올이 아닌 경우)는 시트로넬롤 및 네롤로 이루어진 군 중에서 선택되는 화합물인, 게라니올 또는 게라니올 전구체 함유 조성물의 효과적인 퇴치 농도 및 양에 3차원 공간을 한정된 시간 동안 노출시키는 단계로 본질적으로 이루어진, 무스카 도메스티카 L.(Musca domestica L.)(디프테리아:집파리과), 애데스 애집티(Aedes aegypti), 쿨렉스 니그리팔푸스(Culex nigripalpus), 애데스 아틀란티구스(Aedes atlanticus), 쿨렉스 살 리나리우스(Culex salinarius), 애데스 벡산스(Aedes vexans), 쿨렉스 종(Culex spp.), 시물리움 종(Simulium spp.), 프소로페리아 페록스(Psoroferia ferox), 애데스 인퍼마투스(Aedes infirmatus), 드로소필라 멜라노가스터(Drosophila melanogaster), 코시넬리대(Coccinellidae), 아노펠레스 크루시안스(Anopheles crucians), 프소로페리아 콜룸비애(Psoroferia columbiae), 쿨리코이데스 종(Culicoides spp.), 및 애데스 종(Aedes spp.)의 퇴치 방법을 기재한다. 상기 기재된 퇴치제는 그 제체로서 유용하거나 또는 폴리(엡실론 카프로락톤) 단일중합체를 주성분으로 함유하는 조성물과 같은 생분해성 중합체일 수 있는 중합체로 함유되는 것으로 기재된다. US 5,401,500, US 6,143,288, US 5,635,173 및 US 5,665,781은 본질적으로 50 ∼ 100%의 게라니올로 이루어지고, 조성물의 나머지는 시트로넬롤 및 네롤로 이루어진 군 중에서 선택되는 화합물인 게라니올 함유 조성물에 노출시키는 것을 포함하는 무스카 도메스티카 L.(디프테리아:집파리과) 및/또는 애데스 애집태(Aedes aegyptae)의 퇴치 방법을 기재한다.
US 5,753,686은 (i) 0 ∼ 약 20 중량%의 네롤; (ii) 약 20 ∼ 약 40 중량%의 시트로넬롤; 및 (iii) 약 50 ∼ 약 70 중량%의 게라니올을 포함하는 게라니올 함유 혼합물 (상기 게라니올 함유 혼합물은 도면에 제시된 구체적 GLC 프로파일 및 상기 특허의 명세서에 제시된 굴절률 및 밀도에 따라 정의됨)의 "붉은 불개미" 및/또는 감침파리의 퇴치량 및 농도를 하나 이상의 곤충 종이 서식하는 표면 또는 부피에 도포하는 단계를 포함하는, 상기 표면 또는 부피로부터 (i) 해마토비아 이리탄스(Haematobia irritans) (린네) (일반적으로 감침파리로서 공지됨); 및 (ii) 솔레 놉시스 인빅타 부렌(Solenopsis invicta Buren) (일반적으로 "붉은 불개미"로서 공지됨) 중 하나 이상의 곤충 종을 퇴치하는 방법을 기재한다.
게라니올을 함유하는 제품은 곤충 퇴치제로서 사용하기 위한, 밴드, 종이 수건 및 펌프식 분무 용기의 형태로 시판된다. 액체를 의류 또는 피부에 직접 분무함으로써, 게라니올 증기는 흡혈 곤충이 무는 것을 저지하는 보호 장벽을 형성한다. 상기 제품은 모기, 벼룩, 진드기, 흑색 날벌레, 각다귀, 털진드기, 무는 벌레, 및 다수에 유효한 것으로 증명되었다.
본 발명자가 아는 한, 게라니올은 코들링 나방에 대한 퇴치제로서 문헌에 기재되지 않았다.
발명의 요약
하나의 측면에서, 본 발명은 식물 조직 추출물에 대한 β-글루코시다제의 작용에 의해 이의 비휘발성 글리코사이드로부터 방출되는 휘발성 곤충 퇴치제 및/또는 유인제의 식별 방법에 관한 것이다.
상기 방법을 사과 잎 추출물에 적용함으로써, 게라니올은 코들링 나방 퇴치제로서 식별되었고, 메틸 살리실레이트, (2R,5R)- 및 (2S,5R)-아스피란 이성질체, 리날룰 및 벤질 알콜은 코들링 나방 유인제로서 식별되었다.
따라서, 또다른 측면에서, 본 발명은 코들링 나방 퇴치제로서 사용하기 위한 게라니올을 포함하는 조성물, 및 상기 게라니올 퇴치제 조성물로 과수원을 처리함으로써 과일 과수원의 코들링 나방을 퇴치하는 방법에 관한 것이다.
또다른 측면에서, 본 발명은 메틸 살리실레이트, 테아스피란(theaspirane) 이성질체, 리날룰, 벤질 알콜, 또는 이의 조합물을 포함하는 조성물, 코들링 나방 유인제로서의 용도, 및 상기 유인제 조성물로 과수원을 처리함으로써 과일 과수원의 코들링 나방을 유인하는 방법에 관한 것이다.
또다른 측면에서, 본 발명은 과수원을 상기 게라니올 퇴치제 및 유인제 조성물로 처리함으로써 과일 과수원의 코들링 나방을 완전히 억제하는 방법에 관한 것이다.
