KR20050042249A - Ｄｎａ 복제 단백질 및 병인 관련 단백질을 코딩하는유전자 - Google Patents

Ｄｎａ 복제 단백질 및 병인 관련 단백질을 코딩하는유전자 Download PDF

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Abstract

본 발명은 신규한 핵산 분자, 유전자적으로 개선된 미생물의 제조에 있어서의 그의 용도 및 상기 유전자적으로 개선된 미생물을 사용한 정밀 화학물질, 특히 아미노산의 제조 방법에 관한 것이다.

Description

ＤＮＡ 복제 단백질 및 병인 관련 단백질을 코딩하는 유전자 {GENES CODING FOR DNA REPLICATION PROTEINS AND FOR PROTEINS RELATED TO PATHOGENESIS}
세포에서 자연발생적으로 일어나는 대사 과정의 일부 산물 및 부산물은 식품, 사료, 화장품 및 제약 산업을 비롯한 다양한 산업 분야에 사용된다. 총체적으로 "정밀 화학물질"로 불리는 이들 분자로는 유기산, 단백질생성 및 비단백질생성 아미노산, 뉴클레오티드 및 뉴클레오시드, 지질 및 지방산, 디올, 탄수화물, 방향족 화합물, 비타민 및 보조인자, 및 효소가 있다. 이들은 원하는 각각 특정의 경우에 분자를 대량으로 생산하고 분비하도록 개발된 세균의 대규모 배양을 통해 최고로 생산된다. 이러한 목적에 특히 적합한 유기체는 그람 양성의 비병원성 세균인 코리네박테리움 글루타미쿰 (Corynebacterium glutamicum)이다. 균주 선별을 통해, 일련의 바람직한 화합물을 생산하는 다수의 돌연변이 균주가 개발되어 있다. 그러나, 특정 분자의 생산을 위해 개량된 균주의 선별은 시간 소모적이고 어려운 과정이다.
<발명의 개요>
본 발명은 코리네박테리움 글루타미쿰 또는 관련 박테리아 종 씨. 글루타미쿰 (C. glutamicum)의 동정 또는 분류를 위해 사용될 수 있는 신규 핵산 분자를 제공한다. 씨. 글루타미쿰은 그람-양성, 호기성 박테리아이고 다양한 정밀 화학물질의 대량 생산, 탄화수소의 분해 (예컨대, 원유 유출 경우) 및 테르페노이드의 산화를 위해 공업적으로 통상 사용된다. 따라서, 핵산 분자는 예를 들어, 발효 공정에 의해 정밀 화학물질을 생산하는 데 이용할 수 있는 미생물을 동정하는 데 사용할 수 있다. 씨. 글루타미쿰 자신이 비병원성이지만, 관련 다른 코리네박테리움 종, 예컨대 코리네박테리움 디프테리아에 (Corynebacterium diphteriae) (디프테리아 병원체)는 인간에서 주요 병원체이다. 따라서, 코리네박테리움 종의 존재의 동정능이 또한 예를 들면 진단 용도에서 임상적으로 상당히 중요할 수 있다. 또한, 상기 핵산 분자는 씨. 글루타미쿰 게놈 또는 관련 유기체의 게놈의 맵핑하기 위한 기준점으로 제공될 수 있다..
이들 신규 핵산 분자는 DNA-복제, 리보솜 및 병인 (RRP: replication, ribosomal and pathogenesis) 단백질로 본원에 칭해지는 단백질을 코딩한다. 이들 RRP 단백질은 예를 들면 씨. 글루타미쿰에서 1종 이상의 정밀 화학물질의 생산에 직접 또는 간접적으로 관련될 수 있다. 본 발명의 RRP 단백질은 탄화수소의 분해 또는 테르페노이드의 산화에 관련될 수도 있다. 이들 단백질은 코리네박테리움 글루타미쿰 또는 씨. 글루타미쿰 관련 유기체의 동정에 사용될 수 있으며; 단백질 혼합물 중에 씨. 글루타미쿰 및 관련 종에 특이적인 RRP 단백질의 존재는 시료 중에 임의의 상기 박테리아의 존재른 나타낼 수 있다. 또한, 상기 RRP 단백질은 식물 또는 동물에서 질환 상태 또는 질병과 관련된 상동체를 가질 수 있으므로 상기 단백질은 약제 스크리닝 및 치료 화합물의 개발을 위한 유용한 제약상 표적으로서 제공될 수 있다.
미국 특허 제4,649,119호 (Sinskey et al.)에 개시된 바와 같이, 코리네박테리움 글루타미쿰에 사용하기 위한 클로닝 벡터의 이용가능성; 및 씨. 글루타미쿰 및 관련 브레비박테리움 (Brevibacterium) 종(예컨대, 락토페르멘툼)의 유전자 조작 기술 (Yoshihama et al, J. Bacteriol. 162: 591-597 (1985); Katsumata et al., J. Bacteriol. 159: 306-311 (1984); 및 Santamaria et al., J. Gen. Microbiol. 130: 2237-2246 (1984)) 때문에 본 발명의 핵산 분자는 이 유기체가 1종 이상의 정밀 화학물질 생산을 조정하기 위해 상기 유기체를 유전학적으로 조작하는데 사용할 수 있다. 이 조정은 본 발명의 유전자의 조작의 직접 영향 또는 이러한 조작의 간접적인 영향 때문에 일어날 수 있다. 예를 들면, 정밀 화학물질의 생합성 또는 분해와 관련된 단백질의 활성을 (즉, 상응하는 유전의 돌연변이유발에 의해) 조정하여 세포의 활성을 직접적으로 조정하고, 상기 화합물을 합성 또는 분해하여, 그에 의해 상기 정밀 화학물질의 수율 및(또는) 생산 효율을 조정할 수 있다. 마찬가지로, 정밀 화학물질의 대사 경로를 조절하는 단백질의 활성을 조정하여, 세포로부터의 정밀 화학물질의 수율 또는 생산 효율을 조정하는 이들 과정 모두로 중요 화합물의 생산을 상향 또는 하향조절하는데 직접적으로 영향을 줄 수 있다.
본 발명의 단백질의 활성의 조정 (즉, 상응하는 유전자의 돌연변이유발)은 또한 정밀 화학물질의 생산을 간접적으로 조정하여 성장 및 분열하거나 또는 생존능 및 생산성을 보유하는 세포의 활성을 전체적으로 증가시킬 수 있다. 정밀 화학물질은 성장 및 세포 분열에 대해 종종 차선인 조건하에 대량 발효 배양함으로써 씨. 글루타미쿰으로부터 보통 생산된다. 본 발명의 단백질 (예컨대, 스트레스 반응 단백질, 세포벽 단백질 또는 발생하는 세포 분열 및 세포 성장에 요구되는 화합물의 대사에 관련된 단백질, 예컨대 뉴클레오티드 및 아미노산)을 개질하여 더 양호한 생존, 성장 및 증식이 상기 조건하에 가능하여 이들 개질된 씨. 글루타미쿰 세포 수 및 생산성을 대량 배양에서 증가시킬 수 있고, 이는 또한 중요한 1종 이상의 정밀 화학물질의 수율 및(또는) 생산 효율의 상승을 유도하여야 한다. 또한, 세포의 대사 경로는 상호 및 공동-조절에 반드시 의존적이다. 씨. 글루타미쿰에서 임의의 대사 경로의 활성을 변화시켜 (즉, 이러한 경로와 관련된, 본 발명의 임의의 단백질의 활성을 변화시켜서) 동시에 상기 미생물에서 정밀 화학물질의 합성 또는 분해에 직접적으로 관련될 수 있는 또다른 대사 경로의 활성 또는 조절을 변화시킬 수 있다.
본 발명의 RRP 단백질의 개질이 이러한 개질된 RRP 단백질을 함유한 씨. 글루타미쿰 계통에서의 정밀 화학물질의 수율, 생산 또는 생산성에 영향을 주는 다수의 메카니즘이 있다. 예를 들면, DNA 복제 속도를 증가시켜 (예를 들면, 하나 이상의 DNA 중합효소의 활성을 최적화시키거나 또는 DNA를 푸는 위상이성질체화효소 또는 헬리카제의 속도를 증가시킴으로써) 세포 분열을 가속화시킬 수 있고, 이는 배양액에 생존하는 정밀 화학물질-생산 세포 수를 또한 증가시킨다. 유사한 방식으로, (예컨대, 리보솜 단백질의 활성을 최적화시킴으로써) 번역의 속도를 증가시켜 중요한 1종 이상의 정밀 화학물질의 합성과 관련된 단백질의 수를 세포에서 증가시킬 수 있다. 적절하게 개질된 RRP 단백질을 갖는 미생물을 배양하는 경우 이 방법 모두는 중요한 정밀 화학물질의 생산을 증대시켜야 한다.
본 발명의 DNA 복제 단백질의 개질은 또한 더 큰 복제 정확도를 유도하여 상기 미생물의 유전학적 안정성 및 생존성을 증가시키고, 그에 의해 부정확한 복제 때문에 상기 정밀 화학물질의 생산을 증가시키는 추가 유전학적 개질을 파과하는 위험을 감소시킬 수 있다.
본 발명은 본원에서 RRP 단백질로서 칭해지고 예를 들면 씨. 글루타미쿰에서 1종 이상의 정밀 화학물질의 생산 또는 생산 효율을 조절하거나 또는 씨. 글루타미쿰 또는 관련 유기체에 대한 동정 마커로서 제공될 수 있는 단백질을 코딩하는 신규 핵산 분자를 제공한다. RRP 단백질을 코딩하는 핵산 분자는 본원에서 RRP 핵산 분자로서 칭해진다. 바람직한 실시양태에서, RRP 단백질은 씨. 글루타미쿰에서 1종 이상의 정밀 화학물질의 생산 또는 생산 효율을 조정할 수 있거나 또는 씨. 글루타미쿰 또는 관련 유기체에 대한 동정 마커로서 제공될 수 있다. 이러한 단백질의 실례는 표 1에 열거된 유전자에 의해 코딩된 것이다.
따라서, 본 발명의 한 측면은 RRP 단백질 또는 그의 생물학적 활성 부위를 코딩하는 뉴클레오티드 서열 및 또한 RRP-코딩 핵산 (예컨대, DNA 또는 mRNA)을 탐지 또는 증폭하기 위한 프라이머 또는 혼성화 프로브로서 적합한 핵산 단편을 포함하는 단리된 핵산 분자 (예컨대, cDNA)에 관한 것이다. 특히 바람직한 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 첨부문서 (Appendix) A에 열거된 임의의 뉴클레오티드 서열 또는 코딩 영역 또는 임의의 이들 뉴클레오티드 서열의 상보체를 포함한다. 다른 바람직한 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 첨부문서 B에 열거된 임의의 아미노산 서열을 코딩한다. 본 발명의 바람직한 RRP 단백질은 마찬가지로 바람직하게는 본원에 기재된 하나 이상 RRP 활성을 가진다.
첨부문서 A는 관련 위치의 서열 개질과 함께 서열목록의 핵산 서열을 하기에서 정의하고, 표 1에 기재한다.
첨부문서 B는 관련 위치의 서열 개질과 함께 서열목록의 폴리펩티드 서열을 하기에서 정의하고, 표 1에 기재한다.
추가 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는 길이 15개 이상의 뉴클레오티드이고, 엄격한 조건 하에 첨부문서 A의 뉴클레오티드 서열을 포함하는 핵산 분자에 혼성화된다. 단리된 핵산 분자는 바람직하게는 자연 발생 핵산 분자에 상응한다. 단리된 핵산은 더 바람직하게는 자연 발생 씨. 글루타미쿰 RRP 단백질 또는 그의 생물학적 활성 부위를 코딩한다.
본 발명의 추가 측면은 본 발명의 핵산 분자를 함유한 벡터, 예를 들면 재조합 발현 벡터, 및 상기 벡터가 도입되는 숙주 세포에 관한 것이다. 일 실시양태에서, RRP 단백질은 적합한 배지에서 배양된 이 숙주 세포를 사용하여 생산된다. RRP 단백질은 이어서 배지 또는 숙주 세포로부터 단리될 수 있다.
본 발명의 추가 측면은 RRP 유전자가 도입되거나 또는 RRP 유전자가 개질된 유전학적으로 개질된 미생물에 관한 것이다. 일 실시양태에서, 상기 미생물의 게놈은 돌연변이된 RRP 서열을 이전유전자로서 코딩하는 하나 이상 본 발명의 핵산 분자를 도입시킴으로써 개질된다. 또다른 실시양태에서, 상기 미생물의 게놈의 내생 RRP 유전자는 개질된 RRP 유전자를 사용하는 상동성 재조합에 의해 개질, 예를 들면 기능적으로 파괴된다. 바람직한 실시양태에서, 이 미생물은 코리네박테리움 또는 브레비박테리움 속에 속하며, 코리네박테리아 글루타미쿰이 특히 바람직하다. 바람직한 실시양태에서, 이 미생물은 중요한 화합물, 예컨대 아미노산, 특히 바람직하게는 리신의 생산에도 사용된다.
또다른 바람직한 실시양태는 첨부문서 A에 기재된 하나 이상의 핵산 분자를 갖는 숙주 세포이다. 이러한 숙주 세포는 당업자에게 공지된 각종 방식으로 생산될 수 있다. 이 숙주 세포는 예를 들면, 몇몇 본 발명의 핵산 분자를 갖는 벡터에 의해 형질감염될 수 있다. 그러나, 각각의 경우에 본 발명의 하나의 핵산 분자를 숙주 세포 내로 도입시키기 위해 벡터를 사용할 수도 있고, 따라서 다수의 벡터를 동시에 또는 순차적으로 사용할 수 있다. 따라서, 본 발명의 다수, 수 백개 이하의 핵산 서열을 갖는 숙주 세포의 작제가 가능하다. 이러한 축적은 정밀 화학물질 생산성에 대해 숙주 세포에 추가 효과를 종종 만들 수 있다.
본 발명의 추가 측면은 단리된 RRP 단백질 또는 그의 부분, 예를 들면 생물학적 활성 부위에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, 단리된 RRP 단백질 또는 그의 부분은 씨. 글루타미쿰에서 1종 이상의 정밀 화학물질의 생산 또는 생산 효율을 조정할 수 있거나 또는 씨. 글루타미쿰 또는 관련 유기체에 대한 동정 마커로서 제공될 수 있다. 또다른 바람직한 실시양태에서, 단리된 RRP 단백질 또는 그의 부분은 이 단백질 또는 그의 부분이 예를 들면 씨. 글루타미쿰에서 1종 이상의 정밀 화학물질의 생산 또는 생산 효율을 조정하거나 또는 씨. 글루타미쿰 또는 관련 유기체에 대한 동정 마커로서 제공되는 활성을 보유하도록 첨부문서 B의 아미노산 서열에 대해 충분히 상동성이다.
또한, 본 발명은 단리된 RRP 단백질 생산에 관한 것이다. 바람직한 실시양태에서, RRP 단백질은 첨부문서 B의 아미노산 서열을 포함한다. 추가로 바람직한 실시양태에서, 본 발명은 첨부문서 B의 완전 아미노산 서열 (첨부문서 A의 오픈 리딩 프레임에 의해 코딩됨)에 실질적으로 상동성인 단리된 전장 단백질에 관한 것이다.
RRP 폴리펩티드 또는 그의 생물 활성 부위를 RRP 폴리펩티드가 아닌 폴리펩티드와 작동 가능하게 연결하여 융합 단백질을 생성할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 이 융합 단백질은 RRP 단백질만의 활성과는 다르다. 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 융합 단백질은 씨. 글루타미쿰에서 1종 이상의 정밀 화학물질의 수율, 생산 및(또는) 생산 효율을 조정하거나 또는 씨. 글루타미쿰 또는 관련 유기체에 대한 동정 마커로서 제공될 수 있다. 특히 바람직한 실시양태에서, 이 융합 단백질을 숙주 세포에 도입시켜 숙주 세포로부터 원하는 화합물이 생성되는 것을 조절한다.
본 발명의 추가 측면은 정밀 화학물질의 제조 방법에 관한 것이다. 이 방법은 본 발명의 RRP 핵산 분자를 발현하는 벡터를 포함하는 세포를, 정밀 화학물질이 생산되도록 배양하는 것을 제공한다. 바람직한 실시양태에서, 이 방법은 RRP 핵산을 발현하는 벡터로 세포를 형질감염시켜 상기 벡터를 함유하는 세포를 수득하는 단계도 포함한다. 추가의 바람직한 실시양태에서, 상기 방법은 추가로 정밀 화학물질을 배양액으로부터 수득하는 단계를 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 세포는 코리네박테리움 또는 브레비박테리움 속에 속한다.
본 발명의 추가 측면은 미생물로부터 분자가 생산되는 것을 조절하는 방법에 관한 것이다. 이러한 방법은 RRP 단백질 활성 또는 RRP 핵산 발현을 조절하는 물질과 세포를 접촉시켜 세포 관련 활성이 상기 물질의 부재 하의 동일 활성에 비해 개질되도록 하는 것을 포함한다. 바람직한 실시양태에서, 세포는 하나 이상의 씨. 글루타미쿰 RRP 단백질 활성에 대해 조정되어 이 미생물에 의해 중요한 정밀 화학물질의 수율, 생산 및(또는) 생산 효율을 개선한다. RRP 단백질 활성을 조절하는 물질은 예를 들면 RRP 단백질 활성 또는 RRP 핵산 발현을 자극하는 물질일 수 있다. RRP 단백질 활성 또는 RRP 핵산 발현을 자극하는 물질의 예로는 소분자, 활성 RRP 단백질, 및 세포에 도입된 RRP 단백질을 코딩하는 핵산이 있다. RRP 활성 또는 발현을 억제하는 물질의 예로는 소분자 및 안티센스 RRP 핵산 분자가 있다.
본 발명의 또 다른 측면은 별개의 플라스미드 상에 보유되거나 숙주 세포의 게놈 내로 도입되도록 RRP 야생형 유전자 또는 RRP-돌연변이 유전자를 세포에 도입하는 것을 포함하는, 세포로부터의 원하는 화합물의 수율, 생산 및(또는) 생산 수율을 조절하는 방법에 관한 것이다. 게놈 내로 삽입되면 (이러한 삽입은 무작위적일 수 있거나 천연 유전자가 도입된 카피로 대체되도록 하는 상동성 재조합에 의해 일어날 수 있음) 세포로부터의 조절되는 원하는 화합물의 생산을 유도한다. 바람직한 실시양태에서, 상기 수율은 증가한다. 또 다른 바람직한 실시양태에서, 상기 화학물질은 정밀 화학물질이며, 특히 바람직한 실시양태에서, 상기 정밀 화학물질은 아미노산이다. 특히 바람직한 실시양태에서, 상기 아미노산은 L-리신이다.
본 발명은 코리네박테리움 글루타미쿰 또는 관련 유기체의 동정, 씨. 글루타미쿰 게놈 (또는 매우 관련된 유기체의 게놈)의 맵핑 또는 예를 들면 발효 과정에 의한 정밀 화학물질의 생산에 사용될 수 있는 미생물의 동정에 사용될 수 있는 RRP-핵산 및 RRP-단백질 분자를 제공한다. 상기 핵산에 의해 코딩된 단백질을 씨. 글루타미쿰에서 1종 이상의 정밀 화학물질의 생산 또는 생산 효율의 직접 또는 간접적 조정, 씨. 글루타미쿰 또는 관련 유기체에 대한 동정 마커로서, 테르페노이드의 산화 또는 탄화수소의 분해를 위해 또는 치료 제약 화합물의 표적으로서 사용할 수 있다. 본 발명의 측면은 아래에 더 자세히 기재되어 있다.
Ⅰ. 정밀 화학물질
용어 "정밀 화학물질"은 당업계에 잘 인지되어 있고, 제약, 농업 및 화장품 산업과 같은, 그러나 이에 제한되지 않는 다양한 산업에 이용되는 유기체에 의해 생산되는 분자를 포함한다. 이러한 화합물로는 타르타르산, 이타콘산 및 디아미노피멜산과 같은 유기산, 단백질생성 및 비단백질생성 아미노산, 퓨린 및 피리미딘 염기, 뉴클레오시드, 및 뉴클레오티드 [예를 들어, 문헌 (Kuninaka, A. (1996) Nucleotides and related compounds, pp. 561-612, in Biotechnology Vol. 6, Rehm et al., Editors. VCH: Weinheim 및 그의 참고문헌)에 기재되어 있음), 지질, 포화 및 불포화 지방산 (예컨대, 아라키돈산), 디올 (예를 들어, 프로판디올 및 부탄디올), 탄수화물 (예를 들어, 히알루론산 및 트레할로스), 방향족 화합물 (예를 들어, 방향족 아민, 바닐린 및 인디고), 비타민 및 보조인자 [문헌 (Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry, Vol. A27, "Vitamins", pp. 443-613 (1996) VCH: Weinheim 및 그의 참고문헌; 및 Ong, A. S., Niki, E. & Packer, L. (1995) "Nutrition, Lipids, Health, and Disease" Proceedings of the UNESCO/Confederation of Scientific and Technological Associations in Malaysia, and the Society for Free Radical Research Asia, held Sept. 1-3,1994 at Penang, Malaysia, AOCS Press, (1995)에 기재되어 있음], 효소 및 문헌 (Gutcho (1983) Chemicals by Fermentation, Noyes Data Corporation, ISBN: 0818805086) 및 그의 참고문헌에 기재된 다른 모든 화학물질이 있다. 이들 정밀 화학물질의 대사 및 용도는 아래에 더 자세히 기재된다.
A. 아미노산 대사 및 용도
아미노산은 모든 단백질의 기본 구조 단위를 구성하므로 모든 유기체에서 정상적인 세포 기능에 필수적이다. 용어 "아미노산"은 당업계에 인지되어 있다. 아미노산 중 단백질생성 아미노산은 20종이고 이들이 펩티드 결합에 의해 결합되어 있는 단백질에 대한 구조 단위로 작용하는 반면, 비단백질생성 아미노산 (수백 종이 공지되어 있음)은 정상적으로는 단백질에서 발견되지 않는다 [문헌 Ulmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry, Vol. A2, pp. 57-97 VCH: Weinheim (1985)을 참조함]. 비록 L-아미노산이 일반적으로 천연 발생 단백질에서 발견되는 유일한 형태일지라도 아미노산은 D-광학 또는 L-광학 구조로 존재할 수 있다. 20종의 단백질생성 아미노산 각각의 생합성 및 분해 경로의 특징은 원핵세포 및 진핵세포 둘다에서 잘 규명되어 있다 [예를 들어, 문헌 (Stryer, L. Biochemistry, 3rd edition, pp. 578-590 (1988))을 참조함]. 생합성의 복잡성으로 인한 일반적인 영양 요구물이기 때문에 "필수" 아미노산이라고 불리는 아미노산 (히스티딘, 이소루이신, 루이신, 리신, 메티오닌, 페닐알라닌, 트레오닌, 트립토판 및 발린)은 단순한 생합성 경로에 의해 나머지 11종의 "비필수" 아미노산 (알라닌, 아르기닌, 아스파라긴, 아스파테이트, 시스테인, 글루타메이트, 글루타민, 글리신, 프롤린, 세린 및 티로신)으로 전환된다. 고등동물은 필수 아미노산 중 일부를 합성하는 능력을 보유하지만, 상기 필수 아미노산은 음식물로부터 공급되어야 정상적인 단백질 합성이 일어난다.
단백질 생합성에서의 아미노산의 기능 이외에, 이들 아미노산은 그 자체가 흥미로운 화학물질이고, 다수의 아미노산이 식품, 사료, 화학물질, 화장품, 농업 및 제약 산업에 다양하게 사용될 수 있는 것으로 밝혀져 있다. 리신은 인간 뿐만 아니라 가금 및 돼지와 같은 단위 (monogastric) 동물의 영양에 있어서도 중요한 아미노산이다. 글루타메이트는 향미제 첨가물 (모노-소듐 글루타메이트, MSG) 및 그외에 아스파테이트, 페닐알라닌, 글리신 및 시트테인도 식품 산업에 가장 흔히 사용된다. 글리신, L-메티오닌 및 트립토판은 모두 제약 산업에 사용된다. 글루타민, 발린, 루이신, 이소루이신, 히스티딘, 아르기닌, 프롤린, 세린 및 알라닌은 제약 및 화장품 산업 둘다에 사용된다. 트레오닌, 트립토판 및 D/L-메티오닌은 통상적인 사료 첨가제이다 (Leuchtenberger, W. (1996) Amino acid-technical production and use, pp. 466-502 in Rehm et al. (editors.) Biotechnology Vol. 6, Chapter 14a, VCH: Weinheim). 또한, 이들 아미노산은 합성 아미노산 및 단백질, 예컨대, N-아세틸시스테인, S-카르복시메틸-L-시스테인, (S)-5-히드록시트립토판, 및 문헌 (Ulmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry, Vol. A2, pp. 57-97, VCH: Weinheim, 1985)에 기재된 다른 것의 합성을 위한 전구체로 추가로 유용하다는 것이 밝혀져 있다.
이들 천연 아미노산을 생산할 수 있는 유기체, 예컨대, 세균에서의 이들 천연 아미노산의 생합성의 특징은 잘 규명되어 있다 [세균 아미노산 생합성 및 그의 조절에 대한 자세한 것은 문헌 (Umbarger, H. E. (1978) Ann. Rev. Biochem. 47: 533-606)을 참조함]. 글루타메이트는 시트르산 사이클의 중간체인 α-케토글루타레이트의 환원 아미노화에 의해 합성된다. 그 다음에 글루타민, 프롤린 및 아르기닌 각각이 글루타메이트로부터 생성된다. 세린의 생합성은 3-포스포글리세레이트 (해당작용의 중간체)에서 시작되며, 산화, 트랜스아민화 및 가수분해 단계 후 세린을 생성하는 3 단계 과정에서 발생한다. 시스테인 및 글리신 둘다 세린으로부터 생성되는데, 시스테인은 호모시스테인과 세린의 축합에 의해 생성되며, 글리신은 세린 트랜스히드록시메틸라제에 의해 촉매되는 반응에서 측쇄 β-탄소 원자가 테트라히드로폴레이트로 전달되어 생성된다. 페닐알라닌 및 티로신은 프레페네이트의 합성 후 최종 두 단계에서만 9 단계 생합성 경로에서 해당작용 및 펜토스 포스페이트 경로 전구체, 및 에리쓰로스 4-포스페이트 및 포스포에놀피루베이트로부터 합성된다. 트립토판도 이들 두 초기 분자로부터 합성되지만, 그의 합성은 11 단계 경로에 의해 합성된다. 티로신은 페닐알라닌 히드록실라제에 의해 촉매되는 반응에서 페닐알라닌으로부터 합성될 수도 있다. 알라닌, 발린 및 루이신은 해당작용의 최종 생성물인 피루베이트로부터 유도된 생합성 산물 각각이다. 아스파테이트는 시트르산 사이클의 중간체인 옥살아세테이트로부터 형성된다. 아스파라긴, 메티오닌, 트레오닌 및 리신 각각은 아스파테이트의 전환에 의해 생성된다. 이소루이신은 트레오닌으로부터 형성된다. 복잡한 9 단계 경로에서 활성화된 당인 5-포스포리보실-1-피로포스페이트로부터 히스티딘이 생성된다.
단백질 합성 필요량을 초과하는 아미노산의 양은 저장될 수 없고, 그 대신에 분해되어 세포의 주요 대사 경로에 대한 중간체로 제공된다 [자세한 것은 문헌 (Stryer, L. Biochemistry 3rd edition Chapter 21 "Amino Acid Degradation and the Urea Cycle" pp. 495-516 (1988))을 참조함]. 세포가 불필요한 아미노산을 유용한 대사 중간체로 전환시킬 수 있다 하더라도, 아미노산 생성은 에너지, 전구체 분자, 및 이들 아미노산을 합성하는 데 필요한 효소를 고려할 때 손실이다. 따라서, 특정한 아미노산의 존재가 그 자신의 생성을 서서히 또는 완전히 중지시키는 피드백 억제에 의해 아미노산의 생합성이 조절된다는 것은 놀라운 일이 아니다 [아미노산 생합성 경로의 피드백 기작에 대한 전체적인 내용은 문헌 (Stryer, L. Biochemistry 3rd editior Chapter 24 "Biosynthesis of Amino Acids and Heme" pp. 575-600 (1988))을 참조함]. 따라서, 임의의 특정 아미노산의 산출량은 세포의 아미노산의 양에 의해 제한된다.
B. 비타민, 보조인자 및 영양제의 대사 및 용도
비타민, 보조인자 및 영양제는 또다른 군의 분자를 포함한다. 이들 분자가 세균과 같은 다른 유기체에 의해 쉽게 합성된다 하더라도 고등동물은 이들 분자를 합성하고 섭취해야 하는 능력을 상실하였다. 이들 분자는 그 자체가 생활성 물질이거나, 다양한 대사 경로에서 전자 전달 물질 또는 중간체로 작용할 수 있는 생물 활성 물질의 전구체이다. 이들의 영양 가치 이외에, 이들 화합물은 색소, 항산화제 및 촉매로서, 또는 다른 과정의 보조제로서 상당한 산업적 가치를 갖는다 (이들 화합물의 구조, 활성 및 산업적인 용도에 대한 것은 예컨대, 문헌 (Ullman's Encyclopedia of Industrial Chemistry, "Vitamins" Vol. A27, pp. 443-613, VCH: Weinheim, 1996)을 참조함]. 용어 "비타민"은 당업계에 인지되어 있고, 유기체의 정상적인 기능을 위해서는 필요하지만 유기체가 스스로 합성할 수 없는 영양분을 포함한다. 비타민 군은 보조인자 및 영양제 화합물도 포함할 수 있다. 용어 "보조인자"는 정상적인 효소 활성이 일어나는 데 필요한 비단백질생성 화합물을 포함한다. 이러한 화합물은 유기성 또는 무기성일 수 있고, 본 발명의 보조인자 분자는 유기성인 것이 바람직하다. 용어 "영양제"는 식물 및 동물, 특히 인간에게 건강상 유익한 식이성 보충물을 포함한다. 이러한 분자의 예로는 비타민, 항산화제 및 일부 지질 (예를 들어, 다불포화 지방산)이 있다.
이들을 생성할 수 있는 유기체, 예컨대, 세균에서 일어나는 이들 분자의 생합성의 특징은 잘 규명되어 있다 (Ullman's Encyclopedia of Industrial Chemistry, "Vitamins" Vol. A27, pp. 443-613, VCH: Weinheim, 1996; Michal, G. (1999) Biochemical Pathways: An Atlas of Biochemistry and Molecular Biology, John Wiley & Sons; Ong, A. S., Niki, E. & Packer, L. (1995) "Nutrition, Lipids, Health, and Disease "Proceedings of the UNESCO/Confederation of Scientific and Technological Associations in Malaysia, and the Society for Free Radical Research-Asia, held Sept. 1-3, 1994 at Penang, Malaysia, AOCS Press: Champaign, IL X, 374 S).
티아민 (비타민 B1)은 피리미딘과 티아졸 잔기의 화학적 커플링에 의해 생성된다. 리보플라빈 (비타민 B2)는 구아노신-5'-트리포스페이트 (GTP) 및 리보스-5'-포스페이트로부터 합성된다. 그 다음, 리보플라빈은 플라빈 모노뉴클레오티드 (FMN) 및 플라빈 아데닌 디뉴클레오티드 (FAD)의 합성에 사용된다. 총칭하여 "비타민 B6"로 불리는 화합물 족 (예를 들어, 피리독신, 피리독사민, 피리독살-5'-포스페이트 및 시판되는 피리독신 히드로클로라이드)은 모두 통상적인 구조 단위인 5-히드록시-6-메틸피리딘의 유도체이다. 판토테네이트 (판토텐산, (R)-(+)-N-(2,4-디히드록시-3,3-디메틸-1-옥소부틸)-β-알라닌)은 화학적인 합성 또는 발효에 의해 생성될 수 있다. 판토테네이트의 생합성의 최종 단계는 β-알라닌과 판토산의 ATP-유도 축합으로 구성된다. 판토산으로 전환하는 생합성 단계, β-알라닌으로 전환하는 생합성 단계 및 판토텐산으로의 축합에 관여하는 효소는 공지되어 있다. 판토테네이트의 대사 활성 형태는 조효소 A인데, 이 조효소 A를 위한 생합성은 5 단계 효소 반응으로 진행된다. 판토테네이트, 피리독살-5'-포스페이트, 시스테인 및 ATP는 조효소 A의 전구체이다. 이들 효소는 판토테네이트의 형성을 촉매할 뿐만 아니라 (R)-판토산, (R)-판토락톤, (R)-판테놀 (프로비타민 B5), 판테테인 (및 그의 유도체) 및 조효소 A의 생성도 촉매한다.
미생물에서 전구체 분자인 피멜로일-CoA로부터 바이오틴이 생합성되는 것은 자세히 연구되어 있고 관련된 여러가지 유전자가 확인되어 있다. 상응하는 다수의 단백질이 Fe-클러스터 합성에도 관여하는 것으로 밝혀져 있고 이들 단백질은 nifS 클래스 단백질의 구성원이다. 리포산은 옥타노산으로부터 유도되고, 에너지 대사에서 조효소로 작용하는데, 여기서 상기 리포산은 에너지 대사에서 피루베이트 데히드로게나제 복합체 및 α-케토글루타레이트 데히드로게나제 복합체의 일부이다. 폴레이트는 모두 폴산의 유도체 물질의 군이고, 폴산은 L-글루탐산, p-아미노벤조산 및 6-메틸프테린으로부터 유도된다. 생전환의 대사 중간체인 구아노신-5'-트리포스페이트 (GTP), L-글루탐산 및 p-아미노벤조산으로부터 출발하는, 폴산 및 그의 유도체의 생합성은 특정 미생물에서 상세히 연구되어 있다.
코리노이드 (예컨대, 코발라민 및 특히 비타민 B12) 및 포피린은 테트라피롤 고리계에 의해 특징지워지는 화학물질의 군에 속한다. 비타민 B12의 생합성은 그 특징이 완전히 규명되어 있지는 않지만 다수의 효소 및 기질이 현재 공지되어 있다는 점에서 충분히 복잡하다. 니코틴산 (니코티네이트) 및 니코틴아미드는 "니아신"으로도 불리는 피리딘 유도체이다. 니아신은 중요한 조효소인 NAD (니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드), NADP (니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드 포스페이트) 및 그들의 환원형의 전구체이다.
이들 화합물의 대량 생산은 비록 이들 화학물질 중 일부, 예를 들어, 리보플라빈, 비타민 B6, 판토테네이트 및 바이오틴이 미생물의 대량 배양에 의해서도 생산된다 하더라도 무세포 화학 합성에 주로 의존한다. 비타민 B12만이 발효에 의해 전적으로 생성되는데, 이는 비타민 B12의 합성의 복잡성 때문이다. 시험관내 방법론은 재료 및 시간, 종종 많은 비용의 상당한 투입을 요구한다.
C. 퓨린, 피리미딘, 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드의 대사 및 용도
퓨린 및 피리미딘 대사 유전자 및 이들의 대응하는 단백질은 종양 질환 및 바이러스 감염의 치료에 중요한 표적이다. 용어 "퓨린" 또는 "피리미딘"은 핵산, 조효소 및 뉴클레오티드의 구성 성분인 질소 함유 염기를 포함한다. 용어 "뉴클레오티드"는 질소 함유 염기, 오탄당 (RNA의 경우, 상기 당은 리보스이고; DNA의 경우, 상기 당은 D-데옥시리보스임) 및 인산으로 구성된, 핵산 분자의 기본 구조 단위를 포함한다. 용어 "뉴클레오시드"는 뉴클레오티드의 전구체로 작용하지만 뉴클레오티드가 갖는 인산 잔기가 없는 분자를 포함한다. 이들 분자의 생합성을 억제하거나 핵산 분자를 형성하기 위한 이들 분자의 이동화를 억제함으로써, RNA 및 DNA 합성을 억제하는 것이 가능하고; 암세포에 표적화시키는 방식으로 상기 활성을 억제함으로써 종양 세포의 분열 및 복제 능력을 억제할 수 있다. 또한, 핵산 분자를 형성하기 보다는 에너지 저장물 (즉, AMP) 또는 조효소 (즉, FAD 및 NAD)로 작용하는 뉴클레오티드도 있다.
이들 화학물질이 퓨린 및(또는) 피리미딘 대사에 영향을 줌으로써 상기 의학적 증상에 사용될 수 있다는 것은 여러 가지 문헌에 기재되어 있다 (예를 들어, Christopherson, R.I. and Lyons, S.D. (1990) "Potent inhibitors of de novo pyrimidine and purine biosynthesis as chemotherapeutic agents. "Med. Res. Reviews 10: 505-548). 퓨린 및 피리미딘 대사에 관여하는 효소의 연구는 예를 들어, 면역억제제 또는 항증식제로 사용할 수 있는 신약의 개발에 초점을 두고 있다 (Smith, J. L., (1995) "Enzymes in Nucleotide Synthesis." Curr. Opin. Struct. Biol. 5: 752-757; Simmonds, H.A. (1995) Biochem Soc. Transact. 23: 877-902). 그러나, 퓨린 및 피리미딘 염기, 뉴클레오시드 및 뉴클레오티드는 여러 가지 정밀 화학물질 (예를 들어, 티아민, S-아데노실메티오닌, 폴레이트 또는 리보플라빈)의 생합성에 있어서 중간체로서의 용도, 세포를 위한 에너지 캐리어 (예를 들어, ATP 또는 GTP)로서의 용도, 및 통상적으로 향 상승제 (예를 들어, IMP 또는 GMP)로 사용되는 화학물질 자체를 위한 용도 또는 여러 가지 의학 용도를 갖는다 [예를 들어, 문헌 (Kuninaka, A. (1996) Nucleotides and Related Compounds in Biotechnology Vol. 6, Rehm et al., Editors. VCH: Weinheim, pp. 561-612)을 참조함]. 또한, 퓨린, 피리미딘, 뉴클레오시드 또는 뉴클레오티드 대사에 관여하는 효소를 표적으로 사용하여 살진균제, 제초제 및 살충제를 비롯한, 농작물 보호용 화학물질을 개발하는 연구가 증가하고 있다.
세균에 있어서 이들 화합물의 대사의 특징은 규명되어 있다 (예를 들어, 자세한 내용은 문헌 (Zalkin, H. and Dixon, J. E. (1992) "De novo purine nucleotide biosynthesis", in Progress in Nucleic Acid Research and Molecular Biology, Vol. 42, Academic Press:, pp. 259-287; 및 Michal, G. (1999) "Nucleotides and Nucleosides", Chapter 8 in: Biochemical Pathways: An Atlas of Biochemistry and Molecular Biology, Wiley: New York)을 참조함). 퓨린의 대사는 집중적인 연구의 대상이고, 세포의 정상적인 기능에 필수적이다. 고등 동물의 손상된 퓨린 대사는 통풍과 같은 심각한 질환을 초래할 수 있다. 퓨린 뉴클레오티드는 구아노신-5'-모노포스페이트 (GMP) 또는 아데노신-5'-모노포스페이트 (AMP)를 생성시키는 중간체 화합물인 이노신-5'-포스페이트 (IMP)를 통해 일련의 단계에서 리보스-5-포스페이트로부터 합성되고, 이들 GMP 또는 AMP로부터 뉴클레오티드로 사용되는 트리포스페이트가 용이하게 생성된다. 이들 화합물은 에너지 저장물로도 사용되므로, 이들의 분해는 세포에서 다수의 상이한 생합성 과정을 위한 에너지를 공급한다. 피리미딘 생합성은 리보스-5-포스페이트로부터의 유리딘 5'-모노포스페이트 (UMP)의 형성에 의해 진행된다. 그 다음, UMP가 시티딘 5'-트리포스페이트 (CTP)로 전환된다. 이들 모든 뉴클레오티드의 디옥시 형태는 뉴클레오티드의 디포스페이트 리보스 형태가 뉴클레오티드의 디포스페이트 데옥시리보스 형태로 전환되는 1 단계 환원 반응에서 생성된다. 인산화 후, 이들 분자는 DNA 합성에 관여할 수 있다.
D. 트레할로스의 대사 및 용도
트레할로스는 α,α-1,1 결합에 의해 결합된 두 가지 당 분자로 구성된다. 트레할로스는 감미료, 건조 또는 동결 식품용 첨가제로서 식품 산업, 및 음료 산업에 통상적으로 사용된다. 그러나, 제약, 화장품 및 생물공학 산업에도 사용된다 [예를 들어, 문헌 (Nishimoto et al., (1998) 미국 특허 제5,759,610호; Singer, M. A. and Lindquist, S. (1998) Trends Biotech. 16: 460-467; Paiva, C. L. A. and Panek, A. D. (1996) Biotech. Ann. Rev. 2: 293-314; 및 Shiosaka, M. (1997) J. Japan 172: 97-10)을 참조함]. 트레할로스는 다수의 미생물로부터 효소에 의해 생성되고 주위 배지내로 자연적으로 방출되는데, 트레할로스는 당업계에 공지된 방법을 이용하여 상기 배지로부터 단리할 수 있다.
II. 본 발명의 유전자의 활성
3가지 이상의 활성이 환경에서 생존하기 위해 특히 박테리아 종에 대해 요구된다. 첫 번째, 세포는 적어도 세포 개체수를 유지하거나 또는 증가시키기 위해 효율적으로 분열될 수 있어야 한다. 두 번째, 세포는 정상 세포 기능에 요구되는 단백질을 코딩하는 유전자를 효율적으로 발현하여야 한다. 마지막으로, 세포는 지역적 환경 조건에 적응하거나 또는 바람직한 환경에서의 물리적 운동에 의해 또는 직접적으로 환경에 작용하여 그의 생존성을 개선함으로써 그의 환경과 상호작용할 수 있어야 한다. 임의의 이들 활성과 관련된 중대한 단계는 박테리아 게놈의 복제, 단백질 생합성의 리보솜 활성 및 항세포 또는 세포 융해 활성 (유기체의 병인과 관련됨)을 포함한다.
III. 본 발명의 요소 및 방법
본 발명은 부분적으로는 본원에서 RRP 핵산 분자로 언급되는 새로운 분자의 발견을 기초로 한다. 이들 RRP 핵산 분자는 씨. 글루타미쿰 또는 관련 박테리아 종의 동정, 씨. 글루타미쿰 게놈의 맵핑 및 예를 들면 발효성 공정에 의해 정밀 화학물질의 생산에 적합한 박테리아의 동정을 위한 마커로서 적합하다. 본 발명은 부분적으로 또한 상기 RRP 핵산 분자에 의해 코딩되는 이들 RRP-단백질 분자에 기초한다. 이들 RRP 분자는 씨. 글루타미쿰에서 1종 이상의 정밀 화학물질의 수율, 생산 및(또는) 생산 효율을 조정하고, 씨. 글루타미쿰 또는 관련 유기체에 대해 동정 마커로서 제공되고, 탄화수소를 분해하고, 치료 제약 화합물의 개발에 대한 표적으로서 제공될 수 있다. 일 실시양태에서, 본 발명의 RRP 분자는 씨. 글루타미쿰에서 1종 이상의 정밀 화학물질의 대사 경로에 직접 또는 간접적으로 관련된다. 바람직한 실시양태에서, 이러한 대사 경로에서 간접 또는 직접적으로 관여되는 본 발명의 RRP 분자의 활성은 이 미생물에 의한 중요한 정밀 화학물질의 생산에 영향을 미친다. 특히 바람직한 실시양태에서, 본 발명의 RRP 분자의 활성을 조정하여 본 발명의 RRP 단백질이 관련된 씨. 글루타미쿰 대사 경로가 효율 또는 산출과 관련하여 조정되고, 이는 씨. 글루타미쿰에 의한 중요한 정밀 화학물질의 생산 또는 생산 효율을 직접 또는 간접적으로 조정한다.
용어 "RRP 단백질" 또는 "RRP 폴리펩티드"에는 씨. 글루타미쿰에서 1종 이상의 정밀 화학물질의 수율, 생산 및(또는) 생산 효율을 조정하고, 탄화수소를 분해하고, 테르페노이드를 산화시키고, 약제 스크리닝 또는 약제 디자인에 대한 표적 단백질 또는 씨. 글루타미쿰 또는 관련 유기체에 대한 동정 마커로서 제공될 수 있는 단백질이 포함된다. RRP 단백질의 예로는 표 1 및 첨부문서 A에 기재된 RRP 유전자에 의해 코딩되는 단백질이 포함된다. 용어 "RRP 유전자" 또는 "RRP 핵산 서열"에는 코딩 영역 및 이에 대응하는 비번역 5' 및 3'의 서열 영역으로 이루어진, RRP 단백질을 코딩하는 핵산 서열이 포함된다. RRP 유전자의 예로는 표 1에 기재된 것들이다. 용어 "생산" 또는 "생산성"은 당업계에서 인식되는 용어이며, 소정의 시간 및 소정의 발효 용적내에서 생성되는 발효 산물 (예를 들면, 원하는 정밀 화학물질)의 농도 (예를 들어, 1시간에 1리터 당 kg 산물)가 포함된다. 용어 "생산 효율"에는 세포에 의해 특정 생성물 양을 달성하는데 요구되는 시간(예를 들어, 세포가 특정 산출 비율의 정밀 화학물질 생성물을 얻는데 걸리는 시간)이 포함된다. 용어 "수율" 또는 "산물/탄소 수율"은 당업계에서 인식되는 용어이며, 탄소 공급원의 생성물 (즉, 정밀 화학물질)로의 전환 효율이 포함된다. 이 용어는 일반적으로는, 예를 들어, 탄소 공급원 kg 당 생성물 kg으로 표기된다. 화합물의 수율 또는 생산율을 증대시킴으로써, 소정의 시간 동안 특정 배양물 용적 중 이 화합물의 수득된 분자의 양 또는 적합한 분자의 양은 증가하게 된다. 용어 "생합성" 또는 "생합성 경로"는 당업계에서 인식되는 용어이고, 세포에 의한 중간체 화합물로부터의 화합물, 바람직하게는 유기 화합물의 합성을 포함하며, 다단계 또는 고도로 조절되는 과정일 수 있다. 용어 "분해" 또는 "분해 경로"는 당업계에서 인식되는 용어이고, 세포에 의한 화합물, 바람직하게는 유기 화합물의 분해 생성물(일반적으로 말해서, 더 작거나 덜 복잡한 구조의 분자)로의 분해를 포함하며, 다단계 또는 고도로 조절되는 과정일 수 있다. 용어 "대사"는 당업계에서 인식되는 용어이고, 유기체에서 일어나는 생화학적 반응의 전체를 포함한다. 특정 화합물의 대사 (예컨대, 아미노산 예를 들면 글리신의 대사)는 이 화합물에 영향을 미치는 세포에서의 모든 생합성, 개질 및 분해 경로를 포함한다.
또다른 실시양태에서, 본 발명의 RRP 분자는 씨. 글루타미쿰과 같은 미생물에서 목적하는 분자, 예컨대 정밀 화학물질의 생산을 직접 또는 간접적으로 조절할 수 있다. 유전자 재조합 기술을 사용하여, 본 발명의 하나 이상의 RRP 단백질을 조작하여 그의 기능을 조정할 수 있다. 기능의 이 조정은 씨. 글루타미쿰으로부터의 1종 이상의 정밀 화학물질의 수율, 생산 및(또는) 생산 효율의 조정을 유도할 수 있다.
예를 들면, 정밀 화학물질의 생합성 또는 분해와 관련된 단백질의 활성을 조정하여 (즉, 상응하는 유전자의 돌연변이유발에 의해) 이 화합물의 합성 또는 분해에 대한 세포 활성을 직접적으로 조정하고, 이에 의해 정밀 화학물질의 수율 및(또는) 생산 효율을 조정할 수 있다. 마찬가지로, 세포로부터의 상기 정밀 화학물질의 수율 또는 생산 효율의 조절 방법 모두를 사용하며 정밀 화학물질 대사 경로를 조절하는 단백질의 활성을 조정하여 원하는 화합물의 생산에 대한 상향 또는 하향조절에 직접 영향을 미칠 수 있다.
