KR20070022906A - Composition and food for prevention and/or treatment of disease to liver and nerve system with extracts of Wasabia japonica - Google Patents

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KR20070022906A KR1020050076893A KR20050076893A KR20070022906A KR 20070022906 A KR20070022906 A KR 20070022906A KR 1020050076893 A KR1020050076893 A KR 1020050076893A KR 20050076893 A KR20050076893 A KR 20050076893A KR 20070022906 A KR20070022906 A KR 20070022906A
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Abstract

본 발명은 고추냉이 추출물을 포함하는 간, 신경질환 예방 및 치료용 조성물과 건강식품에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 고추냉이 추출물이 세포수준에서 야기된 산화적 손상으로부터 세포보호효과를 확인함으로서 여러 가지 만성질환을 예방 및 치료용 조성물에 적용할 수 있고, 이러한 효과를 가진 고추냉이 추출물을 츄잉껌, 캔디, 비스켓, 아이스크림, 음료 및 초콜렛 등의 음식물에 함께 배합함으로써, 청소년, 성인 및 노인층의 광범위한 계층까지 언제 어디서나 늘 간편하게 섭취할 수 있어서 지속적인 음용효과를 기대할 수 있는 고추냉이 추출물을 포함하는 간, 신경질환 예방 및 치료용 조성물과 건강식품에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for preventing and treating liver and neurological diseases and health foods including horseradish extract, and more particularly, to confirm the effect of the horseradish extract on the cellular protection from oxidative damage caused at the cellular level. Chronic diseases can be applied to preventive and therapeutic compositions, and horseradish extracts with these effects can be blended with foods such as chewing gum, candy, biscuits, ice cream, beverages, and chocolates to broader levels of youth, adults, and the elderly. It always relates to a composition for preventing and treating liver and neurological diseases and health foods, including horseradish extract, which can be easily consumed anytime and anywhere and can be expected to have a continuous drinking effect.

고추냉이 추출물, 산화적 손상, 세포보호효과 Wasabi extract, oxidative damage, cytoprotective effect

Description

고추냉이 추출물을 포함하는 간, 신경질환 예방 및 치료용 조성물과 식품{Composition and food for prevention and/or treatment of disease to liver and nerve system with extracts of Wasabia japonica}Composition and food for prevention and / or treatment of disease to liver and nerve system with extracts of Wasabia japonica}

도 1은 위상차 현미경에서 200 μM H2O2로 생쥐의 간세포에 산화적 손상을 일으키고 고추냉이 추출물 100 ∼ 200 ㎍/ml 농도에서 간세포 보호효능을 나타낸 것이고,1 shows oxidative damage to hepatocytes of mice with 200 μM H 2 O 2 under a phase contrast microscope, and shows hepatocyte protective effect at 100-200 ㎍ / ml horseradish extract.

도 2는 200 μM H2O2로 생쥐의 간세포에 산화적 손상으로 인한 세포사멸을 유도하고 고추냉이 추출물 100 ∼ 200 ㎍/ml 농도에서 세포독성 보호효능을 나타낸 것이고,Figure 2 induces apoptosis due to oxidative damage to the liver cells of the mouse with 200 μM H 2 O 2 and showing the cytotoxic protective effect at the concentration of horseradish extract 100 ~ 200 ㎍ / ml,

도 3은 피오크로모사이토마[Pheochromocytoma-12(PC12)] 세포는 래트(rat)의 부신(adrenal gland)으로부터 분리된 갈색세포종으로 200 μM H2O2로 산화적 손상을 일으키고, 고추냉이 추출물 200 ∼ 300 ㎍/ml 농도에서 위상차 현미경으로 PC12 세포 보호효능을 나타낸 것이고,3 is a pheochromocytoma-12 (PC12) cells are pheochromocytoma isolated from the adrenal gland of rats, causing oxidative damage with 200 μM H 2 O 2 , wasabi extract Representative effect of PC12 cell protection under phase contrast microscope at 200-300 ㎍ / ml concentration,

도 4는 위상차 현미경에서 200 μM 하이포크산틴과 0.5 mU 크산틴 옥시다아제로 생쥐의 간세포에 산화적 손상을 일으키고 고추냉이 추출물 25 ∼ 200 ㎍/ml 농도에서 간세포 보호효능을 나타낸 것이고, 여기서 H-X라 함은 200 μM 하이포크산틴과 0.5 mU 크산틴 옥시다아제로 세포에 산화적 스트레스를 일으킨 경우이고,4 shows oxidative damage to liver cells of mice with 200 μM hypoxanthine and 0.5 mU xanthine oxidase under a phase contrast microscope, and shows hepatocyte protection at a concentration of 25-200 μg / ml of wasabi extract, where HX is 200 μM hypoxanthine and 0.5 mU xanthine oxidase caused oxidative stress in the cells,

도 5는 200 μM 하이포크산틴과 0.5 mU 크산틴 옥시다아제로 생쥐의 간세포에 산화적 손상으로 인한 세포사멸을 유도하고 고추냉이 추출물 25 ∼ 200 ㎍/ml 농도에서 세포독성 보호효능을 나타낸 것이다.Figure 5 shows the cytotoxic protective effect at the concentration of horseradish extract 25 ~ 200 ㎍ / ml with 200 μM hypoxanthine and 0.5 mU xanthine oxidase induces apoptosis due to oxidative damage to the liver cells of mice.

본 발명은 고추냉이 추출물을 포함하는 간, 신경질환 예방 및 치료용 조성물 및 식품에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 고추냉이 추출물이 생쥐의 간세포 및 래트(rat)의 PC12 세포에서 야기된 산화적 손상으로부터 세포보호효과를 확인함으로서 간, 신경질환을 예방 및 치료용 조성물에 적용할 수 있고, 이러한 효과를 가진 고추냉이 추출물을 츄잉껌, 캔디, 비스켓, 아이스크림, 음료 및 초콜렛 등의 음식물에 함께 배합함으로써, 청소년, 성인 및 노인층의 광범위한 계층까지 언제 어디서나 늘 간편하게 섭취할 수 있어서 지속적인 음용효과를 기대할 수 있는 고추냉이 추출물을 포함하는 간, 신경질환 예방 및 치료용 조성물 및 식품에 관한 것이다.The present invention relates to a composition and food for preventing and treating liver and neurological diseases, including horseradish extract, and more specifically, wasabi extract from oxidative damage caused in liver cells of rats and PC12 cells of rats. By confirming the cytoprotective effect can be applied to the composition for preventing and treating liver and neurological diseases, by combining horseradish extract with such effects in foods such as chewing gum, candy, biscuits, ice cream, drinks and chocolate, To a wide range of adults and seniors, anytime, anywhere can be easily consumed anytime, and relates to a composition and food for preventing and treating liver and neurological diseases, including horseradish extract can expect a continuous drinking effect.

질병의 90%는 활성산소에 의하여 발생하며 90년대 이후 의학계 최대의 과제는 활성산소의 공격에 어떻게 대응하느냐에 관한 것으로 활성산소는 질병이나 노화 를 촉진하는 인류 최대의 적이라 할 수 있다. 정상적인 산소는 체내에서 약 100초 이상 머무는데 비해 유해산소(활성산소)는 1백만 ∼ 1억분의 1초만 머물러도 세포막을 형성하는 주성분인 지질을 과산화지질로 만들어, 세포와 적혈구 파괴의 악영향을 미치며 세포는 하루 평균 1만회 이상의 유해산소 공격을 받고 있다. 또한, 생리적인 조건하에서 3 ∼ 10 %의 분자상 산소는 활성산소로 변하게 되며 대부분의 활성산소는 다양한 분자와 재빨리 반응하여 세포내 기능에 영향을 미치게 된다90% of diseases are caused by free radicals, and the biggest problem in the medical field since the 1990s is how to respond to free radical attacks. Free radicals are the biggest enemy of mankind to promote disease and aging. Normal oxygen stays in the body for about 100 seconds or more, while harmful oxygen (active oxygen) remains lipid peroxide, which is the main component of the cell membrane, even if only 1 million to 100 million seconds stays, which adversely affects cell and red blood cell destruction. Cells are averaging more than 10,000 harmful oxygen attacks per day. In addition, under physiological conditions, 3-10% of molecular oxygen is converted into free radicals, and most free radicals react rapidly with various molecules to affect intracellular function.

