KR20070086101A

KR20070086101A - 셀룰라이트 치료용 약제학적 조성물

Info

Publication number: KR20070086101A
Application number: KR1020077013256A
Authority: KR
Inventors: 마시밀리아나 란디니; 산드로 기울리아니; 알레산드로 기올리티
Original assignee: 메나리니 리케르체 에스.피.아.
Priority date: 2004-12-14
Filing date: 2005-12-06
Publication date: 2007-08-27
Also published as: HK1111599A1; RU2007120465A; TNSN07203A1; RU2401098C2; CA2590288A1; NO20073575L; MX2007007015A; JP2008523127A; NZ555836A; WO2006063714A1; PE20060746A1; AR052048A1; BRPI0518554A2; US20100016324A1; AU2005315919A1; EP1824463A1; MA29145B1; IL183893A0; AU2005315919B2

Abstract

활성 성분으로 PDE3 저해제를 함유하는, 국소 투여용 또는 메소테라피에서 사용하기 위한 약제학적 조성물, 및 이들의 셀룰라이트 치료에서의 용도가 개시되어 있다.

PDE3 저해제, 메소테라피, 셀룰라이트, 국소 치료

Description

셀룰라이트 치료용 약제학적 조성물{Pharmaceutical compositions for the treatment of cellulite}

본원 발명은 셀룰라이트 국소 치료용 또는 메소테라피(mesotherapeutic) 치료용 약제학적 조성물과 관련된 것으로, 상기 조성물은 선택적으로는 안티-셀룰라이트(anti-cellulite) 활성이 있는 다른 물질들과 회합되며(associated), 활성 성분으로서 PDE3 저해제를 포함한다.

셀룰라이트(cellulite), 또는 "부종-섬유경화증성 조직층 질환(oedematous-fibrosclerotic panniculopathy)"은 주로 지방성 조직이고 진피 아래에 있는 조직인 피하조직에 영향을 미치는 질환이다. 셀룰라이트는 대개 여성에게 배타적으로 작용하고, 사춘기 이후 여성 계층의 80-85％에서 문제가 되고 있다. 피하 지방 조직은 여성 체중 중에서 25％를 차지하고, 세 개의 기본적인 기능을 수행하는데: (a) 지방 조직은 신체적 및 물리적 보호를 제공하고; (b) 지방 조직은 지질 대사에 관련된 지질과 단백질 물질을 방출하고; 및 (c) 지방 조직은 내분비성 작용과 주변 분비성 작용(paracrine action)을 수행한다.

통계학적으로, 이러한 손상은 대다수의 백인종 여성들에게 나타난다. 이러한 문제는 다른 인종의 여성에게 있어서는 훨씬 덜 빈번하게 일어난다. 상기 질환 에 가장 민감한 여성들은 "지중해 지방의" 여성들인데, 일반적으로 이러한 여성들의 호르몬 공급이 에스트로겐에서 더 많다는 사실 때문이다.

심지어 마른 여성들이 허벅지에 더 현저한 지방 조직 축적을 보이기도 한다.

소정의 인자들이 부정적으로 간섭하여, 지방 조직 덩어리의 미세순환(microcirculation)에 악 영향을 주는 국소 변형을 일으키게 한다. 이것은 조직 혈관 시스템의 해부학적인 파괴 및 기능상 파괴를 일으키고, 피하조직 및 바로 위에 있는 층, 즉 진피에 작용하는 문제를 만든다.

셀룰라이트는 지방 조직의 미세 순환의 변성, 결과적으로 가장 중요한 대사 기능의 변형에 의해 야기된다.

이와 같은 조직 변성의 가시적인 결과는 지방 조직 세포의 크기(volume), 세포 내 공간에서 액체의 잔류 및 액체 정체의 증가이다.

셀룰라이트는 종종 좌식 생활 스타일, 스트레스, 간 질환, 부족한 다이어트, 소화기 장애, 또는 현저한 액체 잔류를 특징으로 하는 질환에 의해 악화되고, 유전적 원인(가족적 소인), 체질적 요인, 호르몬 및 혈관 요인을 가질 수 있다.

호르몬 불균형(난소, 뇌하수체 및 티로이드 호르몬에 작용)이 셀룰라이트의 원인이 되고; 에스트로겐의 작용 및 미세 순환에서의 이들의 영향 때문에, 난소 호르몬의 활성이 절정에 도달하는 사춘기, 임신, 및 특히 폐경 전 여성들이 이러한 상태에 걸리기 쉽게 된다.

