JP2005500252A - リバビリン又はマイコフェノール酸などのｉｍｄｐｈ阻害剤とｄａｐｄの併用療法 - Google Patents

Abstract

薬剤抵抗性株のＨＩＶにβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルヌクレオシドとＩＭＰＤＨ阻害剤の組み合わせを与えた時に、当該薬剤抵抗性株のＨＩＶが薬剤を受けたことがないウイルスの反応を示すことが意外にも見いだされた。一つの非限定的な実施態様においては、上記ＨＩＶ株はβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルヌクレオシドに対して抵抗性である。

Description

【技術分野】
【０００１】
本発明は、宿主におけるヒト免疫不全ウィルス（ＨＩＶ）感染症を治療又は予防するための医薬組成物及び方法に関し、当該方法はそのような組成物を投与することを含んでなる。本出願は、２０００年１２月１５日に出願された米国仮出願第 60/256,068 号及び２００１年３月１日に出願された米国仮出願第 60/272,605 号に対して優先権を主張する。
【背景技術】
【０００２】
エイズ（ＡＩＤＳ）、後天性免疫不全症侯群は、全世界に広がっている破滅的な病気である。１９９８年７月から１９９９年６月にかけて、米国だけで総計４７，０８３人のエイズ患者が報告されている。１９９８年には死亡数が２２０万人を超えており、ＨＩＶエイズ疾患は、今日では、主要な死亡原因の第４番目になっており、その影響はまさに増大している。エイズによる死亡者数は、これまでで最高の１年当たり２６０万人に達している。そのうえ、国連エイズ合同計画（ＵＮＡＩＤＳ）の最近の報告によると、新たなＨＩＶの感染は増大する速度で広がり続けている。
【０００３】
疾病管理センター（ＣＤＣ）がＡＩＤＳに最初に気づいたのは、１９８１年、見たところ健康な同性愛の男が、免疫不全症の患者が罹患することしか知られていない２種類の日和見疾患であるカポジ肉腫（ＫＳ）とニューモシスチスカリニ肺炎（ＰＣＰ）に罹患した時である。２年後、エイズの原因微生物であるリンパ節症関連レトロウイルス、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）がパリにあるパスツール研究所で単離され、その後、米国の国立癌研究所で独自の病原により確認された。
【０００４】
１９８６年、パリで開催された第２回国際ＡＩＤＳ会議において、エイズに対する薬物の使用についての速報がなされた。この薬物、３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ＡＺＴ、ジドブジン、レトロビル)は、食品・医薬品庁（ＦＤＡ）の承認を受け、エイズとの戦いに使用される最初の薬物となった。ＡＺＴが登場して以来、数種類のヌクレオシド類似体がヒト免疫不全ウイルスＩ型（ＨＩＶ−Ｉ）に対して強力な抗ウイルス活性を有することが示された。特に、数多くの２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロ−ヌクレオシド類が強力な抗ＨＩＶ−１活性を有することが示された。２’，３’−ジデオキシ−２’，３’−ジデヒドロ−チミジン（“Ｄ４Ｔ”；１−（２，３−ジデオキシ−β−Ｄ−グリセロ−ペント−２−エノ−フラノシル）チミンとも呼ばれる）は、現在、Bristol Myers Squibb によって、スタブジン（Stavudine）の名称で、ＨＩＶの治療用として販売されている。
【０００５】
抗ウイルス剤を用いた長期にわたる治療の後にＨＩＶの薬剤抵抗性変異株が出現する可能性があることは認識されていた。薬剤抵抗性は、最も典型的には、ウイルス複製で使用される酵素をコードする遺伝子の突然変異によって生ずる。ＨＩＶの場合には、最も典型的には、逆転写酵素、プロテアーゼ又はＤＮＡポリメラーゼをコードする遺伝子の突然変異によって生じる。最近、ＨＩＶ感染症に対する薬物を、当該ＨＩＶ感染症に対する第一の薬物により引き起こされる突然変異とは異なる突然変異を誘発する第二の抗ウイルス性化合物及び場合により第三の抗ウイルス性化合物と併用して投与するか又は交互に投与することにより、前記ＨＩＶ感染症に対する薬物の効力を延長させるか、増大させるか又は回復させることができることが示された。あるいは、上記のような併用して行う療法や交互に行う療法により、当該薬物の薬物動態学、生体内分布及び別のパラメータを変えることができる。一般に、併用して行う療法の方が交互に行う療法よりも好ましい。それは、併用療法の場合、ウイルスに対して同時に複数の強制を加えることができるからである。しかしながら、所与の薬物によってＨＩＶ−１ゲノムの中でどのような突然変異が誘発されるのかについて、誘発された突然変異は恒久的であるのかそれとも一時的なものなのかについて、又は、突然変異を起こしたＨＩＶ−１配列が感染した細胞は別の薬物と併用して行う療法若しくは交互に行う療法に対してどのように反応するのかについて、誰も予想できない。このような予想は、新しい抗レトロウイルス薬で処理された長期細胞培養における薬剤抵抗性の動力学についてのデータが不足しているという事実によってさらに困難なものとなっている。
【０００６】
３’−アジド−３’−デオキシチミジン（ＡＺＴ）、２’，３’−ジデオキシイノシン（ＤＤＩ）又は２’，３’−ジデオキシシチジン（ＤＤＣ）に対する抵抗性を有するＨＩＶ−１変異株は、これらの薬剤を用いる長期単独薬療法を受けた患者から単離されている（Larder BA, Darby G 及び Richman DD., Science, 1989, 243：1731-4； St Clair MH, Martin JL 及び Tudor WG ら, Science, 1991, 253：1557-9； St Clair MH, Martin JL 及び Tudor WG ら, Science, 1991, 253：1557-9；及び, Fitzgibbon JE, Howell RM, Haberzettl CA, Sperber SJ, Gocke DJ 及び Dubin DT, Antifmicrob Agents Chemother, 1992, 36：153-7）。増えてきている臨床的な証拠は、ＡＺＴ抵抗性があると子供と大人の両方において臨床的転帰が乏しいことが予測されることを示している（Mayers DLによる、第３２回抗菌薬および化学療法に関する学術会議での講演（Anaheim, CA. 1992）； Tudor-Williams G, St Clair MH 及び McKinney RE ら, Lancet, 1992, 339：15-9； Ogino MT, Dankner WM 及び Spector SA, J Pediatr, 1993, 123：1-8； Crumpacker CS, D'Aquila RT 及び Johnson VA ら, Third Workshop on Viral Resistance（Gaithersburg, MD. 1993)；及び Mayers D と RV43 研究グループ, Third Workshop on Viral Resistance（Gaithersburg, MD. 1993））。
【０００７】
細胞培養とヒトの臨床試験の両方において、非ヌクレオシド逆転写酵素阻害剤（ＮＮＲＴＩ）に対するＨＩＶ−１の抵抗性が急速に発達していることも報告されている（Nunberg JH, Schleif WA 及び Boots EJ ら, J Virol, 1991, 65(9)：4887-92； Richman D, Shih CK 及び Lowy I ら, Proc Natl Acad Sci (USA) 1991, 88：11241-5； Mellors JW, Dutschman GE, Im GJ, Tramontano E, Winkler SR 及び Cheng YC, Mol Pharm, 1992, 41：446-51； Riclmian DD と ACTG 164/168 研究チーム, Second International HIV-1 Drug Resistance Workshop（Noordwijk, the Netherlands. 1993）； 及び Saag MS, Emini EA 及び Laskin OL ら, N Engl J Med, 1993, 329：1065-1072）。ＮＮＲＴＩ Ｌ’６９７，６６１のケースにおいては、薬剤抵抗性ＨＩＶ−１は、ウイルス血症が処理前のレベルに逆戻りするのに関連して、治療開始後２〜６週間以内に出現した（Saag MS, Emini EA 及び Laskin OL ら, N Engl J Med, 1993, 329：1065-1072）。また、プロテアーゼ阻害剤を包含する別の種類のＨＩＶ−１阻害剤で、薬剤抵抗性株の出現に関連したブレイクスルーウイルス血症も認められている（Jacobsen H, Craig CJ, Duncan IB, Haenggi M, Yasargil K 及び Mous J, Third Workshop on Viral Resistance（Gaithersburg, MD. 1993））。このような経験により、ＨＩＶ−１の全ての新しい療法の前臨床評価において、ＨＩＶ−１薬剤抵抗性に関する潜在的な可能性について早い時期に評価しなければならないということが認識されるようになった。
（１，３−ジオキソラニルヌクレオシド類）
様々な合成ヌクレオシドがインビボ及びインビトロでＨＩＶの複製を阻害するのに成功したことにより、多くの研究者は、ヌクレオシドの３’位の炭素原子がヘテロ原子で置き換えられたヌクレオシドをデザインして試験するようになった。Norbeck らは、（＋／−）−１−［（２−β，４−β）−２−（ヒドロキシメチル）−４−ジオキソラニル］チミン（（＋／−）−ジオキソラン−Ｔと呼ばれている）が、ＨＩＶに対して穏やかな活性（ＡＴＨ８細胞でのＥＣ_５０ ２０μＭ）を示しながら、２００μＭの濃度で感染していない対照細胞には毒性を示さないことを開示した。Tetrahedron Letters, 30(46)：6246, (1989)。
【０００８】
１９８８年４月１１日、BioChem Pharma の Bernard Belleau, Dilip Dixit 及び Nghe Nguyen-Ba は、ＨＩＶを治療するためのラセミ体２−置換−４−置換−１，３−ジオキソランヌクレオシド類の包括的な化合物群を開示している米国特許出願第 07/179,615 号を出願した。前記 '615 特許出願は、BioChem Pharma, Inc. に譲渡された、欧州特許第 0 337 713号；米国特許第 5,041,449 号及び米国特許第 5,270,315 号になった。
【０００９】
１９９０年１２月５日、Chung K. Chu 及び Raymond F. Schinazi は、立体特異的な合成を介したエナンチオマー的に富化されたβ−Ｄ−１，３−ジオキソランヌクレオシドの不斉合成方法、当該合成方法によって調製された（−）−（２Ｒ，４Ｒ）−９−［（２−ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］グアニン（ＤＸＧ）を包含するある種のヌクレオシド、及びＨＩＶを治療するためのその使用ついて開示している米国特許出願第 07/622,762 号を出願した。この特許出願は米国特許第 5,179,104 号として発行された。
【００１０】
【化１】
１９９１年５月２１日、BioChem Phanna の Tarek Mansour らは、キラル補助剤に共有結合的に結合した１，３−ジオキソラン中間体をシリルルイス酸を用いて縮合することを含む立体選択的合成を用いて１，３−ジオキソランヌクレオシドのエナンチオマーを得る方法に関する、米国特許出願第 07/703,379 号を出願した。対応出願は、欧州において、欧州特許出願第 0 515 156 号として出願された。
【００１１】
１９９２年８月２５日、Chung K. Chu 及び Raymond F. Schinazi は、ＨＩＶに感染したヒトを治療するための、場合により製薬上許容される担体又は希釈剤中の式：
【００１２】
【化２】
［式中、Ｒは、ＯＨ、Ｃｌ、ＮＨ_２又はＨである］で表されるエナンチオマー的に富化されているある種のβ−Ｄ−ジオキソラニルプリン化合物又はその製薬上許容される塩若しくは誘導体を開示している米国特許出願第 07/935,515 号を出願した。Ｒがクロロである上記化合物の名称は、（−）−（２Ｒ，４Ｒ）−２−アミノ−６−クロロ−９−［（２−ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］プリンである。Ｒがヒドロキシである上記化合物の名称は、（−）（２Ｒ，４Ｒ）−９−［（２−ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］グアニンである。Ｒがアミノである上記化合物の名称は、（−）−（２Ｒ，４Ｒ）−２−アミノ−９−［（２−ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］アデニンである。Ｒが水素である上記化合物の名称は、（−）−（２Ｒ，４Ｒ）−２−アミノ−９−［（２−ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］プリンである。この出願は、米国特許第 5,925,643 号及び米国特許第 5,767,122 号として発行された。
【００１３】
１９９２年、Kim らは、１，６−アンヒドロ−Ｌ−β−グルコピラノースからどのようにして（−）−Ｌ−β−ジオキソラン−Ｃ及び（＋）−Ｌ−β−ジオキソラン−Ｔを得るかについて教示している論文を発表した。Kim ら、「Potent anti-HIV and anti-HBV Activities of (-)-L-β-Dioxolane-C and (+)-L-β-Dioxolane-T and Their Asymmetric Syntheses」, Tetrahedron Letters, Vol 32(46), pp 5899-6902。
【００１４】
１９９２年１０月２８日、Raymond Schinazi は、米国特許出願第 07/935,515 号に開示された化合物のＢ型肝炎の治療のための使用に関する米国特許出願第 07/967,460 号を出願した。この出願は、米国特許第 5,444,063 号、米国特許第 5,684,010 号、米国特許第 5,834,474 号及び米国特許第 5,830,898 号として発行された。
【００１５】
１９９３年、BioChem and Glaxo の Siddiqui らは、アデノシンデアミナーゼを用いてシス−２，６−ジアミノプリンジオキソランを選択的に脱アミノ化できることを発表した。Siddiqui ら、「Antiviral Optically Pure dioxolane Purine Nucleoside Analogues」, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, Vol. 3(8), pp 1543-1546 (1993)。
【００１６】
