KR20040040402A

KR20040040402A - 이노신 모노포스페이트 데하이드로게나제 억제제와ｄａｐｄ의 병행 요법

Info

Publication number: KR20040040402A
Application number: KR10-2003-7007971A
Authority: KR
Inventors: 퍼만필립에이.; 보로토-에소다캐티나
Original assignee: 트라이앵글 파마슈티칼스 인코포레이티드
Priority date: 2000-12-15
Filing date: 2001-12-12
Publication date: 2004-05-12
Also published as: OA12588A; MXPA03005382A; EP1363704A2; RU2003121401A; JP2005500252A; IL156447A0; CA2432287A1; BR0116223A; CN1501828A; US20020173491A1; WO2002068058A3; US20050113321A1; WO2002068058A2

Abstract

예기치 않게, 본 발명에 따라 β-D-1,3-디옥솔라닐 뉴클레오사이드를 IMPDH 억제제와 함께 사용하는 경우, HIV의 약물 내성 균주가 약물에 노출되지 않은 바이러스의 행태를 나타내는 것으로 밝혀졌다. 비한정적인 한 구체예로, HIV 균주는 β-D-1,3-디옥솔라닐 뉴클레오사이드에 대해 내성을 나타낸다.

Description

이노신 모노포스페이트 데하이드로게나제 억제제와 ＤＡＰＤ의 병행 요법{DAPD Combination therapy with inosine monophosphate dehydrogenase inhibitor}

후천성 면역결핍증후군인 AIDS는 전세계적으로 퍼진 파국적 질병이다. 1998년 7월부터 1999년 6월까지 미국에서만 총 47,083명의 AIDS 환자가 보고되었다. 1998년에 이백이십만명 이상이 사망하였고, 이제 HIV/AIDS는 사망의 네 번째 주요 원인이 되었으며, 그 충격은 증가하고 있다. AIDS로 인한 사망자의 수는 연간 이백육십만명에 이르렀고, 반면에 최근 UNAIDS 보고에 따르면 새로운 HIV 감염은 급속한 속도로 계속 퍼지고 있다.

AIDS는 외관상 건강해 보이는 동성애자들이 면역-결핍 환자들을 괴롭히는 것으로만 알려진 두 가지 기회감염 질병인 카포시육종(Karposi's Sarcoma, KS) 및 뉴모시스티스 카리니 뉴모니아(Pneumocystis carinii Pneumonia, PCP)에 걸렸을 때인 1981년에 질병 구제 예방 센터(Center for Disease Control and Prevention, CDC)에 의해 처음 보고되었다. 2년 후, 파리 소재 파스퇴르 연구소(Pasteur Institute)에 의해 AIDS 병원체인 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 림프절병증 관련 레트로바이러스(lymphoadenopathy associated retrovirus)가 분리되었고, 그 후 미국의 국립암센터(National Cancer Institute)에서 독자적으로 확인되었다.

1986년 파리에서 열린 AIDS와 관련한 제 2 차 국제회의에서 AIDS에 대한 약물의 사용에 대하여 최초로 보고되었다. 이 약물 3'-아지도-3'-데옥시-티미딘 (AZT, 지도부딘(Zidovudine), Retrovir)은 식품의약청(Food And Drug Administration, FDA)에 의해 승인되었고, 이것은 AIDS 치료에 사용된 최초의 약물이 되었다. AZT의 출현 이래, 몇몇 뉴클레오사이드 유사체가 인간 면역결핍 바이러스 I형(HIV-1)에 대하여 강력한 항바이러스 활성을 가지는 것으로 나타났다. 특히, 다수의 2',3'-디데옥시-2',3'-디데하이드로-뉴클레오사이드가 강력한 항-HIV-1 활성을 가지는 것으로 나타났다. 2',3'-디데옥시-2',3'-디데하이드로-티미딘("D4T"; 1-(2,3-디데옥시-β-D-글리세로-펜트-2-에노-푸라노실)티미딘이라고도 불린다)은 현재 HIV 치료를 위해 브리스톨 마이어 스퀴브(Bristol Myers Squibb)에 의해 스타부딘(Stavudine) 상품명으로 판매되고 있다.

항바이러스제에 의한 장기 치료후 HIV의 약물-내성 변이체가 나타날 수 있음이 인지되었다. 약물 내성은 가장 전형적으로는 바이러스 복제에 사용된 효소,가장 전형적으로는 HIV의 경우 역전사효소인 프로테아제 또는 DNA 폴리메라제에 대하여 코딩하는 유전자의 변이에 의해 일어난다. 최근, 화합물을 원리적인 약물에 의해 야기된 것과는 다른 변이를 유도하는 제 2 및, 어쩌면 제 3의 항바이러스 화합물과 함께, 또는 교대로 투여하는 것에 의해 HIV 감염에 대한 약물의 효능이 연장되거나 증대되거나 회복될 수 있음이 입증되었다. 다르게는, 약물의 약물동태학, 생체분포(biodistribution) 또는 다른 파라미터는 이러한 병용 또는 교대 요법에 의해 변경될 수 있다. 일반적으로, 병용 요법은 전형적으로 바이러스에 동시다발적 압력을 유도하기 때문에 교대 요법보다 바람직하다. 그러나, 변이가 주어진 약물에 의해 HIV-1 게놈에서 유도될지, 변이가 영구적 또는 일시적일지, 또는 변이 HIV-1 시퀀스에 의한 감염 세포가 다른 약물과의 병용 또는 교대 요법에 반응할지를 예측할 수 없다. 이것은 현대의 항레트로바이러스제로 처리된 장기 세포 배양물에서의 약물 내성 동력학에 대한 데이터가 부족하다는 사실에 의해 악화된다.

3'-아지도-3'-데옥시티미딘(AZT), 2',3'-디데옥시이노신(DDI) 또는 2',3'-디데옥시시티딘(DDC)에 대한 내성을 가진 HIV-1 변이체가 이들 약물로 장기간 단일요법(monotheray)을 받은 환자들로부터 분리되었다(Larder BA, Darby G, Richman DD.Science1989; 243:1731-4; St Clair MH, Martin JL, Tudor WG, et al.Science1991; 253:1557-9; St Clair MH, Martin JL, Tudor WG, et al.Science1991; 253:1557-9; and Fitzgibbon JE, Howell RM, Haberzettl CA, Sperber SJ, Gocke DJ, Dubin DT.Antimicrob Agents Chemother 1992; 36:153-7). 많은 임상적 증거는 AZT 내성이 어린이 및 성인 모두에서 좋지 않은 임상 결과의 예시임을 나타낸다(Mayers DL. Lecture at the Thirty-second Interscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy. (Anaheim, CA. 1992); Tudor-Williams G, St Clair MH, McKinney RE, et al.Lancet1992; 339:15-9; Ogino MT, Dankner WM, Spector SA.J Pediatr1993; 123:1-8; Crumpacker CS, D'Aquila RT, Johnson VA, et al. Third Workshop on Viral Resistance. (Gaithersburg, MD. 1993); and Mayers D, and the RV43 Study Group. Third Workshop on Viral Resistance. (Gaithersburg, MD. 1993)).

비뉴클레오사이드 역전사효소 억제제(NNRTI)에 대한 HIV-1 내성의 신속한 발달이 또한 세포 배양물 및 인간 임상 시험 둘 다에서 보고되었다(Nunberg JH, Schleif WA, Boots EJ, et al.J Virol1991; 65(9):4887-92; Richman D, Shih CK, Lowy I, et al.Proc Natl Acad Sci(USA) 1991; 88:11241-5; Mellors JW, Dutschman GE, Im GJ, Tramontano E, Winkler SR, Cheng YC.Mol Pharm1992; 41:446-51; Riclmian DD and the ACTG 164/168 Study Team. Second International HIV-1 Drug Resistance Workshop. (Noordwijk, the Netherlands. 1993); and Saag MS, Emini EA, Laskin OL, et al.N Engl J Med1993; 329:1065-1072). NNRTI L'697,661의 경우, 약물-내성 HIV-1은 전처리 수준으로 바이러스혈증의 회복과 관련하여 치료 개시 2-6 주내에 나타났다(Saag MS, Emini EA, Laskin OL, et al.N Engl J Med1993; 329:1065-1072). 약물-내성 균주의 출현과 관련된 파괴성 바이러스혈증이 또한 프로테아제 억제제를 포함한 다른 부류의 HIV-1 억제제와 함께 언급되었다(Jacobsen H, Craig CJ, Duncan IB, Haenggi M, Yasargil K, Mous J. Third Workshop on Viral Resistance. (Gaithersburg, MD. 1993)). 이러한 경험에 의해 HIV-1 약물 내성에 대한 잠재성이 HIV-1에 대한 모든 새로운 요법의 전임상 평가에서 먼저 평가되어야 함을 실감케 했다.

1,3-디옥솔라닐 뉴클레오사이드

생체내 또는 시험관내에서 HIV 복제를 억제함에 있어서 다양한 합성 뉴클레오사이드의 성과가 많은 연구자들로 하여금 뉴클레오사이드 3'-위치의 탄소원자가 헤테로원자로 치환된 뉴클레오사이드를 디자인하고 시험하게 하였다. 노르벡 (Norbeck) 등은 (+/-)-1-[(2-β,4-β)-2-(하이드록시메틸)-4-디옥솔라닐]티미딘 ((+/-)-디옥솔란-T라 함)이 HIV에 대하여 적당한 활성(ATH8 세포에서 20 μM의 EC₅₀)을 나타내며, 200 μM의 농도에서 비감염 대조 세포에 대하여 독성이 없다고 기술하였다. Tetrahedron Letters 30 (46), 6246, (1989).

1988년 4월 11일, 바이오켐 파마(BioChem Pharma)의 베르나르드 벨로우 (Bernard Belleau), 딜립 딕시트(Dilip Dixit) 및 엔게 엔구엔-바(Nghe Nguyen-Ba)는 HIV 치료용 라세미 2-치환된-4-치환된-1,3-디옥솔란 뉴클레오사이드의 일반적 그룹을 개시하는 특허출원 U.S.S.N. 07/179,615호를 출원하였다. 이 '615 특허출원은 바이오켐 파마 인코포레이티드(BioChem Pharma, Inc.)에 양도된 유럽특허 공개 제 0 337 713호; 미국 특허 제 5,041,449호; 및 미국 특허 제 5,270,315호로 완성되었다.

1990년 12월 5일, 청 케이. 츄(Chung K. Chu) 및 레이몬드 에프. 쉬나지 (Raymond F. Schinazi)는 입체특이적 합성을 통한 에난티오머적으로 풍부한 β-D-1,3-디옥솔란 뉴클레오사이드의 비대칭적인 제조 방법, 그에 의해 제조된 특정 뉴클레오사이드[(-)-(2R,4R)-9-[(2-하이드록시메틸)-1,3-디올란-4-일]구아닌(DXG) 포함] 및 HIV를 치료하기 위한 그의 용도를 개시한 U.S.S.N. 07/622,762호를 출원하였다. 본 특허출원은 미국 특허 제 5,179,104호로서 등록되었다.

1991년 5월 21일, 바이오켐 파마의 타렉 만소르(Tarek Mansour) 등은 실릴 루이스산과 키랄 보조기에 공유 결합된 1,3-디옥솔란 중간체를 축합하는 것을 포함하는 입체선택적 합성을 사용하여 1,3-디옥솔란 뉴클레오사이드의 에난티오머를 수득하는 방법과 관련된 U.S.S.N. 07/703,379호를 출원하였다. 대응 출원이 유럽에서 EP 0 515 156호로서 출원되었다.

1992년 8월 25일, 청 케이. 츄(Chung K. Chu) 및 레이몬드 에프. 쉬나지 (Raymond F. Schinazi)는 임의로 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제중의 HIV로 감염된 인간을 치료하기 위한 하기 구조식의 특정 에난티오머적으로 풍부한 β-D-디옥솔라닐 퓨린 화합물, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 유도체를 개시하는 U.S.S.N. 07/935,515호를 출원하였다:

상기 식에서,

R은 OH, Cl, NH₂또는 H이다.