도 1은 재조합 β-글루코시다제 (BGL1) 및 글루코이미다졸 (β-글루코시다제 억제제)로 처리된 사과 잎 추출물의 유인을 나타낸다. 잎 BGL1 - β-글루코시다제로 처리된 잎 추출물로 트래핑함; 잎 억제제 - 글루코이미다졸로 처리된 잎 추출물로 트래핑함; 잎 - 잎 추출물로 트래핑함; 물 - 물로 트래핑함. 동일한 소문자 및 대문자는 상이한 트랩 및 트랩 주위 각각에서 포획된 곤충의 수에 있어서 유의한 차이가 없음(p = 0.05, 여러회의 터키(turkey) 시험)을 나타낸다.
도 2a-2b는 외부 β-글루코시다제가 첨가된 사과(cv. Anna) 잎 추출물로부터 방출된 화합물의 증가된 수준을 나타낸다. (2a) β-글루코시다제 (BGL1), 글루코이미다졸 (억제제)을 첨가하거나 아무것도 첨가하지 않은 사과 잎 추출물의 GC 크로마토그래프. 피크 1, 벤질 알콜; 2, 리날룰; 3, 메틸 살리실레이트; 4, 게라니올; 5, (2R,5R)-테아스피란; 6, (2S,5R)-테아스피란. (2b) β-글루코시다제 BGL1을 갖는 잎 추출물 중 화합물의 증가된 수준. 동일한 문자는 다양한 트랩에 포획된 곤충의 수에 있어서 유의한 차이가 없음 (p = 0.05, 여러회의 터키 시 험)을 나타낸다.
도 3은 β-글루코시다제-증강된 화합물이 코들링 나방 곤충에 미치는 유인/퇴치 효과를 나타낸다. 트래핑 시험을 짝지어진 트랩 및 60마리의 성충 곤충이 있는 스크린 우리 중에서 수행하였다. 트랩에 포획된 곤충의 수를 기록하고 t-시험에 의해 분석하였다(p < 0.05). +G, 39.4 ng/㎖의 농도의 게라니올을 첨가; 혼합됨, 잎 추출물 중 검지된 농도의 모든 유인물의 혼합물.
하나의 측면에서, 본 발명은 하기 단계를 포함하여 이에 따라 각 시험된 곤충의 퇴치제 또는 유인제인 휘발물을 식별하는, 식물 조직 추출물에 대한 β-글루코시다제의 작용에 의해 비휘발성 글리코사이드로부터 방출되는 휘발성 곤충 퇴치제 및/또는 유인제를 식별하는 방법에 관한 것이다:
(i) 식물 조직을 균질화하고, 상기 식물 조직 균질액에 추출 완충제 작용을 실시하는 단계;
(ii) 상기 식물 추출물을 β-글루코시다제 또는 β-글루코시다제 억제제로 처리하는 단계;
(iii) β-글루코시다제 억제제로 처리된 추출물과 비교시 β-글루코시다제로 처리된 추출물 중 그 수준이 상승된, 단계 (ii)에서 방출된 특정 휘발물을 GC-MS에 의해 식별하는 단계; 및
(iv) 단계 (iii)에서 식별된 각 휘발물이 곤충의 거동에 미치는 영향을 시험하는 단계.
본 출원에서, 피키아 파스토리스(Pichia pastoris)에서 생성된 재조합 아스퍼질러스 나이거(Aspergillus niger) β-글루코시다제 (이후 BGL1)를 사용하여 사과(Malus domestica, cv. Anna)의 잎에 존재하는 휘발물의 글리코사이드를 가수분해하였다.
그 수준이 글루코이미다졸로 처리된 잎 추출물과 비교시 BGL1으로 처리된 잎 추출물에서 더 높은 효소적으로 방출된 휘발성 화합물이 코들링 나방 성충의 거동에 미치는 효과를 평가하였다.
본 발명에 따라, 사과 잎 추출물(cv. Anna)로부터 방출되는 글리코사이드 결합된 휘발물을 SPME-GC-MS에 의해 분석하고, 이들이 코들링 나방(CM) 성충에 미치는 거동 효과를 우리(cage) 생검으로 평가하였다. 1-옥타놀, 리날룰, 게라니올, 벤질 알콜, 메틸 살리실레이트, (2R,5R)-테아스피란 및 (2S,5R)-테아스피란의 수준은 글루코이미다졸을 함유하는 추출물과 비교시 아스퍼질러스 나이거 β-글루코시다제 (BGL1)를 함유하는 잎 추출물에서 유의하게 증가하였다. CM 성충에 대한 개별 화합물의 유인성은 하기 순서로 감소하는 것으로 관측되었다: 메틸 살리실레이트 및 2개의 테아스피란 이성질체의 혼합물, 이어서 리날룰 및 벤질 알콜. 게라니올은 CM 성충을 퇴치하는 것으로 관측되었다. 임의의 개별 휘발물 또는 상기 유인제의 혼합물에 게라니올 (39.4 ng/㎖)을 첨가하는 것은 이의 유인성을 감소시켰다. 상기 데이타는 사과 과수원에서 CM의 완전 억제를 위하여 게라니올을 퇴치제로서 사용하고, 메틸 살리실레이트 또는 테아스피란을 유인제로서 사용하는 가능성을 암시하는 것이다.
본 발명의 일부 실험의 목적은 아스퍼질러스 나이거 BGL1의 광범위한 특이성에 의해 사과 잎 중에서 식물 휘발물을 방출하는 잠재성을 평가하며, 방출된 휘발물과 사과의 가장 중요한 곤충인 코들링 나방의 잠재적인 상호작용을 평가하는 것이다.
