KR20050042147A - 항증식 활성을 갖는 피리미도 화합물 - Google Patents

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KR20050042147A
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이 천
안드레이 로버트 다니브스키
윌리엄 해리스
마렉 미할 캐벗
에밀리 아이쥔 류
진-쥔 류
킨-춘 룩
크리스토프 미초드
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에프. 호프만-라 로슈 아게
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D487/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00
    • C07D487/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, not provided for by groups C07D451/00 - C07D477/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D487/04—Ortho-condensed systems

Abstract

KDR 및 FGFR 키나아제 둘 다의 선택적 저해제이며 LCK 에 대해 선택적인 화학식 I 의 신규 피리미도 화합물이 개시된다. 상기 화합물 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염은 고형암, 특히 유방암, 결장암, 폐암 및 전립선암의 치료 또는 조절에 유용한 항증식제이다. 또한 상기 화합물을 함유하는 약학 조성물 및 이들의 제조 방법이 개시된다.
[화학식 I]

Description

항증식 활성을 갖는 피리미도 화합물 {PYRIMIDO COMPOUNDS HAVING ANTIPROLIFERATIVE ACTIVITY}
본 발명은 하기 화학식 I 의 신규 피리미도 화합물 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다:
(식 중,
R1 은 하기 군으로부터 선택되고:
-H,
-COR4, 및
-COOCHR5OCOR4;
R2 및 R3 은 독립적으로 하기로부터 선택되고:
-H, 및
-OR5;
R4 는 하기 군으로부터 선택되고:
-C1-6 알킬,
독립적으로 하기로부터 선택되는 4 이하의 기로 치환되는 -C1-6 알킬:
-NR5R6,
-SR5,
-OR5,
-아릴,
독립적으로 -OR5 및 C1-4 알킬로부터 선택되는 2 이하의 기로 치환되는 -아릴, 및
-헤테로아릴, 및
- 헤테로사이클;
R5 및 R6 은 독립적으로 하기로부터 선택되고:
-H, 및
-C1-5 알킬, 또는
대안적으로, -NR5R6 는 3 내지 7 원자수의 고리를 형성할 수 있고, 상기 고리는 임의로 하나 이상의 부가적 N 또는 O 원자를 포함한다).
상기 화합물은 KDR (키나아제 삽입 도메인-포함 수용체) 및 FGFR (섬유아세포 성장 인자 수용체) 키나아제를 저해하며, LCK (T-세포 티로신 키나아제 p56lck) 에 대해 선택적이다. 상기 화합물 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염은 항증식 활성을 가지며, 암, 특히 고형암의 치료 또는 조절에 유용하다. 또한, 상기 화합물은 유리한 생체이용율 프로필을 갖는다. 본 발명은 또한 상기 화합물을 함유하는 약학 조성물 및 암의 치료 또는 조절, 가장 구체적으로는 유방암, 폐암, 결장암 및 전립선암의 치료 또는 조절 방법에 관한 것이다.
단백질 키나아제는 다양한 세포 기능을 조절하는 단백질 (효소) 클래스이다. 이는 기질 단백질의 구조 변화를 일으키는 단백질 기질 상 특정 아미노산의 인산화로 달성된다. 구조 변화는 기질의 활성 또는 이것이 다른 결합 파트너와 상호작용하는 능력을 조절한다. 단백질 키나아제의 효소 활성은 키나아제가 기질에 포스페이트기를 부가하는 속도를 나타낸다. 이는, 예를 들어 산물로 전환되는 기질의 양을 시간의 함수로 결정하여 측정될 수 있다. 기질 인산화는 단백질 키나아제의 활성 부위에서 일어난다.
티로신 키나아제는 아데노신 트리포스페이트의 말단 포스페이트의 단백질 기질 상 티로신 잔기로의 전달을 촉매하는 단백질 키나아제의 하위세트이다. 상기 키나아제는 세포 증식, 분화 및 이동을 야기하는 성장 인자 신호 전달의 전파에 중요한 역할을 담당한다.
예를 들어, 섬유아세포 성장 인자 (FGF) 및 혈관 내피 성장 인자 (VEGF) 는 암으로 촉진되는 혈관신생의 중요한 매개제로 인지되고 있다. VEGF 는 두 가지 고친화도 수용체를 통한 신호전달로 내피 세포를 활성화시키며, 그 중 하나는 키나아제 삽입 도메인 포함 수용체 (KDR, Hennequin L.F. 등, J. Med. Chem. 2002, 45(6), pp. 1300) 이다. FGF 는 FGF 수용체 (FGFR) 를 통한 신호전달로 내피 세포를 활성화시킨다. 고형암은 성장하기 위해 새로운 혈관의 형성 (혈관신생) 에 의존한다. 따라서, 성장 신호 전달을 방해하여 혈관신생을 느리게 하거나 예방하는 수용체 FGFR 및 KDR 의 저해제는 고형암의 예방 및 치료에 유용한 제제이다 (Klohs W.E. 등, Current Opinion in Biotechnology 1999, 10, p. 544).
단백질 키나아제 촉매 활성의 소분자 저해제의 몇몇 예가 존재한다. 특히, 소분자 저해제는 전형적으로 단백질 키나아제 ATP 결합 부위 (또는 "활성 부위", WO 98/24432 및 Hennequin L.F. 등, J. Med. Chem. 2002, 45(6), pp. 1300 참고) 와 친밀하게 상호작용하여 기질의 인산화를 차단한다. 몇몇 상기 화합물은 다중 표적을 저해한다. 예를 들어, W099/61444 (Warner-Lambert) 에는 시클린 의존적 키나아제 Cdk1, Cdk2 및 Cdk4 뿐만 아니라 성장 인자 수용체 티로신 키나아제 효소 PDGFR 및 FGFR 을 저해하는 것으로 나타나는 하기 화학식의 비시클릭 피리미딘 및 비시클릭 3,4-디히드로피리미딘이 개시되어 있다:
일부 화합물은 또한 Cdk6 을 저해하는 것으로 나타난다.
US 특허 No. 6,150,373 (Hoffmann-La Roche Inc.) 에는 T-세포 티로신 키나아제 p56lck 을 저해하는 것으로 언급되는 하기 화학식의 비시클릭 질소 헤테로사이클이 개시되어 있다:
하나 이상의 유형의 고형암을 치료하기 위해, 쉽게 합성되고, 단백질 키나아제, 특히 FGF 및 KDR 키나아제의 촉매 활성을 저해하는데 효과적인 소분자 화합물이 계속 요구되고 있다. FGF 및 KDR 에 대해 선택적인 소분자 저해제를 제공하는 것이 특히 바람직하다. 이는 다중 표적의 저해에 수반될 수 있는 동시적 독성 및 다른 바람직하지 못한 합병증의 가능성 때문에 바람직하다. 상기 소분자 저해제가 또한 유리한 생체이용율 프로필을 보유하는 것이 바람직하다. 따라서, 본 발명의 목적은 상기 화합물 및 이들 화합물을 함유하는 약학 조성물을 제공하는 것이다.
본 발명은 KDR 및 FGFR 의 활성을 선택적으로 저해할 수 있는 신규 피리미도 화합물에 관한 것이다. 상기 화합물은 암의 치료 또는 조절, 특히 고형암의 치료 또는 조절에 유용하다. 특히 본 발명은 하기 화학식의 화합물 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다:
[화학식 I]
(식 중,
R1 은 하기 군으로부터 선택되고:
-H,
-COR4, 및
-COOCHR5OCOR4;
R2 및 R3 은 독립적으로 하기로부터 선택되고:
-H, 및
-OR5;
R4 는 하기 군으로부터 선택되고:
-C1-6 알킬,
독립적으로 하기로부터 선택되는 4 이하의 기로 치환되는 저급 알킬:
-NR5R6,
-SR5,
-OR5,
-아릴,
독립적으로 -OR5 및 C1-4 저급 알킬로부터 선택되는 2 이하의 기로 치환되는 -아릴, 및
-헤테로아릴, 및
- 헤테로사이클;
R5 및 R6 은 독립적으로 하기로부터 선택되고:
-H, 및
-C1-5 저급 알킬, 또는
대안적으로, -NR5R6 는 3 내지 7 원자수의 고리를 형성할 수 있고, 상기 고리는 임의로 하나 이상의 부가적 N 또는 O 원자를 포함한다).
본 발명은 또한 하나 이상의 화학식 I 의 화합물의 치료 유효량 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 함유하는 약학 조성물에 관한 것이다.
본 발명은 또한 유효량의 화학식 I 의 화합물 및/또는 그의 염을, 이 치료를 필요로 하는 인간 환자에게 투여하여, 고형암, 특히 유방암 또는 결장암을 치료하기 위한 화학식 I 의 화합물의 용도에 관한 것이다. 특히, 본 발명은 폐암, 결장암 또는 전립선암의 치료 및 조절을 위한 화학식 I 의 화합물의 용도에 관한 것이다.
본 발명은 또한 화학식 I 의 화합물의 제조 방법 뿐만 아니라 화학식 I 의 화합물의 제조에 유용한 신규 중간체 화합물에 관한 것이다.
본원에서 사용되는 하기 용어는 하기 정의를 가질 것이다:
"저급 알킬" 은 1 내지 6, 바람직하게는 1 내지 4 탄소수의 직쇄 또는 분지쇄 포화 지방족 탄화수소를 나타낸다. 전형적인 저급 알킬기에는 메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 부틸, t-부틸, 2-부틸, 펜틸 및 헥실이 포함된다. 본원에서 사용되는 표시예인 C1-4 알킬은 1 내지 4 탄소수의 저급 알킬을 의미한다.
치환된 알킬에서와 같은 "치환된" 은 치환이 하나 이상의 위치에서 일어날 수 있고, 달리 언급되지 않는 한, 각 치환 부위에서의 치환기는 특정된 선택사항으로부터 독립적으로 선택됨을 의미한다.
"아릴" 은 방향족 카르보시클릭 라디칼, 예를 들어 6-10 원 방향족 또는 부분 방향족 고리 시스템을 의미한다. 바람직한 아릴기에는 페닐, 나프틸, 톨릴 및 자일릴이 포함되지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
"헤테로아릴" 은 2 이하의 고리를 포함하는 방향족 헤테로시클릭 고리 시스템을 의미한다. 바람직한 헤테로아릴기에는 티에닐, 푸릴, 인돌릴, 피롤릴, 피리디닐, 피리딘, 피라지닐, 옥사졸릴, 티아졸릴, 퀴놀리닐, 피리미디닐, 이미다졸 및 테트라졸릴이 포함되지만, 이에 제한되는 것은 아니다.
"헤테로사이클" 또는 "헤테로시클릴" 은 질소, 산소 또는 황, 또는 이들의 조합으로부터 선택되는 1 내지 3 헤테로원자수의 포화 또는 부분 불포화 방향족 1 가 시클릭 라디칼을 의미한다. 바람직한 헤테로사이클의 예는 피페리디닐, 피페라지닐, 피롤리디닐, 및 모르폴리닐이다.
"시클로알킬" 은 3 내지 8 원자수의 비방향족, 부분 또는 완전 포화 시클릭 지방족 탄화수소기를 의미한다. 시클로알킬기의 예에는 시클로프로필, 시클로펜틸 및 시클로헥실이 포함된다.
"할로겐" 은 불소, 염소, 브롬 또는 요오드, 바람직하게는 염소를 의미한다.
"헤테로 원자" 는 N, O 및 S 로부터 선택되는 원자, 바람직하게는 N 을 의미한다.
"실릴 보호기" 는 히드록실 관능기에 대한 보호기로서의 실릴 에테르를 의미한다. 실릴 에테르는 유기규소 시약과의 반응으로 제조된다. 이들은 쉽게 형성되고 온화한 조건 하에 절단되며, 이들의 상대적 안정성은 규소 상 치환기의 단순한 변화에 의해 미세하게 조절될 수 있다. 실릴 보호기의 예에는 트리메틸실릴, 트리에틸실릴, 트리이소프로필실릴, tert-부틸디메틸실릴 및 tert-부틸디페닐실릴이 포함된다.
"유효량" 은 질환의 증상을 예방, 완화 또는 개선시키거나 치료받는 대상체의 생존을 연장시키는데 효과적인 양을 의미한다.
"IC50" 은 특정 측정 활성의 50% 를 저해하는데 필요한 본 발명에 따른 특정 화합물의 농도를 나타낸다. IC50 은 특히, 아래 실시예 22 에 기재된 바와 같이 측정될 수 있다.
"약학적으로 허용가능한 염" 은 화학식 I 의 화합물의 생물학적 효능 및 특성을 보유하고, 적합한 무독성 유기 또는 무기 산 또는 유기 또는 무기 염기로부터 형성되는 종래 산 부가염 또는 염기 부가염을 나타낸다. 산 부가염의 예에는 무기 산, 예컨대 염화수소산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 술팜산, 인산 및 질산 유래의 것들, 및 유기 산, 예컨대 p-톨루엔술폰산, 살리실산, 메탄술폰산, 옥살산, 숙신산, 시트르산, 말산, 락트산, 푸마르산 유래의 것들 등이 포함된다. 염기-부가염의 예에는 암모늄, 칼륨, 나트륨, 및 4 차 암모늄 히드록시드 유래의 것들, 예를 들어 테트라메틸암모늄 히드록시드가 포함된다. 약학 화합물 (즉 약물) 의 염으로의 화학적 개질은 화합물의 물리적 및 화학적 안정성, 흡습성, 유동성 및 용해도를 개선시키기 위해 약학 화학자들에게 널리 공지된 기법이다. 예컨대 [H. Ansel 등, Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems (6판, 1995), pp. 196 및 1456-1457] 를 참고한다.
