KR20050119488A

KR20050119488A - 퇴행성 관절염 예방 및 치료용 조성물

Info

Publication number: KR20050119488A
Application number: KR1020040044595A
Authority: KR
Inventors: 유상우; 김성규
Original assignee: (주)주신알앤디
Priority date: 2004-06-16
Filing date: 2004-06-16
Publication date: 2005-12-21
Also published as: KR100656571B1

Abstract

본 발명은 퇴행성 관절염 예방 및 치료용 조성물에 관한 것으로, 상세하게는 우지 추출 혼합물(글루코사민 30 중량%, 우지 추출물 69 중량% 및 실리콘 디옥사이드 1중량%) 80~90 중량부, 상어연골 추출물 2~8 중량부, 하고초 추출물 2~8 중량부 및 세인트존스풀 추출물 2~8 중량부를 포함하는 것을 특징으로 한다.

본 발명의 조성물은 히알루로니데이즈의 활성을 현저히 억제하며, 동통을 현저히 경감시킴으로써, 퇴행성 관절염 예방 및 치료에 유용한 의약품 및 건강식품으로 사용할 수 있다.

Description

퇴행성 관절염 예방 및 치료용 조성물{Composition for preventation and treatment of degenerative arthritis}

퇴행성 관절염(degenerative arthritis)은 관절 연골이 닳아 없어지면서 국소적인 퇴행성 변화가 나타나는 질환으로서, 골관절염(osteoarthritis) 또는 골관절증 이라고도 한다. 골관절염은 노령화와 밀접한 연관을 갖는 대표적인 퇴행성 질환으로, 전 인구의 10~15% 정도가 앓고 있으며, 특히 65세 이상의 고령인구 중 60~80% 정도가 골관절염을 앓고 있다.

퇴행성 관절염의 원인은 노화 현상이나 과다한 체중과 관계가 깊으며, 나이가 많아질수록 여성에게서 더 많이 그리고 더 심하게 나타난다. 초기 증상은 한개 또는 두개의 관절이 강직과 함께 쑤시는 듯한 동통이 나타나며, 장기화 되면 연골 하 골의 경화, 관절 주변에 골의 과잉형성, 관절의 변형 등을 초래하게 된다.

퇴행성 관절염은 일차성(원발성) 또는 이차성(속발성)으로 분류할 수 있다.

첫째, 일차성(원발성) 퇴행성 관절염은 확실한 원인은 아직 밝혀져 있지 않지만, 나이, 성별, 유전적 요소, 비만증 등이 원인이라로 생각되고 있다. 일차성(원발성) 퇴행성 관절염은 중년 이후 나이가 많을수록 발병 빈도가 높아지고, 여성에게서 더 많이 나타난다. 또한, 가족력과 관계가 있다. 비만증이 있는 경우는, 정상인보다 약 2배 정도로 발생률이 높고, 이때는 주로 체중 부하 관절에 나타난다. 흔히 침범되는 관절은 체중 부하와 압박력을 받는 요추, 고관절, 슬관절, 그리고 발의 모지의 중족지 관절 등이다. 특히, 관절 내에서도 일정 부위, 즉 예를 들면 슬관절의 내측 관절이 잘 침범된다. 여성의 경우는 수지의 원위지 관절(몸통에서 먼 손가락관절)과 제 1 수근중수 관절(손바닥의 관절)에 잘 침범되고, 남성의 경우는 고관절의 침범이 흔하다.

둘째, 이차성(속발성) 퇴행성 관절염은 관절 연골에 손상을 줄 수 있는 외상, 질병 및 기형이 모두 원인이 될 수 있다. 선천성 기형으로는 고관절 발육 부전이나 내반슬같이 관절의 정렬이 틀어진 경우이고, 화농성/결핵성 관절염후 관절 연골이 파괴된 경우는 무혈성 괴사, 심한 충격 또는 반복적인 가벼운 외상 등에서 퇴행성 관절염이 속발되는 경우가 흔하다. 또한, 말단 거대증이나 당뇨병 등 내분비이상이나, 통풍 등의 대사성 질환에서도 퇴행성 관절염이 많이 나타난다.

관절연골의 퇴행성 변화의 원인은 아직 규명되어 있지는 않지만, 연골세포 수의 절대적 감소와 연골세포(chondrocytes)에서 일어나는 연골기질 합성과 분해의 불균형이 하나의 원인으로 알려져 있다. 따라서, 관절연골의 퇴행성 변화는 연골기질의 분해로 인하여 연골 강도와 쿠션으로서의 능력이 감소된다.