R이 클로로인 화합물은 (-)-(2R,4R)-2-아미노-6-클로로-9-[(2-하이드록시메틸)-1,3-디옥솔란-4-일]퓨린으로서 언급된다. R이 하이드록시인 화합물은 (-)-(2R,4R)-9-[(2-하이드록시메틸)-1,3-디옥솔란-4-일]구아닌이다. R이 아미노인 화합물은 (-)-(2R,4R)-2-아미노-9-[(2-하이드록시메틸)-1,3-디옥솔란-4-일]아데닌이다. R이 수소인 화합물은 (-)-(2R,4R)-2-아미노-9-[(2-하이드록시메틸)-1,3-디옥솔란-4-일]퓨린이다. 이 출원은 미국 특허 제 5,925,643호 및 제 5,767,122호로서 등록되었다.

1992년, 김(Kim) 등은 1,6-언하이드로-L-β-글루코피라노스로부터 (-)-L-β-디옥솔란-C 및 (+)-L-β-디옥솔란-T를 수득하는 방법을 교시하는 논문을 발표하였다. Kim et al.,Potent anti-HIV and anti-HBV Activities of (-)-L-β-Dioxolane-C and (+)-L-β-Dioxolane-T and Their Asymmetric Syntheses, Tetrahedron LettersVol 32(46), pp 5899-6902.

1992년 10월 28일, 레이몬드 쉬나지(Raymond Schinazi)는 B형 간염을 치료하기 위한 U.S.S.N. 07/935,515호에 개시된 화합물의 용도와 관련된 U.S.S.N. 07/967,460호를 출원하였다. 이 출원은 미국 특허 제 5,444,063호; 제 5,684,010호; 제 5,834,474호; 및 제 5,830,898호로서 등록되었다.

1993년, 바이오켐(BioChem) 및 글락소(Glaxo)의 시디퀴(Siddiqui) 등은 시스-2,6-디아미노퓨린 디옥솔란이 아데노신 데아미나제를 사용하여 선택적으로 탈아미노화될 수 있음을 발표하였다. Siddiqui, et al.,Antiviral Optically Pure dioxolane Purine Nucleoside Analogues, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, Vol. 3 (8), pp 1543-1546 (1993).

(-)-(2R,4R)-2-아미노-9-[(2-하이드록시메틸)-1,3-디옥솔란-4-일]아데노신(DAPD)는 역전사효소 억제제(RTI)로서 시험관내 HIV-1 복제의 선택적 억제제이다. DAPD는 편재 효소인 아데노신 데아미나제에 의해 생체내에서 탈아미노화되어 (-)-β-D-디옥솔란 구아닌(DXG)을 제공하고 이어 상응하는 5'-트리포스페이트(DXG-TP)로 전환되는 것으로 생각된다. 생화학적 분석에 의해 DXG-TP가 0.019 μM의 Ki를 가진 HIV 역전사효소(HIV-RT)의 잠재 억제제임이 입증되었다.

트라이앵글 파마슈티칼스, 인코포레이티드(Triangle Pharmaceuticals, Inc. 노스 캐롤라이나 더럼 소재)는 현재 아보트 라보라토리즈, 인코포레이티드(AbbottLaboratories, Inc.)와 공동으로 에모리 유니버시티(Emory University)로부터 라이센스 계약하에 HIV 및 HBV 치료용 이 화합물을 개발중이다.

리바비린

리바비린(1-β-D-리보푸라노실-1,2,4-트리아졸-3-카복스아미드)은 상품명 비라졸(Virazole)(The Merck Index, llth edition, Editor: Budavari, S., Merck & Co., Inc., Rahway, NJ, pl304, 1989)로 시판되는 비인터페론-유도성의 광범위한 항바이러스 효과가 있는 합성 뉴클레오사이드 유사체이다. 미국 특허 제 3,798,209호 및 RE29,835호는 리바비린을 개시하고 청구한다. 미국에서, 리바비린은 먼저 어린이에게서 특정 형태의 호흡기 바이러스 감염을 치료하기 위한 에어로졸 형태로 승인되었다. 리바비린은 구아노신과 구조적으로 유사하며, 플라비비리다에(Flaviviridae)를 포함한 몇몇 DNA 및 RNA 바이러스에 대하여 시험관내 활성을 가진다(Gary L. DavisGastroenterology118:S104-S114, 2000). 리바비린은 환자의 40%에서 혈청 아미노 전사효소 농도를 정상으로 감소시키지만, HCV-RNA의 혈청 농도를 낮추지는 않는다(Gary L. DavisGastroenterology118:S104-S114, 2000). 따라서, 리바비린 단독은 바이러스 RNA 농도를 감소시키는데 효과적이지 않다. 리바비린은 항-HIV 치료제로서 DDI와 병용하여 연구되고 있다. 보다 최근에, 리바비린이 A, B 및 C형 간염에 대하여 활성을 보이는 것으로 나타났다. 그러나, AIDS 발증 초기에 사람들은 리바비린을 항-HIV 치료제로서 사용하였기 때문에, 단일요법으로서 사용된 경우 일부 대조 연구에서 리바비린이 HIV에 대하여 효과적이지 않은 것으로 나타났다. T4 세포, T8 세포 또는 p24 항원에는 효과를 나타내지 않는다.

HCV 감염을 치료하기 위한 IFN 및 리바비린의 병용 요법이 IFN 비투여 환자의 치료에 효과적인 것으로 보고되었다(Battaglia, A. M. et al.,Ann. Pharmacother.34:487-494,2000). 이러한 병용 치료법은 간염이 발전하기 전 또는 조직학적 질병이 존재하는 경우 둘 다에 대해 가망성이 있는 것으로 나타났다 (Berenguer, M. et al.Antivir. Ther.3 (Suppl. 3): 125-136, 1998). 병용 요법의 부작용은 용혈, 인플루엔자성 증상(flulike symptom), 빈혈 및 피로를 포함한다(Gary L. Davis.Gastroenterology118: S104-S114, 2000).

마이코페놀산

마이코페놀산 (6-(4-하이드록시-6-메톡시-7-메틸-3-옥소-5-프탈라닐)-4-메틸-4-헥산산)은 이노신 모노포스페이트 데하이드로게나제("IMPDH")의 억제에 의해 구아노신 모노포스페이트의 데노보 합성의 속도를 감소시키는 것으로 알려져 있다. 이것은 또한 림프구 증식을 감소시킨다.

과학자들은 마이코페놀산이 시험관내에서 아바카비르(Ziagen)와 병행 사용시 상승 효과를 나타내는 것을 밝혀냈다. 마이코페놀산은 필수 DNA 빌딩 블록 (building block)중 하나인 구아노신을 고갈시킨다. 아바카비르는 구아노신 유사체이며, 그 자체로서 체내에서 자연적으로 구아노신을 생성하여 치료 효과를 가지도록 한다. 자연적으로 생성된 구아노신을 고갈시킴으로써, 마이코페놀산은 세포에 의한 아바카비르의 흡수율을 높인다. 과학자들은 마이코페놀산과 아바카비르를 함께 사용하게 되면 아바카비르-내성 바이러스에 대해 매우 활성적으로된다 라고 결정하였다. 그러나, 마이코페놀산과 지도부딘 또는 스타부딘을 병행 사용하는 것은, 아마도 마이코페놀산에 의한 티미딘 포스포릴화의 억제로 인해 길항적임이 자명하다(참조: 39^thInterscience Conference on Antimicrobial Agents and Chemotherapy, San Francisco, California, September 26-29, 1999. Heredia, A., Margolis, D. M., Oldach, D., Hazen, R., Redfield, R. R. (1999)Avacavir in combination with the IMPDH inhibitor mycophenolic acid, is active against multi-drug resistant HIV. J Acquir Immune Defic Syndr.; 22:406-7. Margolis, D. M., Heredia, A., Gaywee, J., Oldach, D., Drusano, G., Redfield, R. R.(1999)Avacavir and mycophenolic acid, an inhibitor of inosine monophosphate dehydrogenase, have profound and synergistic anti-HIV activity. J Acquir Immune Defic Syndr., 21:362-370).

미국 특허 제 4,686,234호는 마이코페놀산의 다양한 유도체, 그의 합성 및 자가면역질환, 건선 및 특히 류마티스성 관절염, 종양, 바이러스를 포함한 염증성 질환 및 동종이식 거부를 치료하기 위한 그의 용도를 개시하고 있다.

1995년 5월 5일자 미국 특허 제 5,665,728호는 항증식 유효량의 라파마이신을 단독으로 또는 마이코페놀산과 함께 투여하여 포유동물에서 고증식성 혈관 질환을 예방 또는 치료하는 방법에 대해 개시하고 있다.

유행성 HIV의 세계적인 치료에 발맞추어, 본 발명의 목적은 HIV를 치료하기 위한 신규 방법 및 조성물을 제공하는데 있다.

본 발명의 또 다른 목적은 HIV의 약물 내성 균주를 치료하기 위한 방법 및 조성물을 제공하는데 있다.

발명의 요약

예기치 않게, 본 발명에 따라 β-D-1,3-디옥솔라닐 뉴클레오사이드 및 IMPDH 억제제를 병행하여 사용하는 경우 HIV의 약물 내성 균주가 약물로 처리되지 않은(drug-naive) 바이러스의 행태를 나타냄이 밝혀졌다. 비제한적인 한 구체예로, HIV 균주는 β-D-1,3-디옥솔라닐 뉴클레오사이드에 대해 내성을 갖는다.

따라서, 본 발명은 임의로 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제중의 유효량의 하기 일반식 (I)의 β-D-디옥솔라닐 퓨린 1,3-디옥솔라닐 뉴클레오사이드("β-D-1,3-디옥솔라닐 뉴클레오사이드") 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭을 이노신 모노포스페이트 데하이드로게나제(IMPDH) 억제제와 함께, 또는 교대로 투여하는 것을 특징으로 하여, 감염 숙주, 특히 인간에서 HIV, 특히 HIV의 DAPD 및/또는 DXG 내성 균주가 예시되나 이들로만 한정되지 않는 것을 포함하는 HIV의 약물-내성 균주를 치료 또는 예방하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다:

상기 식에서,

R은 H, OH, Cl, NH₂또는 NR¹R²를 나타내고;

R¹및 R²는 독립적으로 수소, 알킬 또는 사이클로알킬을 나타내며;

R³는 H, 알킬, 아릴, 아실, 모노포스페이트, 디포스페이트 또는 트리포스페이트를 포함한 포스페이트, 또는 포스포리피드 또는 에테르-리피드를 포함한 안정화된 포스페이트 부분을 나타낸다.

한 구체예로, 에난티오머적으로 풍부한 β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린, 특히 DAPA가 HIV-1의 야생형 또는 돌연변이 균주에 대해 시험되었을 때 DXG에 대한 EC₅₀을 효과적으로 감소시키는 IMPDH 억제제, 예를 들어 리바비린, 마이코페놀산, 벤즈아미드 리보사이드, 티아조푸린, 셀레나조푸린, 5-에티닐-1-β-D-리보푸라노실이미다졸-4-카복사미드(EICAR), 또는 (S)-N-3-[3-(3-메톡시-4-옥사졸-5-일-페닐)-우레이도]-벤질-카밤산 테트라하이드로푸란-3-일-에스테르(VX-497)와 함께, 또는 교대로 투여된다.

한 구체예로, IMPDH 억제제는 마이코페놀산이다. 본 발명의 다른 바람직한 구체예로, IMPDH 억제제는 리바비린이다. 바람직한 구체예로, 뉴클레오사이드는 IMPDH 억제제와 함께 투여된다. 바람직한 구체예로, 뉴클레오사이드는 DAPD이다.

다른 구체예로, 에난티오머적으로 풍부한 β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린, 특히 DAPD는 구아노신 또는 데옥시구아노신 뉴클레오타이드의 데 노보(de novo) 합성 속도를 감소시키는 화합물과 함께, 또는 교대로 투여된다.

바람직한 구체예로, DAPD는 구아노신 뉴클레오타이드의 데 노보(de novo) 합성 속도를 감소시키는 리바비린 또는 마이코페놀산과 함께, 또는 교대로 투여된다.

또 다른 구체예로, 에난티오머적으로 풍부한 β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린, 특히 DAPD는 DXG-TP의 세포내 농도를 효과적으로 증가시키는 화합물과 함께, 또는 교대로 투여된다.

또 다른 바람직한 구체예로, DAPD는 DXG-TP의 세포내 농도를 효과적으로 증가시키는 리바비린 또는 마이코페놀산과 함께, 또는 교대로 투여된다.