"약학적으로 허용가능한", 예컨대 약학적으로 허용가능한 담체, 부형제 등은 특정 화합물이 투여되는 대상체에 대해 약리학적으로 허용가능하고 실질적으로 무독성인 것을 의미한다.
"치료 유효량" 은 인간 종양 세포주를 포함하여, 인간 종양 세포의 증식을 유의미하게 저해하고/저해하거나 분화를 예방하는, 하나 이상의 화학식 I 의 화합물, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 또는 에스테르의 양을 의미한다.
하나의 구현예에 있어서, 본 발명은 하기 화학식 I 의 화합물 이들의 약학적으로 허용가능한 염에 관한 것이다:
[화학식 I]
(식 중,
R1 은 하기 군으로부터 선택되고:
-H,
-COR4, 및
-COOCHR5OCOR4;
R2 및 R3 은 독립적으로 하기로부터 선택되고:
-H, 및
-OR5;
R4 는 하기 군으로부터 선택되고:
-C1-6 알킬,
독립적으로 하기로부터 선택되는 1 내지 4 의 기로 치환되는 -C1-6 알킬:
-NR5R6,
-SR5,
-OR5,
-페닐,
독립적으로 -OR5 및 C1-4 알킬로부터 선택되는 1 내지 2 의 기로 치환되는 -페닐, 및
-티에닐, -푸릴, -인돌릴, -피롤릴, -피리디닐, -피라지닐, -옥사졸릴, -티아졸릴, 퀴놀리닐, 피리미디닐, 이미다졸릴 및 테트라졸릴, 및
- 피페리디닐, 피페라지닐, 피롤리디닐, 및 모르폴리닐;
R5 및 R6 은 독립적으로 하기로부터 선택되고:
-H, 및
-C1-5 알킬, 또는
대안적으로, -NR5R6 는 3 내지 7 원자수의 고리를 형성할 수 있고, 상기 고리는 임의로 하나 이상의 부가적 N 또는 O 원자를 포함한다).
바람직한 구현예에 있어서, 본 발명은 R1 이 -COR4 인 화학식 I 의 화합물에 관한 것이다.
제 3 항의 화학식 I 의 화합물에 있어서, R1 이 -COR4 이고 R4 가 C1-6 알킬인 화학식 I 의 화합물이 특히 바람직하다.
상기 화합물의 예는 하기이다:
N-3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐아세트아미드;
N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐프로판아미드;
N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐펜탄아미드; 및
N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐부탄아미드.
R1 이 -COR4 이고 R4 가 -NR5R6 으로 치환된 -C 1-6 알킬, 또는 -NR5R6 및 하기로부터 선택되는 추가 기로 치환된 -C1-6 알킬이고:
-NR5R6,
-SR5,
-OR5,
-페닐,
독립적으로 -OR5 및 C1-4 알킬로부터 선택되는 1 내지 2 의 기로 치환되는 -페닐, 및
-티에닐, -푸릴, -인돌릴, -피롤릴, -피리디닐, -피라지닐, -옥사졸릴, -티아졸릴, 퀴놀리닐, 피리미디닐, 이미다졸릴 및 테트라졸릴;
R5 및 R6 이 독립적으로 -H, 및 -C1-5 알킬로부터 선택되는 화학식 I 의 화합물이 또한 바람직하다.
하기는 상기 화합물의 예이다:
(2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸티오-N-페닐부탄아미드;
(2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-3-페닐-N-페닐프로판아미드;
(2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸-N-페닐펜탄아미드 아세트산 염; 및
(2S)-2-아미노-3-인돌-3-일-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐프로판아미드 염화수소산 염.
상기 화합물의 추가예는 하기이다:
2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐아세트아미드 아세트산 염;
2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐아세트아미드 염화수소산 염;
(2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸티오-N-페닐부탄아미드 아세트산 염;
(2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸티오-N-페닐부탄아미드 염화수소산 염;
(2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-3-페닐-N-페닐프로판아미드 염화수소산 염;
(2S)-2-아미노-N-3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸-N-페닐펜탄아미드 염화수소산 염;
(2S)-2-아미노-3-(4-히드록시페닐)-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐프로판아미드 염화수소산 염;
(2S)-2,6-디아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐헥산아미드 디-염화수소산 염;
(2S)-2-아미노-3-히드록시-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐프로판아미드;
(2R)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸티오-N-페닐부탄아미드 염화수소산 염;
N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐펜탄아미드; 및
N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐부탄아미드.
R1 이 -COR4 이고 R3 이 -OR5 이고 R5 가 -H 또는 -C1-5 알킬인 화학식 I 의 화합물이 또한 바람직하다.
하기 화합물이 이들의 예이다:
N-(4-히드록시페닐)-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]아세트아미드; 및
N-(4-메톡시페닐)-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]아세트아미드.
추가의 바람직한 구현예에 있어서, 본 발명은 R1 이 -COOCHR5OCOR4 인 화학식 I 의 화합물에 관한 것이다.
상기 화합물의 예는 하기이다:
{N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐카르바모일옥시}메틸 아세테이트;
{N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐카르바모일옥시}메틸 2-(디메틸아미노)아세테이트;
{N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐카르바모일옥시}메틸 2-(디메틸아미노)아세테이트 염화수소산 염; 및
{N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐카르바모일옥시}메틸 피페리딘-4-카르복실레이트 트리플루오로아세트산 염.
또다른 바람직한 구현예에 있어서, 본 발명은 R1 이 H 인 화학식 I 의 화합물에 관한 것이다.
하기 화합물이 이들의 예이다:
3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온;
3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 메탄술포네이트 염;
7-[(4-히드록시페닐)아미노]-3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온; 및
3-(4-메톡시페닐)-7-[(4-메톡시페닐)아미노]-1-페닐-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온.
화학식 I 의 화합물의 또다른 바람직한 구현예에 있어서, R2 는 H 이다.
화학식 I 의 화합물의 또다른 바람직한 구현예에 있어서, R2 및 R3 은 H 이다.
본 발명의 화합물은 FGF 및 KDR 키나아제에 대해 선택적이다. 상기 화합물은 암의 치료 또는 조절, 특히 고형암, 구체적으로 유방암, 폐암, 결장암 및 전립선암의 치료 또는 조절에 유용하다. 상기 화합물은 가용성이며, 따라서 유리한 생체이용율 프로필, 예컨대 개선된 경구 생체이용율을 보유한다.
본 발명의 화학식 I 의 화합물은 하기를 포함하는 방법으로 제조될 수 있다:
a) 하기 화학식 II 의 화합물을:
(식 중, hal 은 클로로, 브로모 또는 요오도이다),
하기 화학식 III 의 아닐린 유도체와 반응시켜:
(식 중, R2 및 R3 은 H 또는 -OR5' 이며, 여기서 R5' 은 H, C1-5 알킬 또는 실릴 보호기이다),
하기 화학식 I-A 의 화합물을 수득하고/하거나:
b) 화학식 I-A 의 화합물을 하기 화학식 IV 의 산 할로겐화물 또는 무수물과 반응시켜:
(식 중, X 는 할로겐 또는 -OCOR4 이며, R4 는 상기 본원에 정의된 바와 같다),
하기 화학식 I-B 의 화합물을 수득하거나:
또는 대안적으로
c) 화학식 I-A 의 화합물을 하기 화학식 V 의 클로로포르메이트와 반응시켜:
(식 중, R5 는 상기 본원에 정의된 바와 같다),
하기 화학식 VI 의 화합물을 수득한 후:
하기 화학식 VII 의 나트륨 염과 반응시켜:
하기 화학식 I-C 의 화합물을 수득하고:
d) 필요하다면, 화학식 I-A, I-B 또는 I-C 의 화합물을 약학적으로 허용가능한 염으로 전환시킴.
본 발명은 또한 화학식 I 의 화합물의 합성에 유용한 하기 신규 중간체에 관한 것이다:
(클로로메톡시)-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-벤즈아미드 [실시예 4a]
3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-{[4-(1,1,2,2-테트라메틸-1-실라프로폭시)페닐]아미노}-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 [실시예 19c], 및
N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-[4-(1,1,2,2-테트라메틸-1-실라프로폭시)페닐]아세트아미드 [실시예 19d].
본 발명의 화합물은 임의의 종래 방법으로 제조될 수 있다. 상기 화합물을 합성하기 위해 적합한 방법은 실시예에 제공된다. 일반적으로, 화학식 I 의 화합물은 후술되는 합성 경로에 따라 제조될 수 있다.
R1 = -COOCHR5OCOR4 인 화학식 I 의 화합물의 합성은 당분야에 널리 공지되어 있으며, [J. Alexander, R. Cargill, S.R. Michelson, H. Schwam, J. Med. Chem. 1988, 31, 318-322] 에 기술되어 있다.
대안적 구현예에 있어서, 본 발명은 하나 이상의 화학식 I 의 화합물, 또는 이들의 약학적으로 허용가능한 염 또는 에스테르를 함유하는 약학 조성물에 관한 것이다.
상기 약학 조성물은, 예를 들어 정제, 코팅정, 당의정, 경질 또는 연질 젤라틴 캡슐, 용액, 에멀젼 또는 현탁액의 형태로 경구 투여될 수 있다. 이들은 또한, 예를 들어 좌약의 형태로 직장 투여되거나, 예를 들어 주사 용액의 형태로 비경구 투여될 수도 있다.
화학식 I 의 화합물, 및/또는 이들의 염을 함유하는 본 발명의 약학 조성물은 당분야에 공지된 방식으로, 예컨대 종래 혼합, 캡슐화, 용해, 제립, 유화, 트랩핑, 당의정 제조 또는 동결건조 방법에 의해 제조될 수 있다. 상기 약학 제제는 치료적으로 불활성인 무기 또는 유기 담체와 제형화될 수 있다. 락토오스, 옥수수 전분 또는 이들의 유도체, 활석, 스테르산 또는 그의 염은 그대로 정제, 코팅정, 당의정 및 경질 젤라틴 캡슐용 담체로 사용될 수 있다. 연질 젤라틴 캡슐용으로 적합한 담체에는 식물성 오일, 왁스 및 지방이 포함된다. 활성 물질의 성질에 따라, 연질 젤라틴 캡슐의 경우 일반적으로 담체가 필요하지 않다. 용액 및 시럽 제조를 위해 적합한 담체는 물, 폴리올, 사카로오스, 전화당 및 글루코오스이다. 주사를 위해 적합한 담체는 물, 알콜, 폴리올, 글리세린, 식물성 오일, 인지질 및 계면활성제이다. 좌약을 위해 적합한 담체는 천연 또는 경화 오일, 왁스, 지방 및 반액체 폴리올이다.
약학 제제는 또한 방부제, 가용화제, 안정화제, 습윤제, 유화제, 감미제, 착색제, 조미제, 삼투압 변화용 염, 완충액, 코팅제 또는 항산화제를 함유할 수 있다. 이들은 또한 화학식 I 의 화합물 이외에, 부가적인 활성 성분을 포함하는 다른 치료적으로 유용한 물질을 함유할 수 있다.
상술된 바와 같이, 화학식 I 의 화합물을 포함하는 본 발명의 화합물은 세포 증식 장애, 특히 암성 장애의 치료 또는 조절에 유용하다. 상기 화합물 및 상기 화합물을 함유하는 제형물은 특히 고형암, 예를 들어 유방암, 결장암, 폐암 및 전립선암의 치료 또는 조절에 유용하다. 따라서, 본 발명은 또한 유효량의 화학식 I 의 화합물 및/또는 그의 염을, 그 치료를 필요로 하는 환자에게 투여하여 상기 고형암을 치료하는 방법에 관한 것이다.
본 발명에 따른 화합물의 치료 유효량은 질환의 증상을 예방, 완화 또는 개선시키거나 치료받는 대상체의 생존을 연장시키는데 유효한 화합물의 양을 의미한다. 치료 유효량의 결정은 당업자의 능력 범위 내이다.
본 발명에 따른 화합물의 치료 유효량 또는 투여량은 광범위하게 변할 수 있고, 당분야에 공지된 방식으로 결정될 수 있다. 상기 투여량은 투여되는 특정 화합물(들), 투여 경로, 치료받는 조건 뿐만 아니라 치료받는 환자를 포함하는, 각각의 특정 경우의 개별 요건에 따라 조절될 것이다. 일반적으로, 대략 70 Kg 체중의 성인 인간에게 경구 또는 비경구 투여하는 경우, 1 일 투여량 약 10 mg 내지 약 10,000 mg, 바람직하게는 약 200 mg 내지 약 1,000 mg 이 적절할 것이지만, 명시되는 경우 상한치를 초과할 수 있다. 1 일 투여량은 단일 용량 또는 분리된 용량으로 투여될 수 있으며, 또는 비경구 투여에 있어서 연속 주입으로 주어질 수 있다.
하기 실시예는 본 발명의 화합물 및 제형물을 합성하기 위해 바람직한 방법을 예시한다.