히알루론산(hyaluronic acid)은 생체 내 연골조직에 많이 함유되어 있는 물질로, 연골조직의 탄력성을 높이는데 큰 역할을 하며, 수분 함유량이 높고, 뛰어난 점탄성(viscoelasticity)을 지니고 있다. 일반적으로 골관절염 환자에게서 히알루론산의 분해 촉진이 관찰되고 있다. 또한 콜라게나제(collagenase)와 히알루로니데이즈(hyaluronidase) 등이 관절연골세포의 세포사를 증가시키고, 연골세포의 대사작용을 감소시켜 연골조직의 퇴행성 변화를 촉진한다는 연구보고가 있다. 따라서, 히알루론산의 분해효소인 히알루로니데이즈를 억제하면 골관절염의 치료효과 가능성이 있을 것으로 생각된다.

현재 임상적으로 사용되고 있는 퇴행성 관절염의 치료로는, 약물치료제(진통제, 스테로이드제, 비스테로이드계 항염제 등)나 연골보호제(히알루론산, 글루코사민, 콘드로이틴 등)를 이용하거나 수술적 처치(관절경 수술, 경골 근위부 절골술, 관절 부분 치환술, 슬관절 전치환술 등)에 의한다. 그러나 약물치료제의 경우는 통증이나 염증반응 자체를 비특이적으로 완화시키는 효과만을 가지며, 연골보호제는 단지 연골세포에 영양을 공급해 주거나 충격을 완화시킴으로써 관절을 보호해 주는 역할을 할 뿐이다. 또한 스테로이드성 제제를 장기간 복용할 시 칼슘의 손실로 골다공증, 고혈압, 당뇨병 등을 초래할 수 있는 부작용이 있다. 따라서 약물치료는 대부분의 경우 통증을 감소시키는 목적으로만 사용되고 있고, 영구적인 인공관절 치환술이 주를 이루고 있지만 근본적인 치료효과를 주는 약물이나 수술법은 현재까지 없는 실정이다.

이에, 본 발명자들은 기존의 관절염 치료제의 부작용을 최소화하고 관절염의 동통을 최대한 경감시키기 위한 대안을 탐색하던 중, 우지 추출 혼합물, 상어연골추출물, 하고초 추출물 및 세인트존스풀 추출물의 혼합물이 히알루로니데이즈의 활성을 현저히 억제하고 동통을 경감시키는 효과가 있음을 확인하고 본 발명을 완성하였다.

본 발명은 우지 추출 혼합물(글루코사민, 우지 추출물 및 실리콘 디옥사이드), 상어연골 추출물, 하고초 추출물 및 세인트존스풀 추출물을 포함하는 퇴행성 관절염 예방 및 치료용 조성물을 제공하고자 한다.

본 발명은 우지 추출 혼합물(글루코사민, 우지 추출물 및 실리콘 디옥사이드), 상어연골 추출물, 하고초 추출물 및 세인트존스풀 추출물을 포함하는 퇴행성 관절염 예방 및 치료용 조성물을 제공한다.

본 발명의 조성물은 퇴행성 관절염 예방 및 치료에 유용한 의약품 및 건강식품을 포함한다.

이하, 본 발명에 대해 상세히 설명한다.

본 발명의 조성물은 우지 추출 혼합물 80~90 중량부, 상어연골 추출물 2~8 중량부, 하고초 추출물 2~8 중량부 및 세인트존스풀 추출물 2~8 중량부를 포함한다.

상기 우지 추출 혼합물은 글루코사민 30 중량%, 우지 추출물 69 중량% 및 실리콘 디옥사이드 1중량%를 포함한다.

본 발명의 조성물에서 각각의 구성성분이 어떠한 작용을 나타내는지 구체적으로 설명한다.

우지 추출물(Beef Tallow Extract)의 주성분은 CMO(Cetyl Myristoleate; cerasomal cis-9-cetylmyristoleate)라고 불리는 지방산 복합군으로, 소와 같은 동물의 연결조직에서 추출하며, 식물에서도 소량 발견된다. 1970년대 초반, 다이얼 (Diel)에 의해 CMO가 관절염에 많은 도움을 준다는 것이 발견되었다. CMO는 일반적인 관절염이나 류마티스 치료제와는 달리 손상된 면역시스템이 정상적으로 되도록 도와주어 증세가 악화되는 것을 근본적으로 막아주어 관절 및 류마티스 보조제로서 사용된다.