예를 들어, 이러한 약물 복합체는 HIV의 DAPD-내성 및 DXG-내성 균주를 치료하기 위해 사용될 수 있음이 또한 밝혀졌다. HIV의 DAPD 및 DXG 내성 균주는 개시된 약물의 복합 치료후 약물에 노출되지 않은 바이러스의 특성을 나타내었다.

따라서, 본 발명의 또 다른 구체예로, 에난티오머적으로 풍부한 β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린, 특히 DAPD는 HIV-1 돌연변이 균주에서 확인된 약물 내성을 효과적으로 역전시키는 IMPDH 억제제와 함께, 또는 교대로 투여된다.

본 발명의 그 밖의 또 다른 구체예로, 에난티오머적으로 풍부한 β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린, 특히 DAPD는 HIV-1 돌연변이 균주에서 확인된 DAPD 또는 DXG 약물 내성을 효과적으로 역전시키는 IMPDH 억제제와 함께, 또는 교대로 투여된다.

일반적으로, 교대 치료동안, 각 약제의 효과적인 투여량은 연속해서 투여되는 반면, 병행 치료시에는 2 이상의 약제의 유효량이 함께 투여된다. 투여량은 각 약물의 흡수율, 생체분포, 대사 및 분비율 뿐만 아니라 당업자들에 알려진 다른 요인들에 따라 달라질 것이다. 투여량은 또한 경감시키고자 하는 증상의 중증도에 따라 변할 것이다. 특정 대상체, 특정 투여 요법 및 스케줄이 개개인의 요구 및 조성물을 투여하거나 투여를 지시하는 사람의 전문적인 판단에 따라 경시적으로 조정되어야 하는 것으로 이해되어야 한다. 적합한 투여량 범위의 예는 과학 문헌 및 의사의 데스크 문헌에서 확인할 수 있다. 본 원에 개시된 다른 화합물에 대한 적합한 투여량 범위에 대한 많은 예가 또한 공중 문헌에서 확인되거나, 공지된 방법을 이용하여 동정될 수 있다. 이들 투여량 범위는 목적하는 결과를 수행하기 위해 필요에 따라 변경될 수 있다.

개시된 병용 및 교대 요법은 HIV 감염 및 다른 관련 증상, 예컨대 AIDS-관련 컴플렉스(ARC), 지속성 전신 림프절병증(PGL), AIDS-관련 신경계장애 증상, 항-HIV 항체 양성 및 HIV-양성 증상, 카포시 육종(Kaposi's sarcoma), 저혈소판증 자반병및 기회감염을 예방 및 치료하는데 유용하다. 또한, 이들 화합물 또는 제제는 항-HIV 항체 또는 HIV-항원 양성이거나, HIV에 노출된 개체에서 임상적 증상의 진행을 예방하거나 저지하기 위해 예방적으로 사용될 수 있다.

본 발명은 숙주의 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염을 치료 또는 예방하기 위한 약제학적 조성물 및 상기 조성물을 투여하는 것을 포함하여 숙주에서 인간 면역결핍 바이러스(HIV) 감염을 치료 또는 예방하는 방법에 관한 것이다. 본 출원은 2000년 12월 15일 출원된 미국 가출원 제 60/256,068호 및 2001년 3월 1일 출원된 미국 가출원 제 60/272,605호를 우선권으로 주장한다.

예기치 않게, 본 발명에 따라 β-D-1,3-디옥솔라닐 뉴클레오사이드 및 IMPDH 억제제를 병행하여 사용하는 경우 HIV의 약물 내성 균주가 약물 처리되지 않은 바이러스의 행태를 나타냄이 밝혀졌다. 비제한적인 한 구체예로, HIV 균주는 β-D-1,3-디옥솔라닐 뉴클레오사이드에 대해 내성을 갖는다.

IMPDH는 구아노신 뉴클레오타이드 합성에서 필수적인 단계로, 이노신-5'-모노포스페이트(IMP)가 크산토신-5'-모노포스페이트(XMP)로 NAD-의존적으로 산화되는 것을 촉진한다. 이노신 모노포스페이트 데하이드로게나제(IMPDH) 억제를 통한 세포내 데옥시 구아노신 5'-트리포스페이트(dGTP) 수준의 감소는 DXG-TP의 세포내 농도를 효과적으로 증가시켜 HIV 복제가 억제되는 것을 증대시킨다. 그러나, 이 것만으로는 IMPDH 억제제의 존재하에 투여된 β-D-1,3-디옥솔라닐 뉴클레오사이드에 대한 HIV의 약물 내성 형태의 예기치 않은 감수성을 설명할 수 없다.

따라서, 본 발명은 임의로 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제중의 유효량의 하기 일반식 (I)의 에난티오머적으로 풍부한 β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭을 이노신 모노포스페이트 데하이드로게나제 (IMPDH) 억제제와 함께, 또는 교대로 투여하는 것을 특징으로 하여, 숙주, 예를 들어 포유동물 및 특히 인간에서 HIV, 특히 HIV의 약물 내성 균주, 예를 들어 HIV의 DAPD 및/또는 DXG 내성 균주를 치료 또는 예방하기 위한 방법 및 조성물에 관한 것이다:

상기 식에서,

R은 H, OH, Cl, NH₂또는 NR¹R²를 나타내고;

바람직한 구체예로, IMPDH 억제제는 마이코페놀산이다. 본 발명의 다른 바람직한 구체예로, IMPDH 억제제는 리바비린이다. 바람직한 구체예로, 뉴클레오사이드는 IMPDH 억제제와 함께 투여된다. 다른 바람직한 구체예로, 뉴클레오사이드는 DAPD이다.

다른 구체예로, 에난티오머적으로 풍부한 β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린, 특히 DAPD는 구아노신 및 데옥시구아노신 뉴클레오타이드의 데 노보(de novo) 합성 속도를 감소시키는 화합물과 함께, 또는 교대로 투여된다.

I. 정의

본 원에서 사용되는, 용어 "보호된"은, 다르게 특정되지 않는 한, 추가의 반응을 저지하거나 또 다른 목적을 위해 산소, 질소 또는 인 원자에 첨가되는 그룹을 의미한다. 각종 산소 및 질소 보호 그룹이 유기 합성 업자들에게 알려져 있다.

본 원에서 사용되는, 용어 할로는 클로로, 브로모, 요오도 및 플루오로를 포함한다.

본 원에서 사용되는, 용어 알킬은, 다르게 특정되지 않는 한, 포화된 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭인 일차, 이차 또는 삼차의 전형적으로 C₁내지 C₁₀탄화수소를 의미하고, 구체적으로 메틸, 트리플루오로메틸, 에틸, 프로필, 이소프로필, 사이클로프로필, 부틸, 이소부틸, t-부틸, 펜틸, 사이클로펜틸, 이소펜틸, 네오펜틸, 헥실, 이소헥실, 사이클로헥실, 사이클로헥실메틸, 3-메틸펜틸, 2,2-디메틸부틸 및 2,3-디메틸부틸을 포함한다. 상기 용어는 치환되거나 비치환된 알킬 그룹 둘 다를 포함한다. 알킬 그룹이 치환될 수 있는 부분은, 예를 들어 본 명세서에서 참고 문헌으로 인용되는 [Greene, et al.,Protective groups in Organic Synthesis,John Wiley and Sjons, Second Edition, 1991]에 교시된 바대로, 당업자들에게 공지된 바와 같이, 보호되지 않거나, 또는 필요한 경우 보호되는 하이드록실, 아미노, 알킬아미노, 아릴아미노, 알콕시, 아릴옥시, 니트로, 시아노, 설폰산, 설페이트, 포스폰산, 포스페이트 및 포스포네이트로 구성된 그룹중에서 선택된다.

본 원에서 사용되는, 용어 저급 알킬은, 다르게 특정되지 않는 한, 치환 및 비치환된 형태 둘 다를 포함하는, C₁내지 C₄의 포화된 직쇄, 측쇄, 또는 적절한 경우, 사이클릭(예를 들면, 사이클로프로필) 알킬 그룹을 의미한다. 본 출원에서 다르게 특정되지 않는 한, 알킬이 적합한 부분인 경우, 저급 알킬이 바람직하다. 유사하게, 알킬 또는 저급 알킬이 적합한 부분인 경우, 비치환된 알킬 또는 저급 알킬이 바람직하다.

본 원에서 사용되는, 용어 아릴은, 다르게 특정되지 않는 한, 페닐, 비페닐 또는 나프틸, 바람직하게는 페닐을 의미한다. 이 용어는 치환되거나 비치환된 부분 둘 다를 포함한다. 아릴 그룹은, 예를 들어 [Greene, et al.,Protective groups in Organic Synthesis, John Wiley and Sjons, Second Edition, 1991]에 교시된 바대로, 당업자들에게 공지된 바와 같이, 보호되지 않거나, 또는 필요한 경우 보호되는 하이드록실, 아미노, 알킬아미노, 아릴아미노, 알콕시, 아릴옥시, 니트로, 시아노, 설폰산, 설페이트, 포스폰산, 포스페이트 및 포스포네이트로 구성된 그룹중에서 선택된 하나 이상의 부분에 의해 치환될 수 있다.

용어 아실은 에스테르 그룹의 비카보닐 부분이 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭 알킬 또는 저급 알킬, 메톡시메틸을 포함하는 알콕시알킬, 벤질을 포함하는 아르알킬, 페녹시메틸과 같은 아릴옥시알킬, 할로겐(예: F, Cl, Br 또는 I), C₁내지 C₄알킬 또는 C₁내지 C₄알콕시에 의해 임의로 치환된 페닐을 포함한 아릴, 메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아르알킬 설포닐과 같은 셀포네이트 에스테르, 모노, 디 또는 트리포스페이트 에스테르, 트리틸 또는 모노메톡시트리틸, 치환된 벤질, 트리알킬실릴(예: 디메틸-t-부틸실릴) 및 디페닐메틸실릴중에서 선택되는 카복실산 에스테르를 의미한다. 에스테르중의 아릴 그룹이 페닐 그룹을 포함하는 것이 가장 좋다. 용어 "저급 아실"은 비카보닐 부분이 저급 알킬인 아실 그룹을 의미한다.

용어 "에난티오머적으로 풍부한" 이란 본 명세서를 통해 화합물의 단일 에난티오머를 약 95% 이상, 바람직하게는 적어도 96%, 보다 바람직하게는 적어도 97%, 보다 더 바람직하게는 적어도 98%, 및 보다 더 더욱 바람직하게는 적어도 약 99% 또는 그 이상으로 포함하는 화합물을 기술하기 위하여 사용된다. 특정 배위(L 또는 D)의 뉴클레오사이드가 본 명세서에서 언급될 때, 뉴클레오사이드는 달리 언급되지 않는 한 에난티오머적으로 풍부한 뉴클레오사이드로 가정된다.

본 원에서 사용되는 용어 "숙주"는 세포주 및 동물, 및 바람직하게 인간을 포함하여 바이러스가 복제할 수 있는 단세포 또는 다세포 유기체를 의미한다. 또한, 숙주는 바이러스 게놈의 일부를 운반할 수 있고, 그의 복제 또는 작용은 본 발명의 화합물에 의해 변화될 수 있다. 용어 숙주는 특히 감염된 세포, 바이러스 게놈 전체 또는 일부에 의해 형질감염된 세포 및 동물, 특히, 영장류(침팬지 포함)및 인간을 의미한다. 본 발명의 대부분의 동물 적용예에 있어, 숙주는 인간 환자이다. 그러나, 특별한 지시가 있는 경우 본 발명에 의해 수의학적 적용(예: 침팬지에서 원숭이 면역결핍 바이러스)도 명확하게 기대된다.

약제학적으로 허용되는 프로드럭은, 예를 들어 숙주에서 대사되어 예컨대 가수분해 또는 산화되어 본 발명의 화합물을 형성하는 화합물을 의미한다. 프로드럭의 전형적인 예는 활성 화합물의 작용 부위상에 생물학적으로 불안정한 보호 그룹을 갖는 화합물을 포함한다. 프로드럭은 산화, 환원, 아민화, 탈아민화, 하이드록실화, 탈하이드록실화, 가수분해, 탈가수분해, 알킬화, 탈알킬화, 아실화, 탈아실화, 포스포릴화, 탈포스포릴화하여 활성 화합물을 생성할 수 있는 화합물을 포함한다. 약제학적으로 허용되는 염은 약제학적으로 허용되는 무기 또는 유기 염기 및 산으로부터 유도된 것을 포함한다. 적합한 염은 약학 분야에 공지된 다수의 다른 산중에서 알칼리 금속, 예를 들어 포타슘 및 소듐, 알칼리 토금속, 예를 들어 칼슘 및 마그네슘으로부터 유도된 것을 포함한다. 본 발명의 화합물은 항바이러스 활성을 보유하거나, 이러한 활성을 나타내는 화합물로 대사된다.