실시예 1
실시예 1a
5-(히드록시메틸)-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온
기계적 교반기, 온도계, 응축기, 및 질소-입구 버블러가 장착된 2 ℓ, 3 목 플라스크에 우라실 (185.0 g, 1650 mmol) (Aldrich), 파라포름알데히드 (61.50 g, 포름알데히드로는 2050 mmol) (Aldrich), 및 수중 칼륨 히드록시드 (86.9%, 59.95 g, 928.5 mmol) (Aldrich) 용액 (1.445 ℓ) 을 충전하였다. 혼합물을 50-52℃ 에서 68 h 동안 교반하였다. TLC 분석은 반응 종료를 나타내었다. 60℃/14 mmHg 에서 부피 약 500 ㎖ 로의 농축 후, 잔기를 아세톤 (500 ㎖) 으로 희석하였다. 생성 침전물을 여과로 수집하고, 아세톤으로 세척하고, 흡입 건조한 후 50℃/25 mmHg 에서 미정제 5-(히드록시메틸)-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온 (250 g) 을 백색 고체로 얻었다. 합한 모액 및 세척액을 부피 약 100 ㎖ 로 농축하고, 수중 히드록실아민 히드로클로라이드 (27.52 g, 396.0 mmol, Aldrich) 의 용액 (100 ㎖) 을 첨가하였다. 생성 침전물을 여과로 수집하고, 아세톤으로 세척하고, 흡입 건조하여, 이차 산물인 미정제 5-(히드록시메틸)-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온 (34 g) 을 백색 고체로 얻었다. 두 로트를 합하여 (244 g, 4% 초과중량) 다음 단계에서 직접 사용하였다.
실시예 1b
2,4-디클로로-5-(클로로메틸)피리미딘
기계적 교반기, 추가 깔때기, 온도계 및 질소-입구 버블러가 장착된 1 ℓ, 3 목 플라스크에 미정제 5-(히드록시메틸)-1,3-디히드로피리미딘-2,4-디온 (50.25 g, 약 340 mmol) (상기 실시예 1a 로부터), 포스포러스옥시클로라이드 (164.8 ㎖, 1768 mmol) (Aldrich), 및 톨루엔 (100 ㎖) 을 충전하였다. 상기 혼합물에 N,N-디이소프로필에틸아민 (184.7 ㎖, 1060 mmol) (Aldrich) 을 10 분에 걸쳐 첨가하면서, 수조를 이용하여 혼합물의 온도를 70℃ 미만으로 유지하였다. 첨가 완료 후, 냉각조를 제거하고 혼합물을 1 시간 동안 환류 가열하였다 (113-116℃). 일부 톨루엔 (약 35 ㎖) 을 증류 제거하여 반응 혼합물의 온도를 120℃ 로 증가시키고, 혼합물을 120-123℃ 에서 5 시간 동안 교반하였다. TLC 분석은 반응 종료를 나타내었다. 혼합물을 실온으로 하룻밤 동안 냉각시킨 후, 빙수조를 이용하여 온도를 17℃ 내지 21℃ 로 유지하면서 혼합물을 물 (200 ㎖) 및 이소프로필 아세테이트 (150 ㎖) 의 교반 2-상 혼합물에 67 분에 걸쳐 조심스럽게 첨가하였다. 때때로 빙수로 냉각하면서 18-21℃ 에서 80 분 동안 교반한 후, 혼합물을 톨루엔으로 추출하였다 (4 ×150 ㎖). 합한 유기층을 건조하고 (나트륨 술페이트), 여과한 후 감압 하에 농축 건조하여, 미정제 2,4-디클로로-5-(클로로메틸)피리미딘을 극성 불순물을 포함하는 백색 고체로 얻었다 (수율 56.1 g, 우라실로부터 83.6% 수율).
미정제 2,4-디클로로-5-(클로로메틸)피리미딘 (70.39 g) 을 디클로로메탄 (80 ㎖) 중에 용해시키고, 생성 용액을 TLC 급 실리카 겔 (100 g) 패드를 통해 여과하였다. 이어서 실리카 겔을 디클로로메탄:헥산 (1 ℓ, 7:3) 으로 세척하고, 합한 여과액 및 세척액을 감압 하에 농축 건조하여 2,4-디클로로-5-(클로로메틸)피리미딘을 백색 고체로 얻었다 (수율 58.77 g, 83.5% 회수율, 우라실로부터 69.8% 총 수율). 상기 화합물은 매우 부식성이었다.
실시예 1c
2,4-디클로로-5-(요오도메틸)피리미딘
자기 교반기, 응축기, 및 질소-입구 버블러가 장착된 500 ㎖, 둥근 바닥 플라스크에 나트륨 요오다이드 (38.5 g, 256.9 mmol) (Aldrich) 및 아세톤 (300 ㎖) 을 충전하였다. 깨끗한 용액이 수득된 후, 2,4-디클로로-5-(클로로메틸)피리미딘 (50.0 g, 253.2 mmol) (상기 실시예 1b 로부터) 을 1 회 첨가하였다. 실온에서 20 분 동안 교반 후, 혼합물을 15 분 동안 환류 가열하였다. NMR 분석은 98% 전환을 나타내었다. 실온으로 냉각 후, 생성 침전물 (나트륨 클로라이드) 을 중간 크기 소결 유리 깔때기를 통해 여과 제거하고 아세톤으로 세척하였다. 합한 여과액 및 세척액을 중량 약 75 g 으로 농축하였다. 아세톤 중 2,4-디클로로-5-(요오도메틸)피리미딘의 생성 농축 용액을 톨루엔 (20 ㎖) 으로 희석하였다. 중량 약 85 g 으로 농축하여 잔여 아세톤을 제거한 후, 톨루엔 중의 2,4-디클로로-5-(요오도메틸)피리미딘의 상기 농축 용액을 다음 단계에서 직접 사용하였다.
실시예 1d
[(2,4-디클로로피리미딘-5-일)메틸](4-메톡시페닐)아민
자기 교반기, 온도계, 및 질소-입구 버블러가 장착된 500-㎖, 3 목 플라스크에 이전 단계로부터의 톨루엔 (13.7 ㎖) 중 2,4-디클로로-5-(요오도메틸)피리미딘 (85 g, 약 253.2 mmol) 의 용액 (상기 실시예 1c 로부터) 및 톨루엔 (96.3 ㎖, 따라서 전체 톨루엔 약 110 ㎖) 을 충전하였다. 빙수조로 냉각 후, p-아니시딘 (31.18 g, 253.2 mmol) (Aldrich) 을 첨가하였다. 30 분 동안 교반 후, 수중 나트륨 히드록시드 (13.54 g, 331.7 mmol) 의 용액 (50 ㎖) 을 8 분에 걸쳐 적가하면서, 반응 혼합물의 온도를 10-15℃ 에서 유지하였다. 헥산 (55 ㎖) 을 첨가하고, 혼합물을 10-15℃ 에서 45 분 동안, 이어서 실온에서 22 시간 동안 교반하여 슬러리를 얻었다. 상층액의 TLC 분석은 반응 종료를 나타내었다. 슬러리를 물 (100 ㎖) 로 희석하고, 고체를 여과로 수집하고, 냉수 및 냉 (-50℃) 메탄올 (100 ㎖) 로 세척하고 흡입 건조하여, [(2,4-디클로로피리미딘-5-일)메틸](4-메톡시페닐)아민을 회백색 고체로 얻었다; HPLC 분석으로 97% 순수 (수율 59.87 g, 83.2%).
실시예 1e
N-[(2,4-디클로로피리미딘-5-일)메틸]-N-(4-메톡시페닐)-페닐아미노-카르복사미드
기계적 교반기, 온도계, 응축기, 및 질소-입구 버블러가 장착된 500-㎖, 3 목 플라스크에 [(2,4-디클로로피리미딘-5-일)메틸](4-메톡시페닐)아민 (59.6 g, 209.7 mmol) (상기 실시예 1d 로부터) 및 tert-부틸 메틸 에테르 (300 ㎖) (Aldrich) 를 충전하였다. 55℃ 에서 가열하여 깨끗한 용액을 얻은 후, 페닐 이소시아네이트 (27.48 g, 230.7 mmol) (Aldrich) 를 첨가하고 혼합물을 10 시간 동안 환류 가열하였다. TLC 분석은 본질적으로 반응 종료를 나타내었다. 실온으로 냉각 후, 생성 고체를 여과로 수집하고, tert-부틸 메틸 에테르 (100 ㎖) 로 세척하고 흡입 건조하여, N-[(2,4-디클로로피리미딘-5-일)메틸]-N-(4-메톡시페닐)(페닐아미노)카르복사미드를 백색 결정으로 얻었다; HPLC 분석으로 98.46% 순수 (수율 78.8 g, 91.3%).
실시예 1f
7-클로로-3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온
자기 교반기, 온도계, 및 질소-입구 버블러가 장착된 500-㎖, 3 목 플라스크에 N-[(2,4-디클로로피리미딘-5-일)메틸]-N-(4-메톡시페닐)(페닐아미노)카르복사미드 (78.8 g, 195.4 mmol) (상기 실시예 1e 로부터) 및 디클로로메탄 (120 ㎖) 을 충전하였다. 냉수조로 16℃ 로 냉각한 후, 수중 나트륨 히드록시드 (14.04 g, 343.9 mmol) 의 용액 (28 ㎖) 및 40% 테트라부틸암모늄 히드록시드 수용액 (1.0 ㎖, 3.8 mmol) (Aldrich) 을 첨가하였다. 20-24℃ 에서 2 시간 동안 교반 후, 추가분의 40% 테트라부틸암모늄 히드록시드 수용액 (0.75 ㎖, 2.9 mmol) 을 첨가하였다. 1 시간 동안 교반 후, 세번째 부분의 40% 테트라부틸암모늄 히드록시드 수용액 (0.75 ㎖, 2.9 mmol) 을 첨가하고 혼합물을 실온에서 2.3 h 동안 교반하였다. TLC 분석은 본질적으로 반응 종료를 나타내었다. 이어서 반응을 진한 염화수소산 (15 ㎖) 및 물 (80 ㎖) 의 혼합물로 켄칭하였다. 유기층을 분리하고, 물 (90 ㎖) 로 세척하고, 나트륨 술페이트 상에서 건조하고, 감압 하에 중량 약 140 g 으로 농축하였다. 잔기를 톨루엔 (90 ㎖) 중에 용해시키고, 용액을 감압 하에 중량 100 g 으로 농축하였다. 7-클로로-3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온의 생성 농축 톨루엔 용액을 다음 단계에서 직접 사용하였다.
실시예 1g
3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온
기계적 교반기, 온도계, 응축기, 및 질소-입구 버블러가 장착된 500-㎖, 3 목 플라스크에 앞 단계로부터의 톨루엔 용액 중 7-클로로-3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (대략 50 g, 약 97.7 mmol) (상기 실시예 1f 로부터) 용액 (70 ㎖), 아닐린 (22.75 g, 244.3 mmol)(Fluka), 및 아닐린 히드로클로라이드 (0.2 g, 1.54 mmol) (Aldrich) 를 충전하였다. 혼합물을 2 시간 동안 환류 가열하여 (111-113℃ 에서) 슬러리를 얻었다. TLC 분석은 반응 종료를 나타내었다. 약 80℃ 로의 냉각 후, 물 (50 ㎖) 을 첨가하고, 이어서 헥산 (90 ㎖) 을 첨가하였다. 생성 현탁액을 30 분에 걸쳐 실온으로 냉각 후, 고체를 여과로 수집하고, 물 (100 ㎖) 및 메탄올 (2 ×45 ㎖) 로 세척하고 흡입 건조하여, 미정제 3-(4-메톡시-페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온을 담황색 고체로 얻었다; HPLC 분석으로 98.9% 순수 (수율 40.5 g, 98%). 상기 물질을 고온 아세트산 (50 ㎖) (약 100℃) 중에 용해시켰다. 약 70℃ 로 냉각 후, 메탄올 (125 ㎖) 을 수분에 걸쳐 첨가하였다. 생성 슬러리를 45℃ 로 냉각하고, 고체를 여과로 수집하고, 메탄올 (50 ㎖) 로 세척하고 흡입 건조하여, 3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온을 백색 고체로 얻었다; HPLC 분석으로 99.49% 순수 (수율 38.2 g, N-[(2,4-디클로로피리미딘-5-일)메틸]-N-(4-메톡시페닐)(페닐아미노)카르복사미드로부터 92.3% 총 수율).
실시예 1h
3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 메탄술포네이트 염
3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (7.50 g, 17.71 mmol) (상기 실시예 1g 로부터) 을 고온 1,4-디옥산 (120 ㎖) 중에 용해시키고, 용액을 유리 필터를 통해 여과하였다. 깨끗한 여과액에 메탄술폰산 (10 ㎖) (Aldrich) 용액을 실온에서 적가한 후, 혼합물을 -15℃ 에서 하룻밤 동안 방치하였다. 형성된 결정성 물질을 수집하고, 1,4-디옥산, 메탄올 및 에테르로 세척하고, 85℃ 에서 하룻밤 동안 진공 건조하여, 3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 메탄술포네이트 염을 무색 결정으로 얻었다. mp. 245-251℃ (수율 5.5 g, 59.8 %).