글루코사민(Glucosamine)은 포도당에 클루타민이라는 아미노산으로 구성된 물질로 연골, 피부, 손톱, 머리카락을 비롯한 신체 조직구조를 이루는 중요한 성분이다. 글루코사민은 당단백질, 당지질 및 뮤코다당체 등의 중요한 생체성분으로서 널리 분포되어 있는 대표적인 천연아미노당이다. 글루코사민은 생체중의 여러 가지 복합 당질의 당쇄중에 구성단위로 존재한다. 그 대표적인 것이 콘드로이틴황산이나 히아론산의 뮤코다당류를 포함하는 프로테오글리칸이며, 종합조직, 피부조직, 연골 및 관절액 등에 많이 분포되어 있다. 이들은 높은 보습효과를 가지고 세포의 기능이나 형태를 유지하며 윤활작용, 세포접착, 증식, 분화 등의 세포표면에 있어서 중요한 기능을 담당하고 있다. 글루코사민은 염의 형태로 유럽 등에서 변형성 관절염의 치료약으로 사용되고 있다. 미국에서는 5~6년 전부터 영양 보조식품으로 판매되어 큰 시장을 형성하고 있고, 일본에서는 이미 오래전부터 식품 첨가물로 등재되어 사용되고 있다. 관절을 혹사하는 운동선수, 노인, 노약자, 관절염을 앓고 있는 환자 등에 여러 식품 소재로써 사용되고 있다.

실리콘 디옥사이드(silicon dioxide; SiO₂)는 천연으로 존재하는 각종 규산염 속의 성분으로서 이산화 규소라고 하며, 고결방지제로 사용한다. 고결방지제로 사용할 경우, 이산화 규소 및 이를 함유하는 제제의 사용량은 식품의 2% 이하이어야 한다.

상어연골(Shark cartilage)은 회분, 단백질, 탄수화물, 수분, 섬유질, 인 등으로 구성되어 있다. 상어연골에는 콘드로이틴황산(chondroitin sulfate)이라는 성분이 포함되어 있으며, 이 성분은 연골의 탄성을 주는 거대한 단백질의 일부분이다. 콘드로이틴황산은 아스피린이나 이부프로펜과 같은 비스테로이드성 관절염 치료제와 같은 정도로 약한 골관절염의 통증을 완화시키고 연골의 퇴행을 늦추는 결과가 보고되어 있다. 또한, 상어 연골은 신생혈관 억제작용을 한다고도 알려져 있다(Lee, A. and Langer, R. Science, 221, 1185-1187, 1983).

하고초(夏枯草, Xia Ku Cao)는 꿀풀 및 동속근연식물의 과수로서 여름에 과수가 반쯤 시들면 채취하여 햇볕에 말려 약재로 사용하여온 무독한 한방 생약이다. 하고초는 각종 종기나 상처, 기관지염, 유선염, 편도선염 및 치루 등의 일반적인 염증에 널리 사용되어 왔을 뿐만 아니라 특히 습비를 제거하는 작용이 있어 손발이 차거나 저린데, 무릎이 아파 걷지 못하는데, 허리와 어깨 아픈데, 온몸이 힘이 없고 살갗통증 등의 증상치료에 탕제 또는 생약분말제로 이용되어 왔다. 이들 상기 증상은 현대 병리학적 개념으로 보면 만성류마티스 관절염을 포함한 일반적 관절염의 증상과 유사하여 하고초로부터 추출한 물질을 일반 관절염 치료에 많이 이용한다. 하고초의 성분으로는 올레아놀린산(oleanolic acid), 우르솔린산(ursolic acid) 등의 사포닌류와 카로틴(carotine), 비타민 C(vitamine C), 비타민 K (vitamine K), 탄닌(tannin), 카페인산(caffeic acid),클로르제닌산(chlorogenic acid) 등이 알려져 있고 로즈마린산(rosmarinic acid)이 존재하는 것도 밝혀져 있다[한국유용식물자원 연구총람, 한국화학연구소, pp480-482(1988); 하고초 화학성분연구, 이작평(李作平) 외 3인, 북경의과대학학보, 17(4), pp297-299(1985); Pharm. Acta. Helv. 66. No.7, pp185-188(1991)].

세인트존스풀(St. John's wort)은 고추나물(Hypericum perforatum)이라는 식물의 지상부를 말하는 것으로, 가벼운 우울증을 치료하는 신경안정제로 쓰인다. 활성성분으로 광에 민감한 색소로 하이퍼리신(hypericin)과 하이퍼포린(hyperforin)을 함유하며, 세로토닌(serotonin) 재흡수를 억제하는 작용기작을 가지고 있다.

본 발명에 따르는 조성물의 제조방법은 다음과 같다.

소의 지방조직을 깨끗이 세척한 후, 약 40℃에서 1차 건조시킨다. 건조된 소의 지방조직을 잘게 분쇄한 후, 120℃에서 4시간동안 열수추출한다. 추출액을 여과하고 감압하에 농축하고 동결건조하여 분말상태의 우지 추출물을 얻는다. 여기에 글루코사민 30 중량% 및 실리콘 디옥사이드 1중량% 넣고 혼합하여 우지 추출 혼합물을 얻는다.