정밀 화학물질의 생산은 또한 본 발명의 단백질의 활성을 조정하여 (즉, 상응하는 유전자를 돌연변이시킴으로써) 생존 및 생산성을 유지하기 위한 세포의 성장 및 분열의 활성을 전체적으로 증가시킬 수 있다. 정밀 화학물질은 성장 및 세포 분열에 대해 종종 차선인 조건하에 이들 미생물을 대량 발효 배양하여 씨. 글루타미쿰으로부터 보통 생산한다. 이들 조건에서 생존, 성장 및 증식을 개선할 수 있도록 본 발명의 단백질 (예를 들면, 스트레스 반응 단백질, 세포벽 단백질 또는 발생하는 세포 성장 및 세포 분열에 요구되는 화합물, 예컨대 뉴클레오티드 및 아미노산의 대사에 관련된 단백질)을 개질하여 대량 배양에서 이들 개질된 씨. 글루타미쿰 세포의 수 및 생산성을 증가시킬 수 있고, 이는 또한 원하는 1종 이상의 정밀 화학물질의 수율 및(또는) 생산 효율의 증가를 유도하여야 한다. 또한, 세포의 대사 경로는 상호 및 공동-조절에 반드시 의존적이다. 씨. 글루타미쿰에서 임의의 대사 경로의 활성의 변화 (즉, 이러한 경로에 관련된, 임의의 본 발명의 단백질의 활성의 변화)는 이 미생물에서 정밀 화학물질의 합성 또는 분해에 직접적으로 관련될 수 있는 또다른 대사 경로의 활성 또는 조절을 동시에 변화시킬 수 있게 한다.
본 발명의 단리된 핵산 서열은 명칭이 ATCC 13032로 부여된, 아메리칸 타입 컬쳐 콜렉션에서 분양받을 수 있는 코리네박테리움 글루타미쿰 균주의 게놈내에 포함되어 있다. 단리된 씨. 글루타미쿰 RRP 핵산 분자의 뉴클레오티드 서열 및 씨. 글루타미쿰 RRP 단백질의 예상 아미노산 서열은 첨부문서 A 및 B 각각에 나타나 있다. 다수의 이들 뉴클레오티드 서열을 이. 콜라이 (E. coli) 유전자 또는 바실러스 서브틸리스 (Bacillus subtilis) 유전자에 상동성인 서열로서 분류 및(또는) 동정을 컴퓨터 분석으로 수행하였다.
본 발명은 또한 아미노산 서열이 첨부문서 B의 아미노산 서열에 실질적으로 상동성인 단백질에 관한 것이다. 본원에 사용되는 바와 같이. 아미노산 서열이 선별된 아미노산 서열에 실질적으로 상동성인 단백질은 선별된 아미노산 서열, 예를 들면 전체 선별된 아미노산 서열에 대해 상동성이 약 50％ 이상이다. 또한, 아미노산 서열이 선별된 아미노산 서열에 실질적으로 상동성인 단백질은 선별된 서열에 대해 상동성이 약 50 내지 60％ 이상, 바람직하게는 약 60 내지 70％ 이상, 더 바람직하게는 약 70 내지 80％, 80 내지 90％ 또는 90 내지 95％ 이상, 가장 바람직하게는 약 96％, 97％, 98％, 99％ 이상이다.
본 발명의 RRP 단백질 또는 그의 생물학적 활성 부위 또는 단편은 씨. 글루타미쿰에서 1종 이상의 정밀 화학물질의 수율, 생산 및(또는) 생산 효율을 조정하거나, 탄화수소를 분해하거나, 테르페노이드를 산화시키거나, 약제 개발에 대한 표적으로서 제공되거나 또는 씨. 글루타미쿰 또는 관련 유기체에 대한 동정 마커로서 제공될 수 있다.
본 발명의 다양한 측면은 하기 소단락에 보다 상세히 기재되어 있다.
A. 단리된 핵산 분자
본 발명의 한 측면은 RRP 폴리펩티드 또는 그의 생물학적으로 활성인 일부를 코딩하는 단리된 핵산 분자 뿐만 아니라 RRP-코딩 핵산 (예를 들어, RRP DNA) 확인 또는 증폭을 위한 혼성화 프로브 또는 프라이머로 사용하기에 충분한 핵산 단편에 관한 것이다. 이들 핵산 분자는 씨. 글루타미쿰 또는 관련 유기체의 동정, 씨. 글루타미쿰 또는 관련된 유기체의 게놈의 맵핑 또는 예를 들면 발효 공정에 의한 정밀 화학물질을 생산하기에 적합한 미생물의 동정에 사용될 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "핵산 분자"는 DNA 분자 (예를 들어, cDNA 또는 게놈 DNA), RNA 분자 (예를 들어, mRNA), 및 뉴클레오티드 유사체를 사용하여 생성되는 DNA 또는 RNA 유사체를 포함하는 의미이다. 이 용어에는 또한 유전자의 코딩 영역의 3' 및 5' 말단의 둘 다에 위치하는 비번역 서열, 코딩 영역의 5' 말단으로부터 상류의 약 100개 이상의 뉴클레오티드 서열, 및 이 유전자의 코딩 영역의 3' 말단으로부터 하류의 약 20개 이상의 뉴클레오티드 서열이 포함된다. 핵산 분자는 단일 가닥 또는 이중 가닥일 수 있으며, 바람직하게는 이중 가닥 DNA이다. "단리된" 핵산 분자는 핵산의 천연 공급원에 존재하는 다른 핵산 분자로부터 분리되는 것이다. 바람직하게는, "단리된" 핵산은 이 핵산이 유도되는 생물의 게놈 DNA에서 본래 핵산의 양측면에 있는 서열 (즉, 핵산의 5' 및 3' 말단에 위치하는 서열)을 가지고 있지 않다. 예를 들어, 다양한 실시양태에서, 단리된 RRP 핵산 분자는 이 핵산이 유도되는 세포 (예를 들어, 씨. 글루타미쿰 세포)의 게놈 DNA에서 본래 핵산 분자의 양측면에 있는 약 5 kb, 4 kb, 3 kb, 2 kb, 1 kb, 0.5 kb 또는 0.1 kb 보다 작은 크기의 뉴클레오티드 서열일 수 있다. 게다가, "단리된" 핵산 분자, 예를 들어, cDNA 분자는, 재조합 기술에 의해 생산되는 경우 또다른 세포 물질 또는 배양 배지, 또는 화학적으로 합성되는 경우 화학물질 전구체 또는 다른 화학물질을 실질적으로 함유하지 않을 수 있다.
표준 분자 생물학 기술 및 본원에 제공되는 서열 정보를 이용하여, 본 발명의 핵산 분자, 예를 들어, 첨부문서 A의 뉴클레오티드 서열을 갖는 핵산 분자 또는 그의 일부를 단리할 수 있다. 예를 들어, 첨부문서 A로부터의 완전 서열 또는 그의 일부를 혼성화 프로브로 사용하고 표준 혼성화 기술 (예를 들어, 문헌[Sambrook, J., Fritsh, E.F., and Maniatis T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2nd, Ed., Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989]에 기재된 바와 같음)을 사용하여 씨. 글루타미쿰 뱅크로부터 씨. 글루타미쿰 RRP cDNA를 단리할 수 있다. 더우기, 첨부문서 A로부터의 완전 서열 또는 그의 일부를 포함하는 핵산 서열을 기초로 하여 설계된 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용하는 중합효소 연쇄반응에 의해 상기 핵산 분자를 단리할 수 있다 (예를 들면, 첨부문서 A의 이 동일 서열을 기초로하여 생산한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용하는 중합효소 연쇄 반응을 통해 첨부문서 A로부터의 완전 서열 또는 그의 부분를 포함하는 핵산 분자를 단리할 수 있음). 예를 들어, mRNA는 정상 내피세포로부터 (예를 들어, 문헌[Chirgwin et al.(1979) Biochemistry 18:5294-5299]의 구아니디늄-티오시아네이트 추출 방법에 의해) 단리할 수 있고, cDNA는 역전사효소(예를 들어, Gibco/BRL(Bethesda, MD)로부터 입수가능한 몰로니(Moloney) MLV 역전사효소; 또는 세이까가꾸 아메리카, 인크.(Seikagaku America, Inc., St. Petersburg, FL)로부터 입수가능한 AMV 역전사효소) 및 첨부문서 A에 나타낸 임의의 뉴클레오티드 서열에 기초한 무작위 폴리뉴클레오티드 프라이머 또는 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용하여 제조할 수 있다. 첨부문서 A에 기재된 뉴클레오티드 서열 중 하나를 기초로 하여 중합효소 연쇄반응 증폭을 위한 합성 올리고뉴클레오티드 프라이머를 생산할 수 있다. 본 발명의 핵산은 cDNA 또는, 별법으로, 게놈 DNA를 주형으로 사용하고 표준 PCR 증폭 기술에 따라 적절한 올리고뉴클레오티드 프라이머를 사용하여 증폭시킬 수 있다. 이와 같이 증폭된 핵산을 적절한 벡터내에 클로닝하고 DNA 서열 분석에 의해 특성화할 수 있다. 또한, RRP 뉴클레오티드 서열에 상응하는 올리고뉴클레오티드는 표준 합성 기술, 예를 들어, 자동 DNA 합성기를 사용하여 제조할 수 있다.
바람직한 실시양태에서, 본 발명의 단리된 핵산 분자는 첨부문서 A에 기재된 뉴클레오티드 서열 중 하나를 포함한다. 첨부문서 A의 서열은 본 발명의 코리네박테리움 글루타미쿰 RRP cDNA에 상응한다. 이 cDNA는 첨부문서 A에 나타낸 서열, RRP 단백질 (즉, 첨부문서 A에서 서열 각각에 나타낸 "코딩 영역") 뿐만 아니라 5' 및 3' 비번역 서열도 포함한다. 또한, 핵산 분자는 첨부문서 A의 서열 중 하나의 코딩 영역만을 포함할 수 있다.
게다가, 본 발명의 핵산 분자는 첨부문서 A의 서열 중 한 서열의 코딩 영역의 일부만을, 예를 들어, 프로브 또는 프라이머로 사용될 수 있는 단편 또는 RRP 단백질의 생물학적으로 활성인 부분을 코딩하는 단편을 포함할 수 있다. 씨. 글루타미쿰으로부터의 RRP 유전자의 클로닝으로부터 결정되는 뉴클레오티드 서열을 이용하여 다른 유형의 세포 및 유기체에서 RRP 상동체 뿐만 아니라 다른 코리네박테리아 또는 관련 종으로부터 RRP 상동체를 동정하고(하거나) 클로닝하는데 사용하기 위해 설계된 프로브 및 프라이머를 생성시킬 수 있다. 프로브 또는 프라이머는 통상적으로 실질적으로 정제된 올리고뉴클레오티드를 포함한다. 올리고뉴클레오티드는 통상적으로 엄격 조건하에 첨부문서 A에 나타낸 임의의 서열의 센스 가닥, 첨부문서 A에 나타낸 임의의 서열의 안티센스 가닥, 또는 자연 발생적인 그의 변이체의 약 12개, 바람직하게는 약 25개, 보다 바람직하게는 약 40, 50 또는 75개 이상의 연속된 뉴클레오티드와 혼성화되는 뉴클레오티드 서열 영역을 포함한다. 첨부문서 A의 뉴클레오티드 서열을 기초로 한 프라이머는 RRP 상동체를 클로닝하기 위한 PCR 반응에서 사용될 수 있다. RRP 뉴클레오티드 서열을 기초로 한 프로브를 사용하여 동일하거나 상동성인 단백질을 코딩하는 전사체 또는 게놈 서열을 탐지할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 프로브는 그에 부착되는 표지 기, 예를 들어 방사성동위원소, 형광성 화합물, 효소 또는 효소의 보조인자를 추가로 포함한다. 이러한 프로브는, 예를 들어 세포 시료 중 RRP-코딩 핵산 양을 측정함으로써, 예를 들어 RRP mRNA 수준을 검출하거나 또는 게놈 RRP 유전자가 변이되었는지 또는 결실되었는지를 결정함으로써, RRP 단백질을 잘못 발현시키는 세포를 동정하기 위한 진단용 분석 키트의 일부로 사용될 수 있다.
일 실시양태에서, 본 발명의 핵산 분자는 씨. 글루타미쿰에서 1종 이상의 정밀 화학물질의 수율, 생산 및(또는) 생산 효율을 조정하고, 탄화수소를 분해하고, 테르페노이드를 산화시키고, 약제 개발에 대한 표적으로서 제공되고, 씨. 글루타미쿰 또는 관련 유기체에 대한 동정 마커로서 제공되는 활성을 보유하는 단백질 또는 그의 부분에 대한, 첨부문서 B의 아미노산 서열에 충분히 상동성인 아미노산 서열을 포함하는 단백질 또는 그의 부분을 코딩한다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "충분히 상동성인"이란 첨부문서 B의 아미노산 서열과 비교하여 아미노산 서열이 동일 또는 동등한 최소 수의 아미노산 잔기(예를 들어, 첨부문서 B의 서열 중 하나의 서열에서의 하나의 아미노산 잔기와 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기)를 가져서 단백질 또는 그의 부분이 씨. 글루타미쿰에서 1종 이상의 정밀 화학물질의 수율, 생산 및(또는) 생산 효율을 조정하거나, 탄화수소를 분해하거나, 테르페노이드를 산화시키거나, 약제 개발에 대한 표적으로서 제공되거나, 또는 씨. 글루타미쿰 또는 관련 유기체에 대한 동정 마커로서 제공될 수 있는 단백질 또는 그의 부분에 관한 것이다. 따라서, "RRP 단백질의 기능"은 1종 이상의 정밀 화학물질의 대사경로의 전체 조절, 탄화수소의 분해 또는 테르페노이드의 산화에 기여한다.
본 발명의 RRP 핵산 분자에 의해 코딩되는 단백질의 부분은 바람직하게는 RRP 단백질 중 하나의 생물학적으로 활성인 부분이다. 본원에 사용된 바와 같이, 용어 "RRP 단백질의 생물학적으로 활성인 부분"은 씨. 글루타미쿰에서 1종 이상의 정밀 화학물질의 수율, 생산 및(또는) 생산 효율을 조정하고, 탄화수소를 분해하고, 테르페노이드를 산화시키고, 약제 개발에 대한 표적으로 또는 씨. 글루타미쿰 또는 관련 유기체에 대한 동정 마커로서 제공되는 RRP 단백질의 부분, 예를 들어, 도메인 또는 모티프를 포함한다. RRP 단백질 또는 그의 생물학적 활성 부위가 씨. 글루타미쿰에서 1종 이상의 정밀 화학물질의 수율, 생산 및(또는) 생산 효율을 조정하거나, 탄화수소를 분해하거나 또는 테르페노이드를 산화시킬 수 있는지를 결정하기 위해, 효소 활성 분석을 수행할 수 있다. 실시예 8에 상세히 기개된 바와 같이 이들 분석 방법은 당업자에게 친숙하다.
RRP 단백질의 생물학적 활성 부위를 코딩하는 추가 핵산 단편을 첨부문서 B의 임의의 서열 부분을 단리하고, RRP 단백질 또는 RRP 펩티드의 코딩된 부위를 발현시키고 (예컨대, 시험관내 재조합 발현에 의해), 상기 RRP 단백질 또는 펩티드의 코딩된 부위의 활성을 측정하여 제조할 수 있다.
또한, 본 발명은 유전학적 코드의 퇴화 때문에 첨부문서 A에 나타낸 임의의 뉴클레오티드 서열 (및 그의 부분)과 상이한 핵산 분자를 포함하므로 첨부문서 A에 나타낸 뉴클레오티드 서열에 의해 코딩된 것으로 동일한 RRP 단백질을 코딩한다. 또다른 실시양태에서, 본 발명의 단리된 핵산 분자는 첨부문서 B에 나타낸 아미노산 서열을 갖는 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 가진다. 추가 실시양태에서, 본 발명의 핵산 분자는 첨부문서 B의 아미노산 서열에 실질적으로 상동성인 전장의 씨. 글루타미쿰 단백질을 코딩한다 (첨부문서 A에 나타낸 오픈 리딩 프레임에 의해 코딩됨).
개체에 존재할 수 있는 RRP 서열의 자연 발생 변이체 외에, 당업자는 마찬가지로 상기 RRP 단백질의 기능의 손상 없이 돌연변이로 첨부문서 A의 뉴클레오티드 서열을 변화시켜서, 코딩된 RRP 단백질의 아미노산 서열 변화를 유도할 수 있다는 사실을 인식하고 있다. 예를 들어, "비필수" 아미노산 잔기에서 아미노산 치환을 일으키는 뉴클레오티드 치환이 첨부문서 A의 뉴클레오티드 서열에서 일어날 수 있다. "비필수 아미노산" 잔기가 상기 RRP 단백질의 활성을 변화시키지 않으면서 RRP 단백질 (첨부문서 B) 중 하나의 야생형 서열로부터 개질될 수 있는 잔기인 반면 "필수" 아미노산 잔기는 RRP 단백질 활성에 요구된다. 그러나, 다른 아미노산 잔기 (예를 들어, RRP 활성을 갖는 도메인에서 보존되지 않거나 또는 반보존된 아미노산 잔기)는 활성에 필요하지 않을 수도 있으며, 따라서 RRP 활성을 변화시키지 않으면서도 변화시킬 수 있다.
따라서, 본 발명의 또다른 측면은 RRP 활성에 필수적이지 않은 아미노산 잔기에서의 변화를 포함하는 RRP 단백질을 코딩하는 핵산 분자에 관한 것이다. 이러한 RRP 단백질은 첨부문서 B의 서열로부터의 아미노산 서열이 다르지만, 상기 단백질을 본원에 기재된 RRP 활성 중 적어도 하나를 보유한다. 일 실시양태에서, 단리된 핵산 분자는, 첨부문서 B의 아미노산 서열과 약 50％ 이상 상동성인 아미노산 서열을 포함하며, 씨. 글루타미쿰에서 1종 이상의 정밀 화학물질의 수율, 생산 및(또는) 생산 효율을 조정하거나, 탄화수소를 분해하거나, 테르페노이드를 산화시키거나, 약제 개발에 대한 표적으로서 제공되거나 또는 씨. 글루타미쿰 또는 관련 유기체에 대한 동정 마커로서 제공되는 단백질을 코딩하는 뉴클레오티드 서열을 포함한다.
코딩된 단백질 내에 하나 이상의 아미노산의 치환, 부가 또는 결실이 도입되도록 첨부문서 A의 뉴클레오티드 서열 내에 하나 이상의 뉴클레오티드의 치환, 부가 또는 결실을 도입시킴으로써, 첨부문서 B의 단백질 서열과 상동성인 RRP 단백질을 코딩하는 단리된 핵산 분자를 생성시킬 수 있다. 부위-지정 돌연변이유발법 및 PCR-매개 돌연변이유발법과 같은 표준 기술에 의해 첨부문서 A의 서열 중 하나에 돌연변이를 도입할 수 있다. 바람직하게는, 예상되는 하나 이상의 비필수 아미노산 잔기에서 보존된 아미노산 치환을 수행할 수 있다. "보존된 아미노산 치환"이란 아미노산 잔기가 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기로 대체되는 것을 말한다. 유사한 측쇄를 갖는 아미노산 잔기의 군은 당업계에 정의되어 있다. 이러한 군에는 염기성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 리신, 아르기닌, 히스티딘), 산성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 아스파라긴산, 글루탐산), 비하전된 극성 측쇄를 갖는 아미노산(예를 들어, 글리신, 아스파라긴, 글루타민, 세린, 트레오닌, 티로신, 시스테인), 비극성 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 알라닌, 발린, 루이신, 이소루이신, 프롤린, 페닐알라닌, 메티오닌, 트립토판), 베타-분지 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 트레오닌, 발린, 이소루이신) 및 방향족 측쇄를 갖는 아미노산 (예를 들어, 티로신, 페닐알라닌, 트립토판, 히스티딘)이 포함된다. 따라서, RRP 단백질에서 예상되는 비필수 아미노산 잔기는 바람직하게는 동일한 측쇄 군으로부터의 다른 아미노산 잔기로 치환된다. 또다른 실시양태에서, 돌연변이는, 예를 들어, 포화 돌연변이유발법에 의해 RRP 코딩 서열의 전부 또는 일부를 따라 무작위적으로 도입될 수 있으며, RRP 활성을 보유하는 변이체를 동정하기 위해, 생성된 변이체를 본원에 기재된 RRP 활성에 대하여 시험할 수 있다. 첨부문서 A의 임의의 서열을 돌연변이 유발시킨 다음, 코딩된 단백질을 재조합적으로 발현시킬 수 있고, 예를 들어 본원에 기재된 분석법을 이용하여 상기 단백질의 활성을 측정할 수 있다 (실시예 8 참조).
B. 재조합 발현 벡터 및 숙주 세포
본 발명의 다른 측면은 RRP 단백질 (또는 그의 부분)을 코딩하는 핵산을 함유하는 벡터, 바람직하게는 발현 벡터에 관한 것이다. 본원에서 사용하는 용어 "벡터"는 그에 연결된 다른 핵산을 수송할 수 있는 핵산 분자에 관한 것이다. 벡터의 한 유형으로 "플라스미드"란 추가의 DNA 단편이 라이게이션될 수 있는 환형 이중쇄 DNA 루프를 의미한다. 벡터의 다른 유형은 바이러스 벡터이고 추가의 DNA 단편을 바이러스 게놈 내로 라이게이션시킬 수 있다. 특정 벡터는 도입된 숙주 세포 내에서 자가 복제 능력이 있다 (예, 세균 복제 개시점을 가진 세균 벡터 및 포유류의 에피솜 벡터). 다른 벡터 (예, 포유류의 비-에피솜 벡터)는 숙주 세포 내로 도입 시에 숙주 게놈 내로 삽입되고, 이렇게 함으로써 숙주 게놈과 함께 복제된다. 게다가, 특정 벡터는 작동 가능하게 연결된 유전자의 발현을 조절할 수 있다. 본 명세서에서는 그러한 벡터를 "발현 벡터"로 지칭한다. 일반적으로, 재조합 DNA 기술에서 사용하는 발현 벡터는 플라스미드의 형태를 갖는다. 플라스미드는 가장 일반적으로 사용되는 벡터 형태이기 때문에, 본 명세서에서는 "플라스미드"와 "벡터"를 혼용할 수 있다. 본 발명에는 동등한 기능을 제공하는 바이러스 벡터 (예, 복제 결손 레트로바이러스, 아데노 바이러스 및 아데노-관련 바이러스)와 같은 다른 형태의 발현 벡터도 포함된다.
본 발명의 재조합 발현 벡터는 숙주 세포 내에서 핵산의 발현에 적합한 형태인 본 발명의 핵산을 포함하며, 즉 적합한 형태란 상기 재조합 발현 벡터가 발현용 숙주 세포를 기준으로 선택된 하나 이상의 조절 서열 (발현되는 핵산 서열에 작동 가능하게 연결됨)을 함유하고 있음을 의미한다. 재조합 발현 벡터 내에서, "작동 가능하게 연결된"이란 목적하는 뉴클레오티드 서열이 발현 가능하도록 조절 서열(들)에 연결된 것을 의미한다 (예, 시험관내 전사/번역 시스템 내 또는 벡터가 숙주 세포 내로 도입되는 경우 숙주 세포 내). 용어 "조절 서열"이란 프로모터, 억제제-결합 부위, 할성제-결합 부위, 인핸서 영역 및 기타 발현 조절 요소 (예, 폴리아데닐화 신호)를 포함하는 것이다. 그러한 조절 서열은, 예를 들어 문헌 [Goeddel; Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990)]에 기술되어 있다. 조절 서열에는 다수의 숙주 세포 유형 내에서 뉴클레오티드 서열의 발현을 조절하는 것과 단지 특정 숙주 세포 내에서의 뉴클레오티드 서열을 발현하는 것이 포함된다. 당업자는 발현 벡터 설계가 형질전환되는 숙주 세포의 선택, 목적 단백질의 발현 정도 등과 같은 인자들에 따라 다를 수 있음을 이해할 것이다. 본 발명의 발현 벡터는 숙주세포에 도입됨으로써 본 명세서에 기술된 핵산에 의해 코딩되는 융합 단백질 또는 펩티드를 비롯한 단백질 또는 펩티드를 생산할 수 있다 (예, RRP 단백질, RRP 단백질의 돌연변이형, 융합 단백질 등).
본 발명의 재조합 발현 벡터는 원핵 또는 진핵 세포에서의 RRP 단백질 발현용으로 설계될 수 있다. 예를 들어, RRP 유전자는 씨. 글루타미쿰과 같은 세균 세포, 곤충 세포 (바큘로바이러스 발현 벡터 사용), 효모 및 다른 진균류 세포 (문헌 [Romanos, M.A. et al. (1992) "Foreign gene expression in yeast: a review", Yeast 8:423-488; van den Hondel, C.A.M.J.J. et al. (1991) "Heterologous gene expression in filamentous fungi" in: More Gene Manipulations in Fungi, J.W. Bennet ＆ L.L. Lasure, Editors, pp. 396-428: Academic Press: San Diego; 및 van den Hondel, C.A.M.J.J. ＆ Punt, P.J. (1991) "Gene transfer systems and vector development for filamentous fungi, in: Applied Molecular Genetics of Fungi, Peberdy, J.F. et al., Editors, pp. 1-28, Cambridge University Press: Cambridge] 참조), 조류 및 다세포 식물 세포 (문헌 [Schmidt, R. and Willmitzer, L. (1988) High efficiency Agrobacterium tumefactiens-mediated transformation of Arabidopsis thaliana leaf and cotyledon explants" Plant Cell Rep.:583-586] 참조) 또는 포유류 세포 내에서 발현될 수 있다. 적합한 숙주 세포는 문헌 [Goeddel, Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, CA (1990)]에 더 기술되어 있다. 별법으로, 예를 들어 T7 프로모터 조절 서열 및 T7 중합효소를 사용하여 재조합 발현 벡터를 시험관 내에서 전사 및 번역시킬 수 있다.
원핵 세포 내에서 단백질을 발현시키는 것은 대체로 융합 또는 비-융합 단백질이 발현되도록 하는 구성적 또는 유도적 프로모터 함유 벡터로 수행한다. 융합 벡터는 그의 코딩되는 단백질에, 일반적으로는 재조합 단백질의 아미노 말단에 다수의 아미노산을 조절한다. 그러한 융합 벡터는 전형적으로 세 가지 목적: 1) 재조합 단백질의 발현 증가, 2) 재조합 단백질의 가용성 증가 및 3) 친화도 정제에서 리간드로서 작용함에 의한 재조합 단백질 정제 상의 용이함을 위한 것이다. 대개 융합 발현 벡터 내에서는 융합 단위와 재조합 단백질의 접합부에 단백질 절단 부위가 도입되어 있어서 융합 단백질을 정제한 후 융합 단위로부터 재조합 단백질을 분리하는 것이 가능하다. 그러한 효소 및 그의 상응하는 인식 서열에는 인자 Xa, 트롬빈 및 엔테로키나제가 포함된다.
전형적인 융합 발현 벡터에는 pGEX (Pharmacia Biotech Inc; 문헌 [Smith, D.B. and Johnson, K.S. (1988) Gene 67:31-40] 참조), pMAL (New England Biolabs, Beverly, MA) 및 pRIT5 (Pharmacia, Piscataway, NJ)가 포함되며, 이들은 각각 글루타티온-S-트랜스퍼라제 (GST), 말토스 E-결합 단백질 또는 프로틴 A (protein A)를 재조합 표적 단백질에 융합시킨다. 한 실시양태에서는 RRP 단백질의 코딩 서열을 pGEX 발현 벡터 내로 클로닝하여 N-말단 내지 C-말단에 GST-트롬빈 절단 부위-X 단백질을 함유하는 융합 단백질 코딩 벡터를 생성하였다. 상기 융합 단백질은 글루타티온-아가로스 수지를 사용하는 친화도 크로마토그래피에 의해 정제할 수 있다. GST에 융합되지 않은 재조합 RRP 단백질은 융합 단백질을 트롬빈으로 절단함으로써 얻을 수 있다.
적합한 유도적 비-융합 대장균 발현 벡터의 예로는 pTrc (문헌 [Amann et al.,(1988) Gene 69:301-315] 참조) 및 pET 11d (문헌 [Studier et al., Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, California (1990) 60-89]가 있다. pTrc로부터 표적 유전자가 발현되는 것은 혼성 trp-lac 융합 프로모터를 통한 숙주의 RNA 중합효소 전사에 의한 것이다. pET 11d 벡터로부터 표적 유전자가 발현되는 것은 T7 gn 10-lac 융합 프로모터를 통한 동시 발현된 바이러스 RNA 중합효소 (T7 gn1)로 매개되는 전사에 의한 것이다. 이 바이러스 중합효소는 lacUV 5 프로모터의 전사 조절 하에 T7 gn1 유전자를 함유하는 상재 λ프로파지로부터 숙주 균주 BL21(DE3) 또는 HMS174(DE3)에 의해 공급된다.
재조합 단백질의 발현을 극대화하는 전략의 일환으로 재조합 단백질을 단백질 분해에 의해 절단하는 능력을 감소시킨 숙주 세균 내에서 상기 단백질을 발현시키는 것이 있다 (문헌 [Gottesman, S., Gene Expression Technology: Methods in Enzymology 185, Academic Press, San Diego, California (1990) 119-128] 참조). 다른 전략으로는 발현 벡터 내로 삽입되는 핵산의 핵산 서열을 변형하여 각각의 아미노산에 대한 개별적인 코돈이 발현을 위해 선택된 세균 (예를 들어, 씨. 글루타미쿰)가 선호하는 코돈이 되도록 하는 것이 있다 (문헌 [Wada et al.(1992) Nucleic Acids Res. 20:2111-2118] 참조). 본 발명의 핵산 서열을 변형하는 것은 표준 DNA 합성 기술에 의해 수행될 수 있다.
다른 실시양태에서, RRP 단백질 발현 벡터는 효모 발현 벡터이다. 효모 에스. 세레비지애의 발현 벡터의 예로는 pYepSec1 (문헌 [Baldari, et al.,(1987) Embo J.6:229-234), pMFa (문헌 [Kurjan and Herskowitz,(1982) Cell 30:933-943] 참조), pJRY88 (문헌 [Shultz et al.,(1987) Gene 54:113-123] 참조) 및 pYES2 (Invitrogen Corporation, San Diego, CA)가 포함된다. 사상 진균류와 같은 다른 진균류용으로 적절한 벡터 및 벡터의 제조 방법으로는 문헌 [van den Hondel, C.A.M.J.J. ＆ Punt, P.J. (1991) "Gene transfer systems and vector development for filamentous fungi, in: Applied Molecular Genetics of Fungi, J.F. Peberdy, et al., Editors, pp. 1-28, Cambridge University Press: Cambridge]에 상술된 것들이 포함된다.
별법으로, 바큘로바이러스 발현 벡터를 사용하여 본 발명의 RRP 단백질을 곤충 세포 내에서 발현시킬 수 있다. 배양된 곤충 세포 (예, Sf9 세포)에서의 단백질 발현용 바큘로바이러스 벡터에는 pAc계 (문헌 [Smith et al. (1983) Mol. Cell Biol. 3:2156-2165] 참조) 및 pVL계 (문헌 [Lucklow and Summers (1989) Virology 170:31-39] 참조)가 포함된다.
다른 실시양태에서는 단세포 식물 세포 (예를 들어, 조류) 또는 고등 식물 (예, 작물 식물과 같은 종자 식물)로부터의 세포 내에서 본 발명의 RRP 단백질을 발현시킬 수 있다. 식물 발현 벡터의 예로는 문헌 [Becker, D., Kemper, E., Schell, J. and Masterson, R. (1992) "New plant binary vectors with selectable markers located proximal to the left border", Plant Mol. Biol. 20: 1195-1197], 문헌 [Bevan, M.W. (1984) "Binary Agrobacterium vectors for plant transformation", Nucl. Acid. Res. 12: 8711-8721]에 상술된 것들이 포함된다.
또 다른 실시양태에서는 포유류 발현 벡터를 사용하여 포유류 세포 내에서 본 발명의 핵산을 발현시킨다. 포유류 발현 벡터의 예로는 pCDM8 (문헌 [Seed, B. (1987) Nature 329:840] 참조) 및 pMT2PC (문헌 [Kaufman et al. (1987) EMBO J. 6:187-195] 참조)가 포함된다. 포유류 세포를 사용하는 경우, 발현 벡터의 조절 기능은 대개 바이러스 조절 요소에 의한 것이다. 예를 들어, 일반적으로 사용되는 프로모터는 폴리오마, 아데노바이러스 2, 사이토메갈로바이러스 및 시미안 바이러스 40으로부터 유래된 것이다. 원핵 세포 및 진핵 세포 둘 다에 적합한 다른 발현계에 대해서는 문헌 [Chapters 16 and 17 of Sambrook, J., Fritsh, E.F., and Maniatis, T. Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2nd. Edition. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989]을 참조한다.
다른 실시양태에서, 재조합 포유류 발현 벡터는 바람직하게는 특정 세포 유형에서 핵산의 발현을 가능하게 한다 (예, 조직-특이적 조절 요소가 핵산을 발현시키는데 사용됨). 조직-특이적 조절 요소는 당업계에 공지되어 있다. 적합한 조직-특이적 프로모터에 대한 제한되지 않는 예로는 알부민 프로모터 (간-특이적; 문헌 [Pinkert et al. (1987) Genes Dev. 1: 268-277] 참조), 림프양-특이적 프로모터 (문헌 [Calame and Eaton (1988) Adv. Immunol. 43: 235-275] 참조), 특히 T 세포 수용체의 프로모터 (문헌 [Winoto and Baltimore (1989) EMBO J. 8: 729-733] 참조)와 이뮤노글로불린의 프로모터 (문헌 [Banerji et al. (1983) Cell 33: 729-740], 문헌 [Queen and Baltimore (1983) Cell 33: 741-748] 참조), 뉴런-특이적 프로모터 (예, 뉴로필라멘트 프로모터; 문헌 [Byrne and Ruddle (1989) PNAS 86: 5473-5477] 참조), 췌장-특이적 프로모터 (문헌 [Edlund et al. (1985) Science 230: 912-916] 참조) 및 유선-특이적 프로모터 (예, 유청 프로모터; 미국 특허 제4,873,316호 및 유럽 출원 번호 제264,166호 참조)가 포함된다. 또한, 발생-조절 프로모터, 예를 들어 쥐의 hox 프로모터 (문헌 [Kessel and Gruss (1990) Science 249: 374-379] 참조) 및 α-페토프로테인 프로모터 (문헌 [Campes and Tilghman (1989) Genes Dev. 3: 537-546] 참조)도 포함된다.
본 발명은 안티센스 방향으로 발현 벡터 내에서 클로닝된 본 발명의 DNA 분자를 함유하는 재조합 발현 벡터를 추가로 제공한다. 즉, 상기 DNA 분자는 RRP mRNA에 대해 안티센스인 RNA 분자의 (상기 DNA 분자의 전사에 의한) 발현이 가능하도록 조절 서열에 작동 가능하게 연결된다. 안티센스 방향으로 클로닝된 핵산에 작동 가능하게 연결되고 다양한 세포 유형에서 안티센스 RNA 분자의 연속 발현을 조절하는 조절 서열을 선택할 수 있는데, 예를 들어 바이러스 프로모터 및(또는) 인핸서, 또는 안티센스 RNA의 구성적, 조직-특이적 또는 세포형 특이적 발현을 조절하는 조절 서열을 선택할 수 있다. 안티센스 발현 벡터는 고효율의 조절 영역의 조절 하에서 안티센스 핵산을 생산하는 재조합 플라스미드, 파지미드 또는 약독화 바이러스의 형태일 수 있으며, 그 활성은 상기 벡터가 도입된 세포 유형에 의해 결정될 수 있다. 안티센스 유전자를 사용하여 유전자 발현을 조절하는 것에 대해서는 문헌 [Weintraub, H. et al., Antisense RNA as a molecular tool for genetic analysis, Reviews - Trends in Genetics, Vol. 1(1) 1986]을 참조한다.
본 발명의 다른 측면은 본 발명의 재조합 발현 벡터가 도입된 숙주 세포에 관한 것이다. 용어 "숙주 세포" 및 "재조합 숙주 세포"는 본 명세서에서 혼용되고 있다. 그러한 용어는 특정 대상 세포를 지칭할 뿐만 아니라 그러한 세포의 자손 또는 잠재적인 자손도 의미하는 것으로 이해한다. 세대를 지나면서 돌연변이나 환경의 영향으로 인해 특정 변형이 나타날 수 있기 때문에, 사실 그러한 자손은 부모 세포와 동일하지 않지만, 여전히 본 명세서에서 사용하는 용어의 범위에 포함된다.
숙주 세포는 임의의 원핵 세포 또는 진핵 세포일 수 있다. 예를 들어, RRP 단백질은 씨. 글루타미쿰과 같은 세균 세포, 곤충 세포, 효모 또는 포유류 세포 (예를 들어, 중국산 큰쥐 난소 세포 (CHO) 또는 COS 세포) 내에서 발현될 수 있다. 다른 적합한 숙주 세포는 당업자에게 공지되어 있다. 본 발명의 핵산 및 단백질 분자를 위한 숙주 세포로서 적합한 방식으로 사용할 수 있는 코리네박테리움 글루타미쿰 관련 미생물이 표 3에 기재되어 있다.
벡터 DNA는 통상적인 형질전환 또는 형질감염 기술을 통해 원핵 또는 진핵 세포 내로 도입될 수 있다. 본원에서 사용된 용어 "형질전환", "형질감염", "접합" 및 "형질도입"이란 이종 핵산 (예, DNA)을 숙주 세포 내에 도입하는 다양한 공지 기술을 의미하는 것이며, 천연 수용법 (natural competence), 화학적 매개 전달법, 인산 칼슘 또는 염화 칼슘 동시 침전법, DEAE-덱스트란-경유 형질감염법, 리포펙션법 (lipofection) 또는 전기천공법이 포함된다. 숙주 세포를 형질전환 또는 형질감염시키는데 적합한 방법은 문헌 [Sambrook et al. (Molecular Cloning: A Laboratory Manual. 2nd, Edition, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NY, 1989)] 및 다른 실험 안내서에서 찾을 수 있다.
포유류 세포의 안정적 형질감염에 대해서는, 발현 벡터와 이용된 형질감염 기술에 따라, 단지 일부 소수 세포만이 그의 게놈 내로 이종 DNA를 삽입할 수 있다는 것이 알려져 있다. 이들 인서트를 확인하고 선별하기 위해, 일반적으로 선별 가능 표지 (예, 항생제 내성)를 코딩하는 유전자를 목적 유전자와 함께 숙주 세포 내로 도입시킨다. 바람직한 선별 가능 표지에는 G418, 하이그로마이신 및 메토트렉세이트와 같은 약물 내성을 부여하는 것들이 포함된다. 선별 가능 표지를 코딩하는 핵산은 RRP 단백질을 코딩하는 그 벡터 상에서 숙주 세포 내로 도입될 수 있으며, 또는 별도의 벡터 상에서 도입될 수도 있다. 도입된 핵산이 안정적으로 형질감염된 세포는, 예를 들어 약물 선별을 통해 동정할 수 있다 (예, 선별 가능 표지 유전자가 혼입된 세포는 생존할 것이나, 그렇지 않은 다른 세포는 사멸함).
상동성 재조합 미생물을 제조하기 위해서, 결실, 부가 또는 치환을 도입시켜 RRP 유전자를 변형 (예, 기능을 파괴)시킨 하나 이상의 RRP 유전자를 함유하는 벡터를 제조한다. 바람직하게는 이 RRP 유전자는 코리네박테리움 글루타미쿰 RRP 유전자이지만, 관련 세균으로부터의 상동체, 또는 포유류, 효모 또는 곤충 기원의 상동체도 사용할 수 있다. 바람직한 실시양태에서, 상기 벡터는 상동성 재조합에 의해 내생성 RRP 유전자가 기능적으로 파괴 (즉, 더이상 기능적 단백질을 코딩하지 않음, "녹 아웃 (knock-out)" 벡터로도 지칭함)되도록 설계된다. 별법으로, 상기 벡터는 상동성 재조합에 의해 내생성 RRP 유전자가 돌연변이되거나 달리 변형되었지만 여전히 기능적 단백질을 코딩 (즉, 상류 조절 영역이 변형되어 내생성 RRP 단백질의 발현이 변형될 수 있음)하도록 설계된다. 상동성 재조합 벡터에는 변형된 RRP 유전자 단편의 5' 및 3' 말단의 측면에 RRP 유전자의 추가적인 핵산이 자리하여 벡터에 의해 운반된 외래 RRP 유전자와 미생물 내의 내생성 RRP 유전자 사이에 상동성 재조합이 일어날 수 있다. 추가된 측면 RRP 핵산은 내생성 유전자와 성공적으로 상동성 재조합 되기에 충분한 길이를 갖는다. 전형적으로, 수 킬로베이스 미만의 측면 DNA (5' 및 3' 말단 둘 다)가 상기 벡터 내에 포함된다 (예를 들어, 상동성 재조합 벡터에 대해 기술하는 문헌 [Thomas, K.R., and Capecchi, M.R. (1987) Cell 51:503] 참조). 상기 벡터는 (예, 전기천공법에 의해) 미생물 내로 도입되고, 도입된 RRP 유전자와 내생성 RRP 유전자가 상동성 재조합된 세포를 당업계에 공지된 기술에 의해 선별한다.
다른 실시양태에서, 재조합 미생물은 도입된 유전자의 발현을 조절하도록 선별 시스템을 포함하는 것으로 제조할 수 있다. 예를 들어, 벡터 상에서 RRP 유전자가 lac 오페론의 조절 하에 위치하며 포함된 경우에는 오직 IPTG의 존재 하에서만 RRP 유전자의 발현이 가능하다. 그러한 조절 시스템은 당업계에 공지되어 있다.
배양된 원핵 또는 진핵 숙주 세포와 같은 본 발명의 숙주 세포는 RRP 단백질을 생산 (즉, 발현)에 사용될 수 있다. 또한, 본 발명은 본 발명의 숙주 세포를 이용한 RRP 단백질의 생산 방법을 추가로 제공한다. 한 실시양태에서, 상기 방법은 본 발명의 (RRP 단백질을 코딩하는 재조합 발현 벡터가 도입되거나, 야생형 또는 변형된 RRP 단백질을 코딩하는 유전자가 게놈 내로 도입된) 숙주 세포를 RRP 단백질이 생산될 때까지 적합한 배지에서 배양하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 상기 방법은 상기 배지 또는 숙주 세포로부터 RRP 단백질을 단리하는 것을 추가로 포함한다.
C. 본 발명의 용도 및 방법
본원에 기재한 핵산 분자, 단백질, 단백질 상동체, 융합 단백질, 프라이머, 벡터 및 숙주세포는 코리네박테리움 글루타미쿰 및 관련된 유기체의 동정, 씨. 글루타미쿰과 관련된 유기체의 게놈 맵핑, 씨. 글루타미쿰의 목적 서열의 동정 및 위치 확인, 진화 연구, 기능에 필요한 RRP 단백질 부위의 결정, RRP 단백질의 활성 조절, 하나 이상의 대사 경로의 활성 조절 및 정밀 화학 물질과 같은 목적 화합물의 세포 생산 조절 등의 방법 중 하나 이상에 사용할 수 있다. 본 발명의 RRP 핵산 분자는 다수의 용도를 가진다. 첫 번째, 본 발명의 RRP 핵산 분자는 유기체를 코리네박테리움 글루타미쿰 또는 가까운 관계물로서 동정하기 위해 사용될 수 있다. 본 발명의 RRP 핵산 분자는 미생물의 혼합된 개체들 중에서 씨. 글루타미쿰 또는 그의 관계물의 존재를 동정하기 위해 사용될 수도 있다. 본 발명은 다수의 씨. 글루타미쿰 유전자의 핵산 서열을 제공한다. 이 유기체에 특이적인 씨. 글루타미쿰 유전자의 영역을 포함하는 프로프를 사용하여 엄격한 조건 하에 미생물의 동질 또는 혼합된 개체의 배양의 추출된 게놈 DNA를 탐침함으로써 상기 유기체의 존재를 결정하는 것이 가능하다. 코리네박테리움 글루타미쿰 자신이 비병원성이지만, 병원성 종, 예컨대 코리네박테리움 디프테리아에 관련된다. 이러한 유기체의 탐지는 실질적으로 임상상 중요하다.
시료에서 씨. 글루타미쿰의 존재는 당업계에 공지된 기술을 사용하여 탐지될 수 있다. 특히, 시료의 세포는 적합한 액상 또는 고상 배양 배지에서 먼저 성장시켜 배양액에서 세포 수를 증가시킬 수 있다. 상기 세포를 용해시키고, 그에 함유된 모든 DNA를 추출하고, 필요에 따라 차후 분석을 방해할 수 있는 세포 파편 및 단백질 물질을 제거한다. 중합효소 연쇄 반응 또는 당업계에 공지된 유사 기술을 발명의 RRP 핵산 분자에 특이적이고, 시료에 존재하는 경우 핵산 시료와 인큐베이션되어 특정 RRP 핵산 서열을 증폭시키는 프라이머와 함께 수행한다 (핵산 서열 증폭에 보통 사용된 방법에 대한 일반 리뷰는 문헌 [Mullis et al., U.S. Patent No. 4683195, Mullis et al., U.S. Patent No. 4965188 and Innis, M.A. and Gelfand, D.H. (1989) PCR-Protocols, A guide to Metohods and Applications, Academic Press, pp. 3-12, and (1988) Biotechnology 6:1197 and international Patent Application No. WO89/01050]에서 알 수 있음). 증폭될 특정 핵산 서열은 씨. 글루타미쿰 및 단지 소수의 관련된 박테리아의 게놈에 그의 독점적인 존재에 기초하여 선별된다. 목적 증폭 산물의 존재는 씨. 글루타미쿰 또는 씨. 글루타미쿰과 매우 관련된 유기체의 존재를 나타낸다.
본 발명의 핵산 및 단백질 분자는 게놈의 특정 영역에 대한 마커로서 또한 제공될 수 있다. 당업계에 공지된 기술을 사용하여 글루타미쿰 게놈에 대해 본 발명의 RRP 핵산 분자의 물리적 위치를 탐지할 수 있고, 이것은 맵에 대해 다른 핵산 분자 및 유전자를 더 용이하게 위치화시키는데 사용될 수도 있다. 또한, 본 발명의 핵산 분자는 이들 핵산 분자에 대한 관련 종의 서열에 충분히 상동성이서 마찬가지로 이러한 박테리아 (예컨대, 브레비박테리움 락토페르멘툼)의 게놈 맵의 작제를 가능하게 할 수 있다.
본 발명의 핵산 및 단백질 분자는 게놈의 맵핑 및 씨. 글루타미쿰 단백질의 기능 연구에 적합하다. 특정 씨. 글루타미쿰 DNA-결합 단백질이 결합할 수 있는 게놈 영역은 예를 들면 씨. 글루타미쿰 게놈의 절단 및 단편과 상기 DNA-결합 단백질과의 인큐베이션으로 동정될 수 있다. 단백질에 결합하는 이들 단편은 본 발명의 핵산 분자로 바람직하게는 용이하게 탐지가능한 표지를 사용하여 탐침할 수도 있으며; 게놈 단편에 대한 이러한 핵산 분자의 결합은 씨. 글루타미쿰의 게놈 맵 상에 상기 단편을 위치화시킬 수 있고, 이것은 상이한 효소를 사용하여 수회 수행하는 경우 단백질이 결합하는 핵산 서열을 신속하게 결정하는 것을 촉진한다.
본 발명의 RRP 핵산 분자는 마찬가지로 진화 연구 및 단백질 구조 연구에 적합하다. 원핵 및 진핵 세포의 다양성은 본 발명의 분자가 관련된 대사 과정을 이용하며; 본 발명의 핵산 분자의 서열을 다른 유기체로부터의 유사한 효소를 코딩하는 것과 비교하여 상기 유기체의 진화 관련성 정도를 결정함으로써 가능하다. 따라서, 이러한 비교는 서열이 보존되거나 되지 않은 것을 결정할 수 있게 하고, 이는 효소 기능이 필수인 이들 단백질 영역의 결정을 도울 수 있다. 이 유형의 결정은 단백질 가공 연구에 대해 가치있고, 상기 단백질이 그의 기능 손실 없이 허용될 수 있는 돌연변이유발 정도를 나타낼 수 있다.