실시예 2
N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐아세트아미드
자기 교반기, 온도계, 응축기, 및 질소-입구 버블러가 장착된 250-㎖, 3 목 플라스크에 3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (37.90 g, 89.50 mmol) (상기 실시예 1g 로부터), 아세트산 무수물 (45.3 ㎖, 481.5 mmol) (J.T. Baker) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (22.76 ㎖, 130.7 mmol) (Aldrich) 을 충전하였다. 혼합물을 2 시간 동안 환류 가열하였다 (123-127℃). TLC 분석은 본질적으로 반응 종료를 나타내었다. 휘발물을 60℃/18 mmHg 에서 제거하여 고체 잔기 (약 69 g) 를 얻고, 이를 아세톤 (45 ㎖) 중에 67-70℃ 에서 용해시켰다. 혼합물의 온도를 54℃ 약간 초과로 유지하면서 생성 용액에 헥산 (50 ㎖) 을 천천히 첨가하고, N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐아세트아미드 (약 5 mg) 의 시드 결정을 첨가하였다. 혼합물의 온도를 약 53℃ 에서 유지하면서 생성 슬러리를 헥산 (50 ㎖) 으로 추가 희석하였다. 실온으로 냉각 후, 고체를 여과로 수집하고, 아세톤-헥산 (1:2, 3 ×40 ㎖) 으로 세척하고 간단히 흡입 건조하여, 미정제 산물 (수율 55 g) 을 얻었다. 상기 물질을 헥산 (200 ㎖) 중에 현탁하고 생성 슬러리를 20 분 동안 환류 가열하였다 (68-70℃). 실온으로 냉각 후, 고체를 여과로 수집하고, 헥산 (100 ㎖) 으로 세척하고 흡입 건조하여, N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐아세트아미드를 회백색 고체로 얻었다; HPLC 분석으로 98.5% 순수, 1.07% 의 3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온을 함유 (수율 39.4 g, 94.6%).
실시예 3
N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐프로판아미드
피리딘 (5 ㎖) (Fisher) 중 3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (304.0 mg, 0.718 mmol) (상기 실시예 1g 로부터) 의 용액에 프로피온산 무수물 (1.0 ㎖, 7.8 mmol) (Aldrich) 및 4-디메틸아미노피리딘 (45.0 mg, 0.37 mmol) (Aldrich) 을 첨가하였다. 혼합물을 1.5 시간 동안 환류 가열하고, 실온으로 냉각하였다. 이를 얼음 (15 g) 내로 붓고, 5 분 동안 교반하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (15 ㎖) 로 추출하였다. 유기층을 물, 5% 수성 염화수소산, 및 물로 세척하고, 건조하고 (Na2SO4), 날려서 감압 하에 농축 건조하였다. 잔기를 디클로로메탄 중에 용해시키고 TLC 급 실리카 겔을 통해 여과하고 에틸 아세테이트-헥산 (V/V 1:1) 및 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축 건조하였다. 잔기를 에테르 중에 용해시키고 헥산으로 천천히 희석하였다. 이어서 에테르를 감압 하에 제거하였다. 고체를 여과로 수집하고, 헥산으로 세척하여 흡입 건조하였다. 고체를 고온 이소프로필 아세테이트 (2 ㎖) 중에 용해시키고 헥산으로 희석하여 뿌옇게 하였다. 이를 4 일 동안 냉동고에서 냉각하였다. 생성 현탁액을 감압 하에 농축 건조하여 N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐프로판아미드를 백색 분말로 얻었다 (수율 270 mg, 78.4%).
실시예 4a
(클로로메톡시)-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-벤즈아미드
디클로로메탄 (50 ㎖) 중 3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (3.5 g, 8.26 mmol) (상기 실시예 1g 로부터) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (8.63 ㎖, 49.6 mmol) (Aldrich) 의 용액에 0℃ 에서 새로운 클로로메틸 클로로포르메이트 (2.55 ㎖, 28.9 mmol) (Lancaster) 를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 건조하고 (MgSO4), 여과하여 감압 하에 농축하였다. 잔기를 디클로로메탄 중 5% 에테르로 용출하며 플래시 크로마토그래피 (Biotage) 로 정제하여, 미량의 3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 및 다른 불순물을 함유하는 미정제 (클로로메톡시)-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-벤즈아미드를 산출하였다. 상기 물질을 추가 정제없이 즉시 사용하였다 (수율 3.28 g, 77%).
실시예 4b
{N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐카르바모일옥시}메틸 아세테이트
디메틸포름아미드 (60 ㎖) 중 (클로로메톡시)-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-벤즈아미드 (3.23 g, 6.32 mmol) (상기 실시예 4a 로부터) 의 용액에 무수 나트륨 아세테이트 (5.18 g, 63.2 mmol) (Aldrich) 및 테트라부틸 암모늄 히드로겐 술페이트 (3.22 g, 9.48 mmol) (Aldrich) 를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 18 시간 동안 교반한 후, 물로 희석하고 에틸 아세테이트-에테르 (3X, 1:1) 로 추출하였다. 합한 유기상을 물 및 염수로 세척하고, 건조하고 (MgSO4), 여과하고 감압 하에 농축하였다. 잔기를 에틸 아세테이트-헥산 (1:1 및 3:2) 으로 용출하며 플래시 크로마토그래피 (Biotage) 로 정제하여 {N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐카르바모일옥시}메틸 아세테이트를 백색 발포체로 산출하였다 (수율 3.20 g, 93.8%).
실시예 5a
{N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐카르바모일옥시}메틸 2-(디메틸아미노)아세테이트
질소 하에 건조 테트라히드로푸란 (15 ㎖) 중 (클로로메톡시)-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-벤즈아미드 (300 mg, 0.58 mmol) (상기 실시예 4a 로부터) 의 용액에 N,N-디메틸글리신 나트륨 염 (300 mg, 2.1 mmol, 나트륨 염은 1 당량의 나트륨 히드록시드로 산 (Aldrich) 을 처리하여 제조되었다), 이어서 테트라부틸암모늄 히드로겐 술페이트 (329 mg, 0.87 mmol) (Aldrich) 를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 72 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고 고체를 용매로서 0.1% 트리에틸아민을 함유하는 디클로로메탄 중 16% 메탄올로, 이어서 동일 용매 시스템 중 30% 메탄올로 플래시 크로마토그래피 (Biotage, 40 S 칼럼) 에 의해 정제하였다. 산물을 함유하는 합한 분획을 메탄올-디클로로메탄-헥산으로부터 재결정화시켜 {N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐카르바모일옥시}메틸 2-(디메틸아미노)아세테이트를 얻었다 (수율 166 mg, 49%).
(M.p.: 172℃; MS HR-ES [M+H]+ - 583.2306 (실측치) 583.2300 (계산치)).
실시예 5b
{N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐카르바모일옥시}메틸 2-(디메틸아미노)아세테이트 염화수소산 염
{N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐카르바모일옥시}메틸 2-(디메틸아미노)아세테이트 (144 mg, 0.247 mmol) (상기 실시예 5a 로부터) 를 테트라히드로푸란 (3 ㎖), 아세토니트릴 (2 ㎖) 및 물 (15 방울) 의 혼합물 중에 용해시켰다. 이를 0℃ 로 냉각하였다. 수성 1 N 염화수소산 (272 ㎕, 0.27 mmol) 을 첨가하고 반응물을 실온에서 4 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 물 (10 ㎖) 로 희석하고, 유기 용매를 감압 하에 제거하였다. 수용액을 동결건조하여 {N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐-카르바모일옥시}메틸 2-(디메틸아미노)아세테이트 염화수소산 염을 백색 고체로 얻었다.
실시예 6a
FMOC-글리실 플루오라이드
FMOC-글리신 (5.02 g, 16.82 mmol) (Bachem) 을 디클로로메탄 (85 ㎖) 중에 용해시켰다. 피리딘 (1.36 ㎖, 16.82 mmol) (Aldrich) 및 시아누르산 플루오라이드 (2.27 g, 16.82 mmol) (Aldrich) 를 실온에서 연속 첨가하고, 혼합물을 하룻밤 동안 교반하였다. 빙냉수 (100 ㎖) 를 첨가하고 생성 슬러리를 여과하였다. 여과액을 분별 깔때기로 부어 층을 분리하였다. 유기층을 무수 나트륨 술페이트 상에서 건조하고, 여과하고 감압 하에 농축하여, FMOC-글리실 플루오라이드를 백색 분말로 산출하였다 (수율 3.67 g, 73%).
실시예 6b
2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐아세트아미드 아세트산 염
3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (150 mg, 0.35 mmol) (상기 실시예 1g 로부터) 을 아세토니트릴 (2 ㎖) 중에 용해시켰다. FMOC-글리실 플루오라이드 (265 mg, 0.89 mmol) (상기 실시예 6a 로부터) 를 실온에서 첨가하고, 혼합물을 30 분 동안 마이크로파 장치 (Smith SynthesizerTM) 내에서 120℃ 로 가열하였다. 용액을 활성 염기성 알루미나 플러그 (Alfa Aesar) 를 통해 여과하고 알루미나를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 용액을 감압 하에 농축하고 잔기를 아세토니트릴-피페리딘 (Aldrich) (10:1) 혼합물 중에 용해시켰다. 실온에서 10 분 후, 혼합물을 농축하고 잔기를 에테르-헥산 (1:1) 으로 분쇄하였다. 침전물을 여과로 수집하고 진공 하 45℃ 에서 건조하였다. 미정제 산물을 역상 HPLC (물-아세토니트릴 구배, 용매 중 0.1% 아세트산 함유) 로 정제하여 2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐아세트아미드 아세트산 염을 산출하였다 (수율 63 mg, 34%).
실시예 6c
2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐아세트아미드 염화수소산 염
2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐아세트아미드 아세트산 염 (126 mg, 0.24 mmol) (상기 실시예 6b 로부터) 을 디옥산 (4 ㎖) (Aldrich) 중 4 N 히드로겐 클로라이드 중에 용해시켰다. 용액을 실온에서 15 분 동안 유지한 후, 농축 건조하였다. 잔기를 에테르로 분쇄하고 고체를 흡입 여과로 수집하여, 2-아미노-N-[3-(4-메톡시-페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐아세트아미드 염화수소산 염을 산출하였다 (수율 124 mg, 100%).
실시예 7a
FMOC-L-메티오닐 플루오라이드
FMOC-L-메티오닌 (5.00 g, 13.46 mmol) (Bachem) 을 디클로로메탄 (70 ㎖) 중에 용해시켰다. 피리딘 (1.09 ㎖, 13.46 mmol) (Aldrich) 및 시아누르산 플루오라이드 (1.82 g, 13.46 mmol) (Aldrich) 를 실온에서 연속 첨가하고 혼합물을 하룻밤 동안 교반하였다. 빙냉수 (100 ㎖) 를 첨가하고 생성 슬러리를 여과하였다. 여과액을 분별 깔때기로 붓고 층을 분리하였다. 유기층을 무수 나트륨 술페이트 상에서 건조하고, 여과하고 감압 하에 농축하여, FMOC-L-메티오닐 플루오라이드를 백색 분말로 산출하였다 (수율 3.7 g, 74%).
실시예 7b
(2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸티오-N-페닐부탄아미드
3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (150 mg, 0.35 mmol) (상기 실시예 1g 로부터) 을 아세토니트릴 (2 ㎖) 중에 용해시켰다. FMOC-L-메티오닐 플루오라이드 (420 mg, 1.12 mmol) (상기 실시예 7a 로부터) 를 실온에서 첨가하고, 혼합물을 10 분 동안 마이크로파 장치 (Smith SynthesizerTM) 내에서 120℃ 로 가열하였다. 용액을 활성 염기성 알루미나 플러그 (Alfa Aesar) 를 통해 여과하고 알루미나를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축하고 잔기를 역상 HPLC 로 정제하여, FMOC 보호 아민 (228 mg, 0.29 mmol) 을 얻었다. 상기 유도체를 아세토니트릴-피페리딘 (Aldrich) (10:1, 2 ㎖) 중에 용해시켰다. 실온에서 10 분 후에, 혼합물을 농축하고 잔기를 에테르-헥산 (1:1) 으로 분쇄하였다. 침전물을 여과로 수집하고 진공 하에 45℃ 에서 건조하여, (2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸티오-N-페닐부탄아미드를 백색 고체로 산출하였다 (수율 120 mg, 62%).
실시예 7c
(2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸티오-N-페닐부탄아미드 아세트산 염
3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (100 mg, 0.24 mmol) (상기 실시예 1g 로부터) 을 아세토니트릴 (1.5 ㎖) 중에 용해시켰다. FMOC-L-메티오닐 플루오라이드 (445 mg, 1.18 mmol) (상기 실시예 7a 로부터) 를 실온에서 첨가하고 혼합물을 10 분 동안 마이크로파 장치 (Smith SynthesizerTM) 내에서 120℃ 로 가열하였다. 용액을 활성 염기성 알루미나 플러그 (Alfa Aesar) 를 통해 여과하고 알루미나를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축하고 잔기를 역상 HPLC 로 정제하여 FMOC 보호 아민 (42 mg, 0.05 mmol) 을 얻었다. 상기 유도체를 아세토니트릴-피페리딘 (Aldrich) (10:1, 1.1 ㎖) 중에 용해시켰다. 실온에서 10 분 후에, 혼합물을 농축하고 잔기를 역상 HPLC (물-아세토니트릴 구배, 용매 중 0.1% 아세트산 함유) 로 정제하여, (2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸티오-N-페닐부탄아미드 아세트산 염을 산출하였다 (수율 25 mg, 17%).