본 발명에 따라, 게라니올이 코들링 나방을 퇴치하는 것으로 관측되었다.
따라서, 본 발명은 코들링 나방 퇴치제로서 사용하기 위한 게라니올을 포함하는 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 오로지 천연 또는 합성의 게라니올만을 함유하거나, 이는 기타 성분, 예컨대 네롤 및 시트로넬롤을 함유할 수 있고, 바람직하게는 약 50 ∼ 약 70 중량%의 게라니올, 0 ∼ 약 20 중량%의 네롤 및 약 20 ∼ 약 40 중량%의 시트로넬롤을 포함할 수 있다.
본 발명에 따라, 메틸 살리실레이트, (2R,5R) 및 (2S,5R) 테아스피란 이성질체, 리날룰 및 벤질 알콜이 코들링 나방의 유인제임이 또한 발견되었다.
따라서, 본 발명은 또한 코들링 나방의 유인제로서 사용하기 위한, 메틸 살리실레이트, 테아스피란 이성질체, 리날룰, 벤질 알콜, 및 이의 조합물로 이루어진 군 중에서 선택되는 작용제를 포함하는 조성물에 관한 것이다. 상기 유인제는 단독으로 또는 조합하여 급성 독소 및/또는 트래핑 장치에 대한 미끼 증진제로서 유용하다. 바람직한 실시양태에서, 유인제는 메틸 살리실레이트, (2R,5R) 테아스피란, (2S,5R) 테아스피란, 또는 이의 조합물이다.
본원에 정의된 휘발성 곤충 퇴치제 및 유인제는 이의 급속한 증발 및/또는 처리된 기질의 흡수로 인하여 오로지 상대적으로 짧은 시간 동안 보호 효과를 제공하는 단점을 갖는다. 상기 두 인자, 흡수 및 증발은 성가시고 시간이 걸리는 빈번한 사용을 필요로 하게 한다. 종래 기술에 공지된 각종 물질을 사용하여 본 발명에 따른 휘발성 곤충 퇴치제 및 유인제의 잔류 활성을 연장시키며, 이들 모두는 본 발명에 포함된다.
본원에 정의된 게라니올 또는 코들링 나방 유인제를 포함하는 조성물은 생분해성이거나 생분해성이 아닐 수 있는 천연 또는 합성 친화성 중합체와 함께 사용할 수 있다. 중합체는 예컨대 셀룰로오스 에테르, 예를 들어 메틸 셀룰로오스, 에틸 셀룰로오스, 카르복시메틸 셀룰로오스, 히드록시에틸 셀룰로오스, 히드록시프로필 셀룰로오스; 셀룰로오스 에스테르, 예를 들어 아세틸 셀룰로오스를 포함하지만 이에 국한되지는 않는 셀룰로오스 또는 셀룰로오스 유도체일 수 있다. 중합체 는 또한 옥수수 전분으로 코팅되고 이를 보유하는 비들렛(beadlet)을 생성하기 위한, 젤라틴 및 기타 물질 기재의 코팅 물질일 수 있다. 중합체는 또한 본원에서 참고로 인용하는 미국 특허 제 4,496,467호, 4,496,613호 및 4,548,764호에 개시된 고밀도 폴리에틸렌 또는 저밀도 폴리에틸렌, 또는 생분해성 중합체, 예컨대 생분해성 열가소성 폴리우레탄, 주쇄에 에스테르 결합을 갖는 생분해성 에틸렌 중합체, 및 폴리(엡실론-카프로락톤) 단일중합체일 수 있다.
본 발명의 조성물은 분무가능할 수 있고, 상기 경우 이는 또한 수성 희석제를 포함하거나, 또는 이는 농축물이어서 분무가능한 조성물을 제공하기 위하여 물 중 희석, 분산 또는 용해될 필요가 있을 수 있다.
본 발명의 하나의 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 조성물은 본 발명의 게라니올 또는 1 이상의 유인제를 함유하는 마이크로캡슐을 포함한다. 상기 마이크로캡슐은 게라니올 또는 유인제를 서서히 방출하는 것을 비롯한 몇가지 이점을 제공한다. 또한, 상기 마이크로캡슐은 분무 노즐을 막지 않고 분무가능한 조성물에 적절하게 사용되도록 충분히 작을 수 있다. 또한, 게라니올 또는 유인제(들)은 예를 들어 액적의 형태로 식물의 군엽(foliage) (예를 들어, 잎 또는 기타 광합성 기관) 상 또는 가지 상에 "달라붙어(glue)" 효과적으로 보유될 것이다.
본 발명의 추가의 실시양태에서, 게라니올 또는 유인제 조성물은 또한 이를 제어된 방식으로 서서히 방출할 수 있는 과립상(granulate)으로 도입될 수도 있다. 상술한 마이크로캡슐과 마찬가지로, 과립상은 매트릭스 중 존재하고, 액적 또는 액적 유사 단위의 형태로 살포된다. 과립상은 예컨대 당업자에게 친숙한 소립자 무기 담체 및/또는 유기 중합체로 이루어질 수 있다.
본 발명은 또한 상기 모들링 나방이 창궐하거나 금방이라도 창궐할 수 있는 환경을 게라니올을 포함하는 코들링 나방 퇴치 조성물로 처리하는 것을 포함하는, 코들링 나방의 퇴치 방법을 제공한다.
본 발명은 또한 코들링 나방이 서식할 수 있는 과일 과수원에서 한정된 시간 동안 코들링 나방을 퇴치하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 과수원을 게라니올 퇴치제 조성물로 처리하는 것을 포함한다.