본 발명의 RRP 단백질은 공지되지 않은 박테리아를 씨. 글루타미쿰으로서 분류하거나 또는 시료 중의 씨. 글루타미쿰 또는 가깝게 관련된 박테리아를 동정하기 위한 마커로서 사용될 수 있다. 당업계에 공지된 기술을 사용하여 예를 들면 시료에서 필요에 따라 세포를 증폭하여 (예를 들면, 적합한 배지에서 배양함으로써) 시료의 양을 증가시키고, 이어서 상기 세포를 융해시켜 그에 함유된 단백질을 유리하는 것이 가능하다. 필요에 따라, 상기 시료를 정제하여 세포 파편 및 핵산 분자를 제거할 수 있으며, 이는 차후 분석을 방해할 수 있다. 본 발명의 선택된 RRP 단백질이 시료체 존재하는 경우 그의 표적 단백질에 결합하는 항체와 함께 이 RRP 단백질에 특이적인 항체를 단백질 시료와 전형적인 웨스턴 분석 형식으로 인큐베이션할 수 있다 (예를 들면, 문헌 [Ausubel et al., (1988) Current Protocols in Molecular Biology, Wiley: New York] 참조). RRP 단백질은 씨. 글루타미쿰 또는 씨. 글루타미쿰 및 매우 가깝게 관려된 박테리아에서 특이적이거나 또는 거의 특이적인 경우 이 유형의 분석에 대해 선별된다. 시료의 단백질을 이어서 겔 전기영동으로 분획하고, 적합한 매트릭스, 예컨대 니트로셀룰로오스로 옮긴다. 탐지가능 표지 (예컨대, 화학발광 또는 측색)를 갖는 적합한 2차 항체를 상기 매트릭스와 인큐베이션한 후에 엄격한 세척을 한다. 표지의 존재 또는 부재는 시료에서 표적 단백질의 존재 또는 부재를 나타낸다. 이 단백질이 존재하는 경우, 이는 씨. 글루타미쿰의 존재를 나타낸다. 유사한 방법은 공지되지 않은 박테리아를 씨. 글루타미쿰으로서 분류할 수 있게 하며; 이 박테리아는 다수의 씨. 글루타미쿰-특이성 단백질이 상기 공지되지 않은 박테리아로부터 제조된 단백질 시료에서 탐지되지 않는 경우 아마 씨. 글루타미쿰이 아니다.
본 발명의 RRP 핵산 분자의 유전 조작은 야생형 RRP 단백질과 비교하여 기능적으로 상이한 RRP 단백질을 생성할 수 있다. 그의 효율 또는 활성과 관련하여 개선될 수 있는 이들 단백질은 보통 세포보다 더 많은 양으로 세포에 존재할 수 있거나 또는 그의 효율 또는 활성과 관련하여 약화될 수 있다.
활성의 이들 변화는 씨. 글루타미쿰에서 1종 이상의 정밀 화학물질의 수율, 생산 및(또는) 생산 효율을 직접적으로 조절할 수 있다. 예를 들면, 정밀 화학물질의 생합성 또는 분해에 관련된 단백질의 활성을 조정하여 (즉, 상응하는 유전자를 돌연변이시킴으로써) 세포의 활성을 직접적으로 조정하고, 이 화합물을 합성 및 분해하고, 그에 의해 상기 정밀 화학물질의 수율 및(또는) 생산 효율을 조정할 수 있다. 마찬가지로, 정밀 화학물질의 대사 경로를 조절하는 단백질의 활성을 조정하여 세포로부터 정밀 화학물질의 수율 또는 생산 효율을 조절하는 이들 과정 모두로 원하는 화합물의 생산을 상향 또는 하향조절하는 직접적인 영향을 가질 수 있다.
본 발명의 단백질의 활성의 조정 (즉, 상응하는 유전자의 돌연변이유발)은 정밀 화학물질의 생산을 간접적으로 조정하여 세포의 성장 및 분열, 또는 생존성 및 생산성의 보유 활성을 전체적으로 증가시킬 수도 있다. 정밀 화학물질은 성장 및 세포 분열에 대해 종종 차선인 조건하에 이들 미생물의 대량 발효 배양액으로 씨. 글루타미쿰으로부터 보통 생산된다. 본 발명의 단백질 (예컨대, 스트레스 반응 단백질, 세포벽 단백질 또는 일어나는 세포 성장 및 세포 분열에 대해 요구되는 화합물, 예컨대 뉴클레오티드 및 아미노산의 대사에 관련된 단백질)을 개질하여 더 양호한 생존, 성장 및 증식을 상기 조건하에 가능하게 하여 대량 배양액에서 이들 개질된 씨. 글루타미쿰 세포의 수 및 생산성을 증가시킬 수 있고, 이것은 또한 원하는 1종 이상의 정밀 화학물질의 증가된 수율 및(또는) 생산 효율을 유도하여야 한다. 또한, 세포의 대사 경로는 상호 및 공동-조절에 대해 반드시 의존적이다. 씨. 글루타미쿰에서 임의의 대사 경로의 활성을 변화시켜 (즉, 이러한 경로와 관련된, 본 발명의 임의의 단백질의 활성을 변화시켜서) 동시에 상기 미생물에서 정밀 화학물질의 합성 또는 분해에 직접적으로 관련될 수 있는 또다른 대사 경로의 활성 또는 조절을 변화시킬 수 있다.
씨. 글루타미쿰에서 정밀 화학물질의 수율을 증가시켜야 하는, RRP 단백질의 돌연변이유발에 대한 상술된 방법은 제한되지 않으며, 이들 돌연변이유발 방법의 변형도 당업자에게 매우 분명하다. 이들 방법을 사용하고, 본원에 개시된 메카니즘을 포함함으로써 본 발명의 핵산 및 단백질 분자를 사용하여 돌연변이 RRP 핵산 및 단백질 분자를 발현하는 씨. 글루타미쿰 또는 관련 박테리아 계통을 생산하여 원하는 화합물의 수율, 생산 및(또는) 생산 효율을 개선할 수 있다. 원하는 화합물은 생합성 경로의 최종 산물 및 자연 발생 대사 경로의 중간체 및 또한 씨. 글루타미쿰 대사에서 자연 발생되지 않지만 본 발명의 씨. 글루타미쿰 계통에 의해 생산되는 분자를 포함하는 씨. 글루타미쿰에 의해 생산된 임의의 산물일 수 있다.
또한, 본 발명은 하기 실시예에 의해 예시되나, 이에 한정되는 것으로 해석해서는 안된다. 본원에 인용된 모든 참고 문헌, 특허 출원, 특허, 공개된 특허 출원의 모든 내용은 참고로 본원에 인용된다.
실시예 1: 코리네박테리움 글루타미쿰 ATCC13032의 전체 게놈 DNA의 제조
BHI 배지 (디프코 (Difco) 제품) 중의 코리네박테리움 글루타미쿰 (ATCC 13032) 배양물을 30℃에서 격렬히 진탕시키면서 밤새 배양하였다. 원심분리하여 세포를 회수하여 상층액은 버리고, 세포를 완충액-I 5 mL (배양물 처음 부피의 5％에 해당함-언급한 모든 부피는 배양 부피 100 mL에 대해 계산한 값임) 중에 재현탁했다. 완충액-I의 조성은 다음과 같았다: 140.34 g/L 수크로스, 2.46 g/L MgS04 ×7 H2O, 10 mL/L KH2PO4 용액 (100 g/L, KOH를 사용하여 pH 6.7로 조정함), 50 mL/L M12 농축물 (10 g/L (NH4)2SO4, 1 g/L NaCl, 2 g/L MgSO4 ×7 H2O, 0.2 g/L CaCl2, 0.5 g/L 효모 추출물 (디프코 제품), 10 mL/L 미량 원소 혼합물 (200 mg/L FeSO4 ×H2O, 10 mg/L ZnSO4 ×7 H2O, 3 mg/L MnCl2 ×4 H2O, 30 mg/L H3BO3, 20 mg/L CoCl2 ×6 H2O, 1 mg/L NiCl2 ×6 H2O, 3 mg/L Na2MoO4 ×2 H2O), 500 mg/L 착화제 (EDTA 또는 시트르산), 100 mL/L 비타민 혼합물 (0.2 mg/L 바이오틴, 0.2 mg/L 엽산, 20 mg/L p-아미노 벤조산, 20 mg/L 리보플라빈, 40 mg/L Ca 판토테네이트, 140 mg/L 니코틴산, 40 mg/L 피리독살 히드로클로라이드, 200 mg/L 미오이노시톨). 상기 현탁액에 리소짐을 최종 농도 2.5 mg/mL로 첨가했다. 37℃에서 대략 4시간 동안 인큐베이션시킨 후, 세포벽을 파괴하고 원심분리하여 원형질체를 수거했다. 펠렛을 완충액-I 5 mL로 1회 세척하고, TE 완충액 (10 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA, pH 8) 5 mL로 1회 세척했다. 펠렛을 TE 완충액 4 mL 중에 재현탁하고, SDS 용액 (10％) 0.5 mL 및 NaCl 용액 (5 M) 0.5 mL을 첨가했다. 프로테이나제 K를 최종 농도 200 ㎍/mL로 첨가한 후, 상기 현탁액을 37℃에서 대략 18시간 동안 인큐베이션시켰다. 표준 방법에 따라 DNA를 페놀, 페놀/클로로포름/이소아밀 알콜 및 클로로포름/이소아밀 알콜로 추출하여 정제했다. 이어서, 1/50배 부피의 3 M 아세트산나트륨 및 2배 부피의 에탄올을 첨가하여 DNA를 침전시킨 후, -20℃에서 30분 동안 인큐베이션시키고, SS34 회전자 (소르발 (Sorvall) 제품)를 사용한 고속 원심분리기에서 12,000 rpm로 30분 동안 원심분리했다. DNA를 20 ㎍/mL RNaseA를 함유하는 TE 완충액 1 mL 중에 용해시키고, 4℃에서 3시간 이상 동안 TE 완충액 1000 mL 중에 투석했다. 투석 동안, 상기 완충액을 3회 교환하였다. 투석된 DNA 용액을 0.4 mL씩 분취하여, 2 M LiCl 0.4 mL 및 에탄올 0.8 mL을 첨가했다. -20℃에서 30분 동안 인큐베이션시킨 후, 원심분리 (13,000 rpm, 독일 하나우 헤래우스에 소재하는 바이오퓨지 프레스코 (Biofuge Fresco) 제품)하여 DNA를 수집했다. DNA 펠렛을 TE 완충액 중에 용해했다. 이 방법으로 제조된 DNA를 서던 블롯팅 또는 게놈 뱅크 제작 등의 모든 목적에 이용했다.
실시예 2: 대장균에서 코리네박테리움 글루타미쿰 (ATCC13032)의 게놈 뱅크 제작
실시예 1에 기재한 바와 같이 제조된 DNA를 사용하여, 공지되고 확립되어 있는 방법 (예를 들어 문헌 [Sambrook, J. et al. (1989) "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory Press] 또는 문헌 [Ausubel, F.M. et al. (1994) "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley ＆ Sons] 참조)에 따라 코스미드 및 플라스미드 뱅크를 제작했다.
임의의 플라스미드 또는 코스미드를 사용할 수 있었다. 특히, 플라스미드 pBR322 [Sutcliffe, J.G. (1979) Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 75:3737-3741]; pACYC177 [Change ＆ Cohen (1978) J. Bacteriol 134:1141-1156], pBS 계열의 플라스미드 (pBSSK+, pBSSK- 등; 미국 라졸라에 소재하는 스트라타진 (Stratagene) 제품) 또는 SuperCos I (미국 라졸라에 소재하는 스트라타진 제품) 또는 Lorist6 [Gibson, T.J., Rosenthal A. and Waterson, R.H. (1987) Gene 53:283-286] 등의 코스미드를 사용하는 것이 바람직했다.
실시예 3: DNA 서열분석 및 컴퓨터를 이용한 기능 분석
실시예 2에 기재한 바와 같은 게놈 뱅크를 사용하여, 표준 방법, 특히 ABI377 서열 분석기를 사용한 쇄 종결 방법 (예를 들어 문헌 [Fleischman, R.D. et al. (1995) "Whole-genome Random Sequencing and Assembly of Haemophilus Influenzae Rd.", Science, 269:496-512])에 따른 DNA 서열분석을 수행했다. 하기 뉴클레오티드 서열을 갖는 서열분석 프라이머를 사용했다: 5'-GGAAACAGTATGACCATG-3' 또는 5'-GTAAAACGACGGCCAGT-3'.
실시예 4: 생체내 돌연변이유발
코리네박테리움 글루타미쿰의 생체내 돌연변이유발은 유전 정보의 통합성을 유지할 수 없는 대장균 또는 다른 미생물 (예를 들면, 바실러스 종 또는 사카로마이세스 세레비지애 등의 효모)에 플라스미드 (또는 다른 벡터) DNA를 계대배양하여 수행할 수 있다. 전형적인 돌연변이유발 균주는 DNA 복구 시스템에 관한 유전자 (예를 들면, mutHLS, mutD, mutT 등; 비교하기 위해서는 문헌 [Rupp, W.D. (1996) DNA repair mechanisms, in Escherichia coli and Salmonella, pp. 2277-2294, ASM: Washington] 참조)에 돌연변이가 있다. 이러한 균주들은 당업자에게 공지되어 있다. 이러한 균주의 사용법은 예를 들어 문헌 [Greener, A. and Callahan, M. (1994) Strategies 7:32-34]에 예시되어 있다.
실시예 5: 대장균과 코리네박테리움 글루타미쿰 사이의 DNA 전달
여러 코리네박테리움 및 브레비박테리움 종은 자율적으로 복제되는 내인성 플라스미드 (예를 들면, pHM1519 또는 pBL1 등)를 함유하고 있다 (이에 관해 검토하기 위해서는 예를 들어 문헌 [Martin, J.F. et al. (1987) Biotechnology, 5:137-146] 참조). 대장균 및 코리네박테리움 글루타미쿰에 사용하기 위한 셔틀 벡터는 대장균의 경우에 사용하는 표준 벡터 (문헌 [Sambrook, J. et al. (1989), "Molecular Cloning: A Laboratory Manual", Cold Spring Harbor Laboratory Press] 또는 문헌 [Ausubel, F.M. et al. (1994) "Current Protocols in Molecular Biology", John Wiley ＆ Sons])에 코리네박테리움 글루타미쿰의 복제 기점 및 적당한 마커를 부가하여 사용함으로써 쉽게 제작될 수 있다. 이러한 복제 기점은 코리네박테리움 및 브레비박테리움 종에서 단리한 내인성 플라스미드로부터 얻는 것이 바람직하다. 이들 종에 특히 유용한 형질전환 마커는 카나마이신 내성 유전자 (예를 들면, Tn5 또는 Tn903 트란스포손에서 유래함) 또는 클로람페니콜 내성 유전자 [Winnacker, E.L. (1987) "From Genes to Clones-Introduction to Gene Technology", VCH, Weinheim]이다. 대장균 및 코리네박테리움 글루타미쿰에서 복제되고 유전자 과다발현을 비롯한 각종 목적에 사용할 수 있는 매우 다양한 셔틀 벡터의 제조법에 관한 문헌들이 많이 있다 (예를 들어 [Yoshihama, M. et al. (1985) J. Bacteriol. 162:591-597], [Martin J.F. et al. (1987) Biotechnology, 5:137-146] 및 [Eikmanns, B.J. et al. (1991) Gene, 102:93-98] 참조).
표준 방법을 이용하여, 관심 유전자를 상기 기재한 셔틀 벡터들 중 하나에 클로닝하고 이러한 하이브리드 벡터를 코리네박테리움 글루타미쿰 균주에 도입할 수 있다. 코리네박테리움 글루타미쿰은 원형질체 형질전환법 [Kastsumata, R. et al. (1984) J. Bacteriol. 159:306-311], 전기천공법 [Liebl, E. et al. (1989) FEMS Microbiol. Letters, 53:399-303]을 이용하고 특정 벡터가 사용되는 경우에는 접합법 (예를 들어 문헌 [Schaefer, A et al. (1990) J. Bacteriol. 172:1663-1666]에 기재된 바와 같음)도 이용하여 형질전환시킬 수 있다. 또한, 코리네박테리움 글루타미쿰으로부터 플라스미드 DNA를 제조 (당업계에 공지된 표준 방법을 사용함)하고, 이것으로 대장균을 형질전환시켜 코리네박테리움 글루타미쿰의 셔틀 벡터를 대장균에 전달할 수도 있다. 이러한 형질전환 단계는 표준 방법으로 수행할 수 있지만, NM522 [Gough ＆ Murray (1983) J. Mol. Biol. 166:1-19] 등과 같은 Mcr-결핍 대장균 균주를 사용하는 것이 유리하다.
실시예 6: 돌연변이된 단백질의 발현 측정
형질전환된 숙주 세포에서 돌연변이된 단백질의 활성 관찰은 상기 돌연변이 단백질이 야생형 단백질과 유사한 방식 및 유사한 양으로 발현된다는 사실을 바탕으로 한다. 돌연변이된 유전자의 전사량 (유전자 생성물의 번역에 이용가능한 mRNA 양에 관한 지표) 측정에 적합한 방법은 관심 유전자에 결합하도록 고안되어 검출가능한 표지 (통상적으로 방사성 표지 또는 화학발광 표지)가 부착된 프라이머를 사용하여 노던 블롯팅 (예를 들어 문헌 [Ausubel et al. (1988) Current Protocols in Molecular Biology, Wiley: New York] 참조)을 수행하는 것인데, 이는 유기체 배양물의 전체 RNA를 추출하고 겔상에서 분리하여 안정한 매트릭스에 옮긴 후에 상기 프로브와 인큐베이션시켜, 프로브의 결합 및 그 결합 활성이 상기 유전자에 대한 mRNA의 존재 여부 및 또한 그 존재량을 지시하는 방법이다. 이러한 정보는 돌연변이된 유전자의 전사 정도에 관한 지표가 된다. 예를 들어 문헌 [Bormann, E.R. et al. (1992) Mol. Microbiol. 6:317-326]에 기재된 것과 같이 당업계에 공지된 각종 방법들을 이용하여 코리네박테리움 글루타미쿰의 세포내 전체 RNA를 단리할 수 있다.
상기 mRNA로부터 번역된 단백질의 존재 여부 또는 그 상대량은 웨스턴 블롯팅과 같은 표준 기술을 사용하여 측정할 수 있다 (예를 들어 문헌 [Ausubel et al. (1988) Current Protocols in Molecular Biology, Wiley: New York] 참조). 이 방법에서는, 세포내 전체 단백질을 추출하여 겔 전기영동법으로 분리한 후에 이를 니트로셀룰로스 등과 같은 매트릭스에 옮겨서 관심 단백질에 특이적으로 결합하는 항체 등과 같은 프로브와 함께 인큐베이션시킨다. 통상적으로, 이 프로브에는 쉽게 검출될 수 있는 화학발광 표지 또는 비색 표지가 부착되어 있다. 표지의 존재 여부 및 그의 관찰된 양은 그 세포 내에서 원하는 돌연변이 단백질의 존재 여부 및 그 존재량을 지시한다.
실시예 7: 유전자 변형된 코리네박테리움 글루타미쿰의 성장 - 배지 및 배양 조건
유전자 변형된 코리네박테리움을 합성 또는 천연 성장 배지에서 배양한다. 코리네박테리움을 위한 여러 다양한 성장 배지는 당업계에 공지되어 있으며 쉽게 입수가능하다 (문헌 [Lieb et al. (1989) Appl. Microbiol. Biotechnol. 32:205-210], [von der Osten et al. (1998) Biotechnology Letters, 11:11-16], 독일 특허 제4,120,867호, [Liebl (1992) "The Genus Corynebacterium", in: The Procaryotes, Volume II, Balows, A. et al., Editors. Springer-Verlag]). 이들 배지는 1종 이상의 탄소 공급원, 질소 공급원, 무기염, 비타민 및 미량 원소로 구성된다. 바람직한 탄소 공급원은 단당류, 이당류 또는 다당류 등의 당이다. 매우 훌륭한 탄소 공급원의 예로는 글루코스, 프럭토스, 만노스, 갈락토스, 리보스, 소르보스, 리불로스, 락토스, 말토스, 수크로스, 라피노스, 녹말 및 셀룰로스 등이 있다. 또한, 당 정제시 생성되는 당밀 또는 기타 부산물 등과 같은 복합 화합물 등으로서 배지에 당을 공급할 수도 있다. 또한, 각종 탄소 공급원들의 혼합물을 첨가하는 것이 유리할 수도 있다. 다른 가능한 탄소 공급원은 메탄올, 에탄올, 아세트산 또는 락트산 등의 알콜 및 유기산이다. 질소 공급원은 통상적으로 유기 또는 무기 질소 화합물이거나 이러한 화합물을 함유하는 물질이다. 질소 공급원의 예로는 암모니아 기체 및 NH4Cl 또는 (NH4)2SO4, NH40H 등의 암모늄염, 질산염, 우레아, 아미노산 또는 옥수수 침지액, 대두 가루, 대두 단백질, 효모 추출물, 육류 추출물 등과 같은 복합 질소 공급원 등이 있다.
배지에 함유시킬 수 있는 무기 염 화합물로는 칼슘, 마그네슘, 나트륨, 코발트, 몰리브덴, 칼륨, 망간, 아연, 구리 및 철의 염산염, 인산염 또는 황산염 등이 있다. 킬레이팅제를 배지에 첨가하여 금속 이온을 용액 중에 유지할 수 있다. 특히 적합한 킬레이팅제로는 카테콜 또는 프로토카테쿠에이트 등과 같은 디히드록시페놀 또는 시트르산 등의 유기산 등이 있다. 또한, 배지에는 통상적으로 비타민 또는 성장 촉진제 등의 다른 성장 인자가 함유되어 있고, 이들의 예로는 바이오틴, 리보플라빈, 티아민, 엽산, 니코틴산, 판토테네이트 및 피리독신 등이 있다. 성장 인자 및 염은 흔히 효모 추출물, 당밀, 옥수수 침유 등과 같은 복합 배지 성분으로부터 생성된다. 배지의 정확한 조성은 특정 실험마다 크게 달라지고, 각 경우마다 따로 결정된다. 배지의 최적화에 관한 정보는 문헌 ["Applied Microbiol. Physiology, A Practical Approach (editors P.M. Rhodes, P.F. Stanbury, IRL Press (1997) pp.53-73, ISBN 0 19 963577 3)]에서 찾을 수 있다. 또한, 스탠다드 1 (Standard 1) (머크 (Merck) 제품) 또는 BHI (Brain Heart Infusion, 디프코 제품) 등과 같이 제조 회사가 시판하는 것을 구입할 수도 있다.
모든 배지 성분들을 열처리 (1.5 bar 및 121℃에서 20분) 또는 멸균 여과로 멸균시킨다. 이 성분들은 한꺼번에 멸균시킬 수도 있고 필요에 따라서는 따로 멸균시킬 수도 있다. 모든 배지 성분들은 배양 초기부터 함유시킬 수도 있고, 원한다면 연속적으로 또는 배치식으로 첨가할 수도 있다.
배양 조건은 각 실험마다 따로 정의된다. 온도는 15℃와 45℃ 사이의 범위이어야 하고, 실험하는 동안 일정하게 유지시키거나 변경시킬 수 있다. 배지의 pH는 5 내지 8.5의 범위, 바람직하게는 약 7.0 정도이어야 하며, 배지에 완충액을 첨가하여 유지시킬 수 있다. 이러한 목적으로 사용할 수 있는 완충액의 예로는 인산칼륨 완충액 등이 있다. MOPS, HEPES, ACES 등과 같은 합성 완충액을 대안적으로 사용하거나 동시에 사용할 수 있다. 또한, 배양하는 동안 NaOH 또는 NH4OH를 첨가하여 pH를 일정하게 유지시킬 수도 있다. 효모 추출물 등의 복합 배지 성분이 사용되는 경우, 많은 복합 화합물들은 완충 성능이 높기 때문에 추가 완충액에 대한 요구를 감소시킬 수 있다. 미생물 배양에 발효기를 사용하는 경우, pH는 암모니아 기체를 사용하여 조절할 수도 있다.
인큐베이션 기간은 통상적으로 수 시간 내지 수 일이다. 이 시간은 브로쓰에 축적되는 생성물의 양이 최대가 되도록 선택한다. 개시한 성장 실험을 다양한 크기의 미량역가 플레이트, 유리관, 유리 플라스크 또는 유리 또는 금속 발효기 등의 각종 용기에서 수행할 수 있다. 다수의 클론을 스크리닝하기 위해서는, 미생물을 배플이 있거나 없는 미량역가 플레이트, 유리관 또는 진탕 플라스크에서 배양해야 한다. 요구되는 성장 배지를 100 mL 진탕 플라스크에 10％ (부피 기준) 채워 사용하는 것이 바람직하다. 이 플라스크들은 100 내지 300 rpm 속력 범위의 회전 진탕기 상에서 진탕 (진폭 25 mm)되어야 한다. 대기를 습하게 유지함으로써 증발로 인한 손실량을 감소시키거나, 별법으로는 증발로 인한 손실량을 정확하게 보정해야 한다.
유전자 변형된 클론을 연구하는 경우, 변형되지 않은 대조 클론 또는 인서트가 없는 원래의 플라스미드를 함유하는 대조 클론도 분석해야 한다. CM 플레이트 (10 g/L 글루코스, 2.5 g/L NaCl, 2 g/L 우레아, 10 g/L 폴리펩톤, 5 g/L 효모 추출물, 5 g/L 육류 추출물, 22 g/L 아가, 2 M NaOH을 사용하여 pH 6.8로 조정) 등과 같은 아가 플레이트 상에서 30℃에서 인큐베이션하여 성장시킨 세포를 OD600이 0.5 내지 1.5가 되도록 배지에 접종한다. 배지 접종은 CM 플레이트로부터의 코리네박테리움 글루타미쿰 세포의 염수 용액을 도입하거나, 상기 박테리아의 예비배양액을 첨가하여 수행한다.
실시예 8: 돌연변이된 단백질의 기능에 관한 시험관내 분석
효소의 활성 및 반응 속도 (kinetics) 측정법은 당업계에 공지되어 있다. 특정하게 변형된 효소의 활성 측정 실험은 야생형 효소의 비활성에 맞추어야 하며, 당업자라면 이를 잘 수행할 수 있다. 효소에 관한 일반적인 개요 뿐만 아니라 효소의 구조, 반응 속도, 원리, 방법, 적용에 관한 구체적인 세부사항 및 많은 효소들의 활성 측정 방법의 예는 예를 들어 하기의 참고문헌에서 찾을 수 있다: [Dixon, M., and Webb, E.C.: (1979) Enzymes. Longmans: London; Fersht (1985) Enzyme Structure and Mechanism. Freeman, New York], [Walsh (1979) Enzymatic Reaction Mechanisms. Freeman: San Francisco], [Price, N.C., Stevens, L. (1982) Fundamentals of Enzymology. Oxford Univ. Press: Oxford], [Boyer, P.D., editors (1983) The Enzymes, 3rd edition. Academic Press: New York], [Bisswanger, H., (1994) Enzymkinetik, 2nd edition. VCH: Weinheim (ISBN 3527300325)], [Bergmeyer, H.U., Bergmeyer, J., Grassl, M., editors (1983-1986) Methods of Enzymatic Analysis, 3rd edition, Vol. I-XII, Verlag Chemie: Weinheim] 및 [Ullmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry (1987) Vol. A9, "Enzymes". VCH: Weinheim, pp. 352-363].
DNA에 결합하는 단백질의 활성은 DNA 밴드쉬프트 분석법 (겔 지연 분석법이라고 지칭하기도 함) 등과 같이 잘 확립되어 있는 여러 방법들을 사용하여 측정할 수 있다. 상기 단백질들이 다른 분자들의 발현에 미치는 영향은 리포터 유전자 분석법 (예를 들어 문헌 [Kolmar, H. et al. (1995) EMBO J. 14:3895-3904]과 그의 참고문헌에 기재된 바와 같음)을 사용하여 측정할 수 있다. β-갈락토시다제 등의 효소, 녹색 형광 단백질 및 여러가지 기타 효소가 사용되는 리포터 유전자 시험 시스템은 원핵 세포 및 진핵 세포 모두에의 적용에 대해 공지되어 있으며 잘 확립되어 있다.
막 수송 단백질의 활성은 문헌 [Gennis, R.B. (1989) "Pores, Channels and Transporters", in Biomembranes, Molecular Structure and Function, Springer: Heidelberg, pp. 85-137, 199-234 및 270-322]에 기재된 기술에 따라 측정할 수 있다.
실시예 9: 돌연변이된 단백질이 관심 생성물의 생산에 미치는 영향의 분석
코리네박테리움 글루타미쿰에서의 유전자 변형이 관심 화합물 (예컨대 아미노산)의 생산에 미치는 영향은 변형된 미생물을 적합한 조건 (예를 들어 상기 기재한 조건)하에서 성장시키고, 관심 생성물 (즉, 아미노산)의 생산 증가에 관여한 배지 성분 및(또는) 세포내 성분을 시험하여 결정할 수 있다. 이러한 분석 기술은 당업자에게 익히 공지되어 있으며, 분광분석법, 박층 크로마토그래피법, 각종 유형의 착색법, 효소적 및 미생물학적 방법 및 고성능 액체 크로마토그래피법 등과 같은 분석용 크로마토그래피법 등이 있다 (예를 들어 문헌 ([Ullman, Encyclopedia of Industrial Chemistry, Vol. A2, pp. 89-90 및 pp. 443-613, VCH: Weinheim (1985)], [Fallon, A. et al., (1987) "Applications of HPLC in Biochemistry" in: Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Vol. 17], [Rehm et al. (1993) Biotechnology, Vol. 3, Chapter III: "Product recovery and purification", pp. 469-714, VCH: Weinheim], [Belter, P.A. et al. (1988) Bioseparations: downstream processing for biotechnology, John Wiley and Sons], [Kennedy, J.F. and Cabral, J.M.S. (1992) Recovery processes for biological materials, John Wiley and Sons], [Shaeiwitz, J.A. and Henry, J.D. (1988) Biochemical separations, in Ulmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry, Vol. B3, Chapter 11, pp. 1-27, VCH: Weinheim] 및 [Dechow, F.J. (1989) Separation and purification techniques in biotechnology, Noyes Publications]) 참조).
최종 발효 생성물의 측정 뿐만 아니라, 중간체 및 부산물 등과 같이 관심 화합물의 생산에 이용된 대사 경로 중의 다른 성분들을 분석함으로써 전반적인 화합물 생산 효율을 측정할 수도 있다. 분석 방법으로는 배지 내의 영양분 (예컨대 당, 탄화수소, 질소 공급원, 인산염 및 기타 이온) 함량 측정, 바이오매스의 조성 및 성장 측정, 생합성 경로의 공통 대사물질의 생산 분석 및 발효 동안에 생성된 기체의 측정 등이 있다. 이러한 측정을 위한 표준 방법은 문헌 [Applied Microbial Physiology, A Practical Approach, P.M.Rhodes and P.F.Stanbury, eds., IRL Press, pp. 103-129, 131-163 및 165-192 (ISBN:0199635773)과 그의 참고문헌]에 기재되어 있다.
실시예 10: 코리네박테리움 글루타미쿰 배양물로부터의 관심 생성물의 정제
당업계에 공지된 여러가지 방법을 사용하여, 코리네박테리움 글루타미쿰 세포 또는 상기 기재한 배양물의 상층액으로부터 관심 생성물을 수득할 수 있다. 세포가 관심 생성물을 분비하지 않는 경우에는 배양물을 저속 원심분리하여 세포를 수거하고 기계적인 힘이나 초음파 등과 같은 표준 기술로 세포를 용균시킬 수 있다. 원심분리로 세포 잔해를 제거하여 가용성 단백질을 함유하는 상층액 분획물을 수득하고, 이를 사용하여 관심 화합물을 추가로 정제한다. 코리네박테리움 글루타미쿰 세포가 생성물을 분비하는 경우에는 배양물을 저속 원심분리하여 세포를 제거하고, 수득한 상층액 분획물을 추가로 정제한다.
상기 두 가지 정제 방법 모두의 경우에서 수득한 상층액 분획물을 적합한 수지를 사용한 크로마토그래피에 적용하여 관심 분자는 크로마토그래피 수지 상에 남지만 샘플 중의 많은 오염물질들은 남지 않게 하거나, 오염물질들은 수지에 남지만 원하는 분자는 남지 않게 한다. 필요에 따라서는, 동일하거나 상이한 크로마토그래피 수지를 사용하여 이러한 크로마토그래피 단계를 반복할 수 있다. 당업자라면, 적합한 크로마토그래피 수지를 선택하고 정제할 특정 분자에 대해 가장 효과적으로 이를 적용하는 것에 숙달되어 있을 것이다. 정제된 생성물을 여과 또는 한외여과사켜 농축시키고, 생성물의 안정성이 최대가 되는 온도에 저장할 수 있다.
당업계에는 상기 기재한 정제법 및 예를 들어 문헌 [Bailey, J.E. ＆ Ollis, D.F. Biochemical Engineering Fundamentals, McGraw-Hill: New York (1986)]에 기재된 정제법 등을 포함하나 이에 제한되지 않는 여러가지 정제법들이 공지되어 있다.
단리된 화합물의 확인 및 순도는 당업계의 기술로 측정할 수 있다. 이러한 기술로는 고성능 액체 크로마토그래피법 (HPLC), 분광분석법, 착색법, 박층 크로마토그래피법, NIRS법, 효소 분석법 또는 미생물학적 분석법 등이 있다. 이러한 분석 방법은 하기 문헌에서 고찰된다: [Patek et al. (1994) Appl. Environ. Microbiol. 60:133-140], [Malakhova et al. (1996) Biotekhnologiya 11:27-32], [Schmidt et al. (1998) Bioprocess Engineer. 19:67-70], [Ulmann's Encyclopedia of Industrial Chemistry, (1996) Vol. A27, VCH: Weinheim, pp. 89-90, pp. 521-540, pp. 540-547, pp. 559-566, pp. 575-581 및 pp. 581-587], [Michal, G. (1999) Biochemical Pathways: An Atlas of Biochemistry and Molecular Biology, John Wiley and Sons] 및 [Fallon, A. et al. (1987) Applications of HPLC in Biochemistry in: Laboratory Techniques in Biochemistry and Molecular Biology, Vol. 17].
등가물
당업자라면, 단순한 통상의 방법을 이용하여 본 발명의 특정 실시양태의 수많은 등가물을 알아내거나 확인할 수 있다. 이러한 등가물은 하기한 청구의 범위에 포함된다.
표 1의 정보는 다음과 같이 이해되어야 한다:
컬럼 1에서, "DNA 서열 번호"의 해당 번호는 첨부된 서열 목록에서의 서열 번호 각각을 지칭하는 것이다. 따라서, 컬럼 "DNA 서열 번호"의 "5"는 서열 5를 지칭한다.
컬럼 2에서, "아미노산 서열 번호"의 해당 번호는 첨부된 서열 목록에서의 서열 번호 각각을 지칭하는 것이다. 따라서, 컬럼 "아미노산 서열 번호"의 "6"은 서열 6을 지칭한다.
컬럼 3에서, "확인"은 각 서열에 대한 명확한 내부 명칭을 기재한 것이다.
컬럼 4에서, "아미노산 위치"의 해당 번호는 각 경우에서 동일 열에 있는 "아미노산 서열 번호"에 기재된 폴리펩티드 서열에서의 아미노산 위치를 지칭한다. 따라서, 컬럼 "아미노산 위치"의 "26"은 해당 폴리펩티드 서열의 아미노산 위치 26이다. 위치 번호는 N 말단을 +1로 하여 출발한다.
컬럼 5에서, "아미노산 야생형"의 해당 문자는 각 경우의 컬럼 4에 표시한 야생형 서열에서 해당 위치에 존재하는 아미노산을 지칭하며, 1문자 코드로 나타내었다.
컬럼 6에서, "아미노산 돌연변이체"의 해당 문자는 각 경우의 컬럼 4에 표시한 돌연변이체 서열에서 해당 위치에 존재하는 아미노산을 지칭하며, 1문자 코드로 나타내었다.
컬럼 7에서, "기능"은 해당 폴리펩티드 서열의 생리적 기능을 기재한 것이다.