II. 약제학적으로 허용되는 염 및 프로드럭

화합물이 안정한 비독성 산 또는 염기 염을 형성하기에 충분히 염기성 또는 산성인 경우 화합물을 약제학적으로 허용되는 염으로 투여하는 것이 적절할 수 있다. 약제학적으로 허용되는 염의 예는 산과 함께 형성된 유기산 부가염이며, 이는 생리학적으로 허용되는 음이온을 형성하고, 예로서 토실레이트, 메탄설포네이트, 아세테이트, 시트레이트, 말로네이트, 타르타레이트, 숙시네이트, 벤조에이트, 아스코르베이트, α-케토글루타레이트, 및 α-글리세로포스페이트가 있다. 설페이트, 나이트레이트, 바이카보네이트, 및 카보네이트 염을 포함한 적합한 무기 염이 또한 형성될 수 있다.

약제학적으로 허용되는 염은 당 업계에 널리 공지된 표준 방법을 사용하여, 예를 들면, 아민과 같은 충분한 염기성 화합물을 적합한 산과 반응시켜 생리학적으로 허용되는 음이온을 형성함으로써 수득할 수 있다. 카복실산의 알칼리 금속(예: 소듐, 포타슘 또는 리튬) 또는 알칼리 토금속(예: 칼슘) 염이 또한 제조될 수 있다.

본 원에 기술된 모든 뉴클레오사이드는 뉴클레오사이드의 활성, 생체이용율, 안정성을 증가시키거나 다르게는 성질을 변화시키기 위하여 프로드럭으로서 투여될 수 있다. 다수의 뉴클레오타이드 프로드럭 리간드가 공지되어 있다. 일반적으로, 화합물의 하이드록실 그룹, 또는 뉴클레오사이드의 모노, 디 또는 트리포스페이트의 알킬화, 아실화 또는 다른 친유성 변형이 뉴클레오타이드의 안정성을 증가시킬 것이다. 포스페이트 부위상의 하나 이상의 수소를 대체할 수 있는 치환체 그룹의 예로 알킬, 아릴, 스테로이드, 당을 포함하는 카보하이드레이트, 1,2-디아실글리세롤 및 알콜이 있다. 다수가 [R. Jones and N. Bischofberger,Antiviral Research, 27(1995) 1-17]에 기재되어 있다. 목적하는 효과를 얻기 위하여 이들중 어느 것을 개시된 뉴클레오사이드와 배합하여 사용할 수 있다.

병용 또는 교대 치료에 사용하기 위해 본 원에 개시된 화합물은 아실화된 프로프럭으로서 투여될 수 있으며, 여기에서, 용어 아실은 에스테르 그룹의 비카보닐 부분이 직쇄, 측쇄 또는 사이클릭 알킬 또는 저급 알킬, 메톡시메틸을 포함하는 알콕시알킬, 벤질을 포함하는 아르알킬, 페녹시메틸과 같은 아릴옥시알킬, 할로겐, C₁내지 C₄알킬 또는 C₁내지 C₄알콕시에 의해 임의로 치환된 페닐을 포함한 아릴, 메탄설포닐을 포함하는 알킬 또는 아르알킬 설포닐과 같은 셀포네이트 에스테르, 모노, 디 또는 트리포스페이트 에스테르, 트리틸 또는 모노메톡시트리틸, 치환된 벤질 및 트리알킬실릴(예: 디메틸-t-부틸실릴) 중에서 선택되는 카복실산 에스테르를 의미한다.

활성 뉴클레오사이드 또는 다른 하이드록실 함유 화합물은 또한 본 원에 참고로 인용되는 하기 문헌에 기술된 바와 같이 에테르 리피드(및 특히 뉴클레오사이드에 대한 5'-에테르 리피드 또는 5'-포스포에테르 리피드)로서 제공될 수 있다: Kucera, L.S., N. Iyer, E. Leake, A. Raben, Modest E.K., D.L.W., and C. Piantadosi. 1990. "Novel membrane-interactive ether lipid analogs that inhibit infectious HIV-1 production and induce defective virus formation."AIDS Res. Hum. Retro Viruses. 6:491-501; Piantadosi, C., J. Marasco C.J., S. L. Morris-Natschke, K.L. Meyer, F. Gumus, J.R. Surles, K.S. Ishaq, L.S. Kucera, N. Iyer, C.A. Wallen, S. Piantadosi, and 15. J. Modest. 1991. "Synthesis and evaluation of novel ether lipid nucleoside conjugates for anti-HIV activity."J. Med. Chem. 34:1408.1414; Hosteller, K.Y., D.D.Richrnan, D.A. Carson, L.M. Stuhmiller, G.M.T. van Wijk, and H. van den Bosch. 1992. "Greatly enhanced inhibition of human immunodeficiency virus type 1 replication in CEM and HT4-6C cells by 3'-deoxythymidine diphosphate dimyristoylglycerol, a lipid prodrug of 3-deoxythymidine."Antimicrob. Agents Chemother. 36:2025.2029; Hostetler, K.Y., L.M. Stuhmiller, H.B. Lenting, H. van den Bosch, and D.D. Richman, 1990. "Synthesis and antiretroviral activity of phospholipid analogs of azidothymidine and other antiviral nucleosides."J. Biol. Chem. 265:61127.

바람직하게는 뉴클레오사이드 또는 친유성 제제의 5'-OH 위치에서 뉴클레오사이드, 또는 다른 하이드록실 또는 아민 함유 화합물에 공유적으로 도입될 수 있는 적합한 친유성 치환체를 개시하고 있는 미국 특허의 비한정적인 예로는 모두 다 본 원에 참고로 인용되는 미국 특허 제 5,149,794호(Sep. 22, 1992, Yatvin et al.); 5,194,654호(Mar. 16, 1993, Hostetler et al., 5,223,263호(June 29, 1993, Hostetler et al.); 5,256,641호(Oct. 26, 1993, Yatvin et al.); 5,411,947호(May 2, 1995, Hostetler et al.); 5,463,092호(Oct. 31, 1995, Hostetler et al.); 5,543,389호(Aug. 6, 1996, Yatvin et al.); 5,543,390호(Aug. 6, 1996, Yatvin et al.); 5,543,391호(Aug. 6, 1996, Yatvin et al.); 및 5,554,728호(Sep. 10, 1996; Basava et al.)가 포함된다. 본 발명의 뉴클레오사이드 또는 친유성 제제에 부착될 수 있는 친유성 치환체를 기술하고 있는 외국 특허 출원에는 WO 89/02733, WO 90/00555, WO 91/16920, WO 91/18914, WO 93/00910, WO 94/26273, WO 96/15132, EP0 350 287, EP 93917054.4 및 WO 91/19721이 포함된다.

뉴클레오타이드 프로드럭의 비한정적인 예가 하기 문헌에 기재되어 있다: Ho, D.H.W. (1973) "Distribution of Kinase and deaminase of lβ-D-arabinofuranosylcytosine in tissues of man and muse."Cancer Res. 33, 2816-2820; Holy, A. (1993) Isopolar phosphorous-modified nucleotide analogues," In: De Clercq (Ed.),Advances in Antiviral Drug Design, Vol. I, JAI Press, pp. 179-231; Hong, C.I., Nechaev, A., and West, C.R. (1979a) "Synthesis and antitumor activity of 1-β-D-arabino-furanosylcytosine conjugates of cortisol and cortisone."Bicohem. Biophys. Rs. Commun. 88, 1223-1229; Hong, C.I., Nechaev, A., Kirisits, A.J. Buchheit, D.J. and West, C.R. (1980) "Nucleoside conjugates as potential antitumor agents. 3. Synthesis and antitumor activity of l-(β-D-arabinofuranosyl) cytosine conjugates of corticosteriods and selected lipophilic alcohols."J. Med. Chem. 28, 171-177 ; Hosteller, K.Y., Stuhmiller, L.M., Lenting, H.B.M. van den Bosch, H. and RichmanJ. Biol. Chem. 265, 6112-6117; Hosteller, K.Y., Carson, D.A. and Richman, D.D. 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III. 약제학적 조성물

환자에게 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제중의 정의된 유효량의 β-D-1,3-디옥솔라닐 뉴클레오사이드, 특히 DAPD 또는 DXG, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 에스테르를 리바비린 또는 마이코페놀산을 포함하는 IMPDH 억제제와 함께, 또는 교대로 투여함으로써 본 원에 기술된 질병에 의해 야기된 영향, 특히 HIV의 약물 내성 균주에 의해 야기된 감염으로 고통받는 인간이 치료될 수 있다. 활성 물질은 액체 또는 고체 형태로 하여 적절한 경로, 예를 들어 경구, 비경구, 장내, 정맥내, 피내, 경피, 국소, 비강내, 직장내로 투여될 수 있다.

활성 화합물은 치료 환자에서 심각한 독성 효과를 야기함이 없이 생체내에서 바이러스 복제, 특히 HIV 복제를 억제하기에 치료적으로 효과적인 양의 화합물을 환자에게 전달하기에 충분한 양으로 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제중에 포함된다. "억제량" 이란, 예를 들어 본 원에 개시된 바와 같은 분석에 의해 측정된 바, 억제 효과를 나타내기에 충분한 활성 성분의 양을 의미한다.

상기 언급된 모든 증상에 바람직한 화합물의 투여량은 1일 수여자 체중 1 ㎏당 약 1 내지 50 ㎎, 바람직하게는 1 내지 20 ㎎, 보다 일반적으로는 0.1 내지 약 100 ㎎일 것이다. 약제학적으로 허용되는 유도체의 유효한 투여량 범위는 전달되는 모 뉴클레오사이드의 중량에 기준해 산출될 수 있다. 유도체가 그 자체로 활성을 나타낸다면, 유효량은 유도체의 중량을 사용하여 상기와 같이 평가될 수 있거나, 당업자들에 알려진 다른 수단으로 평가될 수 있다.

화합물은 편리하게는 단위 복용형당 활성 성분을 7 내지 3,000 ㎎, 바람직하게는 70 내지 1,400 ㎎ 함유하나 이로만 한정되지 않는 적합한 복용형으로 단위 투여될 수 있다. 50 내지 1,000 ㎎의 경구 복용량이 일반적으로 편리하다.

이상적으로, 활성 성분의 배합물이 바람직하긴 하지만, 적어도 하나의 활성 성분은 약 0.2 내지 70 mM, 바람직하게는 약 0.1 내지 10 mM의 활성 화합물의 피크 혈장 농도를 이루도록 투여되어야 한다. 이것은 예를 들어 임의로 염수중의 활성 성분의 0.1 내지 10% 용액을 정맥내 주사하거나. 활성 성분의 거환제를 투여함으로써 달성할 수 있다.

약물 조성물중 활성 화합물의 농도는 약물의 흡수율, 분포, 대사 및 분비율 뿐만 아니라 당업자들에 알려진 다른 요인들에 따라 달라질 것이다. 투여량은 또한 경감시키고자 하는 증상의 중증도에 따라 변할 것이다. 특정 대상체, 특정 투여 요법이 개개인의 요구 및 조성물을 투여하거나 투여를 지시하는 사람의 전문적인 판단에 따라 경시적으로 조정되어야 하며, 본 원에 예시된 농도 범위는 단지 예시적인 목적으로 기술되었으며 청구된 조성물의 실시 또는 영역을 제한할 의도는아닌 것으로 이해되어야 한다. 활성 성분은 한번에 투여될 수 있거나, 다수의 보다 적은 양으로 나누어 다양한 시간 간격으로 투여될 수 있다.

활성 화합물의 바람직한 투여 경로는 경구에 의한 것이다. 경구용 조성물은 일반적으로 불활성 희석제 또는 식용 담체를 포함할 것이다. 이들은 젤라틴 캅셀에 포함되거나, 정제로 타정될 수 있다. 경구적 치료 투여의 목적을 위해, 활성 화합물은 부형제내에 함침되어 정제, 구내정(troches) 또는 캅셀제로 사용될 수 있다. 약제학적으로 상용적인 결합제 및/또는 보조 물질이 조성물의 일부로 포함될 수 있다.