또다른 측면에서, 본 발명은 과일 과수원에서 코들링 나방을 유인하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 과일 과수원을 메틸 살리실레이트, 테아스피란 이성질체, 리날룰, 벤질 알콜, 및 이의 조합물로 이루어진 군 중에서 선택되는 유인제로 처리하는 것을 포함한다.
하나의 실시양태에서, 본 발명은 트랩을 둘러싼 환경을 메틸 살리실레이트, 테아스피란 이성질체, 리날룰, 벤질 알콜, 및 이의 조합물로 이루어진 군 중에서 선택되는 유인제의 중합체 및 상기 중합체의 1 중량% 이상의 혼합물로 이루어진 중합체를 함유하는 곤충 유인제에 노출시키는 단계를 포함하는, 사과 과수원 중에서 코들링 나방을 곤충 트랩에 유인하는 방법을 제공한다.
또한, 본 발명은 코들링 나방이 서식할 수 있는 과일 과수원에서 한정된 시간 동안 코들링 나방을 완전히 억제하는 방법에 관한 것이고, 상기 방법은 과수원을 게라니올 퇴치제 조성물 및 메틸 살리실레이트, 테아스피란 이성질체, 리날룰, 벤질 알콜, 및 이의 조합물로 이루어진 군 중에서 선택되는 코들링 나방 유인제를 포함하는 조성물로 처리하는 것을 포함한다.
본 발명의 게라니올 퇴치제 조성물 및 유인제 조성물로 처리될 수 있는 과일 과수원은 코들링 나방 해충에 의해 공격받은 것이고, 이는 사과, 배, 모과, 호두, 산사나무속 및 야생 능금 과수원을 포함한다. 하나의 가장 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 방법은 사과 과수원에 적용되며, 상기 나무는 결실기 동안 분무된다.
본 발명은 하기 비제한적인 실시예에 의해 이제 예시될 것이다.
물질 및 방법
(i) 곤충 - CM 시디아 포모넬라 L.의 알을 페트리 접시 중 실온에서 부화시켰다. 유충에 인공 사료 (Manduca Premix- Heliothis Premix, Stonefly Inc., Bryan, TX)를 공급하고, 25 ± 0.5℃, 60 ± 1%의 상대 습도 및 16:8 h (L:D)의 광주기에서 5령 유충 때까지 유지시키고, 이를 골판지 띠 (2 ㎠)로 옮겼다. 발생시, 성별 및 연령(2일 내)이 혼합된 성충 곤충을 우리 생검에 사용하였다.
( ii ) 사과 잎 추출물 처리 - 잎 및 과일 모두를 갖는 사과 (cv. Anna) 돌기(spur)를 2004년 6월, 이스라엘 레호보트의 근교의 영리적 과수원으로부터 잘라내었다. 잎을 돌기로부터 잘라서, 이중 증류수(DDW)로 세정한 후 여과지로 건조하였다. 건조된 잎을 액체 질소 중에서 균질화하였다. pH 4.3의 50 mM 시트레이트 완충제 중 10 mM EDTA 및 4 mM DTT를 함유하는 빙냉 추출 완충제의 중량을 상기 잎 균질액에 3회 (처리당 4 ∼ 5g) 첨가하였다. 그 후, 혼합물을 4℃에서 1시간 동안 회전시키고, 16,000 g에서 5분 동안 원심분리하였다. 상청액 (처리당 10 ㎖)을 수집하였다. 한 처리에 있어서, 피키아 파스토리스에서 생성된 재조합 아스퍼질러스 나이거 BGL1 (Dan 등, 2000)의 1 단위를 첨가하였고, 그 용액을 37℃에서 4시간 동안 유지시켰다. 또다른 처리에서, 임의의 내인성 β-글루코시다제 활성을 차단하기 위하여 2 μM 글루코이미다졸 (β-글루코시다제 억제제)을 추출 완충제의 첨가 직후 상기 잎 균질액에 첨가하였다. Shoseyov 등 (1990)에 따라 p-니트로페닐-β-D-글루코피라노사이드(pNPG)를 기질로서 사용하여 정량적 β-글루코시다제 활성을 분석하였다.
( iii ) 휘발물 수집 및 GC - MS (기체 크로마토그래피(GC) 및 질량 분석법(MS)) 분석 - 잎 추출물 및 과일 주스의 혼합물로부터 방출되는 상부 공간(headspace)의 휘발물을, 100 ㎛ 폴리디메틸실록산(PDMS)으로 코팅된 고체상 미량추출(SPME) 섬유를 사용하여 수집하였다. 상기 섬유를 상부 공간 휘발물에 30분 동안 노출시켰다. SPME 동안, 바이알 내부의 잎 추출물 온도는 교반 없이 60℃였다. 적재된 SPME 섬유를, 30 m, 0.25 mm ID DB-5 모세관 칼럼이 장착된 Varian-3GC-MS 시스템 (J&W, Folson, CA)의 주입 포트 중에서 3분 동안 탈착시켰다. Varian 8200 오토샘플러 (Varian, Palo Alto, CA)에 의해 샘플링 및 탈착 시간을 정확하게 조절하였다. 3-옥타놀 (0.1 ppm)을 각 샘플에 내부 표준으로서 첨가하엿다. 각 샘플을 독립적으로 3회 분석하였다. GC-MS 파라미터는 Shalit 등 (2003)에 따라 설정하였다. 주입기 온도는 비분할 주입용으로 설정된 250℃였다. 칼럼은 1분 동안 50℃로 설정한 후 온도를 4℃/분 의 속도로 200℃까지 상승시켰다. 70 eV의 전기 에너지로 45 ∼ 450 질량-대-전하 비율로 질량 범위를 기록하였다.