단백질원성 아미노산의 1문자 코드는 다음과 같다:
A 알라닌
C 시스테인
D 아스파르트산
E 글루탐산
F 페닐알라닌
G 글리신
H 히스티딘
I 이소루이신
K 리신
L 루이신
M 메티오닌
N 아스파라긴
P 프롤린
Q 글루타민
R 아르기닌
S 세린
T 트레오닌
V 발린
W 트립토판
Y 티로신
SEQUENCE LISTING <110> BASF Aktiengesellschaft <120> Genes coding for DNA replication and pathogenesis proteins <130> O.Z. 0050/52977 <160> 96 <210> 1 <211> 2326 <212> DNA <213> Corynebacterium glutamicum <220> <221> CDS <222> (101)..(2296) <223> RXA00050 <400> 1 agcaatgtcc cattttccct gctcacctgt atgggcaccc gcggcggaag tggaattgca 60 tatggagttt tgatgatatt tagcgtaact taaaggaaca atg agt aat acc gag 115 Met Ser Asn Thr Glu 1 5 aac gtc aac ggc gac gta gaa cag ccg aat aac gtc att tcg tcg gaa 163 Asn Val Asn Gly Asp Val Glu Gln Pro Asn Asn Val Ile Ser Ser Glu 10 15 20 tct cag gaa acc ccg cag ggt gac tca gca tca gct gac ttc gct ctc 211 Ser Gln Glu Thr Pro Gln Gly Asp Ser Ala Ser Ala Asp Phe Ala Leu 25 30 35 gaa acc cca acc aac act gtt gaa gat gca cca gca tct gag ggt agc 259 Glu Thr Pro Thr Asn Thr Val Glu Asp Ala Pro Ala Ser Glu Gly Ser 40 45 50 gaa gag atc acc agg gtt gcg gat act tct gag gac gcc gac tct gca 307 Glu Glu Ile Thr Arg Val Ala Asp Thr Ser Glu Asp Ala Asp Ser Ala 55 60 65 gat gca gac aac gcg agc aat gta atc aat gag aat gag gac tcc tcg 355 Asp Ala Asp Asn Ala Ser Asn Val Ile Asn Glu Asn Glu Asp Ser Ser 70 75 80 85 gaa ggt gct aac cag cct tca aac gag tca tcc tct acg gaa gcc aaa 403 Glu Gly Ala Asn Gln Pro Ser Asn Glu Ser Ser Ser Thr Glu Ala Lys 90 95 100 tcc ggc ttc gat gca ctc gga ctg cca gag cgt gtt ctt gac gct gtg 451 Ser Gly Phe Asp Ala Leu Gly Leu Pro Glu Arg Val Leu Asp Ala Val 105 110 115 cgc aag gtg ggt tac gaa act cct tcc cca att cag gca caa acc atc 499 Arg Lys Val Gly Tyr Glu Thr Pro Ser Pro Ile Gln Ala Gln Thr Ile 120 125 130 cca atc ctc atg gag ggc cag gat gtt gtt ggt cta gca cag acc ggt 547 Pro Ile Leu Met Glu Gly Gln Asp Val Val Gly Leu Ala Gln Thr Gly 135 140 145 acc ggt aag act gca gct ttc gcg ctg cca atc ctt gcc cgt att gac 595 Thr Gly Lys Thr Ala Ala Phe Ala Leu Pro Ile Leu Ala Arg Ile Asp 150 155 160 165 aag tcc gtg cgc agc cca cag gca ctt gtg ctt gcc cct acc cgt gag 643 Lys Ser Val Arg Ser Pro Gln Ala Leu Val Leu Ala Pro Thr Arg Glu 170 175 180 ctg gca ctt cag gtt gct gac tcc ttc caa tcc ttc gct gac cac gtc 691 Leu Ala Leu Gln Val Ala Asp Ser Phe Gln Ser Phe Ala Asp His Val 185 190 195 ggt ggc ctg aac gtt ctg cca atc tat ggt gga cag gct tac ggc att 739 Gly Gly Leu Asn Val Leu Pro Ile Tyr Gly Gly Gln Ala Tyr Gly Ile 200 205 210 cag ctc tct ggc ctg cgt cgt ggc gct cac atc gtc gtg ggt acc cca 787 Gln Leu Ser Gly Leu Arg Arg Gly Ala His Ile Val Val Gly Thr Pro 215 220 225 ggc cga atc atc gat cac ctc gaa aag ggc tcc ctg gat atc tcc gga 835 Gly Arg Ile Ile Asp His Leu Glu Lys Gly Ser Leu Asp Ile Ser Gly 230 235 240 245 ctg cgc ttc ctc gtg ctc gat gaa gca gac gag atg ctg aac atg ggc 883 Leu Arg Phe Leu Val Leu Asp Glu Ala Asp Glu Met Leu Asn Met Gly 250 255 260 ttc cag gaa gat gtc gag cgc atc ctc gag gac acc cca gac gag aag 931 Phe Gln Glu Asp Val Glu Arg Ile Leu Glu Asp Thr Pro Asp Glu Lys 265 270 275 cag gtt gca cta ttc tcc gca acg atg cca aac ggc att cgt cgc ctg 979 Gln Val Ala Leu Phe Ser Ala Thr Met Pro Asn Gly Ile Arg Arg Leu 280 285 290 tcc aag cag tac ctg aac aac cct gct gaa atc acc gtt aag tcc gag 1027 Ser Lys Gln Tyr Leu Asn Asn Pro Ala Glu Ile Thr Val Lys Ser Glu 295 300 305 acc agg act aac acc aac atc acc cag cgc ttc ctc aac gtt gca cac 1075 Thr Arg Thr Asn Thr Asn Ile Thr Gln Arg Phe Leu Asn Val Ala His 310 315 320 325 cgc aac aag atg gat gca ctg acc cgt att ctc gag gtc acc gag ttt 1123 Arg Asn Lys Met Asp Ala Leu Thr Arg Ile Leu Glu Val Thr Glu Phe 330 335 340 gaa gca atg atc atg ttc gtg cgc acc aag cac gaa act gaa gaa gtt 1171 Glu Ala Met Ile Met Phe Val Arg Thr Lys His Glu Thr Glu Glu Val 345 350 355 gct gaa aag ctc cgt gca cgc gga ttc tcc gca gca gcc atc aac ggc 1219 Ala Glu Lys Leu Arg Ala Arg Gly Phe Ser Ala Ala Ala Ile Asn Gly 360 365 370 gac att gct cag gca cag cgt gag cgc acc gtc gac cag ctg aag gac 1267 Asp Ile Ala Gln Ala Gln Arg Glu Arg Thr Val Asp Gln Leu Lys Asp 375 380 385 ggc cgc ctg gac atc ctc gtt gca acc gac gtt gca gcc cgt ggt ctt 1315 Gly Arg Leu Asp Ile Leu Val Ala Thr Asp Val Ala Ala Arg Gly Leu 390 395 400 405 gac gtt gag cgc atc tcc cac gtg ctt aac ttc gac att cca aac gac 1363 Asp Val Glu Arg Ile Ser His Val Leu Asn Phe Asp Ile Pro Asn Asp 410 415 420 acc gag tcc tac gtt cac cgc atc ggc cgc acc ggc cgt gca gga cgt 1411 Thr Glu Ser Tyr Val His Arg Ile Gly Arg Thr Gly Arg Ala Gly Arg 425 430 435 acc ggc gag gca atc ctg ttc gtg acc cca cgt gag cgt cgt atg ctt 1459 Thr Gly Glu Ala Ile Leu Phe Val Thr Pro Arg Glu Arg Arg Met Leu 440 445 450 cgc tcc atc gag cgc gca acc aac gca cca ctg cac gaa atg gaa ctg 1507 Arg Ser Ile Glu Arg Ala Thr Asn Ala Pro Leu His Glu Met Glu Leu 455 460 465 cca acc gtc gat cag gtc aac gac ttc cgc aag gtc aag ttc gct gac 1555 Pro Thr Val Asp Gln Val Asn Asp Phe Arg Lys Val Lys Phe Ala Asp 470 475 480 485 tcc atc acc aag tcc ctc gag gac aag cag atg gac ctg ttc cgc acc 1603 Ser Ile Thr Lys Ser Leu Glu Asp Lys Gln Met Asp Leu Phe Arg Thr 490 495 500 ctg gtc aag gaa tac tcc cag gcc aac gac gtt cct cta gag gac atc 1651 Leu Val Lys Glu Tyr Ser Gln Ala Asn Asp Val Pro Leu Glu Asp Ile 505 510 515 gca gcg gca ctg gca acc cag gca cag tcc ggc gac ttc ctg ctc aag 1699 Ala Ala Ala Leu Ala Thr Gln Ala Gln Ser Gly Asp Phe Leu Leu Lys 520 525 530 gag ctc cca cca gag cgc cgt gag cgc aac gac cgc cgt cgt gac cgt 1747 Glu Leu Pro Pro Glu Arg Arg Glu Arg Asn Asp Arg Arg Arg Asp Arg 535 540 545 gac ttc gac gac cgt ggt gga cgt gga cgc gac cgt gac cgt ggc gac 1795 Asp Phe Asp Asp Arg Gly Gly Arg Gly Arg Asp Arg Asp Arg Gly Asp 550 555 560 565 cgc gga gat cgt ggc tca cgc ttc gac cgc gac gac gag aac ctg gca 1843 Arg Gly Asp Arg Gly Ser Arg Phe Asp Arg Asp Asp Glu Asn Leu Ala 570 575 580 acc tac cgc ctc gca gtg ggc aag cgc cag cac atc cgc cca ggc gca 1891 Thr Tyr Arg Leu Ala Val Gly Lys Arg Gln His Ile Arg Pro Gly Ala 585 590 595 atc gtt ggt gca ctt gcc aac gaa ggt ggc ctg aac tcc aag gac ttc 1939 Ile Val Gly Ala Leu Ala Asn Glu Gly Gly Leu Asn Ser Lys Asp Phe 600 605 610 ggc cgc atc acc atc gca gcc gac cac acc ctg gtt gaa ctg cca aag 1987 Gly Arg Ile Thr Ile Ala Ala Asp His Thr Leu Val Glu Leu Pro Lys 615 620 625 gat ctc cca cag agc gtt ctt gac aac ctg cgc gac acc cgc atc tcc 2035 Asp Leu Pro Gln Ser Val Leu Asp Asn Leu Arg Asp Thr Arg Ile Ser 630 635 640 645 ggc cag ctc atc aac ata gaa cgc gac tcc ggt gga cgc cca cca cgc 2083 Gly Gln Leu Ile Asn Ile Glu Arg Asp Ser Gly Gly Arg Pro Pro Arg 650 655 660 cgc ttc gag cgc gat gac cgt ggc gga cgc ggc gga ttc cgc ggc gac 2131 Arg Phe Glu Arg Asp Asp Arg Gly Gly Arg Gly Gly Phe Arg Gly Asp 665 670 675 cgt gat gac cgc ggt gga cgt gga cgt gac cgt gac gat cgt gga agc 2179 Arg Asp Asp Arg Gly Gly Arg Gly Arg Asp Arg Asp Asp Arg Gly Ser 680 685 690 cgt gga ggt ttc cgc ggt gga cgt gac cgt gat gat cgt ggc gga cgc 2227 Arg Gly Gly Phe Arg Gly Gly Arg Asp Arg Asp Asp Arg Gly Gly Arg 695 700 705 ggt gga ttc cgc gga cgc gac gac cgc gga gac cgt ggt ggc cgt ggc 2275 Gly Gly Phe Arg Gly Arg Asp Asp Arg Gly Asp Arg Gly Gly Arg Gly 710 715 720 725 ggt tac cgt ggc gga cgc gac taagagttcg 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Asp Ser Phe Gln Ser 180 185 190 Phe Ala Asp His Val Gly Gly Leu Asn Val Leu Pro Ile Tyr Gly Gly 195 200 205 Gln Ala Tyr Gly Ile Gln Leu Ser Gly Leu Arg Arg Gly Ala His Ile 210 215 220 Val Val Gly Thr Pro Gly Arg Ile Ile Asp His Leu Glu Lys Gly Ser 225 230 235 240 Leu Asp Ile Ser Gly Leu Arg Phe Leu Val Leu Asp Glu Ala Asp Glu 245 250 255 Met Leu Asn Met Gly Phe Gln Glu Asp Val Glu Arg Ile Leu Glu Asp 260 265 270 Thr Pro Asp Glu Lys Gln Val Ala Leu Phe Ser Ala Thr Met Pro Asn 275 280 285 Gly Ile Arg Arg Leu Ser Lys Gln Tyr Leu Asn Asn Pro Ala Glu Ile 290 295 300 Thr Val Lys Ser Glu Thr Arg Thr Asn Thr Asn Ile Thr Gln Arg Phe 305 310 315 320 Leu Asn Val Ala His Arg Asn Lys Met Asp Ala Leu Thr Arg Ile Leu 325 330 335 Glu Val Thr Glu Phe Glu Ala Met Ile Met Phe Val Arg Thr Lys His 340 345 350 Glu Thr Glu Glu Val Ala Glu Lys Leu Arg Ala Arg Gly Phe Ser Ala 355 360 365 Ala Ala Ile Asn Gly Asp Ile Ala Gln Ala Gln Arg Glu Arg Thr Val 370 375 380 Asp Gln Leu Lys Asp Gly Arg Leu Asp Ile Leu Val Ala Thr Asp Val 385 390 395 400 Ala Ala Arg Gly Leu Asp Val Glu Arg Ile Ser His Val Leu Asn Phe 405 410 415 Asp Ile Pro Asn Asp Thr Glu Ser Tyr Val His Arg Ile Gly Arg Thr 420 425 430 Gly Arg Ala Gly Arg Thr Gly Glu Ala Ile Leu Phe Val Thr Pro Arg 435 440 445 Glu Arg Arg Met Leu Arg Ser Ile Glu Arg Ala Thr Asn Ala Pro Leu 450 455 460 His Glu Met Glu Leu Pro Thr Val Asp Gln Val Asn Asp Phe Arg Lys 465 470 475 480 Val Lys Phe Ala Asp Ser Ile Thr Lys Ser Leu Glu Asp Lys Gln Met 485 490 495 Asp Leu Phe Arg Thr Leu Val Lys Glu Tyr Ser Gln Ala Asn Asp Val 500 505 510 Pro Leu Glu Asp Ile Ala Ala Ala Leu Ala Thr Gln Ala Gln Ser Gly 515 520 525 Asp Phe Leu Leu Lys Glu Leu Pro Pro Glu Arg Arg Glu Arg Asn Asp 530 535 540 Arg Arg Arg Asp Arg Asp Phe Asp Asp Arg Gly Gly Arg Gly Arg Asp 545 550 555 560 Arg Asp Arg Gly Asp Arg Gly Asp Arg Gly Ser Arg Phe Asp Arg Asp 565 570 575 Asp Glu Asn Leu Ala Thr Tyr Arg Leu Ala Val Gly Lys Arg Gln His 580 585 590 Ile Arg Pro Gly Ala Ile Val Gly Ala Leu Ala Asn Glu Gly Gly Leu 595 600 605 Asn Ser Lys Asp Phe Gly Arg Ile Thr Ile Ala Ala Asp His Thr Leu 610 615 620 Val Glu Leu Pro Lys Asp Leu Pro Gln Ser Val Leu Asp Asn Leu Arg 625 630 635 640 Asp Thr Arg Ile Ser Gly Gln Leu Ile Asn Ile Glu Arg Asp Ser Gly 645 650 655 Gly Arg Pro Pro Arg Arg Phe Glu Arg Asp Asp Arg Gly Gly Arg Gly 660 665 670 Gly Phe Arg Gly Asp Arg Asp Asp Arg Gly Gly Arg Gly Arg Asp Arg 675 680 685 Asp Asp Arg Gly Ser Arg Gly Gly Phe Arg Gly Gly Arg Asp Arg Asp 690 695 700 Asp Arg Gly Gly Arg Gly Gly Phe Arg Gly Arg Asp Asp Arg Gly Asp 705 710 715 720 Arg Gly Gly Arg Gly Gly Tyr Arg Gly Gly Arg Asp 725 730 <210> 3 <211> 2845 <212> DNA <213> Corynebacterium glutamicum <220> <221> CDS <222> (101)..(2815) <223> RXA00061 <400> 3 aatcaattgc agaactaacc cggttgtttc cgagccagtc tgaatgactg aaagcaatat 60 tagaccatca atgattagga atggaaatta ggggtctggt ttg ggt gaa tgt gtc 115 Leu Gly Glu Cys Val 1 5 gct aat ttt tcc act cgc cta cac tcg gga ggc gtg act gag aag act 163 Ala Asn Phe Ser Thr Arg 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Asp Asn Leu Leu Asp His Ala Asp Glu Ile Lys Gly 230 235 240 245 aag gtt ggc gcc agc ctg cgt gag cgc att gag cag gtc cgg atg aac 883 Lys Val Gly Ala Ser Leu Arg Glu Arg Ile Glu Gln Val Arg Met Asn 250 255 260 cgc aag ctc acg gag atg gtg aag gat ctg gag ctg ccg ctt ggt ccg 931 Arg Lys Leu Thr Glu Met Val Lys Asp Leu Glu Leu Pro Leu Gly Pro 265 270 275 gac gat ttt gag atg aag cct gtg cag gtt gcg gag gtt gcg gcg aag 979 Asp Asp Phe Glu Met Lys Pro Val Gln Val Ala Glu Val Ala Ala Lys 280 285 290 ttt gac gat ctg gag ttt ggt acc aat ttg cgt gag cgg gtg ctg gcg 1027 Phe Asp Asp Leu Glu Phe Gly Thr Asn Leu Arg Glu Arg Val Leu Ala 295 300 305 gtg gtg aag gcc gag ggt tcc gct gcc ccc gtg gag gaa gtg gaa gcg 1075 Val Val Lys Ala Glu Gly Ser Ala Ala Pro Val Glu Glu Val Glu Ala 310 315 320 325 gaa cag gtt gtc gtc gat acg caa tct ttg gcg caa tgg ctg cct gct 1123 Glu Gln Val Val Val Asp Thr Gln Ser Leu Ala Gln Trp Leu Pro Ala 330 335 340 agg gct ggc cag gcg ctt gct tta gcg ctg gct gga gtg gct aaa cct 1171 Arg Ala Gly Gln Ala Leu Ala Leu Ala Leu Ala Gly Val Ala Lys Pro 345 350 355 gct gct ggc gac acg tat gcg cta gcg att gcg gat acc aag cgc cat 1219 Ala Ala Gly Asp Thr Tyr Ala Leu Ala Ile Ala Asp Thr Lys Arg His 360 365 370 gcg gtg ttg gtt gat gtg gct gat att tca gcg gag gat gaa aag gcg 1267 Ala Val Leu Val Asp Val Ala Asp Ile Ser Ala Glu Asp Glu Lys Ala 375 380 385 ctg gcc acg tgg ttg gcg tcg gaa gat cca aag atg ctg cac ggc gct 1315 Leu Ala Thr Trp Leu Ala Ser Glu Asp Pro Lys Met Leu His Gly Ala 390 395 400 405 aag gcc gcc tat cat atg ctc gct ggg cgc ggt ttt gag ctg cac ggc 1363 Lys Ala Ala Tyr His Met Leu Ala Gly Arg Gly Phe Glu Leu His Gly 410 415 420 gtg gtg cat gac acg gcg atc gcg gca tac ttg ctg cgt ccg ggc caa 1411 Val Val His Asp Thr Ala Ile Ala Ala Tyr Leu Leu Arg Pro Gly Gln 425 430 435 cgc acc tat gag ctt gcc gac gtc tac cag cgg cat ctt caa cga cag 1459 Arg Thr Tyr Glu Leu Ala Asp Val Tyr Gln Arg His Leu Gln Arg Gln 440 445 450 ttg tct aca aac gac aat ggc ggc cag ctc acg ctg ctc gac gca gct 1507 Leu Ser Thr Asn Asp Asn Gly Gly Gln Leu Thr Leu Leu Asp Ala Ala 455 460 465 gat gac caa tcg ctt gtt gat gat gtc att gca atc ctt gag ctg tct 1555 Asp Asp Gln Ser Leu Val Asp Asp Val Ile Ala Ile Leu Glu Leu Ser 470 475 480 485 gaa gaa ttg acc aaa cag ctt cag gag att caa gct ttt gag ctt tac 1603 Glu Glu Leu Thr Lys Gln Leu Gln Glu Ile Gln Ala Phe Glu Leu Tyr 490 495 500 cat gac ctg gaa att ccg ctg tcg gga att ctg gcg cgc atg gag gcc 1651 His Asp Leu Glu Ile Pro Leu Ser Gly Ile Leu Ala Arg Met Glu Ala 505 510 515 atc ggt atc gct gtt gat gtt gcc act ttg gaa gag cag ttg aag act 1699 Ile Gly Ile Ala Val Asp Val Ala Thr Leu Glu Glu Gln Leu Lys Thr 520 525 530 ttc att ggt cag gtt gct cag gaa gag gaa gca gct cgc gag ctc gct 1747 Phe Ile Gly Gln Val Ala Gln Glu Glu Glu Ala Ala Arg Glu Leu Ala 535 540 545 gag gat cca acc ctg aat ctc tcg agc ccg aag cag ctg caa gtg gtg 1795 Glu Asp Pro Thr Leu Asn Leu Ser Ser Pro Lys Gln Leu Gln Val Val 550 555 560 565 ctt ttt gag acg ttc 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ctg act gcc gac tat tcg cag att gaa atg cgc gtg atg gct cac ctt 2179 Leu Thr Ala Asp Tyr Ser Gln Ile Glu Met Arg Val Met Ala His Leu 680 685 690 tcc cag gac cca ggc ttg att gag gcg tac cgc gaa ggc gaa gac ctg 2227 Ser Gln Asp Pro Gly Leu Ile Glu Ala Tyr Arg Glu Gly Glu Asp Leu 695 700 705 cac aat tac gtg ggt tcc aag gtg ttt aat gtg ccc atc gat ggc gtg 2275 His Asn Tyr Val Gly Ser Lys Val Phe Asn Val Pro Ile Asp Gly Val 710 715 720 725 acc cct gag ctg cgt cgc cag gtc aag gcc atg tct tac ggt ctg gtg 2323 Thr Pro Glu Leu Arg Arg Gln Val Lys Ala Met Ser Tyr Gly Leu Val 730 735 740 tac ggc ttg tcc gcg ttt ggt ttg tct cag cag ctg agc att cct gct 2371 Tyr Gly Leu Ser Ala Phe Gly Leu Ser Gln Gln Leu Ser Ile Pro Ala 745 750 755 ggc gaa gcg aag cag atc atg gag tcc tac ttc gag cgc ttc ggc gga 2419 Gly Glu Ala Lys Gln Ile Met Glu Ser Tyr Phe Glu Arg Phe Gly Gly 760 765 770 gta cag cgc tac ctc cgg gag atc gtg gag gag gct cga aaa gct ggc 2467 Val Gln Arg Tyr Leu Arg Glu Ile Val Glu Glu Ala Arg Lys Ala Gly 775 780 785 tac acg gaa acg ctg ttt ggg cgt cgt cgc tac ctg ccg gaa ctg acc 2515 Tyr Thr Glu Thr Leu Phe Gly Arg Arg Arg Tyr Leu Pro Glu Leu Thr 790 795 800 805 tcg gat aac cgt gtc gct cgt gaa aac gct gaa cgt gcc gca ctg aac 2563 Ser Asp Asn Arg Val Ala Arg Glu Asn Ala Glu Arg Ala Ala Leu Asn 810 815 820 gcc ccg att cag gga act gcc gca gac atc atc aag gtg gcc atg atc 2611 Ala Pro Ile Gln Gly Thr Ala Ala Asp Ile Ile Lys Val Ala Met Ile 825 830 835 cgg gtg gac cgt tca ctc aag gaa gct gcc gtg aaa tct cgc gtg ctg 2659 Arg Val Asp Arg Ser Leu Lys Glu Ala Ala Val Lys Ser Arg Val Leu 840 845 850 ctt cag gtg cat gat gaa ttg gtc gtg gaa gta gcg gcc ggt gag ttg 2707 Leu Gln Val His Asp Glu Leu Val Val Glu Val Ala Ala Gly Glu Leu 855 860 865 gaa caa gtc cgt gag att ctg gaa cgc gaa atg gat aac gcc atc aag 2755 Glu Gln Val Arg Glu Ile Leu Glu Arg Glu Met Asp Asn Ala Ile Lys 870 875 880 885 ctg tcc gtt cct ttg gaa gtt tca gct ggt gat ggc gtt aac tgg gat 2803 Leu Ser Val Pro Leu Glu Val Ser 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Ala Gln Ile Glu Ala Ala Gln Glu Arg Leu Asp Glu Ile Ser Arg Ala 135 140 145 gcg tat cgc caa aac gga acc tcc aag ggg ctt tca ggc atc tcg ggc 595 Ala Tyr Arg Gln Asn Gly Thr Ser Lys Gly Leu Ser Gly Ile Ser Gly 150 155 160 165 aat gga aat tct gaa gat gcg cta gat cgt cag act tac ctg cga acc 643 Asn Gly Asn Ser Glu Asp Ala Leu Asp Arg Gln Thr Tyr Leu Arg Thr 170 175 180 agt gcg gaa aag cag cag gca gct gtt gaa gag ctt gat cgc ctc cgt 691 Ser Ala Glu Lys Gln Gln Ala Ala Val Glu Glu Leu Asp Arg Leu Arg 185 190 195 acg gaa aac gcc aac aag gaa tcg gtg ttg cgc cag gcc cgc atc gtt 739 Thr Glu Asn Ala Asn Lys Glu Ser Val Leu Arg Gln Ala Arg Ile Val 200 205 210 gct gag cag cgt gag gcg gaa gcc gtc gaa aag caa gtc cag acc gag 787 Ala Glu Gln Arg Glu Ala Glu Ala Val Glu Lys Gln Val Gln Thr Glu 215 220 225 gct gca att gcc gca aac agc gag cag ctc aat gtc ttg act aac aat 835 Ala Ala Ile Ala Ala Asn Ser Glu Gln Leu Asn Val Leu Thr Asn Asn 230 235 240 245 cgc agt acc ttg gtt gcc cag cgt gat ggg gct gag cgc aac ttg gcc 883 Arg Ser Thr Leu Val Ala Gln Arg Asp Gly Ala Glu Arg Asn Leu Ala 250 255 260 atc gct cgt gcg cag gcg gat aat ctg caa ggt cag cgt gct gag tac 931 Ile Ala Arg Ala Gln Ala Asp Asn Leu Gln Gly Gln Arg Ala Glu Tyr 265 270 275 gag gaa ttc cag cag gca gag cag gct cgc atc cag gcg gaa gcg gaa 979 Glu Glu Phe Gln Gln Ala Glu Gln Ala Arg Ile Gln Ala Glu Ala Glu 280 285 290 gct cag gct gct gcg gag gag aag cgt cgt gcc gat gag gct gct gca 1027 Ala Gln Ala Ala Ala Glu Glu Lys Arg Arg Ala Asp Glu Ala Ala Ala 295 300 305 cag gca gcc gct gaa gct caa gaa gct gcc cag caa gct cag gcg gcg 1075 Gln Ala Ala Ala Glu Ala Gln Glu Ala Ala Gln Gln Ala Gln Ala Ala 310 315 320 325 gag gaa gcc caa gcc gcg caa gca gct gag aca gca caa gcc caa gcc 1123 Glu Glu Ala Gln Ala Ala Gln Ala Ala Glu Thr Ala Gln Ala Gln Ala 330 335 340 gcg caa gct gcg gaa acc caa gct gca caa gcc gcg caa gct cag gca 1171 Ala Gln Ala Ala Glu Thr Gln Ala Ala Gln Ala Ala Gln Ala Gln Ala 345 350 355 gaa gcg aat gat cgt gcc gcc gcg caa cag cgt gct gca gag gct caa 1219 Glu Ala Asn Asp Arg Ala Ala Ala Gln Gln Arg Ala Ala Glu Ala Gln 360 365 370 gca gca gcg gaa cag gcg caa cgt gag gct gac gct cag gcg gcc aac 1267 Ala Ala Ala Glu Gln Ala Gln Arg Glu Ala Asp Ala Gln Ala Ala Asn 375 380 385 gat gcc caa gct cag gca ctg cgt gaa cag gcg ctc acc gca gcc tcc 1315 Asp Ala Gln Ala Gln Ala Leu Arg Glu Gln Ala Leu Thr Ala Ala Ser 390 395 400 405 atc gct gcg gct gct cta att gcg gcg agc cag tcc agc cat gcc act 1363 Ile Ala Ala Ala Ala Leu Ile Ala Ala Ser Gln Ser Ser His Ala Thr 410 415 420 act caa aat cct tac cca act gat gaa gac gcg gat ccg acc gat att 1411 Thr Gln Asn Pro Tyr Pro Thr Asp Glu Asp Ala Asp Pro Thr Asp Ile 425 430 435 gcg gac atc caa ggc cca acg cag cca ggt acg ggt gag tct gga gat 1459 Ala Asp Ile Gln Gly Pro Thr Gln Pro Gly Thr Gly Glu Ser Gly Asp 440 445 450 tcc cag agc aac tcc agc gac aac gat tcc aca ggc aac gat tcc aca 1507 Ser Gln Ser Asn Ser Ser Asp Asn Asp Ser Thr Gly Asn Asp Ser Thr 455 460 465 ggc tct gac tct tca gat tca gat tcc tcc ggc aac gat tct tca gag 1555 Gly Ser Asp Ser Ser Asp Ser Asp Ser Ser Gly Asn Asp Ser Ser Glu 470 475 480 485 gtt att tcc ggc gat cgt tcc gct cag att gag act gtg att gcg cgc 1603 Val Ile Ser Gly Asp Arg Ser Ala Gln Ile Glu Thr Val Ile Ala Arg 490 495 500 gcc atg agc cag ttg ggt gtg cag tac gca tgg ggt ggc ggt aac gct 1651 Ala Met Ser Gln Leu Gly Val Gln Tyr Ala Trp Gly Gly Gly Asn Ala 505 510 515 aat ggc cca act ctg ggt atc cgt gac ggt ggc gtg gcg gac tct tac 1699 Asn Gly Pro Thr Leu Gly Ile Arg Asp Gly Gly Val Ala Asp Ser Tyr 520 525 530 ggc gat tac aac aag gtt ggc ttc gac tgc tct gga ctg acc ttg tat 1747 Gly Asp Tyr Asn Lys Val Gly Phe Asp Cys Ser Gly Leu Thr Leu Tyr 535 540 545 gcg ttt gcg ggt gtg gga att tca ctt cct cac tac acg ggc tac cag 1795 Ala Phe Ala Gly Val Gly Ile Ser Leu Pro His Tyr Thr Gly Tyr Gln 550 555 560 565 tac cag cac ggc acc aag gtg tcg cct tct gag atg caa cgt ggc gat 1843 Tyr Gln His Gly Thr Lys Val Ser Pro Ser Glu Met Gln Arg Gly Asp 570 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att tcc ccc gat ctc atc cgc ttc agc ttc gac tgc cca 211 Val Arg Gln Ile Ser Pro Asp Leu Ile Arg Phe Ser Phe Asp Cys Pro 25 30 35 gaa atc gtt ggc gcc gac ctg ggg ttc acg gac cat tac atc aag atc 259 Glu Ile Val Gly Ala Asp Leu Gly Phe Thr Asp His Tyr Ile Lys Ile 40 45 50 ctc ttc gtg cca gca ggt gcg gat tac tcc tgg cct ttc gac atg gca 307 Leu Phe Val Pro Ala Gly Ala Asp Tyr Ser Trp Pro Phe Asp Met Ala 55 60 65 gaa att gcg gaa acc cag ccc cgt gag ctg caa cca gtg cgc cgc acc 355 Glu Ile Ala Glu Thr Gln Pro Arg Glu Leu Gln Pro Val Arg Arg Thr 70 75 80 85 tac act ttc cgc acg gtt gac act gtc gca ggc aca ttt gac ata gat 403 Tyr Thr Phe Arg Thr Val Asp Thr Val Ala Gly Thr Phe Asp Ile Asp 90 95 100 ttc gtt gcg cac ggc acc gat ggc ctt gcc ggt cct tgg gcg cag cag 451 Phe Val Ala His Gly Thr Asp Gly Leu Ala Gly Pro Trp Ala Gln Gln 105 110 115 gca cag gta ggt gat gtc atc gcg ttc ggc ggc cca ggt ggc gca tgg 499 Ala Gln Val Gly Asp Val Ile Ala Phe Gly Gly Pro Gly Gly Ala Trp 120 125 130 aag cca gaa acc acc tat gag cac tac gtt ctc gca ggc gat gaa gcc 547 Lys Pro Glu Thr Thr Tyr Glu His Tyr Val Leu Ala Gly Asp Glu Ala 135 140 145 gca gca ccc gca att ttc gca gcc tta gaa cac cta ccc gcc ggc acc 595 Ala Ala Pro Ala Ile Phe Ala Ala Leu Glu His Leu Pro Ala Gly Thr 150 155 160 165 acc gcc aaa gcc ttc att gaa atc tcc tcc aac gaa gcg cgt ttc aac 643 Thr Ala Lys Ala Phe Ile Glu Ile Ser Ser Asn Glu Ala Arg Phe Asn 170 175 180 gcc cca gcc agc gac aac atc gag gtt gtc tgg gtg ccc cgc gac ggc 691 Ala Pro Ala Ser Asp Asn Ile Glu Val Val Trp Val Pro Arg Asp Gly 185 190 195 gcc acc cac ggt aca ttg ctt atc gac gcc ctc cgc cag gac ggc tac 739 Ala Thr His Gly Thr Leu Leu Ile Asp Ala Leu Arg Gln Asp Gly Tyr 200 205 210 cca acc aag aaa act tcc tgg ttc atc cac gga gtc gcc gaa atg gtg 787 Pro Thr Lys Lys Thr Ser Trp Phe Ile His Gly Val Ala Glu Met Val 215 220 225 aag gaa acc cgc aaa ttc ctc ttc gtg gaa ggc aac gta gac aaa gct 835 Lys Glu Thr Arg Lys Phe Leu Phe Val Glu Gly Asn Val Asp Lys Ala 230 235 240 245 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Asp Val Ile Ala Phe Gly Gly 115 120 125 Pro Gly Gly Ala Trp Lys Pro Glu Thr Thr Tyr Glu His Tyr Val Leu 130 135 140 Ala Gly Asp Glu Ala Ala Ala Pro Ala Ile Phe Ala Ala Leu Glu His 145 150 155 160 Leu Pro Ala Gly Thr Thr Ala Lys Ala Phe Ile Glu Ile Ser Ser Asn 165 170 175 Glu Ala Arg Phe Asn Ala Pro Ala Ser Asp Asn Ile Glu Val Val Trp 180 185 190 Val Pro Arg Asp Gly Ala Thr His Gly Thr Leu Leu Ile Asp Ala Leu 195 200 205 Arg Gln Asp Gly Tyr Pro Thr Lys Lys Thr Ser Trp Phe Ile His Gly 210 215 220 Val Ala Glu Met Val Lys Glu Thr Arg Lys Phe Leu Phe Val Glu Gly 225 230 235 240 Asn Val Asp Lys Ala Asp Ala Ser Ile Ser Gly Tyr Trp Arg Leu Gly 245 250 255 Met Thr Glu Asp Gln Trp Gln Ala Ser Lys Arg Glu Phe Asn Glu Gln 260 265 270 Asn Glu Ala Glu Glu Leu Ala Leu Ser Lys Ala 275 280 <210> 9 <211> 1069 <212> DNA <213> Corynebacterium glutamicum <220> <221> CDS <222> (101)..(1039) <223> RXA00313 <400> 9 gatcgtcttg ccgatgctgg tattgaggtt gtggataccg cagatggcgc tacatggaaa 60 ttgcagtaat tacagacact 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Ala Arg Val Pro Val Ala Lys Glu Thr Asn Met Thr Arg Val Val Lys 215 220 225 gaa ttc cag caa aac ggt tac cag gtc gtc ggc ctt gac gct ggc ggc 835 Glu Phe Gln Gln Asn Gly Tyr Gln Val Val Gly Leu Asp Ala Gly Gly 230 235 240 245 gac cac act ttg gac acc tac gac ggc acc gac aac gtt gtc atc gtc 883 Asp His Thr Leu Asp Thr Tyr Asp Gly Thr Asp Asn Val Val Ile Val 250 255 260 gtc ggt tct gag ggc aag gga att tcc cgt ctc gtt cgc gaa aac tgc 931 Val Gly Ser Glu Gly Lys Gly Ile Ser Arg Leu Val Arg Glu Asn Cys 265 270 275 gac acc atc atg tcc ata ccc acc gag ggc tgg gtt gaa tcg ctg aac 979 Asp Thr Ile Met Ser Ile Pro Thr Glu Gly Trp Val Glu Ser Leu Asn 280 285 290 gct tcg gtt gct gcc ggc gtc gtg ctg tcg gag ttc tcg cgc cag cgt 1027 Ala Ser Val Ala Ala Gly Val Val Leu Ser Glu Phe Ser Arg Gln Arg 295 300 305 cgc att aag ggt taagccggag gttggcgtcg aaaagccaaa 1069 Arg Ile Lys Gly 310 <210> 10 <211> 313 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 10 Met Ala Gly Asn Asp Ser Arg Arg Gly Gly Leu Arg Lys 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aag ctc tat gca gca gtc ctc gac ttt gaa cca gtg gca caa gag ttc 259 Lys Leu Tyr Ala Ala Val Leu Asp Phe Glu Pro Val Ala Gln Glu Phe 40 45 50 ggt gtg gag cga ggt ttt gac cct cat atc cac gac gaa gcc gcg tca 307 Gly Val Glu Arg Gly Phe Asp Pro His Ile His Asp Glu Ala Ala Ser 55 60 65 agt gtc gat agg tat gcg caa gag cgg gaa gat ctc ctg cac atg ccc 355 Ser Val Asp Arg Tyr Ala Gln Glu Arg Glu Asp Leu Leu His Met Pro 70 75 80 85 ttt gtc acc atc gat ccc gta ggt tcc aga gac ctc gat caa gct gtg 403 Phe Val Thr Ile Asp Pro Val Gly Ser Arg Asp Leu Asp Gln Ala Val 90 95 100 ctg att gag gag atc gac agc gga ttt cgg gtg cat tac gcg att gca 451 Leu Ile Glu Glu Ile Asp Ser Gly Phe Arg Val His Tyr Ala Ile Ala 105 110 115 gat gtc gca gcc ttc gtg gag ccg ggc agt gaa ttg gaa aag att tcc 499 Asp Val Ala Ala Phe Val Glu Pro Gly Ser Glu Leu Glu Lys Ile Ser 120 125 130 ctt cac cgc ggg cag act att tat ctg ccg gat tcc cca gcg cga ctg 547 Leu His Arg Gly Gln Thr Ile Tyr Leu Pro Asp Ser Pro Ala Arg Leu 135 140 145 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cac ccc gtg ttg gaa aag tct ttg ggt aaa acc tta 2131 Ile Thr Tyr Asp His Pro Val Leu Glu Lys Ser Leu Gly Lys Thr Leu 665 670 675 gga atc cca ctg ttt cag gaa cag ctc atg cag gta gct gtt gat gct 2179 Gly Ile Pro Leu Phe Gln Glu Gln Leu Met Gln Val Ala Val Asp Ala 680 685 690 gca ggt ttt agt ggt ggg gaa gcg gat tcc ttg cgc aga gcg atg ggg 2227 Ala Gly Phe Ser Gly Gly Glu Ala Asp Ser Leu Arg Arg Ala Met Gly 695 700 705 tcg aaa cgc tca cct gaa cgc atg gct gcg ttg cgc tcg cgg ttt ttc 2275 Ser Lys Arg Ser Pro Glu Arg Met Ala Ala Leu Arg Ser Arg Phe Phe 710 715 720 725 caa ggg ctg aaa gat acc aat ggg att gtg ggg gag acc gcc gag aaa 2323 Gln Gly Leu Lys Asp Thr Asn Gly Ile Val Gly Glu Thr Ala Glu Lys 730 735 740 ctg tgg aac aaa att gtg gcc ttt gct gcc tac ggt ttt ccg gaa tcg 2371 Leu Trp Asn Lys Ile Val Ala Phe Ala Ala Tyr Gly Phe Pro Glu Ser 745 750 755 cat tcg cag tcg ttt gcg tcc ttg gtg tat ttc tcc gcg tgg ttt aaa 2419 His Ser Gln Ser Phe Ala Ser Leu Val Tyr Phe Ser Ala Trp Phe Lys 760 765 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Ala Lys Gly Lys Gly Val His Lys Ala Val Arg Gly Gly Ala Gly 295 300 305 gat ttc aaa gca ctc gaa gac caa caa aaa ctc cga cgc acc cga ttc 1075 Asp Phe Lys Ala Leu Glu Asp Gln Gln Lys Leu Arg Arg Thr Arg Phe 310 315 320 325 ctc cgc gac agc ctc gac ctc gca ctc gtc gac cta gcc ggc atc tac 1123 Leu Arg Asp Ser Leu Asp Leu Ala Leu Val Asp Leu Ala Gly Ile Tyr 330 335 340 cgc gat gcc atc atc att tcc tcc caa gcc caa gtc gga ctc aca cac 1171 Arg Asp Ala Ile Ile Ile Ser Ser Gln Ala Gln Val Gly Leu Thr His 345 350 355 ccc gat atg gaa ggc ctc tcc caa gaa ctc gca aca aaa gta agc caa 1219 Pro Asp Met Glu Gly Leu Ser Gln Glu Leu Ala Thr Lys Val Ser Gln 360 365 370 gaa gga ctc ctg gca tgc ctc gac gcg atc tcc aaa tgc cgc gaa tcc 1267 Glu Gly Leu Leu Ala Cys Leu Asp Ala Ile Ser Lys Cys Arg Glu Ser 375 380 385 ttc ggc ttc aat gta cga ccc atc gtg gcc atg gac gcc ctg gta gga 1315 Phe Gly Phe Asn Val Arg Pro Ile Val Ala Met Asp Ala Leu Val Gly 390 395 400 405 cgc ctg cgc aaa gcc tac aaa gtg tcc taaacacccc 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Arg Cys Arg His Leu Tyr Ile Pro 180 185 190 Thr Pro Ser Ile Ala Glu Val Ala Arg Ile Leu Val Ala Glu Gly Asn 195 200 205 Val Ser Gln Ala Asp Ala Glu Leu Ala Ala Ala Ala Ser Gly Ala His 210 215 220 Ile Gly Arg Ala Arg Tyr Leu Ala His Asn Asn Ala Ala Gln Arg Arg 225 230 235 240 Arg Ala Ser Ile Leu Asn Leu Ala Glu Leu Ile Phe His Gly Asp Val 245 250 255 Ala Phe Arg Ser Val Asn Thr Leu Val Lys Met Val Glu Thr Glu Ala 260 265 270 Lys Asp Ser Asn Lys Glu Lys Glu Glu Ala Glu Leu Glu Ala Val Arg 275 280 285 Ile Ser Leu Gly Met Gly Ala Lys Gly Lys Gly Val His Lys Ala Val 290 295 300 Arg Gly Gly Ala Gly Asp Phe Lys Ala Leu Glu Asp Gln Gln Lys Leu 305 310 315 320 Arg Arg Thr Arg Phe Leu Arg Asp Ser Leu Asp Leu Ala Leu Val Asp 325 330 335 Leu Ala Gly Ile Tyr Arg Asp Ala Ile Ile Ile Ser Ser Gln Ala Gln 340 345 350 Val Gly Leu Thr His Pro Asp Met Glu Gly Leu Ser Gln Glu Leu Ala 355 360 365 Thr Lys Val Ser Gln Glu Gly Leu Leu Ala Cys Leu Asp Ala Ile Ser 370 375 380 Lys Cys Arg Glu Ser Phe Gly Phe Asn 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gca gct gat att gat 355 Ala Pro Asn Ser Ser Ala Asp Leu Ala Ala Leu Ala Ala Asp Ile Asp 70 75 80 85 gct gtg ttg aag ggt gaa aag cca cag cac ctg ggt ggc gga gcc cca 403 Ala Val Leu Lys Gly Glu Lys Pro Gln His Leu Gly Gly Gly Ala Pro 90 95 100 gta gtg cct tca gct cca tct act gtt gct ggt ctg aat ttc gtg ggc 451 Val Val Pro Ser Ala Pro Ser Thr Val Ala Gly Leu Asn Phe Val Gly 105 110 115 ttt gac gta gag acg gcc aat gat gat tgg ggt tcc atc tgc cag att 499 Phe Asp Val Glu Thr Ala Asn Asp Asp Trp Gly Ser Ile Cys Gln Ile 120 125 130 ggt ttg gtc aag tac gtc gat ggt gtg gag gaa tct tcg gag tca tgg 547 Gly Leu Val Lys Tyr Val Asp Gly Val Glu Glu Ser Ser Glu Ser Trp 135 140 145 ttg tgt act cct cct gag agc ctg aat ttc ttc aat gag atc aac att 595 Leu Cys Thr Pro Pro Glu Ser Leu Asn Phe Phe Asn Glu Ile Asn Ile 150 155 160 165 ggt att cac ggc atc acc cca gag atg gtt gct gat cag cct cgt ttt 643 Gly Ile His Gly Ile Thr Pro Glu Met Val Ala Asp Gln Pro Arg Phe 170 175 180 gca gac ctt gtg ccc aag atg gtg 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gtg gat aac gcc cgg gtg tat ccg gtg ctg aag 1027 Phe Thr Met Gly Thr Val Asp Asn Ala Arg Val Tyr Pro Val Leu Lys 295 300 305 gat cgt tct gga gct aac gtt gcg ttg cag cgt cga aac ttt ggt ttg 1075 Asp Arg Ser Gly Ala Asn Val Ala Leu Gln Arg Arg Asn Phe Gly Leu 310 315 320 325 gat gca ggc aag acc gaa gtc ccc gtg cag cca gct gtt gat cca gcg 1123 Asp Ala Gly Lys Thr Glu Val Pro Val Gln Pro Ala Val Asp Pro Ala 330 335 340 tgg gaa acc ccg aag gcg gag cca aaa aag caa tct ggc cgc cgt gca 1171 Trp Glu Thr Pro Lys Ala Glu Pro Lys Lys Gln Ser Gly Arg Arg Ala 345 350 355 ccg tgg gac aag gtg gct acc cct gag gtc att cca gat ccc aat ccc 1219 Pro Trp Asp Lys Val Ala Thr Pro Glu Val Ile Pro Asp Pro Asn Pro 360 365 370 gat gct gat ccg tcg agc att ctc tat ggc cag aat gtg acc ttg act 1267 Asp Ala Asp Pro Ser Ser Ile Leu Tyr Gly Gln Asn Val Thr Leu Thr 375 380 385 ggt gat ttc gag cca tat gaa aag ggt gcg ctg tgg cag cgg atc gct 1315 Gly Asp Phe Glu Pro Tyr Glu Lys Gly Ala Leu Trp Gln Arg Ile Ala 390 395 400 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Asn Ser Ser Ala Asp Leu Ala Ala Leu 65 70 75 80 Ala Ala Asp Ile Asp Ala Val Leu Lys Gly Glu Lys Pro Gln His Leu 85 90 95 Gly Gly Gly Ala Pro Val Val Pro Ser Ala Pro Ser Thr Val Ala Gly 100 105 110 Leu Asn Phe Val Gly Phe Asp Val Glu Thr Ala Asn Asp Asp Trp Gly 115 120 125 Ser Ile Cys Gln Ile Gly Leu Val Lys Tyr Val Asp Gly Val Glu Glu 130 135 140 Ser Ser Glu Ser Trp Leu Cys Thr Pro Pro Glu Ser Leu Asn Phe Phe 145 150 155 160 Asn Glu Ile Asn Ile Gly Ile His Gly Ile Thr Pro Glu Met Val Ala 165 170 175 Asp Gln Pro Arg Phe Ala Asp Leu Val Pro Lys Met Val Glu Phe Val 180 185 190 Gly Asp Leu Pro Leu Val Ala His Asn Ala Gln Phe Asp Phe Thr Ala 195 200 205 Leu Ser Arg Ala Cys Ala Ala Ser Gly Ile Asp Val Pro Glu Met Ile 210 215 220 Tyr Gly Cys Ser Leu Thr Leu Ala Arg Asn Glu Lys Leu Gln Val Glu 225 230 235 240 Asn His Lys Leu Pro Thr Val Ala Ser His Leu Gly Phe Glu Leu Lys 245 250 255 Asn His His Asp Ala Ala Glu Asp Ala Arg Ala Cys Ala Ala Ile Thr 260 265 270 Ile Ala Leu Ala Lys Arg His Ser Phe 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att tcc ggt gaa ttt gat 1747 Asn His Val Thr Val Ile Asp Ala Ala Ser Ile Ser Gly Glu Phe Asp 535 540 545 gag gtt att gtt gat ggc gca gtt gac gct cag gtg agc tac gac aac 1795 Glu Val Ile Val Asp Gly Ala Val Asp Ala Gln Val Ser Tyr Asp Asn 550 555 560 565 ggc tct gtc gtg att act aca ggc gca cct tct gat gac gta aag gaa 1843 Gly Ser Val Val Ile Thr Thr Gly Ala Pro Ser Asp Asp Val Lys Glu 570 575 580 act ggc tct tct gct ggc gga att ctt gcc atc gtg gca gcc ctg ggt 1891 Thr Gly Ser Ser Ala Gly Gly Ile Leu Ala Ile Val Ala Ala Leu Gly 585 590 595 ggc att gca gca ctg atc ttc ggt gca ttc acc cag ttt ggt ttc cca 1939 Gly Ile Ala Ala Leu Ile Phe Gly Ala Phe Thr Gln Phe Gly Phe Pro 600 605 610 cca gca atc aag gaa atg ttc gac ctt taagccttcg ccaaccccac 1986 Pro Ala Ile Lys Glu Met Phe Asp Leu 615 620 ggcgtgcttt 1996 <210> 26 <211> 622 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 26 Met Arg Pro Ser Ser Arg Pro Leu Gly Leu Val Leu Cys Thr Ala Leu 1 5 10 15 Ala Ser Thr Ile Ile Thr Val Pro Ala Ala Ser 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gag gag atc gtg ggt gat tat gtg cag ctg aaa tcg gca ggt gct gat 259 Glu Glu Ile Val Gly Asp Tyr Val Gln Leu Lys Ser Ala Gly Ala Asp 40 45 50 tcg ctc aag ggg ctt tct ccc ttt aaa gat gaa aaa aca cca tcg ttc 307 Ser Leu Lys Gly Leu Ser Pro Phe Lys Asp Glu Lys Thr Pro Ser Phe 55 60 65 cat gtg cgc ccc aac cgt ggt