여기서 활성산소라 함은 유리 래디컬(free radical)인 유해산소로 활동 주기가 대단히 짧은 분자이며, 전자의 짝을 잃어서 불안정한 구조로 되어 있다. 이러한 활성산소는 스스로를 안정화시키기 위하여 주변의 다른 분자로부터 전자를 빼앗게 되고, 이렇게 하여 자신의 전자를 빼앗긴 분자도 역시 유리 래디컬이 되어 근처의 다른 분자로부터 전자를 빼앗게 된다.Here, active oxygen is a free radical, harmful oxygen, a molecule having a very short activity cycle, and having an unstable structure due to the loss of an electron pair. These free radicals deprive electrons from other molecules in order to stabilize themselves, and thus, the molecules deprived of their electrons also become free radicals and deprive electrons from other molecules nearby.

상기와 같은 과정이 연속됨으로서 세포가 손상을 받게 되고 질병으로 직결되게 된다. 활성산소의 피해는 직접, 간접적으로 암, 심장질환, 뇌질환과 같은 성인병과 위궤양, 고혈압, 피부의 노화, 만성 피로증후군, 동맥질환, 알레르기, 천식, 관절염, 파킨스씨병, 백내장, 당뇨병, 당뇨병성 망막증 등과 같은 질병과 노화의 주된 원인이 된다고 알려지고 있다.As the above process continues, the cells are damaged and directly connected to the disease. Free radical damage can directly and indirectly affect adult diseases such as cancer, heart disease, and brain diseases, gastric ulcers, hypertension, aging of the skin, chronic fatigue syndrome, arterial diseases, allergies, asthma, arthritis, Parkinson's disease, cataracts, diabetes, and diabetes. It is known to be a major cause of aging and diseases such as retinopathy.

본 발명에서 활성산소 생성계에 이용한 크산틴 옥시다아제[Xanthine oxidase (Xanthine : oxygen oxidoreductase, EC 1.2.3.2)]는 분자상의 산소를 수소(전자)수용체로 이용하여 크산틴(xanthine) 또는 하이포크산틴(hypoxanthine)을 요산 (uric acid)형으로 산화하는 반응을 촉매하며, 모든 퓨린(purine)의 마지막 산화과정에 속도조절 효소(rate-limiting enzyme)로 작용한다. 상기 크산틴 또는 하이포크산틴과 크산틴 옥시다아제 반응의 생성물인 요산은 통풍의 원인이 되기도 하는데, 이 효소의 저해효과는 유리 래디컬의 생성 억제와 더불어 생물학적으로 중요한 의의를 가진다. 이러한 크산틴 옥시다아제의 저해물질로는 다양한 탄닌류 및 관련 페놀성 물질들이 보고되어 있다.The xanthine oxidase (Xanthine oxidase (EC 1.2.3.2)) used in the active oxygen generation system in the present invention is a xanthine or hypoxanthine using molecular oxygen as a hydrogen (electron) receptor. ) Catalyzes the oxidation of uric acid into uric acid, and acts as a rate-limiting enzyme in the final oxidation of all purines. Uric acid, which is a product of the xanthine or hypoxanthine and xanthine oxidase reaction, may also cause gout, and the inhibitory effect of the enzyme has biological significance as well as inhibition of free radical production. As such inhibitors of xanthine oxidase, various tannins and related phenolic substances have been reported.

최근 유리 래디컬 소거(free radical scavenger) 역할을 하는 것 중에서 여러 가지 천연물 성분의 개발에 대한 연구가 시도되고 있다. 이러한 연구의 결과, 현재 가장 주목받고 있는 성분들은 식물영양소인 피토뉴트리언트(Phytonutrients)로서, 세계적으로 수많은 논문이 발표되고 있는데, 자몽, 오렌지, 레몬, 탄제린 등에서 추출한 시트러스 바이오플라보노이드(citrus bioflavonoid)와 소나무 껍질과 포도씨에서 추출한 피크노제놀(pycnogenol)이라 불리는 성분 등이 보고되어 있다. 상기 성분외에도 토코페롤, 아스코르빈산과 그 유도체들, 카로티노이드, 플라보노이드계 화합물들, 인지질, 갈색화 반응생성물, 아미노산, 펩티드, 단백질들, 향신료 추출물 등이 있다.Recently, studies on the development of various natural ingredients have been attempted among free radical scavengers. As a result of this research, the most noticeable ingredients are Phytonutrients, which are phytonutrients, and numerous papers are published around the world. Citrus bioflavonoids extracted from grapefruit, orange, lemon, and tangerine A component called pycnogenol extracted from pine bark and grape seeds has been reported. In addition to the above components, there are tocopherols, ascorbic acid and derivatives thereof, carotenoids, flavonoid compounds, phospholipids, browning reaction products, amino acids, peptides, proteins, spice extracts, and the like.

한편, 향신료 추출물에 관한 연구는 1940 년대부터 시작된 이래로 최근 관심이 높아지고 있는 분야로서, 특히 로즈마리, 세이지 추출물은 FDA로부터 승인을 받았다. 항신료 추출물로는 상기 성분 외에도 육두구, 정향, 고추 등 많은 성분들이 알려져 있는데, 종류에 따라 정도의 차이는 있으나 유리 래디컬 소거(free radical scavenger)효능을 인정받고 있으며, 기타, 쌀겨에 함유된 오리자놀과 함께 구아이약 수지, 참기름에 들어있는 세시물, 세사몰린, 세사민 등이 많이 알려져 있고 봉선화추출물, 루틴, 소목을 포함한 각종 한약재나 식용식물에서도 이러한 효능이 있다고 보고되고 있다.On the other hand, the research on the spice extract has been a field of increasing interest since the beginning of the 1940s, in particular rosemary, sage extract has been approved by the FDA. In addition to the above ingredients, many ingredients such as nutmeg, cloves, and red pepper are known as anti-drug extracts. Although there are differences in the degree depending on the type, the free radical scavenger effect is recognized, and the other, oryzanol contained in rice bran Along with Guai medicinal resin, sesame oil in sesame oil, sesamolin, sesamin, etc. are known a lot, and it is reported that such medicinal herbs and edible plants, including balsam extract, rutin, joiner.

한편, 고추냉이[와사비아 자포니카(Wasabia japonica=W. koreana), 재팬 호오스래디쉬(Japanese horseradish)]는 십자화과에 속하는 식물로 일본산 고추냉이 [와사비아 자포니카(Wasabia japonica)]와 서양산 고추냉이[고추냉이무, 호오스래디쉬(Horseradish), 코코레리아 아모라시아(Cocholearia armoracia L.)]로 분류된다. On the other hand, wasabi (Wasabia japonica (W. koreana), Japanese horseradish) is a plant belonging to the cruciferous family of Japanese wasabi (Wasabia japonica) and horseradish. Wasabi (Horse radish, Horseradish, Cocoholearia armoracia L.).

우리나라 울릉도 및 일본의 산과 계곡에 야생 또는 재배하는 다년생 초본으로 높이 30 cm 내외이고, 근경은 비후하며, 근생엽은 여러 겹으로 모여 나며 호생한다. 엽신은 심장형이고, 거치가 있으며 꽃은 5 ∼ 6 월에 줄기 끝에 백색의 십자화가 정생 또는 총생화서로 피고, 과실은 각과로 끝에 부리모양의 돌기가 있다. 생약으로는 근경을 사용하며 산규근[와사비애 리조마(Wasabiae Rhizoma)]이라 한다. 주요 성분으로는 근경에 시니그린(sinigrin), 아릴이소티오시아네이트(allylisothiocyanate), 부틸이소티오시아네이트(butylisothiocyanate) 등이 함유되어 있다.It is a perennial herb that is wild or cultivated in the mountains and valleys of Korea's Ulleungdo and Japan. It is about 30 cm in height. The folies are heart-shaped, fermented, and the flowers bloom in May-June with white cruciferous flowers at the end of the stems or total flowers. Root is used as a herbal medicine and is called San Kyu-Geun (Wasabiae Rhizoma). The main components include rhizome, sinigrin, arylisothiocyanate, and butylisothiocyanate.

상기 식물은 뿌리에 상처를 내거나 껍질을 벗기면 독특한 냄새와 매운맛을 나타내는데, 이러한 향미 때문에 서유럽에서는 적당히 가공하여 식욕증진이나 소화촉진 식품으로 사용하여 왔다.When the plant is wound or peeled off the roots, it exhibits a unique smell and spicy taste. Due to this flavor, the plant has been suitably processed and used as an appetite promoting or digestive food.