상어연골 원료로부터 살, 이물질 등을 완전히 제거하고, 깨끗이 세척한 후, 저온 건조공법을 이용하여 약 40℃에서 1차 건조한다. 건조된 상어연골을 120℃에서 4시간동안 열수추출하고, 56℃에서 4시간동안 효소처리한다. 95℃에서 20분동안 1차 멸균처리하고 100매쉬 체로 1차 여과한다. 여과액을 진공 농축하고, 다시 8℃에서 30분동안 2차 멸균한 후, 150매쉬의 체로 2차 여과한다. 여과액을 분사건조시킨 후, 100매쉬 체로 걸러내어 농축된 분말상태의 상어연골 추출물을 얻는다.

세절된 하고초에 1ℓ의 물을 가해 잘 교반하여 주면서 5시간 열탕 추출한다. 여액을 취하여 모으고 잔사에 대해서는 2ℓ의 물을 가해 3시간 재열탕 추출한 후 여액을 모두 합하여 농축한다. 여기에 동량의 수포화 n-부틸알콜을 가하여 3회 층분리한 후 n-부틸알콜만을 모아 65℃로 하고초 추출물이 건조될 때까지 감압 농축한다. 대부분의 n-부틸알콜과 물이 증발된 상태에서 100㎖의 물을 가해 공비 농축한 후 다시 2회 반복하고, 최종적으로 동량의 증류수를 가하여 현탁시킨 후 동결 건조하여 분말상태의 하고초 엑기스를 얻는다.

세인트존스풀을 잘게 자르고, 세척한 후 하고초 추출방법과 동일하게 열수 추출하여 분말상태의 세인트존스풀 추출물을 얻는다.

상기에서 제조한 우지 추출 혼합물, 상어연골 추출물, 하고초 추출물, 세인트존스풀 추출물을 혼합하여 추출 혼합물을 제조한다.

본 발명의 추출 혼합물은 히알루로니데이즈의 활성 억제도가 62.6±0.71 %로, 우지 추출 혼합물 또는 상어연골 추출물보다 히알루로니데이즈의 활성을 현저히 억제시킨다.

또한, 본 발명의 추출 혼합물은 500㎎/㎏ 농도로 투여한 경우, 30분, 1시간, 2시간 및 3시간째에 각각 30.3%, 45.2%, 53.6% 및 70.5%의 진통효과를 나타내고, 1,000㎎/㎏ 농도로 투여한 경우, 1시간, 2시간 및 3시간째에 각각 55.1%, 66.7% 및 82.3%의 진통효과를 나타내어, 진통효과가 시간과 농도에 비례함을 알 수 있다.

따라서, 본 발명의 조성물은 퇴행성 관절염의 예방 및 치료에 유용하게 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물은 상기 추출 혼합물에 추가로 동일 또는 유사한 기능을 나타내는 유효성분을 1종 이상 함유할 수 있다.

상기 추출 혼합물은 임상 투여 시에 경구 또는 비경구로 투여가 가능하며 일반적인 의약품 제제의 형태로 사용될 수 있다. 즉, 본 발명의 추출 혼합물은 실제 임상 투여 시에 경구 및 비경구의 여러 가지 제형으로 투여될 수 있는데, 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제 및 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다. 경구 투여를 위한 고형 제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제 및 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형 제제는 혼합 생약재 추출물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로스, 락토오스 및 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 마그네슘 스티레이트 탈크 같은 윤활제들도 사용된다. 경구 투여를 위한 액상 제제로는 현탁제, 내용액제, 유제 및 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인 물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제 및 보존제 등이 포함될 수 있다. 비경구 투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제가 포함된다. 비수성용제와 현탁용제로는 프로필렌글리콜, 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테르 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔 (witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세롤 및 젤라틴 등이 사용될 수 있다.

투여량은 환자의 체중, 연령, 성별, 건강상태, 식이, 투여시간, 투여방법, 배설율 및 질환의 중증도에 따라 그 범위가 다양하며, 본 발명의 추출 혼합물의 일일 투여량은 10~50 ㎎/㎏(1일 기준으로 1,000~3,000 mg)이며, 하루 1~6 회 투여될 수 있다.

본 발명의 추출 혼합물을 랫트에 경구 투여하여 독성 실험을 수행한 결과, 경구 투여 독성시험에 의한 50% 치사량(LD₅₀)은 적어도 1g/kg 이상인 안전한 물질로 판단된다.

본 발명의 조성물은 퇴행성 관절염의 예방 및 치료를 위하여 단독으로, 또는 수술, 방사선 치료, 호르몬 치료, 화학 치료 및 생물학적 반응 조절제를 사용하는 방법들과 병용하여 사용할 수 있다.