tac tac cac tgt ttc tcc acc ggc aaa 355 His Val Arg Pro Asn Arg Gly Tyr Tyr His Cys Phe Ser Thr Gly Lys 70 75 80 85 ggt gga gat gtg ttc tcc ttc ctc atg gag atg gaa cac atc tct ttc 403 Gly Gly Asp Val Phe Ser Phe Leu Met Glu Met Glu His Ile Ser Phe 90 95 100 cct gag gct gtg gaa gtg tgt gcg gag aaa att ggt tat cag atc aat 451 Pro Glu Ala Val Glu Val Cys Ala Glu Lys Ile Gly Tyr Gln Ile Asn 105 110 115 tac caa ggt ggt ggc ccg ggg cgc cgt gag gaa cct gga act cgc cag 499 Tyr Gln Gly Gly Gly Pro Gly Arg Arg Glu Glu Pro Gly Thr Arg Gln 120 125 130 cgc ctt att ttg gct aat aag gct gcg cac cag ttt tat cgc gag caa 547 Arg Leu Ile Leu Ala Asn Lys Ala Ala His Gln Phe Tyr Arg Glu Gln 135 140 145 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Ala Gln Asp Leu Glu Ser Tyr Thr Asp Gly Val Leu Ser Arg Leu Gln 585 590 595 gaa aca cga gtg ggc aac cag atc gcc atc ttg aaa gga cag ctg caa 1939 Glu Thr Arg Val Gly Asn Gln Ile Ala Ile Leu Lys Gly Gln Leu Gln 600 605 610 aga atg cgt ccg tct gaa gat gag caa gcc tac aac tcg ctg ttt tcc 1987 Arg Met Arg Pro Ser Glu Asp Glu Gln Ala Tyr Asn Ser Leu Phe Ser 615 620 625 gat ctg gtt gcc ctg gaa cag gcg cgc cgg gag ctg ttg gcc cgg gcg 2035 Asp Leu Val Ala Leu Glu Gln Ala Arg Arg Glu Leu Leu Ala Arg Ala 630 635 640 645 ttt aga ggg taatttagtc ctggtcttgc tcgaggactt 2074 Phe Arg Gly <210> 30 <211> 648 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 30 Leu His Thr Thr Asn Ile Gly Thr Leu Lys Gly Arg Ala Lys Val Met 1 5 10 15 Val Met Ala Lys Gly Arg Ile Pro Glu Ser Asp Ile Gln Ala Ile Arg 20 25 30 Glu Arg Thr Pro Ile Glu Glu Ile Val Gly Asp Tyr Val Gln Leu Lys 35 40 45 Ser Ala Gly Ala Asp Ser Leu Lys Gly Leu Ser Pro Phe Lys Asp Glu 50 55 60 Lys Thr Pro Ser Phe His Val Arg Pro Asn Arg Gly Tyr Tyr His 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Leu Asp Phe Pro 1 5 cag agg gcg tca ccg aac tac gaa ggt aga ttg gac acc atg gtt tcc 163 Gln Arg Ala Ser Pro Asn Tyr Glu Gly Arg Leu Asp Thr Met Val Ser 10 15 20 gat ctc ctt caa ccc cgc gac ggc att ccg cct ttg cta tct acc cct 211 Asp Leu Leu Gln Pro Arg Asp Gly Ile Pro Pro Leu Leu Ser Thr Pro 25 30 35 ggt gag ttc act gct gcg gca gat ctc ttg gct agc gga act ggg ccc 259 Gly Glu Phe Thr Ala Ala Ala Asp Leu Leu Ala Ser Gly Thr Gly Pro 40 45 50 ttc gcc att gat acg gaa cgc gcg tcc ggt ttt aga tac gat gac cgc 307 Phe Ala Ile Asp Thr Glu Arg Ala Ser Gly Phe Arg Tyr Asp Asp Arg 55 60 65 gca ttt ttg att cag atc cgg cgc cgt ggc agc gga act ctc cta ttc 355 Ala Phe Leu Ile Gln Ile Arg Arg Arg Gly Ser Gly Thr Leu Leu Phe 70 75 80 85 gac ccg gag cag ttc cgt cct gaa tta act cag gcg tta aag ccg gtg 403 Asp Pro Glu Gln Phe Arg Pro Glu Leu Thr Gln Ala Leu Lys Pro Val 90 95 100 ctc aat ggt caa gag tgg atc att cac gca gca agc acc gat ttg ccg 451 Leu Asn Gly Gln Glu Trp Ile Ile His Ala Ala Ser Thr Asp Leu 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Arg Arg Ala Trp Ala Ser Tyr Tyr Pro 330 335 340 gaa gag cac gaa gtg ctc caa gag att aga gcg ctt atc gac gac ctc 1171 Glu Glu His Glu Val Leu Gln Glu Ile Arg Ala Leu Ile Asp Asp Leu 345 350 355 gcc gcc gat atc aac gtt ccc ggc gag aat atc ctt cag cct tca act 1219 Ala Ala Asp Ile Asn Val Pro Gly Glu Asn Ile Leu Gln Pro Ser Thr 360 365 370 ctg cga gta gct gtg tgg atg gct aaa cac acc ggc gag atc cat aat 1267 Leu Arg Val Ala Val Trp Met Ala Lys His Thr Gly Glu Ile His Asn 375 380 385 gct gaa aca ctc aac gct gta ctt cgc gat tat ggt gcc cgc cag tgg 1315 Ala Glu Thr Leu Asn Ala Val Leu Arg Asp Tyr Gly Ala Arg Gln Trp 390 395 400 405 caa att gac cag act ttt ccg att ctg tcc gcc aac ttg ctg aag ctc 1363 Gln Ile Asp Gln Thr Phe Pro Ile Leu Ser Ala Asn Leu Leu Lys Leu 410 415 420 taaacctaaa gcccgcggct aaggctgcgg 1393 <210> 32 <211> 421 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 32 Leu Leu Asp Phe Pro Gln Arg Ala Ser Pro Asn Tyr Glu Gly Arg Leu 1 5 10 15 Asp Thr Met Val Ser Asp Leu Leu Gln Pro Arg Asp Gly Ile Pro Pro 20 25 30 Leu Leu Ser Thr Pro Gly Glu Phe Thr Ala Ala Ala Asp Leu Leu Ala 35 40 45 Ser Gly Thr Gly Pro Phe Ala Ile Asp Thr Glu Arg Ala Ser Gly Phe 50 55 60 Arg Tyr Asp Asp Arg Ala Phe Leu Ile Gln Ile Arg Arg Arg Gly Ser 65 70 75 80 Gly Thr Leu Leu Phe Asp Pro Glu Gln Phe Arg Pro Glu Leu Thr Gln 85 90 95 Ala Leu Lys Pro Val Leu Asn Gly Gln Glu Trp Ile Ile His Ala Ala 100 105 110 Ser Thr Asp Leu Pro Ser Leu Ala Trp Leu Asp Leu His Pro Gly Leu 115 120 125 Leu Phe Asp Thr Glu Leu Ala Gly Arg Leu Ala Gly Phe Asp His Val 130 135 140 Asn Leu Ala Ala Met Val Glu Gln Ile Phe Asp Leu His Leu Leu Lys 145 150 155 160 Gly His Gly Ser Glu Asp Trp Ser Lys Arg Pro Leu Pro Glu Ser Trp 165 170 175 Leu Asn Tyr Ala Ala Leu Asp Val Glu Met Leu Leu Glu Leu Ala Asp 180 185 190 Val Met Ala Glu Ile Leu Asp Gln Gln Gly Lys Leu Pro Trp Ala Glu 195 200 205 Gln Glu Phe Val His Ile Val Asp Gln Phe Ala Thr Met Thr Glu Pro 210 215 220 Ser Glu Thr Ser Trp Gln Asp Leu Lys Gly Leu Ser Thr Leu Lys 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ggc att gtg aca tta gaa gat tta gct gag gaa 1075 Tyr Gly Gly Phe Ile Gly Ile Val Thr Leu Glu Asp Leu Ala Glu Glu 310 315 320 325 gtc ctc ggc gat atc aac gat gag cac gat gtt ttc agc tct gaa gat 1123 Val Leu Gly Asp Ile Asn Asp Glu His Asp Val Phe Ser Ser Glu Asp 330 335 340 att acg gaa acg agc cct gac aaa tgg cta att gat ggc gat acc cct 1171 Ile Thr Glu Thr Ser Pro Asp Lys Trp Leu Ile Asp Gly Asp Thr Pro 345 350 355 ctt gac gag gtt gag cgc gcc atc ggg tac gag cta cct gaa ggc gat 1219 Leu Asp Glu Val Glu Arg Ala Ile Gly Tyr Glu Leu Pro Glu Gly Asp 360 365 370 tac gag acg att tct gga ctg ctc ttt gac cat gcg aat gcc ctt cta 1267 Tyr Glu Thr Ile Ser Gly Leu Leu Phe Asp His Ala Asn Ala Leu Leu 375 380 385 aag act ggg gat gtc ata gaa ata cct ctg gat ttt gag cca gag gat 1315 Lys Thr Gly Asp Val Ile Glu Ile Pro Leu Asp Phe Glu Pro Glu Asp 390 395 400 405 tac ctg aac aac acc tcc cct acg cag cgt att ttg cgc atc act gtt 1363 Tyr Leu Asn Asn Thr Ser Pro Thr Gln Arg Ile Leu Arg Ile Thr Val 410 415 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cca gaa gtc ctc acc ctt gcc aac gca gtt tcg cgg 1219 Trp Arg Asn Pro Pro Glu Val Leu Thr Leu Ala Asn Ala Val Ser Arg 360 365 370 gag gtg ctt ggg tcg ccc gat gcg ccg act cgg acg gtg cag ccg ctg 1267 Glu Val Leu Gly Ser Pro Asp Ala Pro Thr Arg Thr Val Gln Pro Leu 375 380 385 cag cct cgg gaa ggc gca ccg acc ggt gaa gtg tcg ctc gga tgg ttt 1315 Gln Pro Arg Glu Gly Ala Pro Thr Gly Glu Val Ser Leu Gly Trp Phe 390 395 400 405 ggt acg gcg gcg cag gaa cgt gag ttt gtg gct gat gag atg gtg aag 1363 Gly Thr Ala Ala Gln Glu Arg Glu Phe Val Ala Asp Glu Met Val Lys 410 415 420 cat tgg aat gcg cgg gag gag aag ggc aca ttt act gct gcg gtg ttg 1411 His Trp Asn Ala Arg Glu Glu Lys Gly Thr Phe Thr Ala Ala Val Leu 425 430 435 gtg cgt aag aag cgt cat tcg gca ccg atg gcg gag gag ctg acc aag 1459 Val Arg Lys Lys Arg His Ser Ala Pro Met Ala Glu Glu Leu Thr Lys 440 445 450 cgt ggc atc ccc gtg gag atc gtc gga ctg tct ggt ttg ttg gat atc 1507 Arg Gly Ile Pro Val Glu Ile Val Gly Leu Ser Gly Leu Leu Asp Ile 455 460 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Leu Ala Thr Gln 570 575 580 ttg cga tat ttg cgt aag tac agc ttg ggt cgt tcg gtg gcg gac att 1891 Leu Arg Tyr Leu Arg Lys Tyr Ser Leu Gly Arg Ser Val Ala Asp Ile 585 590 595 ttt gct gat att gaa act gtg ttc aat att cgc acg gag gtg ttg tcg 1939 Phe Ala Asp Ile Glu Thr Val Phe Asn Ile Arg Thr Glu Val Leu Ser 600 605 610 agg cag gat cct cac gcc gat ggt gct gct gga acg gtg cat ttg gat 1987 Arg Gln Asp Pro His Ala Asp Gly Ala Ala Gly Thr Val His Leu Asp 615 620 625 aag ttc gca gaa gag gtc gca agt cac ggt ggc att ggg ctg cct gag 2035 Lys Phe Ala Glu Glu Val Ala Ser His Gly Gly Ile Gly Leu Pro Glu 630 635 640 645 ctg ttg gac tat ttt gag ctc gcg aag gat cag gaa gag ggc ctt gag 2083 Leu Leu Asp Tyr Phe Glu Leu Ala Lys Asp Gln Glu Glu Gly Leu Glu 650 655 660 ccg ggt gag gtg acg gtt cgc agc gat cgt gtg cag atc ctt act gtc 2131 Pro Gly Glu Val Thr Val Arg Ser Asp Arg Val Gln Ile Leu Thr Val 665 670 675 cac aag gct aag ggt ttg gag tgg gat atc gtt tcg gtg ttg cat gcc 2179 His Lys Ala Lys Gly Leu Glu 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ctc gct gtc tat aga ctc gcc tgg gca 3187 Met Asp Ala Ala Ile Ile Gln Leu Ala Val Tyr Arg Leu Ala Trp Ala 1015 1020 1025 cga ctc aaa ggc ctc gaa cct gaa gaa gtc cgc gca gca ttc cat tac 3235 Arg Leu Lys Gly Leu Glu Pro Glu Glu Val Arg Ala Ala Phe His Tyr 1030 1035 1040 1045 gtc gcc cac gat cac acc ttt gag ccg aac gat ctg ccg act caa gaa 3283 Val Ala His Asp His Thr Phe Glu Pro Asn Asp Leu Pro Thr Gln Glu 1050 1055 1060 gaa cta gcc cgg ctg ctc agt cag gaa tgatgcgcct aagatcaaac 3330 Glu Leu Ala Arg Leu Leu Ser Gln Glu 1065 1070 aagaatgaaa 3340 <210> 42 <211> 1070 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 42 Met Arg Arg Ile Ser Pro Arg Leu Leu Ser Gln Tyr Leu Gly Gln Glu 1 5 10 15 His Ala Pro Thr Asp Gln Gln Ser Ala Ile Ile Gly Ser Glu Pro Gly 20 25 30 Pro Leu Leu Val Val Ala Gly Ala Gly Ala Gly Lys Thr Glu Thr Met 35 40 45 Ala Ala Arg Val Val Trp Leu Val Ala Asn Gly Phe Val Ala Pro Asp 50 55 60 Gln Val Leu Gly Leu Thr Phe Thr Arg Lys Ala Ala Gln Gln Leu Ser 65 70 75 80 Gln Arg Ile 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atc att 115 Met Pro Ile Ile Ile 1 5 gat aac ctc aat tct gac gac gac tcc acc atc ggc act gcc acc gaa 163 Asp Asn Leu Asn Ser Asp Asp Asp Ser Thr Ile Gly Thr Ala Thr Glu 10 15 20 tac aac cct gac act gac gcc gat tta ctt gat gct att aac gct gat 211 Tyr Asn Pro Asp Thr Asp Ala Asp Leu Leu Asp Ala Ile Asn Ala Asp 25 30 35 gct gac ctt gat ggc gac gcc acc atc agc act aac gcg aca gaa gaa 259 Ala Asp Leu Asp Gly Asp Ala Thr Ile Ser Thr Asn Ala Thr Glu Glu 40 45 50 ggt gta gac gca gca gct gaa aaa cct aag aaa aag cgt aaa gcc cct 307 Gly Val Asp Ala Ala Ala Glu Lys Pro Lys Lys Lys Arg Lys Ala Pro 55 60 65 gct ctg aag cct aaa gga ctc acg gca aag ttc ttc cac cgt gat ctt 355 Ala Leu Lys Pro Lys Gly Leu Thr Ala Lys Phe Phe His Arg Asp Leu 70 75 80 85 act ggc gta ggt ggt agg acc ggt cgc ctc aac aag aac gta cac ccg 403 Thr Gly Val Gly Gly Arg Thr Gly Arg Leu Asn Lys Asn Val His Pro 90 95 100 acc aac cca gat ctg tcc tac cag cca gtc tct gat gtc tac acc cca 451 Thr Asn Pro Asp Leu Ser Tyr Gln Pro Val Ser 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att tac gca cac aat ttc 1795 Ser Met Thr Ile Ser Lys Met Val His Glu Ile Tyr Ala His Asn Phe 550 555 560 565 cct gat cat gag atc tcc acc atc gac acc att atc aat acg ctt gat 1843 Pro Asp His Glu Ile Ser Thr Ile Asp Thr Ile Ile Asn Thr Leu Asp 570 575 580 att gaa tac ggc gat caa atg gtg acc tcc gat tac atg att cag ctc 1891 Ile Glu Tyr Gly Asp Gln Met Val Thr Ser Asp Tyr Met Ile Gln Leu 585 590 595 cgt gac ctg ctc tat aag gtc atg acg cag ggt ggc aac gcc aac ctg 1939 Arg Asp Leu Leu Tyr Lys Val Met Thr Gln Gly Gly Asn Ala Asn Leu 600 605 610 aca gcg ttg agc atc ttc atg gaa tcc cat atc gag gcg ttc atc tcg 1987 Thr Ala Leu Ser Ile Phe Met Glu Ser His Ile Glu Ala Phe Ile Ser 615 620 625 gtg ttg gat cag atc aag cag act tct ctt gag ctg gaa atc atc atc 2035 Val Leu Asp Gln Ile Lys Gln Thr Ser Leu Glu Leu Glu Ile Ile Ile 630 635 640 645 tgc tac ctg ctc ttg gat aag ctg atc gag cct cat gca tcg ccg aag 2083 Cys Tyr Leu Leu Leu Asp Lys Leu Ile Glu Pro His Ala Ser Pro Lys 650 655 660 tac ctc att att gat gag gtg cag gac aac tcg gtc ttc gag ttc gtc 2131 Tyr Leu Ile Ile Asp Glu Val Gln Asp Asn Ser Val Phe Glu Phe Val 665 670 675 ttt gca ctt cgt ttt gcg gca aag cac aat acg agt ctg tac ttg gtg 2179 Phe Ala Leu Arg Phe Ala Ala Lys His Asn Thr Ser Leu Tyr Leu Val 680 685 690 ggt gac tcg tca cag acc ttg tat gag ttc cgt tct gct aac cct aag 2227 Gly Asp Ser Ser Gln Thr Leu Tyr Glu Phe Arg Ser Ala Asn Pro Lys 695 700 705 gct ctg aac tcc ctg gaa gca tct ggt gtt ttc ggt acc tac cgt ttg 2275 Ala Leu Asn Ser Leu Glu Ala Ser Gly Val Phe Gly Thr Tyr Arg Leu 710 715 720 725 acc acc aat tac cgt tcc aac cag gaa att ctt gac ttc gct aat atc 2323 Thr Thr Asn Tyr Arg Ser Asn Gln Glu Ile Leu Asp Phe Ala Asn Ile 730 735 740 cac ctc tcg gat att gaa gct aac cag ttc gca ggt att cag ctc tac 2371 His Leu Ser Asp Ile Glu Ala Asn Gln Phe Ala Gly Ile Gln Leu Tyr 745 750 755 gcc aac tct ttt gat gca cct act gcg gac agc ttc aaa gaa aag gtt 2419 Ala Asn Ser Phe Asp Ala Pro Thr Ala Asp Ser Phe Lys Glu Lys Val 760 765 770 gaa ctg gac atg cac cat gtg tct aag cag tct gag ttt acc gac agc 2467 Glu Leu Asp Met His His Val Ser Lys Gln Ser Glu Phe Thr Asp Ser 775 780 785 att cct tat ttc atg gag tcc aat aaa gct cgc ttt gat gct gcg atc 2515 Ile Pro Tyr Phe Met Glu Ser Asn Lys Ala Arg Phe Asp Ala Ala Ile 790 795 800 805 ttg aac aat gag caa acc att gtg ctt gct cat tct ggt cgt gaa att 2563 Leu Asn Asn Glu Gln Thr Ile Val Leu Ala His Ser Gly Arg Glu Ile 810 815 820 cgt gca gcg cag caa gcg cta gcc gag atg tac ccc agc atc acg gtg 2611 Arg Ala Ala Gln Gln Ala Leu Ala Glu Met Tyr Pro Ser Ile Thr Val 825 830 835 cgt aac ttg cag tcc gat aag ggt ttc aac aac acg gta ttt tcg acc 2659 Arg Asn Leu Gln Ser Asp Lys Gly Phe Asn Asn Thr Val Phe Ser Thr 840 845 850 ttt att aag gat ttc tgg ttt gag gtc acc gct gta gac cca gct cat 2707 Phe Ile Lys Asp Phe Trp Phe Glu Val Thr Ala Val Asp Pro Ala His 855 860 865 gcc gca ttt acc ttt acc agc caa gtc acc gct cat cta gat aag ttg 2755 Ala Ala Phe Thr Phe Thr Ser Gln Val Thr Ala His Leu Asp Lys Leu 870 875 880 885 gta cgc gga aag cgt gag cag atg gag gat cgc gtt atc cgg tct atg 2803 Val Arg Gly Lys Arg Glu Gln Met Glu Asp Arg Val Ile Arg Ser Met 890 895 900 gct gca tgg tgg cgt gaa aat gag cgt gac atc cag ggt tgg gtg cag 2851 Ala Ala Trp Trp Arg Glu Asn Glu Arg Asp Ile Gln Gly Trp Val Gln 905 910 915 caa act cag tcc ggt gcg atc acc aac gaa gag ttc ttc tac cgt ctt 2899 Gln Thr Gln Ser Gly Ala Ile Thr Asn Glu Glu Phe Phe Tyr Arg Leu 920 925 930 cgt cag tgc att ctt gac tat gaa atc agg aat aac cga gca cgt cag 2947 Arg Gln Cys Ile Leu Asp Tyr Glu Ile Arg Asn Asn Arg Ala Arg Gln 935 940 945 tcc atg ctc aat gcg cgc aac aac gct aac aag gag gct gtc gca cag 2995 Ser Met Leu Asn Ala Arg Asn Asn Ala Asn Lys Glu Ala Val Ala Gln 950 955 960 965 gag aaa cca ctg ctc atg gtc tcc acc att cac agt gca aag ggt ctg 3043 Glu Lys Pro Leu Leu Met Val Ser Thr Ile His Ser Ala Lys Gly Leu 970 975 980 gaa ttc gat aat gtc atc gtg ctt caa aaa cca agc tcc gat gca gag 3091 Glu Phe Asp Asn Val Ile Val Leu Gln Lys Pro Ser Ser Asp Ala Glu 985 990 995 atg acc gaa gaa ggt aag cgc gca acc tat gtg gcg ctg acc cgt gca 3139 Met Thr Glu Glu Gly Lys Arg Ala Thr Tyr Val Ala Leu Thr Arg Ala 1000 1005 1010 aaa aag cgt gaa ctc att att gct ggt tct act cgc gca tac cca cgc 3187 Lys Lys Arg Glu Leu Ile Ile Ala Gly Ser Thr Arg Ala Tyr Pro Arg 1015 1020 1025 atc gtc acc gat tat gag caa atc gtt gat ctt ctt gaa aag cgc gat 3235 Ile Val Thr Asp Tyr Glu Gln Ile Val Asp Leu Leu Glu Lys Arg Asp 1030 1035 1040 1045 gag gag cgc aaa att aag gag gaa gag gct gca gca ctc gcc acc ctt 3283 Glu Glu Arg Lys Ile Lys Glu Glu Glu Ala Ala Ala Leu Ala Thr Leu 1050 1055 1060 gaa gct gaa cag gag acg cgc gcc ctt gct gct gct gag gcg cag gct 3331 Glu Ala Glu Gln Glu Thr Arg Ala Leu Ala Ala Ala Glu Ala Gln Ala 1065 1070 1075 cag gcg ttg ttg ctt gag cac aac ccg tgg ttg cgt gat ctc agc gat 3379 Gln Ala Leu Leu Leu Glu His Asn Pro Trp Leu Arg Asp Leu Ser Asp 1080 1085 1090 gaa gaa gtc act gct cta act gag caa gag atc atc aac aat gtt gag 3427 Glu Glu Val Thr Ala Leu Thr Glu Gln Glu Ile Ile Asn Asn Val Glu 1095 1100 1105 gca gcc cta cag att gaa gaa gag gag gaa gag gct cgt gca ctc gct 3475 Ala Ala Leu Gln Ile Glu Glu Glu Glu Glu Glu Ala Arg Ala Leu Ala 1110 1115 1120 1125 gca gca gag cca gca att cag cag tac ttg tct cag ttt gct ttc gat 3523 Ala Ala Glu Pro Ala Ile Gln Gln Tyr Leu Ser Gln Phe Ala Phe Asp 1130 1135 1140 gag ttc ccg gac gac gac aat gta gcc aac act gtc gta cat gta gca 3571 Glu Phe Pro Asp Asp Asp Asn Val Ala Asn Thr Val Val His Val Ala 1145 1150 1155 cca cag cct att ctc cac cag gca gtg cct gca gat gtg act gta caa 3619 Pro Gln Pro Ile Leu His Gln Ala Val Pro Ala Asp Val Thr Val Gln 1160 1165 1170 tca agc acc gcc ccc gta aca cct gtt gtt gcg gat ctt gag gta acc 3667 Ser Ser Thr Ala Pro Val Thr Pro Val Val Ala Asp Leu Glu Val Thr 1175 1180 1185 act gtt gca gct gat cca gtc gaa ccg act atc gtt gct gca cag cct 3715 Thr Val Ala Ala Asp Pro Val Glu Pro Thr Ile Val Ala Ala Gln Pro 1190 1195 1200 1205 gag gtg gac gac aac ctt gtc tac agc acg tcc acc cct aat agt cac 3763 Glu Val Asp Asp Asn Leu Val Tyr Ser Thr Ser Thr Pro Asn Ser His 1210 1215 1220 agt gac gtt att gca gtg aac tct gat acc tca gaa aac gct gct gtt 3811 Ser Asp Val Ile Ala Val Asn Ser Asp Thr Ser Glu Asn Ala Ala Val 1225 1230 1235 aat cca gtt ctg tcc gat att gag gca ctc cga gca att ttc aac aac 3859 Asn Pro Val Leu Ser Asp Ile Glu Ala Leu Arg Ala Ile Phe Asn Asn 1240 1245 1250 cag gac taaaacacct gctgctgttg agcgcttctc 3895 Gln Asp 1255 <210> 44 <211> 1255 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 44 Met Pro Ile Ile Ile Asp Asn Leu Asn Ser Asp Asp Asp Ser Thr Ile 1 5 10 15 Gly Thr Ala Thr Glu Tyr Asn Pro Asp Thr Asp Ala Asp Leu Leu Asp 20 25 30 Ala Ile Asn Ala Asp Ala Asp Leu Asp Gly Asp Ala Thr Ile Ser Thr 35 40 45 Asn Ala Thr Glu Glu Gly Val Asp Ala Ala Ala Glu Lys Pro Lys Lys 50 55 60 Lys Arg Lys Ala Pro Ala Leu Lys Pro Lys Gly Leu Thr Ala Lys Phe 65 70 75 80 Phe His Arg Asp Leu Thr Gly Val Gly Gly Arg Thr Gly Arg Leu Asn 85 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Leu Val Pro Ser Ile Ser Leu Leu Ser Gln Thr Leu 230 235 240 245 aaa gag tgg act gca caa aag aca atg gat ctt cgt cct gtc gcc gta 883 Lys Glu Trp Thr Ala Gln Lys Thr Met Asp Leu Arg Pro Val Ala Val 250 255 260 tgt tct gac tcc aag gtc tcc aag gct gca gaa gat att gct gct tat 931 Cys Ser Asp Ser Lys Val Ser Lys Ala Ala Glu Asp Ile Ala Ala Tyr 265 270 275 gat ctt gaa gtt ccg gta agt act gat ggt gca ttg att gcg gaa aaa 979 Asp Leu Glu Val Pro Val Ser Thr Asp Gly Ala Leu Ile Ala Glu Lys 280 285 290 ctg gag cat cgt aag cga gca gca gga ttg acc gtg gtg ttc tct act 1027 Leu Glu His Arg Lys Arg Ala Ala Gly Leu Thr Val Val Phe Ser Thr 295 300 305 tac cag tcc ctt cct gct gtt cac gcg gct caa gaa gct ggg gct gag 1075 Tyr Gln Ser Leu Pro Ala Val His Ala Ala Gln Glu Ala Gly Ala Glu 310 315 320 325 ccc ttt gat ctt gtc atc tgc gat gaa gcc cac cgc acc aca ggc atc 1123 Pro Phe Asp Leu Val Ile Cys Asp Glu Ala His Arg Thr Thr Gly Ile 330 335 340 acc ttg gct gga gaa gac cct tca aac ttc acc cgc att cat gac gct 1171 Thr Leu Ala Gly Glu Asp Pro Ser Asn Phe Thr Arg Ile His Asp Ala 345 350 355 tct tat atc aag gca gca aag cgg ctg tac atg acg gca acc cca agg 1219 Ser Tyr Ile Lys Ala Ala Lys Arg Leu Tyr Met Thr Ala Thr Pro Arg 360 365 370 ctt ttc gac gac tcc gtg aag ggc aag gct gca gat cat tca gct gaa 1267 Leu Phe Asp Asp Ser Val Lys Gly Lys Ala Ala Asp His Ser Ala Glu 375 380 385 gtt tct tcc atg gat gat gaa gca atc tac gga ccc gaa ttt cac cgg 1315 Val Ser Ser Met Asp Asp Glu Ala Ile Tyr Gly Pro Glu Phe His Arg 390 395 400 405 ctg ggt ttt ggg gaa gca gta gaa aaa ggc ctg ctt act gac tac aaa 1363 Leu Gly Phe Gly Glu Ala Val Glu Lys Gly Leu Leu Thr Asp Tyr Lys 410 415 420 gtt gta gtg atg aca gtt gat gag caa gtt gca gcc agt gcc tta act 1411 Val Val Val Met Thr Val Asp Glu Gln Val Ala Ala Ser Ala Leu Thr 425 430 435 gtt ttg ggt tca aca cct ggt gaa gaa ctc act ctg gac atg act tcc 1459 Val Leu Gly Ser Thr Pro Gly Glu Glu Leu Thr Leu Asp Met Thr Ser 440 445 450 gca att att ggc gcg tgg aat ggc ttg gca aag cgt tcg ggt aaa gag 1507 Ala Ile Ile Gly Ala Trp Asn Gly Leu Ala Lys Arg Ser Gly Lys Glu 455 460 465 caa gac acc aag act ggt ttc tca agc tct gac gca gca atg gaa cga 1555 Gln Asp Thr Lys Thr Gly Phe Ser Ser Ser Asp Ala Ala Met Glu Arg 470 475 480 485 gct gtt gca ttt gcg cga gac att aag act tct cag caa atc gcg gag 1603 Ala Val Ala Phe Ala Arg Asp Ile Lys Thr Ser Gln Gln Ile Ala Glu 490 495 500 tct ttt cca cga gtt gtc aat gct tat acg act gag ctt gag gtt aaa 1651 Ser Phe Pro Arg Val Val Asn Ala Tyr Thr Thr Glu Leu Glu Val Lys 505 510 515 aac gat gac gta gat gag cac aac ctc aat ttg agc gtg gca tgc cag 1699 Asn Asp Asp Val Asp Glu His Asn Leu Asn Leu Ser Val Ala Cys Gln 520 525 530 cat gtc gat gga tca atg aat gcg ctg gaa cga aac tct cgt tta act 1747 His Val Asp Gly Ser Met Asn Ala Leu Glu Arg Asn Ser Arg Leu Thr 535 540 545 tgg ctt aaa gct cct acc cag tca atg gaa acc aag att ctt act aac 1795 Trp Leu Lys Ala Pro Thr Gln Ser Met Glu Thr Lys Ile Leu Thr Asn 550 555 560 565 gcg cgc tgc ctt tct gag ggt gtc gat gta ccg gct ttg gat tcc gta 1843 Ala Arg Cys Leu Ser Glu Gly Val Asp Val Pro Ala Leu Asp Ser Val 570 575 580 atc ttc ttt aat ccc cgt aat tcc atg gtg gat gtg gtt cag tcg gtt 1891 Ile Phe Phe Asn Pro Arg Asn Ser Met Val Asp Val Val Gln Ser Val 585 590 595 ggc cga gtt atg cgt aaa tct cca ggt aag aat tac gga tat atc atc 1939 Gly Arg Val Met Arg Lys Ser Pro Gly Lys Asn Tyr Gly Tyr Ile Ile 600 605 610 ttg cca gtt gct gtt ccc cca ggt gtt gca cca tca gct gcg tta aat 1987 Leu Pro Val Ala Val Pro Pro Gly Val Ala Pro Ser Ala Ala Leu Asn 615 620 625 gat tca cgc cgc ttc aag gtt gta tgg cag gtt ctt aac gcc ctt cgt 2035 Asp Ser Arg Arg Phe Lys Val Val Trp Gln Val Leu Asn Ala Leu Arg 630 635 640 645 gct cac gat gac cgt ttt aac gca atg gtg aac tcc att gcg ctc aat 2083 Ala His Asp Asp Arg Phe Asn Ala Met Val Asn Ser Ile Ala Leu Asn 650 655 660 gag gga aat att aag gat cta cct gtt gag act gag cat act ggc cct 2131 Glu Gly Asn Ile Lys Asp Leu Pro Val Glu Thr Glu His Thr Gly Pro 665 670 675 aca agt aaa gat aga gat aac gca ccc tat gac agt gct gaa tcc gct 2179 Thr Ser Lys Asp Arg Asp Asn Ala Pro Tyr Asp Ser Ala Glu Ser Ala 680 685 690 aca caa tac gta ctg ttc tct tta gaa cag tgg caa gaa gcg atc tac 2227 Thr Gln Tyr Val Leu Phe Ser Leu Glu Gln Trp Gln Glu Ala Ile Tyr 695 700 705 acc aag ctt gta gat aaa gtt ggt acc cga acc tac tgg gaa gat tgg 2275 Thr Lys Leu Val Asp Lys Val Gly Thr Arg Thr Tyr Trp Glu Asp Trp 710 715 720 725 gca gat gat gtt gct gac atc gcc caa gca caa ata acc cgt att aaa 2323 Ala Asp Asp Val Ala Asp Ile Ala Gln Ala Gln Ile Thr Arg Ile Lys 730 735 740 gcg ctc tta gac aat gct tca cca acg atc aaa gaa gag ttc gag cga 2371 Ala Leu Leu Asp Asn Ala Ser Pro Thr Ile Lys Glu Glu Phe Glu Arg 745 750 755 ttt gtt gaa ggt cta cgt ggc aac ctc aat gag tcc atc tct gac gac 2419 Phe Val Glu Gly Leu Arg Gly Asn Leu Asn Glu Ser Ile Ser Asp Asp 760 765 770 gag gca atc agc atg ttg tca cag cat ctg atc acc gca cca gtg ttt 2467 Glu Ala Ile Ser Met Leu Ser Gln His Leu Ile Thr Ala Pro Val Phe 775 780 785 gac gct cta ttt gct gaa tca agc ttc gct aag caa aac cct gtt tcc 2515 Asp Ala Leu Phe Ala Glu Ser Ser Phe Ala Lys Gln Asn Pro Val Ser 790 795 800 805 cag gtt atg caa cgc atg gca gat gct ctt aat agt gct gaa ctt aac 2563 Gln Val Met Gln Arg Met Ala Asp Ala Leu Asn Ser Ala Glu Leu Asn 810 815 820 tct gaa acg gaa aaa ctt gag aag ttc tat gac tct gtt cgt atc cgt 2611 Ser Glu Thr Glu Lys Leu Glu Lys Phe Tyr Asp Ser Val Arg Ile Arg 825 830 835 gct gct gaa gta agc tcc gca gct ggt aaa caa gca gta att aaa gac 2659 Ala Ala Glu Val Ser Ser Ala Ala Gly Lys Gln Ala Val Ile Lys Asp 840 845 850 ctc tac gaa cga ttc ttt aaa aag gcc ttt aaa aag caa tct gaa gct 2707 Leu Tyr Glu Arg Phe Phe Lys Lys Ala Phe Lys Lys Gln Ser Glu Ala 855 860 865 cta ggt att gtc tat acc cct gtt gag atc gtg gac ttt att ctg cga 2755 Leu Gly Ile Val Tyr Thr Pro Val Glu Ile Val Asp Phe Ile Leu Arg 870 875 880 885 gct gcc gat gat gtg tcc aag aag cat ttt ggt cgt ggc tta agc gat 2803 Ala Ala Asp Asp Val Ser Lys Lys His Phe Gly Arg Gly Leu Ser Asp 890 895 900 aaa gat gtc cat gtt ctt gat cct ttc acc ggt acg ggt act ttt atg 2851 Lys Asp Val His Val Leu Asp Pro Phe Thr Gly Thr Gly Thr Phe Met 905 910 915 gtg cgt tta ttg cag tca ggt cta att aag cct gaa gat ttg gcc cgt 2899 Val Arg Leu Leu Gln Ser Gly Leu Ile Lys Pro Glu Asp Leu Ala Arg 920 925 930 aaa tat gcc aat gag ctg cac gct act gag atc atg ttg ctt gcc tat 2947 Lys Tyr Ala Asn Glu Leu His Ala Thr Glu Ile Met Leu Leu Ala Tyr 935 940 945 tat gtt gcg gcc gtt aac att gag acc act tat ttt ggt ctc gag gga 2995 Tyr Val Ala Ala Val Asn Ile Glu Thr Thr Tyr Phe Gly Leu Glu Gly 950 955 960 965 gag cgt gct ctg cgt aat ggt gaa gat gcg ccg gtc tat gag ccg ttt 3043 Glu Arg Ala Leu Arg Asn Gly Glu Asp Ala Pro Val Tyr Glu Pro Phe 970 975 980 gat ggc att gtg ttg ggt gat acc ttc cag atg tat gaa gac gat gac 3091 Asp Gly Ile Val Leu Gly Asp Thr Phe Gln Met Tyr Glu Asp Asp Asp 985 990 995 aaa ctc gat cta gat gtt ttt act gct aac aat gac cgt atg gag cgt 3139 Lys Leu Asp Leu Asp Val Phe Thr Ala Asn Asn Asp Arg Met Glu Arg 1000 1005 1010 cag aga ctt act cct gta cag gtt att gtg ggt aac ccg cct tac tct 3187 Gln Arg Leu Thr Pro Val Gln Val Ile Val Gly Asn Pro Pro Tyr Ser 1015 1020 1025 gtg ggg caa tcg agt gcg aat gac aat aac gca aac ctc aag tac ccc 3235 Val Gly Gln Ser Ser Ala Asn Asp Asn Asn Ala Asn Leu Lys Tyr Pro 1030 1035 1040 1045 act ctt gat cga cgt att gaa gat tct tat gcg aag tat tcg acc gca 3283 Thr Leu Asp Arg Arg Ile Glu Asp Ser Tyr Ala Lys Tyr Ser Thr Ala 1050 1055 1060 aca aat aag aac tct ctg tac gac tcc tat tta cgt gct ttc cgg tgg 3331 Thr Asn Lys Asn Ser Leu Tyr Asp Ser Tyr Leu Arg Ala Phe Arg Trp 1065 1070 1075 gca aca gat cgt att cac aca caa ggg gtt gtt gct ttt gtt tct aac 3379 Ala Thr Asp Arg Ile His Thr Gln Gly Val Val Ala Phe Val Ser Asn 1080 1085 1090 aac ggt tgg gtt gac ggc aat acc gct gat ggt gtg cgc cta agt ttg 3427 Asn Gly Trp Val Asp Gly Asn Thr Ala Asp Gly Val Arg Leu Ser Leu 1095 1100 1105 gca cag gac ttc tcc gag att tat gtt ttc aac ctt cgt ggc aat tcc 3475 Ala Gln Asp Phe Ser Glu Ile Tyr Val Phe Asn Leu Arg Gly Asn Ser 1110 1115 1120 1125 cga aca ggt ggt gat ttg gct aag cgc gag ggc ggc aac gtc ttt aat 3523 Arg Thr Gly Gly Asp Leu Ala Lys Arg Glu Gly Gly Asn Val Phe Asn 1130 1135 1140 gtc cgt gtg ggt act caa atc att gtt gcc gtg aaa aac cca caa ttg 3571 Val Arg Val Gly Thr Gln Ile Ile Val Ala Val Lys Asn Pro Gln Leu 1145 1150 1155 tct ggt tgc agg att ctt tat aaa gat att ggt gac aat ctc agc gcg 3619 Ser Gly Cys Arg Ile Leu Tyr Lys Asp Ile Gly Asp Asn Leu Ser Ala 1160 1165 1170 gat gcg aag ttg aac gag att gcc gtt gcc aca att gag ggc gct gag 3667 Asp Ala Lys Leu Asn Glu Ile Ala Val Ala Thr Ile Glu Gly Ala Glu 1175 1180 1185 tgg cag act att tcg cct aat gaa tat gga gat tgg atc agc cag cgc 3715 Trp Gln Thr Ile Ser Pro Asn Glu Tyr Gly Asp Trp Ile Ser Gln Arg 1190 1195 1200 1205 tct gta gat ttt gat acc tgg cct gta ctc ggt gat aag aaa aac aaa 3763 Ser Val Asp Phe Asp Thr Trp Pro Val Leu Gly Asp Lys Lys Asn Lys 1210 1215 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Met Ser Leu Tyr Arg Pro Phe Phe 1320 1325 1330 cct caa cag aca tac ttc cat gtt tca ttg aac cag cgt cga tac cag 4147 Pro Gln Gln Thr Tyr Phe His Val Ser Leu Asn Gln Arg Arg Tyr Gln 1335 1340 1345 tta ccg tca atg ttc ccg acc ccg gaa cat gac aac cag ggc ttt tat 4195 Leu Pro Ser Met Phe Pro Thr Pro Glu His Asp Asn Gln Gly Phe Tyr 1350 1355 1360 1365 atc gtc aac cca ggt agt gcc aag cca ttc tct acc ctt gca aca aat 4243 Ile Val Asn Pro Gly Ser Ala Lys Pro Phe Ser Thr Leu Ala Thr Asn 1370 1375 1380 cta ctt cca gat ctt gct atg tgg ggt tct aac gcc gga cag ttc ttt 4291 Leu Leu Pro Asp Leu Ala Met Trp Gly Ser Asn Ala Gly Gln Phe Phe 1385 1390 1395 acc cga tgg act tgg gaa ccc atc gaa act cga gaa ggc gaa tta gac 4339 Thr Arg Trp Thr Trp Glu Pro Ile Glu Thr Arg Glu Gly Glu Leu Asp 1400 1405 1410 ttc ggt aat gga ctt ttc tcc aca acc cca aaa aag gga gtt gaa ggc 4387 Phe Gly Asn Gly Leu Phe Ser Thr Thr Pro Lys Lys Gly Val Glu Gly 1415 1420 1425 gag atc ctt gac ggt tac cgg cgc gtc gat aac atc acc gac gag 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atg aag tgg gct aag gtt cgt gat cca gag acc aag aaa 4771 Val Thr Lys Met Lys Trp Ala Lys Val Arg Asp Pro Glu Thr Lys Lys 1545 1550 1555 ttg gtg gag gac cat acc acc ttg att tac aac agc tca atc acc atc 4819 Leu Val Glu Asp His Thr Thr Leu Ile Tyr Asn Ser Ser Ile Thr Ile 1560 1565 1570 agc ggc atc ccc gaa gaa gct gaa aac tat caa cta ggt tca cgt tct 4867 Ser Gly Ile Pro Glu Glu Ala Glu Asn Tyr Gln Leu Gly Ser Arg Ser 1575 1580 1585 gcc atc gca tgg ctt att gac cgt tac cag gtg aag aaa gat aag gcg 4915 Ala Ile Ala Trp Leu Ile Asp Arg Tyr Gln Val Lys Lys Asp Lys Ala 1590 1595 1600 1605 tcc ggc att gtt aat gat ccc aat gat tgg gct gat gaa gtg ggt aac 4963 Ser Gly Ile Val Asn Asp Pro Asn Asp Trp Ala Asp Glu Val Gly Asn 1610 1615 1620 cct cgc tac att gtg gag ctg att gct aag gtc acc cgc gtt gcc gtt 5011 Pro Arg Tyr Ile Val Glu Leu Ile Ala Lys Val Thr Arg Val Ala Val 1625 1630 1635 gag acc atg aga att gta gag gag ctt tgagttttcc tactgcagct 5058 Glu Thr Met Arg Ile Val Glu Glu Leu 1640 1645 tccagaagtg 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355 Arg Thr Gly Phe Gly Thr Arg Lys Ala Thr Lys Arg Ala Tyr Val Thr 70 75 80 85 ctt cgc gaa ggc agc gac tcc atc gac atc ttc agc ggc tcc gtc gct 403 Leu Arg Glu Gly Ser Asp Ser Ile Asp Ile Phe Ser Gly Ser Val Ala 90 95 100 taagacgtcg atagaaaagg acacattatg 433 <210> 48 <211> 101 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 48 Met Ala Thr Ile Ala Asn Pro Arg Asp Ile Ile Ile Ala Pro Val Val 1 5 10 15 Ser Glu Lys Ser Tyr Gly Leu Met Glu Gln Asn Val Tyr Thr Phe Phe 20 25 30 Val Ser Thr Asp Ala Asn Lys Thr Gln Ile Lys Ile Ala Ile Glu Glu 35 40 45 Ile Phe Gly Val Lys Val Ala Ser Val Asn Thr Val Asn Arg Ala Gly 50 55 60 Lys Arg Lys Arg Ser Arg Thr Gly Phe Gly Thr Arg Lys Ala Thr Lys 65 70 75 80 Arg Ala Tyr Val Thr Leu Arg Glu Gly Ser Asp Ser Ile Asp Ile Phe 85 90 95 Ser Gly Ser Val Ala 100 <210> 49 <211> 787 <212> DNA <213> Corynebacterium glutamicum <220> <221> CDS <222> (101)..(757) <223> RXA01966 <400> 49 gctgtccaag gccatgaatt ttgtgtcctc tgttgctcca accgctgtgc tctcccctgt 60 tatgggctgg gtttataaga agatgggtta gtttttaaaa gtg tct gaa tct gaa 115 Val Ser Glu Ser Glu 1 5 aac aac aca aca cca gca gtc gca gct cgc gat gac cgt ctg gtc tgg 163 Asn Asn Thr Thr Pro Ala Val Ala Ala Arg Asp Asp Arg Leu Val Trp 10 15 20 gtc gat ctg gaa atg act ggt cta gat ttg aag cgc cac gtg atc gtg 211 Val Asp Leu Glu Met Thr Gly Leu Asp Leu Lys Arg His Val Ile Val 25 30 35 gag gtt gcg gcg ttg gtc act gac gct aac ctc aac gtt ttg ggc gag 259 Glu Val Ala Ala Leu Val Thr Asp Ala Asn Leu Asn Val Leu Gly Glu 40 45 50 ggc gtg gac ttg gtt gtt cac gca act gaa gaa gag ctc gcg cag atg 307 Gly Val Asp Leu Val Val His Ala Thr Glu Glu Glu Leu Ala Gln Met 55 60 65 gat gat ttt gtc acc aac atg cac gaa tcc tct ggg ctg act gag cag 355 Asp Asp Phe Val Thr Asn Met His Glu Ser Ser Gly Leu Thr Glu Gln 70 75 80 85 atc cgg gaa tcc gcg gtc acg ttg aag gaa gcc gaa gat gct gtg ctc 403 Ile Arg Glu Ser Ala Val Thr Leu Lys Glu Ala Glu Asp Ala Val Leu 90 95 100 gca ttg att gaa aag cac tgc gat cca gcc cat cct gca ccg cta gct 451 Ala Leu Ile Glu Lys His Cys Asp Pro Ala His Pro Ala Pro Leu Ala 105 110 115 ggt aac tcc att gcc act gac cgc gcg ttt atc cgc gaa cat atg cca 499 Gly Asn Ser Ile Ala Thr Asp Arg Ala Phe Ile Arg Glu His Met Pro 120 125 130 cgt ctt gat gag gcc ctg cat tac cgc atg gtg gat gtg tcc tcg gtg 547 Arg Leu Asp Glu Ala Leu His Tyr Arg Met Val Asp Val Ser Ser Val 135 140 145 aag gaa ttg gcg cgt cgc tgg tac cca cgc gtg tac tac aag cag ccg 595 Lys Glu Leu Ala Arg Arg Trp Tyr Pro Arg Val Tyr Tyr Lys Gln Pro 150 155 160 165 gag aag ggt ttg gcg cac cgc gcg ttg gcg gac att gtg gag tcg att 643 Glu Lys Gly Leu Ala His Arg Ala Leu Ala Asp Ile Val Glu Ser Ile 170 175 180 cgg gag ttg gat tac tac cgt cgc tca ttt ttt gtt gca gag cct ggt 691 Arg Glu Leu Asp Tyr Tyr Arg Arg Ser Phe Phe Val Ala Glu Pro Gly 185 190 195 cct acc tct gag cag tgc gca gat gat gcg cag gca gcg gtg gac cgt 739 Pro Thr Ser Glu Gln Cys Ala Asp Asp Ala Gln Ala Ala Val Asp Arg 200 205 210 ttt gca ccc tac ttt gat tagagggttt taagcagcct ggtgagttcg 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caa gtt cat gtc acc acc gat gtc atg agt gat 355 Ile Asp Gly Val Gly Gln Val His Val Thr Thr Asp Val Met Ser Asp 70 75 80 85 gaa cag cgc cgt gcg ctc cgc gtc tcc ctg cgc ggt gaa act tct gag 403 Glu Gln Arg Arg Ala Leu Arg Val Ser Leu Arg Gly Glu Thr Ser Glu 90 95 100 cca gtg att cca ttc gct cag cct ggt tcc act acc cgc gtt tac gct 451 Pro Val Ile Pro Phe Ala Gln Pro Gly Ser Thr Thr Arg Val Tyr Ala 105 110 115 gtt gct tcc ggc aaa ggt ggc gta gga aaa tcc tcc atg acg gtg aac 499 Val Ala Ser Gly Lys Gly Gly Val Gly Lys Ser Ser Met Thr Val Asn 120 125 130 ttg gct gca gcc cta gcc aag cgc ggg ctg tct gtg gga att ttg gat 547 Leu Ala Ala Ala Leu Ala Lys Arg Gly Leu Ser Val Gly Ile Leu Asp 135 140 145 gcc gat att tac gga cac tca gtg ccc gga atg ctc ggc tcg gac caa 595 Ala Asp Ile Tyr Gly His Ser Val Pro Gly Met Leu Gly Ser Asp Gln 150 155 160 165 cgc cca cac cag gtc gat gac atg atc atg cct ccc cag gcg cac ggc 643 Arg Pro His Gln Val Asp Asp Met Ile Met Pro Pro Gln Ala His Gly 170 175 180 gtg aag atg ata tcc att gct cac ttc acc gaa gga aat gct cct gtg 691 Val Lys Met Ile Ser Ile Ala His Phe Thr Glu Gly Asn Ala Pro Val 185 190 195 gtg tgg cgt gga cca atg ctg cac cgt gcc atc cag caa ttc ctc act 739 Val Trp Arg Gly Pro Met Leu His Arg Ala Ile Gln Gln Phe Leu Thr 200 205 210 gac gtg ttc tgg ggc gac ctg gat att ttg ctg ctg gat ctt cct cca 787 Asp Val Phe Trp Gly Asp Leu Asp Ile Leu Leu Leu Asp Leu Pro Pro 215 220 225 gga act ggt gac atc gcc atc acc gtt gcc caa ttg atc ccg aat gct 835 Gly Thr Gly Asp Ile Ala Ile Thr Val Ala Gln Leu Ile Pro Asn Ala 230 235 240 245 gag ttg ctc att gtg acc act cct cag gct gcc gca gct gag gtt gcc 883 Glu Leu Leu Ile Val Thr Thr Pro Gln Ala Ala Ala Ala Glu Val Ala 250 255 260 gag cga gca gga acg atc tct gtg cag acc aac cag aag gtt gct ggc 931 Glu Arg Ala Gly Thr Ile Ser Val Gln Thr Asn Gln Lys Val Ala Gly 265 270 275 gtg att gaa aac atg tct gcc atg gtg ctt cct gat ggc acc acc atg 979 Val Ile Glu Asn Met Ser Ala Met Val Leu Pro Asp Gly Thr Thr Met 280 285 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Ile Pro Asn Ala Glu Leu Leu Ile Val Thr Thr Pro Gln Ala Ala 245 250 255 Ala Ala Glu Val Ala Glu Arg Ala Gly Thr Ile Ser Val Gln Thr Asn 260 265 270 Gln Lys Val Ala Gly Val Ile Glu Asn Met Ser Ala Met Val Leu Pro 275 280 285 Asp Gly Thr Thr Met Asp Val Phe Gly Thr Gly Gly Gly Gln Lys Ile 290 295 300 Ala Asp Arg Leu Thr Ala Val Thr Gly Glu Glu Val Lys Val Ile Gly 305 310 315 320 Ser Val Pro Leu Asp Pro Asn Leu Arg Ile Gly Gly Asp Val Gly Asn 325 330 335 Pro Ile Ala Ile Ser Glu Pro His Ser Pro Thr Ala Ala Ala Ile Asn 340 345 350 Glu Ile Ala Glu His Leu Ala His Arg Lys Val Ser Leu Val Gly Lys 355 360 365 Thr Leu Gly Leu Gly Val Lys 370 375 <210> 53 <211> 3595 <212> DNA <213> Corynebacterium glutamicum <220> <221> CDS <222> (101)..