따라서, 셀룰라이트에 걸리기 쉬움은 주로 유전에 의한 것이기보다는 호르몬에 기초한다.

여성들로 하여금 진피에서 셀룰라이트의 특징인 지방 조직의 불규칙적인 돌출이 쉽게 나타나도록 하는, 피하 결합 조직의 구조적인 특징에 있어서는 명백한 성적 이형성(sexual dimorphism)이 존재한다. 남성에 비해 여성의 피하 지방 조직에서 항 지방 분해 활성(α₂-아드레날린성-의존적 수용체)이 우세함은 허벅지에서 지방 축적의 증가를 촉진할 수 있어, 결과적으로는 셀룰라이트 출현을 촉진하게 한다(Rosenbaum 등에 의해 등재된 Plastic and Reconstructive Surgery, 101(7): 1934-1939, 1998).

또한, 엉덩이(buttocks), 둔부(hips) 또는 넙적다리 부위의 피하 지방 조직에 있는 지방 세포의 카테콜아민에 대한 지방 분해 반응은 내장 지방 조직에 있는 것보다 낮고(Lafontan and Berlan, TIPS, 24: 276-283, 2003), 이것은 이들 부위에서 지방 조직 세포가 축적되도록 한다.

현재, 셀룰라이트는 통상적으로 다음 방법에 의해 치료되고 있다.

- 물리적 치료방법

현재 전기 지방 분해(electrolipolysis) 및 더 최근에는 레이저 치료법, 이온 삼투 요법(ionophoresis), 초음파 치료법 및 오존 치료법과 같은 방법들이 마사지 방법에 추가되어 폭넓게 사용되고 있지만, 이러한 방법들 중 어떠한 것도 근본적인 문제를 해결하지 못한다.

- 다이어트 보충물 (diet supplement)

대사 작용을 늘리고, 순환을 개선하고, 세포 손상을 막고, 지방 흡수를 줄일 수 있는 수많은 다이어트 보충물(미네랄 솔트, 특히 포타슘, 비타민, '지방 연소제(fatburner)' 또는 이뇨제용 식물 추출물, 창자 조절제(bowel regulator) 및 바이오플라보노이드(bioflavonoid))이 판매 시장에서 입수가능하지만, 이와 같은 다이어트 보충물들의 셀룰라이트 치료 효능을 지지하는 명백한 임상 실험은 전혀 알려져 있지 않다.

- 약리학적 활성 생성물

문헌 European J. of Dermatology 10(8) 596-603, 2000에서 발표된 연구에 따르면, 분석된 32개 셀룰라이트 치료용 제품 중 가장 흔한 활성 성분은 14개 의료 제품에 존재하는 카페인이다.

광범위하게 사용되는 다른 화합물로는:

a) cAMP와 지방 분해를 증가시키는 능력이 있는 아미노필린으로서, 아미노필린의 항 셀룰라이트 활성에 관해서는 호의적인 연구와 호의적이지 않은 연구 모두가 공개되어 있고;

b) 대사 작용을 높이는 티로이드 호르몬의 활성을 이용한 레보티록신 (Levothyroxine)으로서, 레보티록신의 높은 투여량으로 인해 전신 흡수가 일어날 수 있고, 이것은 결과적으로 심장 자극(cardiostimulation) 및 티로이드 간섭 효과를 만들고, 이것은 특히 갑상선 기능 항진증 환자에게 위험하며,

c) 혈관 보호 헤파린노이드 능력이 있는 에스신이다.

- 메소테라피

이 방법은 보통 전신 루트로 투여되는 약물을 국소 피부내 주사하는 단계를 포함한다. 이것은 소량의 제품이 셀룰라이트 부위에 직접 주입되도록 하고; 따라서 이 방법은 전신성이 아니며 매우 침습적(invasive)이지 않다. 진피 단계에서는 약물 흡수가 느리기 때문에, 메소테라피로 장기간 동안 치료 효과를 얻을 수 있다. 셀룰라이트 치료를 위해 메소테라피에서 현재 사용되는 화합물은 코엔자임 A, 포스파티딜콜린, 아미노필린, 에스신 및 동종 요법의 제품이다.