정제, 환제, 캅셀제, 구내정 등이 하기 성분 또는 유사한 성질의 화합물을 함유할 수 있다: 결합제, 예를 들어 미정질 셀룰로즈, 트라가칸트검 또는 젤라틴; 부형제, 예를 들어 전분 또는 락토스, 붕해제, 예를 들어 알긴산, 프리모겔 (Primogel) 또는 옥수수 전분; 윤활제, 예를 들어 마그네슘 스테아레이트 또는 스테로테스(Sterotes); 활제, 예를 들어 콜로이드성 이산화규소; 감미료, 예를 들어 수크로스 또는 사카린; 또는 향미제, 예를 들어 페퍼민트, 메틸 살리실레이트 또는 오렌지 향. 복용 단위형이 캅셀제인 경우, 이는 상기 타입의 물질 이외에, 지방 오일과 같은 액체 담체를 함유할 수 있다. 또한, 복용 단위형은 복용형의 물리적 형태를 변경시키는 다양한 다른 물질, 예를 들자면 당 코팅, 셸락(shellac) 또는 다른 장용제를 함유할 수 있다.

화합물은 엘릭시스, 현탁액, 시럽, 웨이퍼, 츄잉검 등의 성분으로 투여될 수 있다. 시럽은 활성 화합물 이외에도 감미료로서 수크로스, 특정 방부제, 염료,착색제 및 향미제를 함유할 수 있다.

화합물 또는 그의 약제학적으로 허용되는 유도체 또는 염은 또한 목적하는 작용을 손상시키지 않는 다른 활성 물질 또는 목적하는 작용을 보충하는 물질, 예를 들어 항생제, 항진균제, 항염증제, 프로테아제 저해제 또는 상기에 상세히 설명된 다른 뉴클레오사이드 또는 비뉴클레오사이드 항바이러스제와 혼합될 수 있다. 비경구, 피내, 경피 또는 국소 적용용으로 사용되는 용액 또는 현탁액은 하기 성분들을 함유할 수 있다: 멸균 희석액, 예를 들어 주사용수, 식염액, 고정 오일, 폴리에틸렌 글리콜, 글리세린, 프로필렌 글리콜 또는 다른 합성 용매; 항균제, 예를 들어 벤질 알콜 또는 메틸 파라벤; 항산화제, 예를 들어 아스코르브산 또는 소듐 바이설파이트; 킬레이트제, 예를 들어 에틸렌디아민테트라아세트산; 완충액, 예를 들어 아세테이트, 시트레이트 또는 포스페이트 및 장성을 조정하기 위한 제제, 예를 들어 염화나트륨 또는 덱스트로즈. 비경구 제제는 앰풀, 일회용 시린지 또는 유리나 플라스틱으로 만들어진 다중복용 바이얼내에 도입될 수 있다.

정맥내로 투여되는 경우, 바람직한 담체는 생리염수 또는 포스페이트 완충염수(PBS)이다.

비강내 에어졸 또는 흡입에 의해 투여되는 경우, 이들 조성물은 제약 업계에 잘 알려진 기술에 따라 제조되며, 벤질 알콜 또는 다른 적합한 방부제, 생체이용률을 높이기 위한 흡수 촉진제, 플루오로카본 및/또는 업계에 알려진 다른 가용 또는 분산제를 사용하여 염용액으로 제조될 수 있다.

좌제의 형태로 직장내 투여되는 경우, 조성물은 약제를 적합한 비개시 부형제, 예를 들어 상온에서 고체이나 직장강에서 액화 및/또는 용해되어 약물을 방출하는 코코아 버터, 폴리에틸렌 글리콜의 합성 글리세라이드 에스테르와 혼합하여 제조될 수 있다.

바람직한 구체예로, 활성 화합물은 서방성 제제와 같이 화합물이 체내로부터 신속히 제거되는 것을 보호할 담체(임플란트 및 마이크로캅셀화 전달 시스템을 포함)와 함께 제조된다. 생분해가능한 생체상용성 폴리머, 예를 들어 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리언하이드라이드, 폴리글리콜산, 콜라겐, 폴리오르토에스테르 및 폴리락트산이 사용될 수 있다. 이러한 제제를 제조하는 방법은 당업자들에게 자명할 것이다. 이들 물질은 또한 Alza Corporation으로부터 상업적으로 입수할 수 있다.

리포좀 현탁액(바이러스성 항원에 대한 모노클로날 항체로 감염된 세포의 표적 리포좀 포함)이 또한 약제학적으로 허용되는 담체로서 바람직하다. 이들은, 예를 들어 본 원에 참고로 인용되는 미국 특허 제 4,522,811호에 기술된 바와 같이 당업자들에 알려진 방법에 따라 제조될 수 있다. 예를 들어, 리포좀 제제는 적절한 리피드(들)(예: 스테아로일 포스파티딜 에탄올아민, 스테아로일 포스파티딜 콜린, 아라카도일 포스파티딜 콜린 및 콜레스테롤)를 유기 용매에 용해시킨 후, 이를 증발시켜 용기의 표면상에 건조된 리피드의 박막을 제공함으로써 제조될 수 있다. 그후, 활성 화합물 또는 그의 모노포스페이트, 디포스페이트 및/또는 트리포스페이트의 수용액을 용기내에 도입한다. 이어서, 용기를 손으로 흔들어 용기면으로부터 리피드 물질을 유리시키고 리피드 응집물을 분산시켜 리포좀 현탁액을 형성한다.

IV. HCV 감염 치료를 위한 병용 및 교대 요법

일반적으로, 교대 요법동안, 각 약제의 유효 투여량은 연속해서 투여되는 반면, 병행 치료시에는 2 이상의 약제의 유효량이 함께 투여된다. 투여량은 각 약물의 흡수율, 생체분포, 대사 및 분비율 뿐만 아니라 당업자들에 알려진 다른 요인들에 따라 달라질 것이다. 투여량은 또한 경감시키고자 하는 증상의 중증도에 따라 변할 것이다. 특정 대상체, 특정 투여 요법 및 스케줄이 개개인의 요구 및 조성물을 투여하거나 투여를 지시하는 사람의 전문적인 판단에 따라 경시적으로 조정되어야 하는 것으로 이해되어야 한다. 적합한 투여량 범위의 예는 과학 문헌 및 의사의 데스크 문헌에서 확인할 수 있다. 본 원에 개시된 다른 화합물에 대한 적합한 투여량 범위에 대한 많은 예가 또한 공중 문헌에서 확인되거나, 공지된 방법을 이용하여 동정될 수 있다. 이들 투여량 범위는 목적하는 결과를 수행하기 위해 필요에 따라 변경될 수 있다.

개시된 병용 및 교대 요법은 HIV 감염 및 다른 관련 증상, 예컨대 AIDS-관련 컴플렉스(ARC), 지속성 전신 림프절병증(PGL), AIDS-관련 신경계장애 증상, 항-HIV 항체 양성 및 HIV-양성 증상, 카포시 육종, 저혈소판증 자반병 및 기회감염을 예방 및 치료하는데 유용하다. 또한, 이들 화합물 또는 제제는 항-HIV 항체 또는 HIV-항원 양성이거나, HIV에 노출된 개체에서 임상적 증상의 진행을 예방하거나 저지하기 위해 예방적으로 사용될 수 있다.

예를 들어, 이러한 약물 복합체는 HIV의 DAPD-내성 및 DXG-내성 균주를 치료하기 위해 사용될 수 있음이 또한 밝혀졌다. HIV의 DAPD 및 DXG 내성 균주는 개시된 약물 복합 치료후 약물에 노출되지 않은 바이러스의 특성을 나타내었다.

또한, 본 발명에 따른 화합물은 본 발명의 다른 화합물을 포함하여, 하나 이상의 항바이러스제, 항-HBV제, 항-HCV제, 항헤르페스제 또는 인터페론, 항암제, 항증식제 또는 항박테리아제와 함께, 또는 교대로 투여될 수 있다. 본 발명에 따른 특정 화합물은 다른 화합물의 대사, 이화작용 또는 불활성화를 감소시켜 본 발명에 따른 특정 약제의 생물학적 활성을 증진시키는데 효과적일 수 있으며, 그 자체로서 이러한 의도하는 목적을 위해 공투여될 수 있다.

본 발명을 설명하기 위해 하기 실시예가 제한의 의도없이 제공된다. 이들 실시예는 본 발명의 영역을 제한하고자 하지 않는다.

V. 리바비린과 DAPD의 병용

리바비린(RBV)을 시험관내에서 HIV-1에 대한 활성 및 시험관내에서 두 dGTP 유사체, DAPD 및 DXG의 항 HIV 활성에 대한 효과에 대하여 분석하였다. RBV을 또한 실험실에서 개조된 세포주 MT2 및 말초혈관단핵세포(PBMC)에 대한 세포독성에 대해 평가하였다. RBV은 효소 IMP 탈수소효소의 억제제이다. 이 효소는 GTP의 데 노보(de novo) 합성을 위한 세포에 의해 이용되는 경로의 부분이다.

세포독성 어세이:

RBV을 XTT에 기초한 어세이를 사용하여 실험실에서 개조된 T-세포주 MT2 및 PBMCs에 대한 세포독성에 대해 실험하였다. XTT (2,3-비스(2-메톡시-4-니트로-5설폭시페닐)-5-[(페닐아미노)카보닐]-2H-테트라졸륨 하이드록사이드) 어세이는 시험관내에서 비색계의 세포-단백질 어세이이다. 미토콘드리아 탈수소효소에 의한 XTT의 환원은 XTT의 테트라졸륨 환을 분열시키고, 수용액에 용해될 수 있는 오렌지색의 포르마잔 측정을 생산한다. 결과물인 오렌지색 용액을 스펙트로포토메타의 450nM 파장에서 판독하였다. RBV을 100% DMSO내에서 100mM의 최종농도로 제조하였다. 세포독성 어세이를 위하여, RBV의 2mM 용액을 세포 배양 배지(어린 송아지 혈청 10%, L-글루타민 lmg/ml 및 20ug/ml 젠타마이신으로 보충한 RPMI)에서 제조하고 96 웰 플레이트 상에서 2배 연속 희석시켰다. 세포들을 3×10⁵웰(MTX) 및 2xlO⁵/웰(PBMC)에서 플레이트에 부가하고, 플레이트를 5% C0₂배양기(세포들을 l mM의 최종 고 농도로 화합물을 희석시킨 플레이트에 부가함)에서 37 ℃에서 5일 동안 배양하였다. 5일동안의 배양이 끝나고, XTT를 각 웰에 부가하고 37℃에서 3 시간 동안 배양하고 이어서 산화된 이소프로판올을 부가하였다. 96 웰 플레이트 판독기의 450nm에서 플레이트를 판독하였다. 투여량 반응 곡선은 100% 보호된 화합물의 존재하에 세포성장의 흡수값을 사용하여 작성하였다.

RBV은 이러한 어세이에서 l mM의 농도까지 독성을 나타내지 않았다 (표 1).

표 1

민감도 어세이

XXT 어세이

실험실에서 적용된 세포주 MT2에서 HIV-1의 xxLAI 균주에 대한 활성에 대해 RBV을 시험하였다. RBV의 희석화는 96 웰 플레이트내에서 세포 배양 배지에서 진행되었다; 시험 최고 농도는 100 μM이다. 화합물의 3중 샘플이 시험되었다. MT2 세포를 5% C0₂내에서 0.03의 다중감염도(MOI)로 37 ℃에서 3 시간 동안 xxLAI로 감염시켰다. 감염된 세포는 3.0 x 104/웰에서 희석제를 포함하는 96 웰 플레이트로 평판배양시키고 C0₂내에서 5일동안 37 ℃에서 배양시켰다. RBV의 항 바이러스 활성을 상기에 기술한 XTT 어세이를 사용하여 측정하였다. 이 방법은 감수성 어세이에 변경되어 다양한 시험관내 항바이러스 시험에 사용되어 왔고 세포 용해 바이러스를 가지고 있는 어떠한 시스템에도 쉽게 적응될 수 있다(Weislow, O. S., et. al. 1989). 세포 대조군을 100% 보호 및 무약제로서, 바이러스 감염된 세포들을 0% 보호로서의 흡수값을 사용하여, Y축상에 % 보호 및 X 축상에 약제 농도를플롯팅하여 투여량 반응 곡선을 생성한다. 이 곡선으로부터 EC₅₀값을 측정하였다.