(3565) <223> RXA02082 <400> 53 gctcgtatcg cagaccaggt catgtggaca cagttattga gcaatggggc gagccgcgtg 60 acgttgaagg ctttgtggag cgctagactt taaccccgtt atg tat ttg aaa tcg 115 Met Tyr Leu Lys Ser 1 5 ttg acg ctc aag ggg ttt aag tct ttc gcg tct gcg acg acc ctg aaa 163 Leu Thr Leu Lys Gly Phe Lys Ser Phe Ala Ser Ala Thr Thr Leu Lys 10 15 20 ttt gag cca ggc att tgt gcc gtg gtg ggt ccg aat ggt tca ggc aaa 211 Phe Glu Pro Gly Ile Cys Ala Val Val Gly Pro Asn Gly Ser Gly Lys 25 30 35 tcc aat gtg gtt gat gcg ctg gcc tgg gtg atg ggt gaa ggt tct gcg 259 Ser Asn Val Val Asp Ala Leu Ala Trp Val Met Gly Glu Gly Ser Ala 40 45 50 aag acc ttg cgt ggc ggc aaa atg gaa gat gtc att ttt gct ggc gcg 307 Lys Thr Leu Arg Gly Gly Lys Met Glu Asp Val Ile Phe Ala Gly Ala 55 60 65 ggc gat cgt aaa ccg ttg ggt cgc gca gaa gtc acg ctg acc att gat 355 Gly Asp Arg Lys Pro Leu Gly Arg Ala Glu Val Thr Leu Thr Ile Asp 70 75 80 85 aac tct gat ggc gca ctg ccc att gag tac acc gaa gtg tcg gtg acc 403 Asn Ser Asp Gly Ala Leu Pro Ile Glu Tyr Thr Glu Val Ser Val Thr 90 95 100 aga cgg atg ttc cgt gat ggt gca agt gaa tat gag atc aat ggg gcg 451 Arg Arg Met Phe Arg Asp Gly Ala Ser Glu Tyr Glu Ile Asn Gly Ala 105 110 115 aaa gct cga ttg atg gat atc cag gag ctg ttg tcg gat acc ggt att 499 Lys Ala Arg Leu Met Asp Ile Gln Glu Leu Leu Ser Asp Thr Gly Ile 120 125 130 ggc cgt gaa atg cac atc atg gtg ggg cag gga aag ctc gca gag att 547 Gly Arg Glu Met His Ile Met Val Gly Gln Gly Lys Leu Ala Glu Ile 135 140 145 ttg gag tcc cgc ccc gaa gag cgc cga gcg tat atc gaa gaa gct gcg 595 Leu Glu Ser Arg Pro Glu Glu Arg Arg Ala Tyr Ile Glu Glu Ala Ala 150 155 160 165 ggt gtg ctc aag cac cgg cgc agg aaa gaa aag gcg cag cgc aaa ctt 643 Gly Val Leu Lys His Arg Arg Arg Lys Glu Lys Ala Gln Arg Lys Leu 170 175 180 cag ggc atg cag gtc aat ctt gat cgt ttg cag gat ctg acc cat gag 691 Gln Gly Met Gln Val Asn Leu Asp Arg Leu Gln Asp Leu Thr His Glu 185 190 195 ttg gcc aag cag ctc aag ccg ttg gct agg cag gcg gaa gca gcg cag 739 Leu Ala Lys Gln Leu Lys Pro Leu Ala Arg Gln Ala Glu Ala Ala Gln 200 205 210 cgt gcg gcg acg gtg cag gct gat ttg cgt gat gcg cgt ttc cag att 787 Arg Ala Ala Thr Val Gln Ala Asp Leu Arg Asp Ala Arg Phe Gln Ile 215 220 225 gct ggc ttt gag atc gtg aag ctc tcg gaa aag ctg gaa acc tct act 835 Ala Gly Phe Glu Ile Val Lys Leu Ser Glu Lys Leu Glu Thr Ser Thr 230 235 240 245 gag cgc gag aaa atg att cgt gag cag gcg gaa gca gca caa gag cag 883 Glu Arg Glu Lys Met Ile Arg Glu Gln Ala Glu Ala Ala Gln Glu Gln 250 255 260 ctg gaa gaa gcc acc aca act cag atg gaa gtg gag atg gag ttg gcg 931 Leu Glu Glu Ala Thr Thr Thr Gln Met Glu Val Glu Met Glu Leu Ala 265 270 275 gag atc act ccg cag gct gaa gct gcg caa cag ttg tgg ttt gat ttg 979 Glu Ile Thr Pro Gln Ala Glu Ala Ala Gln Gln Leu Trp Phe Asp Leu 280 285 290 tct tcg ctg gct gag cgg gtg tcg gca acg atg cgt att gct gca gac 1027 Ser Ser Leu Ala Glu Arg Val Ser Ala Thr Met Arg Ile Ala Ala Asp 295 300 305 cgt gcg agt tca ggt gcc gcg gat gtg ccg tat gcg ggc cag gat cct 1075 Arg Ala Ser Ser Gly Ala Ala Asp Val Pro Tyr Ala Gly Gln Asp Pro 310 315 320 325 gat gag ttg ctt ggt cgg gcc gaa act gct gac aaa gaa tta gaa gaa 1123 Asp Glu Leu Leu Gly Arg Ala Glu Thr Ala Asp Lys Glu Leu Glu Glu 330 335 340 ctc gag atg gcc gtg gaa atg acc acc gag cgt ttg acc tcc att caa 1171 Leu Glu Met Ala Val Glu Met Thr Thr Glu Arg Leu Thr Ser Ile Gln 345 350 355 gag gaa gcc gag gat aag gcc gcg cag gct cgt gag gct gag cgt gaa 1219 Glu Glu Ala Glu Asp Lys Ala Ala Gln Ala Arg Glu Ala Glu Arg Glu 360 365 370 cac ttg gcg cag gtc agg gcg att tct gat cgt cgt gaa ggt gtt gtg 1267 His Leu Ala Gln Val Arg Ala Ile Ser Asp Arg Arg Glu Gly Val Val 375 380 385 cgc ctg ctt gca tct gag gaa tct ttg cgc acc cag cac acg tca gca 1315 Arg Leu Leu Ala Ser Glu Glu Ser Leu Arg Thr Gln His Thr Ser Ala 390 395 400 405 gag gag gaa gct gag cga ctc agt gag cag ctt gag gag ttc atc ggc 1363 Glu Glu Glu Ala Glu Arg Leu Ser Glu Gln Leu Glu Glu Phe Ile Gly 410 415 420 cgc att ttg gat gtg gaa cgt gaa cgt cgc ctc acc gat gag cgt aaa 1411 Arg Ile Leu Asp Val Glu Arg Glu Arg Arg Leu Thr Asp Glu Arg Lys 425 430 435 cag ggc gtt gac acg gat cgt gcg ccc ttg gaa gaa gcc ctc aaa cag 1459 Gln Gly Val Asp Thr Asp Arg Ala Pro Leu Glu Glu Ala Leu Lys Gln 440 445 450 gca aaa cat gaa gcc gaa gca gca gag act cgt ctt gag gag ctt cgt 1507 Ala Lys His Glu Ala Glu Ala Ala Glu Thr Arg Leu Glu Glu Leu Arg 455 460 465 act aag cgc agc gat ctg gaa aaa gaa gta tcc agg ttg cag tcg cgc 1555 Thr Lys Arg Ser Asp Leu Glu Lys Glu Val Ser Arg Leu Gln Ser Arg 470 475 480 485 att gag acg ctt aac caa aat agg cca cgt tcc gat gct gct gat gtg 1603 Ile Glu Thr Leu Asn Gln Asn Arg Pro Arg Ser Asp Ala Ala Asp Val 490 495 500 gtg gat tac ccg cag ctg gcc acg ttg att cga ccg caa cga aac gtc 1651 Val Asp Tyr Pro Gln Leu Ala Thr Leu Ile Arg Pro Gln Arg Asn Val 505 510 515 gat aag gct ctc gct gcc gcc ctg ggt gcg cat gcc gag gcg ctg gct 1699 Asp Lys Ala Leu Ala Ala Ala Leu Gly Ala His Ala Glu Ala Leu Ala 520 525 530 ggc gag gct gcg gaa ggg ctc gtc gag aag ctt atc gac gcc ggc gtt 1747 Gly Glu Ala Ala Glu Gly Leu Val Glu Lys Leu Ile Asp Ala Gly Val 535 540 545 gca cgc acc atc atc gtt gat ggc acg cag gct ggc ggc gca tgg cgc 1795 Ala Arg Thr Ile Ile Val Asp Gly Thr Gln Ala Gly Gly Ala Trp Arg 550 555 560 565 ctg gac gcg aac att ccg gcc ggg gcg agc tgg ctg ctc gac cat gtt 1843 Leu Asp Ala Asn Ile Pro Ala Gly Ala Ser Trp Leu Leu Asp His Val 570 575 580 gat ctg gat ccg gcg att gcc ggc ccg gta aac cgg ctg ctt gcc gac 1891 Asp Leu Asp Pro Ala Ile Ala Gly Pro Val Asn Arg Leu Leu Ala Asp 585 590 595 gtt gtg ctt gtc gac gac ccc tcc ctc ggc cgc caa gca atc gag gat 1939 Val Val Leu Val Asp Asp Pro Ser Leu Gly Arg Gln Ala Ile Glu Asp 600 605 610 gat ccc cgt ctg cgt gcc gtt gac cgc aat ggt gtg ctc atc ggc gct 1987 Asp Pro Arg Leu Arg Ala Val Asp Arg Asn Gly Val Leu Ile Gly Ala 615 620 625 ggg tgg att cag gtc ggc acc gaa acc tcg act gtg gaa atc aca gct 2035 Gly Trp Ile Gln Val Gly Thr Glu Thr Ser Thr Val Glu Ile Thr Ala 630 635 640 645 caa att gag gaa gca gaa gct caa ctt gct gcg gcc tct gcc gcc ttg 2083 Gln Ile Glu Glu Ala Glu Ala Gln Leu Ala Ala Ala Ser Ala Ala Leu 650 655 660 gac gac att gcc ggc act ttt gat ggc gcc ctc cac gct gcc gac aac 2131 Asp Asp Ile Ala Gly Thr Phe Asp Gly Ala Leu His Ala Ala 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gtggggatat ccgcttcgcc acgaaggaaa aatttacttt ccacaacccg ctagaaaaca 60 catcatcgcc ttaggtttct ctgtagaagt taggaaaaag atg tgt tca ctc agc 115 Met Cys Ser Leu Ser 1 5 aaa ttc tta atg tac agg caa ttg atg agt tca aga att ggc aat ttt 163 Lys Phe Leu Met Tyr Arg Gln Leu Met Ser Ser Arg Ile Gly Asn Phe 10 15 20 ctt ata aat cgc att tcc acg ggc ctg ccc gta gaa aat att atc cct 211 Leu Ile Asn Arg Ile Ser Thr Gly Leu Pro Val Glu Asn Ile Ile Pro 25 30 35 cac ctg caa gaa gct ttt tcg gcc gga cct aaa aac ctt gtc att cag 259 His Leu Gln Glu Ala Phe Ser Ala Gly Pro Lys Asn Leu Val Ile Gln 40 45 50 gcc cct ccc ggc aca gga aaa acg aca ctt ctc ccc cca tta gta gct 307 Ala Pro Pro Gly Thr Gly Lys Thr Thr Leu Leu Pro Pro Leu Val Ala 55 60 65 aac atc tta tgt aat gaa gga gcg gga aat gcc acc cca acc aag gtt 355 Asn Ile Leu Cys Asn Glu Gly Ala Gly Asn Ala Thr Pro Thr Lys Val 70 75 80 85 tta gta acg gca cct cgt cgt gtg gcc gtc cga gca gca gct cgc aga 403 Leu Val Thr Ala Pro Arg Arg Val Ala Val Arg Ala Ala Ala Arg Arg 90 95 100 ctc gcc caa cta gat gat agc cag ctc gga aca aaa gtg gga ttc agc 451 Leu Ala Gln Leu Asp Asp Ser Gln Leu Gly Thr Lys Val Gly Phe Ser 105 110 115 gtg cgt ggt gaa cat att tca ggc tcc cac gtg caa ttt atg acc ccc 499 Val Arg Gly Glu His Ile Ser Gly Ser His Val Gln Phe Met Thr Pro 120 125 130 ggt gtg tta atc cgc cag ctc tta aac aac cca gaa tta ccc ggc atc 547 Gly Val Leu Ile Arg Gln Leu Leu Asn Asn Pro Glu Leu Pro Gly Ile 135 140 145 ggc gct gtg att atc gat gaa gtc cac gaa cgt caa ctc gat tcc gat 595 Gly Ala Val Ile Ile Asp Glu Val His Glu Arg Gln Leu Asp Ser Asp 150 155 160 165 cta ctg cta gga atg ctt gct gaa ctc agt caa ctg cgc gac gat ttc 643 Leu Leu Leu Gly Met Leu Ala Glu Leu Ser Gln Leu Arg Asp Asp Phe 170 175 180 tcc ctc atc gcc atg tcc gca acc tta gat tca gat aaa ttc gca aac 691 Ser Leu Ile Ala Met Ser Ala Thr Leu Asp Ser Asp Lys Phe Ala Asn 185 190 195 tta tta gac gct cag gtc ctt agt gtt gaa gca ccg att ttc ccc tta 739 Leu Leu Asp Ala Gln Val Leu Ser Val Glu Ala Pro Ile Phe Pro Leu 200 205 210 gac att tct tat gct cca gcc cgc gcg cct cgc ctc aat gca aaa ggt 787 Asp Ile Ser Tyr Ala Pro Ala Arg Ala Pro Arg Leu Asn Ala Lys Gly 215 220 225 gtc gac tgg gat ttc ctc gac cac atg gcg cag aaa act cac gat gcg 835 Val Asp Trp Asp Phe Leu Asp His Met Ala Gln Lys Thr His Asp Ala 230 235 240 245 gtg aca cat tca gag cac tct gca ctc att ttc gtc cca ggt gtg cgt 883 Val Thr His Ser Glu His Ser Ala Leu Ile Phe Val Pro Gly Val Arg 250 255 260 gaa att gat cga gta atg agc acg ctc aaa tcg ctc ggc cat aat aat 931 Glu Ile Asp Arg Val Met Ser Thr Leu Lys Ser Leu Gly His Asn Asn 265 270 275 gtt ttc cca ctt cat ggc caa ctc agc ccg acc gaa caa gac cgc gcc 979 Val Phe Pro Leu His Gly Gln Leu Ser Pro Thr Glu Gln Asp Arg Ala 280 285 290 ctc gca ccg tca caa cag cag cgc atc att gtc tcc act ccc gtt gcg 1027 Leu Ala Pro Ser Gln Gln Gln Arg Ile Ile Val Ser Thr Pro Val Ala 295 300 305 gaa agc tcc cta act gtg cct gga gtt cgc atc gtg gtg gat tcc ggc 1075 Glu Ser Ser Leu Thr Val Pro Gly Val Arg Ile Val Val Asp Ser Gly 310 315 320 325 ctc tca cga agc ccc aaa cga gac tct gcc cgc ggc atg aca gga ctg 1123 Leu Ser Arg Ser Pro Lys Arg Asp Ser Ala Arg Gly Met Thr Gly Leu 330 335 340 atc acc agc agt tgc gcg cag gct tca gca ggc caa cgc gca ggt cgc 1171 Ile Thr Ser Ser Cys Ala Gln Ala Ser Ala Gly Gln Arg Ala Gly Arg 345 350 355 gct ggc cgt gaa gga cca gga caa ata atc aga tgc tat tcc gaa gaa 1219 Ala Gly Arg Glu Gly Pro Gly Gln Ile Ile Arg Cys Tyr Ser Glu Glu 360 365 370 gac ttc tcc cac ttc cca cga ttt gtg aca cca gaa atc agc tcc gct 1267 Asp Phe Ser His Phe Pro Arg Phe Val Thr Pro Glu Ile Ser Ser Ala 375 380 385 gac ctc acc caa gca gcc ctc tgg ctc gcc caa tgg gga acg tca cct 1315 Asp Leu Thr Gln Ala Ala Leu Trp Leu Ala Gln Trp Gly Thr Ser Pro 390 395 400 405 gcg gat tta ccg ctt ctt gat caa ccc cct cac gca gcc tgg acg gct 1363 Ala Asp Leu Pro Leu Leu Asp Gln Pro Pro His Ala Ala Trp Thr Ala 410 415 420 gca caa cag atc ctg cgc ctc atc ggc gcg ctt gaa ggt gac gct atc 1411 Ala Gln Gln Ile Leu Arg Leu Ile Gly Ala Leu Glu Gly Asp Ala Ile 425 430 435 acg agc ctg gga cat cgc tta tcg acg ctt ccc ctc tgc cct caa ctc 1459 Thr Ser Leu Gly His Arg Leu Ser Thr Leu Pro Leu Cys Pro Gln Leu 440 445 450 agc gct tct ctc ctc cgc ttc ggt gaa caa tcc gca aaa atc ttg gcg 1507 Ser Ala Ser Leu Leu Arg Phe Gly Glu Gln Ser Ala Lys Ile Leu Ala 455 460 465 gtg gtg tcc gaa aac ccg cag ggg gac gtc gaa aag caa caa ccc gac 1555 Val Val Ser Glu Asn Pro Gln Gly Asp Val Glu Lys Gln Gln Pro Asp 470 475 480 485 aag cgt gaa gtg gaa cgc ctt cgc cgt ttg gca cct gcg tcg gtt gga 1603 Lys Arg Glu Val Glu Arg Leu Arg Arg Leu Ala Pro Ala Ser Val Gly 490 495 500 aaa gcg agt gcg ggg caa atc gta ggc gct gca ttc ccg cag ctc atc 1651 Lys Ala Ser Ala Gly Gln Ile Val Gly Ala Ala Phe Pro Gln Leu Ile 505 510 515 ggc cga aaa ata gac aat gga gaa tac ctt tta gcc agt gga acc cgc 1699 Gly Arg Lys Ile Asp Asn Gly Glu Tyr Leu Leu Ala Ser Gly Thr Arg 520 525 530 gca cgc ctc atg gat tca gat ctc aaa gat gcc gaa tgg atc tcc gtt 1747 Ala Arg Leu Met Asp Ser Asp Leu Lys Asp Ala Glu Trp Ile Ser Val 535 540 545 gct gca att aac cgc tca caa aat tct gcc atc atc cgc gcc gcc gcc 1795 Ala Ala Ile Asn Arg Ser Gln Asn Ser Ala Ile Ile Arg Ala Ala Ala 550 555 560 565 cgc att tca gag gac gat gcc ata gac atc atc gga gtc gtg gaa gaa 1843 Arg Ile Ser Glu Asp Asp Ala Ile Asp Ile Ile Gly Val Val Glu Glu 570 575 580 acc cgc gcg att ttt gtc aac gga aaa gtc caa gcc cgg aag gtc aaa 1891 Thr Arg Ala Ile Phe Val Asn Gly Lys Val Gln Ala Arg Lys Val Lys 585 590 595 gca gca ggc gcg atc gaa tta agt tcc act ccg aca aaa cca aca ccc 1939 Ala Ala Gly Ala Ile Glu Leu Ser Ser Thr Pro Thr Lys Pro Thr Pro 600 605 610 gcc gaa gcc tcg gaa aca atc gcc aca gcc ctt gcc aaa ggc gga atc 1987 Ala Glu Ala Ser Glu Thr Ile Ala Thr Ala Leu Ala Lys Gly Gly Ile 615 620 625 gac cta ttc cac ttc tcc gac aaa gcg gca tcc ttg cgt gac cga ctg 2035 Asp Leu Phe His Phe Ser Asp Lys Ala Ala Ser Leu Arg Asp Arg Leu 630 635 640 645 aaa ttc atc cac gaa cac cgt ggc gaa 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ctt gca gtt acc gat gac ctg cgt agt ttc tgg tct 2419 Ala Gly Arg Pro Leu Ala Val Thr Asp Asp Leu Arg Ser Phe Trp Ser 760 765 770 ggc ccg tac agc caa gtc cgt gca gaa atg cgg ggc cgg tac ccc aaa 2467 Gly Pro Tyr Ser Gln Val Arg Ala Glu Met Arg Gly Arg Tyr Pro Lys 775 780 785 cac ccg tgg ccg gag gat cca tgg acc gct cct gcc act gcg cgc acc 2515 His Pro Trp Pro Glu Asp Pro Trp Thr Ala Pro Ala Thr Ala Arg Thr 790 795 800 805 aag aat cgc atg tagttttggc acgacttgat gtgagccgat 2557 Lys Asn Arg Met <210> 58 <211> 809 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 58 Met Cys Ser Leu Ser Lys Phe Leu Met Tyr Arg Gln Leu Met Ser Ser 1 5 10 15 Arg Ile Gly Asn Phe Leu Ile Asn Arg Ile Ser Thr Gly Leu Pro Val 20 25 30 Glu Asn Ile Ile Pro His Leu Gln Glu Ala Phe Ser Ala Gly Pro Lys 35 40 45 Asn Leu Val Ile Gln Ala Pro Pro Gly Thr Gly Lys Thr Thr Leu Leu 50 55 60 Pro Pro Leu Val Ala Asn Ile Leu Cys Asn Glu Gly Ala Gly Asn Ala 65 70 75 80 Thr Pro Thr Lys Val Leu Val Thr Ala Pro Arg Arg Val Ala Val Arg 85 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gac cag gca gat cgt ttg gcg cgg ctc att cac aat aac cca gca 595 Asn Asp Gln Ala Asp Arg Leu Ala Arg Leu Ile His Asn Asn Pro Ala 150 155 160 165 ctt aaa ggt gtt acc gcc ggt att tat acc ggt gaa gcc aag ggc aat 643 Leu Lys Gly Val Thr Ala Gly Ile Tyr Thr Gly Glu Ala Lys Gly Asn 170 175 180 cgc acg cag atg ggc gaa agg gag ctt att aat gat ccc caa gcc atg 691 Arg Thr Gln Met Gly Glu Arg Glu Leu Ile Asn Asp Pro Gln Ala Met 185 190 195 cgg gtt agt ccc cca gat att ttg ctc acc aac tac aaa atg ttg gat 739 Arg Val Ser Pro Pro Asp Ile Leu Leu Thr Asn Tyr Lys Met Leu Asp 200 205 210 cag ctc ttg ctg cgc agc gtc gac cgc gaa atg tgg caa aaa tcc gcc 787 Gln Leu Leu Leu Arg Ser Val Asp Arg Glu Met Trp Gln Lys Ser Ala 215 220 225 acc tct ttg cag tat tta gta ctt gat gag ttc cac act tat gac ggt 835 Thr Ser Leu Gln Tyr Leu Val Leu Asp Glu Phe His Thr Tyr Asp Gly 230 235 240 245 gct caa ggt aca gat gtg gcg ttg ttg ttg cgg cgt ttg ggg ctc atg 883 Ala Gln Gly Thr Asp Val Ala Leu Leu Leu Arg Arg Leu Gly Leu Met 250 255 260 ctg aaa tcc cag cag cct gct aat ttt ttg gat gat agt gcc atg cac 931 Leu Lys Ser Gln Gln Pro Ala Asn Phe Leu Asp Asp Ser Ala Met His 265 270 275 cgg cca ttg ggc att att acg cca gtg gct acc tca gca acc ttg ggt 979 Arg Pro Leu Gly Ile Ile Thr Pro Val Ala Thr Ser Ala Thr Leu Gly 280 285 290 tct ggt gat tcc ggc tcc ccc atg ttg gat ttt gct tac acc att ttt 1027 Ser Gly Asp Ser Gly Ser Pro Met Leu Asp Phe Ala Tyr Thr Ile Phe 295 300 305 ggt gag cgt ttt cca gct gat gcc atc gtc ggg gaa act cgc ctg gag 1075 Gly Glu Arg Phe Pro Ala Asp Ala Ile Val Gly Glu Thr Arg Leu Glu 310 315 320 325 ctg gat caa tgg cgc gca gaa att gcc cag aat ttt ggt gcc cca gca 1123 Leu Asp Gln Trp Arg Ala Glu Ile Ala Gln Asn Phe Gly Ala Pro Ala 330 335 340 gtt agc gag ccc cgt gag cta ccc act gtg gaa gat att gag gtg gtt 1171 Val Ser Glu Pro Arg Glu Leu Pro Thr Val Glu Asp Ile Glu Val Val 345 350 355 tta gat acc atc gcc aca gct caa cat gag gac gat tat gca cag ctc 1219 Leu Asp Thr Ile Ala Thr Ala Gln His Glu Asp Asp 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Arg Gly Val Asp Gly Thr Ser Ala Val Leu Trp Phe His Ser Ala 585 590 595 agc aat gaa ctc agc acg cgc caa ccc agc cca gaa gaa gaa caa tca 1939 Ser Asn Glu Leu Ser Thr Arg Gln Pro Ser Pro Glu Glu Glu Gln Ser 600 605 610 ggt tct tct atc gca gtg ctc acc cac ttt ggc cct gag gca gac gat 1987 Gly Ser Ser Ile Ala Val Leu Thr His Phe Gly Pro Glu Ala Asp Asp 615 620 625 ctc tcc gcc aaa cag acc tgc cct tcc tgt ggt gat gtt gat tcc atc 2035 Leu Ser Ala Lys Gln Thr Cys Pro Ser Cys Gly Asp Val Asp Ser Ile 630 635 640 645 cgt tat atc gga tcg gga atc tct acc ctg ctc tct gtc tca ctc tcc 2083 Arg Tyr Ile Gly Ser Gly Ile Ser Thr Leu Leu Ser Val Ser Leu Ser 650 655 660 aat ctt ttt ggt atg gcc gat ttg gat agc gct gag aaa aag acg ctg 2131 Asn Leu Phe Gly Met Ala Asp Leu Asp Ser Ala Glu Lys Lys Thr Leu 665 670 675 gtc ttt gcc gat tcc gtg caa gat gcc gcg cac cgc gcc ggg tac gtc 2179 Val Phe Ala Asp Ser Val Gln Asp Ala Ala His Arg Ala Gly Tyr Val 680 685 690 caa gca cgt tcc cgc gct ttt gcc ctt cgt acc tat acc 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cag gtg ctt ggc atc agc acc cac gat gcc gcc acc gcc atc 2899 Thr Ser Gln Val Leu Gly Ile Ser Thr His Asp Ala Ala Thr Ala Ile 920 925 930 aca aag ctt ttc gac gct tta agc aac cgc agc att ctc tcc tca ata 2947 Thr Lys Leu Phe Asp Ala Leu Ser Asn Arg Ser Ile Leu Ser Ser Ile 935 940 945 tct acc gac agc ggc gga aaa atc tac tgc ctc gag gcc gaa cgc atc 2995 Ser Thr Asp Ser Gly Gly Lys Ile Tyr Cys Leu Glu Ala Glu Arg Ile 950 955 960 965 cgt att ttt agc gaa gac cat ccc gaa gtt ctg gaa tgc agc gtg tgc 3043 Arg Ile Phe Ser Glu Asp His Pro Glu Val Leu Glu Cys Ser Val Cys 970 975 980 cat gcc caa act ggt gta act gat cat gtg cgt gaa ctt ctt gat ggc 3091 His Ala Gln Thr Gly Val Thr Asp His Val Arg Glu Leu Leu Asp Gly 985 990 995 gct ccg tgt ttt agc cct agt tgt ggg ggc gtt ctc cat acc gag gaa 3139 Ala Pro Cys Phe Ser Pro Ser Cys Gly Gly Val Leu His Thr Glu Glu 1000 1005 1010 gta gaa gac aac tac tac cgc agg ctt tat tcc gca att gaa ccg cgc 3187 Val Glu Asp Asn Tyr Tyr Arg Arg Leu Tyr Ser Ala Ile Glu Pro 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cct tat acc cgc act gcc acg ctc ctc cag act 5155 Pro Glu Cys Leu Leu Pro Tyr Thr Arg Thr Ala Thr Leu Leu Gln Thr 1670 1675 1680 1685 tcc cgc gca gct gca gaa aaa gcc ttg cgc gca att ttg ctc aat agc 5203 Ser Arg Ala Ala Ala Glu Lys Ala Leu Arg Ala Ile Leu Leu Asn Ser 1690 1695 1700 tcg cgc ccc gaa gaa atc act gac ctt tct gca gta ccg gac tgg act 5251 Ser Arg Pro Glu Glu Ile Thr Asp Leu Ser Ala Val Pro Asp Trp Thr 1705 1710 1715 ttc ttg gaa aag cgc cca gag aac act ctt ggc tct cag ttg gaa ctg 5299 Phe Leu Glu Lys Arg Pro Glu Asn Thr Leu Gly Ser Gln Leu Glu Leu 1720 1725 1730 cgt ttc cgc gtg atg ctg cga cgc gcc tta aaa aat cgc cat gcc aaa 5347 Arg Phe Arg Val Met Leu Arg Arg Ala Leu Lys Asn Arg His Ala Lys 1735 1740 1745 ctt gtg gac cgc gtc aac ggc tca aac tct tat gtg gat att gag atg 5395 Leu Val Asp Arg Val Asn Gly Ser Asn Ser Tyr Val Asp Ile Glu Met 1750 1755 1760 1765 agc tcc ggt gtg cgc tgg cgg atg agc gaa caa gtt gat cgt gga tat 5443 Ser Ser Gly Val Arg Trp Arg Met Ser Glu Gln Val Asp 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1415 1420 Gln Ile Leu Glu Val Val Gln Met Arg Lys Val Ser Ser Ala Val Glu 1425 1430 1435 1440 Lys Thr Arg Ala Ala Ile Ser Asp Asp Arg Glu Asp Arg Phe Ser Thr 1445 1450 1455 Arg Phe Asn Gln His Val Ser Phe Val Val Pro Pro Asp Gly His Gly 1460 1465 1470 Lys Ser Trp Tyr Leu Asn Asp Gly Phe Gly Ile Glu His Leu Pro Lys 1475 1480 1485 Val Glu Leu Arg Trp Leu Asn Leu Gly Ile Gly Asn Gly Gln Lys Arg 1490 1495 1500 Arg Leu Gly Gly Phe Glu Val Thr Ser Pro Leu Phe Asn Val Cys Arg 1505 1510 1515 1520 His Cys Gly His Leu Asp Ser Glu Ala Gly Ala Asn Ser Arg Trp Asp 1525 1530 1535 His Arg Pro Trp Cys Pro His Arg Tyr Glu Gln Lys Glu Asp Thr Val 1540 1545 1550 Ser Phe Ala Leu Gly Arg Thr Leu Lys Thr Gln Gly Val Leu Met Leu 1555 1560 1565 Leu Pro Glu Tyr Phe Gly Ser Glu Ala Asp Ser Met Val Val Thr Ser 1570 1575 1580 Leu Ile Ala Ala Ile Lys Leu Gly Phe Arg Glu Val Leu Gly Gly Asp 1585 1590 1595 1600 Pro Asp His Leu Asp Val Thr Ser Val Gln Val Pro Arg Thr Ser Gly 1605 1610 1615 Asp Gly Ala Leu Asp Ala Leu Leu Leu His Asp Gln Val Pro Gly Gly 1620 1625 1630 Thr Gly Tyr Leu Asn Gln Phe Ala Asp Pro Thr Lys Val Arg Glu Leu 1635 1640 1645 Ile Ser Arg Ala Trp Glu Arg Val Ser Arg Cys Gln Cys Gln Tyr Asp 1650 1655 1660 Glu Arg Leu Ala Cys Pro Glu Cys Leu Leu Pro Tyr Thr Arg Thr Ala 1665 1670 1675 1680 Thr Leu Leu Gln Thr Ser Arg Ala Ala Ala Glu Lys Ala Leu Arg Ala 1685 1690 1695 Ile Leu Leu Asn Ser Ser Arg Pro Glu Glu Ile Thr Asp Leu Ser Ala 1700 1705 1710 Val Pro Asp Trp Thr Phe Leu Glu Lys Arg Pro Glu Asn Thr Leu Gly 1715 1720 1725 Ser Gln Leu Glu Leu Arg Phe Arg Val Met Leu Arg Arg Ala Leu Lys 1730 1735 1740 Asn Arg His Ala Lys Leu Val Asp Arg Val Asn Gly Ser Asn Ser Tyr 1745 1750 1755 1760 Val Asp Ile Glu Met Ser Ser Gly Val Arg Trp Arg Met Ser Glu Gln 1765 1770 1775 Val Asp Arg Gly Tyr Thr Arg Pro Asp Phe Trp Phe Glu Pro Leu Asn 1780 1785 1790 Gly Asn Tyr Pro Thr Val Ala Val Phe Thr Asp Gly Ala Ala Phe His 1795 1800 1805 Ile Ser Ser Ala Asn Tyr Arg Leu Asp Gly Asp Ile Gln Lys Arg Met 1810 1815 1820 Lys Leu Ala Leu Asp Pro Asp Asn Ile Leu Pro Trp Asn Ile Thr Ser 1825 1830 1835 1840 Leu Asp Leu Asp Arg Phe Ser Asn Pro Ala Ala Gln Gly Glu Glu Pro 1845 1850 1855 Ala Trp Phe Ser Pro Ile Gly Arg Gln Leu Ser Lys Ala Asn Leu Ile 1860 1865 1870 Leu Asp Pro Gln Ser Thr Ala Leu Leu Ala Ala Thr Pro Met Asp Gln 1875 1880 1885 Leu Leu Ala Phe Leu Asp Asn Pro Ala Ala Ser Ser Trp Lys Glu Phe 1890 1895 1900 Ala His Ile Ala Ala Ala His Met Leu Gly His Asn Pro Gln Lys Asn 1905 1910 1915 1920 Gly Asp Gly Ile Val Gly Thr Phe Arg Asn Lys Ile Ser Leu Arg Ala 1925 1930 1935 Thr Met Val Asn Arg Glu Leu Arg Ala Arg Gln Leu Trp Leu Ala Pro 1940 1945 1950 Thr Thr Pro Glu Glu Leu Glu Val Asp Thr Trp Thr Ala Phe Leu Asn 1955 1960 1965 Leu Ala Asn Leu Met Trp Leu Ala Pro Glu Ser Val Asp Val Ser Thr 1970 1975 1980 Asn Gly Ser Pro His Lys Ile Asp Ile Val Pro Ala Pro Ala Ala Pro 1985 1990 1995 2000 Leu Ala Val Glu Val Pro Glu Leu Trp Ala Pro Ile Leu Asp Gly Phe 2005 2010 2015 Thr Ala Asp Glu Asp Glu Glu Ala Glu Gly Ala Leu Gln Ile Leu Ala 2020 2025 2030 Lys Glu His Ala Leu Val Pro Glu Thr Thr Gly Asp Glu Leu Ser Ser 2035 2040 2045 Ile Pro Thr Ile Ala Thr Trp Pro Ser Val Lys Ile Ala Leu Leu Tyr 2050 2055 2060 Glu Ser Asp Pro Asp Glu Pro Leu Glu Asp Asp Leu Lys Ala Glu Gly 2065 2070 2075 2080 Trp Thr Leu Leu Phe Ala Asn Asp Leu Glu Thr Ser Asp Ile Pro Ala 2085 2090 2095 Ala Leu Arg Pro 2100 <210> 61 <211> 4930 <212> DNA <213> Corynebacterium glutamicum <220> <221> CDS <222> (101)..(4900) <223> RXA02363 <400> 61 ttcctcgtct cacaggattt gacctggtga gtgccgaagc gaaagtgctc agcgcaataa 60 acaacaacaa tataatccca actgcaattt aaggatcact atg tcc aac gca cct 115 Met Ser Asn Ala Pro 1 5 aaa aag agc ttt tca gac ttc ttt tcc cca cta gca acc gaa act gaa 163 Lys Lys Ser Phe Ser Asp Phe Phe Ser Pro Leu Ala Thr Glu Thr Glu 10 15 20 aca act att acg ctc tcg gca att gag gta gag aaa gtc aat gcc aag 211 Thr Thr Ile Thr Leu Ser Ala Ile Glu Val Glu Lys Val Asn Ala Lys 25 30 35 act gaa gtc act cga aat att gat cca gtc gaa gca gca gaa caa atc 259 Thr Glu Val Thr Arg Asn Ile Asp Pro Val Glu Ala Ala Glu Gln Ile 40 45 50 agc cgc gac tac cgc cgc tac ctg aaa aca ctt att agc ccc agt aat 307 Ser Arg Asp Tyr Arg Arg Tyr Leu Lys Thr Leu Ile Ser Pro Ser Asn 55 60 65 aag aca att gcg gca gaa ttc aac cga gag att gat gag tcc gaa aac 355 Lys Thr Ile Ala Ala Glu Phe Asn Arg Glu Ile Asp Glu Ser Glu Asn 70 75 80 85 ctt gtc tac gga cca att ttg cag ctg act ccg cct tat gca cca ggt 403 Leu Val Tyr Gly Pro Ile Leu Gln Leu Thr Pro Pro Tyr Ala Pro Gly 90 95 100 aag tcc cct gct caa tta att gat gag gga gtc ctt tct cca aac ttc 451 Lys Ser Pro Ala Gln Leu Ile Asp Glu Gly Val Leu Ser Pro Asn Phe 105 110 115 tca cgt ctc gat gcc gca cta ccc aaa gat cgc ccg ctt tat cag cat 499 Ser Arg Leu Asp Ala Ala Leu Pro Lys Asp Arg Pro Leu Tyr Gln His 120 125 130 cag gaa gac gct ctg cga aaa atc gct agt ggc cga aac tta atc gtt 547 Gln Glu Asp Ala Leu Arg Lys Ile Ala Ser Gly Arg Asn Leu Ile Val 135 140 145 tca acc ggt aca gga tct gga aaa aca gag tct ttc ctc atc ccg atc 595 Ser Thr Gly Thr Gly Ser Gly Lys Thr Glu Ser Phe Leu Ile Pro Ile 150 155 160 165 ttt gac caa ctg ctc cgc caa caa caa gcc ggt gag tta aat cct ggt 643 Phe Asp Gln Leu Leu Arg Gln Gln Gln Ala Gly Glu Leu Asn Pro Gly 170 175 180 gtc aga gca ttg ctt ctt tac cct atg aat gct ctt gca aat gat cag 691 Val Arg Ala Leu Leu Leu Tyr Pro Met Asn Ala Leu Ala Asn Asp Gln 185 190 195 gag aaa cgt ctc cgc gaa tta ttg gca gac acc ccg gaa att act ttt 739 Glu Lys Arg Leu Arg Glu Leu Leu Ala Asp Thr Pro Glu Ile Thr Phe 200 205 210 ggt cga tac acc gga gat acc aaa cag acc cgt gaa gaa gcc gag aaa 787 Gly Arg Tyr Thr Gly Asp Thr Lys Gln Thr Arg Glu Glu Ala Glu Lys 215 220 225 tac ttc aaa ctg att aat ggg cga aat gcg acc cct cta cct aat gag 835 Tyr Phe Lys Leu Ile Asn Gly Arg Asn Ala Thr Pro Leu Pro Asn Glu 230 235 240 245 cta att agc cgt gat gag atg cag gaa aat cca cct cat atc ttg ctc 883 Leu Ile Ser Arg Asp Glu Met Gln Glu Asn Pro Pro His Ile Leu Leu 250 255 260 acc aac tac gca atg ttg gaa tac ctc ctg ctt cgt cct gca gac aac 931 Thr Asn Tyr Ala Met Leu Glu Tyr Leu Leu Leu Arg Pro Ala Asp Asn 265 270 275 gca ttc ttc gat gat gca tat tcc aat aat tgg aag ttc ctt gtt ctt 979 Ala Phe Phe Asp Asp Ala Tyr Ser Asn Asn Trp Lys Phe Leu Val Leu 280 285 290 gat gaa gct cat gtc tac gcc gga gca caa ggc act gaa gtc ggc atg 1027 Asp Glu Ala His Val Tyr Ala Gly Ala Gln Gly Thr Glu Val Gly Met 295 300 305 ctg atg agg cgc ctg aaa gat cgt gtc caa cga gga aat ccc ctc cag 1075 Leu Met Arg Arg Leu Lys Asp Arg Val Gln Arg Gly Asn Pro Leu Gln 310 315 320 325 tgc atc gct aca agt gct tct ttg gaa gga act aaa gaa gcc atc atg 1123 Cys Ile Ala Thr Ser Ala Ser Leu Glu Gly Thr Lys Glu Ala Ile Met 330 335 340 acc ttt gga caa gac ctc ttt ggt gaa cct ttt gag ttt gtc aac gaa 1171 Thr Phe Gly Gln Asp Leu Phe Gly Glu Pro Phe Glu Phe Val Asn Glu 345 350 355 gat ccc tcg cgc cag gat ttg gta tcc gcg cat cgg aga aaa cta cca 1219 Asp Pro Ser Arg Gln Asp Leu Val Ser Ala His Arg Arg Lys Leu Pro 360 365 370 aaa acc ttt acg tgg tcc cta cca gat gag ctc ttt gac cag cct tta 1267 Lys Thr Phe Thr Trp Ser Leu Pro Asp Glu Leu Phe Asp Gln Pro Leu 375 380 385 gaa agt gat ggt ctt ttc caa gca cta caa gag cgc ggt gga gat caa 1315 Glu Ser Asp Gly Leu Phe Gln Ala Leu Gln Glu Arg Gly Gly Asp Gln 390 395 400 405 tac gaa gag ctc tcc aaa gaa gaa cac atc gta aaa ctc cgc gaa cta 1363 Tyr Glu Glu Leu Ser Lys Glu Glu His Ile Val Lys Leu Arg Glu Leu 410 415 420 tcc cag caa tca agc act cga gtt gaa gac atc ggc aag ggt ctt tgg 1411 Ser Gln Gln Ser Ser Thr Arg Val Glu Asp Ile Gly Lys Gly Leu Trp 425 430 435 cca aat gtt act gat aaa gca tca atg cac cgc aca cat atg ctg gtg 1459 Pro Asn Val Thr Asp Lys Ala Ser Met His Arg Thr His Met Leu Val 440 445 450 aat tta ggc agt ggc gtt cta tcc cat gat gga gta cca gct ctg tcc 1507 Asn Leu Gly Ser Gly Val Leu Ser His Asp Gly Val Pro Ala Leu Ser 455 460 465 gcg cgt tat cac atg ttt gtc cgc gca gtt gaa ggc gct ttt ctt ggg 1555 Ala Arg Tyr His Met Phe Val Arg Ala Val Glu Gly Ala Phe Leu Gly 470 475 480 485 tat aca gag caa gga aag cca atc gtg tcc ttg gac cgg caa gtg aca 1603 Tyr Thr Glu Gln Gly Lys Pro Ile Val Ser Leu Asp Arg Gln Val Thr 490 495 500 tta ggc gac aca gct cga cca atg tat gaa atg ggt gct tgc atc aaa 1651 Leu Gly Asp Thr Ala Arg Pro Met Tyr Glu Met Gly Ala Cys Ile Lys 505 510 515 tgt gga acc gtt cat atc agc gcc cat aat gat tct ggt ttc ctt gtg 1699 Cys Gly Thr Val His Ile Ser Ala His Asn Asp Ser Gly Phe Leu Val 520 525 530 cct cca gag aat tcc tca aat ttc gac gaa caa cag ctc aaa tgg gta 1747 Pro Pro Glu Asn Ser Ser Asn Phe Asp Glu Gln Gln Leu Lys Trp Val 535 540 545 gtc ctc acc gat gat ttc gaa aca gca gac atc gac gaa gat gac cta 1795 Val Leu Thr Asp Asp Phe Glu Thr Ala Asp Ile Asp Glu Asp Asp Leu 550 555 560 565 gaa act gat gct gac gag aac gtc aaa gtc ctt gag cta caa aaa tta 1843 Glu Thr Asp Ala Asp Glu Asn Val Lys Val Leu Glu Leu Gln Lys Leu 570 575 580 tgt acg gcc tgc gga aaa cta aac gga aag aac tct ctt ctc tgc tcc 1891 Cys Thr Ala Cys Gly Lys Leu Asn Gly Lys Asn Ser Leu Leu Cys Ser 585 590 595 gga tgc tca tca cat cat gac cag ttt att gat gta aag atc ttg gaa 1939 Gly Cys Ser Ser His His Asp Gln Phe Ile Asp Val Lys Ile Leu Glu 600 605 610 ccc cgg aat ggt agc caa tta aca tgc act cga tgc ggt ggc cga gaa 1987 Pro Arg Asn Gly Ser Gln Leu Thr Cys Thr Arg Cys Gly Gly Arg Glu 615 620 625 aag aac ctg att cga cga ctc cga acc gat tca aat gct gca cct tct 2035 Lys Asn Leu Ile Arg Arg Leu Arg Thr Asp Ser Asn Ala Ala Pro Ser 630 635 640 645 gtc ctc acc aca tca ttg ttc caa ctg ttg cca gaa tca gct gat caa 2083 Val Leu Thr Thr Ser Leu Phe Gln Leu Leu Pro Glu Ser Ala Asp Gln 650 655 660 gat aca tca cgc aag atc ggt gct gga cgc aaa cta ctc acg ttt tct 2131 Asp Thr Ser Arg Lys Ile Gly Ala Gly Arg Lys Leu Leu Thr Phe Ser 665 670 675 gac tcc cgc cag gct gcc gct tac gca gca cca tat ttg caa gca agt 2179 Asp Ser Arg Gln Ala Ala Ala Tyr Ala Ala Pro Tyr Leu Gln Ala Ser 680 685 690 tac acc agg ttg cta gag cga aga atc ctc att gag acc ctg cgg gat 2227 Tyr Thr Arg Leu Leu Glu Arg Arg Ile Leu Ile Glu Thr Leu Arg Asp 695 700 705 gaa gaa ttt act gaa ggc gca tcc att gaa cga tgg att tcc cgc gca 2275 Glu Glu Phe Thr Glu Gly Ala Ser Ile Glu Arg Trp Ile Ser Arg Ala 710 715 720 725 agt gaa gtg gcg aaa aac aat cga gtc ctc gct aac aac ttg aac cca 2323 Ser Glu Val Ala Lys Asn Asn Arg Val Leu Ala Asn Asn Leu Asn Pro 730 735 740 cgc gaa aca cta gaa cag aca ggt aac tgg gta ttc gca gat ctt gct 2371 Arg Glu Thr Leu Glu Gln Thr Gly Asn Trp Val Phe Ala Asp Leu Ala 745 750 755 tcg aca gtc cga cgt agt tcg act gaa ggg ctt gga cta gcc aaa att 2419 Ser Thr Val Arg Arg Ser Ser Thr Glu Gly Leu Gly Leu Ala Lys Ile 760 765 770 gaa ctg acc cct gag gct ttg tcg caa ctc agt ttc aga aaa cca ctt 2467 Glu Leu Thr Pro Glu Ala Leu Ser Gln Leu Ser Phe Arg Lys Pro Leu 775 780 785 ggc gag atg ttt ggg gat ccg gat gcc gcc gac gcc ttt ttt aat ctc 2515 Gly Glu Met Phe Gly Asp Pro Asp Ala Ala Asp Ala Phe Phe Asn Leu 790 795 800 805 ttc gct caa gaa ttc cgt cac aag ggc gca atc aat tgc cct gac tac 2563 Phe Ala Gln Glu Phe Arg His Lys Gly Ala Ile Asn Cys Pro Asp Tyr 810 815 820 gtc aat ctt gag gat gaa cgc ttt ggc cct cgt cgt ggg cag cac ttt 2611 Val Asn Leu Glu Asp Glu Arg Phe Gly Pro Arg Arg Gly Gln His Phe 825 830 835 ttc acc aaa gat ggt gga aga aaa tca aca cga cgc ctc tac tca tgg 2659 Phe Thr Lys Asp Gly Gly Arg Lys Ser Thr Arg Arg Leu Tyr Ser Trp 840 845 850 att ccg caa cga gga acc aac aat cgc aag gac ttc att aca aaa gtc 2707 Ile Pro Gln Arg Gly Thr Asn Asn Arg Lys Asp Phe Ile Thr Lys Val 855 860 865 ttg aac cgc atc gga caa gca ggt gac gaa ggt gaa aat att acg acg 2755 Leu Asn Arg Ile Gly Gln Ala Gly Asp Glu Gly Glu Asn Ile Thr Thr 870 875 880 885 ctt ctc cat cac cta tgg aat gac tac act aat tcc gaa att ttg aag 2803 Leu Leu His His Leu Trp