지방 세포는 그 크기를 쉽게 변경하는 세포이어서; 지방 형성으로 인해 그 부피가 증가하고, 지방 분해로 인해 그 부피가 감소한다.

지방 형성은 LPL (리포단백질 리파제, lipoprotein lipase)에 의해 생성되는데: 모세혈관과 인접해 있는 지방 세포들이 LPL을 합성하여 방출하고, 이것은 초 저밀도 리포 단백질 (VLDL)과 킬로미크론(kilomicron)에 존재하는, 트리글리세라이드 (triglyceride, TG))를 가수분해한다. 글리세롤과 지방산이 방출되어, 지방 세포에 의해 포획되고, 트리글리세라이드로 에스테르화 반응을 하게 된다.

지방 분해는 호르몬-민감성 리파제(hormone-sensitive lipase, HSL)에 의해 초래되는데; 이것은 지방 세포에 존재하는 TG를 유리 지방산과 글리세롤로 가수분해한다. 상기 활성 효소는 cAMP-의존적 프로테인 키나제 A에 의해 인산화된다.

cAMP 합성은 두 개의 상반되는 효소 시스템

d) ATP를 cAMP로 변환하는 아데닐레이트 사이클라제(이것은 α₂ 아드레날린성 수용체에 의해 음성 조절되고, β 아드레날린성 수용체의 의해 양성 조절됨)

e) cAMP를 HSL에 활성이 없는 AMP로 분해하는 포스포디에스테라제(이 활성은 카페인, 테오필린 및 아미노필린에 의해 저해됨)에 의존한다.

또한, 지방 세포는 렙틴 (leptin)(포만 인자), 혈관 신생 유도 인자(안지오텐시노겐), 프로스타글란딘 PGE₂ (항 지방 분해성) 및 PGI₂ (세포 분화), 리소포스파티딕 산(lysophosphatidic acid) (세포 증식) 및 스테로이드와 같은 다수 개의 인자를 분비한다.

치료 방법

셀룰라이트 치료를 위한 약리학적인 기초의 개발은 수많은 단계를 거쳐오고 있다. 80년 대에는, 크산틴 계열(카페인)로 포스포디에스테라제 (PDE)를 저해하는 방법이 사용되었다. 90년 대에는, 배출(draining) 및 항 부종(antioedematous) 활성이 있는 식물 추출물(플라보노이드류 및 사포노시드류(saponoside))로 정맥림프 부전(venolymphatic insufficiency)을 개선해야 하는 문제에 부딪히게 되었다. 더 최근에는, 세포 외 매트릭스의 구성 성분과 분해 효소들로 결합 조직을 재구성하려는 시도를 하고 있다.

그러나, 가장 가능성 있는 치료를 위한 접근법은 지방세포 대사 및 지방 분해를 높이도록 설계된 방법인 것 같다.

지방 분해는 a) β-아드레날린성 수용체의 자극; b) 아데노신 또는 α₂-아드레날린성 수용체의 저해; c) 포스포디에스테라제의 저해에 의해 유도될 수 있다.

일련의 임상 실험은 β-아드레날린성 자극물질 (이소프레날린), α₂-아드레날린성 안타고니스트 (요힘빈), 및 포스포디에스테라제 저해제 (아미노필린)의 국 소 적용시 효과를 평가하였다. 그 결과에 따르면, 다이어트 또는 운동 없이도, 국소적인 지방 감소가 약리학적으로 얻어질 수 있음을 입증한다(Greenway 등에 의해 등재된 Obes res, 3: 561S-568S, 1995).

β-아드레날린성 수용체의 자극은 지방 세포에서 cAMP 농도를 증가시키고, 이에 따라 지방 분해를 촉진한다. cAMP를 높이는 또 다른 방법은 효소 포스포디에스테라제를 저해함으로써 cAMP 분해를 막는 것이다.

가장 흔한 PDE 저해제 (카페인, 테오필린 및 아미노필린)는 특이성이 낮고 국소적으로 흡수되는 용량이 낮아 만족스럽지 못하다. PDE3, 특히 PDE3B는 인간의 지방 세포에 존재하고; 결국 지방 조직에 한정된 효과를 얻기 위해 이러한 효소를 서브-타입별로 선택적으로 저해하는 것이 결과적으로 필요할 것 같다.