（−）−（２Ｒ，４Ｒ）−２−アミノ−９−［（２−ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］アデニン（ＤＡＰＤ）は、逆転写酵素阻害剤（ＲＴＩ）として、インビトロで、ＨＩＶ−１の複製を選択的に阻害する。ＤＡＰＤは、至る所に存在している酵素であるアデノシンデアミナーゼによりインビボで脱アミノ化されて（−）−β−Ｄ−ジオキソラングアニン（ＤＸＧ）を生じ、これが引き続いて対応する５’−トリホスフェート（ＤＸＧ−ＴＰ）に変換されると考えられている。ＤＸＧ−ＴＰは、Ｋｉ値０．０１９μＭを示す、ＨＩＶ逆転写酵素（ＨＩＶ−ＲＴ）の強力な阻害剤であることが生化学的解析により示されている。
【００１７】
【化３】
Triangle Pharmaceuticals, Inc. (Durham, N. C.) は、現在、Abbott Laboratories, Inc. と提携している Emory 大学からの実施許諾契約のもと、上記化合物をＨＩＶとＨＢＶ感染の治療用として開発している。
（リバビリン）
リバビリン（Ribavirin）（１−β−Ｄ−リボフラノシル−１，２，４−トリアゾール−３−カルボキサミド）は、商品名ビラゾール（Virazole）（The Merck Index, 第１１版, Budavari S. 編, Merck & Co., Inc., Rahway, NJ, p1304, 1989）で販売されている、インターフェロンを誘導せず広域抗ウイルス性を有する合成ヌクレオシド類似体である。米国特許第 3,798,209 号及び RE29,835 には、リバビリンが開示され、特許請求されている。米国においては、リバビリンは、子供におけるある種の型の呼吸性ウイルス感染症を治療するためのエーロゾル形態として最初に承認された。リバビリンは構造的にグアノシンに類似しており、フラビウイルス科のウイルスを包含する数種類のＤＮＡウイルスとＲＮＡウイルスに対するインビトロ活性を有している（Gary L. Davis, Gastroenterology, 118：S104-S114, 2000)。リバビリンは、４０％の患者において、血清アミノトランスフェラーゼ濃度を正常値まで下げるが、ＨＣＶ−ＲＮＡの血清中濃度は下げない（Gary L. Davis, Gastroenterology, 118：S104-S114、2000)。従って、ウイルス性ＲＮＡの濃度を下げる上で、リバビリン単独では有効ではない。抗ＨＩＶ治療として、リバビリンとＤＤＩの併用が研究されている。最近、それは、Ａ型肝炎、Ｂ型肝炎及びＣ型肝炎に対して活性を示すことが示された。エイズ危機の最初の頃から、抗ＨＩＶ治療としてリバビリンが使用されてきた。しかしながら、リバビリンは、単独療法として使用した場合、ＨＩＶに対して有効ではないということがいくつかの対照比較試験により示されている。リバビリンは、Ｔ４細胞、Ｔ８細胞又はｐ２４抗原には効果がない。
【００１８】
ＨＣＶ感染症の治療におけるＩＦＮとリバビリンの併用は、ＩＦＮの投薬を受けたことが無い患者の治療において有効であることが報告されている（Battaglia, A. M. ら, Ann. Pharmacother., 34：487-494, 2000)。肝炎にかかる前と組織学的な疾患が存在する場合のいずれにおいても、結果はこの併用治療に関して有望である（Berenguer, M. ら, Antivir. Ther., 3(Suppl. 3)：125-136, 1998）。併用療法の副作用としては、溶血、インフルエンザ様症状、貧血及び疲労などがある（Gary L. Davis., Gastroenterology, 118：S104-S114, 2000）。
【００１９】
【化４】
（マイコフェノール酸）
マイコフェノール酸（６−（４−ヒドロキシ−６−メトキシ−７−メチル−３−オキソ−５−フタラニル）−４−メチル−４−ヘキサン酸）は、イノシン一リン酸脱水素酵素（「ＩＭＰＤＨ」）を阻害することによってグアノシン一リン酸のデノボ合成の速度を低下させることが知られている。マイコフェノール酸は、リンパ球の増殖も減じる。
【００２０】
【化５】
科学者たちにより、マイコフェノール酸は、インビトロでアバカビル（Ｚｉａｇｅｎ）と組み合わせた場合に相乗作用を示すことが示された。マイコフェノール酸は、ＤＮＡの本質的な基礎単位の１つであるグアノシンを枯渇させる。アバカビルはグアノシンの類似体であり、治療効果を有するためには、アバカビル自体が体内の天然産物であるグアノシンと競合しなければならない。マイコフェノール酸は、天然グアノシンを枯渇させることにより、細胞によるアバカビルの取り込みを改善する。科学者たちは、マイコフェノール酸とアバカビルの組み合わせはアバカビル抵抗性ウイルスに対して高い活性を有するということを確認した。しかしながら、同様にマイコフェノール酸がチミジンのリン酸化を阻害することにより、とりわけ、マイコフェノール酸とジドブジンの組み合わせ又はマイコフェノール酸とスタブジンの組み合わせは拮抗的であった。第３９回抗菌薬および化学療法に関する学術会議（１９９９年９月２６〜２９日, San Francisco, California）。Heredia, A., Margolis, D. M., Oldach, D., Hazen, R. 及び Redfield, R. R. (1999) 「Abacavir in combination with the IMPDH inhibitor mycophenolic acid is active against multi-drug resistant HIV」, J Acquir Immune Defic Syndr., 22：406-7。Margolis, D. M., Heredia, A., Gaywee, J., Oldach, D., Drusano, G. 及び Redfield, R. R. (1999) 「Abacavir and mycophenolic acid, an inhibitor of inosine monophosphate dehydrogenase, have profound and synergistic anti- HIV activity」, J Acquir Immune Defic Syndr., 21：362-370。
【００２１】
米国特許第 4,686,234 号には、マイコフェノール酸の様々な誘導体、その合成、並びに、その、自己免疫疾患、乾癬及び炎症性疾患（特に慢性関節リューマチなど）、腫瘍及びウイルス感染の治療における使用、及び、同種異系移植片拒絶反応を治療するための使用が記載されている。
【００２２】
１９９５年５月５日、Morris らは、米国特許第 5,665,728 号において、増殖抑制有効量のラパマイシン単独又はマイコフェノール酸と併用した増殖抑制有効量のラパマイシンを投与することによる、哺乳動物の過増殖性血管系疾患を予防又は治療する方法を開示した。
【発明の開示】
【発明が解決しようとする課題】
【００２３】
ＨＩＶ蔓延の世界的な驚異に鑑みて、本発明の目的は、ＨＩＶ感染症を治療するための新しい方法と組成物を提供することである。
【００２４】
本発明の別の目的は、ＨＩＶ薬剤抵抗性株によるＨＩＶ感染症を治療するための方法及び組成物提供することである。
【課題を解決するための手段】
【００２５】
薬剤抵抗性株のＨＩＶにβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルヌクレオシドとＩＭＰＤＨ阻害剤の組み合わせを与えた時に、当該薬剤抵抗性株のＨＩＶが薬剤を受けたことがないウイルスの反応を示すことが意外にも見いだされた。一つの非限定的な実施態様においては、上記ＨＩＶ株はβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルヌクレオシドに対して抵抗性である。
【００２６】
従って、本発明は、感染宿主、特にヒトにおける、ＨＩＶ感染症、特に、ＨＩＶ薬剤抵抗性株（例えば、非限定的に、ＨＩＶのＤＡＰＤ及び／又はＤＸＧ抵抗性株）によるＨＩＶ感染症を治療又は予防するための組成物及び方法に関し、当該方法は、場合により製薬上許容される担体又は希釈剤の中の、有効量の式：
【００２７】
【化６】
［式中、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、ＮＨ_２又はＮＲ^１Ｒ^２であり、Ｒ^１及びＲ^２は独立して、水素、アルキル又はシクロアルキルであり、Ｒ^３は、Ｈ、アルキル、アリール若しくはアシルであるか、又はモノホスフェート、ジホスフェート若しくはトリホスフェートを包含するホスフェートであるか、又はリン脂質を包含する安定化されたホスフェート部分構造、又はエーテル脂質である］で表されるβ−Ｄ−ジオキソラニルプリン１，３−ジオキソラニルヌクレオシド（「β−Ｄ−１，３−ジオキソラニルヌクレオシド類」）又はその製薬上許容される塩若しくはプロドラッグをイノシン一リン酸脱水素酵素（ＩＭＰＤＨ）阻害剤と併用して又は交互に投与することを含んでなる。
【００２８】
一実施態様においては、上記エナンチオマー的に富化されているβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリン、特にＤＡＰＤを、ＨＩＶ−１の野生型又は突然変異株に対する試験においてＤＸＧのＥＣ_５０を効果的に引き下げるＩＭＰＤＨ阻害剤、例えば、リバビリン、マイコフェノール酸、ベンズアミドリボシド、チアゾフリン、セレナゾフリン、５−エチニル−１−β−Ｄ−リボフラノシルイミダゾール−４−カルボキサミド（ＥＩＣＡＲ）又は（Ｓ）−Ｎ−３−［３−（３−メトキシ−４−オキサゾル−５−イル−フェニル）−ウレイド］−ベンジル−カルバミン酸テトラヒドロフラン−３−イル−エステル（ＶＸ−４９７）と併用して又は交互に投与する。
【００２９】
一実施態様においては、上記ＩＭＰＤＨ阻害剤はマイコフェノール酸である。本発明の別の好ましい実施態様においては、上記ＩＭＰＤＨ阻害剤はリバビリンである。好ましい実施態様においては、上記ヌクレオシドは上記ＩＭＰＤＨ阻害剤と併用して投与する。好ましい実施態様においては、上記ヌクレオシドはＤＡＰＤである。
【００３０】
別の実施態様においては、上記エナンチオマー的に富化されているβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリン、特にＤＡＰＤを、グアノシン又はデオキシグアノシンヌクレオチドのデノボ合成の速度を低下させる化合物と併用して又は交互に投与する。
【００３１】
好ましい実施態様においては、ＤＡＰＤを、グアノシンヌクレオチドのデノボ合成の速度を低下させるリバビリン又はマイコフェノール酸と併用して又は交互に投与する。
【００３２】
さらに別の実施態様においては、上記エナンチオマー的に富化されているβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリン、特にＤＡＰＤを、ＤＸＧ−ＴＰの細胞内濃度を効果的に上昇させる化合物と併用して又は交互に投与する。
【００３３】
さらに別の好ましい実施態様においては、ＤＡＰＤを、ＤＸＧ−ＴＰの細胞内濃度を効果的に上昇させるリバビリン又はマイコフェノール酸と併用して又は交互に投与する。
【００３４】
例えば、薬物の上記組み合わせを用いて、ＨＩＶのＤＡＰＤ抵抗性株及びＤＸＧ抵抗性株によるＨＩＶ感染症を治療することができることも見いだされた。ＨＩＶのＤＡＰＤ抵抗性株及びＤＸＧ抵抗性株は、本明細書において開示されている薬物の組み合わせで処理した後は、薬物を受けたことのないウイルスの特性を示す。
【００３５】
従って、本発明のさらに別の実施態様においては、エナンチオマー的に富化されているβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリン、特にＤＡＰＤを、ＨＩＶ−１突然変異株において観察される薬剤抵抗性を効果的に無効にするＩＭＰＤＨ阻害剤と併用して又は交互に投与する。
【００３６】
本発明のさらに別の実施態様においては、エナンチオマー的に富化されているβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリン、特にＤＡＰＤを、ＨＩＶ−１突然変異株において観察されるＤＡＰＤ又はＤＸＧ薬剤抵抗性を効果的に無効にするＩＭＰＤＨ阻害剤と併用して又は交互に投与する。
【００３７】
一般に、交互に行う療法に際しては、有効な投与量の各薬剤を逐次的に投与するが、併用療法においては、有効な投与量の２種以上の薬剤を一緒に投与する。投与量は、各薬剤の吸収速度、生体内分布速度、代謝速度及び排出速度などの要因に依存するだけでなく、当業者に知られている別の要因にも依存する。投与量は、また、緩和すべき状態の重症度に応じても変わるということは注意すべきである。さらに当然のことながら、任意の特定の患者に対して、特定の薬剤投与計画及びスケジュールは、各個人の必要性と当該組成物の投与者又は当該組成物の投与の管理者の専門的な判断に従って、時間の経過に伴って調整されるべきである。適切な投与量の範囲の例は、学術文献や医師用卓上参考書（Physicians Desk Reference）の中に見いだすことができる。本明細書中に記載されている他の化合物の適切な投与量の範囲の多くの例も、公知文献中に見いだすことができるか、又は、公知方法により確認することができる。これらの投与量範囲は、望ましい結果を得るのに好ましいように変更することができる。
【００３８】
本明細書に開示されている併用又は交互の投与計画は、ＨＩＶ感染症と別の関連した状態、例えば、エイズ関連症候群（ＡＲＣ）、持続性全身性リンパ節腫（ＰＧＬ）、エイズ関連神経学的状態、抗ＨＩＶ抗体陽性状態、ＨＩＶ陽性状態、カポジ肉腫、血小板減少性紫斑病及び日和見感染などを予防又は治療するのに有用である。さらに、これらの化合物又は配合物を予防的に用いて、抗ＨＩＶ抗体若しくはＨＩＶ抗原が陽性である個体又はＨＩＶに曝されたことのある個体における臨床的疾患の進行を止めるか又は遅らせることができる。
【発明を実施するための最良の形態】
【００３９】
薬剤抵抗性株のＨＩＶにβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルヌクレオシドとＩＭＰＤＨ阻害剤の組み合わせを与えた時に、当該薬剤抵抗性株のＨＩＶが薬剤を受けたことがないウイルスの反応を示すことが意外にも見いだされた。一つの非限定的な実施態様においては、上記ＨＩＶ株はβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルヌクレオシドに対して抵抗性である。
【００４０】
ＩＭＰＤＨは、グアノシンヌクレオチド合成における必要なステップであるイノシン−５’−一リン酸（ＩＭＰ）のキサントシン−５’−一リン酸（ＸＭＰ）へのＮＡＤ依存性酸化を触媒する。イノシン一リン酸脱水素酵素（ＩＭＰＤＨ）を阻害することにより細胞内のデオキシグアノシン５’−三リン酸（ｄＧＴＰ）の濃度を下げるとＤＸＧ−ＴＰの細胞内濃度が効果的に上昇し、それによって、ＨＩＶ複製の阻害が増強されることが見いだされた。しかしながら、このことだけでは、ＩＭＰＤＨ阻害剤の存在下に投与されたβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルヌクレオシドに対する、ＨＩＶの薬剤抵抗性形態の予期しない感受性を説明することはできない。
【００４１】
従って、本発明は、宿主、例えば哺乳動物、特にヒトにおける、ＨＩＶ感染症、特に、ＨＩＶ薬剤抵抗性株によるＨＩＶ感染症、例えば、ＨＩＶのＤＡＰＤ及び／又はＤＸＧ抵抗性株によるＨＩＶ感染症を治療又は予防するための組成物及び方法に関し、当該方法は、場合により製薬上許容される担体又は希釈剤の中の、有効量の式：
【００４２】
【化７】