RBV은 이 어세이에서 시험된 어떤 농도에서도 HIV-1에 대한 활성이 없었다.

P24 어세이

RBV을 또한 p24에 기초한 Elisa 어세이를 사용하여 PBMCs내에서 HIV-1의 xxLAI 균주에 대한 활성에 대해 시험하였다. 이 어세이에서, 세포 상등액을 HIV-1 p24 코어 항원에 대한 항체로 코팅된 마이크로엘리사 웰에서 배양하였다. 그 후에, 호스래디시(horseradish) 퍼옥시다제로 표지한 항 HIV-1 접합체를 부가하였다. 표지된 항체는 이전에 형성된 고상 항체/항원 복합체에 결합하였다. 테트라메틸벤지딘 기질의 부가로 푸른색의 군계를 얻는다. 반응이 정지될 때에 색상은 노란색으로 변하였다. 490 nm에서 세팅된 플레이트 리더에서 플레이트를 분석하였다. 흡수도는 각 웰에서 생산된 HIV-1의 양의 직접 측정치이고 색상의 감소는 바이러스 생산량의 감소를 의미한다. 96 웰 플레이트내의 세포 배양 배지에서 RBV의 희석액을 만들고, RBV의 시험 최고 농도는 100 μM에서 시험되었다. 피콜 그레디언트(Ficoll gradients)상에서 벤딩함으로써 HIV-1 음성 도너로 부터 PBMC를 얻었고, HIV-1로 감염시키기 전에 피토헤마글루티닌(PHAP)에 의해 48 시간동안 자극하였고, 0.01의 MOI에서 37℃에서 4시간 동안 바이러스로 감염시켰다. 감염된 세포를 RBV의 5배 연속 희석액을 포함하는 96 웰 플레이트에 파종하였다. 플레이트를 37 ℃에서 3일동안 배양하였다. 각 웰의 바이러스 농도를 NEN p24 어세이를 사용하여 측정하였다. 세포 대조군을 100% 보호 및 무약제로서 바이러스 감염된 세포를 0% 보호로서의 흡수값을 이용하여, Y축상에 퍼센트 보호 및 X축상에 약제 농도를 플롯팅하여 투여량 반응 곡선을 작성한다. 이 곡선으로 부터, EC₅₀값을 측정하였다.

RBV은 PBMCs에서 HIV-1의 복제를 20.5 μM ±11.8의 중간 EC₅₀로 억제하였다.

병용 어세이

DAPD 및 DXG의 시험관내 항 HIV-1 활성에 대한 RBV의 효과를 상기에 기술된 MT2/XTT 및 PBMC/p24 어세이를 사용하여 평가하였다. 아바카비르(Abacavir) 및 AZT의 활성에 대한 RBV의 효과를 또한 분석하였다.

MT2/XTT 어세이

다양한 농도의 DAPD, DXG, 아바카비르 및 AZT를 단독으로 또는 고정된 농도의 RBV와 함께 이용하여 병용 어세이를 수행하였다. 시험 화합물의 5배 연속 희석액을 다음의 약제농도에서 96 웰 플레이트에서 수행하였다: DAPD 100 μM, DXG 50 μM, 아바카비르 20 μM 및 AZT 10 μM. 사용된 RBV의 농도는 1, 5, 10, 20, 40 및 60 μM이었다. 어세이를 XXT 민감도 어세이 섹션에서 상술한 MT2 세포주에서 수행하였다. 상기에 기술한 화합물과 병용하여 40 및 60 μM RBV의 부가는 이들 어세이에서 독성이 있는 것으로 밝혀졌고, 따라서, 화합물의 EC₅₀값을 1, 5,10 및 20 μM RBV의 존재 및 부존재하에서 측정하였다(표 2).

표 2

^a= 레플리케이트 수

1, 5, 10 및 20 μM RBV의 부가는 DAPD 및 DXG에 대해 얻어진 EC₅₀값을 감소시켰다. 표 3은 RBV와 병용된 각 화합물에 대해 얻어진 EC₅₀값에서 배(fold) 차를 나타내고 있다.

표 3

20 uM RBV을 부가하는 것은 각각 겉보기 EC₅₀값에서 14.2 및 12 배(fold) 감소로서 DAPD 및 DXG의 항바이러스 활성에 대해 효과가 가장 좋았다. RBV을 부가하는 것은 아바카비르의 활성에 대해 아무런 효과(겉보기 EC₅₀값에서 2 배(fold) 차 이하)도 없었다. 20 μM RBV의 부가는 AZT의 겉보기 EC₅₀에서 6-배(fold) 이상의 증가를 초래하였고 이는 이 병용이 HIV의 억제와 관련하여 길항성이 있다는 것을 의미한다. 비록 고 농도의 RBV에서 관찰된 것 보다는 적은 정도이지만, 1,5 및 10 μM RBV의 부가로 유사한 결과를 얻었다.

DAPD 내성 HIV-1 돌연변이체

HIV의 돌연변이체 균주에 대한 DAPD 및 DXG의 활성에 관한 RBV의 효과가 또한 분석되었다(표 4). 분석된 리스트레인(restraint) 균주는 98S, 116Y, 151M 및215Y 위치에서 돌연변이체를 포함하는 재조합 바이러스뿐만 아니라 위치 지정 돌연변이 유발에 의해 생성된 바이러스 K65R 및 L74V를 포함한다. 이들 돌연변이체가 생성된 야생형태의 백본(backbone), xxLAI을 비교 분석하였다. 시험된 DAPD 및 DXG의 농도는 상기 MT2/XTT 병용 어세이 부분에서 기술한 것과 같았다. RBV을 고정된 20 μM의 농도에서 DAPD 및 DXG와 병용하여 시험하였다. 시험된 돌연변이 바이러스는 모두 DAPD 및 DXG 둘 다에 대하여 이들 화합물에 대한 내성을 나타내는 EC₅₀값의 증가(4 배(fold) 이상)를 보여 주었다. 20 μM RBV의 부가는 이러한 바이러스에 대한 DAPD 및 DXG 의 EC₅₀값을 감소시켰다. 20 μM RBV의 존재하에 DAPD 및 DXG에 대해 측정된 EC₅₀값은 야생형태의 바이러스에 대해 얻어진 값보다 최소한 2.5-배(fold) 낮았다. 이러한 결과를 표 4에 요약하였다.

표 4

^a[RBV] = 20 μM

^b는 WT로부터 배(fold) 차이를 나타낸다

PBMC/p24 어세이

다양한 농도의 DAPD, DXG, 아바카비르 및 AZT를 단독으로 또는 고정 농도의 RBV와 함께 이용하여 PBMCs에서 병용 어세이를 수행하였다. 화합물 희석액과 어세이 조건은 상기에서 기술한 것과 같았다. 사용된 RBV의 농도는 1, 5, 10, 20, 40 및 60 μM이었다. 상기에 기술한 화합물과의 병용하여 40 및 60 μM RBV의 부가는 이 어세이에서 독성이 있는 것으로 밝혀졌다. 1, 5, 10 및 20 μM RBV의 존재 및 부존재하에서 측정된 화합물의 EC₅₀값을 표 5에 제시한다.

표 5

^a= 레플리케이트 수

1 μM RBV의 부가는 DAPD, DXG 및 아바카비르의 EC₅₀에서 약간의 감소(3 배(fold)보다 적은)를 나타냈지만, AZT에 대해 얻어진 EC₅₀값에 대해서는 아무런 효가가 없었다. 이러한 효과는 RBV의 농도를 증가시킴으로 더욱 뚜렷해 졌다. 표 6은 1, 5, 10 및 20 μM RBV와 병용한 각각의 화합물에 대해 얻어진 EC₅₀값에서의 배(fold) 차를 나타내고 있다.

표 6

RBV은 PBMCs내에서 HIV-1의 복제를 20.5 μM의 EC₅₀로 억제하였다. 리바비린은 1 mM까지의 농도에서 이러한 세포에 독성이 없고 따라서 치료지수는 >48이었다. DAPD, DXG 및 아바카비르에 20 μM RBV을 부가하는 것은 PBMCs내에서 시험된 모든 농도에서 HIV 복제를 완전히 억제하였으나 AZT의 활성에 대해서는 효과가 거의 없었다. 보다 낮은 농도의 RBV를 부가하는 것 또한 DAPD, DXG 및 아바카비르의 활성에 대한 효과를 증대시켰다. MT2 세포주에서, RBV은 HIV 복제에 대한 활성이 없었다. 20 μM RBV의 부가는 DAPD 및 DXG의 겉보기 EC₅₀를 각각 14.2 및 12-배(fold)로 감소시켰다. 20 μM RBV의 부가는 아바카비르의 활성에 어떠한 효과도 없었으며 AZT의 겉보기 EC₅₀을 6-배(fold) 증가시켰으며 이는 이 병용이 HIV 억제에 길항성이 있음을 의미한다. MT2에서도 5 및 10 μM RBV을 부가하여, 비록 고 농도의 RBV에서 관찰된 것 보다 낮은 정도이지만, 유사한 결과를 얻었다.HIV-1의 돌연변이체 균주에 대해 시험된 경우, 20 uM RBV 와 DAPD 또는 DXG의 병용은 이러한 화합물의 EC₅₀값을 야생형태의 바이러스에서 관찰된 것보다 낮게 감소시켰으며, 즉 이전에 내성체인 바이러스 균주는 현재 DAPD 및 DXG에 의해 억제에 민감하게 된다 [Weislow, O. S., R. Kiser, D. L. Fine, J. Bader, R. H. Shoemaker, and M. R. Boyd. 1989]. HIV-1 세포변성의 효과에 대한 새로운 가용성 포르마잔 어세이: Application to high-flux screening of synthetic and natural products for AIDS antiviral activity. J. of NCI. 81:577-586.

VI. DAPD와 병용에서의 마이코페놀 산

마이코페놀산(MPA)을 시험관내에서 HIV-1에 대한 활성 및 시험관내에서 두 dGTP 유사체, DAPD 및 DXG의 항 HIV 활성에 대한 효과에 대하여 분석하였다. MPA을 또한 실험실에서 개조된 세포주 MT2 및 말초혈관단핵세포(PBMC)에 대한 세포독성에 대해 평가하였다. MPA은 효소 IMP 탈수소효소의 억제제이다. 이 효소는 GTP의 데 노보(de novo) 합성을 위한 세포에 의해 이용되는 경로의 부분이다. 병용 어세이는 또한 아바카비르, AZT 및 FTC와 함께 수행되었다.

세포독성 어세이 :

MPA를 XTT에 기초한 어세이를 사용하여 실험실에서 개조된 T-세포주 MT2 및 PBMCs에 대한 세포독성에 대해 실험하였다. XTT (2,3-비스(2-메톡시-4-니트로-5설폭시페닐)-5-[(페닐아미노)카보닐]-2H-테트라졸륨 하이드록사이드) 어세이는 시험관내에서 비색계의 세포-단백질 어세이이다. 미토콘드리아 탈수소효소에 의한 XTT의 환원은 XTT의 테트라졸륨 환을 분열시키고, 수용액에 용해되는 오렌지색의 포르마잔 측정을 생산한다. 결과물인 오렌지색 용액을 스펙트로포토메타의 450nM 파장에서 판독하였다. MPA를 100% DMSO내에서 100mM의 최종농도로 제조하였다. 세포독성 어세이를 위하여, MPA의 200μM 용액을 세포 배양 배지(어린 송아지 혈청, L-글루타민 lmg/ml 및 20ug/ml 젠타미신으로 보충한 RPMI)에서 제조하고 96 웰 플레이트 상에서 2배 연속 희석시켰다. 세포들을 3웰 (MTX) 및 2 x lO⁵/웰(PBMC)로 플레이트에 부가하고, 플레이트를 5% C0₂배양기(세포들을 100μM의 최종 고 농도로 화합물을 희석시킨 플레이트에 부가함)에서 37 ℃에서 5일 동안 배양하였다. 5일동안의 배양이 끝나고, XTT를 각 웰에 부가하고 37℃에서 3 시간 동안 부가하고 이어서 산화된 이소프로판올을 부가하였다. 96 웰 플레이트 판독기의 450nm에서 플레이트를 판독하였다. 투여량 반응 곡선은 100% 보호된 화합물의 존재하에 세포성장의 흡수값을 사용하여 작성하였다.

