KR20060027799A - 브라키스피라 필로시콜라이 또는 오니토박테리움리노트라헤일에 기인한 질병의 치료용의 아이블로신 - Google Patents

Abstract

본 발명은 돼지의 브라키스피라 필로시콜라이(Brachyspira pilosicoli) 및 가금의 오니토박테리움 리노트라헤일(Ornithobacterium rhinotracheale)에 기인한 질병의 치료, 예방 또는 억제용의 아이블로신의 용도에 관한 것이다.

Description

브라키스피라 필로시콜라이 또는 오니토박테리움 리노트라헤일에 기인한 질병의 치료용의 아이블로신{AIVLOSIN FOR THE TREATMENT OF DISEASE DUE TO BRACHYSPIRA PILOSICOLI OR ORNITHOBACTERIUM RHINOTRACHEALE}

본 발명은, 특히 돼지와 가금(poultry)에 있어서의 질병과 감염증의 치료 또는 예방 및 억제용의 약제(medicaments)로서의 항생제의 용도에 관한 것이다.

특히 집약적으로 사육되거나 대규모로 사육되는 돼지와 가금은, 예를 들면, 돼지의 브라키스피라 필로시콜라이(Brachyspira pilosicoli) 및 가금의 오니토박테리움 리노트라헤일(Ornithobacterium rhinotracheale)에 기인한 질병과 같은 각종 질병이나 감염증을 앓는 경향이나 해당 질병이나 감염증에 걸릴 위험성을 지닌다.

브라키스피라 필로시콜라이는, 설사와 성장이 늦어지는 것을 특징으로 하는 스피로헤타 설사로 알려진 상태를 일으킨다. 이 감염증은 드물게 사망을 유발하지만, 특히, 예를 들면, 다른 장내 기생충 등의 기타 유기체에 의한 감염과 연관될 경우 치명적일 수 있다. 감염증은, 1일 체중증가의 감소 및 사료 전환에 의해 돼지사육의 수익성에 대한 주된 경제적 충격을 지닐 수 있다. 몇몇 다른 돼지 창자 감염증과 달리, 브라키스피라 필로시콜라이에 기인한 질병은 돼지에게만 단독으로 연관되는 것은 아니다. 또한, 인간, 개 및 기타 동물을 감염시키는 것도 알려져 있다.

오니토박테리움 리노트라헤일은, 가벼운 호흡 징후, 사망률 증가, 체중증가 및 사료 전환의 악화, 뇌병변, 및 알 생산 감소를 특징으로 하는 호흡 질병이다. 이것은, 의료비 증가, 증식률 감소 및 가공시의 높은 불량률에 의한 경제적인 손실을 초래한다. 오니토박테리움 리노트라헤일은, 다른 가금들 중에서 닭, 오리, 자고(partridge), 거위, 비둘기 및 칠면조를 포함한 많은 종으로부터 분리되어 왔다. 이것은, 광범위한 잠재성 병원소인 것을 나타낸다.

브라키스피라 필로시콜라이 및 오니토박테리움 리노트라헤일에 대한 몇몇 공지된 치료법이 있으나, 이들은 통상 사용되는 항생제에 대한 만연된 내성으로 인해 효과가 없는 일이 빈번하다.

놀랍게도, 본 발명자는, 이전에 가금의 마이코플라스마병의 치료와 억제를 위해 높은 투여량으로 사용되고 있던 공지의 항생제 아이블로신(3-O-아세틸-4"-O-이소발레릴-티로신으로도 알려져 있음)이, 특히 돼지의 브라키스피라 필로시콜라이 및 특히 가금의 오니토박테리움 리노트라헤일의 예방 또는 억제에도 유효하다는 것을 발견하였다.