［式中、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、ＮＨ_２又はＮＲ^１Ｒ^２であり、Ｒ^１及びＲ^２は独立して、水素、アルキル又はシクロアルキルであり、Ｒ^３は、Ｈ、アルキル、アリール若しくはアシルであるか、又はモノホスフェート、ジホスフェート若しくはトリホスフェートを包含するホスフェートであるか、又はリン脂質を包含する安定化されたホスフェート部分構造、又はエーテル脂質である］で表されるエナンチオマー的に富化されているβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリン又はその製薬上許容される塩若しくはプロドラッグをイノシン一リン酸脱水素酵素（ＩＭＰＤＨ）阻害剤と併用して又は交互に投与することを含んでなる。
【００４３】
一実施態様においては、上記エナンチオマー的に富化されているβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリン、特にＤＡＰＤを、ＨＩＶ−１の野生型又は突然変異株に対する試験においてＤＸＧのＥＣ_５０を効果的に引き下げるＩＭＰＤＨ阻害剤、例えば、リバビリン、マイコフェノール酸、ベンズアミドリボシド、チアゾフリン、セレナゾフリン、５−エチニル−１−β−Ｄ−リボフラノシルイミダゾール−４−カルボキサミド（ＥＩＣＡＲ）又は（Ｓ）−Ｎ−３−［３−（３−メトキシ−４−オキサゾル−５−イル−フェニル）−ウレイド］−ベンジル−カルバミン酸テトラヒドロフラン−３−イル−エステル（ＶＸ−４９７）と併用して又は交互に投与する。
【００４４】
好ましい実施態様においては、上記ＩＭＰＤＨ阻害剤はマイコフェノール酸である。本発明の別の好ましい実施態様においては、上記ＩＭＰＤＨ阻害剤はリバビリンである。好ましい実施態様においては、上記ヌクレオシドは上記ＩＭＰＤＨ阻害剤と併用して投与する。好ましい別の実施態様においては、上記ヌクレオシドはＤＡＰＤである。
【００４５】
別の実施態様においては、上記エナンチオマー的に富化されているβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリン、特にＤＡＰＤを、グアノシン及びデオキシグアノシンヌクレオチドのデノボ合成の速度を低下させる化合物と併用して又は交互に投与する。
【００４６】
好ましい実施態様においては、ＤＡＰＤを、グアノシンヌクレオチドのデノボ合成の速度を低下させるリバビリン又はマイコフェノール酸と併用して又は交互に投与する。
【００４７】
さらに別の実施態様においては、上記エナンチオマー的に富化されているβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリン、特にＤＡＰＤを、ＤＸＧ−ＴＰの細胞内濃度を効果的に上昇させる化合物と併用して又は交互に投与する。
【００４８】
さらに別の好ましい実施態様においては、ＤＡＰＤを、ＤＸＧ−ＴＰの細胞内濃度を効果的に上昇させるリバビリン又はマイコフェノール酸と併用して又は交互に投与する。
【００４９】
例えば、薬物の上記組み合わせを用いて、ＨＩＶのＤＡＰＤ抵抗性株及びＤＸＧ抵抗性株によるＨＩＶ感染症を治療することができることも見いだされた。ＨＩＶのＤＡＰＤ抵抗性株及びＤＸＧ抵抗性株は、本明細書において開示されている薬物の組み合わせで処理した後は、薬物を受けたことのないウイルスの特性を示す。
【００５０】
従って、本発明のさらに別の実施態様においては、上記エナンチオマー的に富化されているβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリン、特にＤＡＰＤを、ＨＩＶ−１突然変異株において観察される薬剤抵抗性を効果的に無効にするＩＭＰＤＨ阻害剤と併用して又は交互に投与する。
【００５１】
本発明のさらに別の実施態様においては、上記エナンチオマー的に富化されているβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリン、特にＤＡＰＤを、ＨＩＶ−１突然変異株において観察されるＤＡＰＤ又はＤＸＧ薬剤抵抗性を効果的に無効にするＩＭＰＤＨ阻害剤と併用して又は交互に投与する。
（Ｉ．定義）
本明細書中で使用されている用語「保護されている」は、別段の定義が無い限り、酸素原子、窒素原子又はリン原子のさらなる反応を妨げるためか又は別の目的のために、酸素原子、窒素原子又はリン原子に付けられた基を表す。極めて多種多様な酸素保護基及び窒素保護基が有機合成の当業者には知られている。
【００５２】
本明細書中で使用されている用語「ハロ」には、クロロ、ブロモ、ヨード及びフルオロが包含される。
【００５３】
本明細書中で使用されている用語「アルキル」は、別段の断りが無い限り、直鎖、分枝鎖又は環状の、第一級、第二級又は第三級の、典型的にはＣ_１−１０の飽和炭化水素を表し、特に、メチル、トリフルオロメチル、エチル、プロピル、イソプロピル、シクロプロピル、ブチル、イソブチル、ｔ−ブチル、ペンチル、シクロペンチル、イソペンチル、ネオペンチル、ヘキシル、イソヘキシル、シクロヘキシル、シクロヘキシルメチル、３−メチルペンチル、２，２−ジメチルブチル、及び、２，３−ジメチルブチルなどが包含される。上記用語には、置換されているアルキル基と置換されていないアルキル基のいずれもが包含される。アルキル基に置換することができる部分構造は、ヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホン酸、スルフェート、ホスホン酸、ホスフェート又はホスホネートからなる群から選択され、これらの部分構造は、保護されていないか、又は、例えば、Greene らによる Protective Groups in Organic Synthesis（John Wiley and Sons, Second Edition, 1991）中に教示されているように、当業者が知っているように、必要に応じて保護されている。前記文献は、参照により本明細書に組み入れる。
【００５４】
本明細書中で使用されている用語「低級アルキル」は、別段の断りが無い限り、飽和した、直鎖、分枝鎖、又は適切な場合には環状（例えば、シクロプロピル）のＣ_１−４のアルキル基を表し、これには、置換されている形態と置換されていない形態のいずれもが包含される。アルキルが適切な部分構造である場合は、別段の断りが無い限り、低級アルキルが好ましい。同様に、アルキル又は低級アルキルが適切な部分構造である場合は、置換されていないアルキル又は低級アルキルが好ましい。
【００５５】
本明細書中で使用されている用語「アリール」は、別段の断りが無い限り、フェニル、ビフェニル又はナフチルを表し、好ましくはフェニルを表す。前記用語には、置換されている部分構造と置換されていない部分構造のいずれもが包含される。前記アリール基は、ヒドロキシル、アミノ、アルキルアミノ、アリールアミノ、アルコキシ、アリールオキシ、ニトロ、シアノ、スルホン酸、スルフェート、ホスホン酸、ホスフェート又はホスホネートからなる群から選択される１以上の部分構造で置換することができる。前記部分構造は、保護されていないか、又は、例えば、Greene らによる Protective Groups in Organic Synthesis（John Wiley and Sons, Second Edition, 1991）中に教示されているように、当業者が知っているように、必要に応じて保護されている。
【００５６】
用語「アシル」はカルボン酸エステルを表し、当該カルボン酸エステルにおいては、エステル基のカルボニル以外の部分は、直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくは低級アルキル、アルコキシアルキル（例えば、メトキシメチル）、アラルキル（例えば、ベンジル）、アリールオキシアルキル（例えば、フェノキシメチル）及びアリール（例えば、ハロゲン（例えば、Ｆ、Ｃｌ、Ｂｒ又はＩ）、Ｃ_１−４アルキル若しくはＣ_１−４アルコキシ、スルホネートエステル（例えば、アルキルスルホニル若しくはアラルキルスルホニル、例えば、メタンスルホニル）、モノホスフェートエステル、ジホスフェートエステル若しくはトリホスフェートエステル、トリチル若しくはモノメトキシトリチル、置換ベンジル、トリアルキルシリル（例えば、ジメチル−ｔ−ブチルシリル）又はジフェニルメチルシリルで場合により置換されているフェニル）から選択される。前記エステルのアリール基は、最も適切にはフェニル基からなる。用語「低級アシル」は、カルボニル以外の部分が低級アルキルであるアシル記を表す。
【００５７】
用語「エナンチオマー的に富化されている」は、本明細書を通して、９５％以上、好ましくは９６％以上、さらに好ましくは９７％以上、さらに好ましくは９８％以上、さらに好ましくは９９％以上の単一エナンチオマーを含む化合物を説明するために使用されている。本明細書において特定の立体配置（Ｄ又はＬ）を有するヌクレオシドについて言及する場合、別段の断りが無い限り、当該ヌクレオシドは、エナンチオマー的に富化されているヌクレオシドであるとみなされる。
【００５８】
本明細書で使用されている用語「宿主」は、細胞系及び動物（好ましくは、ヒト）を包含する、ウイルスがその中で複製できる単細胞生物又は多細胞生物を表す。あるいは、上記宿主はウイルスゲノムの一部を有することができ、その際、前記ウイルスゲノムの複製又は機能は、本発明にかかる化合物によって改変される。用語「宿主」は、特に、感染した細胞、ウイルスゲノムの全て又は一部をトランスフェクトされた細胞を表す。当該用語は、動物、特に、霊長目の哺乳動物（例えば、チンパンジーなど）及びヒトを表す。本発明を動物に適用する場合は大抵、上記宿主はヒト患者である。しかしながら、特定の適応症における獣医学的な適用も本発明により明らかに期待される（例えば、チンパンジーにおけるサル免疫不全ウイルス感染症）。
【００５９】
製薬上許容されるプロドラッグは、上記宿主体内で代謝（例えば、加水分解又は酸化）されて本発明にかかる化合物を形成する化合物を意味する。プロドラッグの典型的な例としては、本発明にかかる活性化合物の官能基部分に生物学的に不安定な保護基を有する化合物を挙げることができる。プロドラッグには、酸化されて、還元されて、アミノ化されて、脱アミノ化されて、ヒドロキシル化されて、脱ヒドロキシル化されて、加水分解されて、脱水分解（dehydrolyzed）されて、アルキル化されて、脱アルキル化されて、アシル化されて、脱アシル化されて、リン酸化されて、又は、脱リン酸化されて、本発明にかかる活性化合物を生じる化合物が包含される。製薬上許容される塩には、製薬上許容される無機又は有機の塩基及び酸から誘導される塩が包含される。適切な塩としては、製薬業界でよく知られている多数の酸の中で、とりわけ、アルカリ金属、例えば、カリウム及びナトリウム、アルカリ土類金属、例えば、カルシウム及びマグネシウムなどから誘導される塩を挙げることができる。本発明にかかる化合物は、抗ウイルス活性を有しているか、又は、そのような活性を示す化合物に代謝される。
（ＩＩ．製薬上許容される塩及びプロドラッグ）
本明細書に開示されているいずれかの化合物が安定な非毒性の酸性塩（acid salt）又は塩基性塩（base salt）を形成するのに充分な塩基性又は酸性を有している場合、本発明にかかる化合物は製薬上許容される塩として投与するのが適切であり得る。製薬上許容される塩の例は、酸を用いて形成される有機酸付加塩であり、前記酸は、生理学的に許容されるアニオン、例えば、トシラート、メタンスルホン酸イオン、酢酸イオン、クエン酸イオン、マロン酸イオン、酒石酸イオン、コハク酸イオン、安息香酸イオン、アスコルビン酸イオン、α−ケトグルタル酸イオン及びα−グリセロリン酸イオンなどを形成する。硫酸塩、硝酸塩、重炭酸塩及び炭酸塩などの適切な無機塩も形成され得る。
【００６０】
製薬上許容される塩は、当業界でよく知られている標準的な方法を用いて、例えば、アミンなどの充分に塩基性である化合物を生理学的に許容されるアニオンを生じる適切な酸と反応させることにより得ることができる。カルボン酸のアルカリ金属（例えば、ナトリウム、カリウム又はリチウム）塩又はアルカリ土類金属（例えば、カルシウム）塩も調製することができる。
【００６１】
本明細書に記載されているいずれのヌクレオシドも、活性、生物学的利用能及び安定性を向上させるために、あるいは、当該ヌクレオシドの性質を変更するために、ヌクレオチドプロドラッグとして投与することができる。多くのヌクレオチドプロドラッグリガンドが知られている。一般に、上記化合物のヒドロキシル基又は上記ヌクレオシドのモノホスフェート、ジホスフェート若しくはトリホスフェートを、アルキル化するか、アシル化するか又は別の親油性修飾することにより、当該ヌクレオチドの安定性が向上する。上記ホスフェート部分の１個以上の水素と置き換えることができる置換基の例は、アルキル、アリール、ステロイド類、炭水化物（例えば、糖類）、１，２−ジアシルグリセロール及びアルコール類である。多くのものが、R. Jones 及び N. Bischofberger, Antiviral Research, 27 (1995) 1-17 に記載されている。これらのうちのいずれも、本明細書に開示されているヌクレオシドと組み合わせて用いて所望の効果を達成することができる。
【００６２】
本明細書に記載されている併用療法又は交互療法で使用するための化合物のいずれもアシル化されているプロドラッグとして投与することができる。ここで、用語「アシル」はカルボン酸エステルを表し、当該カルボン酸エステルにおいては、エステル基のカルボニル以外の部分は、直鎖、分枝鎖若しくは環状のアルキル若しくは低級アルキル、アルコキシアルキル（例えば、メトキシメチル）、アラルキル（例えば、ベンジル）、アリールオキシアルキル（例えば、フェノキシメチル）及びアリール（例えば、ハロゲン、Ｃ_１−４アルキル若しくはＣ_１−４アルコキシ、スルホネートエステル（例えば、アルキルスルホニル若しくはアラルキルスルホニル、例えばメタンスルホニル）、モノホスフェートエステル、ジホスフェートエステル若しくはトリホスフェートエステル、トリチル若しくはモノメトキシトリチル、置換ベンジル又はトリアルキルシリル（例えば、ジメチル−ｔ−ブチルシリル）で場合により置換されているフェニル）から選択される。
【００６３】