MPA는 MT2 세포주 내 5.7μM 및 PMMC내의 4.5 μM의 50% 세포독성 용량 (CC₅₀)으로 양 세포주에서 독성을 나타낸다 (표 7 참조)

표 7

민감도 어세이

XXT 어세이

실험실 적용 세포주 MT2에서 HIV-1의 xxLAI 균주에 대한 활성에 대해 MPA를 시험하였다. MPA의 희석화는 96 웰 플레이트내에서 세포 배양 배지에서 진행되었다; 시험 최고 농도는 1 μM이었다. 화합물의 3중 샘플이 시험되었다. MT2 세포를 5% C0₂내에서 0.03의 다중감염도(MOI)로 37 ℃에서 3 시간 동안 xxLAI로 감염시켰다. 감염된 세포를 3.0 x 10⁴/웰로 희석제를 포함하는 96 웰 플레이트로 평판배양시키고 C0₂내에서 5일동안 37 ℃에서 배양시켰다. MPA의 항 바이러스 활성을 상기에 기술한 XTT 어세이를 사용하여 측정하였다. 이 방법은 감수성 어세이로 변경되어 다양한 시험관내 항바이러스 시험에 사용되어 왔고 세포 용해 바이러스를 가지고 있는 어떠한 시스템에도 쉽게 적응될 수 있다(Weislow, O. S., et. al. 1989). 세포 대조군을 100% 보호 및 무약제로서, 바이러스 감염된 세포들을 0% 보호로서의 흡수값을 사용하여, Y축상에 % 보호 및 X 축상에 약제 농도를 플롯팅함으로써 투여량 반응 곡선을 생성한다. 이 곡선으로부터 EC₅₀값을 측정하였다. MPA는 이러한 어세이에서 시험된 어떠한 농도에서도 HIV-1에 대한 활성이 없었다.

P24 어세이

MPA를 또한 p24에 기초한 Elisa 어세이를 사용하여 PBMCs내에서 HIV-1의 xxLAI 균주에 대한 활성에 대해 시험하였다. 이 어세이에서, 세포 상등액을 HIV-1 p24 코어 항원에 대한 항체로 코팅된 마이크로엘리사 웰에서 배양하였다. 그 후에, 호스래디시(horse radish) 퍼옥시다제로 표지한 항 HIV-1 접합체를 부가하였다. 표지된 항체는 이전에 형성된 고상 항체/항원 복합체에 결합하였다. 테트라메틸벤지딘 기질의 부가로 푸른색의 군계를 얻는다. 반응이 정지될 때에 색상은 노란색으로 변하였다. 490 nm에서 세팅된 플레이트 리더에서 플레이트를 분석하였다. 흡수도는 각 웰에서 생산된 HIV-1 양의 직접 측정치이고 색상의 감소는 바이러스 생산량의 감소를 의미한다. 96 웰 플레이트내의 세포 배양 배지에서 RBV의 희석액을 만들고, MPA의 시험 최고 농도는 1μM이었다. 피콜 그레디언트 (Ficoll gradients)상에서 벤딩함으로써 HIV-1 음성 도너로 부터 PBMC를 얻었고, HIV-1로 감염시키기 전에 피토헤마글루티닌(PHAP)에 의해 48 시간동안 자극하였고, 0.01의 MOI에서 37℃에서 4시간 동안 바이러스로 감염시켰다. 감염된 세포를 MPA의 4배 연속 희석액을 포함하는 96 웰 플레이트에 파종하였다. 플레이트를 37 ℃에서 3일동안 배양하였다. 각 웰의 바이러스의 농도를 NEN p24 어세이를 사용하여 측정하였다. 세포 대조군을 100% 보호 및 무약제로서 바이러스 감염된 세포를 0% 보호로서의 흡수값을 이용하여, Y축상에 퍼센트 보호 및 X축상에 약제 농도를 플롯팅하여 투여량 반응 곡선을 작성한다. 이 곡선으로 부터, EC₅₀값을 측정하였다.

MPA는 PBMCs에서 HIV-1의 복제를 95 nM ±29의 중간 EC₅₀으로 억제하였다.

병용 어세이

DAPD 및 DXG의 시험관내 항 HIV-1 활성에 대한 MPA의 효과를 상기에 기술된 MT2/XTT 및 PBMC/p24 어세이를 사용하여 평가하였다. 아바카비르, AZT 및 FTC의 활성에 대한 MPA의 효과를 또한 분석하였다.

MT2/XTT 어세이

다양한 농도의 DAPD, DXG, 아바카비르, AZT 및 FTC를 단독으로 또는 고정된 농도의 MPA와 함께 이용하여 병용 어세이를 수행하였다. 시험 화합물의 5배 연속 희석액을 다음의 약제농도에서 플레이트 된 96 웰 플레이트상에서 수행하였다: DAPD - 100 μM, DXG - 50 μM, 아바카비르 - 20 μM 및 AZT - 10 μM, 및 FTC - 10 μM. 사용된 MPA의 농도는 1, 0.5, 0.25, 0.1, 및 0.01μM이다. 어세이를 3.1 섹션에서 기술한 MT2 세포주에서 수행하였다. 상기에 기술한 화합물과 병용하여 40 및 60 μM MPA의 부가는 이들 어세이에서 독성이 있는 것으로 밝혀졌고, 따라서, 화합물의 EC₅₀값을 0.25, 0.1, 및 0.01 μM MPA의 존재 및 부존재하에서 측정하였다(표 8).

표 8

^a= 레플리케이트 수

0.01 μM MPA의 부가는 모든 화합물에 대한 EC₅₀에 대하여 아무런 효과가 없었다. 표 9는 MPA와 병용된 각 화합물에 대해 얻어진 EC₅₀값에서 배(fold) 차를 나타낸다.

표 9

0.25 uM MPA를 부가하는 것은 각각 겉보기 EC₅₀값에서 16.7 및 10.5 배 (fold) 감소로서 DAPD 및 DXG의 항바이러스 활성에 대해 효과가 가장 좋았다. MPA을 부가하는 것은 아바카비르 및 FTC의 활성에 대해 아무런 효과가(겉보기 EC₅₀값에서 2 배(fold) 차 이하) 없었고, AZT의 겉보기 EC₅₀에서 2.3-배(fold) 증가를 초래하였으며, 이는 이 병용이 HIV의 억제와 관련하여 길항성이 있다는 것을 의미한다. 비록 고 농도의 MPA에서 관찰된 것 보다는 적은 정도이지만, 0.1 μM MPA의 부가로 유사한 결과를 얻었다.

DAPD 내성 HIV-1 돌연변이체

HIV의 돌연변이체 균주에 대한 DAPD 및 DXG의 활성에 관한 MPA의 효과를 또한 분석하였다(표 10). 분석된 리스트레인(restraint) 균주는 98S, 116Y, 151M및 215Y 위치에서 돌연변이체를 포함하는 재조합 바이러스뿐만 아니라 위치 지정 돌연변이 유발에 의해 생성된 바이러스 K65R 및 L74V를 포함한다. 이들 돌연변이체가 생성된 야생형태의 백본(backbone), xxLAI을 비교 분석하였다. 시험된 DAPD 및 DXG의 농도는 상기 4.1 섹션에서 기술한 것과 같았다. MPA를 0.25 μM의 고정된 농도에서 DAPD 및 DXG와 병용하여 시험하였다. DAPD 및 DXG는 모든 야성형태의 시험된 HIV의 균주에 대해 활성을 가졌다. 시험된 돌연변이 바이러스는 모두 DAPD 및 DXG 둘 다에 대하여 이들 화합물에 대한 내성을 나타내는 EC₅₀값의 증가를 보여 주었다. 0.25 μM MPA의 부가는 이러한 바이러스에 대한 DAPD 및 DXG 의 EC₅₀값을 감소시켰다. 0.25 μM MPA의 존재하에 DAPD 및 DXG에 대해 측정된 이러한 값은 야생 형태의 바이러스에 대해 얻어진 값과 유사하다.

표 10

^a[MPA] = 0.25 μM

^b는 WT로부터 배(fold) 차이를 나타낸다

PBMC/p24 어세이

병용 어세이는 다양한 농도의 DAPD, DXG, 아바카비르, AZT 및 FTC 를 단독으로 또는 고정농도의 MPA와 함께 이용하여 PBMCs에서 병용 어세이를 수행하였다. 화합물 희석액과 어세이 조건은 상기에서 기술한 것과 같았다. 사용된 MPA의 농도는 1, 0.5, 0.25, 0.1, 및 0.01 μM이다. 상기에 기술한 화합물과 병용하여 1 및 0.5 μM MPA의 부가는 이 어세이에서 독성이 있는 것으로 밝혀졌다. 0.25, 0.1, 및 0.01 μM MPA의 존재 및 부존재하에서 측정된 화합물의 EC₅₀값을 표 11에 나타내었다.

표 11

^a= 레플리케이트 수

0.01 μM MPA의 부가는 DAPD 및 DXG의 EC₅₀에서 감소를 나타냈지만, 아바카비르, AZT 및 FTC에 대한 얻어진 EC₅₀값에 대해서는 아무런 효과가 없었다(EC₅₀에서 2 배(fold) 이하) 0.1 및 0.25 μM MPA의 부가는 DAPD, DXG 및 아바카비르의 EC₅₀에서 감소를 나타냈지만, AZT 및 FTC에 대한 얻어진 EC₅₀값에 대해서는 아무런 효과가 없었다. 표 12는 0.01, 0.1, 및 0.25 μM MPA와 병용한 각각의 화합물에 대해 얻어진 EC₅₀값에서의 배(fold) 차를 나타내고 있다.

표 12

마이코페놀산은 PBMCs내에서 HIV-1의 복제를 0.095 μM의 EC₅₀로 억제하였다. 이러한 세포에 대하여 MPA에 대해 얻어진 CC50 값은 4.5 μM이고 결과적으로 치료지수는 47이다. DAPD, DXG 및 아바카비르에 0.25 μM MPA를 부가하는 것은 PBMCs내에서 시험된 모든 농도에서 완전히 HIV 복제를 억제하였으나 AZT 및 FTC의 활성에 대해서는 효과가 거의 없었다(EC₅₀에서 2-배(fold) 변화 이하). 보다 낮은 농도의의 MPA를 부가하는 것 또한 DAPD, DXG의 활성에 대한 효과는 증대하였으나 아바카비르, AZT 및 FTC의 활성에는 거의 영향이 없었다. MT2 세포주에서, MPA는 HIV 복제에 대한 활성이 없었다. 0.25 μM MPA의 부가는 DAPD 및 DXG의 겉보기EC₅₀를 각각 16.7 및 10.5-배(fold)로 감소시켰다. 0.25 μM MPA의 부가는 아바카비르 및 FTC의 활성에 어떠한 효과도 없었으며 AZT의 겉보기 EC₅₀을 2.3-배 (fold) 증가시켰으며 이는 이 병용이 HIV 억제에 길항성이 있다는 것을 의미한다. 비록 고 농도의 MPA에서 관찰된 것 보다 낮은 정도이지만, MT2에서도 0.1 μM MPA을 부가하여 유사한 결과를 얻었다. HIV-1의 돌연변이체 균주에 대해 시험된 경우, 0.25 μM MPA와 DAPD 또는 DXG의 병용은 이러한 화합물의 EC₅₀값을 야생형태의 바이러스에서 관찰된 것보다 낮게 감소시켰으며, 즉 이전에 내성체인 바이러스 균주는 현재 DAPD 및 DXG에 의해 억제에 민감하게 된다.

PBMCs 내의 DXG-TP의 농도

DXG 트리포스페이트(DXG-TP)의 세포내 농도에 대한 마이코페놀산의 효과를 말초 혈관 단핵 세포(PBMC)에서 평가하였다.

PBMC를 HIV 음성 도너로부터 얻고, 피토헤마글루티닌에 의해 자극한 다음, 0.25 μM 마이코페놀산의 존재 또는 부존재 하에서 DXG (5 μ M or 50 μM)의 다양한 농도로 보충된 완전 배지 내에서 37℃에서 배양시켰다. PBMC를 48 또는 72 시간의 배양후에 수확하고, 세포내 DXG-TP 레벨을 아래에 기술한 LC-MS-MS에 의하여 측정하였다. 0.25 μM 마이코페놀 산의 부가는 DXG 단독으로 배양된 세포에서의 레벨과 비교하여 세포내의 DXG-TP의 중간 농도를 1.7배 증가시켰다.