대부분의 휘발성 화학 물질은 이의 질량 스펙트럼 및 보유 데이타를 Wiley 질량 스펙트럼 라이브러리 (McLafferty, 1994) 및 문헌 데이타 (Adams, 1995)가 보충된, 기준 화합물의 것과 비교함으로써 식별하였다. 내부 표준의 농도와 비교시의 농도를 계산함으로써 휘발물을 정량하였다. 휘발성 성분 피크의 영역을 내부 표준 피크의 영역에 의해 정규화하였다.
( iv ) 화학 물질 - 대부분의 화학적 표준 물질을 Sigma/Aldrich (St. Louis, MO)로부터 구입하였다. 순도는 98 ∼ 99.5%였다. (2R,5R)-테아스피란 및 (2S,5R)-테아스피란의 혼합물을 Fluka (Buchs SG, 스위스)로부터 구입하였다.
(v) 우리 생검 - Zhu 등 (2003)의 방법에 기초하여, 실온 (23℃ ± 3℃)의 실험실 중 스크린 우리 (96 x 68 x 45 cm)에서 트래핑 시험을 수행하였다. 성 및 연령 (번데기 발생 후 2일)이 혼합된 60 마리의 코들링 나방 성충을 상이하게 처리된 트랩을 포함하는 우리에 풀었다. 중앙에 구멍 (5 mm 직경)을 갖는 흰 종이 뚜껑으로 덮인 100 ㎖ 비커로부터 트랩을 구축하였다. 디스펜서로서 와트만 페이퍼 윅(Whatman paper wick) (10 ㎝ 길이)을 사용하였다. 재조합 BGL1을 잎 추출물에 첨가하는 효과를 시험하기 위히여, 4개의 트랩을 구축하고 동일한 우리에 넣었다. 첫번째 트랩은 재조합 BGL1이 첨가된 10 ㎖의 잎 추출물을 함유하였다. 두번째 트랩은 글루코이미다졸이 첨가된 동일한 양의 잎 추출물을 함유하였다. 세번째 트랩은 오로지 잎 추출물만 함유하였고, 네번째 트랩은 물을 함유하였다. 곤충을 풀어놓은 후 12 시간에 트랩 내 또는 트랩 주위에 잡힌 곤충을 세었다. 트랩 주위의 곤충은 하기와 같이 정의하였다: 스크린 우리의 공간을 4개의 부분으로 동일하게 나누었다. 각 트랩을 각 부분의 중앙에 놓았다. 트랩 내부를 제외한 각 특정 공간 중 존재하는 곤충의 수를 실험에서 얻었다. 합성 화합물의 유인을 시험하기 위하여, BGL1으로 처리된 잎 추출물 중 SPME-GC-MS 분석에 의해 측정된 농도에서 에탄올에 먼저 용해된 각 화학 물질로 트랩을 제조하였다. 에탄올의 최종 농도는 0.01%였다. 각 트랩을 우리 중 유지하였고, 오로지 대조군 물 트랩만이 0.01% 에탄올을 포함하였다. 실험을 밤새 (pm 9시부터 am 9시까지) 수행하여 이른 아침 어스름 전에 이의 활성 시간을 다루었다. 예비 실험에서 코들링 나방에 대한 어떠한 거동 활성도 보여주지 않은 대조군 1-옥타놀을 제외하고 각 실험을 5회 반복하였다. 상기 실험을 3회 반복하였다. 트랩을 반복시 무작위로 배열하여 트랩의 위치에 의한 영향을 피하였다. 트래핑된 곤충의 성 비율에 대한 연구는 곤충 페로몬의 복잡한 관여로 인하여 생략하였다.
실시예 1. 코들링 나방 성충에 대한 사과 잎 추출물의 유인/퇴치에 대한 β-글루코시다제 활성의 효과
기질로서 p-니트로페닐 β-D-글루코피라노사이드(pNPG)를 사용하는 정량적 β-글루코시다제 활성 분석으로 사과 잎 추출물 중 내인성 β-글루코시다제의 잔류 활성 (0.24 단위 g-1 새로운 중량·분-1)을 확인하였다. 글루코이미다졸에 의한 처리 (Heightman 및 Vasella, 1999) 결과 잎 추출물 중 β-글루코시다제 활성이 검지불가능한 수준이 되었다.
사과 잎 추출물 및 2 μM 글루코이미다졸을 함유하는 트랩은 잎 추출물, BGL1으로 처리된 잎 추출물, 또는 물을 함유하는 트랩보다 트랩 내부에 유의하게 더 많은 성충 코들링 나방을 포획하였다. 또한, 잎 + 억제제 트랩 주위에, 임의의 다른 트랩보다 유의하게 더 많은 곤충이 있었다 (도 1). 이러한 잘 일치되는 결과는 β-글루코시다제 활성에 의해 방출된 아글리콘이 코들링 나방 곤충에 대한 퇴치 활성을 갖는다는 점을 암시하였다. 또한, 글루코이미다졸에 의한 β-글루코시다제 활성의 완전한 억제 및 상기 β-글루코시다제 억제제로 처리된 잎 추출물의 유의한 유인은 상기 글리코사이드 및 β-글루코시다제가 온전한 잎 중 상이한 구역에 위치한다는 점을 나타낸다.