本発明にかかる活性ヌクレオシド又は別のヒドロキシル含有化合物は、また、以下に示す参考文献（当該参考文献は、参照により本明細書に組み入れる）に開示されているように、エーテル脂質（特に、ヌクレオシドの５’−エーテル脂質又は５’−ホスホエーテル脂質）として供給することもできる。Kucera, L. S., N. Iyer, E. Leake, A. Raben, Modest E. K., D. L. W. 及び C. Piantadosi, 1990,「Novel membrane-interactive ether lipid analogs that inhibit infectious HIV-1 production and induce defective virus formation」, AIDS Res. Hum. Retro Viruses, 6：491-501；Piantadosi, C., J. Marasco C. J., S. L. Morris-Natschke, K. L. Meyer, F. Gumus, J. R. Surles, K. S. Ishaq, L. S. Kucera, N. Iyer, C. A. Wallen, S. Piantadosi, 及び E. J. Modest, 1991,「Synthesis and evaluation of novel ether lipid nucleoside conjugates for anti-HIV activity」, J. Med. Chem., 34：1408-1414；Hosteller, K. Y., D. D. Richman, D. A. Carson, L. M. Stuhmiller, G. M. T. van Wijk 及び H. van den Bosch, 1992,「Greatly enhanced inhibition of human immunodeficiency virus type 1 replication in CEM and HT4-6C cells by 3'-deoxythymidine diphosphate dimyristoylglycerol, a lipid prodrug of 3,-deoxythymidine」, Antimicrob. Agents Chemother., 36：2025-2029；Hostetler, K. Y., L. M. Stuhmiller, H. B. Lenting, H. van den Bosch 及び D. D. Richman, 1990,「Synthesis and antiretroviral activity of phospholipid analogs of azidothymidine and other antiviral nucleosides」, J. Biol. Chem., 265：61127。
【００６４】
上記ヌクレオシド又は別のヒドロキシル若しくはアミン含有化合物の、好ましくは、当該ヌクレオシドの５’−ＯＨの位置に、共有結合的に組み込むことができる適切な親油性置換基又は親油性調製物を開示している米国特許の非限定的な例としては、米国特許第 5,149,794 号（１９９２年９月２２日, Yatvin ら）；米国特許第 5,194,654 号（１９９３年３月１６日, Hostetler ら）；米国特許第 5,223,263 号（１９９３年６月２９日, Hostetler ら）；米国特許第 5,256,641 号（１９９３年１０月２６日, Yatvin ら）；米国特許第 5,411,947 号（１９９５年５月２日, Hostetler ら）；米国特許第 5,463,092 号（１９９５年１０月３１日, Hostetler ら）；米国特許第 5,543,389 号（１９９６年８月６日, Yatvin ら）；米国特許第 5,543,390 号（１９９６年８月６日, Yatvin ら）；米国特許第 5,543,391 号（１９９６年８月６日, Yatvin ら）；及び、米国特許第 5,554,728 号（１９９６年９月１０日; Basava ら）などを挙げることができる。前記米国特許の全ては、参照により本明細書に組み入れる。本発明にかかる上記ヌクレオシドに結合させることができる親油性置換基、又は親油性調製物を開示している外国特許出願としては、国際公開第 89/02733 号、国際公開第 90/00555 号、国際公開第 91/16920 号、国際公開第 91/18914 号、国際公開第 93/00910 号、国際公開第 94/26273 号、国際公開第 96/15132 号、欧州特許出願公開第 0 350 287 号、欧州特許出願公開第 93917054.4 号 及び国際公開第 91/19721 号などを挙げることができる。
【００６５】
ヌクレオチドプロドラッグの非限定的な例は以下に示す参考文献に記載されている。
Ho, D. H. W. (1973)「Distribution of Kinase and deaminase of l-β-D-arabinofuranosylcytosine in tissues of man and muse」, Cancer Res., 33, 2816-2820； Holy, A. (1993)「Isopolar phosphorous-modified nucleotide analogues」, In: De Clercq (Ed.), Advances in Antiviral Drug Design, Vol. I, JAI Press, pp. 179-231； Hong, C. I., Nechaev, A. 及び West, C. R. (1979a)「Synthesis and antitumor activity of 1-β-D-arabino-furanosylcytosine conjugates of cortisol and cortisone」, Bicohem. Biophys. Rs. Commun., 88, 1223-1229； Hong, C. I., Nechaev, A., Kirisits, A. J. Buchheit, D. J. 及び West, C. R. (1980)「Nucleoside conjugates as potential antitumor agents. 3. Synthesis and antitumor activity of 1-(β-D-arabinofuranosyl)cytosine conjugates of corticosteriods and selected lipophilic alcohols」, J. Med. Chem., 28, 171-177； Hosteller, K. Y., Stuhmiller, L. M., Lenting, H. B. M. van den Bosch, H. 及び Richman, J. Biol. Chem., 265, 6112-6117； Hosteller, K. Y., Carson, D. A. 及び Richman, D. D. (1991)「Phosphatidylazidothymidine: mechanism of antiretroviral action in CEM cells」, J. Biol Chem., 266, 11714-11717； Hosteller, K. Y., Korba, B. Sridhar, C., Gardener, M. (1994a)「Antiviral activity of phosphatidyl-dideoxycytidine in hepatitis B-infected cells and enhanced hepatic uptake in mice」, Antiviral Res., 24, 59-67； Hosteller, K. Y., Richman, D. D., Sridhar. C. N. Felgner, P. L. Felgner, J., Ricci, J., Gardener, M. F. Selleseth, D. W. 及び Ellis, M. N. (1994b)「Phosphatidylazidothymidine and phosphatidyl-ddC: Assessment of uptake in mouse lymphoid tissues and antiviral activities in human immunodeficiency virus-infected cells and in rauscher leukemia virus-infected mice」, Antimicrobial Agents Chemother., 38, 2792-2797； Hunston, R. N., Jones, A. A. McGuigan, C., Walker, R. T., Balzarini, J. 及び DeClercq, E. (1984)「Synthesis and biological properties of some cyclic phosphotriesters derived from 2'-deoxy-5-fluorouridine」, J. Med. Chem., 27, 440-444； Ji, Y. H., Moog, C., Schmitt, G., Bischoff, P. 及び Luu, B. (1990)「Monophosphoric acid esters of 7-β-hydroxycholesterol and of pyrimidine nucleoside as potential antitumor agents: synthesis and preliminary evaluation of antitumor activity」, J. Med. Chem., 33, 2264-2270； Jones, A. S., McGuigan, C., Walker, R. T., Balzarini, J. 及び DeClercq, E. (1984)「Synthesis, properties, and biological activity of some nucleoside cyclic phosphoramidates」, J. Chem. Soc. Perkin Trans. I, 1471-1474； Juodka, B. A. 及び Smrt, J. (1974)「Synthesis of diribonucleoside phosph (P→N) amino acid derivatives」, Coll. Czech. Chem. Comm., 39, 363-968； Kataoka, S., Imai, J., Yamaji, N., Kato, M., Saito, M., Kawada, T. 及び Imai, S. (1989)「Alkylated cAMP derivatives; selective synthesis and biological activities」, Nucleic Acids Res. Sym. Ser., 21, 1-2； Kataoka, S., Uchida,「(cAmP) benzyl and methyl triesters」, Heterocycles, 32, 1351-1356； Kinchington, D., Harvey, J. J., O'Connor, T. J., Jones, B. C. N. M., Devine, K. G., Taylor-Robinson D., Jeffries, D. J. 及び McGuigan, C. (1992)「Comparison of antiviral effects of zidovudine phosphoramidate and phosphorodiamidate derivatives against HIV and ULV in vitro」, Antiviral Chem. Chemother., 3, 107-112； Kodama, K., Morozumi, M., Saithoh, K. I., Kuninaka, H., Yosino, H. 及び Saneyoshi, M. (1989)「Antitumor activity and pharmacology of 1-β-D-arabinofuranosylcytosine-5'-stearylphosphate; an orally active derivative of 1-β-D-arabinofuranosylcytosine」, Jpn. J. Cancer Res., 80, 679-685； Korty, M. 及び Engels, J. (1979)「The effects of adenosine- and guanosine 3',5' phosphoric and acid benzyl esters on guinea-pig ventricular myocardium」, Naunyn-Schmieileberg's Arch. Plaarmacol., 310, 103-111； Kumar, A., Goe, P. L., Jones, A. S. Walker, R. T. Balzarini, J. 及び DeClercq, E. (1990)「Synthesis and biological evaluation of some cyclic phosphoramidate nucleoside derivatives」, J. Med. Chem., 33, 2368-2375； LeBec, C. 及び Huynh-Dinh, T. (1991)「Synthesis of lipophilic phosphate triester derivatives of 5-fluorouridine an arabinocytidine as anticancer prodrugs」, Tetrahedron Lett., 32, 6553-6556； Lichtenstein, J., Barner, H. D. 及び Cohen, S. S. (1960)「The metabolism of exogenously supplied nucleotides by Escherichia coli.」, J. Biol. Chem., 235, 457-465； Lucthy, J., Von Daeniken, A., Friederich, J. Manthey, B., Zweifel, J., Schlatter, C. 及び Benn, M. H. (1981)「Synthesis and toxicological properties of three naturally occurring cyanoepithioalkanes」, Mitt. Geg. Lebensmittelunters. Hyg., 72, 131-133 (Chem. Abstr. 95, 127093)； McGigan, C. Tollerfield, S. M. 及び Riley, P. a. (1989)「Synthesis and biological evaluation of some phosphate triester derivatives of the anti-viral drug Ara」, Nucleic Acids Res., 17, 6065-6075； McGuigan, C., Devine, K. G., O'Connor, T. J., Galpin, S. A., Jeffries, D. J. 及び Kinchington, D. (1990a)「Synthesis and evaluation of some novel phosphoramidate derivatives of 3'-azido-3'-deoxythymidine (AZT) as anti-HIV compounds」, Antiviral Chem. Chemother., 1, 107-113； McGuigan, C., O'Connor, T. J., Nicholls, S. R. Nickson, C. 及び Kinchington, D. (1990b)「Synthesis and anti-HIV activity of some novel substituted dialkyl phosphate derivatives of AZT and ddCyd」, Antiviral Chem. Chemother., 1, 355-360； McGuigan, C., Nicholls, S. R., O'Connor, T. J. 及び Kinchington, D. (1990c)「Synthesis of some novel dialkyl phosphate derivative of 3'-modified nucleosides as potential anti-AIDS drugs」, Antiviral Chem. Chemother., 1, 25-33； McGuigan, C., Devin, K. G., O'Connor, T. J., 及び Kinchington, D. (1991)「Synthesis and anti-HIV activity of some haloalkyl phosphoramidate derivatives of 3'-azido-3' deoxythymidine (AZT); potent activity of the trichloroethyl methoxyalaninyl compound」, Antiviral Res., 15, 255-263； McGuigan, C., Pathirana, R. N., Balzarini, J. 及び DeClercq, E. (1993b)「Intracellular delivery of bioactive AZT nucleotides by aryl phosphate derivatives of AZT」, J. Med. Chem., 36, 1048-1052。