상기 주제에 대해 출원된 특허로는

미세 순환을 개선하기 위한 플라본 용도에 관한 EP692250호,

리파제 활성화를 위한 화장품으로서 크산틴의 용도와 관련되는 GB1588501호, FR2797765호, EP1261310호 및 EP1259221호가 있다.

상기 주어진 정보로부터, 지방 분해 활성이 셀룰라이트 치료를 위한 필수 조건이지만, 충분 조건이 아님은 명백하다. 종종 현재까지 사용되고 있는, 크산틴과 같은 포스포디에스테라제 저해제를 사용하는 치료가 완전히 만족스럽다고 입증되지 않았으므로, 이와 같은 피하 지방의 다원적 형태적 변형을 위한 신규하고 효과적인 치료방법의 필요성이 절실히 느껴지고 있다.

비만 치료에 잠재적으로 유용한 선택적 PDE3B 저해제로서 아릴디하이드로피 리다존과 아릴디메틸피라졸론 그룹이 Bioorganic ＆ Medicinal Chemistry Letters, (2003), 13, 3983-3987에 개시되어 있다.

현재, PDE3 (포스포디에스테라제-3) 저해제, 특히 주로 인간의 지방 조직에서 발현되는 아이소형(isoform)인 PDE3B 저해제가 셀룰라이트에 대해 놀라울 정도로 효과가 있음이 발견되었다.

따라서, 본원 발명은 셀룰라이트 국소 치료용 또는 메소테라피 치료용 약제학적 조성물의 제조를 위한, PDE3 바람직하게는 PDE3B 저해제의 용도를 제공한다.

PDE3 저해제 중에서, 화합물 아나그렐리드(anagrelide), 실로스타졸(cilostazol), 피모벤단(pimobendan), 밀리논(milrinone), 암리논(amrinone), 올프리논(olprinone), 에녹시몬(enoximone), 사일로스타미드(cilostamide), 베스나리논(vesnarinone), 트레퀸신(trequinsin) 및 약제학적으로 허용가능한 그의 염이 바람직하다. 특히, 밀리논, 트레퀸신 및 사일로스타미드가 바람직하다.

본원 발명에 따른 바람직한 PDE3 저해제의 추가적인 그룹은 문헌 Bioorganic ＆ Medicinal Chemistry Letters, (2003), 13, 3983-3987에 개시되어 있는 화합물로서; 구체적으로 상기 화합물은:

1) 6-[4-(2-벤질-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노)-페닐]-5-메틸-4,5-디하이드로-2-H-피리다진-3-온(화합물 8a)

2) 3-{2-[4-(4,4-디메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-1-H-피라졸-3-일)-2,3-디플루오로-페닐아미노]-6-옥소-사이클로헥스-1-에닐메틸}-벤조니트릴(화합물 18n)

3) 5-{4-[2-(2,6-디클로로-벤질)-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노]-2-플루오로-페닐}-4,4-디메틸-2,4-디하이드로-피라졸-3-온(화합물 18h)

4) 5-[4-(2-벤질-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노)-페닐]-4,4-디메틸-2,4-디하이드로-피라졸-3-온(화합물 18a)

5) 5-{4-[2-(3-니트로-벤질)-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노]-2-플루오로-페닐}-4,4-디메틸-2,4-디하이드로-피라졸-3-온(화합물 18f)

6) 6-[4-(2-벤질-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노)-2-플루오로-페닐]-5-메틸-4,5-디하이드로-2-H-피리다진-3-온(화합물 14l)

용어 "국소(topical)"가 본원 명세서에서 사용될 때, 이것은 국부 적용(local application) 및 작용을 위해 또는 이들을 포함하여 설계되는 것을 의미한다. 바람직하게는 국소 조성물(topical composition)은 크림, 비-오일성(non-oil) 크림, 연고, 오일-비오일성 제제(oil-non oil formulation), 겔, 스프레이-겔(spray-gel) 및 패취 제형으로 된다. 메소테라피 용도를 위해서는, 조성물은 국부 피부내 주입에 적절한 제형, 바람직하게는 주사 용액 제형으로 되어야만 한다.