초식성 곤충의 숙주 식물 향기에 대한 유인 또는 순응 반응은 식물에 대한 상해에 의해 강화되거나 증가될 수 있다. 코들링 나방 유충 및 성충의 기타 코들링 나방 유충이 창궐된 사과 과일에 대한 증가된 반응이 보고되었다 (Landolt 등, 2000; Reed 및 Landolt, 2002). 상기 연구에서, 글루코이미다졸을 갖는 부서진 사과 잎이 코들링 나방 성충에 대한 유인성을 유지한다는 점이 증명되었다.
실시예 2. BGL1 또는 β- 글루코시다제 억제제로 처리된 사과 잎 추출물의 GC-MS 분석
BGL1, β-글루코시다제 억제제로 처리되거나 어떠한 것으로도 처리되지 않은 잎 추출물의 상부 공간 휘발물을 SPME 필터로 수집하고, GC-MS에 의해 분석하였다. 검지된 휘발물의 질량 스펙트럼 및 머무름 지수를 기준 합성 표준과 비교함으로써 이의 식별 및 정량을 수행하였다. 1-옥타놀 (CV, 변이 계수, 32.6%), 리날룰 (28.6%), 게라니올 (22.5%), 벤질 알콜 (32.1%), 메틸 살리실레이트 (41.9%), (2R,5R)-테아스피란 (38.7%) 및 (2S,5R)-테아스피란 (32.4%)의 수준은 β-글루코시다제 억제제로 처리된 잎 추출물과 비교시 BGL1으로 처리된 잎 추출물에서 유의하게 증가하였고 (도 2), 이는 상기 화합물이 사과 잎 중 글루코사이드로서 주로 존재한다는 것을 나타낸다.
아스퍼질러스 나이거 BGL1은 외인성 β-글루코시다제 또는 β-글루코시다제 억제제의 부재 하의 잎 추출물과 비교시 잎 추출물로부터 상당히 더 많은 아글리콘 을 방출하였다. 이는 반응 바이알 중 아스퍼질러스 나이거 BGL1 및 사과 β-글루코시다제 간의 기질 특이성의 차이 또는 단순히 아스퍼질러스 나이거 BGL1의 더 높은 활성을 반영하는 것일 수 있다.
대부분의 식별된 휘발물은 다수의 식물 종에 있어서 일반적인 아글리콘으로 생각된다 (Stahl-Biskup 등, 1993). 사과 아글리콘에 대한 데이타는 상당히 제한된다. 상당량의 C13-노리프레노이드가 사과 과일 및 잎 중 글리코사이드 결합된 방향족 화합물로서 존재하는 것으로 관측되었다 (Schwab 및 Schreier, 1988; Stingl 등, 2003). 그러나, 이전에는 사과 아글리콘으로서 게라니올, 메틸 살리실레이트, 및 테아스피란 이성질체에 대한 어떠한 보고도 없었다.
특정 아글리콘의 존재는 또한 사과 재배자 간에도 다를 수 있다. 자연에서 부분입체이성질체 테아스피란이 자연에서 관측된다 (Schmidt 등, 1992). 이들 중 둘은 자주색 시계풀의 열매 (Passiflora edulis Sims) 중에서 아글리콘으로서 식별되었다 (Winterhalter, 1990). Schmidt 등 (1992)은 이의 감각 특성이 뚜렷하게 상이한 테아스피란의 4가지 이성질체를 합성하였다. (2R,5R)-테아스피란은 약한 장뇌 향조를 갖는 것으로 관측된 반면, (2S,5R)-테아스피란은 거의 나프탈렌과 유사한 강한 장뇌 향조를 나타내었다. 상기 연구에서, 상기 2개의 합성 테아스피란 이성질체 표준에 기초하여 식별을 행하였다. 우리가 아는 한, 이는 사과 잎 중 아글리콘으로서 존재하는 테아스피란 이성질체에 대한 최초의 보고이다.
1-옥타놀, 벤질 알콜, 및 메틸 살리실레이트는 오로지 아스퍼질러스 나이거 BGL1의 존재 하에서만 검출되었다. 이는 BGL1 및 내인성 사과 β-글루코시다제의 기질 특이성의 상이함 또는 내인성 β-글루코시다제의 불충분한 추출로 인한 것일 수 있다. 일부 식물 글루코시다제, 예컨대 포도 베리 글루코시다제는 막-결합 효소인 것으로 공지되어 있다 (Gunata 등, 1998). 이의 추출은 특정 조건을 필요로 한다. β-글루코시다제의 아글리콘-부분 특이성은 효소의 출처에 따라 상당히 다른 것으로 문헌에 잘 증명되어 있다 (Hosel 및 Conn, 1982; Gunata 등, 1990; Babock 및 Esen, 1994). 상기 연구에서, 낮은 수준의 리날룰 및 테아스피란이, 시험된 조건에서 β-글루코시다제 활성을 완전히 억제하는 글루코이미다졸로 처리된 잎 추출물에서 검출되었고, 이는 이들 화합물의 유리 형태가 사과 잎 중 존재한다는 것을 암시한다. Bengtsson 등 (2001)은 또한 "요나단(Jonathan)" 사과 잎의 상부 공간에서 소량의 유리 리날룰을 검출하였으나, 이들은 테아스피란을 언급하지 않았다.
상기 언급한 화합물에 추가하여, 사과 잎 추출물로부터 방출되는 다수의 기타 휘발물이 존재한다는 점을 염두해야 한다. GC-MS의 제한된 감수성으로 인하여, 사과 잎 상부 공간에 일부 다른 곤충 유인제 또는 퇴치제가 존재하는 것이 가능하다.