【００６６】
抗ＨＩＶ剤であるＡＺＴのリン酸水素アルキル誘導体は、親化合物のヌクレオシド類似体よりも毒性が少ない。Antiviral Chem. Chemother., 5, 271-277； Meyer, R. B., Jr., Shuman, D. A. 及び Robins, R. K. (1973)「Synthesis of purine nucleoside 3',5'-cyclic phosphoramidates」, Tetrahedron Lett., 269-272； Nagyvary, J., Gohil, R. N., Kirchner, C. R. 及び Stevens, J. D. (1973)「Studies on neutral esters of cyclic AMP」, BioChem. Biophys. Res. Commun., 55, 1072-1077； Namane, A., Gouyette, C., Fillion, M. P., Fillion, G. 及び Huynh-Dinh, T. (1992)「Improved brain delivery of AZT using a glycosyl phosphotriester prodrug」, J. Med. Chem., 35, 3039-3044； Nargeot, J., Nerbonne, J. M. Engels, J. 及び Leser, H. A. (1983) Natl. Acad. Sci. U. S. A., 80, 2395-2399； Nelson, K. A., Bentrude, W. G., Stser, W. N. 及び Hutchinson, J. P. (1987)「The question of chair-twist equilibria for the phosphate rings of nucleoside cyclic 3',5'monophosphates. ¹HNAM and x-ray crystallographic study of the diastereomers of thymidine phenyl cyclic 3',5'-monophosphate」, J. Am. Chem. Soc., 109, 4058-4064； Nerbonne, J. M., Richard, S., Nargeot, J. 及び Lester, H. A. (1984)「New photoactivatable cyclic nucleotides produce intracellular jumps in cyclic AMP and cyclic GMP concentrations」, Nature, 301, 74-76； Neumann, J. M., Herv, M., Debouzy, J. C., Guerra, F. I., Gouyette, C., Dupraz, B. 及び Huyny-Dinh, T. (1989)「Synthesis and transmembrane transport studies by NMR of a glycosyl phospholipid of thymidine」, J. Am. Che1n. Soc., 111, 4270-4277； Ohno, R., Tatsumi, N., Hirano, M., Imai, K. Mizoguchi, H., Nakamura, T., Kosaka, M., Takatuski, K., Yamaya, T., Toyama K., Yoshida, T., Masaoka, T.,Hashimoto, S., Ohshima, T., Kimura, I., Yamada, K. 及び Kimura, J. (1991)「Treatment of myelodysplastic syndromes with orally administered l-β-D-arabinouranosylcytosine-5'stearylphosphate」, Oncology, 48, 451-455； Palomino, E., Kessle, D. 及び Horwitz, J. P. (1989)「A dihydropyridine carrier system for sustained delivery of 2',3'dideoxynucleosides to the brain」, J Med. Chem., 32, 22-625； Perkins, R. M., Barney, S., Wittrock, R., Clark, P. H., Levin, R. Lambert, D. M., Petteway, S. R., Serafinowska, H. T., Bailey, S. M., Jackson, S., Harden, M. R. Ashton, R., Sutton, D., Harvey, J. J. 及び Brown, A. G. (1993)「Activity of BRL47923 and its oral prodrug, SB203657A against a rauscher murine leukemia virus infection in mice」, Antiviral Res., 20 (Suppl. I), 84； Piantadosi, C., Marasco, C. J., Jr., Norris-Natschke, S. L., Meyer, K. L., Gumus, F., Surles, J. R., Ishaq,K. S., Kucera, L. S. Iyer, N., Wallen, C. A., Piantadosi, S. 及び Modest, E. J. (1991)「Synthesis and evaluation of novel ether lipid nucleoside conjugates for anti-HIV-1 activity」, J Med. Chem., 34, 1408-1414； Pompon, A., Lefebvre, I., Imbach, J. L., Kahn, S. 及び Farquhar, D. (1994)「Decomposition pathways of the mono- and bis(pivaloyloxymethyl) esters of azidothymidine-5'-monophosphate in cell extract and in tissue culture medium; an application of the 'on-line ISRP-cleaning HPLC technique」, Antiviral Chem Chemother., 5, 91-98； Postemark, T. (1974)「Cyclic AMP and cyclic GMP」, Annu. Rev. Pharmacol., 14, 23-33； Prisbe, E. J., Martin, J. C. M., McGhee, D. P. C., Barker, M. F., Smee, D. F. Duke, A. E., Matthews, T. R. 及び Verheyden, J. P. J. (1986)「Synthesis and antiherpes virus activity of phosphate an phosphonate derivatives of 9-[(1,3-dihydroxy-2-propoxy)methyl]guanine」, J. Med. Chem., 29, 671-675； Pucch, F., Gosselin, G., Lefebvre, I., Pompon, a., Aubertin, A. M. Dirn, 及び Imbach, J. L. (1993)「Intracellular delivery of nucleoside monophosphate through a reductase-mediated activation process」, Antiviral Res., 22, 155-174； Pugaeva, V. P., Klochkeva, S. I., Mashbits, F. D. 及び Eizengart, R. S. (1969)「Toxicological assessment and health standard ratings for ethylene sulfide in the industrial atmosphere」, Gig. Trf. Prof. Zabol., 14, 47-48 (Chem. Abstr., 72, 212)； Robins, R. K. (1984)「The potential of nucleotide analogs as inhibitors of Retro viruses and tumors」, Pharm. Res., 11-18； Rosowsky, A., Kim. S. H., Ross 及び J. Wick, M. M. (1982)「Lipophilic 5'-(alkylphosphate) esters of 1-β-D-arabinofuranosylcytosine and its N⁴-acyl and 2,2'-anhydro-3'-O-acyl derivatives as potential prodrugs」, J Med. Chem., 25, 171-178； Ross, W. (1961)「Increased sensitivity of the walker turnout towards aromatic nitrogen mustards carrying basic side chains following glucose pretreatment」, BioChem. Pharm., 8, 235-240； Ryu, E. K., Ross, R. J., Matsushita, T., MacCoss, M., Hong, C. I. 及び West, C. R. (1982)「Phospholipid-nucleoside conjugates. 3. Synthesis and preliminary biological evaluation of 1-β-D-arabinofuranosylcytosine 5'diphosphate[-], 2-diacylglycerols」, J. Med. Chem., 25, 1322-1329； Saffhill, R. 及び Hume, W. J. (1986)「The degradation of 5-iododeoxyuridine and 5-bromoethoxyuridine by serum from different sources and its consequences for the use of these compounds for incorporation into DNA」, Chem. Biol. Interact., 57, 347-355； Saneyoshi, M., Morozumi, M., Kodama, K., Machida, J., Kuninaka, A. 及び Yoshino, H. (1980)「Synthetic nucleosides and nucleotides. XVI. Synthesis and biological evaluations of a series of 1-β-D-arabinofuranosylcytosine 5'-alkyl or arylphosphates」, Chem. Pharm. Bull., 28, 2915-2923； Sastry, J. K., Nehete, P. N., Khan, S., Nowak, B. J., Plunkett, W., Arlinghaus, R. B. 及び Farquhar, D. (1992)「Membrane-permeable dideoxyuridine 5'-monophosphate analogue inhibits human immunodeficiency virus infection」, Mol. Pharmacol., 41, 441-445； Shaw, J. P., Jones, R. J. Arimilli, M. N., Louie, M. S., Lee, W. A. 及び Cundy, K. C. (1994)「Oral bioavailability of PMEA from PMEA prodrugs in male Sprague-Dawley rats」, 9th Ahyaual AAPS Meeting, San Diego, CA (Abstract)； Shuto, S., Ueda, S., Imamura, S., Fukukawa, K. Matsuda, A. 及び Ueda, T. (1987)「A facile one-step synthesis of 5'phosphatidiylnucleosides by an enzymatic two-phase reaction」, Tetrahedron Lett., 28, 199-202； Shuto, S., Itoh, H., Ueda, S., Imamura, S., Kukukawa, K., Tsujino, M., Matsuda, A. 及び Ueda, T. (1988), Pharm. Bull., 36, 209-217。有用なホスフェートプロドラッグの例は、Ｓ−アシル−２−チオエチル基であり、「ＳＡＴＥ」とも呼ばれる。
(ＩＩＩ．医薬組成物）
本明細書に記載されている疾患のいずれかによる影響を受けているヒト、特に、薬剤抵抗性株のＨＩＶによる感染を受けているヒトは、製薬上許容される担体又は希釈剤の存在下に、ＩＭＰＤＨ阻害剤（例えば、リバビリン又はマイコフェノール酸）と併用して又は交互に、本明細書中で定義されている有効量のβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルヌクレオシド（特に、ＤＡＰＤ又はＤＸＧ）又はその製薬上許容される塩若しくはエステルを投与することにより治療することができる。上記活性物質は、液状形態又は固体形態で、任意の適切な経路、例えば、経口的に、非経口的に、腸内に、静脈内に、皮内に、皮下に、局所的に、鼻内に、又は、直腸内に投与することができる。