Asn Asp Tyr Thr Asn Ser Glu Ile Leu Lys 890 895 900 gtc cca ggc gaa aag gcc gaa ggc tac aca ctt aac tac aac tca ctg 2851 Val Pro Gly Glu Lys Ala Glu Gly Tyr Thr Leu Asn Tyr Asn Ser Leu 905 910 915 caa gta agc cct gga aaa caa cat tcc tgg tat gaa tgt gac act tgt 2899 Gln Val Ser Pro Gly Lys Gln His Ser Trp Tyr Glu Cys Asp Thr Cys 920 925 930 aga aat aca acg cca ttt aat gtt ctc ggg ctg tgt cca cat ggg ttc 2947 Arg Asn Thr Thr Pro Phe Asn Val Leu Gly Leu Cys Pro His Gly Phe 935 940 945 tgt aaa ggc aag cta aaa gaa atc gat act tct tta ccg gag tat gcc 2995 Cys Lys Gly Lys Leu Lys Glu Ile Asp Thr Ser Leu Pro Glu Tyr Ala 950 955 960 965 aac aat cat tat cgg aag ttg gca aca tcg ctt gaa att ctt ccg ctt 3043 Asn Asn His Tyr Arg Lys Leu Ala Thr Ser Leu Glu Ile Leu Pro Leu 970 975 980 tca gcc aaa gag cac act gct caa tgg acg cca acg gag gct gca gag 3091 Ser Ala Lys Glu His Thr Ala Gln Trp Thr Pro Thr Glu Ala Ala Glu 985 990 995 gtt cag aaa gaa ttc atc gaa gga aaa atc aat gtc cta agc tgt tct 3139 Val Gln Lys Glu Phe Ile Glu Gly Lys Ile Asn Val Leu Ser Cys Ser 1000 1005 1010 act acg ttt gag ctt gga gtt gac gtt ggt gat ctg cag tca gta atg 3187 Thr Thr Phe Glu Leu Gly Val Asp Val Gly Asp Leu Gln Ser Val Met 1015 1020 1025 atg cgc aac gta ccg cca cgt acg gct aac tat gtg caa cgt gcg gga 3235 Met Arg Asn Val Pro Pro Arg Thr Ala Asn Tyr Val Gln Arg Ala Gly 1030 1035 1040 1045 cgt gcg gga cgc cga tca ggt tca gca gct ttt gtg ctt acc ttt gct 3283 Arg Ala Gly Arg Arg Ser Gly Ser Ala Ala Phe Val Leu Thr Phe Ala 1050 1055 1060 aag cga tct tct cat gac ttg gct gta ttt aag aac cca acc cag atg 3331 Lys Arg Ser Ser His Asp Leu Ala Val Phe Lys Asn Pro Thr Gln Met 1065 1070 1075 att gat ggc gaa atg aca gtg cca ttt ttg cac att aac aat gcc cga 3379 Ile Asp Gly Glu Met Thr Val Pro Phe Leu His Ile Asn Asn Ala Arg 1080 1085 1090 atc gcc cgt cgt cac acc tat tca atc gct ctc gcc gca ttt ttc cga 3427 Ile Ala Arg Arg His Thr Tyr Ser Ile Ala Leu Ala Ala Phe Phe Arg 1095 1100 1105 gag cag gct gcc caa aat cgg ttc tgg aaa aag gcc gga gag ttc ttc 3475 Glu Gln Ala Ala Gln Asn Arg Phe Trp Lys Lys Ala Gly Glu Phe Phe 1110 1115 1120 1125 ctt ggc act gat gca gct cca tac ctt agg cct gct gtc gca gag caa 3523 Leu Gly Thr Asp Ala Ala Pro Tyr Leu Arg Pro Ala Val Ala Glu Gln 1130 1135 1140 gag gca acg gag atc ctc gaa gag ttt ctc tcc cct gtt cct aat tac 3571 Glu Ala Thr Glu Ile Leu Glu Glu Phe Leu Ser Pro Val Pro Asn Tyr 1145 1150 1155 atc act gaa gcc ctc cgt cgc gta ttc cct gag tcc ctg cat gag gat 3619 Ile Thr Glu Ala Leu Arg Arg Val Phe Pro Glu Ser Leu His Glu Asp 1160 1165 1170 ctg gat att gaa aat caa ggt tgg gtt aaa caa ttc ctt gaa att ttc 3667 Leu Asp Ile Glu Asn Gln Gly Trp Val Lys Gln Phe Leu Glu Ile Phe 1175 1180 1185 gat aca act cgt cag gag atc tcc gaa gat ttc caa acg ctt aaa aag 3715 Asp Thr Thr Arg Gln Glu Ile Ser Glu Asp Phe Gln Thr Leu Lys Lys 1190 1195 1200 1205 atg caa ggg cga gcg ctg ggc agt gaa caa ggc aaa aag gca gat gcc 3763 Met Gln Gly Arg Ala Leu Gly Ser Glu Gln Gly Lys Lys Ala Asp Ala 1210 1215 1220 ttc aaa cgc aca atc aca act ctg atg gac caa gat ctt ttg gga tac 3811 Phe Lys Arg Thr Ile Thr Thr Leu Met Asp Gln Asp Leu Leu Gly Tyr 1225 1230 1235 ttg gcc aag aag aac atg ctg ccc aag tac agc ttc cct gtc gat aca 3859 Leu Ala Lys Lys Asn Met Leu Pro Lys Tyr Ser Phe Pro Val Asp Thr 1240 1245 1250 gta gat ctt caa aca aac ttc agt gaa gct gga aat aag gtg agc ttg 3907 Val Asp Leu Gln Thr Asn Phe Ser Glu Ala Gly Asn Lys Val Ser Leu 1255 1260 1265 tca cga gat ctt cag cta gcg att acc gac tat gct cct ggt gcg gag 3955 Ser Arg Asp Leu Gln Leu Ala Ile Thr Asp Tyr Ala Pro Gly Ala Glu 1270 1275 1280 1285 tta gta gca ggc gga aaa ttg tgg aaa tcc gct ggc att cga cac cta 4003 Leu Val Ala Gly Gly Lys Leu Trp Lys Ser Ala Gly Ile Arg His Leu 1290 1295 1300 gcc ggt aaa aag gtg gaa act ttt tat tgg aca acg tgt act gag tgt 4051 Ala Gly Lys Lys Val Glu Thr Phe Tyr Trp Thr Thr Cys Thr Glu Cys 1305 1310 1315 aaa cat act gaa acc tct cgt ttt gga ttt aca tct gaa gat gtc tgt 4099 Lys His Thr Glu Thr Ser Arg Phe Gly Phe Thr Ser Glu Asp Val Cys 1320 1325 1330 tct cag tgc tct gca cca ata tcg ctg ggt aaa gag aac aag ttc ctt 4147 Ser Gln Cys Ser Ala Pro Ile Ser Leu Gly Lys Glu Asn Lys Phe Leu 1335 1340 1345 atc cct cgt ttt ggt ttc gtt gca gac cca aat cca act gaa gtg ggc 4195 Ile Pro Arg Phe Gly Phe Val Ala Asp Pro Asn Pro Thr Glu Val Gly 1350 1355 1360 1365 act gct ccc ccg gtc cga tcc tct aat cga ctt gaa ttt gta aag cag 4243 Thr Ala Pro Pro Val Arg Ser Ser Asn Arg Leu Glu Phe Val Lys Gln 1370 1375 1380 ttc ggt gtc aaa gat gac agt gaa gag ttc tca aat tca gat ggg aca 4291 Phe Gly Val Lys Asp Asp Ser Glu Glu Phe Ser Asn Ser Asp Gly Thr 1385 1390 1395 gca act gcg caa gta ctt act tct tct tgg agt cgg acg gag atg gga 4339 Ala Thr Ala Gln Val Leu Thr Ser Ser Trp Ser Arg Thr Glu Met Gly 1400 1405 1410 gcg ctt gaa aca ggt cct aac aag aat gga ttt tgg tat tgc caa aca 4387 Ala Leu Glu Thr Gly Pro Asn Lys Asn Gly Phe Trp Tyr Cys Gln Thr 1415 1420 1425 tgc gga ttc ggc act ccc aat ggc gcc gaa atc cct aaa agc cat cga 4435 Cys Gly Phe Gly Thr Pro Asn Gly Ala Glu Ile Pro Lys Ser His Arg 1430 1435 1440 1445 aac ccc aga act aag cag cag tgt ggc acc tac tac tta gaa ccc cac 4483 Asn Pro Arg Thr Lys Gln Gln Cys Gly Thr Tyr Tyr Leu Glu Pro His 1450 1455 1460 tct ttg ggt cac acc tac caa act gac atc gcg aca gtt gcc gtt cct 4531 Ser Leu Gly His Thr Tyr Gln Thr Asp Ile Ala Thr Val Ala Val Pro 1465 1470 1475 tct tat aca aat ctt gac ttc gaa ggg tgg cgc tct gga atg tac gcc 4579 Ser Tyr Thr Asn Leu Asp Phe Glu Gly Trp Arg Ser Gly Met Tyr Ala 1480 1485 1490 atc atc gag gca gct gct gaa tgt tta gaa atc aat cgt gat gat cta 4627 Ile Ile Glu Ala Ala Ala Glu Cys Leu Glu Ile Asn Arg Asp Asp Leu 1495 1500 1505 aac ggc acc atg gcg aaa cac gac aac agg cca acg atg gtg ttg ttc 4675 Asn Gly Thr Met Ala Lys His Asp Asn Arg Pro Thr Met Val Leu Phe 1510 1515 1520 1525 gat act gtt cct ggt gga gct ggt att acc cga aaa gtt cga gaa aac 4723 Asp Thr Val Pro Gly Gly Ala Gly Ile Thr Arg Lys Val Arg Glu Asn 1530 1535 1540 ttc cct caa gta ctc gaa gcg gca att aga agg gtc gaa acc tgt tct 4771 Phe Pro Gln Val Leu Glu Ala Ala Ile Arg Arg Val Glu Thr Cys Ser 1545 1550 1555 tgt ggc atc gat act tcg tgt tat gcc tgt ttg cga tca ttt tct aac 4819 Cys Gly Ile Asp Thr Ser Cys Tyr Ala Cys Leu Arg Ser Phe Ser Asn 1560 1565 1570 cag cgt ttc cat ctc gat tta agg cgc gat att gca ttg gac ttg ctt 4867 Gln Arg Phe His Leu Asp Leu Arg Arg Asp Ile Ala Leu Asp Leu Leu 1575 1580 1585 cac cat atg gcg gtt gcg atg cca aaa tct gag tagataacac cagctaccca 4920 His His Met Ala Val Ala Met Pro Lys Ser Glu 1590 1595 1600 cagctaaaag 4930 <210> 62 <211> 1600 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 62 Met Ser Asn Ala Pro Lys Lys Ser Phe Ser Asp Phe Phe Ser Pro Leu 1 5 10 15 Ala Thr Glu Thr Glu Thr Thr Ile Thr Leu Ser Ala Ile Glu Val Glu 20 25 30 Lys Val Asn Ala Lys Thr Glu Val Thr Arg Asn Ile Asp Pro Val Glu 35 40 45 Ala Ala Glu Gln Ile Ser Arg Asp Tyr Arg Arg Tyr Leu Lys Thr Leu 50 55 60 Ile Ser Pro Ser Asn Lys Thr Ile Ala Ala Glu Phe Asn Arg Glu Ile 65 70 75 80 Asp Glu Ser Glu Asn Leu Val Tyr Gly Pro Ile Leu Gln Leu Thr Pro 85 90 95 Pro Tyr Ala Pro Gly Lys Ser Pro Ala Gln Leu Ile Asp Glu Gly Val 100 105 110 Leu Ser Pro Asn Phe Ser Arg Leu Asp Ala Ala Leu Pro Lys Asp Arg 115 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cag gac atc tat ggt cgc gac aac tac ttc ctc gag 691 Ala Ala Met Trp Gln Asp Ile Tyr Gly Arg Asp Asn Tyr Phe Leu Glu 185 190 195 ttg atg gac cac ggg ctc gac att gaa acc cgt gtg cgc agt gag ctg 739 Leu Met Asp His Gly Leu Asp Ile Glu Thr Arg Val Arg Ser Glu Leu 200 205 210 ctc gaa atc gga cgc aag ctc aat ttg cca ccc ctg gtc acc aac gac 787 Leu Glu Ile Gly Arg Lys Leu Asn Leu Pro Pro Leu Val Thr Asn Asp 215 220 225 tgc cac tat gtg ctg gaa tct cag gcg caa gcc cac gag gca atg ctc 835 Cys His Tyr Val Leu Glu Ser Gln Ala Gln Ala His Glu Ala Met Leu 230 235 240 245 tgc gtg caa aca ggc aag acg ctt cat gat gaa gac cga ttc aaa ttc 883 Cys Val Gln Thr Gly Lys Thr Leu His Asp Glu Asp Arg Phe Lys Phe 250 255 260 ggc gga acc ggc tat tac gtt aaa tct gca gaa caa atg cgt gca ctc 931 Gly Gly Thr Gly Tyr Tyr Val Lys Ser Ala Glu Gln Met Arg Ala Leu 265 270 275 tgg gac gac atg gtt cca gat ggc tgc gac aac acc ctg tgg atc gct 979 Trp Asp Asp Met Val Pro Asp Gly Cys Asp Asn Thr Leu Trp Ile Ala 280 285 290 gaa 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Pro Arg Phe Asn Glu Ala Gly 505 510 515 gcg gtg cgc cag ctg atc gaa acc gac cct gat gtg aag cgc att tac 1699 Ala Val Arg Gln Leu Ile Glu Thr Asp Pro Asp Val Lys Arg Ile Tyr 520 525 530 gac acc gct cgt ggt ttg gaa ggc gtg gtg cgc caa tct ggc gtg cac 1747 Asp Thr Ala Arg Gly Leu Glu Gly Val Val Arg Gln Ser Gly Val His 535 540 545 gcg tgt gcc gtg att atg tct tct gta ccg ctg ctg gac tgc att ccg 1795 Ala Cys Ala Val Ile Met Ser Ser Val Pro Leu Leu Asp Cys Ile Pro 550 555 560 565 atg tgg aag cgg cca gcc gac ggc gca ctg att aca ggc tgg gat tac 1843 Met Trp Lys Arg Pro Ala Asp Gly Ala Leu Ile Thr Gly Trp Asp Tyr 570 575 580 cca gca tgt gag gcc att ggc ctg ttg aag atg gac ttc ctg gga ctt 1891 Pro Ala Cys Glu Ala Ile Gly Leu Leu Lys Met Asp Phe Leu Gly Leu 585 590 595 cga aac ctt acc gtt att ggc gat gcg att gaa aac att aag gcc aac 1939 Arg Asn Leu Thr Val Ile Gly Asp Ala Ile Glu Asn Ile Lys Ala Asn 600 605 610 cgc gat ggg gaa gtg ctt gat cta gaa aac cta gcg atc gag gat gaa 1987 Arg Asp Gly Glu Val Leu Asp Leu Glu Asn Leu Ala Ile Glu Asp Glu 615 620 625 gaa acc tac aag ctg cta ggc cgt gga gaa acc ctt ggt gtg ttc cag 2035 Glu Thr Tyr Lys Leu Leu Gly Arg Gly Glu Thr Leu Gly Val Phe Gln 630 635 640 645 ctt gat ggt ggt ggc atg cag gag ctg ctg aag cgt atg cag cca acc 2083 Leu Asp Gly Gly Gly Met Gln Glu Leu Leu Lys Arg Met Gln Pro Thr 650 655 660 ggc ttc aat gac atc gtc gca gcg ctt gcg ctg tat cgc cca ggc ccc 2131 Gly Phe Asn Asp Ile Val Ala Ala Leu Ala Leu Tyr Arg Pro Gly Pro 665 670 675 atg ggt gtg aac gcg cac tgg gat tac gcc gac cgt aaa aac gga cgc 2179 Met Gly Val Asn Ala His Trp Asp Tyr Ala Asp Arg Lys Asn Gly Arg 680 685 690 aag ccc att act cca att cac cca gag ttg gag gaa gct ctg gaa gaa 2227 Lys Pro Ile Thr Pro Ile His Pro Glu Leu Glu Glu Ala Leu Glu Glu 695 700 705 atc ctt ggt gaa acc tat ggt ctg att gtg tac cag gag cag atc atg 2275 Ile Leu Gly Glu Thr Tyr Gly Leu Ile Val Tyr Gln Glu Gln Ile Met 710 715 720 725 agg atc tcc cag aag gtc gca aac tac acc gct ggt caa gca gat 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ccg gat att aac gag tcc 2659 Cys Arg His Leu Gly Ile Arg Val Leu Ser Pro Asp Ile Asn Glu Ser 840 845 850 tcg ttg aac ttc ctt cct gtt ggc acc gat att cgc tat ggc ctg gga 2707 Ser Leu Asn Phe Leu Pro Val Gly Thr Asp Ile Arg Tyr Gly Leu Gly 855 860 865 gcc att aga aac gtg ggt gct gaa gtt gtg gat tcc att ttg gat acc 2755 Ala Ile Arg Asn Val Gly Ala Glu Val Val Asp Ser Ile Leu Asp Thr 870 875 880 885 cgc aag gaa aag ggc cta ttt aag gac ttc tca gac tac ttg gac aag 2803 Arg Lys Glu Lys Gly Leu Phe Lys Asp Phe Ser Asp Tyr Leu Asp Lys 890 895 900 atc gat acc ctg ccg tgt aac aag cgc atc acc gag tct ttg atc aag 2851 Ile Asp Thr Leu Pro Cys Asn Lys Arg Ile Thr Glu Ser Leu Ile Lys 905 910 915 ggt ggc gct ttt gac tcc ctt gga cac gca cga aaa ggc ctc atg ctg 2899 Gly Gly Ala Phe Asp Ser Leu Gly His Ala Arg Lys Gly Leu Met Leu 920 925 930 gtc ttc gaa gat gcc gtt gat tcc gtc atc gct acc aaa aaa gct gct 2947 Val Phe Glu Asp Ala Val Asp Ser Val Ile Ala Thr Lys Lys Ala Ala 935 940 945 gac aag gga caa ttt 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1050 1055 1060 aac ggc gcg tcc gtt gaa ttg ttg gtc ttc aac aag gtg tat tcc atc 3331 Asn Gly Ala Ser Val Glu Leu Leu Val Phe Asn Lys Val Tyr Ser Ile 1065 1070 1075 gtt gga tcc atg att gtg gaa gac aac atc atc ttg gcc aag gca cac 3379 Val Gly Ser Met Ile Val Glu Asp Asn Ile Ile Leu Ala Lys Ala His 1080 1085 1090 atc tcc att cga gat gat cgt atg agc ctt ttc tgt gat gat ctc cgc 3427 Ile Ser Ile Arg Asp Asp Arg Met Ser Leu Phe Cys Asp Asp Leu Arg 1095 1100 1105 gtt cca gag ctt ggg cca gga aac ggg caa gga ctt ccg ctt cgt ttg 3475 Val Pro Glu Leu Gly Pro Gly Asn Gly Gln Gly Leu Pro Leu Arg Leu 1110 1115 1120 1125 tcc atg cgt act gat cag tgc acc atg tcc aac att gcc aag ctc aag 3523 Ser Met Arg Thr Asp Gln Cys Thr Met Ser Asn Ile Ala Lys Leu Lys 1130 1135 1140 cag gtg ctg gtg gac aac aag ggt gaa tct gat gtg tac ctc aat ttg 3571 Gln Val Leu Val Asp Asn Lys Gly Glu Ser Asp Val Tyr Leu Asn Leu 1145 1150 1155 atc gat ggg gat aac tcc acg gtc atg att ttg ggt gat cac tta aga 3619 Ile Asp Gly Asp Asn Ser 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Ala Ser Pro Asp Ile Ile His Gln 615 620 625 tcc ttg ctc acc ggt ctg ctc tcg caa atc ggt tcc cgt gat ggt gag 2035 Ser Leu Leu Thr Gly Leu Leu Ser Gln Ile Gly Ser Arg Asp Gly Glu 630 635 640 645 agc aaa gaa ttc act gga gcc aga ggt acc aaa ttc ttg gtc ttt cct 2083 Ser Lys Glu Phe Thr Gly Ala Arg Gly Thr Lys Phe Leu Val Phe Pro 650 655 660 ggt tct gcg cta acc aag aag ccg cca cag ttc atc atg gct ggc caa 2131 Gly Ser Ala Leu Thr Lys Lys Pro Pro Gln Phe Ile Met Ala Gly Gln 665 670 675 ttg gta gaa acc tca cgt ttg tgg gct cgc gat gta gcc aag att gaa 2179 Leu Val Glu Thr Ser Arg Leu Trp Ala Arg Asp Val Ala Lys Ile Glu 680 685 690 cca gag tgg gtg gaa aaa gca gcc ggc cca ttg ctc aag cac caa tac 2227 Pro Glu Trp Val Glu Lys Ala Ala Gly Pro Leu Leu Lys His Gln Tyr 695 700 705 tct gaa ccg tat tgg tcc tca aag cgt ggc gct gcc atg gtg cac cgc 2275 Ser Glu Pro Tyr Trp Ser Ser Lys Arg Gly Ala Ala Met Val His Arg 710 715 720 725 aaa tca acg ctc tac ggt gtg aca att gtt gcc gac aag gta gtt ccc 2323 Lys Ser 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gga atc aac gcc tct gat ttc 2995 Asp Ala Leu His Thr Leu Gly Gly Gln Gly Ile Asn Ala Ser Asp Phe 950 955 960 965 gat cct gcc aaa ctc ccc gat cac ctg cgc att tcc tat gca gca gta 3043 Asp Pro Ala Lys Leu Pro Asp His Leu Arg Ile Ser Tyr Ala Ala Val 970 975 980 gat cgt cgt ggc aag atc atc gac cgc gac cgt gac ctc gaa gca cta 3091 Asp Arg Arg Gly Lys Ile Ile Asp Arg Asp Arg Asp Leu Glu Ala Leu 985 990 995 aag aaa cgc cgc gcg aac caa atc agg gca tct gtt tct agc gtt gct 3139 Lys Lys Arg Arg Ala Asn Gln Ile Arg Ala Ser Val Ser Ser Val Ala 1000 1005 1010 aag gca tcc gaa caa gat gaa act acg cag tgg acc aca gat acc ttg 3187 Lys Ala Ser Glu Gln Asp Glu Thr Thr Gln Trp Thr Thr Asp Thr Leu 1015 1020 1025 ggc acc atc gat gaa gaa atc gag acc act gtc gat gga cag tcc gtc 3235 Gly Thr Ile Asp Glu Glu Ile Glu Thr Thr Val Asp Gly Gln Ser Val 1030 1035 1040 1045 acc gcg tac ccc gcc ttg gtt gtc acc ccg act ggc gta tcc gtc aag 3283 Thr Ala Tyr Pro Ala Leu Val Val Thr Pro Thr Gly Val Ser Val Lys 1050 1055 1060 gtc atg ccc acc aag gct gct gct gat gcc tcg atg atc acc gca aca 3331 Val Met Pro Thr Lys Ala Ala Ala Asp Ala Ser Met Ile Thr Ala Thr 1065 1070 1075 ttg aca ctg ttg atg cgt gag att gaa gta tcc aca aag caa atg gtc 3379 Leu Thr Leu Leu Met Arg Glu Ile Glu Val Ser Thr Lys Gln Met Val 1080 1085 1090 aag gga cta ccc ttg caa caa cga gtc gca gtg gac aac tat ccc cac 3427 Lys Gly Leu Pro Leu Gln Gln Arg Val Ala Val Asp Asn Tyr Pro His 1095 1100 1105 ggc ggt gcc gaa gga ctg gtt tct gat gcc cgt atc gcc gca att cgc 3475 Gly Gly Ala Glu Gly Leu Val Ser Asp Ala Arg Ile Ala Ala Ile Arg 1110 1115 1120 1125 gat ttg atg ttt gaa cac ggc gga gct gtg cgt tca ccg gaa gag ttc 3523 Asp Leu Met Phe Glu His Gly Gly Ala Val Arg Ser Pro Glu Glu Phe 1130 1135 1140 gac gtt ctt cta gcc aag gtg aag ccg gaa aca cca gga gtt gtt cgt 3571 Asp Val Leu Leu Ala Lys Val Lys Pro Glu Thr Pro Gly Val Val Arg 1145 1150 1155 cga act gtc gtt gag cta gcc cca gca ttg gtt cac tat gca tcc gtt 3619 Arg Thr Val Val Glu Leu Ala Pro Ala Leu Val His Tyr Ala Ser Val 1160 1165 1170 gtg tca gag ctg gag tcc tgg tct gga cct gcc att gac gat atg acc 3667 Val Ser Glu Leu Glu Ser Trp Ser Gly Pro Ala Ile Asp Asp Met Thr 1175 1180 1185 gcc cag ttg gat ttc ctc ttg cca aag cag gcc atc agc att cac ggc 3715 Ala Gln Leu Asp Phe Leu Leu Pro Lys Gln Ala Ile Ser Ile His Gly 1190 1195 1200 1205 atc agt agg ttg agg cac ctt ccg agg tat ctg cag gcg ttg acg att 3763 Ile Ser Arg Leu Arg His Leu Pro Arg Tyr Leu Gln Ala Leu Thr Ile 1210 1215 1220 cgc cta gaa gag atg aac caa aat ccg gat cgt gac gcc gac cgt caa 3811 Arg Leu Glu Glu Met Asn Gln Asn Pro Asp Arg Asp Ala Asp Arg Gln 1225 1230 1235 gat gaa gtg aac ttc gtt gaa gag cag ctg gag aaa cag ctc agt aag 3859 Asp Glu Val Asn Phe Val Glu Glu Gln Leu Glu Lys Gln Leu Ser Lys 1240 1245 1250 cta ccc gct gcg cga gcc aac acc aag gaa gcc aag gat att gcc tgg 3907 Leu Pro Ala Ala Arg Ala Asn Thr Lys Glu Ala Lys Asp Ile Ala Trp 1255 1260 1265 cag att cag gaa cta agg atc agc ctc ttt gca cag cgg tta ggc act 3955 Gln Ile Gln Glu Leu Arg Ile Ser Leu Phe Ala Gln Arg Leu Gly Thr 1270 1275 1280 1285 ccc cga cct gta tcg gcg cag aga atc cag aag gct att gcc aag ctt 4003 Pro Arg Pro Val Ser Ala Gln Arg Ile Gln Lys Ala Ile Ala Lys Leu 1290 1295 1300 cga taagcactgc ttgagatgag ggactagtta 4036 Arg <210> 68 <211> 1302 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 68 Met Thr Thr Ser Glu Thr Ala Pro Ser Lys Ala Ser Leu Tyr Glu Leu 1 5 10 15 Leu Glu Gly Val Ser Leu Ser Asp Glu Arg Thr Phe Arg Arg Arg Leu 20 25 30 Ser Lys Ala Arg Ala Pro Lys Ala Leu Gly Ala Ile Lys Ala Asp Ile 35 40 45 Asp Lys Ala Arg Leu Leu Ile Asp Glu Lys Ser Gln Leu Ile Pro Ser 50 55 60 Ile Thr Tyr Pro Glu Asn Leu Pro Val Ser Ser Arg Arg Asp Asp Ile 65 70 75 80 Ala Glu Ala Ile Arg Asp Asn Gln Val Val Ile Ile Ala Gly Glu Thr 85 90 95 Gly Ser Gly Lys Thr Thr Gln Ile Pro Lys Ile Cys Leu Asp Leu Gly 100 105 110 Arg Gly Arg Arg Gly Leu Ile Gly His Thr Gln Pro Arg Arg Leu Ala 115 120 125 Ala Arg Thr Val Ala Glu Arg Ile Ala Asp Glu Leu Gly 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Asn Ile Ala 340 345 350 Glu Thr Ser Leu Thr Val Pro Gly Ile His Tyr Val Val Asp Thr Gly 355 360 365 Thr Ala Arg Ile Ser Arg Tyr Ser Val Arg Thr Lys Val Gln Arg Leu 370 375 380 Pro Ile Glu Asn Ile Ser Gln Ala Ser Ala Asn Gln Arg Ser Gly Arg 385 390 395 400 Cys Gly Arg Val Ala Asp Gly Ile Ala Ile Arg Leu Tyr Ser Glu Asp 405 410 415 Asp Phe Asn Ser Arg Pro Glu Phe Thr Asp Pro Glu Ile Leu Arg Thr 420 425 430 Asn Leu Ala Ser Val Ile Leu Arg Met Ala Ser Leu Arg Leu Gly Asp 435 440 445 Ile Asn Asp Phe Pro Phe Val Gln Ala Pro Glu Gln Arg Ser Ile Arg 450 455 460 Asp Gly Ile Leu Leu Leu His Glu Leu Gly Ala Leu Thr Asp Asp Thr 465 470 475 480 Gln Ala Asp Gly Ser Pro Gln Leu Thr Gln Ile Gly Lys Asp Leu Ala 485 490 495 Asn Ile Pro Val Asp Pro Arg Met Ala Arg Met Leu Val Glu Ala Asn 500 505 510 Thr Leu Gly Cys Leu His Ser Val Met Val Ile Val Ser Ala Leu Thr 515 520 525 Ile Gln Asp Val Arg Glu Arg Pro Leu Glu Phe Gln Ala Gln Ala Asp 530 535 540 Gln Ala His Ala Arg Phe Lys Asp Thr Thr Ser Asp Phe Leu 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act gag cct tcc cgc cca 1171 Val Pro Thr Ser Arg Ala Val Phe Gly Phe Thr Glu Pro Ser Arg Pro 345 350 355 gcg atc atg atc cca gag cct gaa gaa atg cct tcc gcc aac gaa aat 1219 Ala Ile Met Ile Pro Glu Pro Glu Glu Met Pro Ser Ala Asn Glu Asn 360 365 370 ggc att ttc caa act ccg gac acc tat ttc acc tac ctg ctc atg cca 1267 Gly Ile Phe Gln Thr Pro Asp Thr Tyr Phe Thr Tyr Leu Leu Met Pro 375 380 385 gtg cgc ctg cca ggc taaacacaaa agtttcaccc ttttcgcgcc 1312 Val Arg Leu Pro Gly 390 <210> 70 <211> 394 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 70 Met Glu Ser Gln Asn Val Ser Phe Arg Val Ala Arg Glu Asp Leu Val 1 5 10 15 Thr Ala Val Ala Trp Val Ala Arg Asn Leu Pro Thr Lys Pro Thr Gln 20 25 30 Pro Val Leu Arg Ala Met Leu Ile Thr Ala Asp Asp Glu Gly Leu Glu 35 40 45 Leu Ala Gly Tyr Asp Tyr Asp Val Ser Thr Arg Val Arg Leu Ser Ala 50 55 60 Glu Val Ser Gln Pro Gly Arg Ile Ala Val Ala Gly Lys Leu Leu Ser 65 70 75 80 Glu Ile Thr Gly Ser Leu Pro Asn Lys Pro Val Asp Phe Arg Ile Asp 85 90 95 Gly Ser 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Thr Glu Ala Gly His Ala Glu Glu Thr Leu Pro Cys Ala 305 310 315 320 Phe Thr Gly Lys Glu Leu Thr Ile Ala Phe Asn Pro Gly Tyr Leu Lys 325 330 335 Asp Gly Leu Ser Val Val Pro Thr Ser Arg Ala Val Phe Gly Phe Thr 340 345 350 Glu Pro Ser Arg Pro Ala Ile Met Ile Pro Glu Pro Glu Glu Met Pro 355 360 365 Ser Ala Asn Glu Asn Gly Ile Phe Gln Thr Pro Asp Thr Tyr Phe Thr 370 375 380 Tyr Leu Leu Met Pro Val Arg Leu Pro Gly 385 390 <210> 71 <211> 331 <212> DNA <213> Corynebacterium glutamicum <220> <221> CDS <222> (101)..(301) <223> RXA03332 <400> 71 attctccttg cagcctataa gcgttaggct ttacctacac acccggaaca cccttacacc 60 agcgcgagct acagaagatt cacagattgg gagcccttcg atg aga ttc tat gtg 115 Met Arg Phe Tyr Val 1 5 acc aat agg gac acc gat cct ccc atg gga tcg agg gga acc tgg gtt 163 Thr Asn Arg Asp Thr Asp Pro Pro Met Gly Ser Arg Gly Thr Trp Val 10 15 20 aat cta ctc cgg gac aat tgg gat gac tat ggg ttc aaa act tct ttt 211 Asn Leu Leu Arg Asp Asn Trp Asp Asp Tyr Gly Phe Lys Thr Ser Phe 25 30 35 cat gta aaa cta tat cgg gac aat ggc gag aca ata cag ctc gga atg 259 His Val Lys Leu Tyr Arg Asp Asn Gly Glu Thr Ile Gln Leu Gly Met 40 45 50 gtg aag atc ctg cgt gcc gga caa att gag ttt tta ctg acc 301 Val Lys Ile Leu Arg Ala Gly Gln Ile Glu Phe Leu Leu Thr 55 60 65 taggggaccg actgaggaag tcgcacagtg 331 <210> 72 <211> 67 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 72 Met Arg Phe Tyr Val Thr Asn Arg Asp Thr Asp Pro Pro Met Gly Ser 1 5 10 15 Arg Gly Thr Trp Val Asn Leu Leu Arg Asp Asn Trp Asp Asp Tyr Gly 20 25 30 Phe Lys Thr Ser Phe His Val Lys Leu Tyr Arg Asp Asn Gly Glu Thr 35 40 45 Ile Gln Leu Gly Met Val Lys Ile Leu Arg Ala Gly Gln Ile Glu Phe 50 55 60 Leu Leu Thr 65 <210> 73 <211> 1105 <212> DNA <213> Corynebacterium glutamicum <220> <221> CDS <222> (101)..(1075) <223> RXA03341 <400> 73 taatgacgat ggaggtgtca agcagaatca tgaagtagcc caaaaggacg atgcttaaaa 60 tcatgtgact aatttttgat ggcagcaaga aaacgcaaca gtg atc gct tat gcc 115 Val Ile Ala Tyr Ala 1 5 ggt act act ggt acc tgt tta aaa gtc agc ccc aac gcc tat gtt gaa 163 Gly Thr Thr Gly Thr Cys Leu Lys Val Ser Pro Asn Ala Tyr Val Glu 10 15 20 gat atg gat gta cac gca gat act cga gaa ttc ctc act gcg cgc cgc 211 Asp Met Asp Val His Ala Asp Thr Arg Glu Phe Leu Thr Ala Arg Arg 25 30 35 aat cgt ctc act cca aaa gac gcc gga ttg cct att tac caa ggc aaa 259 Asn Arg Leu Thr Pro Lys Asp Ala Gly Leu Pro Ile Tyr Gln Gly Lys 40 45 50 agg cga gtt ccg ggg ctt cga cgt gaa gaa gtg gcc atg ttg gct ggc 307 Arg Arg Val Pro Gly Leu Arg Arg Glu Glu Val Ala Met Leu Ala Gly 55 60 65 gtg agc gtg gac tat tac aca cgt ctt gaa cga ggc aac ttg agt ggt 355 Val Ser Val Asp Tyr Tyr Thr Arg Leu Glu Arg Gly Asn Leu Ser Gly 70 75 80 85 gtg tca gaa cag gtg tta agc gcg tta gct act gcc tta cag ctg gat 403 Val Ser Glu Gln Val Leu Ser Ala Leu Ala Thr Ala Leu Gln Leu Asp 90 95 100 gat gcg gag acg cag cat ctg ttt gat ctg gcc aag ctc agt aat tca 451 Asp Ala Glu Thr Gln His Leu Phe Asp Leu Ala Lys Leu Ser Asn Ser 105 110 115 ccg gcg tca cgg cgt aag cgt acc cct gca ccg aag tct gtg ctg cgc 499 Pro Ala Ser Arg Arg Lys Arg Thr Pro Ala Pro Lys Ser Val Leu Arg 120 125 130 cct gag gtg ctg cga att ctc aat tcg atg cac gat att cca gca tat 547 Pro Glu Val Leu Arg Ile Leu Asn Ser Met His Asp Ile Pro Ala Tyr 135 140 145 att cgt tct gaa agc cgt gac ctt ctg gca gcc aac act ttt ggt cgt 595 Ile Arg Ser Glu Ser Arg Asp Leu Leu Ala Ala Asn Thr Phe Gly Arg 150 155 160 165 gcg cta tat gca ccg ttg tat gaa agc acg gtc tcc gat gga att agt 643 Ala Leu Tyr Ala Pro Leu Tyr Glu Ser Thr Val Ser Asp Gly Ile Ser 170 175 180 ggg gaa ccg ggg tca atc aat gtt gca cgc ttt aca ttc ctc gat cca 691 Gly Glu Pro Gly Ser Ile Asn Val Ala Arg Phe Thr Phe Leu Asp Pro 185 190 195 gca gcg cgc gaa ttt ttc cct gag tgg gag aga act tcg gca gat ttg 739 Ala Ala Arg Glu Phe Phe Pro Glu Trp Glu Arg Thr Ser Ala Asp Leu 200 205 210 gta gcc agc ttg cgc acc gtt gca gca cag cgg ccc aac gac acg ttg 787 Val Ala Ser Leu Arg Thr Val Ala Ala Gln Arg Pro Asn Asp Thr Leu 215 220 225 ttt agc aat ttg atc ggt gag ctg gtg acc aag tca gaa gtc ttc gcg 835 Phe Ser Asn Leu Ile Gly Glu Leu Val Thr Lys Ser Glu Val Phe Ala 230 235 240 245 caa atg tgg gcc gac cat aat gtc cgc atg cat cga aca ggt tcc aag 883 Gln Met Trp Ala Asp His Asn Val Arg Met His Arg Thr Gly Ser Lys 250 255 260 aag atc gtg cac ccg ttg gtg ggg gag atg gag ctg gat ttt gaa acg 931 Lys Ile Val His Pro Leu Val Gly Glu Met Glu Leu Asp Phe Glu Thr 265 270 275 ctt gat ctt cca gca gat ccc gat att gcc ctc gtg gtg tac tcc gct 979 Leu Asp Leu Pro Ala Asp Pro Asp Ile Ala Leu Val Val Tyr Ser Ala 280 285 290 gcg gaa ggt tcg aca tct gca atg aac ctt caa ctt ctg gcc aat tgg 1027 Ala Glu Gly Ser Thr Ser Ala Met Asn Leu Gln Leu Leu Ala Asn Trp 295 300 305 aca ggt aat gac agc ccc tcc ctc agc aca gaa ctt ggt gac act att 1075 Thr Gly Asn Asp Ser Pro Ser Leu Ser Thr Glu Leu Gly Asp Thr Ile 310 315 320 325 taattatgac tttcacactg aacaacggac 1105 <210> 74 <211> 325 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 74 Val Ile Ala Tyr Ala Gly Thr Thr Gly Thr Cys Leu Lys Val Ser 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Asn Asp Thr Leu Phe Ser Asn Leu Ile Gly Glu Leu Val Thr Lys 225 230 235 240 Ser Glu Val Phe Ala Gln Met Trp Ala Asp His Asn Val Arg Met His 245 250 255 Arg Thr Gly Ser Lys Lys Ile Val His Pro Leu Val Gly Glu Met Glu 260 265 270 Leu Asp Phe Glu Thr Leu Asp Leu Pro Ala Asp Pro Asp Ile Ala Leu 275 280 285 Val Val Tyr Ser Ala Ala Glu Gly Ser Thr Ser Ala Met Asn Leu Gln 290 295 300 Leu Leu Ala Asn Trp Thr Gly Asn Asp Ser Pro Ser Leu Ser Thr Glu 305 310 315 320 Leu Gly Asp Thr Ile 325 <210> 75 <211> 1903 <212> DNA <213> Corynebacterium glutamicum <220> <221> CDS <222> (101)..(1873) <223> RXA03590 <400> 75 aaaagcaact cacttcgtgc ttttttcacc gaccccggct gtgtggatgc cacccactta 60 caccgcacaa tcgaaaataa aagtaaagga tgttcacctt atg tct gac acc aca 115 Met Ser Asp Thr Thr 1 5 gac agc cac gac cca gca acc tcc cct aca gtc gat tca gcc gca tcc 163 Asp Ser His Asp Pro Ala Thr Ser Pro Thr Val Asp Ser Ala Ala Ser 10 15 20 ggt act tct gac ccc aac cag caa ccc aag aag aaa ttc acc atc att 211 Gly Thr Ser Asp Pro Asn Gln Gln Pro Lys Lys Lys Phe Thr Ile Ile 25 30 35 aag cag gtg aac atg att gcg cgt act gcc att gat gac tgc att aat 259 Lys Gln Val Asn Met Ile Ala Arg Thr Ala Ile Asp Asp Cys Ile Asn 40 45 50 cga cta ggc cca gat gtt gtc acc atg tcc agc gaa gac att gct gat 307 Arg Leu Gly Pro Asp Val Val Thr Met Ser Ser Glu Asp Ile Ala Asp 55 60 65 caa gtg gtc aac tcc att aac gtt gct att gcc aga gaa aac aca cgt 355 Gln Val Val Asn Ser Ile Asn Val Ala Ile Ala Arg Glu Asn Thr Arg 70 75 80 85 gcc caa gat gcc aat gct gcg gtg cgt tac aca cct atc ttt aag ctc 403 Ala Gln Asp Ala Asn Ala Ala Val Arg Tyr Thr Pro Ile Phe Lys Leu 90 95 100 gat ttc tcc cat gtc gct gtc ctt atg cgc aga ctg cat gtg att atc 451 Asp Phe Ser His Val Ala Val Leu Met Arg Arg Leu His Val Ile Ile 105 110 115 aac atc gcg cca tcg cat aac tct gat cct gac agc gat atg ttg gct 499 Asn Ile Ala Pro Ser His Asn Ser Asp Pro Asp Ser Asp Met Leu Ala 120 125 130 att tac gac ccc aac cca cgc agc gag cat tac ggg atc tat cgc acc 547 Ile Tyr Asp Pro Asn Pro Arg Ser Glu His Tyr Gly Ile Tyr Arg Thr 135 140 145 tca gag gct gaa ata cgc cgc gta gcc cgt gaa tac tgc cct gac ctc 595 Ser Glu Ala Glu Ile Arg Arg Val Ala Arg Glu Tyr Cys Pro Asp Leu 150 155 160 165 acc tca gcg cag ttt aga gaa ctg cag atg gca ctc tca gat gct gca 643 Thr Ser Ala Gln Phe Arg Glu Leu Gln Met Ala Leu Ser Asp Ala Ala 170 175 180 cct cgt aaa gtc cgc cac aag cag cgt gac ttg att ccc gtg aaa aac 691 Pro Arg Lys Val Arg His Lys Gln Arg Asp Leu Ile Pro Val Lys Asn 185 190 195 ggc atc ttt aat tac tcg act aaa caa cta gaa ccg ttt tct caa gag 739 Gly Ile Phe Asn Tyr Ser Thr Lys Gln Leu Glu Pro Phe Ser Gln Glu 200 205 210 ttt gtc ttt ctt gct aaa tct gca gtg aac tac aac cca aat gca caa 787 Phe Val Phe Leu Ala Lys Ser Ala Val Asn Tyr Asn Pro Asn Ala Gln 215 220 225 aac cct gtc atc act cat ccc cag gat ggc tct gtc tgg gat gtt gaa 835 Asn Pro Val Ile Thr His Pro Gln Asp Gly Ser Val Trp Asp Val Glu 230 235 240 245 tca tgg atg aac gat ctc tcc gat gac cct gaa gtc gtt aac ctg ctg 883 Ser Trp Met Asn Asp Leu Ser Asp Asp Pro Glu Val Val Asn Leu Leu 250 255 260 tgg gag att atc ggc gct atc gtg cgc ccc tat gtg tcc tgg aac aag 931 Trp Glu Ile Ile Gly Ala Ile Val Arg Pro Tyr Val Ser Trp Asn Lys 265 270 275 tct gcc tgg ttc tac tca gag gcc ggc aac aac ggt aaa ggc acg ctc 979 Ser Ala Trp Phe Tyr Ser Glu Ala Gly Asn Asn Gly Lys Gly Thr Leu 280 285 290 gtt gag ctc atg cgc aac atc ttg ggc gca gag gcc tat acc agt atc 1027 Val Glu Leu Met Arg Asn Ile Leu Gly Ala Glu Ala Tyr Thr Ser Ile 295 300 305 cag ctc tcg gac ttc tct aaa gag ttc cac ctt gaa tca ctg act cgt 1075 Gln Leu Ser Asp Phe Ser Lys Glu Phe His Leu Glu Ser Leu Thr Arg 310 315 320 325 gca caa gca atc ctt gtt gat gag aac gat gtc ggc gcc ttc tta gaa 1123 Ala Gln Ala Ile Leu Val Asp Glu Asn Asp Val Gly Ala Phe Leu Glu 330 335 340 aag tca gca aac ctt aaa gcg att gtc acc aat gac gtc atc tcc att 1171 Lys Ser Ala Asn Leu Lys Ala Ile Val Thr Asn Asp Val Ile Ser Ile 345 350 355 aac cgc aag cac aaa acc atg ctc agc tat cag ttt tat ggc ttt atg 1219 Asn Arg Lys His Lys Thr Met Leu Ser Tyr Gln Phe Tyr Gly Phe Met 360 365 370 gtg cag tgt att aac ggc ttc ccc aag gtc aaa gac cag tcg gag tca 1267 Val Gln Cys Ile Asn Gly Phe Pro Lys Val Lys Asp Gln Ser Glu Ser 375 380 385 ttt ttc agg cgc caa ctc ttt gtg ccg ttt gag aaa agc ttc acc ggt 1315 Phe Phe Arg Arg Gln Leu Phe Val Pro Phe Glu Lys Ser Phe Thr Gly 390 395 400 405 gcc gag cgc aag tac atc aaa gac gac tac atg tcg cgc act gat gtc 1363 Ala Glu Arg Lys Tyr Ile Lys Asp Asp Tyr Met Ser Arg Thr Asp Val 410 415 420 ctc gaa tat gta ctg cac cgc gta ctg cat atg aac tac gac aat ctc 1411 Leu Glu Tyr Val Leu His Arg Val Leu His Met Asn Tyr Asp Asn Leu 425 430 435 tcc acc cct gct gca gct ctc gct gtg ctg gat gaa tac aaa gag ttt 1459 Ser Thr Pro Ala Ala Ala Leu Ala Val Leu Asp Glu Tyr Lys Glu Phe 440 445 450 gtc gat cct gtg cgc gca ttc tgg aat gaa ttc agc gat caa ttt gtc 1507 Val Asp Pro Val Arg Ala Phe Trp Asn Glu Phe Ser Asp Gln Phe Val 455 460 465 tgg gat ctt ctt ccc ctg caa ttc ctc tac gag 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<210> 77 <211> 994 <212> DNA <213> Corynebacterium glutamicum <220> <221> CDS <222> (101)..