영국특허 명세서 제 1,539,907호에는 3 및 4" 위치에 아실기를 갖고 있는 티로신 유도체와 그들의 산 부가염, 특히 타르타르산 부가염, 아세트산 부가염, 프로피온산 부가염, 시트르산 부가염, 숙신산 부가염, 염산 부가염, 황산 부가염 및 인산 부가염이 개시되어 있다. 여기에 구체적으로 개시된 티로신 유도체 가운데, 현재 통상 아이블로신으로서 공지된 3-O-아세틸-4"-O-이소발레릴-티로신이 있다. 이 화합물은 하기 식(I)을 지닌다:

(I)

(식 중, R₁은 아세틸기이고, R₂는 이소발레릴기임). 또, 적당한 아실 공여체, 특히 아세틸 CoA, 이소발레릴 CoA, 아세트산, 이소발레르산, 이들 산의 칼륨염, 나트륨염 또는 암모늄염, 상기 산들의 메탄올 에스테르 또는 에탄올 에스테르, 상기 산들의 아미드류 또는 α-옥소발레르산의 존재하에, 스트렙토마이세스속(genus Streptomyces), 특히 스트렙토마이세스 서모톨러란스(Streptomyces thermotolerans)(ATCC 11416), 스트렙토마이세스 펑기시더스 아종 에스피노마이세티쿠스(Streptomyces fungicidus subsp. espinomyceticus)(ATCC 21574), 스트렙토마이세스 마이카로파시엔스(Streptomyces mycarofaciens)(ATCC 21454), 스트렙토마 이세스 하이그로스코피쿠스(Streptomyces hygroscopicus)(ATCC 21582)중에서 선택된 것의 적당한 아실화 미생물에 의해 적당히 부분적으로 아실화된 티로신 또는 티로신의 생화학적 아실화에 의해 아이블로신을 제조하는 방법도 개시되어 있다.

또, 상기 영국특허 명세서 제 1,539,907호에는, 티로신 유도체가 인간이나 동물에게 투여될 수 있고 일부의 내약품성 균을 포함한 다수의 그램 양성균에 대항한 작용성을 나타내는 것이 언급되어 있다. 하지만, 이들은, 인간, 가축, 애완동물, 실험용 동물 및 가금에 대해, 공지의 마이크로라이드 항생제(macrolide antibiotic drugs)와 마찬가지 방식으로 감염성 질병의 경구, 비경구 또는 국소적 인 억제에 이용될 수 있다고는 기재되어 있지만, 동물의 특정 질병이나 감염증의 치료나 억제에 이들 유도체를 이용하는 것에 대해서는 구체적으로 나타나 있지 않다.

실제로는, 초기의 일본 시장 등록(제 4 치카 AC1771호)에 의거해서 아이블로신은, 오늘날까지 시판되고 있고, 그리고, 사료에 200 내지 500ppm의 높은 투여량으로 돼지와 가금의 마이코플라스마 질병의 치료와 억제를 위해서만 그 시판이 승인되어 있다. 특히 돼지나 가금의 기타 감염증 및 질병의 치료, 예방 및 억제에 적합하다고 상정한 만한 이유는 없다. 특히 마이코플라스마 질병에 대한 효과를 지닌 에리트로마이신(erythromycin) 등의 기타 마이크로라이드 항생제는, 브라키스피라 필로시콜라이 및 오니토박테리움 리노트라헤일에 기인한 질병과 같은 돼지와 가금의 기타 감염증에 대한 임의의 효과 또는 임의의 상당한 효과를 지니지는 않는다. 물론, 하나의 특정 목적을 위한 시판이 승인된 가축 약제가 관계 당국으로부터 별도의 인가나 승인을 받지 않고 다른 특정한 목적으로 판매되거나 그의 사용을 권장할 수 없다는 것이 모든 주요국가에 있어서 적용되는 승인계획의 특징이다. 따라서, 공지된 항생제라 하더라도 새로운 동물용도로 이용하는 연구에 대해서는 강한 반항동기(counter-incentive)가 있다.

또, PCT 출원의 공보 WO 02/32233호에는, 돼지의 브라키스피라 하이오디센테리애(Brachyspire hyodysenteriae)를 치료하는 데 아이블로신을 사용하는 것이 개시되어 있다. 브라키스피라 하이오디센테리애는 대장의 감염증이다. 이것은, 혈변 설사 및 탈수에 의한 사망을 초래하는 돼지 이질을 일으킨다. 브라키스피라 필로시콜라이에 기인한 질병에 대한 아이블로신의 활성은, 어떠한 항균제의 효능도 살아 있는 동물에 대한 시험 없이 정확히 정의될 수 없기 때문에 브라키스피라 하이오디센테리애에 대한 용도로부터 예측될 수는 없었다.