【００６７】
上記活性化合物は、治療を受けた患者に重大な毒性作用を引き起こすことなくインビボでのウイルス複製、特にＨＩＶ複製を阻害する治療有効量の化合物を患者に送達するのに充分な量で、製薬上許容される担体又は希釈剤中に含有させる。「阻害する量」は、例えば、本明細書中に記載されているようなアッセイによって測定して、阻害作用を示すのに充分な量の活性化合物を意味する。
【００６８】
本発明にかかる化合物の上記した全ての状態に対する好ましい用量は、１日当たり約１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜約５０ｍｇ／ｋｇ（体重）、好ましくは、１日当たり１ｍｇ／ｋｇ（体重）〜２０ｍｇ／ｋｇ（体重）であり、より一般的には、１日当たり、レシピエントの体重１ｋｇ当たり、０．１ｍｇ〜約１００ｍｇである。製薬上許容される誘導体の効果的な投与量範囲は、送達すべき親化合物であるヌクレオシドの重量に基づいて計算することができる。当該誘導体自体が活性を示す場合は、効果的な投与量は、該誘導体の重量を用いて上記したように見積もることができるか、又は、当業者には公知の別の手段により見積もることができる。
【００６９】
本発明にかかる化合物は、例えば、非限定的に、単位投与形態当たり７ｍｇ〜３０００ｍｇ、好ましくは７０ｍｇ〜１４００ｍｇの活性成分を含有する単位投与形態などの、任意の適切な単位投与形態で投与するのが便利である。５０ｍｇ〜１０００ｍｇの経口投与量が通常は都合がよい。
【００７０】
理想としては、活性成分の少なくとも１種（好ましいのは活性成分の組み合わせであるが）を、血漿中の当該活性化合物のピーク濃度が約０．２ｍＭ〜約７０ｍＭ、好ましくは、約０．１ｍＭ〜約１０ｍＭに達するように投与すべきである。これは、例えば、場合により食塩水中に入れた、活性化合物の０．１％〜１０％溶液の静脈内注射によって、又は、活性化合物の巨丸剤として投与することによって達成し得る。
【００７１】
薬物組成物中の活性化合物の濃度は、当該薬物の吸収速度、分配速度、代謝速度及び排出速度に依存するだけでなく、当業者には知られている別の要因にも依存する。投与量は、また、緩和すべき状態の重症度に応じても変わるということは注意すべきである。さらに当然のことながら、任意の特定の患者に対して、特定の薬剤投与計画は、各個人の必要性と当該組成物の投与者又は当該組成物の投与の管理者の専門的な判断に従って、時間の経過に伴って調整されるべきであり、本明細書中に示されている濃度範囲は単なる例示であって、特許請求の範囲に記載された組成物の範囲又は実施を制限するものではない。上記活性成分は一度に投与してもよいし、幾つかのより小さな用量に分けてさまざまな時間間隔で投与してもよい。
【００７２】
上記活性化合物の好ましい投与方法は、経口である。経口投与用組成物は、一般に、不活性の希釈剤又は食用の担体を含有する。それらは、ゼラチンカプセル内に封入し得るか、又は、圧搾して錠剤とし得る。治療として経口投与するために、上記活性化合物を賦形剤と混合して、錠剤、トローチ剤又はカプセル剤として使用し得る。製薬上の適合性を有する結合剤及び／又は補助物質を当該組成物の一部として含めることができる。
【００７３】
錠剤、丸剤、カプセル剤及びトローチ剤などは、以下に示す任意の成分又は同様の性質の化合物を含有することができる。結合剤、例えば、微結晶性セルロース、トラガカントゴム又はゼラチン；賦形剤、例えば、デンプン又はラクトース；崩壊剤、例えば、アルギン酸、Ｐｒｉｍｏｇｅｌ、又はトウモロコシデンプン；滑沢剤、例えば、ステアリン酸マグネシウム又はＳｔｅｒｏｔｅｓ；流動促進剤、例えば、コロイド状二酸化ケイ素；甘味剤、例えば、蔗糖又はサッカリン；又は、着香剤、例えば、ペパーミント、サリチル酸メチル又はオレンジ風味料。単位投与形態がカプセルである場合は、それは、上記したタイプの物質の他に、脂肪油などの液体担体を含有することができる。また、単位投与形態は、当該単位投与形態の物理的形状を変更する様々な別の物質、例えば、糖衣、セラック、又は別の腸溶性物質などを含有することができる。
【００７４】
本発明にかかる化合物は、エリキシル、懸濁液、シロップ、カシェ剤又はチューインガムなどに含まれる成分として投与することができる。シロップは、活性化合物の他に、甘味剤としての蔗糖、並びに、特定の保存薬、染料、着色剤及び着香剤を含有し得る。
【００７５】
上記化合物又はそれらの製薬上許容される誘導体若しくは塩は、所望の作用を低下させることのない別の活性物質又は所望の作用を補足する物質、例えば、抗生物質、抗菌剤、抗炎症剤、プロテアーゼ阻害剤、又は上記でさらに詳細に説明した別のヌクレオシド若しくは非ヌクレオシド抗ウイルス剤などと混合することもできる。非経口適用、皮内適用、皮下適用又は局所適用に用いる溶液又は懸濁液は以下の成分を含むことができる。無菌の希釈剤、例えば、注射用水、食塩水、固定油、ポリエチレングリコール、グリセリン、プロピレングリコール又は別の合成溶媒；抗菌剤、例えば、ベンジルアルコール又はメチルパラベン；抗酸化剤、例えば、アスコルビン酸又は重亜硫酸ナトリウム；キレート化剤、例えば、エチレンジアミン四酢酸；緩衝剤、例えば、酢酸イオン、クエン酸イオン又はリン酸イオン；及び、張度調節剤、例えば、塩化ナトリウム又はデキストロース。非経口用調製物は、ガラス製又はプラスチック製の、アンプル、使い捨て注射器又はマルチドーズ用バイアルに封入することができる。
【００７６】
静脈内に投与する場合、好ましい担体は生理的食塩水又はリン酸緩衝溶液（ＰＢＳ）である。
【００７７】
鼻内にエーロゾル又は吸入により投与する場合、これらの組成物は医薬製剤の技術でよく知られている技術に従って調製する。前記組成物は、ベンジルアルコール又は別の適切な保存薬、生物学的利用能を向上させるための吸収促進剤、フルオロカーボン、及び／又は、当該技術で知られている別の可溶化剤又は分散剤を用いて、食塩水中の溶液として調製し得る。
【００７８】
座剤の形態で直腸内に投与する場合、これらの組成物は、常温では固体であるが直腸内では液化及び／又は溶解して薬物を放出するカカオバター又はポリエチレングリコールの合成グリセリドエステルなどの、適切な非刺激性の賦形剤と混合することにより調製し得る。
【００７９】
好ましい実施態様においては、上記活性化合物を体内からの急速な排出に対して保護する担体を用いて、例えば、徐放性製剤（インプラント及びマイクロカプセル化デリバリーシステムなど）に調製する。エチレン酢酸ビニル、ポリ無水物類、ポリグリコール酸、コラーゲン、ポリオルトエステル類及びポリ乳酸などの、生物分解性を有する生物学的適合性ポリマーを使用することができる。そのような製剤の調製方法は、当業者には明らかである。上記物質は Alza Corporation から購入することもできる。
【００８０】
リポソーム懸濁液（ウイルス抗原に対するモノクローナル抗体で感染した細胞を目標とするリポソームを含む）も製薬上許容される担体として好ましい。これらは、当業者には知られている方法、例えば、米国特許第 4,522,811 号（前記米国特許第 4,522,811 号は参照によりその全体を本明細書に組み入れる）に記載されているようにして調製し得る。例えば、リポソーム製剤は、適切な１種又は２種以上の脂質（例えば、ステアロイルホスファチジルエタノールアミン、ステアロイルホスファチジルコリン、アラカドイル（arachadoyl）ホスファチジルコリン、及びコレステロールなど）を無機溶媒に溶解させ、次いで溶媒を蒸発させて、容器の表面上に乾燥した脂質の薄膜を残すことにより調製し得る。次いで、上記活性化合物又はそのモノホスフェート、ジホスフェート及び／又はトリホスフェート誘導体の水溶液を前記容器の中に導入する。次いで、容器を手動で回転させて容器の側面から脂質材料を解放して脂質凝集物を分散し、それによってリポソーム懸濁液を形成させる。
（ＩＶ．ＨＩＶ感染症を治療するための併用療法及び交互療法）
一般に、交互に行う療法に際しては、有効な投与量の各薬剤を逐次的に投与するが、併用療法においては、有効な投与量の２種以上の薬剤を一緒に投与する。投与量は、各薬剤の吸収速度、生体内分布速度、代謝速度及び排出速度などの要因に依存するだけでなく、当業者に知られている別の要因にも依存する。投与量は、また、緩和すべき状態の重症度に応じても変わるということは注意すべきである。さらに当然のことながら、任意の特定の患者に対して、特定の薬剤投与計画及びスケジュールは、各個人の必要性と当該組成物の投与者又は当該組成物の投与の管理者の専門的な判断に従って、時間の経過に伴って調整されるべきである。適切な投与量の範囲の例は、学術文献や医師用卓上参考書（Physicians Desk Reference）の中に見いだすことができる。本明細書中に記載されている他の化合物の適切な投与量の範囲の多くの例も、公知文献中に見いだすことができるか、又は、公知方法により確認することができる。これらの投与量範囲は、望ましい結果を得るのに好ましいように変更することができる。
【００８１】
本明細書に開示されている併用及び交互の投与計画は、ＨＩＶ感染症と別の関連した状態、例えば、エイズ関連症候群（ＡＲＣ）、持続性全身性リンパ節腫（ＰＧＬ）、エイズ関連神経学的状態、抗ＨＩＶ抗体陽性状態、ＨＩＶ陽性状態、カポジ肉腫、血小板減少性紫斑病及び日和見感染を予防及び治療するのに有用である。さらに、これらの化合物又は配合物を予防的に用いて、抗ＨＩＶ抗体若しくはＨＩＶ抗原が陽性である個体又はＨＩＶに曝されたことのある個体における臨床的疾患の進行を止めるか又は遅らせることができる。
【００８２】
例えば、上記した薬剤の組み合わせを用いて、ＨＩＶのＤＡＰＤ抵抗性株及びＤＸＧ抵抗性株によるＨＩＶ感染症を治療できることが見いだされた。ＨＩＶのＤＰＡＤ抵抗性株及びＤＸＧ抵抗性株は、本明細書に開示されている薬物の組み合わせを用いた治療を受けた後は、薬物を受けたことがないウイルスの特徴を示す。
【００８３】
さらに、本発明にかかる化合物は、本発明にかかる別の化合物を包含する１種以上の抗ウイルス剤、抗ＨＢＶ剤、抗ＨＣＶ剤若しくは抗ヘルペス剤、又は、インターフェロン、抗ガン剤、抗細胞増殖剤若しくは抗菌剤と併用して又は交互に投与することができる。本発明にかかる特定の化合物は、別の化合物の代謝、異化作用又は不活性化を緩和することにより本発明にかかる特定の薬剤の生物学的活性を向上するのに有効であり得、それ自体この目的のために同時投与される。
【００８４】
以下に、本発明の例示的且つ非限定的な実施例を示す。これらの実施例は、本発明の範囲を制限するものではない。
（Ｖ．ＤＡＰＤと組み合わせたリバビリン）
リバビリン（ＲＢＶ）の、インビトロにおけるＨＩＶ−１に対する活性及び２種類のｄＧＴＰ類似体、ＤＡＰＤとＤＸＧのインビトロ抗ＨＩＶ−１活性に対する影響について解析した。さらに、実験適合性細胞系ＭＴ２における細胞毒性及び及び末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）における細胞毒性に関してもＲＢＶを評価した。ＲＢＶはＩＭＰ脱水素酵素の阻害剤である。この酵素は、ＧＴＰのデノボ合成のために細胞が利用する経路の一部である。
（細胞毒性アッセイ）
ＸＴＴに基づくアッセイを用いて、実験適合性Ｔ細胞系ＭＴ２及びＰＢＭＣに対するＲＢＶの細胞毒性について試験した。ＸＴＴ（２，３−ビス（２−メトキシ−４−ニトロ−５−スルホキシフェニル）−５［（フェニルアミノ）カルボニル］−２Ｈ−テトラゾリウムヒドロキシド）アッセイは、インビトロでの比色分析による細胞保護アッセイである。ＸＴＴがミトコンドリア脱水素酵素により還元されると、ＸＴＴのテトラゾリウム環が開裂して、オレンジ色をした水溶性のホルマザンの結晶を生じる。得られたオレンジ色の溶液を分光光度計を用いて波長４５０ｎｍで読み取った。ＲＢＶは、最終濃度１００ｍＭで１００％ＤＭＳＯ中で調製した。細胞毒性アッセイ用として、ＲＢＶの２ｍＭ溶液を細胞培養培地（１０％ウシ胎仔血清、１ｍｇ／ｍＬのＬ−グルタミン、及び、２０μｇ／ｍＬのゲンタマイシンを補足してあるＲＰＭＩ）中で調製し、９６ウェルプレート上で２倍連続希釈を行った。細胞を３×１０^４／ウェル（ＭＴＸ）及び２×１０^５／ウェル（ＰＢＭＣ）の密度でプレートに加え、得られたプレートを、５％ＣＯ_２の恒温器中で３７℃で５日間インキュベーションした（プレートに細胞を加えたことにより上記化合物は希釈され、最終的な高い濃度は１ｍＭとなった）。５日間のインキュベーションの最後に、各ウェルにＸＴＴを加えて３７℃で３時間インキュベーションした後、酸性化イソプロパノールを添加した。９６ウェルプレートリーダー中で４５０ｎｍで上記プレートを読み取った。１００％保護として化合物が存在しない状態で増殖した細胞の吸収値を用いて用量反応曲線を作成した。
【００８５】
ＲＢＶは、これらのアッセイにおいて、１ｍＭ以下の濃度では毒性を示さなかった（表１）。
【００８６】
【表１】
（感受性アッセイ）
（ＸＸＴアッセイ）
実験適合性細胞系ＭＴ２におけるＨＩＶ−１のｘｘＬＡＩ株に対する活性についてＲＢＶを試験した。９６ウェルプレート中の細胞培養培地中でＲＢＶを希釈して、試験する最高濃度を１００μＭとした。化合物の３反復のサンプルについて試験を行った。５％ＣＯ_２中３７℃で、ＭＴ２細胞に、ｘｘＬＡＩを０．０３の感染多重度（ＭＯＩ）で３時間感染させた。感染細胞を３．０×１０^４／ウェルの密度で薬剤希釈物を含有する９６ウェルプレート中に設定し、ＣＯ_２中３７℃で５日間インキュベーションした。上記で説明したＸＴＴアッセイを用いてＲＢＶの抗ウイルス活性を測定した。この方法は感受性アッセイに変更されていて、これまで、種々のインビトロ抗ウイルス試験で使用されており、溶菌ウイルスを用いる任意のシステムに容易に適合できる（Weislow, O. S. ら, 1989)。対照細胞の吸収値を１００％保護として、薬物を与えずにウイルスに感染した細胞の吸収値を０％保護として用いて、Ｙ軸に％保護をプロットし、Ｘ軸に薬物の濃度をプロットすることにより用量反応曲線を作成する。この曲線から、ＥＣ_５０値を決定した。
【００８７】
これらのアッセイにおいて、試験した全ての濃度でＲＢＶはＨＩＶ−１に対して活性を示さなかった。
（Ｐ２４アッセイ）
ｐ２４に基づくＥＬＩＳＡアッセイを用いて、ＰＢＶのＰＢＭＣにおけるＨＩＶ−１のｘｘＬＡＩ株に対する活性についても試験した。このアッセイでは、細胞の上清をＨＩＶ−１ｐ２４コア抗原に対する抗体でコーティングしてあるミクロエリザウェル（microelisa wells）上でインキュベーションした。その後、西洋ワサビペルオキシダーゼで標識した抗ＨＩＶ−１コンジュゲートを添加した。前もって形成していた固相抗体／抗原複合体に標識した抗体が結合した。テトラメチルベンジジン基質を添加すると色が青色になった。反応を止めたとき、色が黄色に変わった。次いで、上記プレートを、４９０ｎｍに設定してあるプレートリーダーで解析した。吸光度により各ウェル中で産生されたＨＩＶ−１の量を直接測定するが、色度の低下はウイルス産生の低下を示す。ＲＢＶの希釈は９６ウェルプレート中の細胞培養培地中で行い、試験したＲＢＶの最高濃度は１００μＭであった。ＰＢＭＣは、ＨＩＶ−１陰性ドナーからＦｉｃｏｌｌ勾配上に結合させることにより得て、ＨＩＶ−１感染の前に４８時間フィトヘマグルチニン（ＰＨＡＰ）で刺激し、次いで、０．００１のＭＯＩで３７℃で４時間ウイルスを感染させた。感染した細胞を、ＲＢＶの５倍連続希釈液を含む９６ウェルプレートに播種した。プレートを３７℃で３日間インキュベーションした。各ウェル内のウイルスの濃度をＮＥＮｐ２４アッセイを用いて測定した。対照細胞の吸収値を１００％保護として、薬物を与えずにウイルスに感染した細胞の吸収値を０％保護として用いて、Ｙ軸に％保護をプロットし、Ｘ軸に薬物の濃度をプロットすることにより用量反応曲線を作成する。この曲線から、ＥＣ_５０値を決定した。