본 발명의 조성물은 퇴행성 관절염의 개선을 목적으로 건강식품에 첨가될 수 있다. 본 발명의 추출 혼합물을 식품 첨가물로 사용할 경우, 상기 추출 혼합물을 그대로 첨가하거나 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적(예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에는 본 발명의 혼합 생약재 추출물이 원료에 대하여 15 중량% 이하, 바람직하게는 10 중량% 이하의 양으로 첨가된다. 그러나, 건강 및 위생을 목적으로 하거나 또는 건강 조절을 목적으로 하는 장기간의 섭취의 경우에는 상기 양은 상기 범위 이하일 수 있으며, 안전성 면에서 아무런 문제가 없기 때문에 유효성분은 상기 범위 이상의 양으로도 사용될 수 있다.

상기 식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 상기 물질을 첨가할 수 있는 식품의 예로는 육류, 소세지, 빵, 쵸코렛, 캔디류, 스넥류, 과자류, 피자, 라면, 기타 면류, 껌류, 아이스크림류를 포함한 낙농제품, 각종 스프, 음료수, 차, 드링크제, 알콜 음료 및 비타민 복합제 등이 있으며, 통상적인 의미에서의 건강식품을 모두 포함한다.

본 발명의 건강음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상술한 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 천연 탄수화물의 비율은 본 발명의 조성물 100㎖당 일반적으로 약 0.01~0.04g, 바람직하게는 약 0.02~0.03g 이다.

상기 외에 본 발명의 조성물은 여러가지 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제 등을 함유할 수 있다. 그밖에 본 발명의 조성물은 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료 및 야채 음료의 제조를 위한 과육을 함유할 수 있다. 이러한 성분은 독립적으로 또는 혼합하여 사용할 수 있다. 이러한 첨가제의 비율은 크게 중요하진 않지만 본 발명의 조성물 100 중량부 당 0.01~0.1 중량부의 범위에서 선택되는 것이 일반적이다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예 및 실험예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예 및 실험예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.

실시예 : 본 발명의 추출 혼합물의 제조

1. 우지 추출 혼합물의 제조

소의 지방조직을 깨끗이 세척한 후, 약 40℃에서 1차 건조하였다. 건조된 소의 지방조직을 잘게 분쇄한 후, 120℃에서 4시간동안 열수추출하였다. 추출액을 여과하고 감압하에 농축하였다. 농축액을 동결건조하여 분말상태의 우지 추출물을 얻었다.

상기 우지 추출물 69 중량%에 글루코사민 30 중량% 및 실리콘 디옥사이드 1중량% 넣고 혼합하였다.

2. 상어연골 추출물의 제조

신선한 상어연골 원료로부터 살, 이물질 등을 완전히 제거하고, 깨끗이 세척한 후, 저온 건조공법을 이용하여 약 40℃에서 1차 건조하였다. 건조된 상어연골을 해머밀링기계를 이용하여 작은 입자로 분쇄하였다(초핑(Chopping)). 분쇄된 상어연골조각을 120℃에서 4시간동안 열수추출하고, 56℃에서 4시간동안 효소처리하였다. 95℃에서 20분동안 1차 멸균처리하고 100매쉬의 체로 1차 여과하였다. 여과액을 진공 농축한 후, 다시 8℃에서 30분동안 2차 멸균하고, 150매쉬의 체로 2차 여과하였다. 여과액을 분사건조시킨 후, 100매쉬의 체로 걸러내어 농축된 분말상태의 상어연골 추출물을 얻었다.

3. 하고초 추출물의 제조

약 3.0㎝ 정도로 세절된 하고초 250g을 고루 섞은 후, 2ℓ의 물을 가해 잘 교반하여 주면서 5 시간 열탕 추출하였다. 여액을 취하여 모으고 잔사에 대해서는 2ℓ의 물을 가해 3 시간 재열탕 추출한 후 여액을 모두 합하여 1ℓ로 농축하였다. 여기에 동량의 수포화 n-부틸알콜을 가하여 3회 층분리한 후 n-부틸알콜만을 모아 65℃로 하고초 추출물이 건조될 때까지 감압 농축하였다. 대부분의 n-부틸알콜과 물이 증발된 상태에서 100㎖의 물을 가해 공비 농축한 후 다시 2회 반복하고, 최종적으로 동량의 증류수를 가하여 현탁시킨 후 동결 건조하여 분말상태의 하고초 엑기스를 얻었다.

4. 세인트존스풀 추출물의 제조

세인트존스풀을 잘게 자르고, 세척한 후 상기 3의 방법과 동일하게 열수 추출하여 분말상태의 세인트존스풀 추출물을 얻었다.

5. 추출 혼합물의 제조

상기에서 제조한 우지 추출 혼합물 84.5 중량부, 상어연골 추출물 5 중량부, 하고초 추출물 5 중량부, 세인트존스풀 추출물 5 중량부를 혼합하여 추출 혼합물을 제조하였다.