상기 WO 02/32233호에는, 돼지의 로소니아 인트라셀룰러리스(Lawsonia intracellularis)를 치료하는 데 아이블로신을 사용하는 것도 개시되어 있다. 로소니아 인트라셀룰러리스는 설사 및 소모병을 일으키는 소장의 질병이다. 로소니아 인트라셀룰러리스는, 그램 음성 유기체로서 분류될 수 있으나, 종래의 그램 음성균은 아니다.

아이블로신은, 그램 양성균 및 마이코플라스마에 대해서 유효한 마이크로라이드 항생제로서 간주된다. 이러한 항생제는, 파스퇴렐라 헤모라이티카(Pasteurella haemolytica)에 대한 마이크로라이드의 사용 데이터를 존재시킴으로써 설명된 바와 같이, 그램 음성균에 대해 유효한 것으로 예상되지 않는다(아이오와 주립대학 출판부에서 2000년 3쇄로 프레스콧 제이에프, 바고트 제이디 및 워커 알디에 의해 편집된 가축 의약에서의 항균치료: Antimicrobial Therapy in Veterinary Medicine, 3rd Ed.(2000) Edited by Prescott JF, Baggot JD and Walker RD. Iowa State University Press). 마이크로라이드의 활성은, 세균벽 구조로부터 예측될 수 없다. 마이크로라이드는, 착물 지질 컨쥬게이트를 내포하는 세포벽을 지닌 마이코박테리움 종들(Mycobacterium spp.)과 무벽 마이코플라스마 종들의 모두에 대해서 유효한 것으로 설명되어 있다. 어떠한 마이크로라이드의 활성도 특정 시험 없이 예측될 수는 없다. 예측과 달리, 본 발명자는, 그램 음성균인 오니토박테리움 리노트라헤일에 대해서도 유효한 것을 발견하였다.

광범위한 시험관내 및 생체내(동물) 시험 작업으로부터, 본 발명자는, 아이블로신 및 그의 허용가능한 유도체가 적당한 투여율로 돼지의 브라키스피라 필로시콜라이 및 가금의 오니토박테리움 리노트라헤일에 기인한 질병의 예방과 억제 및 치료에 유효한 것을 확인하였다.

본 발명은, 동물의 브라키스피라 필로시콜라이 및 오니토박테리움 리노트라헤일에 기인한 질병의 치료 또는 예방용의 약제의 제조시, 약리학적으로 허용가능한(비독성의) 유도체와 같은 또는 해당 유도체로서의 산 부가염 등의 아이블로신의 이용을 제공하는 데 있다. 상기 약제는, 포유류, 더욱 바람직하게는, 돼지의 브라키스피라 필로시콜라이에 기인한 질병의 치료용으로 바람직하다. 또 다른 실시형태에 있어서, 상기 약제는, 조류, 더욱 바람직하게는 가금의 오니토박테리움 리노트라헤일의 치료에도 이용된다. 또, 아이블로신 또는 그의 약리학적으로 유효한 유도체의 유효량을 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 동물의 브라키스피라 필로시콜라이 및 오니토박테리움 리노트라헤일에 기인한 질병의 치료 또는 억제 방법도 제공된다.

"예방"이란 용어는, 질병의 예방 또는 억제를 의미한다. 이것은, 발병을 중지시키는 것과, 질병을 제어하기 쉬운 수준으로 유지하는 것의 모두를 망라한다.

"~에 기인한 질병"이란 용어는, 브라키스피라 필로시콜라이에 의한 감염으로 인한 동물의 생리적 상태의 파괴를 의미한다. 이 생리적 상태의 파괴는, 브라키스피라 필로시콜라이 감염증에 관련된 특정 증상 또는 징후, 및 예를 들면, 동물이 다른 병원체로부터의 감염증이나 질병에 더욱 민감해질 수도 있는 단순한 건강상의 전체적인 저하를 포함한다. 특히 브라키스피라 필로시콜라이에 기인한 질병은 스피로헤타 설사병을 포함한다.