실시예 3. β- 글루코시다제 -강화된 화합물이 코들링 나방 곤충에 미치는 유인/퇴치 효과
우리 생검에서, 잎 추출물 중 검출된 농도의 각각의 개별 화합물을 갖는 트랩을 오로지 물 및 에탄올만을 함유하는 대조군 트랩과 짝지었다. 성충 곤충에 대한 화합물의 유인성은 하기 순서로 감소된다: 메틸 살리실레이트 및 2개의 테아스피란 이성질체의 혼합물, 이어서 리날룰 및 다음으로 벤질 알콜. 상기 화합물 모두는 블랭크로서의 물보다 더 유인성이 있다 (도 3). 흥미롭게도, 상기 모든 화합물의 혼합물을 갖는 트랩은 대부분의 곤충을 포획하지 않았다. 우리가 아는 한, 이는 코들링 나방 유인제로서의 테아스피란 이성질체에 대한 최초의 보고이다. 상기 화합물은 곤충-교미 교란의 널리 허용된 기술에 추가하여, 성충 곤충의 대량 포획에 있어서 미끼로서 사용할 수 있다 (Calkins 및 Faust, 2003).
70 ng/㎖의 1-옥타놀을 갖는 트랩은 어떠한 곤충도 포획하지 않았고, 동일량의 1-옥타놀을 임의의 기타 화합물에 첨가하는 것은 상기 화합물 단독과 비교시 트래핑된 곤충의 수에 유의하게 영향을 미치지 않았다 (데이타는 도시되어 있지 않음). 이는 1-옥타놀이 코들링 나방 성충의 거동에 유의한 영향을 미치지 않음을 나타낸다.
현저하게도, 39.3 ng/㎖의 게라니올은 코들링 나방 성충에 대한 퇴치 효과를 나타내었다. 상술한 유인제 화합물 중 임의의 것 + 동일량의 게라니올을 갖는 트랩은 임의의 곤충을 포획하지 않았으며, 이는 상기 농도의 게라니올이 실험에 사용된 상기 화합물의 유인성을 제거한다는 것을 암시한다. 게라니올은 일부 시판되는 모기 퇴치 제품 중 핵심 성분으로서 (Xue 등, 2003), 및 모기에 대한 생물학적 퇴치제로서 시판되는 시트로사(citrosa) 식물의 천연 방향유의 주성분으로서 (Matsuda 등, 1996) 보고되어 왔다.
곤충 억제는 농작물 및 동물의 보호 및 공중 위생의 유지 모두에 초점을 맞춘다. 관심을 갖는 한가지 분야는 환경적으로 안전하고 비독성인 곤충 퇴치제의 개발 및 생산을 포함한다. 본 결과는, 코들링 나방의 사과 식물 숙주에 있어서, 게라니올이 비활성화 글루코사이드/코들링 나방 퇴치제로서 존재한다는 점을 나타낸다. 오로지 잎 손상시에만 글루코사이드 및 β-글루코시다제의 탈구획화(decompartmentation)가 일어나서 게라니올을 방출시킨다. 더 최근에는, 트랜스제닉 담배의 아스퍼질러스 나이거 β-글루코시다제 유전자(BGL1)의 발현은 곤충 및 부서진 잎 모두에 있어서 휘발물의 유의한 변경을 야기한다는 것이 입증되었다 (Wei 등, 2004).
실시예 4. 게라니올을 포함하는 마이크로캡슐
인산3칼슘(TCP) 중 액체 게라니올을 먼저 흡수시킨 후 표 1의 1 ∼ 3 및 5 행의 물질로 코팅함으로써, 또는 표 1의 4 행에 기재된 바와 같이 게라니올을 포함하는 마이크로캡슐을 제조하였다:
[표 1]
게라니올을 포함하는 마이크로캡슐
흡수 담체 코팅 물질 입자 크기 외관 게라니올 함량
1 인산3칼슘 25% 모노글리세라이드 60% <850 ㎛ 자유 유동성 과립 분말 15%
2 인산3칼슘 50% 에틸 셀룰로오스 CAS 9004-57-3 20% (셀룰로오스 에틸 에테르) <850 ㎛ 자유 유동성 과립 분말 30%
3 인산3칼슘 64% 에틸 셀룰로오스 + 히드록시프로필 셀룰로오스 20% <850 ㎛ 자유 유동성 과립 분말 16%
4 옥수수 전분 40% 기재의 매트릭스(충전제) 젤라틴 기재의 용액을 매트릭스에 붓고, 게라니올을 첨가하여 비들렛 50%를 생성함 <850 ㎛ 자유 유동성 과립 분말 10%
5 인산3칼슘 54% 에틸 셀룰로오스 + 히드록시프로필 셀룰로오스 30% <850 ㎛ 자유 유동성 과립 분말 16%
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Claims (28)

  1. 코들링 나방(codling moth) 퇴치제로서 사용하기 위한 게라니올(geraniol)을 포함하는 조성물.
  2. 제 1 항에 있어서, 게라니올이 네롤(nerol) 및 시트로넬롤(citronellol)과 같은 추가의 성분과의 혼합물로 존재하는 조성물.
  3. 제 2 항에 있어서, 약 50 ∼ 약 70 중량%의 게라니올, 0 ∼ 약 20 중량%의 네롤, 및 약 20 ∼ 약 40 중량%의 시트로넬롤을 포함하는 조성물.