실시예 7d
(2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸티오-N-페닐부탄아미드 염화수소산 염
(2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸티오-N-페닐부탄아미드 (350 mg, 0.63 mmol) (상기 실시예 7b 로부터) 를 디옥산 (6 ㎖) (Aldrich) 중 4 N 히드로겐 클로라이드 중에 용해시켰다. 균일 용액을 실온에서 15 분 동안 유지한 후, 농축 건조하였다. 잔기를 에테르로 분쇄하였다. 침전물을 흡입 여과로 수집하고, 에테르로 세척하고 실온에서 진공 챔버 내에서 건조하여, (2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸티오-N-페닐부탄아미드 염화수소산 염을 회백색 고체로 산출하였다 (수율 368 mg, 98%).
실시예 8a
FMOC-L-페닐알라닐 플루오라이드
FMOC-L-페닐알라닌 (17 g, 44 mmol) (Bachem) 을 디클로로메탄 (100 ㎖) 중에 용해시켰다. 피리딘 (3.55 ㎖, 44 mmol) (Aldrich) 및 시아누르산 플루오라이드 (6 g, 44 mmol) (Aldrich) 를 실온에서 연속 첨가하고, 혼합물을 3.5 시간 동안 교반하였다. 빙냉수 (300 ㎖) 를 첨가하고, 생성 슬러리를 여과하였다. 여과액을 분별 깔때기로 붓고 층을 분리하였다. 유기층을 무수 나트륨 술페이트 상에서 건조하고, 여과하고 감압 하에 농축하여 FMOC-L-페닐알라닐 플루오라이드를 백색 분말로 산출하였다 (수율 13.6 g, 80%).
실시예 8b
(2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-3-페닐-N-페닐프로판아미드
3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (450 mg, 1.05 mmol) (상기 실시예 1g 로부터) 을 아세토니트릴 (6 ㎖) 중에 용해시켰다. FMOC-L-페닐알라닐 플루오라이드 (2.1 g, 5.25 mmol) (상기 실시예 8a 로부터) 를 실온에서 첨가하고, 혼합물을 10 분 동안 마이크로파 장치 (Smith SynthesizerTM) 내에서 120℃ 로 가열하였다. 용액을 활성 염기성 알루미나 플러그 (Alfa Aesar) 를 통해 여과하고 알루미나를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축하고 잔기를 1:1 에테르-헥산으로 분쇄하였다. 밝은 오렌지색 침전물을을 흡입 여과로 수집하고 역상 HPLC 로 정제하여, FMOC 보호 아민 (232 mg, 0.29 mmol) 을 얻었다. 상기 중간체를 10:1 아세토니트릴-피페리딘 (Aldrich) (5 ㎖) 중에 용해시켰다. 실온에서 10 분 후에, 혼합물을 농축하고 잔기를 1:1 에테르-헥산으로 분쇄하였다. 침전물을 여과로 수집하고 진공 하에 45℃ 에서 건조하여, (2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-3-페닐-N-페닐프로판아미드를 백색 고체로 산출하였다 (수율 110 mg, 20%).
실시예 8c
(2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-3-페닐-N-페닐프로판아미드 염화수소산 염
(2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-3-페닐-N-페닐프로판아미드 (184 mg, 0.32 mmol) (상기 실시예 8b 로부터) 를 디옥산 (4 ㎖) (Aldrich) 중 4 N 히드로겐 클로라이드 중에 용해시켰다. 균일 용액을 실온에서 15 분 동안 유지한 후, 농축 건조하였다. 잔기를 에테르로 분쇄하였다. 침전물을 흡입 여과로 수집하고, 에틸 아세테이트와 하룻밤 동안 교반하였다. 침전물을 흡입 여과로 수집하고, 에틸 아세테이트로 세척하고 30℃ 에서 건조하여, (2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-3-페닐-N-페닐프로판아미드 염화수소산 염을 회백색 고체로 산출하였다 (수율 125 mg, 64%).
실시예 9a
FMOC-L-류실 플루오라이드
FMOC-L-류신 (5 g, 14.14 mmol) (Bachem) 을 아세토니트릴 (70 ㎖) 중에 용해시켰다. 피리딘 (1.14 ㎖, 14.14 mmol) (Aldrich) 및 시아누르산 플루오라이드 (1.91 g, 14.14 mmol) (Aldrich) 를 실온에서 연속 첨가하고 혼합물을 하룻밤 동안 교반하였다. 빙냉수 (300 ㎖) 을 첨가하고, 생성 슬러리를 여과하였다. 여과액을 분별 깔때기로 붓고 층을 분리하였다. 유기층을 무수 나트륨 술페이트 상에서 건조하고, 여과하고 감압 하에 농축하여, FMOC-L-류실 플루오라이드를 백색 분말로 산출하였다 (수율 4.57 g, 91%).
실시예 9b
(2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸-N-페닐펜탄아미드 아세트산 염
3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (400 mg, 0.93 mmol) (상기 실시예 1g 로부터) 을 아세토니트릴 (4.5 ㎖) 중에 용해시켰다. FMOC-L-류실 플루오라이드 (1.68 g, 4.72 mmol) (상기 실시예 9a 로부터) 를 실온에서 첨가하고 혼합물을 10 분 동안 마이크로파 장치 (Smith SynthesizerTM) 내에서 120℃ 로 가열하였다. 용액을 활성 염기성 알루미나 플러그 (Alfa Aesar) 를 통해 여과하고 알루미나를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축하고 잔기를 역상 HPLC 로 정제하여 FMOC 보호 아민 (323 mg, 0.43 mmol) 을 얻었다. 상기 중간체를 10:1 아세토니트릴-피페리딘 (Aldrich) (4 ㎖) 중에 용해시켰다. 실온에서 10 분 후에, 혼합물을 농축하고 잔기를 1:1 에테르-헥산으로 분쇄하였다. 침전물을 여과로 수집하고 진공 하에 45℃ 에서 건조하고 역상 HPLC (물-아세토니트릴 구배, 용매 중 0.1% 아세트산 함유) 로 정제하여, (2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸-N-페닐펜탄아미드 아세트산 염을 백색 고체로 산출하였다 (수율 96 mg, 17%).
실시예 9c
(2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸-N-페닐펜탄아미드 염화수소산 염
3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (600 mg, 1.42 mmol) (상기 실시예 1g 로부터) 을 아세토니트릴 (8 ㎖) 중에 용해시켰다. FMOC-L-류실 플루오라이드 (629 mg, 1.77 mmol) (상기 실시예 9a 로부터) 를 실온에서 첨가하고, 혼합물을 10 분 동안 마이크로파 장치 (Smith SynthesizerTM) 내에서 120℃ 로 가열하였다. 용액을 활성 염기성 알루미나 플러그 (Alfa Aesar) 를 통해 여과하고 알루미나를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축하고 잔기를 역상 HPLC 로 정제하여 FMOC 보호 아민 (562 mg, 0.74 mmol) 을 얻었다. 상기 중간체를 10:1 아세토니트릴-피페리딘 (Aldrich) (4 ㎖) 중에 용해시켰다. 실온에서 10 분 후에, 혼합물을 농축하고 잔기를 에테르로 분쇄하였다. 침전물을 여과로 수집하고 45℃ 에서 건조한 후 디옥산 (4 ㎖) (Aldrich) 중 4 N 히드로겐 클로라이드 중에 용해시켰다. 용액을 감압 하에 농축하고 잔기를 에테르로 분쇄하여, (2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸-N-페닐펜탄아미드 염화수소산 염을 산출하였다 (수율 333 mg, 57%).
실시예 10a
N-FMOC-O-t-부틸-L-티로실 플루오라이드
N-FMOC-O-t-부틸-L-티로신 (5 g, 10.88 mmol) (Bachem) 을 디클로로메탄 (50 ㎖) 중에 용해시켰다. 피리딘 (0.88 ㎖, 10.88 mmol) (Aldrich) 및 시아누르산 플루오라이드 (1.47 g, 10.88 mmol) (Aldrich) 를 실온에서 연속 첨가하고, 혼합물을 5 시간 동안 교반하였다. 빙냉수 (100 ㎖) 를 첨가하고 생성 슬러리를 여과하였다. 여과액을 분별 깔때기로 붓고 층을 분리하였다. 유기층을 무수 나트륨 술페이트 상에서 건조하고, 여과하고 감압 하에 농축하여, N-FMOC-O-t-부틸-L-티로실 플루오라이드를 백색 분말로 산출하였다 (수율 4.43 g, 88%).
실시예 10b
(2S)-2-아미노-3-(4-히드록시페닐)-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐프로판아미드 염화수소산 염
3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (600 mg, 1.41 mmol) (상기 실시예 1g 로부터) 을 아세토니트릴 (4.5 ㎖) 중에 용해시켰다. N-FMOC-O-t-부틸-L-티로실 플루오라이드 (3.26 g, 7.06 mmol) (상기 실시예 10a 로부터) 를 실온에서 첨가하고, 혼합물을 10 분 동안 마이크로파 장치 (Smith SynthesizerTM) 내에서 120℃ 로 가열하였다. 용액을 활성 염기성 알루미나 플러그 (Alfa Aesar) 를 통해 여과하고 알루미나를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축하고 잔기를 역상 HPLC 로 정제하여 FMOC-t-부틸 에테르 보호 유도체 (648 mg, 0.75 mmol) 를 얻었다. 상기 중간체를 1:1 디클로로메탄-트리플루오로아세트산 (Aldrich) 중에 용해시켰다. 실온에서 1 시간 후, 혼합물을 농축하고 잔기를 에테르로 분쇄하였다. 침전물을 수집하고, 감압 하에 건조하고 1 시간 동안 10:1 아세토니트릴-피페리딘 (Aldrich) (5 ㎖) 으로 처리하였다. 용액을 농축하고, 고체 잔기를 1:1 에테르-헥산으로 분쇄하였다. 고체를 수집하고, 감압 하에 건조하고, 디옥산 (10 ㎖) (Aldrich) 중 4 N 히드로겐 클로라이드 중에 용해시켰다. 농축 후 에테르로부터 침전시켜, (2S)-2-아미노-3-(4-히드록시페닐)-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐-프로판아미드 염화수소산 염을 황색 고체로 산출하였다 (수율 216 mg, 25%).
실시예 11a
비스-FMOC-L-라이실 플루오라이드
비스-FMOC-L-라이신 (5 g, 8.46 mmol) (Bachem) 을 디클로로메탄 (50 ㎖) 중에 용해시켰다. 피리딘 (0.69 ㎖, 8.46 mmol) (Aldrich) 및 시아누르산 플루오라이드 (1.14 g, 8.46 mmol) (Aldrich) 를 실온에서 연속 첨가하고 혼합물을 하룻밤 동안 교반하였다. 빙냉수 (100 ㎖) 를 첨가하고 생성 슬러리를 여과하였다. 여과액을 분별 깔때기로 붓고 층을 분리하였다. 유기층을 무수 나트륨 술페이트 상에서 건조하고, 여과하고 감압 하에 농축하여, 비스-FMOC-L-라이실 플루오라이드를 백색 분말로 산출하였다 (수율 1.14 g, 23%).
실시예 11b
(2S)-2,6-디아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로- 피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐헥산아미드 디-염화수소산 염
3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (150 mg, 0.35 mmol) (상기 실시예 1g 로부터) 을 아세토니트릴 (2 ㎖) 중에 용해시켰다. 비스-FMOC-L-라이실 플루오라이드 (1.05 g, 1.77 mmol) (상기 실시예 11a 로부터) 를 실온에서 첨가하고 혼합물을 10 분 동안 마이크로파 장치 (Smith SynthesizerTM) 내에서 120℃ 로 가열하였다. 용액을 활성 염기성 알루미나 플러그 (Alfa Aesar) 를 통해 여과하고 알루미나를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축하고 잔기를 역상 HPLC 로 정제하여 비스-FMOC 보호 디-아민 (36 mg, 0.036 mmol) 을 얻었다. 상기 중간체를 10:1 아세토니트릴-피페리딘 (Aldrich) (1 ㎖) 중에 용해시켰다. 실온에서 10 분 후에, 혼합물을 농축하고, 잔기를 1:1 에테르-헥산으로 분쇄하였다. 고체 물질을 여과로 수집하고, 감압 하에 건조한 후 디옥산 (5 ㎖) (Aldrich) 중 4 N 히드로겐 클로라이드 중에 용해시켰다. 감압 하에 농축한 후 에테르로부터 침전시켜, (2S)-2,6-디아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐헥산아미드 디-염화수소산 염을 황색 고체로 산출하였다 (수율 25 mg, 10%).
실시예 12a
FMOC-L-트립토파닐 플루오라이드
FMOC-L-트립토판 (5 g, 11.72 mmol) (Bachem) 을 디클로로메탄 (60 ㎖) 중에 용해시켰다. 피리딘 (0.95 ㎖, 11.72 mmol) (Aldrich) 및 시아누르산 플루오라이드 (1.58 g, 11.72 mmol) (Aldrich) 를 실온에서 연속 첨가하고 혼합물을 6.5 시간 동안 교반하였다. 빙냉수 (100 ㎖) 를 첨가하고 생성 슬러리를 여과하였다. 여과액을 분별 깔때기로 붓고 층을 분리하였다. 유기층을 무수 나트륨 술페이트 상에서 건조하고, 여과하고 감압 하에 농축하여, FMOC-L-트립토파닐 플루오라이드를 베이지색 분말로 산출하였다 (수율 4.36 g, 87%).