"돼지"란 용어는, 돼지과(pig family)의 모든 멤버, 예를 들면, 수이대 족(Suidae family)의 멤버를 망라한다. "가금"이란 용어는, 닭, 칠면조, 오리, 거위, 조류 및 엽조류(game birds)의 평흉류군(ratite group)을 포함한 모든 종류의 집에서 기르는 가름류를 망라하나, 이들로 한정되는 것은 아니다.

바람직하게는, 돼지의 브라키스피라 필로시콜라이에 기인한 질병의 치료, 예방 또는 억제용의 약제는, 사료에 10 내지 200ppm, 더욱 바람직하게는 10 내지 100ppm, 더욱더 바람직하게는 20 내지 50ppm의 수준으로 첨가된다.

바람직하게는, 가금의 오니토박테리움 리노트라헤일 감염증의 치료, 예방 또는 억제용의 약제는, 사료에 10 내지 200ppm, 더욱 바람직하게는 10 내지 100ppm, 더욱더 바람직하게는 20 내지 50ppm의 수준으로 첨가된다. 가금의 오니토박테리움 리노트라헤일 감염증의 치료, 예방 또는 억제용의 약제는 물에 첨가해서 수용성 형태로 체중 1㎏당 10 내지 100㎎, 더욱 바람직하게는 1㎏당 20 내지 40㎎ 투여하는 것도 가능하다.

또, 바람직하게는, 약제는 사료나 음료수의 어느 쪽에 첨가하는 것도 적합하다. 또는, 약제는, 주사에 의한 투여도 적합하다.

또한, 본 발명에 의하면, 시험관내에서 브라키스피라 필로시콜라이 또는 오니토박테리움 리노트라헤일의 증식을 예방 또는 저감하기 위한 아이블로신의 용도도 제공된다. 이들 균의 증식의 예방 또는 저감은, 창자 조직의 시험관내 제조시 또는 세균에 대한 항생제의 활성의 대조시 유용하다.

아이블로신은, 180 내지 184℃의 융점을 갖는 백색 결정분말로서 자유형태로 입수가능하며, 에탄올과 같은 저급 알코올, 아세톤과 같은 케톤, 디에틸에테르와 같은 에테르, 아세트산 에틸과 같은 에스테르 및 톨루엔과 같은 방향족 탄화수소에 가용성이지만, n-헥산 및 석유에테르에는 거의 용해되지 않는다. 이것은, pH 7이하의 수용액에는 대단히 잘 용해되지만 보다 높은 pH의 수용액에는 거의 용해되지 않는다. 이것은, 염기성 물질이므로 산 부가 염을 형성하며, 의약적으로 허용가능한 그러한 염의 이용도 본 발명 내에 포함된다. 허용가능한 산 부가 염을 형성하는 산으로서는, 염산, 황산 또는 인산 등의 무기산, 타르타르산, 아세트산, 프로피온산, 시트르산, 숙신산 등의 유기산을 들 수 있다. 허용가능한 유도체의 구체예로서는, 아이블로신 염산염(융점 129 내지 133℃), 아이블로신 타르타르산염(융점 119 내지 122℃)이 있다. 이러한 유도체는, 빈번하게는 아이블로신 그 자체보다도 더한층 수용성이고, 따라서, 그들의 용도는, 제제로서의 이점을 지닌다.

아이블로신의 유도체는, 바람직하게는 임의의 약리학적으로 허용가능한 작용기 유도체를 포함한다. 작용기 유도체는, 아이블로신의 1개 이상의 치환기를 변성시킴으로써 제조될 수 있다. 바람직하게는, 상기 유도체는, 염, 가장 바람직하게는 산염이다.