활성 성분은 국소 제형의 경우 조성물 전체 중량에 대해 0.1 내지 3 중량％, 바람직하게는 1 내지 2 중량％ 범위의 농도로 존재하고, 메소테라피 용도에서 주사가능한 제형의 경우에는 0.1 내지 1 중량％ 범위의 농도로 존재한다. 본원 발명에 따른 조성물은 PDE3 저해제뿐만 아니라 미세 순환에 활성이 있는 화합물, 이러한 활성이 있는 화합물들의 혼합물, 또는 이러한 활성이 있는 추출물을 포함할 수 있고, 바람직하게는 사포닌, 또는 플라본, 또는 이들을 포함하는 추출물을 포함할 수 있다. 은행나무, 아르니카, 아나나스, 당귀(안젤리카 시니엔시스, Angelica siniensis), 센텔라 아시아티카(Centella asiatica), 또는 사포닌 에스신(saponin escin)의 추출물이 가장 바람직하다.

미세 순환에 활성이 있는 화합물, 추출물, 또는 물질들의 혼합물은 0.1 내지 4％ 농도로 조성물에 포함된다.

본원 발명에 따른 조성물은 아쥬반트(adjuvant) 특히 물 또는 알코올(에탄올), 비타민 특히 토코페롤, 덱스판테놀(dexpanthenol) 또는 레티놀 팔미테이트, 증점제, 방부제, 보호 콜로이드(protective colloid), 보습제, 향미제, 전해질, 보습제, 겔화제, 피부 투과도 증진제, 폴리머 또는 코폴리머, 유화제, 에멀젼-안정화제(emulsion-stabilizing agent)와 같은 약제학적으로 허용가능한 부형제, 및 다른 약제학적으로 허용가능한 부형제를 더 포함할 수 있다.

바람직한 방부제는 에틸 알코올 또는 벤질 알코올과 같이, 알레르기발현성(allergenicity)이 낮은 물질이다.

국소 제형은 10-트란스-12-시스 리놀레산과 같은, 올레산 불포화 유도체를 포함할 수 있다.

특히 적절한 겔화제는 카보머이고, 더 바람직하게는 카보머 940, 폴리아크릴아미드, 이소파라핀-라우레쓰-7(isoparaffin-laureth-7), 크산탄 검, 카라게닌(carrageenin), 아카시아 검, 구아 검, 아가 겔, 알기네이트 및 메틸하이드록시셀룰로오스, 카르복시메틸셀룰로오스, 하이드록시프로필 셀룰로오스, 하이드록시프로필 메틸셀룰로오스, 하이드록시에틸셀룰로오스, 에틸셀룰로오스, 폴리아크릴레이트, 폴리비닐알코올, 폴리비닐피롤리돈, 콜로이드형 실리카이다. 우레아와 판테놀은 본원 발명에 따른 보습제의 예이다.

본원 발명에 따른 약제학적 조성물의 제조 방법은 당해 분야의 당업자에게 알려져 있고, 예를 들면 Remington's Pharmaceutical Sciences, 제18판, Mack Publishing Co.에서 기술되어 있다.

상기 기술한 바와 같이, PDE3 저해제를 포함하는 약제학적 조성물은 인간, 특히 여성의 셀룰라이트 국소 치료에 편리하게 사용된다.

하기 실시예는 본원 발명을 더 상세하게 설명한다.

실시예

실시예 1: 비-오일성 크림(단위는 중량％)

활성 성분:

암리논 1

에스신 2

부형제:

글리세릴 모노스테아레이트 8

마크로골 세토스테아릴 에테르 2.5

액성 페트롤라툼(liquid petrolatum) 2

백색 페트롤라툼(white petrolatum) 2

이소프로필 미리스테이트 4

미리스틸 알코올 3

p-하이드록시벤조산 에스테르 0.3

100 g이 될 때까지 정화한(depurated) 물을 채움 100g

실시예 1.2

활성 성분:

밀리논 1

부형제:

세토스테아릴 알코올 4.5

글리세릴 모노스테아레이트 8.0

액성 페트롤라툼 2

백색 페트롤라툼 2

디메치콘(dimethicone) 0.30

이소프로필 미리스테이트 1

미리스틸 알코올 8

정유(essential oil) q.s.

100 g이 될 때까지 정화한 물을 채움 100g

실시예 1.3

활성 성분:

트레퀸신 2

부형제:

올레산 5.0

마크로골 스테아레이트 40 9.0

세토스테아릴 알코올 6.0

부틸 하이드록시아니솔 0.02

트로메타몰(trometamol) 0.1

디메치콘 0.3

카보풀 980 0.3

프로필렌 글리콜 20.0

소듐 설파이트 0.1

정유 q.s.