실시예 12b
(2S)-2-아미노-3-인돌-3-일-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐프로판아미드 염화수소산 염
3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (600 mg, 1.41 mmol) (상기 실시예 1g 로부터) 을 아세토니트릴 (6 ㎖) 중에 용해시켰다. FMOC-L-트립토파닐 플루오라이드 (3.02 g, 7.06 mmol) (상기 실시예 12a 로부터) 를 실온에서 첨가하고, 혼합물을 10 분 동안 마이크로파 장치 (Smith SynthesizerTM) 내에서 120℃ 로 가열하였다. 용액을 활성 염기성 알루미나 플러그 (Alfa Aesar) 를 통해 여과하고 알루미나를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축하고 잔기를 역상 HPLC 로 정제하여 FMOC 보호 아민 (575 mg, 0.69 mmol) 을 얻었다. 상기 중간체를 10:1 아세토니트릴-피페리딘 (Aldrich) (3 ㎖) 중에 용해시켰다. 실온에서 10 분 후에, 혼합물을 농축하고, 잔기를 1:1 에테르-헥산으로 분쇄하였다. 고체 물질을 여과로 수집하고, 감압 하에 건조한 후, 디옥산 (20 ㎖) (Aldrich) 중 4 N 히드로겐 클로라이드 중에 용해시켰다. 감압 하에 농축한 후 아세토니트릴로부터 침전시켜, (2S)-2-아미노-3-인돌-3-일-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐프로판아미드 염화수소산 염을 황색 고체로 산출하였다 (수율 122 mg, 14%). 모액을 농축하고 에테르로 분쇄한 후 산물의 이차 산물을 수득하였다 (수율 285 mg, 31%).
실시예 13a
N-FMOC-0-t-부틸-L-세리닐 플루오라이드
N-FMOC-O-t-부틸-L-세린 (10 g, 26.07 mmol) (Bachem) 을 디클로로메탄 (135 ㎖) 중에 용해시켰다. 피리딘 (2.11 ㎖, 26.07 mmol) (Aldrich) 및 시아누르산 플루오라이드 (3.52 g, 26.07 mmol) (Aldrich) 를 실온에서 연속 첨가하고 혼합물을 하룻밤 동안 교반하였다. 빙냉수 (100 ㎖) 를 첨가하고, 생성 슬러리를 여과하였다. 여과액을 분별 깔때기로 붓고 층을 분리하였다. 유기층을 무수 나트륨 술페이트 상에서 건조하고, 여과하고 감압 하에 농축하여, N-FMOC-O-t-부틸-L-세리닐 플루오라이드를 방치 시 고화되는 무색 오일로 산출하였다 (수율 9.79 g, 97%).
실시예 13b
(2S)-2-아미노-3-히드록시-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐프로판아미드
3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (300 mg, 0.71 mmol) (상기 실시예 1g 로부터) 을 아세토니트릴 (4 ㎖) 중에 용해시켰다. N-FMOC-O-t-부틸-L-세리닐 플루오라이드 (1.38 g, 3.58 mmol) (상기 실시예 13a 로부터) 를 실온에서 첨가하고, 혼합물을 10 분 동안 마이크로파 장치 (Smith SynthesizerTM) 내에서 120℃ 로 가열하였다. 용액을 활성 염기성 알루미나 플러그 (Alfa Aesar) 를 통해 여과하고 알루미나를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축하고 잔기를 역상 HPLC 로 정제하여 FMOC-t-부틸 보호 유도체 (214 mg, 0.27 mmol) 를 얻었다. 상기 중간체를 1:1 디클로로메탄-트리플루오로아세트산 (Aldrich) (10 ㎖) 으로 1 시간 동안 처리하였다. 혼합물을 농축하고 잔기를 역상 HPLC 로 정제하였다 (97 mg, 0.13 mmol). 상기 FMOC 유도체를 10:1 아세토니트릴-피페리딘 (Aldrich) (2 ㎖) 중에 용해시켰다. 실온에서 10 분 후에, 혼합물을 농축하고 잔기를 에테르로 분쇄하였다. 고체 물질을 여과로 수집하고, 감압 하에 건조한 후, 디옥산 (20 ㎖) (Aldrich) 중 4 N 히드로겐 클로라이드 중에 용해시켰다. 감압 하에 농축한 후 에테르로부터 침전시켜 (2S)-2-아미노-3-히드록시-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐프로판아미드를 황색 고체로 산출하였다 (수율 60 mg, 15%).
실시예 14a
FMOC-D-메티오닐 플루오라이드
FMOC-D-메티오닌 (5.00 g, 13.46 mmol) (Bachem) 을 디클로로메탄 (70 ㎖) 중에 용해시켰다. 피리딘 (1.09 ㎖, 13.46 mmol) (Aldrich) 및 시아누르산 플루오라이드 (1.82 g, 13.46 mmol) (Aldrich) 를 실온에서 연속 첨가하고 혼합물을 4 시간 동안 교반하였다. 빙냉수 (100 ㎖) 를 첨가하고 생성 슬러리를 여과하였다. 여과액을 분별 깔때기로 붓고 층을 분리하였다. 유기층을 무수 나트륨 술페이트 상에서 건조하고, 여과하고 감압 하에 농축하여, FMOC-D-메티오닐 플루오라이드를 백색 분말로 산출하였다 (수율 3.7 g., 74%).
실시예 14b
(2R)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸티오-N-페닐부탄아미드 염화수소산 염
3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (300 mg, 0.71 mmol) (상기 실시예 1g 로부터) 을 아세토니트릴 (4 ㎖) 중에 용해시켰다. FMOC-D-메티오닐 플루오라이드 (1.32 g, 3.54 mmol) (상기 실시예 14a 로부터) 를 실온에서 첨가하고 혼합물을 10 분 동안 마이크로파 장치 (Smith SynthesizerTM) 내에서 120℃ 로 가열하였다. 용액을 활성 염기성 알루미나 플러그 (Alfa Aesar) 를 통해 여과하고 알루미나를 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과액을 감압 하에 농축하고 잔기를 역상 HPLC 로 정제하여 FMOC 보호 아민 (242 mg, 0.31 mmol) 을 얻었다. 상기 중간체를 10:1 아세토니트릴-피페리딘 (Aldrich) (5 ㎖) 중에 용해시켰다. 실온에서 1 시간 후, 혼합물을 농축하고 잔기를 에테르로 분쇄하였다. 침전물을 여과로 수집하고, 역상 HPLC 로 정제한 후 디옥산 (10 ㎖) (Aldrich) 중 4 N 히드로겐 클로라이드 중에 30 분 동안 용해시켰다. 균일 용액을 감압 하에 농축하고, 잔기를 에테르로 분쇄하였다. 침전물을 흡입 여과로 수집하고 감압 하에 건조하여, (2R)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸티오-N-페닐부탄아미드 염화수소산 염을 베이지색 고체로 산출하였다 (수율 20 mg, 5%).
실시예 15
{N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐카르바모일옥시}메틸 피페리딘-4-카르복실레이트 트리플루오로아세트산 염
질소 분위기 하 건조 테트라히드로푸란 중에 용해된 (클로로메톡시)-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-벤즈아미드 (200 mg, 0.39 mmol) (상기 실시예 4a 로부터) 의 용액에 BOC-이소니페코트산 나트륨 염 (356 mg, 1.4 mmol) [나트륨 염은 산 (Bachem) 을 1 당량의 NaOH 로 처리하여 제조되었다], 이어서 테트라부틸암모늄 히드로겐 술페이트 (220 mg, 0.582 mmol) (Aldrich) 를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 22 시간 동안 교반하였다. TLC 는 출발 물질이 여전히 존재함을 나타내었다. 또다른 일부 BOC-이소니페코트산 나트륨 염 (178 mg, 0.7 mmol) 및 테트라부틸암모늄 히드로겐 술페이트 (110 mg, 0.75 mmol) 를 첨가하고, 반응물을 실온에서 추가 23 시간 동안 교반하였다. 용매를 질소 기류로 분출시키고, 미정제 반응 혼합물을 디클로로메탄 및 물 사이에서 분획화하였다. 유기층을 물 및 염수로 세척하고 나트륨 술페이트 상에서 건조한 후 여과하고 감압 하에 농축하였다. 보호 중간체를 용매로서 디클로로메탄 중 10% 메탄올, 이어서 15, 및 20% 로 플래시 크로마토그래피 (Biotage, 40 S 칼럼) 에 의해 정제하여, BOC 보호 산물을 산출하였다 (수율 259 mg, 94%).
BOC 보호 산물 (235 mg, 0.33 mmol) 을 건조 디클로로메탄 (7.5 ㎖) 및 트리플루오로아세트산 (2 ㎖) 의 혼합물 중에 용해시켜 실온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 질소 기류 하에 농축하였다. 잔기를 디클로로메탄 중 20%, 이어서 30% 메탄올로 플래시 크로마토그래피 (Biotage, 12 S 칼럼) 에 의해 정제하여, {N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐카르바모일옥시}메틸 피페리딘-4-카르복실레이트 트리플루오로아세트산 염을 산출하였다 (수율 121 mg, 50%). 산물을 디클로로메탄-에테르로부터 재결정화시켰다 (Mp - 88~90℃).
실시예 16
N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐펜탄아미드
아르곤 하 건조 디클로로메탄 (1O ㎖) 중 3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (0.20g, 0.47 mmol) (상기 실시예 1g 로부터) 의 용액에 발레릴 클로라이드 (0.14 ㎖, 1.18 mmol) (Aldrich) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.41 ㎖, 2.36 mmol) (Aldrich) 을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1 일 동안 교반하였다. 이어서 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고, 1 N HCl 수용액, 물, 포화 나트륨 카르보네이트 수용액 및 염수로 세척하고, 건조하고 (MgSO4), 여과하여 농축하였다. 잔기를 에틸 아세테이트/헥산 (3:2, V/V) 으로 용출하면서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여, N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐펜탄아미드를 백색 발포체로 산출하였다 (수율 0.23 g, 96%).
실시예 17
N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐부탄아미드
아르곤 하 건조 디클로로메탄 (1O ㎖) 중 3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (0.20 g, 0.47 mmol) (상기 실시예 1g 로부터) 의 용액에 부티릴 클로라이드 (0.12 ㎖, 1.18 mmol) (Aldrich) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.41 ㎖, 2.36 mmol) (Aldrich) 을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4 시간 동안 교반하였다. 이어서 혼합물을 에틸 아세테이트로 희석하고 1 N HCl 수용액, 물, 포화 나트륨 카르보네이트 수용액 및 염수로 세척하고, 건조하고 (MgSO4), 여과하여 농축하였다. 잔기를 에틸 아세테이트/헥산 (3:2, V/V) 으로 용출하면서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여, N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐부탄아미드를 백색 발포체로 산출하였다 (수율 0.23 g, 100%).
실시예 18
7-[(4-히드록시페닐)아미노]-3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온
2-프로판올 (3.5 ㎖) 중 7-클로로-3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (0.15 g, 0.41 mmol) (상기 실시예 1f 로부터) 및 4-아미노-페놀 (57.8 mg, 0.53 mmol) (Aldrich) 의 용액을 마이크로파 반응기 (Smith SynthesizerTM) 내에 놓았다. 반응 혼합물을 160℃ 에서 10 분 동안 가열하였다. 형성된 침전물을 여과하고, 에탄올로 세척하고 건조하여, 7-[(4-히드록시페닐)아미노]-3-(4-메톡시-페닐)-1-페닐-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온을 산출하였다 (수율 0.12 g, 67%).
실시예 19a
1-니트로-4-(1,1,2,2-테트라메틸-1-실라프로폭시)벤젠
디메틸포름아미드 (50 ㎖) 중 4-니트로페놀 (5.0 g, 35.9 mmol) (Aldrich) 의 용액에 이미다졸 (3.18 g, 46.7 mmol) (Aldrich) 및 t-부틸디메틸실릴 클로라이드 (6.49 g, 43.1 mmol) (Avocado Research Chemicals Ltd.) 를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1 일 동안 교반하였다. TLC 분석은 출발 물질이 여전히 존재함을 나타내었다. 또다른 일부 t-부틸디메틸실릴 클로라이드 (1.0 g, 6.63 mmol) 를 첨가하고, 혼합물을 실온에서 또다른 1 일 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축하였다. 잔기를 에틸 아세테이트 (200 ㎖) 중에 용해시키고, 물 (100 ㎖) 및 수성 1N HCl (80 ㎖) 의 혼합물로 세척하였다. 이어서 유기층을 물, 포화 나트륨 비카르보네이트 수용액 및 염수로 세척하고, 건조하고 (MgSO4), 여과하여 농축하였다. 잔기를 에틸 아세테이트/헥산 (1:9, V/V) 으로 용출하면서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여, 1-니트로-4-(1,1,2,2-테트라메틸-1-실라프로폭시)벤젠을 산출하였다 (수율 7.8 g, 86%).
실시예 19b
4-(1,1,2,2-테트라메틸-1-실라프로폭시)페닐아민
에틸 아세테이트 (100 ㎖) 중 1-니트로-4-(1,1,2,2-테트라메틸-1-실라프로폭시)벤젠 (7.8 g, 30.8 mmol) (상기 실시예 19a 로부터) 및 10% Pd/C (0.70 g) (Aldrich) 의 용액을 1 일 동안 수소화시켰다. 반응 혼합물을 Celite 를 통해 여과하고 농축하였다. 잔기를 에틸 아세테이트/헥산 (1:9 V/V) 으로 용출하면서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여, 4-(1,1,2,2-테트라메틸-1-실라프로폭시)페닐아민을 산출하였다 (수율 6.7 g, 97%).