아이블로신 및 적절한 유도체들은, 본 발명에 의하면 공지의 방법으로 제제로 제조할 수 있으며, 예를 들면, 바람직한 투여경로를 위한 적절한 고체 또는 액체 담체 및 부형제를 혼합함으로써 경구, 경관(enteral) 또는 비경구적인 투여를 위한 조성물을 제공하는 것이 가능하다. 종래의 성분들은, 담체 및 부형제로서 사용될 수 있는 바, 예를 들면, 경구투여를 위한 액상 제제용으로는 물 및 염용액을 사용할 수 있고, 고형 제제용으로는 규산질 물질-실리카 및 실리케이트(수화 규산 마그네슘 등), 곡물제품(대두 가루 및 밀가루 등) 및 기타 약리학적으로 허용가능한 고형물을 사용할 수 있다. 상기 제제는, 통상의 방법으로, 미네랄, 윤활제, 방부제, 안정제, 습윤제, 유화제, 완충제 및 착색 또는 향미물질 등의 보조제와 첨가제를 더욱 포함할 수도 있다. 전술한 질병의 예방 또는 억제에는, 특히, 아이블로신 또는 유도체를 동물사료나 동물용 음료에 첨가제로서 포함시키는 것이 간편하지만, 상기 질병의 치료시, 원한다면, 주입가능한 용액, 또는 정제, 캡슐 또는 시럽 중에 포함시키는 것도 가능하다.

아이블로신(그 자체, 또는 예를 들면, 타르타르산염과 같은 산 부가염의 적절한 유도체의 형태)은, 각종 효능 또는 역가(potency)에 있어서 예비혼합물(premix)에 1 내지 10 중량% 배합하는 것도 가능하다. 이러한 예비혼합물을 제조하기 위한 특히 적합한 조성물은, 아이블로신염, 대두 가루와 같은 충전제 및 하이드록시프로필셀룰로오스와 같은 첨가물을 함유해서 이루어지며, 180 내지 220㎎/g의 역가를 지닌다.

펠릿 사료나 압출 사료를 위해 고온 가공해야 하는 동물 사료에 있어서의 아이블로신의 안정성을 확보하기 위해서, 폴리비닐피롤리돈으로 피복된 입자 형태의 피복 아이블로신(그 자체 또는 예를 들면, 타르타르산염과 같은 산 부가염의 적절한 유도체의 형태)을 제공하는 것이 요망된다. 적당한 중량비는, 활성 성분 : 폴리비닐피롤리돈 50:1 내지 1:1의 범위이다. 불활성 충전제 및 기타 성분은 이러한 조성물 중에 존재해도 되고, 폴리비닐피롤리돈 전체 농도가 0.1 내지 10 중량%인 것이 바람직하다.

사료 첨가제로서 또는 직접 투여되는 제제로서 이용하기 위한 약물 제제은, 아이블로신을 임의의 적당한 비율, 예를 들면, 1 중량% 이하 내지 90 중량% 이상 함유시켜도 된다. 액상 제제는 전형적으로 50 내지 90 중량% 함유하는 반면, 고형 제제는 전형적으로 1 내지 25 중량% 함유한다.

브라키스피라 필로시콜라이에 기인한 돼지의 질병의 치료, 예방 또는 억제를 위해서, 아이블로신은, 예를 들면, 해당 질병을 성공적으로 억제 또는 치료하는 데 충분한 긴 기간, 예를 들면, 7일 내지 14일 동안, 10 내지 200 중량ppm(사료 1000 ㎏당 10 내지 200g)의 비율로 사료에 투여하는 것이 가능하다.

가금에 있어서의 오니토박테리움 리노트라헤일 감염증의 치료, 예방 또는 억제를 위해서, 아이블로신은, 예를 들면, 해당 감염증을 성공적으로 억제 또는 치료하는 데 충분한 긴 기간, 예를 들면, 7일 내지 14일 동안, 20 내지 50 중량ppm(사료 1000 ㎏당 10 내지 200g)의 비율로 사료에 투여하는 것이 가능하다. 또는, 아이블로신은, 음료수 중에 100 내지 250 중량ppm(물 1000ℓ당 100 내지 250g), 바람직하게는 100 내지 150 중량ppm의 비율로 투여하는 것도 가능하다.

이하의 실시예는, 본 발명에 의한 동물 감염증의 치료 또는 예방을 위한 가축 약제 또는 제제의 제조에 아이블로신을 이용하는 것을 예시하며, 이들 실시예에 있어서 "부"는 "중량부"이다.