100 g이 될 때까지 정화한 물을 채움 100g

실시예 2: 알코올성 하이드로겔 ( hydroalcoholic gel )(단위 중량％)

활성 성분:

밀리논 2

부형제:

카보머 1.5

에틸 알코올 96°EP 40 ml

정유 q.s.

충분한 양의 트리에탄올아민으로 pH 조절

100 g이 될 때까지 정화한 물을 채움 100 g

실시예 3: 친유성 크림( lipophilic cream )(단위 중량％)

활성 성분:

암리논 1

부형제:

폴리글리세릴-3 디이소스테아레이트 4

글리세릴 올리에이트 2

밀랍 7

디카프릴 에테르 10

헥실데칸올/헥실데실 라우레이트 10

85％ 글리세린 5

마그네슘 술페이트 7H₂O 1

p-하이드록시벤조산 에스테르 0.1

정유 q.s. 100 g이 될 때까지 정화한 물을 채움 100 g

실시예 4: 비- 오일성 크림(단위 중량％)

활성 성분:

3-{2-[4-(4,4-디메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-1-H-피라졸-3-일)-2,3-디플루오로-페닐아미노]-6-옥소-사이클로헥스-1-에닐메틸}-벤조니트릴 1

부형제:

올레산 5.0

마크로골 스테아레이트 40 9.0

세토스테아릴 알코올 6.0

부틸 하이드록시아니솔 0.02

트로메타몰 0.1

디메치콘 0.3

카보풀 980 0.3

프로필렌 글리콜 20.0

소듐 설파이트 0.1

100g이 될 때까지 정화한 물로 채움 100 g

하기 활성 성분을 실시예 4에 따른 비-오일성 크림으로 제제화할 수 있다:

6-[4-(2-벤질-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노)-페닐]-5-메틸-4,5-디하이드로-2-H-피리다진-3-온;

5-{4-[2-(2,6-디클로로-벤질)-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노]-2-플루오로-페닐}-4,4-디메틸-2,4-디하이드로-피라졸-3-온;

5-[4-(2-벤질-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노)-페닐]-4,4-디메틸-2,4-디하이드로-피라졸-3-온;

5-{4-[2-(3-니트로-벤질)-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노]-2-플루오로-페닐}-4,4-디메틸-2,4-디하이드로-피라졸-3-온;

6-[4-(2-벤질-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노)-2-플루오로-페닐]-5-메틸- 4,5-디하이드로-2-H-피리다진-3-온.

실시예 5: 메소테라피용 주사가능한 용액(5 ml 바이알 )(양을 mg/ml로 표현함)

활성 성분:

밀리논 5

부형제:

소듐 메타바이설파이트, 락틱산 0.2-0.5

정화한 물로 5 ml까지 채움 5 ml

실시예 6: 약효 테스트

셀룰라이트는 다원성 병인(病因))을 갖는 문제로서, 지방 생성이 핵심적인 역활을 수행한다. 그러므로 최종 후보물질의 동정을 위해서 아주 충분하지는 않지만, 생체 외에서의 지방 분해 활성의 측정이 잠재적인 항 셀룰라이트 약물의 최초 스크리닝에서 핵심적인 요소가 된다. 그러므로 지방 분해 활성의 생체 외 테스트는 생체 내 효능을 평가하는 테스트와 관련될 수 있다.

생체 외 테스트

ㆍ지방 조직에 있는 트리글리세라이드의 지방 분해에 의해 생성된, 세포 외에 있는 글리세롤의 측정

분화 유도에 의한, 인간 지방 조직의 전구 세포(progenitor)인 전 지방세포(preadipocyte)(Promocell)의 일차 배양물로부터 얻은 인간 지방 조직에서 생체 외 지방 분해 테스트를 수행하였다. 글리세롤-3-포스페이트 데히드로게나제(성숙 한 지방 조직에서 발현되고, 전 지방세포에서는 발현되지 않는 효소)와, 세포 내 단계에서 축적되는 리피드를 Oil Red O (Sigma)로 분석함으로써, 실질적인 지방 조직 분화를 수행하였다.

PDE3 저해제를 다양한 농도에서 지방 조직과 함께 15분 동안 예비 배양하였고; 그런 후 지방 분해에 약한 자극(이소프레날린 1μM으로 얻어지는 최대 반응의 25％)을 유도할 수 있는 이소프레날린 10nM을 첨가하였다. 4시간 후에 배양물의 배지를 제거하였고, 각 웰에 축적된 세포 내 리피드의 양을 Oil Red O으로 측정하였다.