상기 추출 혼합물은 DMSO에 녹여서 하기 실험에 사용하였다.

실험예 1 : 본 발명의 추출 혼합물의 히알루로니데이즈 활성 억제도 측정

본 발명의 추출 혼합물의 히알루로니데이즈 활성 억제도를 알아보기 위하여, Morgan-Elson Assay 법을 이용하여 활성을 측정하였다.

인산완충용액에 녹인 히알루론산과 DMSO에 녹인 상기 실시예에서 제조한 추출 혼합물을 각각 넣고 37℃에서 20분간 배양하였다. 배양한 후에 화합물 48/80용액을 넣고 2차 배양하였다. 히알루론산을 넣고 3차 배양 한 후 K₃BO₃를 넣고 열탕에서 가열하여 반응을 중지시켰다. 원심분리 후, 히알루론산이 히알루로니데이즈에 의해서 분해되어 생성되는 N-알세틸글루코사민(N-acetylglucosamine)을 DMAB(p-dimetylaminobenzaldehyde)를 이용하여 585㎚에서 비색정량하여 활성을 검증하였다.

결과는 표 1에 나타내었다.

	본 발명의 추출 혼합물(실시예)	우지 추출 혼합물	상어연골 추출물
활성 억제도(%)	62.6±0.71	53.0±0.28	30.6±0.07

표 1에 나타난 바와 같이, 본 발명의 추출 혼합물은 히알루로니데이즈의 활성 억제도가 62.6±0.71 %로, 우지 추출 혼합물 또는 상어연골 추출물보다 히알루로니데이즈의 활성을 현저히 억제시킴을 알 수 있다.

실험예 2 : 본 발명의 추출 혼합물이 관절연골세포(C28/I2 cell) 증식 및 세포외기질 합성에 미치는 영향

본 발명의 추출 혼합물이 인간 늑골(Human costal) 연골세포에 대한 히알루로니데이즈 효소 저해 활성과 연골세포의 세포외기질 합성에 미치는 영향을 알아보기 위하여, 연골의 특이적인 세포외기질인 콜라겐 타입 Ⅱ의 발현양상을 RT-PCR을 통해 확인하였다.

인간 늑골 연골세포가 배양된 접시에 각각 1) 대조군(연골세포), 2) 히알루로니데이즈 처리군, 3) 본 발명의 추출 혼합물과 히알루로니데이즈 처리군으로, 처리한 후 24~72 시간 관찰하였다.

단층 배양된 연골세포를 떼어낸 후 총 RNA는 트리졸 시약(Trizol Reagent; RNA extraction Kit, GIBCOBRL)을 이용하여 분리하였다. 각각의 군에 대하여 동량의 RNA를 AMV 역전사효소(BMS)를 이용하여 complementary DNA(cDNA)를 만든 뒤, 이를 템플레이트(template)로 하여 콜라겐 타입 Ⅱ와 GAPDH에 대한 각각의 프라이머를 제작하여 PCR로 증폭시킨 후 아가로즈겔에 전기영동하여 변화를 확인하였다.

결과는 도 1에 나타내었다.

도 1에 나타난 바와 같이, 본 발명의 추출 혼합물은 연골세포 콜라겐 타입 Ⅱ 발현에서 히알루로니데이즈 단독 처리군 보다 현저히 발현됨을 확인하였다.

따라서, 본 발명의 추출 혼합물은 히아루로니데이즈의 활성을 억제함을 알 수 있다.

실험예 3 : 동통 효과 실험

본 발명의 추출 혼합물의 동통 효과를 확인하기 위하여, 란달 및 살리토의 방법(Randall, L. O. and Salitto, J. J., Arch. Int. Pharmacodyn. Ther., 111, 4.9-19, 1971)에 따라 하기와 같은 실험을 수행하였다.

동통 효과 실험은 염증부위의 동통에 대한 감수성을 증대시켜 그 증대된 감수성이 진통제에 의해 억제되는 것에 기초하였다.

실험동물로 체중 180~220g의 스프라그-도우리계 웅성 흰쥐 8마리를 한 군으로 하였다. 흰쥐를 하룻밤 절식시킨 뒤, 아날게시미터(analgesymeter)(Ugo Basile, Italy)를 이용하여 300g의 압력에도 반응하지 않는 흰쥐를 먼저 제외시켰다. 20% 브루어 이스트(brewers yeast)-생리식염수 현탁액 0.1㎖씩 흰쥐의 발바닥에 피하주사하여 염증을 유발시키고, 2시간 후에 상기 실시예에서 제조한 추출 혼합물을 500 ㎎/㎏ 및 1,000 ㎎/㎏ 농도로 각각 투여하였다. 0, 0.5, 1, 2, 3시간 후에 아날게시미터로 동통역치(g)를 측정하였다. 동통역치는 흰쥐의 발바닥에 16g/초의 속도로 서서히 압력을 가하여, 흰쥐가 발을 빼려고 하거나 아파서 몸을 뒤틀 때를 동통반응으로 하였다. 진통작용은 대조군 동통역치에 대한 %를 구함으로써 나타내었다. 대조약물로는 이부프로펜(200 ㎎/㎏)을 사용하였다.