상기한 톡특한 향미의 주요성분은 고추냉이 정유의 주요 휘발성 성분인 아릴 이소티오시아네이트로 밝혀졌다. 이러한 아릴이소티오시아네이트는 식물 내에 처음부터 존재하는 것이 아니라, 조직에 들어있는 티오글루코사이드의 일종인 시니그린이 불활성인 상태로 존재하다가 일단 조직을 절단하거나 상처를 입히면 조직 중에 들어있는 효소로서 미로설파타아제(myrosulfatase)와 티오글루코시다아제(thioglucosidase)의 복합효소인 미로시나제(myrosinase)의 작용으로 상기 시니그린이 가수분해되면서 글루코오즈와 황산수소 칼륨 및 아릴이소티오시아네이트가 생성된다. The main ingredient of the above-mentioned flavor is found to be aryl isothiocyanate, which is the main volatile component of horseradish essential oil. Such arylisothiocyanates are not present from the beginning of the plant, but are present in an inactive state of cinigrin, which is a kind of thioglucoside in the tissue, and once the tissue is cut or injured, it is a myrosulpa as an enzyme contained in the tissue. As the synigrin is hydrolyzed by the action of myrosinase, a complex enzyme of myrosulfatase and thioglucosidase, glucose, potassium hydrogen sulfate and arylisothiocyanate are produced.

아릴이소티오시아네이트는 맛과 향으로 인한 식욕 및 소화 촉진 작용 외에도 항균작용 등에 대한 보고가 있으며, 최근 향신료를 이용한 연구동향으로는 식품첨가물 뿐만 아니라 화장품 업계, 아로마 테라피(aroma therapy) 등 보다 넓은 영역에서 연구가 시도되어지고 있다. In addition to promoting appetite and digestion due to taste and aroma, arylisothiocyanate has been reported for antibacterial effects. Recent research trends using spice are not only food additives but also the cosmetics industry and aromatherapy. Research is being attempted at

예전부터, 고추냉이는 근경을 식욕증진, 신미건위, 방부, 살균에 사용하여 왔는데, 특히 일본에서는 민간에서 생선 및 조류고기의 중독에 즙을 내어 사용하고 있다.From the past, horseradish has been used to increase appetite, sourness, preservation, and sterilization, especially in Japan, where it is used for the poisoning of fish and algae.

한편, 고추냉이(와사비) 김치 제조방법이 개시되어 있고[한국특허등록 제10-0483249호], 고추냉이 저장용 그릇이 공지되어 있으며[한국실용신안등록 제20-0356802호], 양고추냉이로부터 추출한 양고추냉이 정유를 활성성분으로 함유하는 저장물 해충 방제제가 개시되어 있다[한국특허등록 제10-0391827호]. On the other hand, wasabi (wasabi) kimchi manufacturing method is disclosed [Korean Patent Registration No. 10-0483249], wasabi storage bowl is known [Korean Utility Model Registration No. 20-0356802], from horseradish A stock pest control agent containing an extracted horseradish essential oil as an active ingredient is disclosed [Korean Patent Registration No. 10-0391827].

그러나, 상기 기술은 아직 범용화되지 못하고 있는 실정이며, 고추냉이를 이용한 대부분의 연구는 고추냉이 추출물의 항균효과, 고추냉이 근경의 아릴이소티오 시아네이트 함량 또는 그 성분에 관한 연구가 대부분이다.However, the technology has not yet been widely used, most of the studies using wasabi was the study on the antimicrobial effect of wasabi extract, arylisothio cyanate content of horseradish root or its components.

특히, 오늘날 세포의 산화로 인한 질환에 대한 인식이 높아짐으로서 화학적 반응이 아닌 동물세포 등을 이용하여 산화적 손상(oxidative stress)를 유발하고 고추냉이 추출물을 이용하여 세포보호 효능에 관한 연구는 국내 외에 발표된 사례가 없으며, 또한, 이를 음료, 츄잉껌, 캔디, 비스켓 및 아이스크림 등의 음식물에 적용한 예 또한 없었다. In particular, as the awareness of diseases caused by the oxidation of cells is increased, oxidative stress is induced by using animal cells rather than chemical reactions, and studies on cell protection efficacy by using horseradish extract are not available in Korea. There have been no published cases, and no examples have been applied to foods such as beverages, chewing gum, candy, biscuits and ice cream.

이에, 본 발명의 발명자들은 고추냉이 추출물이 산화적 스트레스에 대한 세포보호효과를 가짐을 확인하여 본 발명을 완성하였다.Thus, the inventors of the present invention confirmed that horseradish extract has a cytoprotective effect against oxidative stress to complete the present invention.

따라서, 본 발명은 종래에 고추냉이는 향신료로서 식욕증진, 신미건위, 방부, 살균 등에 제한적으로 사용하던 기존의 방법을 탈피하여 고추냉이 추출물을 음식물에 첨가 배합함으로써, 고추냉이 자체가 지니고 있는 다양한 생리적 활성을 살릴 뿐만아니라, 여러 가지 만성질환을 유발하는 세포의 산화적 스트레스에 대한 보호효과를 도모할 수 있어 특히 간, 신경질환의 예방 및 치료효과를 가지는 조성물로서 사용하고, 또한 다양한 음식물에 첨가 배합함으로써 간단하게 상용할 수 있도록 한 고추냉이 추출물을 포함하는 간, 신경질환 예방 및 치료용 조성물과 세포의 산화적 스트레스에 대한 보호작용을 나타내는 식품을 제공하는데 그 목적이 있다.Therefore, in the present invention, wasabi was added to the food by adding wasabi extract to the food by escaping the conventional methods used in the limited appetite, sour health, preservation, sterilization as a spice washer, various physiologically possessed wasabi itself It not only improves the activity but also protects against the oxidative stress of cells that cause various chronic diseases, so it is especially used as a composition that has the effect of preventing and treating liver and neurological diseases, and is also added to various foods. By providing a composition for preventing and treating liver and neurological diseases, and a food which exhibits a protective action against oxidative stress of cells, including wasabi extract, which can be easily commercialized.

본 발명은 고추냉이 추출물을 포함하는 간, 신경질환 예방 및 치료용 조성물을 특징으로 한다.The present invention is characterized by a liver, neurological disease prevention and treatment composition comprising horseradish extract.

또한, 본 발명은 고추냉이 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하며 세포의 산화적 스트레스에 대한 보호작용을 나타내는 건강 식품을 포함한다.In addition, the present invention is characterized by including wasabi extract and includes a health food exhibiting a protective action against oxidative stress of cells.

이하 본 발명을 상세하게 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명은 고추냉이 추출물이 생쥐의 간세포와 래트(rat)의 PC12 세포에서 야기된 산화적 손상으로부터 세포보호효과를 확인함으로서 간 및 신경질환의 예방과 치료용 조성물에 적용할 수 있고, 이러한 효과를 가진 고추냉이 추출물을 츄잉껌, 캔디, 비스켓, 아이스크림, 음료 및 초콜렛 등의 음식물에 함께 배합함으로써, 청소년, 성인 및 노인층의 광범위한 계층까지 언제 어디서나 늘 간편하게 섭취할 수 있어서 지속적인 음용효과를 기대할 수 있는 고추냉이 추출물을 포함하는 간 및 신경질환 예방 및 치료용 조성물 및 건강식품에 관한 것이다.The present invention can be applied to the composition for the prevention and treatment of liver and neurological diseases by confirming the cytoprotective effect of horseradish extract from oxidative damage caused in liver cells of rats and PC12 cells of rats. By combining the horseradish extract with foods such as chewing gum, candy, biscuits, ice cream, beverages and chocolate, it can be easily consumed anytime and anywhere to a wide range of teenagers, adults, and the elderly. It relates to a composition and health food for preventing and treating liver and neurological diseases comprising the extract.

본 발명은 고추냉이 추출물을 만성질환의 원인이 되는 세포의 산화적 스트레스에 대한 보호효과를 갖는 성분으로 사용하여 만성질환, 특히 간 및 신경질환에 대한 예방 및 치료 효과를 가지는 조성물로 사용하고. 이를 식품에 적용하고자 하는 고추냉이 추출물의 새로운 용도에 관한 것이다.The present invention uses horseradish extract as a component having a protective effect against the oxidative stress of the cells that cause chronic diseases, as a composition having a prophylactic and therapeutic effect against chronic diseases, particularly liver and neurological diseases. It relates to a new use of horseradish extract to be applied to food.