【００８８】
ＲＢＶは、ＰＢＭＣにおけるＨＩＶ−１の複製を阻害し、そのメジアンＥＣ_５０は、２０．５μＭ±１１．８であった。
（組み合わせアッセイ）
ＤＡＰＤとＤＸＧのインビトロ抗ＨＩＶ−１活性に対するＲＢＶの影響を、上記で説明したＭＴ２／ＸＴＴアッセイとＰＢＭＣ／ｐ２４アッセイを用いて評価した。アバカビルとＡＺＴの活性に対するＲＢＶの影響についても解析した。
（ＭＴ２／ＸＴＴアッセイ）
様々な濃度のＤＡＰＤ、ＤＸＧ、アバカビル及びＡＺＴを単独で用いるか、又はそれらを固定された濃度のＲＢＶと一緒に用いて、組み合わせアッセイを行った。以下に示す薬物濃度：ＤＡＰＤ １００μＭ、ＤＸＧ ５０μＭ、アバカビル ２０μＭ 及び ＡＺＴ １０μＭ：を用いて、９６ウェルプレート上で、試験化合物の５倍連続希釈を行った。用いたＲＢＶの濃度は、１μＭ、５μＭ、１０μＭ、２０μＭ、４０μＭ及び６０μＭであった。アッセイは、上記ＸＸＴ感受性アッセイの項で説明したようにＭＴ２細胞系中で実施した。上記で挙げた化合物と組み合わせて、４０μＭ及び６０μＭのＲＢＶを添加することにより、本アッセイにおいて毒性を示すことが見いだされた。従って、上記化合物のＥＣ_５０値を、ＲＢＶの非存在下並びに１μＭ、５μＭ、１０μＭ及び２０μＭのＲＢＶの存在下において測定した（表２）。
【００８９】
【表２】
１μＭ、５μＭ、１０μＭ及び２０μＭのＲＢＶを添加することにより、ＤＡＰＤ及びＤＸＧについて得られたＥＣ_５０値が小さくなった。表３は、ＲＢＶと組み合わせた各化合物に関して得られたＥＣ_５０値の倍率差（fold difference）を示している。
【００９０】
【表３】
２０μＭのＲＢＶを添加することによって、ＤＡＰＤとＤＸＧの抗ウイルス活性に最大の影響がみられ、ＤＡＰＤとＤＸＧの見かけのＥＣ_５０値は、それぞれ、１４．２倍と１２倍低下した。ＲＢＶを添加しても、アバカビルの活性には影響は無かった（見かけのＥＣ_５０の差は２倍未満）。２０μＭのＲＢＶを添加することによってＡＺＴの見かけのＥＣ_５０は６倍を超える増大を示したが、これは、当該組み合わせが、ＨＩＶの阻害に関して拮抗的であることを示している。１μＭ、５μＭ及び１０μＭのＲＢＶを添加した場合も同様の結果が得られたが、その程度は高濃度のＲＢＶで観察されたものより小さかった。
（ＤＡＰＤ抵抗性ＨＩＶ−１突然変異体）
ＨＩＶの突然変異株に対するＤＡＰＤとＤＸＧの活性へのＲＢＶの影響についても解析した（表４）。解析した抑制株（restraint strain）には、部位特異的突然変異誘発により作製したウイルス、Ｋ６５Ｒ及びＬ７４Ｖ、並びに、位置９８Ｓ，１１６Ｙ，１５１Ｍ及び２１５Ｙに突然変異を含む組換え体ウイルスが含まれていた。上記突然変異体を作製した野生型バックボーン、ｘｘＬＡＩもまた比較のために解析した。試験したＤＡＰＤ及びＤＸＧの濃度は、上記のＭＴ２／ＸＴＴ組み合わせアッセイの項で説明したのと同様であった。ＲＢＶは、濃度を２０μＭに固定して、ＤＡＰＤ及びＤＸＧとの組み合わせにおいて試験した。試験を行った突然変異体ウイルスは全て、ＤＡＰＤとＤＸＧの両方に関して増大（４倍を超える）したＥＣ_５０値を示したが、これは、これらの化合物に対する抵抗性を示している。２０μＭのＲＢＶを加えることにより、これらのウイルスに対するＤＡＰＤ及びＤＸＧのＥＣ_５０値は低下した。２０μＭのＲＢＶの存在下で測定したＤＡＰＤ及びＤＸＧについてのＥＣ_５０値は、野生型ウイルスで得られたＥＣ_５０値より少なくとも２．５倍低かった。これらの結果は、表４にまとめてある。
【００９１】
【表４】
（ＰＢＭＣ／ｐ２４アッセイ）
様々な濃度のＤＡＰＤ、ＤＸＧ、アバカビル及びＡＺＴを単独で用いるか、又はそれらを固定された濃度のＲＢＶと一緒に用いて、ＰＢＭＣにおける組み合わせアッセイも行った。化合物の希釈とアッセイ条件については上記した通りであった。用いたＲＢＶの濃度は、１μＭ、５μＭ、１０μＭ、２０μＭ、４０μＭ及び６０μＭであった。上記で挙げた化合物と組み合わせて、４０μＭ及び６０μＭのＲＢＶを添加することにより、本アッセイにおいて毒性を示すことが見いだされた。ＲＢＶの非存在下並びに１μＭ、５μＭ、１０μＭ及び２０μＭのＲＢＶの存在下において測定した上記化合物のＥＣ_５０値を表５に示す。
【００９２】
【表５】
１μＭのＲＢＶを添加することにより、ＤＡＰＤ及びＤＸＧ及びアバカビルではそのＥＣ_５０値がわずかに低下（３倍未満の低下）したが、ＡＺＴについて得られたＥＣ_５０値には影響は見られなかった。これらの影響は、ＲＢＶの濃度を上げることによってより顕著になった。表６は、１μＭ、５μＭ、１０μＭ及び２０μＭのＲＢＶと組み合わせた各化合物に関して得られたＥＣ_５０値の倍率差（fold difference）を示している。
【００９３】
【表６】
ＲＢＶは、ＰＢＭＣ中でのＨＩＶ−１の複製を阻害し、そのＥＣ_５０値は２０．５μＭであった。リバビリンは１ｍＭ以下の濃度ではこれらの細胞に対して毒性を示さず、その結果、治療指数は４８を超える値となった。２０μＭのＲＢＶを加えることにより、ＤＡＰＤ、ＤＸＧ及びアバカビルは試験した全ての濃度でＰＢＭＣ中でのＨＩＶの複製を完全に阻害したが、ＡＺＴの活性にはほとんど影響しなかった。より低い濃度のＰＢＶを添加しても、ＤＡＰＤ、ＤＸＧ及びアバカビルの活性に有意な影響が見られた。ＭＴ２細胞系においては、ＲＢＶはＨＩＶの複製に対して活性を示さなかった。２０μＭのＲＢＶを添加することにより、ＤＡＰＤとＤＸＧの見かけのＥＣ_５０値は、それぞれ、１４．２倍及び１２倍低下した。２０μＭのＲＢＶを添加してもアバカビルの活性に対する影響は見られず、ＡＺＴの見かけのＥＣ_５０値は６倍増大した。このことは、当該組み合わせが、ＨＩＶの阻害に関して拮抗的であることを示している。５μＭ及び１０μＭのＲＢＶを添加した場合もＭＴ２において同様の結果が得られたが、その程度は高濃度のＲＢＶで観察されたものより小さかった。ＨＩＶ−１の突然変異株に対して試験を行った場合、２０μＭのＲＢＶとＤＡＰＤ又はＤＸＧの組み合わせでは、これらの化合物のＥＣ_５０値は野生型ウイルスで観察される値よりも低い値まで低下した。即ち、すでに抵抗性となっていたウイルス株は、今や、ＤＡＰＤ及びＤＸＧによる阻害に対して感受性となっている。Weislow, O. S., R. Kiser, D. L. Fine, J. Bader, R. H. Shoemaker 及び M. R. Boyd., 1989,「New soluble formazan assay for HIV-1 cytopathic effects: Application to high-flux screening of synthetic and natural products for AIDS-antiviral activity」, J. of NCI., 81：577-586。
（ＶＩ．ＤＡＰＤと組み合わせたマイコフェノール酸）
マイコフェノール酸（ＭＰＡ）の、インビトロにおけるＨＩＶ−１に対する活性及び２種類のｄＧＴＰ類似体、ＤＡＰＤとＤＸＧのインビトロ抗ＨＩＶ−１活性に対する影響について解析した。さらに、実験適合性細胞系ＭＴ２における細胞毒性及び末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）における細胞毒性に関してもＭＰＡを評価した。ＭＰＡはＩＭＰ脱水素酵素の阻害剤である。この酵素は、ＧＴＰのデノボ合成のために細胞が利用する経路の一部である。アバカビル、ＡＺＴ及びＦＴＣを用いた組合せアッセイも行った。
（細胞毒性アッセイ）
ＸＴＴに基づくアッセイを用いて、実験適合性Ｔ細胞系ＭＴ２及びＰＢＭＣに対するＭＰＡの細胞毒性について試験した。ＸＴＴ（２，３−ビス（２−メトキシ−４−ニトロ−５−スルホフェニル）−５［（フェニルアミノ）カルボニル］−２Ｈ−テトラゾリウムヒドロキシド）アッセイは、インビトロでの比色分析による細胞保護アッセイである。ＸＴＴがミトコンドリア脱水素酵素により還元されると、ＸＴＴのテトラゾリウム環が開裂して、オレンジ色をした水溶性のホルマザンの結晶を生じる。得られたオレンジ色の溶液を分光光度計を用いて波長４５０ｎｍで読み取る。ＭＰＡは、最終濃度１００ｍＭで１００％ＤＭＳＯ中で調製した。細胞毒性アッセイ用として、ＭＰＡの２００μＭ溶液を細胞培養培地（１０％ウシ胎仔血清、１ｍｇ／ｍＬのＬ−グルタミン、及び、２０μｇ／ｍＬのゲンタマイシンを補足してあるＲＰＭＩ）中で調製し、９６ウェルプレート上で２倍連続希釈を行った。細胞を３×１０^４／ウェル（ＭＴＸ）及び２×１０^５／ウェル（ＰＢＭＣ）の密度でプレートに加え、得られたプレートを、５％ＣＯ_２の恒温器中で３７℃で５日間インキュベーションした（プレートに細胞を加えたことにより上記化合物は希釈され、最終的な高い濃度は１００μＭとなった）。５日間のインキュベーションの最後に、各ウェルにＸＴＴを加えて３７℃で３時間インキュベーションした後、酸性化イソプロパノールを添加した。９６ウェルプレートリーダー中で４５０ｎｍで上記プレートを読み取った。１００％保護として化合物が存在しない状態で増殖した細胞の吸収値を用いて用量反応曲線を作成した。
【００９４】
ＭＰＡは、２種類の細胞系のいずれにおいても毒性を示し、５０％細胞毒性を示す薬量（ＣＣ_５０）は、ＭＴ２細胞系では５．７μＭであり、ＰＢＭＣでは４．５μＭであった。表７参照。
【００９５】
【表７】
（感受性アッセイ）
（ＸＸＴアッセイ）
実験適合性細胞系ＭＴ２におけるＨＩＶ−１のｘｘＬＡＩ株に対する活性についてＭＰＡを試験した。９６ウェルプレート中の細胞培養培地中でＭＰＡを希釈して、試験する最高濃度を１μＭとした。化合物の３反復のサンプルについて試験を行った。５％ＣＯ_２中３７℃で、ＭＴ２細胞に、ｘｘＬＡＩを０．０３の感染多重度（ＭＯＩ）で３時間感染させた。感染細胞を３．０×１０^４／ウェルの密度で薬剤希釈物を含有する９６ウェルプレート中で培養し、ＣＯ_２中３７℃で５日間インキュベーションした。上記で説明したＸＴＴアッセイを用いてＭＰＡの抗ウイルス活性を測定した。この方法は感受性アッセイに変更されていて、これまで、種々のインビトロ抗ウイルス試験で使用されており、溶菌ウイルスを用いる任意のシステムに容易に適合できる（Weislow, O. S. ら, 1989)。対照細胞の吸収値を１００％保護として、薬物を与えずにウイルスに感染した細胞の吸収値を０％保護として用いて、Ｙ軸に％保護をプロットし、Ｘ軸に薬物の濃度をプロットすることにより用量反応曲線を作成する。この曲線から、ＥＣ_５０値を決定した。これらのアッセイにおいて、試験した全ての濃度でＭＰＡはＨＩＶ−１に対して活性を示さなかった。
（Ｐ２４アッセイ）
ｐ２４に基づくＥｌｉｓａアッセイを用いて、ＭＰＡのＰＢＭＣにおけるＨＩＶ−１のｘｘＬＡＩ株に対する活性についても試験した。このアッセイでは、細胞の上清をＨＩＶ−１ｐ２４コア抗原に対する抗体でコーティングしてあるミクロエリザウェル（microelisa wells）上でインキュベーションした。その後、西洋ワサビペルオキシダーゼで標識した抗ＨＩＶ−１コンジュゲートを添加した。標識した抗体は前もって形成していた固相抗体／抗原複合体に結合する。テトラメチルベンジジン基質を添加すると色が青色になった。反応を止めたとき、色が黄色に変わった。次いで、上記プレートを、４９０ｎｍに設定してあるプレートリーダーで解析した。吸光度により各ウェル中で産生されたＨＩＶ−１の量を直接測定するが、色度の低下はウイルス産生の低下を示す。ＭＰＡの希釈は９６ウェルプレート中の細胞培養培地中で行い、試験したＭＰＡの最高濃度は１μＭであった。ＰＢＭＣは、ＨＩＶ−１陰性ドナーからＦｉｃｏｌｌ勾配上に結合させることにより得て、ＨＩＶ−１感染の前に４８時間フィトヘマグルチニン（ＰＨＡＰ）により刺激し、次いで、０．００１のＭＯＩで３７℃で４時間ウイルスを感染させた。感染した細胞を、ＭＰＡの４倍連続希釈液を含む９６ウェルプレートに播種した。プレートを３７℃で３日間インキュベーションした。各ウェル内のウイルスの濃度をＮＥＮｐ２４アッセイを用いて測定した。対照細胞の吸収値を１００％保護として、薬物を与えずにウイルスに感染した細胞の吸収値を０％保護として用いて、Ｙ軸に％保護をプロットし、Ｘ軸に薬物の濃度をプロットすることにより用量反応曲線を作成する。この曲線から、ＥＣ_５０値を決定した。
【００９６】
ＭＰＡは、ＰＢＭＣにおけるＨＩＶ−１の複製を阻害し、そのメジアンＥＣ_５０は、９５μＭ±２９であった。
（組み合わせアッセイ）
ＤＡＰＤとＤＸＧのインビトロ抗ＨＩＶ−１活性に対するＭＰＡの影響を、上記で説明したＭＴ２／ＸＴＴアッセイとＰＢＭＣ／ｐ２４アッセイを用いて評価した。アバカビルとＡＺＴとＦＴＣの活性に対するＭＰＡの影響についても解析した。
（ＭＴ２／ＸＴＴアッセイ）
様々な濃度のＤＡＰＤ、ＤＸＧ、アバカビル、ＡＺＴ及びＦＴＣを単独で用いるか、又はそれらを固定された濃度のＭＰＡと一緒に用いて、組み合わせアッセイを行った。以下に示す薬物濃度：ＤＡＰＤ １００μＭ、ＤＸＧ ５０μＭ、アバカビル ２０μＭ、ＡＺＴ １０μＭ 及び ＦＴＣ １０μＭ：を用いて、９６ウェルプレート上で、試験化合物の５倍連続希釈を行った。用いたＭＰＡの濃度は、１μＭ、０．５μＭ、０．２５μＭ、０．１μＭ及び０．０１μＭであった。アッセイは、第３．１項で説明したようにＭＴ２細胞系中で実施した。上記で挙げた化合物と組み合わせて、１μＭ及び０．５μＭのＭＰＡを添加することにより、本アッセイにおいて毒性を示すことが見いだされた。従って、上記化合物のＥＣ_５０値を、ＭＰＡの非存在下並びに０．２５μＭ、０．１μＭ及び０．０１μＭのＭＰＡの存在下において測定した（表８）。
【００９７】
【表８】
０．０１μＭのＭＰＡを添加しても、上記したいずれの化合物についても得られたＥＣ_５０値に対して影響は見られなかった。表９は、０．１μＭ及び０．２５μＭのＭＰＡと組み合わせた各化合物に関して得られたＥＣ_５０値の倍率差（fold difference）を示している。
【００９８】
【表９】
０．２５μＭのＭＰＡを添加することによって、ＤＡＰＤとＤＸＧの抗ウイルス活性に最大の影響がみられ、ＤＡＰＤとＤＸＧの見かけのＥＣ_５０値は、それぞれ、１６．７倍と１０．５倍低下した。０．２５μＭのＭＰＡを添加しても、アバカビルとＦＴＣの活性にはほとんど影響が無かった（見かけのＥＣ_５０の差は２倍未満）が、ＡＺＴの見かけのＥＣ_５０は２．３倍増大した。これは、当該組み合わせが、ＨＩＶの阻害に関して拮抗的であることを示している。０．１μＭのＭＰＡを添加した場合も同様の結果が得られたが、その程度は高濃度のＭＰＡで観察されたものより小さかった。
（ＤＡＰＤ抵抗性ＨＩＶ−１突然変異体）
ＨＩＶの突然変異株に対するＤＡＰＤとＤＸＧの活性へのＭＰＡの影響についても解析した（表１０）。解析した抑制株（restraint strain）には、部位特異的突然変異誘発により作製したウイルス、Ｋ６５Ｒ及びＬ７４Ｖ、並びに、位置９８Ｓ，１１６Ｙ，１５１Ｍ及び２１５Ｙに突然変異を含む組換え体ウイルスが含まれていた。上記突然変異体を作製した野生型バックボーン、ｘｘＬＡＩもまた比較のために解析した。試験したＤＡＰＤ及びＤＸＧの濃度は、第４．１項で説明したのと同様であった。ＭＰＡは、濃度を０．２５μＭに固定して、ＤＡＰＤ及びＤＸＧとの組み合わせにおいて試験した。ＤＡＰＤ及びＤＸＧは、試験した全ての野生型株に対して活性を示した。試験を行った突然変異体ウイルスは全て、ＤＡＰＤとＤＸＧの両方に関して増大したＥＣ_５０値を示したが、これは、これらの化合物に対する抵抗性を示している。０．２５μＭのＭＰＡを加えることにより、これらのウイルスに対するＤＡＰＤ及びＤＸＧのＥＣ_５０値は低下した。０．２５μＭのＭＰＡの存在下で測定したＤＡＰＤ及びＤＸＧについてのこれらの値は、野生型ウイルスで得られたものと同等であった。