실시예 1

물속에 용액 상태로 만든 아이블로신 API(활성 의약 성분: Active Pharmaceutical Ingredient) 20부를 대두 가루 80부와 혼합하고, 이 혼합물을 분무 건조시켜 1000㎏ 당 아이블로신 성분(aivlosin activity) 200㎏을 함유하는 사료용 고형 첨가제를 얻는다. 이 제제는, 사료 중의 아이블로신의 농도가 최종 사료 1000㎏당 아이블로신 25 내지 200g 제공되도록, 돼지 및 가금 사료에 첨가하는 것이 가능하다.

실시예 2

아이블로신 20% 25부를 수화 규산 마그네슘(불활성 실리카) 50부, 사료용 밀 가루 24부 및 액체 파라핀 EP 1부와 함께 분말 배합제로서 혼합하여, 1000㎏ 당 아이블로신 성분 50㎏을 함유하는 사료용 고형 첨가제를 얻는다. 이 제제는 실시예 1과 마찬가지로 돼지 및 가금 사료에 사용가능하다.

실시예 3

실시예 2에서 사용한 바와 같은 아이블로신 20% 5부를 수화 규산 마그네슘 40부, 사료용 밀가루 54부 및 액체 파라핀 EP 1부와 함께 분말 배합제로서 혼합하여, 1000㎏ 당 아이블로신 성분 10㎏을 함유하는 사료용 고형 첨가제를 얻는다. 이 제제는 실시예 1과 마찬가지로 돼지 및 가금 사료에 사용가능하다.

실시예 4

아이블로신을 물에 용해시켜, 돼지 또는 가금용의 음료수에 이용하기 위한 아이블로신 성분 80 내지 90%를 함유하는 수용액을 얻는다. 이 제제는, 음료수 중의 아이블로신 농도가 음료수 200ℓ당 25 내지 100g 제공되도록, 음료수에 첨가하는 것이 가능하다.

실시예 5

아이블로신 타르타르산염 80 % w/w 이상을 함유하는 아이블로신 API를 이하의 조성으로 이루어진 배취(batch) 850㎏에 혼합하였다:

아이블로신 API 163 내지 169㎏

하이드록시프로필 셀룰로오스 Ph. Eur. 8.2 내지 8.5㎏

물, Ph. Eur. 800 내지 1200ℓ

탈지 대두분말 720㎏.

상기 배취를 가공하고, 그 가공 동안 물을 제거하였다. 아이블로신 API의 투입량은, HPLC에 의해 측정된 원료의 유리 염기의 함량이 180 내지 220㎎/g의 최종 제품 생물학적 분석 역가(final product bioassay potency)를 달성하도록 조정하였다. 다른 배취 크기에 있어서도 제조할 수 있었던 상기 제품(AIVLOSIN FG 200)은 아이블로신 예비혼합물을 1% 내지 10%의 각종 역가로 제조하는 데 적합하였다.

실시예 6

펠릿화 또는 압출된 사료로 하기 위한 고온가공 후의 동물사료 중에서 안정성을 보유하는 피복 아이블로신 제제를, 이하의 성분으로부터 이루어진 1000㎏의 배취(단, 다른 배치크기를 이용하는 것도 가능함) 중에서 생산하였다:

AIVLOSIN FG 200(실시예 5 참조) 250.0㎏

파라핀, 라이트 리퀴드, Ph. Eur. 10.0㎏

사료용 밀가루 240.0㎏

폴리비닐피롤리돈 10.0㎏ 내지 100.0㎏

세피올라이트(Sepiolite) ~ 1000.0㎏.

실시예 7

브라키스피라 필로시콜라이에 대한 아이블로신의 최저억제농도( MIC : Minimum Inhibitory Concentration)의 측정

항생제 희석법을 이용해서 영국의 각 지역에서 서로 상이한 돼지 모집단으로 부터 분리한 브라키스피라 필로시콜라이의 5 필드 균주(field strains)에 대해서 아세틸 이소발레릴티로신의 MIC를 측정하였다. 각 분리주(isolate) 0.2㎖의 시료 4개(four replicate)를 항생제 농도가 0.78 내지 200㎍/㎖가 되도록 제조한 한천판에서 배양하였다. 아세틸 이소발레릴티로신의 MIC가 이미 알려져 있는 브라키스피라 하이오디센테리애 균주(P18A)를 대조용으로 이용하였다. 측정된 MIC는 이하의 표 1에 표시되어 있다.