결과는 표 2에 나타내었다.

		시간에 따른 진통율(%)
		30분	1시간	2시간	3시간
대조약물(이부프로펜)		30.2	43.5	51.4	69.1
본 발명의 추출 혼합물(실시예)	500㎎/㎏	30.3	45.2	53.6	70.5
본 발명의 추출 혼합물(실시예)	1,000㎎/㎏	35.7	55.1	66.7	82.3

표 2에 나타난 바와 같이, 본 발명의 추출 혼합물을 500㎎/㎏ 농도로 투여한 경우, 30분, 1시간, 2시간 및 3시간째에 각각 30.3%, 45.2%, 53.6% 및 70.5%의 진통효과를 나타내었으며, 본 발명의 추출 혼합물을 1,000㎎/㎏ 농도로 투여한 경우, 1시간, 2시간 및 3시간째에 각각 55.1%, 66.7% 및 82.3%의 진통효과를 나타내었다. 따라서, 본 발명의 추출 혼합물은 시간과 농도에 비례하여 진통 감소효과를 나타냄을 알 수 있다.

실험예 4 : 랫트에 대한 경구투여 급성 독성실험

본 발명의 추출 혼합물의 급성 독성을 알아보기 위하여, 하기와 같은 방법으로 급성독성실험을 하였다.

실험동물로 6주령의 특정병원체부재(specific pathogen-free, SPF) SD계 랫트를 사용하여 급성독성실험을 실시하였다. 군당 2 마리씩의 동물에 상기 실시예에 서 제조한 추출 혼합물을 0.5% 메틸셀룰로즈 용액에 현탁하여 1g/㎏/㎖의 용량으로 1회 단회 경구투여 하였다. 시험물질 투여 후 동물의 폐사여부, 임상증상, 체중변화를 관찰하고 혈액학적 검사와 혈액생화학적검사를 실시하였으며, 부검하여 육안으로 복강장기와 흉강장기의 이상여부를 관찰하였다.

그 결과, 시험물질을 투여한 모든 동물에서 특기할 만한 임상증상이나 폐사된 동물은 없었으며, 체중변화, 혈액검사, 혈액생화학 검사, 부검소견 등에서도 독성변화는 관찰되지 않았다.

따라서, 본 발명의 추출 혼합물은 모두 랫트에서 1g/㎏까지도 독성변화를 나타내지 않으며, 경구 투여 최소치사량(LD₅₀)은 추출물 1g/kg 이상인 안전한 물질로 판단되었다.

하기에 본 발명의 조성물을 위한 제제예를 예시한다.

제제예 1 : 약학적 제제의 제조

1. 산제의 제조

상기 실시예의 추출 혼합물 2g

유당 1g

상기의 성분을 혼합하고 기밀포에 충진하여 산제를 제조하였다.

2. 정제의 제조

상기 실시예의 추출 혼합물 100㎎

옥수수전분 100㎎

유 당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 정제의 제조방법에 따라서 타정하여 정제를 제조하였다.

3. 캡슐제의 제조

상기 실시예의 추출 혼합물 100㎎

옥수수전분 100㎎

유 당 100㎎

스테아린산 마그네슘 2㎎

상기의 성분을 혼합한 후, 통상의 캡슐제의 제조방법에 따라서 젤라틴 캡슐에 충전하여 캡슐제를 제조하였다.

제제예 2 : 식품의 제조

본 발명의 추출 혼합물을 포함하는 식품들을 다음과 같이 제조하였다.

1. 조리용 양념의 제조

본 발명의 추출 혼합물 20 ~ 95 중량%로 건강 증진용 조리용 양념을 제조하였다.

2. 토마토 케찹 및 소스의 제조

본 발명의 추출 혼합물 0.2 ~ 1.0 중량%를 토마토 케찹 또는 소스에 첨가하여 건강 증진용 토마토 케찹 또는 소스를 제조하였다.

3. 밀가루 식품의 제조

본 발명의 추출 혼합물 0.5 ~ 5.0 중량%를 밀가루에 첨가하고, 이 혼합물을 이용하여 빵, 케이크, 쿠키, 크래커 및 면류를 제조하여 건강 증진용 식품을 제조하였다.