특히 본 발명에서는 단순한 화학반응이 아닌 생쥐의 간세포주 (Hepa 1c1c7 murine hepatoma cell line)를 이용하여 H2O2 및 크산틴 옥시다아제와 하이포크산틴 의 반응에 따라 생성된 활성산소로 산화적 손상(oxidative stress)을 유발한 후, 고추냉이 추출물을 이용하여 그 효능을 평가한 결과, H2O2로 인한 세포의 산화적 손상의 경우 100 ㎍/ml 농도에서 세포보호효과를 나타나기 시작하였으며, 크산틴 옥시다아제와 하이포크산틴의 반응에 따른 손상의 경우 25 ㎍/ml 농도에서부터 탁월한 세포보호 효능이 나타남을 확인하였다.In particular, in the present invention, oxidative stress with oxidative stress generated by the reaction of H 2 O 2 and xanthine oxidase and hypoxanthine using a hepatic cell line (Hepa 1c1c7 murine hepatoma cell line) of the mouse rather than a simple chemical reaction. ), And the results were evaluated using horseradish extract, the oxidative damage of cells due to H 2 O 2 began to show a cytoprotective effect at a concentration of 100 ㎍ / ml, xanthine oxidase and In case of damage caused by hypoxanthine reaction, it was confirmed that excellent cytoprotective effect appeared from 25 ㎍ / ml concentration.

또한, 본 발명에서 이용한 PC12 세포는 래트(rat)의 부신 피오크로모사이토마(pheochromocytoma)에서 유래한 것으로 카테콜아민(catecholamines)을 생합성, 저장, 분비하며, 타이로신 하이드록실라제[tyrosine hydroxylase (EC 1.14.16.2)]를 생합성한다 [Greene, L.A. and Rein, G. (1977) Short-term regulation of catecholamine biosynthesis in a nerve growth factor responsive clonal line of rat pheochromocytoma cells. J. Neurochem. 30: 549-555].In addition, the PC12 cells used in the present invention are derived from rat adrenal pheochromocytoma, biosynthesis, storage and secretion of catecholamines, and tyrosine hydroxylase (EC 1.14). .16.2)] [Greene, LA] and Rein, G. (1977) Short-term regulation of catecholamine biosynthesis in a nerve growth factor responsive clonal line of rat pheochromocytoma cells. J. Neurochem. 30: 549-555.

특히, PC12 세포는 신경세포의 분화 및 크로마핀(chromaffin) 세포의 기능, 학습-습관화 반응(learning-habituation) 등의 연구의 모델로도 이용되고 있다 [Greene, L.A. and Tischler, A.S. (1982) PC12 pheochromocytoma cultures in neurobiological research: In Advance in cellular neurobiology. vol. 3. (ed. Feroroff S.), 373. Academic Press, New York.]. 본 발명에서는 PC12 세포에 H2O2로 산화적 스트레스로 신경세포 손상을 유발하고 고추냉이 추출물에 의한 보호효능을 확인하였다.In particular, PC12 cells have been used as a model for the study of neuronal differentiation, chromaaffin cell function, learning-habituation, etc. [Greene, LA and Tischler, AS (1982) PC12 pheochromocytoma cultures in neurobiological research: In Advance in cellular neurobiology. vol. 3. (ed. Feroroff S.), 373. Academic Press, New York.]. In the present invention, H 2 O 2 induces nerve cell damage by oxidative stress on PC12 cells and confirmed the protective effect by wasabi extract.

본 발명의 고추냉이 추출물로는 일본산 고추냉이 또는 서양산 고추냉이를 모 두 사용사능하며, 물, 탄소수 1 ∼ 6 의 저급알코올, 또는 이들의 혼합물을 추출용매로 사용하여 추출한 것을 사용할 수 있다.As a horseradish extract of the present invention, both Japanese horseradish or horseradish can be used, and water, lower alcohol having 1 to 6 carbon atoms, or a mixture thereof can be used as an extraction solvent.

본 발명에서는 일본산 고추냉이를 사용하여 그 효능을 측정하였으며, 고추냉이를 용매로 에탄올을 사용하고, 초음파를 조사하여 추출하는 방법을 사용한다. 즉, 본 발명에서 고추냉이 추출물을 얻는 방법을 더욱 상세히 설명하면 다음과 같다.In the present invention, the efficacy was measured using Japanese wasabi, using a method of extracting wasabi was extracted by using ethanol as a solvent, ultrasonic irradiation. That is, the method of obtaining wasabi extract in more detail in the present invention.

먼저 시료인 고추냉이의 근경을 액체질소로 순간 동결하여 분쇄기로 분말로 만든후 에탄올을 넣고 초음파로 20 ∼ 40분 동안 2 ∼ 3회 반복 추출한 다음, 도요여지(Toyo filter) No.2로 여액을 얻어 감압농축기 (Rotary vacuum evaporator)로 45 ∼ 55 ℃에서 감압농축시키고 농축물은 동결건조하여 연두색의 고추냉이 건조분말을 얻고, 이를 -70 ℃의 온도에서 보관하는 방법을 사용하였다.First, the root of horseradish was sampled with liquid nitrogen, and then it was made into a powder by a grinder. The resultant was concentrated under reduced pressure at 45 to 55 ° C. using a rotary vacuum evaporator, and the concentrate was lyophilized to obtain a light green horseradish dried powder, which was stored at a temperature of −70 ° C.

상기와 같은 제조방법으로 제조된 고추냉이 추출물이 H2O2 및 하이포크산틴과 크산틴 옥시다아제로 유도한 산화적 스트레스에 대한 보호효능이 우수함을 확인하고, 이를 츄잉검, 캔디, 비스켓, 아이스크림, 음료, 초콜렛 등에 적용할 수 있는 바, 이렇게 음식물에 함께 배합함으로써, 청소년, 성인 및 노인층의 광범위한 계층까지 언제 어디서나 늘 간편하게 섭취할 수 있어서 지속적인 음용효과를 기대할 수 있는 것이다.Wasabi extract prepared by the manufacturing method as described above is excellent in the protective effect against oxidative stress induced by H 2 O 2 and hypoxanthine and xanthine oxidase, and chewing gum, candy, biscuits, ice cream, beverages In addition, it can be applied to chocolate, etc. By blending together in the food, a wide range of adolescents, adults and the elderly can be easily consumed anytime, anywhere, so that continuous drinking effects can be expected.

본 발명에서와 같이, 고추냉이 추출물을 음식물에 적용하는 경우에는 전체 조성물에 대하여 고추냉이 추출물을 필수적으로 0.1 ∼ 1.0 중량% 함유하도록 사용 하는 것이 바람직하다. 만일 그 함량을 0.1 중량% 미만으로 하면 본 발명이 목적으로하는 효과를 얻을 수 없어 바람직하지 않고, 반면에 상기 범위를 초과하여 과량으로 첨가하면, 비경제적이면서 완성제품의 맛, 색깔에 영향을 미칠 수 있기 때문에 바람직하지 않다.As in the present invention, when the horseradish extract is applied to food, it is preferable to use the horseradish extract essentially 0.1 to 1.0% by weight based on the total composition. If the content is less than 0.1% by weight, it is not desirable to achieve the desired effect of the present invention, while if it is added in excess of the above range, it is uneconomical and affects the taste and color of the finished product. It is not desirable because it can.

본 발명의 고추냉이 추출물을 포함하는 간, 신경질환 예방 및 치료용 조성물은 임상 투여시에 경구 또는 비경구로 투여, 예를 들어 정맥 내, 피하, 복강 내 또는 국소 적용할 수 있으며, 일반적인 의약품 및 건강식품의 형태로 사용될 수 있다.Liver, neurological disease prevention and treatment compositions comprising horseradish extract of the present invention can be administered orally or parenterally, for example, intravenous, subcutaneous, intraperitoneal or topical application during clinical administration, general medicine and health It can be used in the form of food.