균주 Ref.	MIC(㎍/㎖)
P0098-10-97	25.0
P0352-10-98	6.25
P0730-09-97	12.5
P0204-10-97(4)	< 0.781
P0525-01-98	6.25
대조용 P181A	12.5

아세틸 이소발레릴티로신의 MIC는, 아세틸 이소발레릴티로신이 훨씬 더 유효한 하나의 분리주(P0204-10-97(4))를 제외하고는 6.25 내지 25.0㎍/㎖의 범위 내로 대략 유사하다는 결론을 얻었다.

이 결과는, 아이블로신이 비교적 낮은 농도이더라도 브라키스피라 필로시콜라이의 증식을 방지하는데 특히 효과적이라는 것을 나타낸다.

실시예 8

MIC (Minimum Inhibitory Concentration)시험을 이용한 오니토박테리움 리 노트라헤일에 대한 아이블로신 및 틸미코신(펄모틸)의 시험

오니토박테리움 리노트라헤일(OR)의 분리주 4개에 대해서 이하의 항생제를 각각 시험하였다:

1) 아이블로신

2) 펄모틸(Pulmotil)

상기 항생제를 이하의 OR 분리주에 대해 시험하였다:

1) 568/99

2) 587/00

3) 33/01

4) 1322/01

1] MIC 법

각 항 생제에 필요한 농도는 그의 활성성분에 따라 산출하였다.

아이블로신

81% 액티브

32 ㎍/㎖× 2 = 64 ㎍/㎖

64 ㎍/㎖ × 1.23 = 78.72 ㎍/㎖

=0.04 g/ 500㎖

펄모틸

25% 액티브

32 ㎕/㎖× 2 = 64 ㎕/㎖

64 ㎕/㎖ × 4 = 256 ㎕/㎖

=0.13 ㎖/ 500㎖

오니토박테리움 리노트라헤일의 동결건조된 세균 분리주 4개를 10㎖ 혈청 액체배지(serum broth: OBP에 의해 공급됨, 코드 655) 중에 접종하여 37℃에서 48시간 배양하여 재구성하였다. 배양 후, 상기 각 배양액의 광학 밀도(OD)(optical density)를 540㎚에서 판독하였다. 순도를 검증하기 위해, 블러드 트립토스 한천판(Blood Tryptose agar plates)에 대해 임의의 오염물에 대해 검사한 후, 이들 판 상에 상기 배양액들을 식균하고 5% CO₂ 조건을 이용해서 37℃에서 배양한 후 각 판에 대한 임의의 오염을 조사하였다.

상기 각 항생제용의 분리주당 12개의 시험관을 시험관대에 놓았다. 이들 각 시험관에 혈청 액체배지 2㎖를 분배하였다. 이어서, 각 열의 첫번째 시험관에 항생제 2㎖를 첨가하고, 2배 희석액으로 하였다(32 ㎍/㎖ 내지 0.0625 ㎍/㎖). 다음에, 11개의 시험관에는 세균 20 ㎕를 첨가하였다. 12번째 시험관, 즉, 음성 대조군에는, 항생제도 세균도 주입되지 않았다. 11번째 시험관, 즉, 양성 대조군에만 세균 20 ㎕가 주입되었다. 이어서, 모든 시험관을 37℃에서 배양하고, 48시간 배양 후 MIC를 판독하였다.