(964) <223> RXA03607 <400> 77 gggtaagaac ttacaggatc tcataggtca ggtgtttggg cgatggactg tcatagatcg 60 agcggaaagt agggtttcct ccacaggaag gaaaaccacc atg tgg cat tgc aga 115 Met Trp His Cys Arg 1 5 tgt act tgc ggt gtt gag aaa gat ctt gct gcg ggg tca ctg aag aat 163 Cys Thr Cys Gly Val Glu Lys Asp Leu Ala Ala Gly Ser Leu Lys Asn 10 15 20 ggt gat tcg aaa tcg tgt ggt tgt cta aaa atc gag tcg ctt tca aag 211 Gly Asp Ser Lys Ser Cys Gly Cys Leu Lys Ile Glu Ser Leu Ser Lys 25 30 35 aat agg gat tta gtt ggt tcc aca ttt ggt cga tgg tct gtt gtt cga 259 Asn Arg Asp Leu Val Gly Ser Thr Phe Gly Arg Trp Ser Val Val Arg 40 45 50 cgt ggt gag gac gtg ctg cag tgg ggt cgc tta tct aag gcg tgg ttt 307 Arg Gly Glu Asp Val Leu Gln Trp Gly Arg Leu Ser Lys Ala Trp Phe 55 60 65 tgc gag tgc gag tgt gga gcg aca agg gac gta ttg gaa cag tct ttg 355 Cys Glu Cys Glu Cys Gly Ala Thr Arg Asp Val Leu Glu Gln Ser Leu 70 75 80 85 ttg cgg 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195 gtt ggt gga gga cca ctg agt tat gat ttt ttg gtt ttc aag gat acc 739 Val Gly Gly Gly Pro Leu Ser Tyr Asp Phe Leu Val Phe Lys Asp Thr 200 205 210 gag ccc tgg ttg ttg att gag tgc caa ggt gag cag cat ttt aga cca 787 Glu Pro Trp Leu Leu Ile Glu Cys Gln Gly Glu Gln His Phe Arg Pro 215 220 225 gtt gag tat ttc ggt gga gag agt cgt ttc gcg atc caa caa gag cac 835 Val Glu Tyr Phe Gly Gly Glu Ser Arg Phe Ala Ile Gln Gln Glu His 230 235 240 245 gac aga cga aaa cga gcg ttt act gta gtc cga gag cta aca ctt ttg 883 Asp Arg Arg Lys Arg Ala Phe Thr Val Val Arg Glu Leu Thr Leu Leu 250 255 260 gag atc cca tat acg gcg aga aca gca gaa tca att ggc gag tta tta 931 Glu Ile Pro Tyr Thr Ala Arg Thr Ala Glu Ser Ile Gly Glu Leu Leu 265 270 275 gta agt ggt ccg ttt cag gaa gaa gtt ttt gga tagcggtttt gcgtagactg 984 Val Ser Gly Pro Phe Gln Glu Glu Val Phe Gly 280 285 acgaagaata 994 <210> 78 <211> 288 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 78 Met Trp His Cys Arg Cys Thr Cys Gly Val Glu Lys Asp Leu Ala Ala 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gcg aac 1987 Glu Ser Val Ala Arg Gln Gly Gly Leu Lys Ala Leu Val Asp Ala Asn 615 620 625 ctg gag cac atc gac gcg cgt tca gta aac tca ctc aag ctt ttc gac 2035 Leu Glu His Ile Asp Ala Arg Ser Val Asn Ser Leu Lys Leu Phe Asp 630 635 640 645 gac gcc gaa ggc cgt gcc gtg aac gtt cga gtc gga cgc tac ggt ccg 2083 Asp Ala Glu Gly Arg Ala Val Asn Val Arg Val Gly Arg Tyr Gly Pro 650 655 660 tac atc gag cgc atc gtg ggc acc acc gcg gaa ggc gag cca gaa ttt 2131 Tyr Ile Glu Arg Ile Val Gly Thr Thr Ala Glu Gly Glu Pro Glu Phe 665 670 675 cag cgc gcc aac cta cct gag gaa acc acg cct gat gag ctg acc ctc 2179 Gln Arg Ala Asn Leu Pro Glu Glu Thr Thr Pro Asp Glu Leu Thr Leu 680 685 690 gag gtc gct gag aag ctc ttc gct acc cca caa ggt gga cgt gaa ctg 2227 Glu Val Ala Glu Lys Leu Phe Ala Thr Pro Gln Gly Gly Arg Glu Leu 695 700 705 ggc att aac cca gca aac ggt cgc atg gtg gtg gct aag gaa ggc cgc 2275 Gly Ile Asn Pro Ala Asn Gly Arg Met Val Val Ala Lys Glu Gly Arg 710 715 720 725 ttt ggt cca tac gtg atc gag cag gtc acg gac tca gag cgc gct ggc 2323 Phe Gly Pro Tyr Val Ile Glu Gln Val Thr Asp Ser Glu Arg Ala Gly 730 735 740 gcc gaa gcc caa gca gaa gaa gtc gtt gca gcg gaa cga aaa gct gaa 2371 Ala Glu Ala Gln Ala Glu Glu Val Val Ala Ala Glu Arg Lys Ala Glu 745 750 755 gac gaa caa cgt gcc acc gat gga atg cga ccc aag aac tgg gaa acc 2419 Asp Glu Gln Arg Ala Thr Asp Gly Met Arg Pro Lys Asn Trp Glu Thr 760 765 770 aag act gcc gca aac cag aag gaa aag cgc atc aac cag ctg gtt gag 2467 Lys Thr Ala Ala Asn Gln Lys Glu Lys Arg Ile Asn Gln Leu Val Glu 775 780 785 gaa aac ctc aag cca gcg acc gca tcc ctg ttc agc ggc atg gaa cct 2515 Glu Asn Leu Lys Pro Ala Thr Ala Ser Leu Phe Ser Gly Met Glu Pro 790 795 800 805 gca acc gtg acc ctg gaa gaa gcc ctc aag ctg ctg tcc ctg cca cgc 2563 Ala Thr Val Thr Leu Glu Glu Ala Leu Lys Leu Leu Ser Leu Pro Arg 810 815 820 gaa gta ggt gtc gat cct tcc gac aac gaa gtg atc acc gct caa aac 2611 Glu Val Gly Val Asp Pro Ser Asp Asn Glu Val Ile Thr Ala Gln Asn 825 830 835 gga cga tac ggc cct tat ctg aag aag ggt agc gac tcc cgt tcc ctc 2659 Gly Arg Tyr Gly Pro Tyr Leu Lys Lys Gly Ser Asp Ser Arg Ser Leu 840 845 850 aac agc gaa gag cag atc ttc acc gtc act ttg gat gag gct cgc cgc 2707 Asn Ser Glu Glu Gln Ile Phe Thr Val Thr Leu Asp Glu Ala Arg Arg 855 860 865 atc tac gcc gaa cca aag cgt cgt gga cgc gcc gct gct cag cca cca 2755 Ile Tyr Ala Glu Pro Lys Arg Arg Gly Arg Ala Ala Ala Gln Pro Pro 870 875 880 885 ctg aag caa ctt ggc gac aat gac gtt tcc ggc aaa cca atg acc gtc 2803 Leu Lys Gln Leu Gly Asp Asn Asp Val Ser Gly Lys Pro Met Thr Val 890 895 900 aag gac gga cgt ttc ggc cca tac gtc acc gac ggc acc acc aac gcg 2851 Lys Asp Gly Arg Phe Gly Pro Tyr Val Thr Asp Gly Thr Thr Asn Ala 905 910 915 tca ctg cgc aag ggc gat gtt cca gag tcc ctg acc gat gcg cgt gcc 2899 Ser Leu Arg Lys Gly Asp Val Pro Glu Ser Leu Thr Asp Ala Arg Ala 920 925 930 aac gag tta ctt tcc gag cgt cgt gcc aag gaa gca gca gat ggc gga 2947 Asn Glu Leu Leu Ser Glu Arg Arg Ala Lys Glu Ala Ala Asp Gly Gly 935 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agc aga gat ccc cgc cca 1939 Leu Ala Val Val Met Thr Pro Ala Asn Gln Ser Arg Asp Pro Arg Pro 600 605 610 tgg gtg acc acc gaa tct ggt tgg tca ggt cgt gtg gat gcg gaa tcc 1987 Trp Val Thr Thr Glu Ser Gly Trp Ser Gly Arg Val Asp Ala Glu Ser 615 620 625 ttt act aat ccg ccg atc acc att ggg cat atg cgt ctg cct cgc caa 2035 Phe Thr Asn Pro Pro Ile Thr Ile Gly His Met Arg Leu Pro Arg Gln 630 635 640 645 gct att gaa gag cct cgc cgc aat gcc cgg cgc gtc cag gaa ctg ttt 2083 Ala Ile Glu Glu Pro Arg Arg Asn Ala Arg Arg Val Gln Glu Leu Phe 650 655 660 agg cgt gag cac ttc aag cga ccc aac aag atg cgg gag ttt gct cgg 2131 Arg Arg Glu His Phe Lys Arg Pro Asn Lys Met Arg Glu Phe Ala Arg 665 670 675 gtt cgt ccc aat gag gca gtg acc aaa ctg cgt aat gct att cgg gat 2179 Val Arg Pro Asn Glu Ala Val Thr Lys Leu Arg Asn Ala Ile Arg Asp 680 685 690 cat gag gcg cat cat tgg cct gat cgg gag cac ttg gct cgc acc gcg 2227 His Glu Ala His His Trp Pro Asp Arg Glu His Leu Ala Arg Thr Ala 695 700 705 gag cgt atg atc cgt 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Asp His Arg Pro Val Pro Leu Asp Gln Tyr Met Met Val Gln Arg Lys 195 200 205 Val Met Pro Leu Phe Glu Pro Gly Thr Asp Gly Arg Val Asn Lys Glu 210 215 220 Leu Glu Ala Thr Ile Asp Arg Leu Asn Ser Lys Gln Ser Glu Gln Gly 225 230 235 240 Arg Ala Ala Tyr Arg Ser Gly Glu Gly Phe Arg Ala Arg Ser Lys Gly 245 250 255 Asp Lys Gln Asp Ser Arg Thr Gly Lys Pro Arg Glu Gln Asp Arg His 260 265 270 Arg Pro Leu Gly Arg Pro Glu Val Leu Ser Ile Leu Lys Gly Ile Asn 275 280 285 Met Leu Pro Ala Ile Thr Phe Ile Phe Ser Arg Ala Gly Cys Asp Gly 290 295 300 Ala Leu Tyr Gln Cys Leu Arg Ser Lys Leu Val Leu Thr Asp Gln Ala 305 310 315 320 Glu Ser Glu Glu Ile Ala Arg Ile Val Asp Ala Gly Val Val Gly Ile 325 330 335 Pro Glu Glu Asp Leu Gln Val Leu Asn Phe Lys Gln Trp Arg Ala Ala 340 345 350 Leu Met Arg Gly Phe Ala Ala His His Ala Gly Met Leu Pro Ala Phe 355 360 365 Arg His Ile Val Glu Glu Leu Phe Val Lys Gly Leu Val Arg Ala Val 370 375 380 Phe Ala Thr Glu Thr Leu Ala Leu Gly Ile Asn Met Pro Ala Arg Thr 385 390 395 400 Val Val Leu Glu Lys Met Val Lys Phe Asp Gly Glu Gly His Val Asp 405 410 415 Leu Thr Pro Gly Gln Tyr Thr Gln Leu Thr Gly Arg Ala Gly Arg Arg 420 425 430 Gly Ile Asp Val Leu Gly Asn Ala Val Val Gln Trp Ser Pro Ala Leu 435 440 445 Asp Pro Arg Trp Val Ala Gly Leu Ala Ser Thr Arg Thr Tyr Pro Leu 450 455 460 Ile Ser Thr Phe Gln Pro Gly Tyr Asn Met Ser Val Asn Leu Leu Lys 465 470 475 480 Thr Ile Gly Tyr Glu Pro Ser Leu Arg Leu Leu Glu Lys Ser Phe Ala 485 490 495 Gln Phe Gln Ala Asp Gly Ser Val Val Gly Asp Val Arg Glu Ile Glu 500 505 510 Arg Ala Glu Ala Lys Val Ala Glu Leu Arg Ala Gln Leu Asn Lys Glu 515 520 525 Ile Ala Ala Thr Asn Pro Ala Val Arg Glu Asp Gln Asp Ala Val Glu 530 535 540 Val Phe Ile Asp Tyr Met Glu Leu Arg Arg Glu Leu Asn Glu Glu Glu 545 550 555 560 Lys Leu Asn Arg Lys Gln Ser Ile Glu Asp Arg Asn Val Glu Thr Val 565 570 575 Arg Val Leu Ser Lys Leu Gln Ile Gly Asp Val Ile Ala Met Pro Gly 580 585 590 Arg Lys Arg Pro Val Leu Ala Val Val Met Thr Pro Ala Asn Gln Ser 595 600 605 Arg Asp Pro Arg Pro Trp Val Thr Thr Glu Ser Gly Trp Ser Gly Arg 610 615 620 Val Asp Ala Glu Ser Phe Thr Asn Pro Pro Ile Thr Ile Gly His Met 625 630 635 640 Arg Leu Pro Arg Gln Ala Ile Glu Glu Pro Arg Arg Asn Ala Arg Arg 645 650 655 Val Gln Glu Leu Phe Arg Arg Glu His Phe Lys Arg Pro Asn Lys Met 660 665 670 Arg Glu Phe Ala Arg Val Arg Pro Asn Glu Ala Val Thr Lys Leu Arg 675 680 685 Asn Ala Ile Arg Asp His Glu Ala His His Trp Pro Asp Arg Glu His 690 695 700 Leu Ala Arg Thr Ala Glu Arg Met Ile Arg Lys Glu Arg Asp Leu Ala 705 710 715 720 Lys Leu Thr Gly Asn Val Asp Lys Ala Arg Glu Thr Leu Gly Arg Thr 725 730 735 Phe Glu Arg Ile Leu Ser Leu Leu Ser Glu Met Asp Tyr Val Asp Tyr 740 745 750 Ser Asn Pro Asp Asn Pro Val Ile Thr Asp Glu Gly Glu Arg Leu Ala 755 760 765 Lys Ile His Ser Glu Ala Asp Leu Leu Val Ala Gln Cys Leu Lys Arg 770 775 780 Gly Ile Trp Asp Asn Leu Asp Pro Ala Glu Leu Ala Gly Val Val Ser 785 790 795 800 Met Cys Thr Phe Glu Asn Arg Arg Glu Thr Gly Gly Glu Ala Gln Ala 805 810 815 Val 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aag 144 Arg Ile Asn His Ala Tyr Leu Phe Ser Gly Pro Arg Gly Cys Gly Lys 35 40 45 acg tcg tcg gca cgc atc ctt gcc cgg tcc ctc aac tgc gtg gaa ggc 192 Thr Ser Ser Ala Arg Ile Leu Ala Arg Ser Leu Asn Cys Val Glu Gly 50 55 60 cca act tcc acg ccg tgt ggg gtg tgt aat tct tgc gta gcg ctg gcc 240 Pro Thr Ser Thr Pro Cys Gly Val Cys Asn Ser Cys Val Ala Leu Ala 65 70 75 80 ccg ggt ggc cct gga acc ctt gat gta aca gag ctc gac gcc gcg agt 288 Pro Gly Gly Pro Gly Thr Leu Asp Val Thr Glu Leu Asp Ala Ala Ser 85 90 95 aac aat ggt gtc gat gac atg cgt gaa ctg cgc gaa cgc gcg aac tac 336 Asn Asn Gly Val Asp Asp Met Arg Glu Leu Arg Glu Arg Ala Asn Tyr 100 105 110 gcc ccg gcg gaa tct cgc tac cgc gtg ttc atc att gac gaa gcc cac 384 Ala Pro Ala Glu Ser Arg Tyr Arg Val Phe Ile Ile Asp Glu Ala His 115 120 125 atg atc agt acc caa ggc ttc aac gcc ttg ctg aaa atc gtt gaa gag 432 Met Ile Ser Thr Gln Gly Phe Asn Ala Leu Leu Lys Ile Val Glu Glu 130 135 140 cca cca gcg cac ctg att ttc atc ttc gcc acc acc gag ccg gac 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atc gat aac gtc atc 816 Ala Ser Lys Asp Asn Ala Ser Met Phe Thr Thr Ile Asp Asn Val Ile 260 265 270 gaa gaa ggc ctc gaa ccg cga cgc ttc acg atc gac ctc ctc gac cgc 864 Glu Glu Gly Leu Glu Pro Arg Arg Phe Thr Ile Asp Leu Leu Asp Arg 275 280 285 ctc cgc gac ttg atg gtc ctc caa gcc gtc cca gaa gca cta aac ctc 912 Leu Arg Asp Leu Met Val Leu Gln Ala Val Pro Glu Ala Leu Asn Leu 290 295 300 ggg ctt gtc gac gcc ccc acc gac cgc gcc gac gcc cta atc gaa caa 960 Gly Leu Val Asp Ala Pro Thr Asp Arg Ala Asp Ala Leu Ile Glu Gln 305 310 315 320 tcc acc ctg ttc aaa ggc aac gag ctc gcc aac cta gcc tcc atg gtg 1008 Ser Thr Leu Phe Lys Gly Asn Glu Leu Ala Asn Leu Ala Ser Met Val 325 330 335 aac tcc gga ctc gac gac atg cgt ggt gcc acc tca ccg cgc ctc ctt 1056 Asn Ser Gly Leu Asp Asp Met Arg Gly Ala Thr Ser Pro Arg Leu Leu 340 345 350 ctg gaa atc ctc tgc gcc cga ctg ctc ctg gca agc aat acc gtg gca 1104 Leu Glu Ile Leu Cys Ala Arg Leu Leu Leu Ala Ser Asn Thr Val Ala 355 360 365 ggt cca gcg gtc agt agt tcg act gac gct gcg cct gca gct act ccg 1152 Gly Pro Ala Val Ser Ser Ser Thr Asp Ala Ala Pro Ala Ala Thr Pro 370 375 380 ggt ggt ctc act ggt att gct gct gcc cgc gcg aaa gca cgg gag tat 1200 Gly Gly Leu Thr Gly Ile Ala Ala Ala Arg Ala Lys Ala Arg Glu Tyr 385 390 395 400 gga cag aag aag gca gct cca gct cct gca cca act cct gcg ccc gag 1248 Gly Gln Lys Lys Ala Ala Pro Ala Pro Ala Pro Thr Pro Ala Pro Glu 405 410 415 cca gtg cgc gaa cag tct ctt gca cca acg cct gaa cca acg cca gcg 1296 Pro Val Arg Glu Gln Ser Leu Ala Pro Thr Pro Glu Pro Thr Pro Ala 420 425 430 gct gaa cct aca tct cag ccc gcg ccg gaa ccg gaa ccc gcc agg gaa 1344 Ala Glu Pro Thr Ser Gln Pro Ala Pro Glu Pro Glu Pro Ala Arg Glu 435 440 445 cca gtg gtg gaa gtg cgg gag gcg agc gtc gaa aag cag cct gca agc 1392 Pro Val Val Glu Val Arg Glu Ala Ser Val Glu Lys Gln Pro Ala Ser 450 455 460 agt gat ccc ctc gaa acc att cga agc cgc tgg tca gag ctg cgc aac 1440 Ser Asp Pro Leu Glu Thr Ile Arg Ser Arg Trp Ser Glu Leu Arg Asn 465 470 475 480 atc gtg gaa aaa caa agt gtg cgc acc tca atc atg ctg acc gaa gcg 1488 Ile Val Glu Lys Gln Ser Val Arg Thr Ser Ile Met Leu Thr Glu Ala 485 490 495 cga gtt ttg gga ctg cga ggc gat acc ctc gtg ctc ggt cac agc acc 1536 Arg Val Leu Gly Leu Arg Gly Asp Thr Leu Val Leu Gly His Ser Thr 500 505 510 ggg gcg ttg gct gcg cgt ttg aac gct gct gat cac aac gga att ttg 1584 Gly Ala Leu Ala Ala Arg Leu Asn Ala Ala Asp His Asn Gly Ile Leu 515 520 525 gtc aag gtg ttg gct gag gaa act ggt ctg cag ctc aag gtc gaa tgc 1632 Val Lys Val Leu Ala Glu Glu Thr Gly Leu Gln Leu Lys Val Glu Cys 530 535 540 att gtg ggc acg aac cca gcc gaa gct gga ttt acc gcc cag cct gct 1680 Ile Val Gly Thr Asn Pro Ala Glu Ala Gly Phe Thr Ala Gln Pro Ala 545 550 555 560 gtg caa aag agc acg tgg aac ccc aac tac gac tcc aaa cca gcc act 1728 Val Gln Lys Ser Thr Trp Asn Pro Asn Tyr Asp Ser Lys Pro Ala Thr 565 570 575 cca agt gcg cct gcg cag cct cag acg cct aag caa gaa tcc gtg ccc 1776 Pro Ser Ala Pro Ala Gln Pro Gln Thr Pro Lys Gln Glu Ser Val 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150 155 160 gag gca gaa atg ctt ctg gag aag aag gac gtt gag gca gac gca gag 528 Glu Ala Glu Met Leu Leu Glu Lys Lys Asp Val Glu Ala Asp Ala Glu 165 170 175 tct gac att gct gag cgt gct gaa aag ctc gaa gag gat ctt gct gaa 576 Ser Asp Ile Ala Glu Arg Ala Glu Lys Leu Glu Glu Asp Leu Ala Glu 180 185 190 ctt gag gca gct ggc gct aag gcc gac gct cgc cgc aag gtt cag gct 624 Leu Glu Ala Ala Gly Ala Lys Ala Asp Ala Arg Arg Lys Val Gln Ala 195 200 205 gct gcc gat aag gaa atg cag cac atc cgt gag cgt gca cag cgc gaa 672 Ala Ala Asp Lys Glu Met Gln His Ile Arg Glu Arg Ala Gln Arg Glu 210 215 220 atc gat cgt ctc gat gag gtc tgg cag acc ttc atc aag ctt gct cca 720 Ile Asp Arg Leu Asp Glu Val Trp Gln Thr Phe Ile Lys Leu Ala Pro 225 230 235 240 aag cag atg atc cgc gat gag aag ctc tac gat gaa ctg atc gac cgc 768 Lys Gln Met Ile Arg Asp Glu Lys Leu Tyr Asp Glu Leu Ile Asp Arg 245 250 255 tac gag gat tac ttc acc ggt ggt atg ggt gca gag tcc att gag gct 816 Tyr Glu Asp Tyr Phe Thr Gly Gly Met Gly Ala Glu Ser Ile Glu Ala 260 265 270 ttg atc cag aac ttc gac ctt gat gct gag gct gaa gag ctg cgc gac 864 Leu Ile Gln Asn Phe Asp Leu Asp Ala Glu Ala Glu Glu Leu Arg Asp 275 280 285 atc atc aac aat ggc aag ggc cag aag aag atg cgt gca ctg aag cgc 912 Ile Ile Asn Asn Gly Lys Gly Gln Lys Lys Met Arg Ala Leu Lys Arg 290 295 300 ctg aag gtt gtt gca gcc ttc cag cgt tcc ggc aac gat cct gcc ggc 960 Leu Lys Val Val Ala Ala Phe Gln Arg Ser Gly Asn Asp Pro Ala Gly 305 310 315 320 atg gtt ttg aac gcg atc cca gtg atc cca cca gag ctt cgc cca atg 1008 Met Val Leu Asn Ala Ile Pro Val Ile Pro Pro Glu Leu Arg Pro Met 325 330 335 gtt cag ctt gac ggt ggt cgc ttc gct acc tcc gac ttg aac gac ctt 1056 Val Gln Leu Asp Gly Gly Arg Phe Ala Thr Ser Asp Leu Asn Asp Leu 340 345 350 tac cgt cgt gtg atc aac cgc aac aac cgt ctg aag cgc atg att gag 1104 Tyr Arg Arg Val Ile Asn Arg Asn Asn Arg Leu Lys Arg Met Ile Glu 355 360 365 ctc ggt gca cct gag atc atc gtg aac aac gag aag cgc atg ctg cag 1152 Leu Gly Ala Pro Glu Ile Ile Val Asn Asn Glu Lys Arg Met Leu Gln 370 375 380 gaa tct gtg gac gcg ctg ttc gac aac ggt cgt cgt ggt cgc cca gtt 1200 Glu Ser Val Asp Ala Leu Phe Asp Asn Gly Arg Arg Gly Arg Pro Val 385 390 395 400 acc gga ccg ggt aac cgt ccg ctg aag tct ctg tct gac ttg ctc aag 1248 Thr Gly Pro Gly Asn Arg Pro Leu Lys Ser Leu Ser Asp Leu Leu Lys 405 410 415 ggc aag caa ggc cgt ttc cgt cag aac ctt ctg ggt aag cgt gtt gac 1296 Gly Lys Gln Gly Arg Phe Arg Gln Asn Leu Leu Gly Lys Arg Val Asp 420 425 430 tac tct ggt cgt tcc gta att atc gtt ggt cct cag ctg cgc ctc cac 1344 Tyr Ser Gly Arg Ser Val Ile Ile Val Gly Pro Gln Leu Arg Leu His 435 440 445 gaa tgt ggt ctg cct aag ctg atg gct ctc gag ctc ttc aag cct ttc 1392 Glu Cys Gly Leu Pro Lys Leu Met Ala Leu Glu Leu Phe Lys Pro Phe 450 455 460 gtc atg aag cgc ttg gtg gag aac gag tac gca cag aac atc aag tct 1440 Val Met Lys Arg Leu Val Glu Asn Glu Tyr Ala Gln Asn Ile Lys Ser 465 470 475 480 gca aag cgc atg gtt gag cgt cag cgc cct gag gtg tgg gac gtc ctc 1488 Ala Lys Arg Met Val Glu Arg Gln Arg Pro Glu Val Trp Asp Val Leu 485 490 495 gaa gag gcc atc tct gag cac cca gtg atg ctg aac cgt gca cca acc 1536 Glu Glu Ala Ile Ser Glu His Pro Val Met Leu Asn Arg Ala Pro Thr 500 505 510 ctg cac cgc ttg ggc att cag gct ttc gag cct gtc ctt gtt gag ggt 1584 Leu His Arg Leu Gly Ile Gln Ala Phe Glu Pro Val Leu Val Glu Gly 515 520 525 aag gct att cag ctg cac cca ctt gct tgt gaa gct ttc aac gcc gac 1632 Lys Ala Ile Gln Leu His Pro Leu Ala Cys Glu Ala Phe Asn Ala Asp 530 535 540 ttc gat ggt gac cag atg gca gtt cac ctg ccg ctg tcc gct gaa gct 1680 Phe Asp Gly Asp Gln Met Ala Val His Leu Pro Leu Ser Ala Glu Ala 545 550 555 560 cag gct gag gct cgc gtg ctg atg ctt gca tcc aac aac att ttg tcc 1728 Gln Ala Glu Ala Arg Val Leu Met Leu Ala Ser Asn Asn Ile Leu Ser 565 570 575 cca gct tcc ggt aag cct ttg gct atg cct cgt ctg gat atg gtg acc 1776 Pro Ala Ser Gly Lys Pro Leu Ala Met Pro Arg Leu Asp Met Val Thr 580 585 590 ggt ctg tac tac ctg act ctg gag aag tct tcc gag gag ttc ggt gga 1824 Gly Leu Tyr Tyr Leu Thr Leu Glu Lys Ser Ser Glu Glu Phe Gly Gly 595 600 605 cag ggc gct tac cag cct gca gat gaa aac ggt cct gaa aag ggc gtg 1872 Gln Gly Ala Tyr Gln Pro Ala Asp Glu Asn Gly Pro Glu Lys Gly Val 610 615 620 tat tcc tca ctg gca gaa gca atc atg gct tat gac cgt ggt gta ctt 1920 Tyr Ser Ser Leu Ala Glu Ala Ile Met Ala Tyr Asp Arg Gly Val Leu 625 630 635 640 ggc ctg cag gcc cca gtt cgc atc cgt ttg aac cac ctg cgc cca cca 1968 Gly Leu Gln Ala Pro Val Arg Ile Arg Leu Asn His Leu Arg Pro Pro 645 650 655 gct gag gta gaa gca gag cag ttc cca gat gga tgg aac cag ggc gag 2016 Ala Glu Val Glu Ala Glu Gln Phe Pro Asp Gly Trp Asn Gln Gly Glu 660 665 670 act tgg ttg gct cac acc acc ttg ggt cgc gtt atg ttc aac gag atc 2064 Thr Trp Leu Ala His Thr Thr Leu Gly Arg Val Met Phe Asn Glu Ile 675 680 685 ctg cct tgg aac tac cca tac ctt gag ggc gtt atg gtc cgt aag ggt 2112 Leu Pro Trp Asn Tyr Pro Tyr Leu Glu Gly Val Met Val Arg Lys Gly 690 695 700 ggc ggc tcc gac aag atc atg ctt ggc gac gta gtc aat gac ctc gct 2160 Gly Gly Ser Asp Lys Ile Met Leu Gly Asp Val Val Asn Asp Leu Ala 705 710 715 720 gct aag tac cca atg atc acc gtg gct cag acc atg gac aag atg aag 2208 Ala Lys Tyr Pro Met Ile Thr Val Ala Gln Thr Met Asp Lys Met Lys 725 730 735 gat gct ggc ttc tac tgg tca acc cgt tcc ggt gtg acc atc gct atg 2256 Asp Ala Gly Phe Tyr Trp Ser Thr Arg Ser Gly Val Thr Ile Ala Met 740 745 750 tct gac gtt ttg gtt ctt cct aac aag gaa gaa atg ctg gac cgc tac 2304 Ser Asp Val Leu Val Leu Pro Asn Lys Glu Glu Met Leu Asp Arg Tyr 755 760 765 gag gaa tct gca cgc cag atc gaa gtt aag tac aac cgc ggt aag ctc 2352 Glu Glu Ser Ala Arg Gln Ile Glu Val Lys Tyr Asn Arg Gly Lys Leu 770 775 780 acc ggc cgt gag cgc tac gac cgt ctg gtc gag ctg tgg aag gac gca 2400 Thr Gly Arg Glu Arg Tyr Asp Arg Leu Val Glu Leu Trp Lys Asp Ala 785 790 795 800 act gac gag gtt gga cag gct gtc gag gat ctg tac cca gac gac aac 2448 Thr Asp Glu Val Gly Gln Ala Val Glu Asp Leu Tyr Pro Asp Asp Asn 805 810 815 cca att cca atg atc gtg aag tct ggt gct gcc ggt aac atg cgt cag 2496 Pro Ile Pro Met Ile Val Lys Ser Gly Ala Ala Gly Asn Met Arg Gln 820 825 830 atc tgg acc ctt gct ggt atg aag ggc atg gtt gtg aac tcg aag ggt 2544 Ile Trp Thr Leu Ala Gly Met Lys Gly Met Val Val Asn Ser Lys Gly 835 840 845 gac tac atc acc cgc ccg atc aag act tcc ttc cgt gaa ggc ttg acc 2592 Asp Tyr Ile Thr Arg Pro Ile Lys Thr Ser Phe Arg Glu Gly Leu Thr 850 855 860 gtt ctc gag tac ttc aac aac tcc cac ggt tcc cgt aag ggc ctg gcc 2640 Val Leu Glu Tyr Phe Asn Asn Ser His Gly Ser Arg Lys Gly Leu Ala 865 870 875 880 gat acc gcg ctg cgt acc gct gac tcc ggt tac ctg acc cgt cgt ctt 2688 Asp Thr Ala Leu Arg Thr Ala Asp Ser Gly Tyr Leu Thr Arg Arg Leu 885 890 895 gtt gac gtc gct cag gac gtc atc gtg cgt gtt gag gac tgt ggc acc 2736 Val Asp Val Ala Gln Asp Val Ile Val Arg Val Glu Asp Cys Gly Thr 900 905 910 cgc cag ggt gtt cgc gtt cct gtc gct gct gag gtt ctg gat gca act 2784 Arg Gln Gly Val Arg Val Pro Val Ala Ala Glu Val Leu Asp Ala Thr 915 920 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Val Gly Gln Arg Leu Leu Arg Gly Ala Ala Asp Pro His Asp Val Leu 1140 1145 1150 gag atc ctc ggt cgc cgt ggt gtg gag cag cac ctc atc gat gag gtg 3504 Glu Ile Leu Gly Arg Arg Gly Val Glu Gln His Leu Ile Asp Glu Val 1155 1160 1165 cag gct gtt tac cgt gca cag ggt gtg gcc atc cac gac aag cac atc 3552 Gln Ala Val Tyr Arg Ala Gln Gly Val Ala Ile His Asp Lys His Ile 1170 1175 1180 gaa atc atc att cgt cag atg ctg cgt cgc ggt acc gtc att gag tcc 3600 Glu Ile Ile Ile Arg Gln Met Leu Arg Arg Gly Thr Val Ile Glu Ser 1185 1190 1195 1200 ggt tcc acc gag ttc ctt cct ggt tct ttg gtt gac ctc tct gag gcg 3648 Gly Ser Thr Glu Phe Leu Pro Gly Ser Leu Val Asp Leu Ser Glu Ala 1205 1210 1215 aag ctg gct aac tct gag gca atc ggt gcg ggc ggt cag cct gca gag 3696 Lys Leu Ala Asn Ser Glu Ala Ile Gly Ala Gly Gly Gln Pro Ala Glu 1220 1225 1230 ctg cgt tct gag atc atg ggt atc acc aag gcc tct ctc gca act gag 3744 Leu Arg Ser Glu Ile Met Gly Ile Thr Lys Ala Ser Leu Ala Thr Glu 1235 1240 1245 tct tgg ctg tct gca gcg tcc 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cgc cgc tac cgc gtc 192 Ile Thr Thr Arg His Arg Gly Gly Gly His Lys Arg Arg Tyr Arg Val 50 55 60 atc gac ttc cgt cgt aac gac aag gat ggc gta ttg gcg aag gtc gct 240 Ile Asp Phe Arg Arg Asn Asp Lys Asp Gly Val Leu Ala Lys Val Ala 65 70 75 80 cac atc gag tac gac cca aac cgt acc gct aac att gca ctg ctt cac 288 His Ile Glu Tyr Asp Pro Asn Arg Thr Ala Asn Ile Ala Leu Leu His 85 90 95 tac ttc gat ggc gag aag cgt tac atc ctc gca ccg aag ggc ctg acc 336 Tyr Phe Asp Gly Glu Lys Arg Tyr Ile Leu Ala Pro Lys Gly Leu Thr 100 105 110 cag ggc acc gtt atc gag tcc ggc gct gca gcc gac atc aag gtt ggt 384 Gln Gly Thr Val Ile Glu Ser Gly Ala Ala Ala Asp Ile Lys Val Gly 115 120 125 aac aac ctg cca ctg cgt aac atc ccg act ggt acc acc atc cac aac 432 Asn Asn Leu Pro Leu Arg Asn Ile Pro Thr Gly Thr Thr Ile His Asn 130 135 140 gtg gag ttg aag cca ggc gca ggt gca aag ctg gca cgt tcc gct gga 480 Val Glu Leu Lys Pro Gly Ala Gly Ala Lys Leu Ala Arg Ser Ala Gly 145 150 155 160 gct tcc atc cag ctt ctt ggt aag gaa ggc tcc tac gca gtt ctg cgt 528 Ala Ser Ile Gln Leu Leu Gly Lys Glu Gly Ser Tyr Ala Val Leu Arg 165 170 175 atg cca tcc tcc gag atc cga cgc gta gac atc cgc tgc cgc gcg act 576 Met Pro Ser Ser Glu Ile Arg Arg Val Asp Ile Arg Cys Arg Ala Thr 180 185 190 gtt ggt gag gtc ggc aac gcc gag cag atc aac att cgt tgg ggt aaa 624 Val Gly Glu Val Gly Asn Ala Glu Gln Ile Asn Ile Arg Trp Gly Lys 195 200 205 gct ggt cgt atg cgt tgg aag ggc tgg cgc cca acc gtc cgt ggt gtc 672 Ala Gly Arg Met Arg Trp Lys Gly Trp Arg Pro Thr Val Arg Gly Val 210 215 220 gtt atg aac ccg gtc gac cac cca cac ggt ggt ggt gaa ggt aag act 720 Val Met Asn Pro Val Asp His Pro His Gly Gly Gly Glu Gly Lys Thr 225 230 235 240 tct ggt ggt cgc cac cca gtc tcc cca tgg gga cag aag gaa ggc cgc 768 Ser Gly Gly Arg His Pro Val Ser Pro Trp Gly Gln Lys Glu Gly Arg 245 250 255 acc cgc aag cct aag cgt tac agc gat gac atg atc gtt cgt cgc cgt 816 Thr Arg Lys Pro Lys Arg Tyr Ser Asp Asp Met Ile Val Arg Arg Arg 260 265 270 cgt gct aac aag aac aag aag cgc 840 Arg Ala Asn Lys Asn Lys Lys Arg 275 280 <210> 90 <211> 280 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 90 Met Ala Ile Arg Lys Tyr Lys Pro Thr Thr Pro Gly Arg Arg Ala Ser 1 5 10 15 Ser Val Ser Met Phe Thr Glu Ile Thr Arg Ser Thr Pro Glu Lys Ser 20 25 30 Leu Leu Arg Pro Leu Ser Lys Thr Gly Gly Arg Asn Ser His Gly His 35 40 45 Ile Thr Thr Arg His Arg Gly Gly Gly His Lys Arg Arg Tyr Arg Val 50 55 60 Ile Asp Phe Arg Arg Asn Asp Lys Asp Gly Val Leu Ala Lys Val Ala 65 70 75 80 His Ile Glu Tyr Asp Pro Asn Arg Thr Ala Asn Ile Ala Leu Leu His 85 90 95 Tyr Phe Asp Gly Glu Lys Arg Tyr Ile Leu Ala Pro Lys Gly Leu Thr 100 105 110 Gln Gly Thr Val Ile Glu Ser Gly Ala Ala Ala Asp Ile Lys Val Gly 115 120 125 Asn Asn Leu Pro Leu Arg Asn Ile Pro Thr Gly Thr Thr Ile His Asn 130 135 140 Val Glu Leu Lys Pro Gly Ala Gly Ala Lys Leu Ala Arg Ser Ala Gly 145 150 155 160 Ala Ser Ile Gln Leu Leu Gly Lys Glu Gly Ser Tyr Ala Val Leu Arg 165 170 175 Met Pro Ser Ser Glu Ile Arg Arg Val Asp Ile Arg Cys 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gca cta cgc cgc gat cac ttg ggt gat gcc gca cct att ccg 192 Leu Ala Ala Leu Arg Arg Asp His Leu Gly Asp Ala Ala Pro Ile Pro 50 55 60 cag gca cga cgc tca ttg gga act att cct aaa gat cag cgc aag gat 240 Gln Ala Arg Arg Ser Leu Gly Thr Ile Pro Lys Asp Gln Arg Lys Asp 65 70 75 80 gcg ggc cgc ttt gtc aac atg gca ctt ggt cgc gca gaa aag cac ttt 288 Ala Gly Arg Phe Val Asn Met Ala Leu Gly Arg Ala Glu Lys His Phe 85 90 95 gct cag gtc aag gtt gtt ttg gaa gaa aag cgc aac gca gaa gtc cta 336 Ala Gln Val Lys Val Val Leu Glu Glu Lys Arg Asn Ala Glu Val Leu 100 105 110 gag ctt gag cgc gtt gac gtc acc gtt cca acc acc cgc gag cag gtt 384 Glu Leu Glu Arg Val Asp Val Thr Val Pro Thr Thr Arg Glu Gln Val 115 120 125 ggt gcg ctg cac ccc atc acg atc ctc aac gag cag atc gca gac atc 432 Gly Ala Leu His Pro Ile Thr Ile Leu Asn Glu Gln Ile Ala Asp Ile 130 135 140 ttc gtg ggc atg ggc tgg gaa atc gcc gag ggc cca gag gtg gaa gca 480 Phe Val Gly Met Gly Trp Glu Ile Ala Glu Gly Pro Glu Val Glu Ala 145 150 155 160 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Val Phe His Gln Ile Glu Gly 225 230 235 240 Leu Ala Val Asp Lys Gly Leu Thr Met Ala His Leu Arg Gly Thr Leu 245 250 255 Asp His Leu Ala Lys Glu Leu Phe Gly Pro Glu Thr Lys Thr Arg Met 260 265 270 Arg Ser Asn Tyr Phe Pro Phe Thr Glu Pro Ser Ala Glu Val Asp Val 275 280 285 Trp Phe Pro Asn Lys Lys Gly Gly Ala Gly Trp Ile Glu Trp Gly Gly 290 295 300 Cys Gly Met Val Asn Pro Asn Val Leu Arg Ala Val Gly Val Asp Pro 305 310 315 320 Glu Glu Tyr Thr Gly Phe Ala Phe Gly Met Gly Ile Glu Arg Thr Leu 325 330 335 Gln Phe Arg Asn Gly Leu Ser Asp Met Arg Asp Met Val Glu Gly Asp 340 345 350 Ile Arg Phe Thr Leu Pro Phe Gly Ile Gln Ala 355 360 <210> 93 <211> 1857 <212> DNA <213> Corynebacterium glutamicum <220> <221> CDS <222> (1)..(1857) <223> RXA07027 <400> 93 atg gca ttt tta cac ttt ggc tca gaa ctg aaa cga ttt ggc cgc gga 48 Met Ala Phe Leu His Phe Gly Ser Glu Leu Lys Arg Phe Gly Arg Gly 1 5 10 15 aaa ctc cca cca ttg ggg ttt gtt gtg gtc atg ttg ctg ccg ttg ctt 96 Lys Leu Pro Pro Leu Gly Phe Val Val Val 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Leu Gly Asn Gln Val 130 135 140 gtc aac act gtt gtg gag acc atg gac acg gaa ttc ggc gtc cgc att 480 Val Asn Thr Val Val Glu Thr Met Asp Thr Glu Phe Gly Val Arg Ile 145 150 155 160 gtg gat aac atg ctc gtc ggt ttc tcc acc ttg ggc gac ggc atg aac 528 Val Asp Asn Met Leu Val Gly Phe Ser Thr Leu Gly Asp Gly Met Asn 165 170 175 caa gcc gcc gaa ggt gcc act acg ctc agc gat ggc gtc ggt tcc gcc 576 Gln Ala Ala Glu Gly Ala Thr Thr Leu Ser Asp Gly Val Gly Ser Ala 180 185 190 aac gac ggt gca gtt cag ctt gcc gac ggc gcg gtc acc ctg cgc gac 624 Asn Asp Gly Ala Val Gln Leu Ala Asp Gly Ala Val Thr Leu Arg Asp 195 200 205 ggc atc gca agt gcc aat gag ggt gcg caa tcg ctt gcc gac ggc gcc 672 Gly Ile Ala Ser Ala Asn Glu Gly Ala Gln Ser Leu Ala Asp Gly Ala 210 215 220 agc cag ctc gac acc ggc ctc ggc tcc gcg gct aca ggc agc caa acg 720 Ser Gln Leu Asp Thr Gly Leu Gly Ser Ala Ala Thr Gly Ser Gln Thr 225 230 235 240 ctc gcc gac ggt cta tcc agc ctg tct gcg ggc acc gcc caa cta ggc 768 Leu Ala Asp Gly Leu Ser Ser Leu Ser Ala Gly Thr Ala Gln Leu Gly 245 250 255 caa ggc gca acc cag gtt tca gat ggc gtg ggc caa ctt gtc gac caa 816 Gln Gly Ala Thr Gln Val Ser Asp Gly Val Gly Gln Leu Val Asp Gln 260 265 270 gta gca cca ctg acc gcc tat gtt cca gac atc aac tct cag ttg atc 864 Val Ala Pro Leu Thr Ala Tyr Val Pro Asp Ile Asn Ser Gln Leu Ile 275 280 285 acc ctg cgc gac ggc gca gcc acc att gcc tct gaa cta tct gat ccc 912 Thr Leu Arg Asp Gly Ala Ala Thr Ile Ala Ser Glu Leu Ser Asp Pro 290 295 300 tcc agc acc tac cgc tcc ggc gtg gac tcc gct gtg agc gca tcc cag 960 Ser Ser Thr Tyr Arg Ser Gly Val Asp Ser Ala Val Ser Ala Ser Gln 305 310 315 320 caa cta gca gcc ggc ctg caa acc ctg aaa gac gga tcc agc caa ctc 1008 Gln Leu Ala Ala Gly Leu Gln Thr Leu Lys Asp Gly Ser Ser Gln Leu 325 330 335 agc atc ggt gca cgc acc ctc gct gat ggc acc agc caa ttg gcc gca 1056 Ser Ile Gly Ala Arg Thr Leu Ala Asp Gly Thr Ser Gln Leu Ala Ala 340 345 350 ggt tcc gaa cag cta gtt gtt ggc gca caa gca ctg cgc gac ggc acc 1104 Gly Ser Glu Gln Leu Val Val Gly Ala Gln Ala Leu Arg Asp Gly Thr 355 360 365 gtc cag ctt gat gaa ggc tcc agc gaa ctc gcc ctc aaa ctc acc gac 1152 Val Gln Leu Asp Glu Gly Ser Ser Glu Leu Ala Leu Lys Leu Thr Asp 370 375 380 ggc gca agc caa gta cca acc ttc gct gac ggc gca gac acc acc atc 1200 Gly Ala Ser Gln Val Pro Thr Phe Ala Asp Gly Ala Asp Thr Thr Ile 385 390 395 400 gca acc cca gtt gaa aca gaa caa gca gga gac acc aca ccg ctc ttc 1248 Ala Thr Pro Val Glu Thr Glu Gln Ala Gly Asp Thr Thr Pro Leu Phe 405 410 415 ggt att ggt ctc gca cca ttc ttc atg gct gtc ggc ctg ttc atg gga 1296 Gly Ile Gly Leu Ala Pro Phe Phe Met Ala Val Gly Leu Phe Met Gly 420 425 430 gca acc gtt gcc tgg atg atc ctg cac cca atc agt cgc cgc gca ctc 1344 Ala Thr Val Ala Trp Met Ile Leu His Pro Ile Ser Arg Arg Ala Leu 435 440 445 gac tcc cgc atg gga ggc ttc cga ggc acc ctg gca agc tac ctt cca 1392 Asp Ser Arg Met Gly Gly Phe Arg Gly Thr Leu Ala Ser Tyr Leu Pro 450 455 460 tca aca gtc tta ggc ctt ggc caa gca acc atc atg tgg gca gta 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Ile Ala Gly Thr His Pro Asp Leu Thr Ile Thr Leu Thr 50 55 60 tgt gga atg cac gct cgt gaa ggc atg act gct gcc caa ctg cat cat 240 Cys Gly Met His Ala Arg Glu Gly Met Thr Ala Ala Gln Leu His His 65 70 75 80 gcg cga gtg ctc cat gac tac tta agc gac cat gat cga ggc ggg gtg 288 Ala Arg Val Leu His Asp Tyr Leu Ser Asp His Asp Arg Gly Gly Val 85 90 95 ttc gtt att ccc cga ttg cgt tat cac ggc aaa atc tat ctt ttc cac 336 Phe Val Ile Pro Arg Leu Arg Tyr His Gly Lys Ile Tyr Leu Phe His 100 105 110 aag aac cag cac aca gat cct att gct tat atc ggt agc gct aac ctc 384 Lys Asn Gln His Thr Asp Pro Ile Ala Tyr Ile Gly Ser Ala Asn Leu 115 120 125 tca gcc atc gtt cct ggg tac acc tct aca ttc gag acc ggc gtc atc 432 Ser Ala Ile Val Pro Gly Tyr Thr Ser Thr Phe Glu Thr Gly Val Ile 130 135 140 tta gac ccc gca cct gaa gat ctc gtg ctt cat ctc aac cgt gat gtc 480 Leu Asp Pro Ala Pro Glu Asp Leu Val Leu His Leu Asn Arg Asp Val 145 150 155 160 gta ccc cta tgt gtc ccc att gac acc gcg cat gtc ccc atc att aaa 528 Val Pro Leu Cys Val Pro Ile Asp Thr Ala His Val Pro Ile Ile Lys 165 170 175 gat caa gaa tcc ccg atg aag cac gtc gct gaa gca aca gct gtg tcc 576 Asp Gln Glu Ser Pro Met Lys His Val Ala Glu Ala Thr Ala Val Ser 180 185 190 acc tct gat gtt gtt gcc atc atg tcc agc cca ttt act tat agt ttt 624 Thr Ser Asp Val Val Ala Ile Met Ser Ser Pro Phe Thr Tyr Ser Phe 195 200 205 gac ctt aaa ctc aaa gcc act gcc agc agc aac ctc aat gct cat aac 672 Asp Leu Lys Leu Lys Ala Thr Ala Ser Ser Asn Leu Asn Ala His Asn 210 215 220 tca ggc ggt ggc gcg cgc aaa cag aaa aac ggt agc ttc ctt gca cgc 720 Ser Gly Gly Gly Ala Arg Lys Gln Lys Asn Gly Ser Phe Leu Ala Arg 225 230 235 240 aat tgg tat gag ggc gaa atc att gtc ggt gtc gag aca aca aga ctc 768 Asn Trp Tyr Glu Gly Glu Ile Ile Val Gly Val Glu Thr Thr Arg Leu 245 250 255 cca ggt tac cca caa aac aaa tcc gaa ttc act gcg gtc act gat gac 816 Pro Gly Tyr Pro Gln Asn Lys Ser Glu Phe Thr Ala Val Thr Asp Asp 260 265 270 ggc tgg tca ttt gtt tgc aaa atc agc gga gga aac gga aag aac cta 864 Gly Trp Ser Phe Val Cys Lys Ile Ser Gly Gly Asn Gly Lys Asn Leu 275 280 285 cgc agc aaa ggt gac ctg tcc atc ctc ggt acg tgg tta aag tct cga 912 Arg Ser Lys Gly Asp Leu Ser Ile Leu Gly Thr Trp Leu Lys Ser Arg 290 295 300 ttc att gaa caa ggt gcc ctg gaa tac ggc gag gat gcc acc caa gaa 960 Phe Ile Glu Gln Gly Ala Leu Glu Tyr Gly Glu Asp Ala Thr Gln Glu 305 310 315 320 aac atc gac cgt ttt ggg aga aca cat atg acc atg cgc tat cac cca 1008 Asn Ile Asp Arg Phe Gly Arg Thr His Met Thr Met Arg Tyr His Pro 325 330 335 gat ttc gat gtg tgg tca ttc gat ctc agc caa acc ccg aag cct tcg 1056 Asp Phe Asp Val Trp Ser Phe Asp Leu Ser Gln Thr Pro Lys Pro Ser 340 345 350 aca cag att ggg cag gat 1074 Thr Gln Ile Gly Gln Asp 355 <210> 96 <211> 358 <212> PRT <213> Corynebacterium glutamicum <400> 96 Met Lys Pro Thr Val Asn Val Val Phe Asn Ala His His Pro Lys Asp 1 5 10 15 Thr Gln Pro Leu Asp Lys Phe Phe Asp Lys Glu Leu Lys Asp Thr His 20 25 30 His Leu Asp Ile Thr Val Gly Tyr Ile Ser Glu Lys Ser Leu Gln Tyr 35 40 45 Leu Leu Leu Ile Ala Gly Thr His Pro Asp Leu Thr Ile Thr Leu Thr 50 55 60 Cys Gly Met His Ala Arg Glu Gly Met Thr Ala Ala Gln Leu His His 65 70 75 80 Ala Arg Val Leu His Asp Tyr Leu Ser Asp His Asp Arg Gly Gly Val 85 90 95 Phe Val Ile Pro Arg Leu Arg Tyr His Gly Lys Ile Tyr Leu Phe His 100 105 110 Lys Asn Gln His Thr Asp Pro Ile Ala Tyr Ile Gly Ser Ala Asn Leu 115 120 125 Ser Ala Ile Val Pro Gly Tyr Thr Ser Thr Phe Glu Thr Gly Val Ile 130 135 140 Leu Asp Pro Ala Pro Glu Asp Leu Val Leu His Leu Asn Arg Asp Val 145 150 155 160 Val Pro Leu Cys Val Pro Ile Asp Thr Ala His Val Pro Ile Ile Lys 165 170 175 Asp Gln Glu Ser Pro Met Lys His Val Ala Glu Ala Thr Ala Val Ser 180 185 190 Thr Ser Asp Val Val Ala Ile Met Ser Ser Pro Phe Thr Tyr Ser Phe 195 200 205 Asp Leu Lys Leu Lys Ala Thr Ala Ser Ser Asn Leu Asn Ala His Asn 210 215 220 Ser Gly Gly Gly Ala Arg Lys Gln Lys Asn Gly Ser Phe Leu Ala Arg 225 230 235 240 Asn Trp Tyr Glu Gly Glu Ile Ile Val Gly Val Glu Thr Thr Arg Leu 245 250 255 Pro Gly Tyr Pro Gln Asn Lys Ser Glu Phe Thr Ala Val Thr Asp Asp 260 265 270 Gly Trp Ser Phe Val Cys Lys Ile Ser Gly Gly Asn Gly Lys Asn Leu 275 280 285 Arg Ser Lys Gly Asp Leu Ser Ile Leu Gly Thr Trp Leu Lys Ser Arg 290 295 300 Phe Ile Glu Gln Gly Ala Leu Glu Tyr Gly Glu Asp Ala Thr Gln Glu 305 310 315 320 Asn Ile Asp Arg Phe Gly Arg Thr His Met Thr Met Arg Tyr His Pro 325 330 335 Asp Phe Asp Val Trp Ser Phe Asp Leu Ser Gln Thr Pro Lys Pro Ser 340 345 350 Thr Gln Ile Gly Gln Asp 355

Claims (8)

  1. 표 1의 컬럼 2에 각각 나타낸 아미노산 서열을 갖는 폴리펩티드를 코딩하며, 표 1의 컬럼 4에 나타낸 아미노산 위치에서 그와 동일 열에 있는 표 1의 컬럼 5에 나타낸 특정 아미노산이 아닌 단백질원성 아미노산을 코딩하는 단리된 핵산 분자.
  2. 제1항에 있어서, 표 1의 컬럼 4에 나타낸 아미노산 위치에서 그와 동일 열에 있는 컬럼 6에 나타낸 아미노산을 코딩하는 단리된 핵산 분자.
  3. 제1항에 따른 하나 이상의 핵산 서열을 포함하는 벡터.
  4. 제3항에 따른 하나 이상의 벡터로 형질감염된 숙주 세포.
  5. 제4항에 있어서, 상기 핵산 분자의 발현에 의해 상기 세포로부터의 정밀 화학물질 (fine chemical) 생산이 조정되는 숙주 세포.
  6. 제3항에 따른 하나 이상의 벡터로 형질감염된 세포를 배양하여 정밀 화학물질이 생산되도록 하는 단계를 포함하는, 정밀 화학물질의 제조 방법.
  7. 제6항에 있어서, 정밀 화학물질이 아미노산인 방법.
  8. 제7항에 있어서, 상기 아미노산이 리신인 방법.
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