경구 투여용 제형, 예를 들면 정제, 트로키제(troches), 로렌지(lozenge), 수용성 또는 유성현탁액, 조제분말 또는 과립, 에멀젼, 하드 또는 소프트 캡슐, 시럽 또는 엘릭실제(elixirs)로 제제화된다. 정제 및 캡슐 등의 제형으로 제제하기 위해 락토오스, 사카로오스, 솔비톨, 만니톨, 전분, 아밀로펙틴, 셀룰로오스 또는 젤라틴과 같은 결합제; 디칼슘 포스페이트와 같은 부형제; 옥수수 전분 또는 고구마 전분과 같은 붕괴제; 스테아린산 마그네슘, 스테아린산 칼슘, 스테아릴푸마르산 나트륨 또는 폴리에틸렌글리콜 왁스와 같은 윤활유가 함유된다. 캡슐제형의 경우는 상기에서 언급한 물질 이외에도 지방유와 같은 액체 담체를 함유한다.Formulations for oral administration such as tablets, troches, lozenges, aqueous or oily suspensions, prepared powders or granules, emulsions, hard or soft capsules, syrups or elixirs. Binders such as lactose, saccharose, sorbitol, mannitol, starch, amylopectin, cellulose or gelatin for preparation in formulations such as tablets and capsules; Excipients such as dicalcium phosphate; Disintegrants such as corn starch or sweet potato starch; Lubricants such as magnesium stearate, calcium stearate, sodium stearyl fumarate or polyethylene glycol wax. Capsules contain liquid carriers, such as fatty oils, in addition to the substances mentioned above.

또한, 본 발명의 고추냉이 추출물을 포함하는 간, 신경질환 예방 및 치료용 조성물은 비경구로 투여할 수 있으며, 비경구 투여는 피하주사, 정맥주사, 근육 내 주사 또는 흉부 내 주사 주입방식에 의한다. 비경구 투여용 제형으로 제제화하기 위해서는 고추냉이 추추물을 안정제 또는 완충제와 함께 물에서 혼합하여 용액 또는 현탁액으로 제조하고 이를 앰플 또는 바이알의 단위 투여형으로 제제한다. In addition, liver, neurological disease prevention and treatment compositions comprising horseradish extract of the present invention can be administered parenterally, parenteral administration is by subcutaneous injection, intravenous injection, intramuscular injection or intrathoracic injection injection method . To formulate into a parenteral formulation, wasabi extract is mixed in water with a stabilizer or buffer to prepare a solution or suspension, which is formulated in unit dosage forms of ampoules or vials.

또한, 상기 유효성분의 투여 용량은 일반적으로 성인 환자 체중 1 kg 당 1 ∼ 50 mg/일이고, 바람직하기로는 5 ∼ 20 mg/일이며, 의사 또는 약사의 판단에 따라 일정 시간 간격으로 1 ∼ 수회, 바람직하기로는 하루 2 ∼ 3 회 분할투여할 수 있다. In addition, the dosage of the active ingredient is generally 1 to 50 mg / day per kg body weight of an adult patient, preferably 5 to 20 mg / day, 1 to several times at regular intervals according to the judgment of the doctor or pharmacist Preferably, it can be dividedly administered 2-3 times a day.

또한, 본 발명은 고추냉이 추출물을 유효성분으로 하는 건강보조제를 포함한다. 상기 건강보조제는 고추냉이 추출물을 음료, 차류, 향신료, 껌, 과자류 등의 식품소재에 첨가하거나, 캡슐화, 분말화, 현탁액 등으로 제조한 식품으로, 이를 섭취할 경우 건강상 특정한 효과를 가져오는 것을 의미하나, 일반 약품과는 달리 식품을 원료로 하여 약품의 장기복용시 발생할 수 있는 부작용 등이 없는 장점이 있다.In addition, the present invention includes a health supplement comprising horseradish extract as an active ingredient. The health supplement is a food prepared by adding horseradish extract to food materials, such as beverages, teas, spices, gums, confectionery, or the like, encapsulated, powdered, suspensions, etc., when ingesting it brings about a specific health effect. Meaning, unlike the general medicine has the advantage that there is no side effect that can occur when the long-term use of the drug using food as a raw material.

이하, 본 발명을 실시예에 의거하여 더욱 구체적으로 설명하겠는 바 다음 실시예에 의하여 본 발명이 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail with reference to Examples. The present invention is not limited by the following Examples.

참고예 : 동물세포주 배양Reference example: Animal cell line culture

본 발명에 사용된 동물세포주인 생쥐(mouse)유래의 간세포(Hepa 1c1c7 cell line)는 미국의 분양기관(American Type Culture Collection, ATCC CRL 2026)으로부터 구입하였으며, 2 mM 글루타민(glutamine), 100 U/ml 페니실린 G(penicillin G), 100 ㎍/ml 스트렙토마이신(streptomycin), 10 % 피탈 보바인 시럼(fetal bovine serum) 등을 포함하는 알파-엠이엠(α-MEM, minimum essential medium alpha modification) 배지를 첨가하여 37 ℃의 5% CO2/95% 공기 환경으로 조절한 CO2 배양기(incubator)내에서 계대배양하면서 실험에 이용하였다.The animal cell line used in the present invention (mouse) derived hepatocytes (Hepa 1c1c7 cell line) was purchased from the American Type Culture Collection (ATCC CRL 2026), 2 mM glutamine (glutamine), 100 U / Minimum essential medium alpha modification (α-MEM) medium containing ml penicillin G, 100 μg / ml streptomycin, 10% petal bovine serum, and the like Addition was used for the experiment while subcultured in a CO 2 incubator controlled at 37 ° C. in a 5% CO 2 /95% air environment.

PC12 세포는 래트(rat)의 부신(adrenal gland)로부터 분리된 갈색세포종으로 10% horse serum, 5% fetal calf serum, 100 units/ml penicillin 및 100 ㎍/ml streptomycin을 포함한 RPMI 1640을 사용하여 37 ℃, CO2 배양기 (5%)에서 배양하였다.PC12 cells are pheochromocytoma isolated from the adrenal gland of rats at 37 ° C. using RPMI 1640 with 10% horse serum, 5% fetal calf serum, 100 units / ml penicillin and 100 μg / ml streptomycin. Incubated in a CO 2 incubator (5%).

제조예 : 고추냉이 추출물의 분리Preparation Example: Isolation of Wasabi Extract

본 발명에서 사용한 공시재료[일본산 고추냉이, Wasabia japonica]를 강원도 철원군에 소재한 재배 농가로부터 구입하여 세척 건조하고, 대략 2 × 2 × 2(가로× 세로× 두께, cm) 크기로 절단하여 액 체질소로 급속동결 후 즉시 분쇄기로 분쇄한 분말상의 고추냉이를 사용하였으며, 추출용 용매인 에탄올은 1급 시약을 사용하였고, 나머지 기타 시약은 미국 시그마(Sigma), 프로메가(Promega), 퀴아젠(Qiagen) 제품 및 특급시약을 이용하였다.The test material [Japanese wasabi, Wasabia japonica ] used in the present invention was purchased from a cultivated farmhouse located in Cheorwon-gun, Gangwon-do, washed and dried, and cut into approximately 2 × 2 × 2 (width × length × thickness, cm) sizes and sieved. Powdered horseradish was pulverized immediately after the rapid freezing with crusher, and ethanol, an extraction solvent, was used as a first-class reagent, and the other reagents were US Sigma, Promega, Qiagen. ) The product and the special reagent were used.

즉, 시료인 고추냉이 분말 500 g에 에탄올 5 L를 넣고 초음파로 30 분간 3회 반복 추출한 다음, 도요여지(Toyo filter) No.2 로 여액을 얻어 감압농축기 (Rotary vacuum evaporator)로 50 ℃에서 감압농축시키고, 농축물은 동결 건조하여 연두색의 고추냉이 건조분말을 얻었다. 이후 시료를 -70 ℃에서 보관하면서 사 용하였다.In other words, 5 g of ethanol was added to 500 g of wasabi powder, which was repeatedly extracted three times with ultrasonic waves for 30 minutes, and then the filtrate was obtained by using a Toyo filter No. 2, and decompressed at 50 ° C. with a rotary vacuum evaporator. The concentrate was freeze-dried to obtain a light green horseradish dry powder. The sample was then used while stored at -70 ° C.