  4. 제 1 항 내지 제 3 항 중 어느 한 항에 있어서, 게라니올 또는 게라니올 혼합물이 중합체 매트릭스에 함유되는 조성물.
  5. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 분무가능한 형태인 조성물.
  6. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 물 중 희석, 분산 또는 용해되어 분무가능한 조성물을 제공하는 농축액으로서 제공되는 조성물.
  7. 제 1 항 내지 제 6 항 중 어느 한 항에 있어서, 게라니올 또는 게라니올 혼 합물을 함유하는 마이크로캡슐을 포함하는 조성물.
  8. 제 7 항에 있어서, 게라니올 또는 게라니올 혼합물을 서서히 방출하는 조성물.
  9. 코들링 나방이 창궐하거나 금방이라도 창궐할 수 있는 환경을 게라니올을 포함하는 코들링 나방 퇴치용 조성물로 처리하는 것을 포함하는 코들링 나방의 퇴치 방법.
  10. 제 9 항에 있어서, 상기 조성물이 네롤 및 시트로넬롤과 같은 추가의 성분을 갖는 게라니올 혼합물을 포함하는 방법.
  11. 제 9 항 또는 제 10 항에 있어서, 상기 조성물이 게라니올 또는 게라니올 혼합물을 함유하는 마이크로캡슐을 포함하는 분무가능한 조성물인 방법.
  12. 제 9 항 내지 제 11 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 환경이 배, 사과, 모과, 호두, 산사나무속 및 야생 능금 과수원을 비롯한 과일 과수원인 방법.
  13. 제 12 항에 있어서, 상기 과일 과수원이 사과 과수원인 방법.
  14. 제 12 항 또는 제 13 항에 있어서, 조성물이 상기 과일 과수원에 분무되는 방법.
  15. 게라니올 퇴치제 조성물로 사과 과수원을 처리하는 것을 포함하는, 사과 과수원의 코들링 나방의 퇴치 방법.
  16. 코들링 나방 유인제로서 사용하기 위한, 메틸 살리실레이트, 테아스피란(theaspirane) 이성질체, 리날룰, 벤질 알콜, 및 이의 조합물로 이루어진 군 중에서 선택되는 작용제를 포함하는 조성물.
  17. 제 16 항에 있어서, 상기 작용제가 메틸 살리실레이트, (2R,5R) 테아스피란, (2S,5R) 테아스피란, 또는 이의 조합물인 조성물.
  18. 제 16 항 또는 제 17 항에 있어서, 유인제 또는 이의 조합물이 중합체 매트릭스에 함유되는 조성물.
  19. 제 16 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서, 분무가능한 형태인 조성물.
  20. 제 16 항 내지 제 18 항 중 어느 한 항에 있어서, 물에 희석, 분산 또는 용 해되어 분무가능한 조성물을 제공하는 농축물로서 제공되는 조성물.
  21. 제 16 항 내지 제 20 항 중 어느 한 항에 있어서, 마이크로캡슐의 형태인 조성물.
  22. 제 21 항에 있어서, 코들링 나방 유인제 또는 유인제의 조합물을 서서히 방출하는 조성물.
  23. 코들링 나방이 창궐하거나 금방이라도 창궐할 수 있는 트랩 주위의 환경을, 메틸 살리실레이트, 테아스피란 이성질체, 리날룰, 벤질 알콜, 및 이의 조합물로 이루어진 군 중에서 선택되는 코들링 나방 유인제로 처리하는 것을 포함하는, 코들링 나방을 곤충 트랩으로 유인하는 방법.
  24. 제 23 항에 있어서, 상기 환경이 배, 사과, 모과, 호두, 산사나무속 및 야생 능금 과수원을 비롯한 과일 과수원인 방법.
  25. 제 24 항에 있어서, 상기 과일 과수원이 사과 과수원인 방법.
  26. 코들링 나방이 창궐하거나 금방이라도 창궐할 수 있는 과수원의 환경을, 게라니올을 포함하는 코들링 나방 퇴치용 조성물 및 메틸 살리실레이트, 테아스피란 이성질체, 리날룰, 벤질 알콜, 및 이의 조합물로 이루어진 군 중에서 선택되는 유인제를 포함하는 코들링 나방 유인제 조성물로 처리하는 것을 포함하는, 과일 과수원의 코들링 나방을 완전히 억제하는 방법.
  27. 하기 단계를 포함하여 이에 따라 각 시험된 곤충의 퇴치제 또는 유인제인 휘발물을 식별하는, 식물 조직 추출물에 대한 β-글루코시다제의 작용에 의해 이의 비휘발성 글루코사이드로부터 방출되는 휘발성 곤충 퇴치제 및/또는 유인제를 식별하는 방법:
    (i) 식물 조직을 균질화하고, 상기 식물 조직 균질액에 추출 완충제 작용을 실시하는 단계;
    (ii) 상기 식물 추출물을 β-글루코시다제 또는 β-글루코시다제 억제제로 처리하는 단계;
    (iii) β-글루코시다제 억제제로 처리된 추출물과 비교시 β-글루코시다제로 처리된 추출물 중 그 수준이 상승된, 단계 (ii)에서 방출된 특정 휘발물을 GC-MS에 의해 식별하는 단계; 및
    (iv) 단계 (iii)에서 식별된 각 휘발물이 곤충의 거동에 미치는 영향을 시험하는 단계.
  28. 제 27 항에 있어서, β-글루코시다제가 재조합 β-글루코시다제이고, β-글루코시다제 억제제가 글루코이미다졸인 방법.
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