4. 스프 및 육즙(gravies)의 제조

본 발명의 추출 혼합물 0.1 ~ 5.0 중량%를 스프 및 육즙에 첨가하여 건강 증진용 육가공 제품, 면류의 수프 및 육즙을 제조하였다.

5. 그라운드 비프(ground beef)의 제조

본 발명의 추출 혼합물 10 중량%를 그라운드 비프에 첨가하여 건강 증진용 그라운드 비프를 제조하였다.

6. 유제품(dairy products)의 제조

본 발명의 추출 혼합물 5 ~ 10 중량%를 우유에 첨가하고, 상기 우유를 이용하여 버터 및 아이스크림과 같은 다양한 유제품을 제조하였다.

7. 선식의 제조

현미, 보리, 찹쌀, 율무를 공지의 방법으로 알파화시켜 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.

검정콩, 검정깨, 들깨도 공지의 방법으로 쪄서 건조시킨 것을 배전한 후 분쇄기로 입도 60메쉬의 분말로 제조하였다.

본 발명의 추출 혼합물을 진공 농축기에서 감압·농축하고, 분무, 열풍건조기로 건조하여 얻은 건조물을 분쇄기로 입도 60메쉬로 분쇄하여 건조분말을 얻었다.

상기에서 제조한 곡물류, 종실류 및 추출 혼합물의 건조분말을 다음의 비율로 배합하여 제조하였다.

곡물류(현미 30중량%, 율무 15중량%, 보리 20중량%),

종실류(들깨 7중량%, 검정콩 8중량%, 검정깨 7중량%),

추출 혼합물의 건조분말(3 중량%),

영지(0.5중량%),

지황(0.5중량%)

제제예 3 : 음료의 제조

1. 탄산음료의 제조

설탕 5~10%, 구연산 0.05~0.3%, 카라멜 0.005~0.02%, 비타민 C 0.1~1%의 첨가물을 혼합하고, 여기에 79~94%의 정제수를 섞어서 시럽을 만들고, 상기 시럽을 85~98℃에서 20~180초간 살균하여 냉각수와 1:4의 비율로 혼합한 다음 탄산가스를 0.5~0.82%를 주입하여 본 발명의 추출 혼합물을 함유하는 탄산음료를 제조하였다.

2. 건강음료의 제조

액상과당(0.5%), 올리고당(2%), 설탕(2%), 식염(0.5%), 물(75%)과 같은 부재료와 추출 혼합물을 균질하게 배합하여 순간 살균을 한 후 이를 유리병, 패트병 등 소포장 용기에 포장하여 건강음료를 제조하였다.

3. 야채쥬스의 제조

본 발명의 추출 혼합물 5g을 토마토 또는 당근 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 야채쥬스를 제조하였다.

4. 과일쥬스의 제조

본 발명의 추출 혼합물 1g을 사과 또는 포도 쥬스 1,000㎖에 가하여 건강 증진용 과일쥬스를 제조하였다.

도 1은 본 발명의 추출 혼합물이 연골세포 콜라겐 타입 Ⅱ 발현에 미치는 영향을 나타낸 도이다.

Claims

글루코사민과 우지 추출물을 포함하는 우지 추출 혼합물, 상어연골 추출물, 하고초 추출물 및 세인트존스풀 추출물을 포함하는 퇴행성 관절염 예방 및 치료용 약학적 조성물.
제 1항에 있어서, 상기 조성물은 우지 추출 혼합물 80~90 중량부, 상어연골 추출물 2~8 중량부, 하고초 추출물 2~8 중량부 및 세인트존스풀 추출물 2~8 중량부를 포함하는 퇴행성 관절염 예방 및 치료용 약학적 조성물.
제 1항 또는 제 2항에 있어서, 상기 우지 추출 혼합물은 우지 추출물 69 중량%, 글루코사민 30 중량% 및 실리콘 디옥사이드 1중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는 퇴행성 관절염 예방 및 치료용 약학적 조성물.
글루코사민과 우지 추출물을 포함하는 우지 추출 혼합물, 상어연골 추출물, 하고초 추출물 및 세인트존스풀 추출물을 포함하는 퇴행성 관절염 예방 및 치료용 건강식품 조성물.
제 4항에 있어서, 상기 조성물은 우지 추출 혼합물 80~90 중량부, 상어연골 추출물 2~8 중량부, 하고초 추출물 2~8 중량부 및 세인트존스풀 추출물 2~8 중량부를 포함하는 퇴행성 관절염 예방 및 치료용 건강식품 조성물.
제 4항 또는 제 5항에 있어서, 상기 우지 추출 혼합물은 우지 추출물 69 중량%, 글루코사민 30 중량% 및 실리콘 디옥사이드 1중량%를 포함하는 것을 특징으로 하는 퇴행성 관절염 예방 및 치료용 건강식품 조성물.