실험예 1 : 생쥐 간세포(Hepa 1c1c 7 cell)에서의 HExperimental Example 1: H in mouse liver cells (Hepa 1c1c 7 cells) 22 OO 22 로 유발된 산화적 스트레스에 대한 고추냉이 추출물의 세포보호효과Cytoprotective Effect of Horseradish Extracts Against Oxidative-induced Oxidative Stress

6 웰 플레이트(well plate)의 각 웰(well)에 동일한 수(4.0 × 104 cells)의 생쥐의 간세포(Hepa 1c1c7 cells)를 분주하고, 24시간 전 배양한 다음에 상기 참고예를 통해 제조된 고추냉이 추출물을 100, 200 ㎍/ml 농도로 첨가하고 동시에 200 μM H2O2를 가하여 30 분간 37 ℃의 5% CO2 인큐베이터(incubator)에서 반응을 시켰다. 반응액을 모두 제거한 다음 포스페이트 버퍼드 생리식염수(phosphate buffered saline)로 세척한 후 생리식염수를 가하여 MTT(3-(4,5-dimethyl-thiazo-2-yl)-2,5-diphenyltetrazoliumbromide)를 최종농도 0.5 mg/ml로 첨가한 다음 위상차현미경을 이용하여 변화된 세포형태를 사진촬영한 후 4시간 동안 37 ℃의 5% CO2 인큐베이터에서 반응을 시켜 MTT부터 형성된 포마쟌(formazan)을 디메틸설폭사이드(dimethylsulfoxide)에 녹여 마이크로플레이트 리더(microplate reader)로 570 nm에서 흡광도를 측정하여 H2O2에 의한 산화적 손상에 대한 고추냉이 추출물의 세포보호효과를 측정하였다.The same number (4.0 × 10 4 cells) of mouse hepatocytes (Hepa 1c1c7 cells) were dispensed into each well of a 6 well plate, and cultured 24 hours before, followed by the preparation of the reference example. Wasabi extract was added at a concentration of 100, 200 μg / ml and simultaneously 200 μM H 2 O 2 was added to react for 30 minutes in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C. After removing all the reaction solution, the solution was washed with phosphate buffered saline, and then saline was added to form MTT (3- (4,5-dimethyl-thiazo-2-yl) -2,5-diphenyltetrazoliumbromide). After adding the concentration at 0.5 mg / ml, the cells were photographed using a phase contrast microscope, and then reacted in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C. for 4 hours to formformazan formed from MTT with dimethyl sulfoxide ( The cytoprotective effect of horseradish extract against oxidative damage by H 2 O 2 was measured by measuring the absorbance at 570 nm by dissolving in dimethylsulfoxide.

첨부도면 도 1에 나타난 바와 같이 H2O2만 처리한 경우 생쥐 간세포(Hepa 1c1c 7 cell)가 산화적 스트레스에 의해 세포독성을 일으켜 50% 이상 사멸하였다.As shown in FIG. 1, when only H 2 O 2 was treated, mouse liver cells (Hepa 1c1c 7 cells) caused cytotoxicity due to oxidative stress and killed more than 50%.

반면, 고추냉이 추출물을 첨가한 군은 농도의존적으로 세포 형태의 변화가 적었으며 세포수도 회복함을 알 수 있었다. 이는 고추냉이 추출물에 의한 세포의 산화적 스트레스에 대한 보호효과로 해석할 수 있다.On the other hand, the group with horseradish extract showed little change in cell morphology and cell number recovery. This can be interpreted as a protective effect against the oxidative stress of cells by wasabi extract.

첨부도면 도 2의 MTT를 이용한 세포독성 시험에서도 도 1과 동일하게 고추냉이 추출물 첨가량이 높아질수록 생쥐 간세포주(Hepa 1c1c7 cell)의 생육률이 증가됨을 알 수 있었다.In the cytotoxicity test using the MTT of FIG. 2, the growth rate of mouse liver cell line (Hepa 1c1c7 cell) was increased as the amount of wasabi extract increased as in FIG. 1.

실험예 2 : 래트(rat)의 부신(adrenal gland) 유래 피오크로모사이토마(pheochromocytoma)인 신경세포 (PC12)에서의 HExperimental Example 2: H in neurons (PC12), which is a pheochromocytoma derived from the adrenal gland of rats 22 OO 22 로 유발된 산화적 스트레스에 대한 고추냉이 추출물의 세포보호효과Cytoprotective Effect of Horseradish Extracts Against Oxidative-induced Oxidative Stress

6 웰 플레이트(well plate)의 각 웰(well)에 동일한 수(4.0 × 104 cells)의 랫(rat)의 부신 피오크로모사이토마 (pheochromocytoma) 유래 신경세포 (PC12)를 분주하고, 24시간 전 배양한 다음에 상기 참고예를 통해 제조된 고추냉이 추출물을 200, 300 ㎍/ml 농도로 첨가하고 실험예 1과 동일하게 실험한 다음 위상차현미경을 이용하여 변화된 세포형태를 사진 촬영하였다.Each well of a 6 well plate is dispensed with equal numbers (4.0 × 10 4 cells) of rat adrenal pheochromocytoma-derived neurons (PC12) for 24 hours. After pre-cultivation was added horseradish extract prepared in the reference example at a concentration of 200, 300 ㎍ / ml and the experiment was carried out in the same manner as in Experiment 1 and then photographed the changed cell morphology using a phase contrast microscope.

첨부도면 도 3에 나타난 바와 같이 H2O2만 처리한 경우 래트(rat)의 PC12 세포가 산화적 스트레스에 의해 세포독성을 일으켜 대부분의 세포가 사멸하였으며 고 추냉이 추출물을 첨가한 군은 농도의존적으로 세포 형태의 변화가 적었으며 세포수도 회복함을 알 수 있었다. 이는 고추냉이 추출물에 의한 세포의 산화적 스트레스에 대한 보호효과로 해석할 수 있다.As shown in FIG. 3, PC12 cells of rats were cytotoxic due to oxidative stress, and most of the cells were killed when H 2 O 2 was treated. The change in cell morphology was small and the cell number recovered. This can be interpreted as a protective effect against the oxidative stress of cells by wasabi extract.

실험예 3 : 하이포크산틴과 크산틴 옥시다아제로 유도된 산화적 스트레스에 대한 고추냉이 추출물의 세포보호효과Experimental Example 3 Cytoprotective Effect of Wasabi Extract Against Oxidative Stress Induced by Hypoxanthine and Xanthine Oxidase

상기 실험예 1과 동일하게 6웰 플레이트의 각 웰에 동일한 수(6.0 × 104 cells)의 생쥐의 간세포(Hepa 1c1c7 cells)를 분주하고, 24 시간 전 배양한 다음 상기 참고예를 통해 제조된 고추냉이 추출물을 25, 50, 100, 200 ㎍/ml 농도로 첨가하고, 동시에 200 μM 하이포크산틴과 0.5 mU 크산틴 옥시다아제를 가하여 30분간 37 ℃의 5% CO2 인큐베이터)에서 반응시켰다. 상기 반응액을 모두 제거한 다음 포스페이트 버퍼드 생리식염수로 조심스럽게 세척한 후 다시 생리식염수을 가하여 MTT 최종농도가 0.5 mg/ml가 되도록 첨가한 다음, 위상차현미경을 이용하여 변화된 세포형태를 사진촬영하고 4시간 동안 37 ℃의 5% CO2 인큐베이터에서 반응시켜 MTT로부터 형성된 포마쟌을 디메틸설폭사이드에 녹여 마이크로플레이트 리더로 570 nm에서 흡광도를 측정하여 하이포크산틴과 크산틴 옥시다아제의 반응으로 일어난 산화적 손상에 대한 고추냉이 추출물의 세포보호효과를 측정하였다.In the same manner as in Experiment 1, the same number (6.0 × 10 4 cells) of mouse liver cells (Hepa 1c1c7 cells) were dispensed into each well of a 6-well plate, incubated 24 hours ago, and the red pepper prepared according to the reference example. Wasabi extract was added at a concentration of 25, 50, 100, 200 μg / ml and at the same time 200 μM hypoxanthine and 0.5 mU xanthine oxidase were added and reacted in a 5% CO 2 incubator at 37 ° C. for 30 minutes. After removing all of the reaction solution, carefully wash with phosphate buffered saline solution, and then add saline solution to the final MTT concentration of 0.5 mg / ml, and photograph the changed cell morphology using a phase contrast microscope for 4 hours. peppers for a poma John reacted in a 5% CO 2 incubator at 37 ℃ formed from MTT in the oxidative damage caused by hypoxanthine and reaction of xanthine oxidase by measuring the absorbance at 570 nm by a microplate reader and dissolved in dimethyl sulfoxide for The cytoprotective effect of the extract was measured.