2] 결과

항생제 희석액에 첨가하기 전의 광학밀도 판독결과(540 ㎚)

1) 568/99 - 1.025

2) 587/00 - 1.045

3) 33/01 - 1.058

4) 1322/01 - 1.081

1) 아이블로신(하기 표 2 참조)

희석액 (㎍/㎖)	세균증식
	568/99	587/00	33/01	1322/01
32	-	-	-	-
16	-	-	-	-
8	-	-	-	-
4	-	-	-	-
2	-	-	-	-
1	-	-	-	-
0.5	-	-	-	-
0.25	+	+	+	+
0.125	+	+	+	+
0.0625	+	+	+	+
음성 대조군	-	-	-	-
양성 대조군	+	+	+	+

2) 펄모틸(하기 표 3 참조)

희석액 (㎍/㎖)	세균증식
	568/99	587/00	33/01	1322/01
32	-	-	-	-
16	-	-	-	-
8	-	-	-	-
4	-	-	-	+
2	+	+	+	+
1	+	+	+	+
0.5	+	+	+	+
0.25	+	+	+	+
0.125	+	+	+	+
0.0625	+	+	+	+
음성 대조군	-	-	-	-
양성 대조군	+	+	+	+

3] 결론:

농도 0.5 ㎍/㎖의 아이블로신은, 시험한 오니토박테리움 리노트라헤일의 분리주의 증식을 억제하였다.

농도 4 ㎍/㎖의 펄모틸은, 시험한 오니토박테리움 리노트라헤일 분리주중 3개의 증식을 억제하였고, 4번째 분리주의 억제는 단지 8 ㎍/㎖의 농도에서 얻어졌다.

이들 결과는, 아이블로신이 비교적 저농도에서도 오니토박테리움 리노트라헤일의 증식을 방지하는 데 특히 효과적이라는 것을 나타낸다.

Claims (16)

1. 브라키스피라 필로시콜라이(Brachyspira pilosicoli)에 기인한 질병의 치료, 예방 또는 억제용의 약제의 제조를 위한 아이블로신(aivlosin) 또는 그의 약리학적으로 허용가능한 염의 용도.
2. 제 1항에 있어서, 상기 약제는, 돼지의 치료용인 용도.
3. 제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 약제의 사료에의 첨가율은 10 내지 200ppm인 용도.
4. 제 1항 내지 제 3항에 있어서, 상기 약제는, 사료 또는 음료수용의 첨가제인 용도.
5. 아이블로신 또는 그의 약리학적으로 허용가능한 염의 유효량을 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 브라키스피라 필로시콜라이(Brachyspira pilosicoli)에 기인한 질병을 치료, 예방 또는 억제하는 방법.
6. 제 5항에 있어서, 상기 동물은 돼지인 방법.
7. 제 5항 또는 제 6항에 있어서, 상기 아이블로신 또는 그의 약리학적으로 허용가능한 염은, 사료 또는 음료수에 투여되는 방법.
8. 오니토박테리움 리노트라헤일(Ornithobacterium rhinotracheale) 감염증의 치료, 예방 또는 억제용의 약제의 제조를 위한 아이블로신 또는 그의 약리학적으로 허용가능한 염의 용도.
9. 제 8항에 있어서, 상기 약제는, 가금의 치료용인 용도.
10. 제 8항 또는 제 9항에 있어서, 상기 약제의 사료에의 첨가율은 10 내지 200ppm인 용도.
11. 제 8항 내지 제 10항에 있어서, 상기 약제는, 사료 또는 음료수용의 첨가제인 용도.
12. 아이블로신 또는 그의 약리학적으로 허용가능한 염의 유효량을 동물에게 투여하는 단계를 포함하는, 오니토박테리움 리노트라헤일(Ornithobacterium rhinotracheale) 감염증을 치료, 예방 또는 억제하는 방법.
13. 제 12항에 있어서, 상기 동물은 가금조(poultry bird)인 방법.
14. 제 13항에 있어서, 상기 아이블로신 또는 그의 약리학적으로 허용가능한 염은, 사료 또는 음료수에 투여되는 방법.
15. 브라키스피라 필로시콜라이(Brachyspira pilosicoli)의 시험관내(in vitro) 증식의 방지 또는 저감에 이용하는 아이블로신 또는 그의 약리학적으로 허용가능한 염의 용도.
16. 오니토박테리움 리노트라헤일(Ornithobacterium rhinotracheale)의 시험관내(in vitro) 증식의 방지 또는 저감에 이용하는 아이블로신 또는 그의 약리학적으로 허용가능한 염의 용도.