실시예 19c
3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-{[4-(1,1,2,2-테트라메틸-1-실라프로폭시)페닐]아미노}-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온
2-프로판올 (4 ㎖) 중 7-클로로-3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (0.20 g, 0.55 mmol) (상기 실시예 1f 로부터) 및 4-(1,1,2,2-테트라메틸-1-실라프로폭시)페닐아민 (0.16 g, 0.71 mmol) (상기 실시예 19b 로부터) 의 용액을 마이크로파 반응기 (Smith SynthesizerTM) 내에 놓았다. 반응 혼합물을 160℃ 에서 10 분 동안 가열하였다. 형성된 침전물을 여과하고, 2-프로판올로 세척하고 건조하여, 3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-{[4-(1,1,2,2-테트라메틸-1-실라프로폭시)페닐]아미노}-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온을 산출하였다 (수율 0.28 g, 93%).
실시예 19d
N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-[4-(1,1,2,2-테트라메틸-1-실라프로폭시)페닐]아세트아미드
아르곤 하 건조 디클로로메탄 (10 ㎖) 중 3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-{[4-(1,1,2,2-테트라메틸-1-실라프로폭시)페닐]아미노}-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (0.28 g, 0.51 mmol) (상기 실시예 19c 로부터) 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (0.44 ㎖, 2.55 mmol) (Aldrich) 의 용액에 아세틸 클로라이드 (0.09 ㎖, 1.26 mmol) (Aldrich) 를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 건조하고 (MgSO4), 여과하여 농축하였다. 잔기를 에틸 아세테이트/헥산 (3:7, 이어서 2:3, V/V) 으로 용출하면서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여, N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-[4-(1,1,2,2-테트라메틸-1-실라프로폭시)페닐]아세트아미드를 산출하였다 (수율 0.18 g, 60%).
실시예 19e
N-(4-히드록시페닐)-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로- 피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]아세트아미드
아르곤 하 건조 테트라히드로푸란 (5 ㎖) 중 N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-[4-(1,1,2,2-테트라메틸-1-실라프로폭시)페닐]아세트아미드 (0.17 g, 0.29 mmol) (상기 실시예 19d 로부터) 의 용액에 테트라부틸암모늄 플루오라이드 (테트라히드로푸란 중 1.0 M 용액, 0.43 ㎖, 0.43 mmol) (Aldrich) 를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4 시간 동안 교반하였다. 혼합물을 농축하고, 잔기를 에틸아세테이트/헥산 (4:1 V/V) 및 에틸 아세테이트로 용출하면서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여, N-(4-히드록시페닐)-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]아세트아미드를 산출하였다 (수율 73 mg, 52%).
실시예 20
3-(4-메톡시페닐)-7-[(4-메톡시페닐)아미노]-1-페닐-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온
2-프로판올 (3.5 ㎖) 중 7-클로로-3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (0.15 g, 0.41 mmol) (상기 실시예 1f 로부터) 및 p-아니시딘 (65 mg, 0.53 mmol) (Aldrich) 의 용액을 마이크로파 반응기 (Smith SynthesizerTM) 내에 놓았다. 반응 혼합물을 160℃ 에서 10 분 동안 가열하였다. 형성된 침전물을 여과하고, 2-프로판올로 세척하고 건조하여, 3-(4-메톡시페닐)-7-[(4-메톡시페닐)아미노]-1-페닐-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온을 산출하였다 (수율 0.18 g, 97%).
실시예 21
N-(4-메톡시페닐)-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]아세트아미드
아르곤 하 건조 디클로로메탄 (10 ㎖) 중 3-(4-메톡시페닐)-7-[(4-메톡시페닐)아미노]-1-페닐-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 (0.10 g, 0.22 mmol) (상기 실시예 20 으로부터) 및 N,N-디이소프로필-에틸아민 (0.19 ㎖, 1.1 mmol) 의 용액에 아세틸 클로라이드 (0.04 ㎖, 0.55 mmol) (Aldrich) 를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 하룻밤 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 디클로로메탄으로 희석하고, 물 및 염수로 세척하고, 건조하고 (MgSO4), 여과하여 농축하였다. 잔기를 에틸 아세테이트/헥산 (7:3 V/V) 으로 용출하면서 플래시 크로마토그래피에 의해 정제하여, N-(4-메톡시페닐)-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로-피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]아세트아미드를 산출하였다 (수율 24 mg, 22%).
항증식 활성
본 발명의 화합물의 항증식 활성을 하기 실시예 22 및 23 에 나타낸다. 상기 활성은 본 발명의 화합물이 암, 특히 고형암, 예컨대 유방암 및 결장암의 치료에 유용함을 나타낸다.
실시예 22
키나아제 분석
KDR, FGFR, EGFR, 및 PDGFR 활성의 저해를 결정하기 위해, 키나아제 분석을 HTRF (균일 시간 해상 형광도, Homogeneous Time Resolved Fluorescence) 분석을 이용하여 수행하였다. 이 분석은 [A.J. Kolb 등, Drug Discovery Today, 1998, 3(7), p 333] 에 기재되어 있다.
키나아제 반응에 앞서, 재조합 EEE-태깅된 KDR 을 활성화 완충액 (50 mM HEPES, pH 7.4, 1 mM DTT, 10% 글리세롤, 150 mM NaCl, 0.1 mM EDTA, 26 mM MgCl2, 및 4 mM ATP) 의 존재 하에 활성화시켰다. 효소를 4℃ 에서 1 시간 동안 인큐베이션하였다.
키나아제 활성 분석은 각각의 웰 당 총 부피 90 ㎕ 로 96-웰 폴리프로필렌 플레이트 (Falcon) 에서 수행하였다. 각각의 웰에는 1 μM KDR 기질 (바이오틴-EEEEYFELVAKKKK), 1 nM 활성화된 KDR, 및 1OO μM 내지 128 pM (1:5 연속 희석) 범위의 8 개 분석 농도 중 하나인 시험 화합물이 포함되었다. 키나아제 활성 분석은 100 mM HEPES, pH 7.4, 1 mM DTT, 0.1 mM Na2VO4, 25 mM MgCl2, 50 mM NaCl (KDR 스톡 용액으로부터), 1% DMSO (화합물로부터), 0.3 mM ATP (Km 농도에서) 및 0.02% BSA 의 존재 하에 수행되었다. 반응물을 37℃ 에서 30 분 동안 인큐베이션하였다. KDR 반응을 중지시키기 위해, 72 ㎕ 의 반응 혼합물을 18 ㎕ 의 표시 (revelation) 완충액 (20 mM EDTA, 50 mM HEPES, pH 7.4, 0.02% BSA, 1O nM Eu-표지된 항-pY 항체 (최종 농도 2 nM), 및 100 nM 스트렙타비딘 (최종 농도 20 nM)) 을 포함하는 STOP 플레이트로 옮겼다. 혼합 후, 35 ㎕ 용액을 384-웰 블랙 플레이트 (Costar) 의 2 개씩의 웰로 옮기고, Wallac Victor 5 판독기 상 615/665 nm 에서 판독하였다.
KDR 활성 분석에 비해 하기 차이를 가지고, FGFR, EGFR, 및 PDGFR 활성 분석을 상술된 바와 같이 수행하였다. GST-태깅된 FGFR 효소를 하기 활성화 완충액 중 실온에서 1 시간 동안 활성화시켰다: 100 mM HEPES, pH 7.4, 50 mM NaCl, 20 mM MgCl2, 및 4 mM ATP. 키나아제 활성 분석은 1 μM 기질 (바이오틴-EEEEYFELV), 1.5 nM 활성화된 FGFR, 및 시험 화합물과, 100 mM HEPES, 1 mM DTT, 0.4 mM MgCl2, 0.4 mM MnCl2, 50 mM NaCl, 1% DMSO, 10 μM ATP (FGFR 에 대해 Km = 8.5 μM), O.1 mM Na2VO4, 및 0.02% BSA 의 존재 하에, 총 부피 90 ㎕ 중에서 수행하였다. 분석의 나머지는 KDR 분석에서와 동일한 방식으로 수행하였다.
EGFR 키나아제 활성 분석은 1 μM 기질 (바이오틴-EEEEYFELV), 1.5 nM EGFR, 시험 화합물, 100 mM HEPES, pH 7.4, 1 mM DTT, 5 mM MgCl2, 2 mM MnCl2, 1% DMSO, 0.5 μM ATP (EGFR 에 대한 Km), O.1 mM Na2VO4, 및 0.02% BSA 와 수행하였다. 분석의 나머지는 KDR 분석에서와 동일한 방식으로 수행하였다.
PDGFR 키나아제 활성 분석은 1 μM 기질 (바이오틴-EEEEYFELV), 1.O nM PDGFR, 시험 화합물, 100 mM HEPES, pH 7.4, 1 mM DTT, 5 mM MgCl2, 2 mM MnCl2, 1% DMSO, 2.3 μM ATP (PDGFR 에 대한 Km), O.1 mM Na2VO4, 및 0.02% BSA 와 수행하였다. 분석의 나머지는 KDR 분석에서와 동일한 방식으로 수행하였다.
화합물 IC50 값은 2 개씩의 데이타 세트로 결정하였고, Excel 을 이용하여 데이타를 공식 Y = [(a - b)/{1 + (X/c)d] + b 에 대입하여 계산하였다 (여기서, a 및 b 는 각각 시험 저해제 화합물의 부재 하 및 무한한 양의 저해제 시험 화합물의 존재 하의 효소 활성이며, c 는 IC50 이고, d 는 화합물 반응의 hill 상수이다). IC50 값은 기재된 시험 조건 하에서 효소 활성을 50% 로 감소시키는 시험 화합물의 농도이다.
IC50 값을 포함하는 상기 시험관 내 실험의 결과를 하기 표 1 에 나타낸다.
실시예 23
VEGF 및 FGF-자극 HUVEC 증식 분석
세포 기재 분석에서 본 발명의 시험 화합물의 항증식 활성을 BrdU 키트 (Roche Biochemicals 1-647-229) 를 이용한 BrdU 분석으로 평가하였다. 인간 탯줄 정맥 내피 세포 (Clonetics CC-2519) 를 EGM-2 (Clonetics CC-3162) 배지 중에서 배양하고, 하룻밤 동안 96-웰 편평 바닥 플레이트 (Costar 3595) 에서 EGM-2 (Clonetics CC-3162) 배지 부피 200 ㎕ 중에 웰 당 10000 세포씩 접종하였다. 37℃ 에서 5% CO2 로 24 시간 동안 성장시킨 후, 인큐베이션 배지를 천천히 흡입 제거하고, 각 웰의 내용물을 1 ㎖ 당 50 ㎍ 의 겐타마이신 및 1 ㎖ 당 50 ng 의 암포테리신-B (Clonetics CC-4083) 를 함유하는, 300 ㎕ 의 사전 가온된 EBM-2 (Clonetics CC-3156) 로 세척하였다. 이어서, 잔여 배지를 다시 흡입하고, 웰 당 160 ㎕ 의 혈청 감소 배지 (1% 의 열 불활성화 FBS (Clonetics CC-4102), 1 ㎖ 당 50 ㎍ 의 겐타마이신 및 1 ㎖ 당 50 ng 의 암포테리신-B (Clonetics CC-4083), 1 ㎖ 당 10 단위의 Wyeth-Ayerst 헤파린 (NDC0641-0391-25), 및 2 mM L-글루타민 (GIBCO 25030-081) 이 보충된 EBM-2) 로 교체하였다. 24 시간 동안 세포의 혈청을 감소시킨 후, 2.5% DMSO 가 포함된, 혈청 감소 배지 중 10X 시험 농도의 시험 화합물 20 ㎕ 를 적절한 웰에 첨가하였다. 대조군 웰에는 2.5% DMSO 가 포함된 혈청 감소 배지 20 ㎕ 가 포함되었다. 플레이트를 2 시간 동안 인큐베이터로 되돌려 놓았다. 2 시간 동안 시험 화합물과 세포를 사전 인큐베이션한 후, 혈청 감소 배지 중에 희석된 10X 분석 농도의 성장인자 20 ㎕, 1 ㎖ 당 50 ng 의 FGF 또는 1 ㎖ 당 200 ng 의 VEGF (R & D 시스템 293-VE) 를 첨가하였다. 분석물 중 FGF 의 최종 농도는 1 ㎖ 당 5 ng 이었고, 분석물 중 VEGF 의 최종 농도는 1 ㎖ 당 20 ng 이었다. 성장 인자가 없는 대조군 웰은 성장 인자를 갖는 웰에서와 동량의 BSA 를 갖는 혈청 감소 배지를 웰 당 20 ㎕ 씩 가졌다. 플레이트를 추가 22 시간 동안 인큐베이터로 되돌려 놓았다.