첨부도면 도 4에 나타난 바와 같이 하이포크산틴과 크산틴 옥시다아제만 처 리한 경우 생쥐 간세포(Hepa 1c1c 7 cell)가 산화적 스트레스에 의해 세포독성을 일으켜 70 % 이상 사멸하였다.As shown in FIG. 4, when only hypoxanthine and xanthine oxidase were treated, mouse hepatocytes (Hepa 1c1c 7 cells) caused cytotoxicity due to oxidative stress and killed more than 70%.

반면, 고추냉이 추출물을 첨가한 군은 농도의존적으로 세포 형태의 변화가 적었으며 세포수도 회복함을 알 수 있었다. 이는 고추냉이 추출물에 의한 산화적 스트레스에 대한 세포보호효과로 해석할 수 있으며, 도 5의 MTT를 이용한 세포독성 시험에서도 도 4과 동일하게 고추냉이 추출물 첨가량이 높아질수록 생쥐 간세포주(Hepa 1c1c7 cell)의 생육률이 100 ㎍/ml 농도에서 80% 이상, 200 ㎍/ml에서는 세포형태나 수 모두, 무처리 대조구와 동일한 결과를 나타냄을 확인할 수 있다.On the other hand, the group with horseradish extract showed little change in cell morphology and cell number recovery. This can be interpreted as a cytoprotective effect on the oxidative stress caused by horseradish extract, mouse hepatocytes (Hepa 1c1c7 cell) as the addition of horseradish extract increased as in Figure 4 in the cytotoxicity test using MTT of Figure 5 The growth rate of 80% or more at a concentration of 100 ㎍ / ml, 200 ㎍ / ml at both the cell type and the number, it can be seen that the same results as the untreated control.

상기한 결과로부터 생쥐 간세포(Hepa 1c1c 7 cell) 뿐 만 아니라 래트(rat)의 PC12 세포에서도 산화적 스트레스에 대한 고추냉이 추출물의 강한 세포 보호효과를 확인할 수 있었으며, 특히 H2O2에 의한 직접적인 산화적 스트레스보다 효소계를 이용한 산화적 손상에 고추냉이 추출물이 보다 효과적으로 방어함을 알 수 있었다.From the above results, it was confirmed that horseradish extract has a strong cellular protective effect against oxidative stress, not only in mouse liver cells (Hepa 1c1c 7 cells) but also in PC12 cells of rats. In particular, direct oxidation by H 2 O 2 was observed. Wasabi extract was more effective in protecting against oxidative damage than enzyme stress.

실험예 4 : 독성실험Experimental Example 4: Toxicity Test

1) 실험용 쥐에 대한 경구 투여 급성 독성실험1) Oral Administration of Rats Acute Toxicity

6주령의 특정병원부재(SPF) SD계 래트(rat)를 사용하여 급성독성실험을 실시하였다. 군당 2 마리씩의 동물에 고추냉이 추출물을 0.5% 메틸셀룰로즈 용액에 현탁하여 1 g/kg/1 ㎖의 용량으로 단회 경구투여하였다. 시험물질 투여 후 동 물의 폐사여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상여부를 관찰하였다. 시험결과, 시험물질을 투여한 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다. 이상의 결과 실험된 화합물은 모두 랫트에서 500 mg/kg까지 독성변화를 나타내지 않으며 경구 투여 최소치사량(LD50)은 500 mg/kg이상인 안전한 물질로 판단되었다.Acute toxicity test was performed using 6-week-old SPF SD rats. Horseradish extract was suspended in 0.5% methylcellulose solution in two animals per group and administered orally at a dose of 1 g / kg / 1 ml. After administration of the test substance, mortality, clinical symptoms, and changes in body weight were observed. Hematological and hematological examinations were performed. Necropsy was performed to observe abdominal and thoracic organ abnormalities. As a result, there were no clinical symptoms or deaths in all animals treated with the test substance, and no toxicity change was observed in weight change, blood test, blood biochemistry test, autopsy findings, etc. As a result, all of the tested compounds did not show toxic changes up to 500 mg / kg in rats, and the oral minimum dose (LD50) was determined to be a safe substance of 500 mg / kg or more.

2) 실험용 쥐에 대한 비경구 투여 독성실험2) Parenteral administration toxicity test for rats

상기 경구 투여 독성실험과 동일한 래트를 사용하여, 본 발명의 고추냉이 추추물을 2 mg 씩 근육주사 방법으로 투여하였다. 실험용 쥐 한 마리에는 2주 간격으로 2번, 다른 한 마리의 실험쥐에는 2 주 간격으로 2회 투여 후, 1 개월의 간격을 둔 다음 다시 2 주 간격으로 3회 투여를 실시하였다. Using the same rat as the oral administration toxicity test, wasabi was administered by the muscle injection method 2 mg each. One rat was administered twice at two week intervals, and the other rat was administered twice at two week intervals, followed by one month intervals, and then again three doses at two week intervals.

처음 주사 후 6 개월간 질병 유무(clinical sign), 체중, 체온 등 외관(physical examination), 혈액세포의 이상(haematology), 배설물의 이상(urinalysis)을 관찰하였으나 모두 정상치의 값을 나타내었다.Six months after the first injection, the clinical signs, body weight, body temperature, physical examination, blood cell abnormalities (haematology) and fecal abnormalities (urinalysis) were observed, but all showed normal values.

실시예 1 : 츄잉껌(A)의 제조Example 1 Preparation of Chewing Gum (A)

껌베이스 20 중량%20% by weight of gum base

설탕 76.5 중량%Sugar 76.5 wt%

고추냉이 추출물(제조예) 0.5 중량%Wasabi extract (manufacturing example) 0.5 wt%

후르츠향 1 중량%1% by weight of fruit flavor

물 2 중량%2 wt% water

상기 조성 및 함량과 통상적인 방법으로 츄잉껌을 제조하였다.Chewing gum was prepared according to the above composition and content.

실시예 2 : 츄임껌(B)의 제조Example 2 Preparation of Chewing Gum (B)

껌 베이스 25 중량%25% by weight of gum base

솔비톨 72 중량%Sorbitol 72 wt%

고추냉이 추출물(제조예) 0.5 중량%Wasabi extract (manufacturing example) 0.5 wt%

페퍼민트 후레버 2.5 중량% Peppermint Flavor 2.5% by weight

상기 조성 및 함량과 통상적인 방법으로 츄잉껌을 제조하였다.Chewing gum was prepared according to the above composition and content.

실시예 3 : 캔디(A)의 제조Example 3 Preparation of Candy (A)

설탕 54.5 중량%54.5 wt% sugar

물엿 45 중량%45 wt% starch syrup

고추냉이 추출물(제조예) 0.4 중량%Horseradish Extract (Preparation) 0.4 wt%

오렌지향 0.1 중량% Orange flavor 0.1 wt%

상기 조성 및 함량과 통상적인 방법으로 캔디를 제조하였다.Candy was prepared by the conventional method and the composition and content.

실시예 4 : 캔디(B)의 제조Example 4 Preparation of Candy (B)

말티톨 53.6 중량%Maltitol 53.6 wt%

환원물엿 45 중량%45 wt% of reduced syrup

고추냉이 추출물(제조예) 0.5 중량%Wasabi extract (manufacturing example) 0.5 wt%

천연허브향 0.14 중량%Natural Herbal Flavor 0.14% by weight

상기 조성 및 함량과 통상적인 방법으로 캔디를 제조하였다.Candy was prepared by the conventional method and the composition and content.

실시예 5 : 비스켓의 제조Example 5 Preparation of Biscuits

박력1급 88 kgClass 1 88 kg

중력1급 76.4 kgGravity Class 1 76.4 kg

정백당 16.5 kg16.5 kg per white

식염 2.5 kg 2.5 kg of salt

포도당 2.7 kg2.7 kg of glucose

팜쇼트닝 40.5 kg40.5 kg of farm shortening

암모 5.3 kg5.3 kg of ammo

중조 0.6 kgMedium kg 0.6 kg

중아황산나트륨 0.55 kg0.55 kg sodium bisulfite

쌀가루 5.0 kg5.0 kg of rice flour

비타민 B1 0.003 kg0.003 kg of vitamin B1

비타민 B2 0.003 kg0.003 kg of vitamin B2

밀크향 0.16 kgMilk Flavor 0.16 kg

물 71.1 kg 71.1 kg of water

전지분유 4 kgWhole milk powder 4 kg

대용분유 1 kg1 kg of substitute powdered milk

제일인산칼슘 0.1 kg0.1 kg of calcium phosphate

살포염 1 kg1 kg of spray salt

분무유 25 kg 25 kg of spray oil

고추냉이 추출물(제조예) 1.7 kgWasabi extract (manufacturing example) 1.7 kg

상기 조성 및 함량과 통상적인 방법으로 비스켓을 제조하였다.The biscuits were prepared by the conventional method and the composition and content.