트리글리세라이드 가수분해에 의해 세포 외 배지로부터 방출된 글리세롤을 측정함으로써, 지방 분해 활성을 평가하였다.

이 테스트에서, 본원 발명에 따른 선택적 PDE3B 저해제를 포함하는, PDE3 저해제 함유 제형들은 비-선택적인 PDE 저해제(카페인, 테오필린) 함유하는 유사 제형과 비슷하거나 또는 보다 효과적임이 입증되었다.

배양된 인간 지방 조직에서 이소프레날린 10 nM에 의해 촉진되는, 글리세롤 방출에 대한 PDE 저해제의 효과

ㆍ지방 조직에서 cAMP 생성을 측정

cAMP는 세포내 전령으로서, cAMP 농도는 cAMP의 합성(아데닐레이트 사이클라제 활성) 및 분해(포스포디에스테라제 활성)에 따라 달라진다. 지방 분해제(아데닐레이트 사이클라제 활성화제), 항 지방 분해제(포스포디에스테라제 활성화제) 및 PDE3 저해제를 첨가한 식염수 용액에 지방 조직을 넣는다. 적절한 배양 기간 이후에, 일련의 프로세스를 중단하고, 세포 내에 형성된 cAMP를 추출한다. 세포 추출물을 동결-건조하고, 상업적으로 입수가능한 특정 비색계 효소 면역검정(enzyme immunoassay, EIA) (Amersham, Cayman)을 사용하여 분석한다. 제조업자의 지시 사항에 따라 cAMP 농도를 측정한다. 이 테스트에서, 본원 발명에 따른 PDE3 안타고니스트(antagonist)를 함유한 제형들이 비-선택적 PDE 저해제(카페인, 아미노필린)를 함유한 유사 제형보다 더 효과적임이 입증되었다.

생체 내 테스트

허벅지 상부 바깥쪽 부분에서 명백하게 셀룰라이트를 보인 10명의 건강한 성인 여성을 대상으로 실험하였다.

각각의 환자는 효능 및 안정성 평가를 위해 스스로 조절하도록 하였다. 임의적인 방식으로, 활성 성분(밀리논 1％)을 함유한 크림을 한쪽 허벅지 바깥쪽 부분에 얇게 발랐고, 다른 허벅지의 동일한 면적에 기초 크림(base cream)(활성 성분이 없음)을 발랐다.

대략 크림 2-3 cm를 처리하고, 흡수될 때까지 2-3분 동안 맛사지하는 과정을 2달 동안 매일 하루에 두 번씩 반복하였다.

테스트하는 동안에, 환자들은 운동 프로그램을 수행하지 않았고, 소정의 다이어트 섭취량 조절을 하지 않았다.

치료가 끝날 때까지 각 허벅지 주변, 무릎과 더 큰 전자(轉子)(trochanter)의 3분의 2를 주기적으로 측정하였다. 치료되지 않은 허벅지에서 범위의 감소(1.3-4.7 cm)에 비해, 약리학적으로 치료된 허벅지에서 범위의 감소는 2.9±0.7 cm이었다.

관찰 기간이 종료될 때, 혈중 PDE3 측정으로 화합물의 존재를 검출하지 못했다.

Claims

셀룰라이트 치료에 사용하기 위한, 활성 성분으로 PDE3 저해제를 함유하는 국소 투여용 약제학적 조성물.
제1항에 있어서, 상기 활성 성분으로 아이소형(isoform)인 PDE3B 저해제를 함유하는 것인 약제학적 조성물.
제1항 및 제2항에 있어서, 상기 저해제는 아나그렐리드(anagrelide), 실로스타졸(cilostazol), 피모벤단(pimobendan), 밀리논(milrinone), 암리논(amrinone), 올프리논(olprinone), 에녹시몬(enoximone), 사일로스타미드(cilostamide), 베스나리논(vesnarinone) 및 트레퀸신(trequinsin)으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
제3항에 있어서, 상기 저해제가 밀리논, 사일로스타미드 또는 트레퀸신인 것인 조성물.
제1항 및 제2항에 있어서, 상기 저해제가