BrdU ELISA
시험 화합물로의 24 시간 노출 후, 혈청 감소 배지 중 희석된 (1:100) BrdU 표지 시약을 웰 당 20 ㎕ 씩 첨가하여 세포를 BrdU (Roche Biochemicals 1-647-229) 로 표지하였다. 이어서, 플레이트를 4 시간 동안 인큐베이터로 되돌려 놓았다. 배지를 종이 타월 상에 따라내어 표지 배지를 제거하였다. 각각의 웰에 200 ㎕ 의 고정/변성 용액을 첨가하고 실온에서 45 분 동안 인큐베이션하여, 세포를 고정하고 DNA 를 변성시켰다. 고정/변성 용액을 종이 타월 상에 따라내고, 각각의 웰에 100 ㎕ 의 항-BrdU-POD 를 첨가하고, 웰을 실온에서 2 시간 동안 인큐베이션하였다. 항체 용액을 제거하고, 웰을 각각 3-4 회 300 ㎕ PBS 로 세척하였다. 100 ㎕ 의 TMB 기질 용액을 각 웰에 첨가하고, 웰을 실온에서 5-8 분 동안 인큐베이션하였다. 이어서, 웰 당 100 ㎕ 의 1 M 인산을 첨가하여 반응을 중지시켰다. 플레이트를 참고 파장 650 nm 로 450 nm 에서 판독하였다. 모든 웰로부터 블랭크 (무세포) 웰의 흡광도를 뺀 후, 각 2 개씩의 시험물의 평균 흡광도를 대조군의 평균으로 나눈 값을 1 로부터 빼서 각 시험 화합물의 저해 백분율을 계산하였다. 이어서 최종 값에 100 을 곱하였다 (저해 % = [1 - (2 개씩의 시험물의 평균 흡광도/대조군의 평균)] * 100). IC50 값은 BrdU 표지를 50% 저해하는 시험 화합물의 농도로, 세포 증식 저해의 척도이다. IC50 은 농도 대 저해 백분율의 논리 도식의 선형 회귀로부터 결정되었다. IC50 값을 하기 표 2 에 나타낸다.
실시예 24
제조 절차:
1. 아이템 1, 2 및 3 을 적합한 혼합기 내에서 15 분 동안 혼합한다.
2. 단계 1 로부터의 분말 혼합물을 20% 포비돈 K30 용액 (아이템 4) 으로 제립한다.
3. 단계 2 로부터의 제립물을 50℃ 에서 건조한다.
4. 단계 3 으로부터의 제립물을 적합한 분쇄 장치를 통해 통과시킨다.
5. 아이템 5 를 단계 4 의 분쇄된 제립물에 첨가하고, 3 분 동안 혼합한다.
6. 단계 5 로부터의 제립물을 적합한 압축기 상에서 압축한다.
실시예 25
제조 절차:
1. 아이템 1, 2 및 3 을 적합한 혼합기 내에서 15 분 동안 혼합한다.
2. 아이템 4 & 5 를 첨가하고, 3 분 동안 혼합한다.
3. 적합한 캡슐 상에 충전한다.
실시예 26
주사 용액/에멀젼 제제
아이템 성분 ㎎/㎖
1 화합물 A* 1 ㎎
2 PEG400 10-50 ㎎
3 레시틴 20-50 ㎎
4 대두유 1-5 ㎎
5 글리세롤 8-12 ㎎
6 물 적량 1 ㎖
화합물 A 는 본 발명의 화합물을 나타낸다.
제조 절차:
1. 아이템 1 을 아이템 2 중에 용해시킨다.
2. 아이템 3, 4 및 5 를 아이템 6 에 첨가하고 분산될 때까지 혼합한 후 균질화시킨다.
3. 단계 1 로부터의 용액을 단계 2 로부터의 혼합물에 첨가하고, 분산액이 투명해질 때까지 균질화시킨다.
4. 0.2 ㎛ 필터를 통해 멸균 여과하고, 바이알 내로 충전한다.
실시예 27
주사 용액/에멀젼 제제
아이템 성분 ㎎/㎖
1 화합물 A* 1 ㎎
2 글리코푸롤 10-50 ㎎
3 레시틴 20-50 ㎎
4 대두유 1-5 ㎎
5 글리세롤 8-12 ㎎
6 물 적량 1 ㎖
화합물 A 는 본 발명의 화합물을 나타낸다.
제조 절차:
1. 아이템 1 을 아이템 2 중에 용해시킨다.
2. 아이템 3, 4 및 5 를 아이템 6 에 첨가하고 분산될 때까지 혼합한 후 균질화시킨다.
3. 단계 1 로부터의 용액을 단계 2 로부터의 혼합물에 첨가하고, 분산액이 투명해질 때까지 균질화시킨다.
0.2 ㎛ 필터를 통해 멸균 여과하고, 바이알 내로 충전한다.
본 발명을 구체적이고 바람직한 구현예를 참고로 예시하였으나, 당업자는 본 발명의 일상적 실험 및 실시를 통해 변화 및 변형이 얻어질 수 있음을 이해할 것이다. 따라서, 본 발명은 상기 설명에 제한되는 것이 아니라 첨부되는 청구범위 및 이들의 동등물에 의해 정의되는 것으로 간주되어야 한다.

Claims (23)

  1. 하기 화학식 I 의 화합물 및 이들의 약학적으로 허용가능한 염:
    [화학식 I]
    (식 중,
    R1 은 하기 군으로부터 선택되고:
    -H,
    -COR4, 및
    -COOCHR5OCOR4;
    R2 및 R3 은 독립적으로 하기로부터 선택되고:
    -H, 및
    -OR5;
    R4 는 하기 군으로부터 선택되고:
    -C1-6 알킬,
    독립적으로 하기로부터 선택되는 4 이하의 기로 치환되는 -C1-6 알킬:
    -NR5R6,
    -SR5,
    -OR5,
    -아릴,
    독립적으로 -OR5 및 C1-4 알킬로부터 선택되는 2 이하의 기로 치환되는 -아릴, 및
    -헤테로아릴, 및
    - 헤테로사이클;
    R5 및 R6 은 독립적으로 하기로부터 선택되고:
    -H, 및
    -C1-5 알킬, 또는
    대안적으로, -NR5R6 는 3 내지 7 원자수의 고리를 형성할 수 있고, 상기 고리는 임의로 하나 이상의 부가적 N 또는 O 원자를 포함한다).
  2. 제 1 항에 있어서,
    R1 이 하기 군으로부터 선택되고:
    -H,
    -COR4, 및
    -COOCHR5OCOR4;
    R2 및 R3 이 독립적으로 하기로부터 선택되고:
    -H, 및
    -OR5;
    R4 가 하기 군으로부터 선택되고:
    -C1-6 알킬,
    독립적으로 하기로부터 선택되는 1 내지 4 의 기로 치환되는 -C1-6 알킬:
    -NR5R6,
    -SR5,
    -OR5,
    -페닐,
    독립적으로 -OR5 및 C1-4 알킬로부터 선택되는 1 내지 2 의 기로 치환되는 -페닐, 및
    -티에닐, -푸릴, -인돌릴, -피롤릴, -피리디닐, -피라지닐, -옥사졸릴, -티아졸릴, 퀴놀리닐, 피리미디닐, 이미다졸릴 및 테트라졸릴, 및
    - 피페리디닐, 피페라지닐, 피롤리디닐, 및 모르폴리닐;
    R5 및 R6 이 독립적으로 하기로부터 선택되고:
    -H, 및
    -C1-5 알킬, 또는
    대안적으로, -NR5R6 는 3 내지 7 원자수의 고리를 형성할 수 있고, 상기 고리는 임의로 하나 이상의 부가적 N 또는 O 원자를 포함하는 화학식 I 의 화합물.
  3. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, R1 이 -COR4 인 화학식 I 의 화합물.
  4. 제 3 항에 있어서, R4 가 C1-6 알킬인 화학식 I 의 화합물.
  5. 제 4 항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 화학식 I 의 화합물:
    N-3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐아세트아미드;
    N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐프로판아미드;
    N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐펜탄아미드; 및
    N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐부탄아미드.
  6. 제 3 항에 있어서,
    R4 가 -NR5R6 으로 치환된 -C1-6 알킬, 또는 -NR5R 6 및 하기로부터 선택되는 추가 기로 치환된 -C1-6 알킬이고:
    -NR5R6,
    -SR5,
    -OR5,
    -페닐,
    독립적으로 -OR5 및 C1-4 알킬로부터 선택되는 1 내지 2 의 기로 치환되는 -페닐, 및
    -티에닐, -푸릴, -인돌릴, -피롤릴, -피리디닐, -피라지닐, -옥사졸릴, -티아졸릴, 퀴놀리닐, 피리미디닐, 이미다졸릴 및 테트라졸릴;
    R5 및 R6 이 독립적으로 -H, 및 -C1-5 알킬로부터 선택되는 화학식 I 의 화합물.
  7. 제 6 항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 화학식 I 의 화합물:
    (2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸티오-N-페닐부탄아미드;
    (2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-3-페닐-N-페닐프로판아미드;
    (2S)-2-아미노-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-4-메틸-N-페닐펜탄아미드 아세트산 염; 및
    (2S)-2-아미노-3-인돌-3-일-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐프로판아미드 염화수소산 염.
  8. 제 3 항에 있어서, R3 이 -OR5 이고 R5 가 -H 또는 -C1-5 알킬인 화학식 I 의 화합물.
  9. 제 8 항에 있어서, 하기 군으로부터 선택되는 화학식 I 의 화합물:
    N-(4-히드록시페닐)-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]아세트아미드; 및
    N-(4-메톡시페닐)-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]아세트아미드.
  10. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, R1 이 -COOCHR5OCOR4 인 화학식 I 의 화합물.
  11. 제 10 항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 화학식 I 의 화합물:
    {N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐카르바모일옥시}메틸 아세테이트;
    {N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐카르바모일옥시}메틸 2-(디메틸아미노)아세테이트;
    {N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐카르바모일옥시}메틸 2-(디메틸아미노)아세테이트 염화수소산 염; 및
    {N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-페닐카르바모일옥시}메틸 피페리딘-4-카르복실레이트 트리플루오로아세트산 염.
  12. 제 1 항 또는 제 2 항에 있어서, R1 이 H 인 화학식 I 의 화합물.
  13. 제 12 항에 있어서, 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 화학식 I 의 화합물:
    3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온;
    3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-(페닐아미노)-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 메탄술포네이트 염;
    7-[(4-히드록시페닐)아미노]-3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온; 및
    3-(4-메톡시페닐)-7-[(4-메톡시페닐)아미노]-1-페닐-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온.
  14. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 치료 유효량 및 약학적으로 허용가능한 담체 또는 부형제를 함유하는 약학 조성물.
  15. 제 14 항에 있어서, 화합물이 암을 갖는 환자로의 투여에 적합한 약학 조성물.
  16. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 약제로서 사용하기 위한 화합물.
  17. 암의 치료 및 조절용 약제를 제조하기 위한, 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 따른 화합물의 용도.
  18. 제 17 항에 있어서, 고형암의 치료 및 조절을 위한 용도.
  19. 제 17 항에 있어서, 유방암, 폐암, 결장암 또는 전립선암의 치료 및 조절을 위한 용도.
  20. 하기를 포함하는, 화학식 I 의 화합물의 제조 방법:
    a) 하기 화학식 II 의 화합물을:
    [화학식 II]
    (식 중, hal 은 클로로, 브로모 또는 요오도이다),
    하기 화학식 III 의 아닐린 유도체와 반응시켜:
    [화학식 III]
    (식 중, R2 및 R3 은 H 또는 -OR5' 이며, 여기서 R5' 은 H, C1-5 알킬 또는 실릴 보호기이다),
    하기 화학식 I-A 의 화합물을 수득하고/하거나:
    [화학식 I-A]
    b) 화학식 I-A 의 화합물을 하기 화학식 IV 의 산 할로겐화물 또는 무수물과 반응시켜:
    [화학식 IV]
    (식 중, X 는 할로겐 또는 -OCOR4 이며, R4 는 제 1 항에 정의된 바와 같다),
    하기 화학식 I-B 의 화합물을 수득하거나:
    [화학식 I-B]
    또는 대안적으로
    c) 화학식 I-A 의 화합물을 하기 화학식 V 의 클로로포르메이트와 반응시켜:
    [화학식 V]
    (식 중, R5 는 제 1 항에 정의된 바와 같다),
    하기 화학식 VI 의 화합물을 수득한 후:
    [화학식 VI]
    하기 화학식 VII 의 나트륨 염과 반응시켜:
    [화학식 VII]
    하기 화학식 I-C 의 화합물을 수득하고:
    [화학식 I-C]
    d) 필요하다면, 화학식 I-A, I-B 또는 I-C 의 화합물을 약학적으로 허용가능한 염으로 전환시킴.
  21. 제 1 항 내지 제 13 항 중 어느 한 항에 있어서, 제 20 항에 따른 방법으로 제조되는 화학식 I 의 화합물.
  22. 하기로 이루어진 군으로부터 선택되는 화합물:
    (클로로메톡시)-N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-벤즈아미드 [실시예 4a]
    3-(4-메톡시페닐)-1-페닐-7-{[4-(1,1,2,2-테트라메틸-1-실라프로폭시)페닐]아미노}-1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-2-온 [실시예 19c], 및
    N-[3-(4-메톡시페닐)-2-옥소-1-페닐(1,3,4-트리히드로피리미디노[4,5-d]피리미딘-7-일)]-N-[4-(1,1,2,2-테트라메틸-1-실라프로폭시)페닐]아세트아미드 [실시예 19d].
  23. 본원에서 앞에 상술된 신규 화합물, 약학 조성물, 방법 및 용도.
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