실시예 6 : 아이스크림의 제조Example 6 Preparation of Ice Cream

유지방 10.0 중량%Milk fat 10.0 wt%

무지유고형분 10.8 중량%Nonfat milk solids 10.8 wt%

설탕 12.0 중량%12.0 wt% sugar

물엿 3.0 중량%Starch syrup 3.0 wt%

유화안정제(스팬,span) 0.5 중량%Emulsifying stabilizer (span) 0.5 wt%

향료(스트로베리) 0.15 중량%Spice (Strawberry) 0.15 wt%

물 63.05 중량%63.05% by weight of water

고추냉이 추출물(제조예) 0.5 중량%Wasabi extract (manufacturing example) 0.5 wt%

상기 조성 및 함량과 통상적인 방법으로 비스켓을 제조하였다.The biscuits were prepared by the conventional method and the composition and content.

실시예 7 : 음료의 제조Example 7 Preparation of Beverages

꿀 522 mg522 mg of honey

치옥토산아미드 5 mgChioctosanamide 5 mg

니코틴산아미드 10 mgNicotinic Acid 10 mg

염산리보플라빈나트륨 3 mgRiboflavin Sodium Hydrochloride 3 mg

염산피리독신 2 mgPyridoxine hydrochloride 2 mg

이노시톨 30 mgInositol 30 mg

오르트산 50 mgOrthoic acid 50 mg

고추냉이 추출물(제조예) 1,003 mg Wasabi Extract (Preparation) 1,003 mg

물 200 ml200 ml of water

상기 조성 및 함량과 통상적인 방법으로 음료를 제조하였다.The beverage was prepared by the conventional method and the composition and content.

실시예 8 : 초콜렛의 제조Example 8 Preparation of Chocolate

설탕 34.5 중량%Sugar 34.5 wt%

코코아 버터 34 중량%Cocoa Butter 34%

코코아 매스 15 중량%15% by weight of cocoa mass

코코아 파우다 15 중량%Cocoa Powder 15% by weight

레시틴 0.5 중량%Lecithin 0.5% by weight

바닐라향 0.5 중량%0.5% by weight of vanilla

고추냉이 추출물(제조예) 0.5 중량%Wasabi extract (manufacturing example) 0.5 wt%

상기 조성 및 함량과 통상적인 방법으로 음료를 제조하였다.The beverage was prepared by the conventional method and the composition and content.

제제화 예Formulation Example

상기에서 확인된 바와 같이, 고추냉이 추출물은 산화적 스트레스에 대한 세포보호효과를 가지므로 간, 신경질환 예방 및 치료용 조성물로 제제화할 수 있다.As confirmed above, horseradish extract has a cytoprotective effect against oxidative stress, so it can be formulated into a composition for preventing and treating liver and neurological diseases.

1) 시럽제의 제조1) Preparation of Syrup

본 발명의 고추냉이 추출물 0.5 %(중량/부피)로 함유하는 시럽은 다음과 같은 방법으로 제조하였다. Syrup containing 0.5% (weight / volume) of wasabi extract of the present invention was prepared by the following method.

고추냉이 추출물 2 g, 당 25.4g 을 온수 80 g에 용해시켰다. 이 용액을 냉각시킨 후, 여기에 글리세린 8.0 g, 사카린 0.8 g, 향미료 0.04 g, 에탄올 4.0 g, 소르빈산 0.4 g 및 증류수로 이루어진 용액을 제조하여 혼합하였다. 이 혼합물에 물을 첨가하여 100 ㎖가 되게 하였다. 2 g of wasabi extract and 25.4 g of sugar were dissolved in 80 g of warm water. After the solution was cooled, a solution consisting of 8.0 g of glycerin, 0.8 g of saccharin, 0.04 g of flavor, 4.0 g of ethanol, 0.4 g of sorbic acid, and distilled water was prepared and mixed. Water was added to this mixture to 100 ml.

2) 정제의 제조2) Preparation of Tablets

유효성분 15 mg이 함유된 정제는 다음과 같은 방법으로 제조하였다.A tablet containing 15 mg of active ingredient was prepared by the following method.

고추냉이 추출물 250 g을 락토오스 175.9 g, 감자전분 180 g 및 콜로이드성 규산 32 g과 혼합하였다. 이 혼합물에 10% 젤라틴 용액을 첨가시킨 후, 분쇄해서 14 메쉬체를 통과시켰다. 이것을 건조시키고 여기에 감자전분 160 g, 활석 50 g 및 스테아린산 마그네슘 5 g을 첨가해서 얻은 혼합물을 정제로 만들었다. 250 g wasabi extract was mixed with 175.9 g lactose, 180 g potato starch and 32 g colloidal silicic acid. 10% gelatin solution was added to the mixture, which was then ground and passed through a 14 mesh sieve. It was dried and the mixture obtained by adding 160 g of potato starch, 50 g of talc and 5 g of magnesium stearate was made into a tablet.

3) 주사액제의 제조3) Preparation of Injection Solution

유효성분 10 mg을 함유하는 주사액제는 다음과 같은 방법으로 제조하였다. Injection solution containing 10 mg of the active ingredient was prepared by the following method.

고추냉이 추출물 1 g, 염화나트륨 0.6 g 및 아스코르빈산 0.1 g을 증류수에 용해시켜서 100 ㎖을 만들었다. 이 용액을 병에 넣고 20 ℃에서 30 분간 가열하여 멸균시켰다.1 g of wasabi extract, 0.6 g of sodium chloride and 0.1 g of ascorbic acid were dissolved in distilled water to make 100 ml. The solution was bottled and sterilized by heating at 20 ° C. for 30 minutes.

상술한 바와 같이, 본 발명은 고추냉이 추출물이 H2O2 또는 하이포크산틴과 크산틴 옥시다아제로 유발된 산화적 스트레스에 대한 세포보호효과를 확인하였다.As described above, the present invention confirmed the horseradish extract H 2 O 2 or cytoprotective effect against oxidative stress induced by hypoxanthine and xanthine oxidase.

본 발명에 의하면, 고추냉이 추출물을 세포의 산화적 스트레스에 의해 유발되는 세포의 산화적 손상을 억제할 수 있으므로, 세포의 산화적 손상에 의한 각종 만성질환에 대한 예방 및 치료효과를 가지는 조성물로 적용할 수 있다.According to the present invention, since the horseradish extract can inhibit the oxidative damage of the cells caused by the oxidative stress of the cells, it is applied as a composition having a prophylactic and therapeutic effect against various chronic diseases caused by the oxidative damage of the cells can do.

또한, 본 발명의 고추냉이 추출물을 츄잉껌, 캔디, 비스켓, 아이스크림, 음료, 초콜렛 등의 다양한 음식물의 재료와 함께 배합하여 각종 기능성 식품으로 제조할 경우 청소년, 성인 및 노인층의 광범위한 계층까지 언제 어디서나 늘 간편하게 섭취할 수 있어서 지속적인 음용효과를 기대할 수 있다.In addition, when the horseradish extract of the present invention is formulated with various food ingredients, such as chewing gum, candy, biscuits, ice cream, beverages, chocolate, etc. to produce a variety of functional foods anytime, anywhere, a wide range of youth, adults and seniors Ingestion can be expected to have a continuous drinking effect.

Claims (3)

고추냉이 추출물을 포함하는 것을 특징으로 하는 간, 신경질환 예방 및 치료용 조성물.Liver, neurological disease prevention and treatment composition comprising horseradish extract. 고추냉이 추출물 포함하며 세포의 산화적 스트레스에 대한 보호작용을 나타내는 것을 특징으로 하는 건강 식품.Contains horseradish extract and health foods, characterized in that it exhibits a protective effect against oxidative stress of cells. 제 2 항에 있어서, 상기 식품은 츄잉껌, 캔디, 비스켓, 아이스크림, 음료 및 초콜렛 중에서 선택된 것을 특징으로 하는 건강 식품.The health food of claim 2, wherein the food is selected from chewing gum, candy, biscuits, ice cream, beverages, and chocolate.
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KR20220078071A (en) * 2020-12-03 2022-06-10 김남철 Manufacturing method for chocolate comprising wasabi

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