a)6-[4-(2-벤질-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노)-페닐]-5-메틸-4,5-디하이드로-2-H-피리다진-3-온;

b)3-{2-[4-(4,4-디메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-1-H-피라졸-3-일)-2,3-디플루오로-페닐아미노]-6-옥소-사이클로헥스-1-에닐메틸}-벤조니트릴;

c)5-{4-[2-(2,6-디클로로-벤질)-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노]-2-플루오로-페닐}-4,4-디메틸-2,4-디하이드로-피라졸-3-온;

d)5-[4-(2-벤질-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노)-페닐]-4,4-디메틸-2,4-디하이드로-피라졸-3-온;

e)5-{4-[2-(3-니트로-벤질)-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노]-2-플루오로-페닐}-4,4-디메틸-2,4-디하이드로-피라졸-3-온; 및

f)6-[4-(2-벤질-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노)-2-플루오로-페닐]-5-메틸-4,5-디하이드로-2-H-피리다진-3-온으로 이루어진 군으로부터 선택되는 것인 조성물.
제1항 내지 제5항에 있어서, 상기 조성물이 겔, 스프레이 겔(spray gel), 크림, 비-오일성 크림(non-oily cream), 오일성-비-오일성 제제(oil-non-oil formulation), 연고 또는 반창고 제형으로 된 것인 조성물.
제1항 내지 제5항에 있어서, 상기 조성물이 국부 피부내 주사 또는 메소테라피에 적절한 제형으로 된 것인 조성물.
제7항에 있어서, 상기 조성물이 주사제 용액 제형으로 된 것인 조성물.
제1항 내지 제8항에 있어서, 상기 활성 성분의 함량이 0.1 내지 3 중량％인 것인 조성물.
제6항 및 제9항에 있어서, 상기 함량이 1 내지 2 중량％인 것인 조성물.
제7항 내지 제9항에 있어서, 상기 함량이 0.1 내지 1 중량％인 것인 조성물.
제1항 내지 제11항에 있어서, 미세 순환에 활성이 있는 화합물, 물질의 혼합물 또는 추출물을 더 포함하는 것인 조성물.
제12항에 있어서, 아르니카, 은행나무, 파인애플, 당귀(안젤리카 시니엔스 ( Angelica siniensis)) 또는 센텔라 아시아티카(Centella asiatica)의 추출물을 포함하는 것인 조성물.
제12항에 있어서, 상기 화합물이 사포닌 또는 플라본인 것인 조성물.
제14항에 있어서, 상기 화합물이 에스신인 것인 조성물.
제12항 내지 제15항에 있어서, 상기 미세순환에 활성이 있는 화합물, 물질의 혼합물 또는 추출물이 0.1 내지 4 중량％ 범위의 농도로 존재하는 것인 조성물.
PDE3 저해제의, 셀룰라이트 국소 치료용 또는 메소테라피 치료용 약제학적 조성물의 제조를 위한 용도.
제17항에 있어서, 아나그렐리드, 실로스타졸, 피모벤단, 밀리논, 암리논, 올프리논, 에녹시몬, 사일로스타미드, 베스나리논 및 트레퀸신으로 이루어진 군으로부터 선택되는 PDE3B 저해제의 용도.
제17항에 있어서,

a)6-[4-(2-벤질-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노)-페닐]-5-메틸-4,5-디하이드로-2-H-피리다진-3-온;

b)3-{2-[4-(4,4-디메틸-5-옥소-4,5-디하이드로-1-H-피라졸-3-일)-2,3-디플루오로-페닐아미노]-6-옥소-사이클로헥스-1-에닐메틸}-벤조니트릴;

c)5-{4-[2-(2,6-디클로로-벤질)-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노]-2-플루오로-페닐}-4,4-디메틸-2,4-디하이드로-피라졸-3-온;

d)5-[4-(2-벤질-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노)-페닐]-4,4-디메틸- 2,4-디하이드로-피라졸-3-온;

e)5-{4-[2-(3-니트로-벤질)-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노]-2-플루오로-페닐}-4,4-디메틸-2,4-디하이드로-피라졸-3-온; 및

f)6-[4-(2-벤질-3-옥소-사이클로헥스-1-에닐아미노)-2-플루오로-페닐]-5-메틸-4,5-디하이드로-2-H-피리다진-3-온으로 이루어진 군으로부터 선택되는 PDE3B 저해제의 용도.