말초혈관 단핵세포로부터 DXG-TP의 분석을 위한 생물분석 방법은 일렉트로스프레이 이오니제이션(ESI) 매스 스펙트로미터와 연결된 이온-쌍 고상 익스트랙션 (SPE) 및 이온-쌍 HPLC를 사용한다. 약 0.5 x 10⁷의 세포를 포함하는 펠렛화된 PBMC 샘플을 내부 기준(2',3'-디데옥시시티딘-5'-트리포스페이트(ddCTP))을 함유하는 용액으로 희석하고 C-18 카트리지상의 이온-쌍 SPE을 사용하여 DXG-TP와 ddCTP를 선택적으로 추출한다. DXG-TP 및 ddCTP를 마이크로보레 이온-쌍 HPLC로 Waters Xterra MS C18 분석 칼럼상에서 약 10분간의 체류 시간으로 분리한다. 관심있는 화합물을 양이온 모드에서 ESI-MS/MS에 의해 마니크로매스 쿼트로 LC 트리플 매스 스펙트로미터상에서 검출한다.

DXG-TP PBMC 샘플을 분석하는 동안, 샘플을 정량하는데 6 포인트, 1/x²웨이트, 4중 검량 곡선을 0.008 부터 1.65pmoles/10⁶세포의 범위내에서 사용한다. 특히, 품질보증(QC) 샘플을, 두 가지 농도(0.008 및 1.65pmoles/10⁶세포)에서, 방법의 정확성을 위하여 각각의 분석공정을 2중으로 하여 분석한다.

생물분석 방법은 약 80%의 재현성 추출 효율을 가진다. 정량한계(LOQ)는 0.008pmoles/10⁶세포 이다. 어세이의 범위는 0.008 내지 1.65pmoles/10⁶세포 이다.

본 발명이 그의 바람직한 구체예와 관련하여 기술되었다. 본 발명의 변화와 변형은 상기 본 발명의 상세한 설명으로 부터 당업자들에게 자명할 것이다. 이러한 변화와 변형은 모두 본 발명의 범위내에 포함된다.

Claims

적어도 하나의 이노신 모노포스페이트 데하이드로게나제(IMPDH) 억제제와 함께, 임의로 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제중의 유효량의 일반식 (I)의 β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭을 포함하는, 숙주의 HIV 감염을 치료 또는 예방하기 위한 약제학적 조성물:

상기 식에서,

R은 H, OH, Cl, NH₂또는 NR¹R²를 나타내고;

R¹및 R²는 독립적으로 수소, 알킬 또는 사이클로알킬을 나타내며;

R³는 H, 알킬, 아릴, 아실, 모노포스페이트, 디포스페이트 또는 트리포스페이트를 포함한 포스페이트, 또는 포스포리피드 또는 에테르리피드를 포함한 안정화된 포스페이트 부분을 나타낸다.
제 1 항에 있어서, β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린이 (-)-(2R,4R)-2-아미노-9-[(2-하이드록시메틸)-1,3-디옥솔란-4-일]-아데닌(DAPD)인 조성물.
제 1 항에 있어서, β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린이 (-)-(2R,4R)-9-[(2-하이드록시메틸)-1,3-디옥솔란-4-일]-구아닌(DXG)인 조성물.
제 1 항 내지 3 항중 어느 한항에 있어서, IMPDH 억제제가 리바비린, 마이코페놀산, 벤즈아미드 리보사이드, 티아조푸린, 셀레나조푸린, 5-에티닐-1-β-D-리보푸라노실이미다졸-4-카복사미드(EICAR) 및 (S)-N-3-[3-(3-메톡시-4-옥사졸-5-일-페닐)-우레이도]-벤질-카밤산 테트라하이드로푸란-3-일-에스테르(VX-497)로 구성된 그룹중에서 선택되는 조성물.
제 4 항에 있어서, IMPDH 억제제가 마이코페놀산인 조성물.
제 4 항에 있어서, IMPDH 억제제가 리바비린인 조성물.
제 1 항 내지 6 항중 어느 한항에 있어서, β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린이 에난티오머적으로 풍부한 조성물.
제 1 항에 있어서, 경구적 전달에 적합한 약제학적으로 허용되는 담체중의 조성물.
제 1 항에 있어서, 정맥내 전달에 적합한 약제학적으로 허용되는 담체중의 조성물.
제 1 항에 있어서, 비경구적 전달에 적합한 약제학적으로 허용되는 담체중의 조성물.
제 1 항에 있어서, 국소적 전달에 적합한 약제학적으로 허용되는 담체중의 조성물.
제 1 항에 있어서, 전신적 전달에 적합한 약제학적으로 허용되는 담체중의 조성물.
임의로 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제중의 유효량의 일반식 (I)의 β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭을 이노신 모노포스페이트 데하이드로게나제(IMPDH) 억제제와 함께, 또는 교대로 투여하는 것을 특징으로 하여, 숙주에서 HIV 감염의 약물 내성 균주를 치료 또는 예방하는 방법:

상기 식에서,

R은 H, OH, Cl, NH₂또는 NR¹R²를 나타내고;

R¹및 R²는 독립적으로 수소, 알킬 또는 사이클로알킬을 나타내며;

R³는 H, 알킬, 아릴, 아실, 모노포스페이트, 디포스페이트 또는 트리포스페이트를 포함한 포스페이트, 또는 안정화된 포스페이트 부분을 나타낸다.
제 13 항에 있어서, β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린이 (-)-(2R,4R)-2-아미노-9-[(2-하이드록시메틸)-1,3-디옥솔란-4-일]-아데닌(DAPD)인 방법.
제 13 항에 있어서, β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린이 (-)-(2R,4R)-9-[(2-하이드록시메틸)-1,3-디옥솔란-4-일]-구아닌(DXG)인 방법.
제 13 항 내지 15 항중 어느 한항에 있어서, IMPDH 억제제가 리바비린, 마이코페놀산, 벤즈아미드 리보사이드, 티아조푸린, 셀레나조푸린, 5-에티닐-1-β-D-리보푸라노실이미다졸-4-카복사미드(EICAR) 및 (S)-N-3-[3-(3-메톡시-4-옥사졸-5-일-페닐)-우레이도]-벤질-카밤산 테트라하이드로푸란-3-일-에스테르(VX-497)로 구성된 그룹중에서 선택되는 방법.
제 16 항에 있어서, IMPDH 억제제가 마이코페놀산인 방법.
제 16 항에 있어서, IMPDH 억제제가 리바비린인 방법.
제 16 항에 있어서, HIV 감염이 DAPD 및/또는 DXG에 대해 내성인 방법.
제 13 항 내지 19 항중 어느 한항에 있어서, 숙주가 인간인 방법.
임의로 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제중의 유효량의 일반식 (I)의 β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭을 이노신 모노포스페이트 데하이드로게나제(IMPDH) 억제제와 함께, 또는 교대로 투여하는 것을 특징으로 하여, 숙주에서 HIV 감염을 치료 또는 예방하는 방법:

상기 식에서,

R은 H, OH, Cl, NH₂또는 NR¹R²를 나타내고;

R¹및 R²는 독립적으로 수소, 알킬 또는 사이클로알킬을 나타내며;

R³는 H, 알킬, 아릴, 아실, 모노포스페이트, 디포스페이트 또는 트리포스페이트를 포함한 포스페이트, 또는 안정화된 포스페이트 부분을 나타낸다.
제 21 항에 있어서, β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린이 (-)-(2R,4R)-2-아미노-9-[(2-하이드록시메틸)-1,3-디옥솔란-4-일]-아데닌(DAPD)인 방법.
제 21 항에 있어서, β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린이 (-)-(2R,4R)-9-[(2-하이드록시메틸)-1,3-디옥솔란-4-일]-구아닌(DXG)인 방법.
제 21 항 내지 23 항중 어느 한항에 있어서, IMPDH 억제제가 리바비린, 마이코페놀산, 벤즈아미드 리보사이드, 티아조푸린, 셀레나조푸린, 5-에티닐-1-β-D-리보푸라노실이미다졸-4-카복사미드(EICAR) 및 (S)-N-3-[3-(3-메톡시-4-옥사졸-5-일-페닐)-우레이도]-벤질-카밤산 테트라하이드로푸란-3-일-에스테르(VX-497)로 구성된 그룹중에서 선택되는 방법.
제 24 항에 있어서, IMPDH 억제제가 마이코페놀산인 방법.
제 24 항에 있어서, IMPDH 억제제가 리바비린인 방법.
제 21 항 내지 26 항중 어느 한항에 있어서, 숙주가 인간인 방법.
의학적 치료용으로 사용하기 위한, 이노신 모노포스페이트 데하이드로게나제 (IMPDH) 억제제와 함께, 또는 교대로 사용되는, 임의로 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제중의 유효량의 일반식 (I)의 β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭의 용도:

상기 식에서,

R은 H, OH, Cl, NH₂또는 NR¹R²를 나타내고;

R¹및 R²는 독립적으로 수소, 알킬 또는 사이클로알킬을 나타내며;

R³는 H, 알킬, 아릴, 아실, 모노포스페이트, 디포스페이트 또는 트리포스페이트를 포함한 포스페이트, 또는 안정화된 포스페이트 부분을 나타낸다.
숙주에서 HIV 감염을 치료 또는 예방하기 위한, 하나 이상의 유효한 이노신 모노포스페이트 데하이드로게나제(IMPDH) 억제제와 함께, 또는 교대로 사용되는, 임의로 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제중의 유효량의 일반식 (I)의 β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭의 용도:

상기 식에서,

R은 H, OH, Cl, NH₂또는 NR¹R²를 나타내고;

R¹및 R²는 독립적으로 수소, 알킬 또는 사이클로알킬을 나타내며;

R³는 H, 알킬, 아릴, 아실, 모노포스페이트, 디포스페이트 또는 트리포스페이트를 포함한 포스페이트, 또는 안정화된 포스페이트 부분을 나타낸다.
숙주의 HIV 감염 치료 또는 예방용 약제를 제조하기 위한, 하나 이상의 유효한 이노신 모노포스페이트 데하이드로게나제(IMPDH) 억제제와 함께, 또는 교대로 사용되는, 임의로 약제학적으로 허용되는 담체 또는 희석제중의 유효량의 일반식 (I)의 β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린, 또는 그의 약제학적으로 허용되는 염 또는 프로드럭의 용도:

상기 식에서,

R은 H, OH, Cl, NH₂또는 NR¹R²를 나타내고;

R¹및 R²는 독립적으로 수소, 알킬 또는 사이클로알킬을 나타내며;

R³는 H, 알킬, 아릴, 아실, 모노포스페이트, 디포스페이트 또는 트리포스페이트를 포함한 포스페이트, 또는 안정화된 포스페이트 부분을 나타낸다.
제 29 항 또는 30 항에 있어서, β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린이 (-)-(2R,4R)-2-아미노-9-[(2-하이드록시메틸)-1,3-디옥솔란-4-일]-아데닌(DAPD)인 용도.
제 29 항 또는 30 항에 있어서, β-D-1,3-디옥솔라닐 퓨린이 (-)-(2R,4R)-9-[(2-하이드록시메틸)-1,3-디옥솔란-4-일]-구아닌(DXG)인 용도.
제 29 항 또는 30 항에 있어서, IMPDH 억제제의 적어도 하나가 리바비린, 마이코페놀산, 벤즈아미드 리보사이드, 티아조푸린, 셀레나조푸린, 5-에티닐-1-β-D-리보푸라노실이미다졸-4-카복사미드(EICAR) 및 (S)-N-3-[3-(3-메톡시-4-옥사졸-5-일-페닐)-우레이도]-벤질-카밤산 테트라하이드로푸란-3-일-에스테르(VX-497)로 구성된 그룹중에서 선택되는 용도.
제 29 항 또는 30 항에 있어서, IMPDH 억제제가 마이코페놀산인 용도.
제 29 항 또는 30 항에 있어서, IMPDH 억제제가 리바비린인 용도.
제 29 항 또는 30 항에 있어서, HIV 감염이 DAPD-내성 및/또는 DXG-내성인 용도.
제 29 항 내지 36 항중 어느 한항에 있어서, 숙주가 인간인 용도.