【００９９】
【表１０】
（ＰＢＭＣ／ｐ２４アッセイ）
様々な濃度のＤＡＰＤ、ＤＸＧ、アバカビル、ＡＺＴ及びＦＴＣを単独で用いるか、又はそれらを固定された濃度のＭＰＡと一緒に用いて、ＰＢＭＣにおける組み合わせアッセイも行った。化合物の希釈とアッセイ条件については上記した通りであった。用いたＭＰＡの濃度は、１μＭ、０．５μＭ、０．２５μＭ、０．１μＭ及び０．０１μＭであった。上記で挙げた化合物と組み合わせて、１μＭ及び０．５μＭのＭＰＡを添加することにより、本アッセイにおいて毒性を示すことが見いだされた。ＭＰＡの非存在下並びに０．２５μＭ、０．１μＭ及び０．０１μＭのＭＰＡの存在下において測定した上記化合物のＥＣ_５０値を表１１に示す。
【０１００】
【表１１】
０．０１μＭのＭＰＡを添加することにより、ＤＡＰＤ及びＤＸＧではそのＥＣ_５０値が低下したが、アバカビル、ＡＺＴ及びＦＴＣについて得られたＥＣ_５０値には影響は見られなかった（ＥＣ_５０の変化２倍未満）。０．１μＭ及び０．２５μＭのＭＰＡを添加することにより、ＤＡＰＤ、ＤＸＧ及びアバカビルではそのＥＣ_５０値が低下したが、ＡＺＴ及びＦＴＣについて得られたＥＣ_５０値には影響は見られなかった。表１２は、０．０１μＭ、０．１μＭ及び０．２５μＭのＭＰＡと組み合わせた各化合物に関して得られたＥＣ_５０値の倍率差（fold difference）を示している。
【０１０１】
【表１２】
マイコフェノール酸は、ＰＢＭＣ中でのＨＩＶ−１の複製を阻害し、そのＥＣ_５０値は０．０９５μＭであった。これらの細胞においてＭＰＡについて得られたＣＣ_５０値は４．５μＭであり、その結果、治療指数は４７であった。０．２５μＭのＭＰＡを加えることにより、ＤＡＰＤ、ＤＸＧ及びアバカビルは試験した全ての濃度でＰＢＭＣ中でのＨＩＶの複製を完全に阻害したが、ＡＺＴ及びＦＴＣの活性にはほとんど影響しなかった（ＥＣ_５０の変化２倍未満）。より低い濃度のＭＰＡを添加した場合も、ＤＡＰＤ及びＤＸＧの活性には有意な影響が見られたが、アバカビル、ＡＺＴ及びＦＴＣの活性にはほとんど影響しなかった。ＭＴ２細胞系においては、ＭＰＡはＨＩＶの複製に対して活性を示さなかった。０．２５μＭのＭＰＡを添加することにより、ＤＡＰＤとＤＸＧの見かけのＥＣ_５０値は、それぞれ、１６．７倍及び１０．５倍低下した。０．２５μＭのＭＰＡを添加してもアバカビルとＦＴＣの活性に対する影響はほとんど見られず、ＡＺＴの見かけのＥＣ_５０値は２．３倍増大した。このことは、当該組み合わせが、ＨＩＶの阻害に関して拮抗的であることを示している。０．１μＭのＭＰＡを添加した場合もＭＴ２において同様の結果が得られたが、その程度は高濃度のＭＰＡで観察されたものより小さかった。ＨＩＶ−１の突然変異株に対して試験を行った場合、０．２５μＭのＭＰＡとＤＡＰＤ又はＤＸＧの組み合わせでは、これらの化合物のＥＣ_５０値は野生型ウイルスで観察される値よりも低い値まで低下した。即ち、すでに抵抗性となっていたウイルス株は、今や、ＤＡＰＤ及びＤＸＧによる阻害に対して感受性となっている。
（ＰＢＭＣ中のＤＸＧ−ＴＰの濃度）
ＤＸＧ−トリホスフェート（ＤＸＧ−ＴＰ）の細胞内濃度へのマイコフェノール酸の影響について末梢血単核球細胞（ＰＢＭＣ）中で評価した。ＰＢＭＣは、ＨＩＶ陰性ドナーから得て、フィトヘマグルチニンで刺激し、マイコフェノール酸の非存在下又は０．２５μＭのマイコフェノール酸の存在下で、種々の濃度のＤＸＧ（５μＭ又は５０μＭ）を補足してある完全培地中で３７℃でインキュベーションした。４８時間又は７２時間のインキュベーションの後、ＰＢＭＣを収集し、細胞内のＤＸＧ−ＴＰの濃度を以下に説明するようにしてＬＣ−ＭＳ−ＭＳで測定した。０．２５μＭのマイコフェノール酸を添加することにより、細胞内のＤＸＧ−ＴＰのメジアン濃度が、ＤＸＧ単独を用いてインキュベーションした細胞内の濃度と比較して１．７倍まで増大した。
【０１０２】
末梢血単核球細胞からのＤＸＧ−ＴＰを解析するための生物学的解析方法（bioanalytical method）では、イオン対固相抽出（ＳＰＥ）及びエレクトロスプレーイオン化（ＥＳＩ）質量分析に連結したイオン対ＨＰＬＣを利用する。約０．５×１０^７個の細胞を含有するペレット状にしたＰＢＭＣのサンプルを、内部標準（２’，３’−ジデオキシシチジン−５’−トリホスフェート（ｄｄＣＴＰ））を含有する溶液で希釈し、Ｃ−１８カートリッジ上でイオン対ＳＰＥを用いてＤＸＧ−ＴＰとｄｄＣＴＰを選択的に抽出する。ＤＸＧ−ＴＰとｄｄＣＴＰを、Ｗａｔｅｒｓ Ｘｔｅｒｒａ ＭＳ Ｃ１８ 分析用カラムを用いたミクロボアイオン対ＨＰＬＣで約１０分の保持時間で分離する。目的とする化合物を、Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ Ｑｕａｔｔｒｏ ＬＣ 三連四重極質量分析計を用いたＥＳＩ−ＭＳ／ＭＳにより、陽イオンモードで検出する。
【０１０３】
ＤＸＧ−ＴＰ ＰＢＭＣサンプルの分析に際しては、６点法、１／ｘ^２加重（weighted）、二次検量線（quadratic calibration curves）、範囲０．００８〜１．６５ｐｍｏｌ／１０^６細胞、を用いてサンプルを定量する。典型的には、品質管理（ＱＣ）サンプルを２種の濃度（０．００８及び１．６５ｐｍｏｌ／１０^６細胞）で各分析ごとに二反復で分析を行って当該方法の正確さを監視する。
【０１０４】
上記生物学的分析方法の再現可能な抽出効率は約８０％である。定量限界（ＬＯＱ）は０．００８ｐｍｏｌ／１０^６細胞である。上記アッセイの範囲は、０．００８〜１．６５ｐｍｏｌ／１０^６細胞である。
【０１０５】
好ましい実施態様に関連して本発明を説明してきた。上記した本発明の詳細な説明から、本発明の変形及び変更は当業者には明らかである。そのような変形及び変更は全て本発明の範囲内に含まれるものとする。

Claims (37)

1. 宿主におけるＨＩＶ感染症を治療又は予防するための医薬組成物であって、有効量の式：
   ［式中、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、ＮＨ_２又はＮＲ^１Ｒ^２であり、Ｒ^１及びＲ^２は独立して、水素、アルキル又はシクロアルキルであり、Ｒ^３は、Ｈ、アルキル、アリール若しくはアシルであるか、又はモノホスフェート、ジホスフェート若しくはトリホスフェートを包含するホスフェートであるか、又はリン脂質を包含する安定化されたホスフェート部分構造、又はエーテル脂質である］で表されるβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリン又はその製薬上許容される塩若しくはプロドラッグを少なくとも１種のイノシン一リン酸脱水素酵素（ＩＭＰＤＨ）阻害剤と組み合わせて、場合により製薬上許容される担体又は希釈剤の中に含有してなる、前記組成物。
2. 前記β−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリンが（−）−（２Ｒ，４Ｒ）−２−アミノ−９−［（２−ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−アデニン（ＤＡＰＤ）である、請求項１に記載の組成物。
3. 前記β−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリンが（−）−（２Ｒ，４Ｒ）−９−［（２−ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−グアニン（ＤＸＧ）である、請求項１に記載の組成物。
4. 前記ＩＭＰＤＨ阻害剤が、リバビリン、マイコフェノール酸、ベンズアミドリボシド、チアゾフリン、セレナゾフリン、５−エチニル−１−β−Ｄ−リボフラノシルイミダゾール−４−カルボキサミド（ＥＩＣＡＲ）及び（Ｓ）−Ｎ−３−［３−（３−メトキシ−４−オキサゾル−５−イル−フェニル）−ウレイド］−ベンジル−カルバミン酸テトラヒドロフラン−３−イル−エステル（ＶＸ−４９７）からなる群から選択される、請求項１〜３のいずれか１項に記載の組成物。
5. 前記ＩＭＰＤＨ阻害剤がマイコフェノール酸である、請求項４に記載の組成物。
6. 前記ＩＭＰＤＨ阻害剤がリバビリンである、請求項４に記載の組成物。
7. 前記β−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリンがエナンチオマー的に富化されている、請求項１〜６のいずれか１項に記載の組成物。
8. 経口送達に適した製薬上許容される担体中にある、請求項１に記載の組成物。
9. 静脈内送達に適した製薬上許容される担体中にある、請求項１に記載の組成物。
10. 非経口送達に適した製薬上許容される担体中にある、請求項１に記載の組成物。
11. 局所送達に適した製薬上許容される担体中にある、請求項１に記載の組成物。
12. 全身送達に適した製薬上許容される担体中にある、請求項１に記載の組成物。
13. 宿主におけるＨＩＶ薬剤抵抗性株によるＨＩＶ感染症を治療又は予防する方法であって、場合により製薬上許容される担体又は希釈剤の中の、有効量の式：
    ［式中、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、ＮＨ_２又はＮＲ^１Ｒ^２であり、Ｒ^１及びＲ^２は独立して、水素、アルキル又はシクロアルキルであり、Ｒ^３は、Ｈ、アルキル、アリール若しくはアシルであるか、又はモノホスフェート、ジホスフェート若しくはトリホスフェートを包含するホスフェートであるか、又は安定化されたホスフェート部分構造である］で表されるβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリン又はその製薬上許容される塩若しくはプロドラッグをイノシン一リン酸脱水素酵素（ＩＭＰＤＨ）阻害剤と併用して又は交互に投与することを含んでなる、前記方法。
14. 前記β−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリンが（−）−（２Ｒ，４Ｒ）−２−アミノ−９−［（２−ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−アデニン（ＤＡＰＤ）である、請求項１３に記載の方法。
15. 前記β−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリンが（−）−（２Ｒ，４Ｒ）−９−［（２−ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−グアニン（ＤＸＧ）である、請求項１３に記載の方法。
16. 前記ＩＭＰＤＨ阻害剤が、リバビリン、マイコフェノール酸、ベンズアミドリボシド、チアゾフリン、セレナゾフリン、５−エチニル−１−β−Ｄ−リボフラノシルイミダゾール−４−カルボキサミド（ＥＩＣＡＲ）及び（Ｓ）−Ｎ−３−［３−（３−メトキシ−４−オキサゾル−５−イル−フェニル）−ウレイド］−ベンジル−カルバミン酸テトラヒドロフラン−３−イル−エステル（ＶＸ−４９７）からなる群から選択される、請求項１３〜１５のいずれか１項に記載の方法。
17. 前記ＩＭＰＤＨ阻害剤がマイコフェノール酸である、請求項１６に記載の方法。
18. 前記ＩＭＰＤＨ阻害剤がリバビリンである、請求項１６に記載の方法。
19. 前記ＨＩＶ感染症がＤＡＰＤ及び／又はＤＸＧに対して抵抗性である、請求項１６に記載の方法。
20. 前記宿主がヒトである、請求項１３〜１９のいずれか１項に記載の方法。
21. 宿主におけるＨＩＶ感染症を治療又は予防する方法であって、場合により製薬上許容される担体又は希釈剤の中の、有効量の式：
    ［式中、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、ＮＨ_２又はＮＲ^１Ｒ^２であり、Ｒ^１及びＲ^２は独立して、水素、アルキル又はシクロアルキルであり、Ｒ^３は、Ｈ、アルキル、アリール若しくはアシルであるか、又はモノホスフェート、ジホスフェート若しくはトリホスフェートを包含するホスフェートであるか、又は安定化されたホスフェート部分構造である］で表されるβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリン又はその製薬上許容される塩若しくはプロドラッグをイノシン一リン酸脱水素酵素（ＩＭＰＤＨ）阻害剤と併用して又は交互に投与することを含んでなる、前記方法。
22. 前記β−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリンが（−）−（２Ｒ，４Ｒ）−２−アミノ−９−［（２−ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−アデニン（ＤＡＰＤ）である、請求項２１に記載の方法。
23. 前記β−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリンが（−）−（２Ｒ，４Ｒ）−９−［（２−ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−グアニン（ＤＸＧ）である、請求項２１に記載の方法。
24. 前記ＩＭＰＤＨ阻害剤が、リバビリン、マイコフェノール酸、ベンズアミドリボシド、チアゾフリン、セレナゾフリン、５−エチニル−１−β−Ｄ−リボフラノシルイミダゾール−４−カルボキサミド（ＥＩＣＡＲ）及び（Ｓ）−Ｎ−３−［３−（３−メトキシ−４−オキサゾル−５−イル−フェニル）−ウレイド］−ベンジル−カルバミン酸テトラヒドロフラン−３−イル−エステル（ＶＸ−４９７）からなる群から選択される、請求項２１〜２３のいずれか１項に記載の方法。
25. 前記ＩＭＰＤＨ阻害剤がマイコフェノール酸である、請求項２４に記載の方法。
26. 前記ＩＭＰＤＨ阻害剤がリバビリンである、請求項２４に記載の方法。
27. 前記宿主がヒトである、請求項２１〜２６のいずれか１項に記載の方法。
28. 薬物療法で使用するための、場合により製薬上許容される担体又は希釈剤の中の、有効量の式：
    ［式中、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、ＮＨ_２又はＮＲ^１Ｒ^２であり、Ｒ^１及びＲ^２は独立して、水素、アルキル又はシクロアルキルであり、Ｒ^３は、Ｈ、アルキル、アリール若しくはアシルであるか、又はモノホスフェート、ジホスフェート若しくはトリホスフェートを包含するホスフェートであるか、又は安定化されたホスフェート部分構造である］で表されるβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリン又はその製薬上許容される塩若しくはプロドラッグの、イノシン一リン酸脱水素酵素（ＩＭＰＤＨ）阻害剤との併用又は交互における使用。
29. 宿主におけるＨＩＶ感染症を治療又は予防するための、場合により製薬上許容される担体又は希釈剤の中の、有効量の式：
    ［式中、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、ＮＨ_２又はＮＲ^１Ｒ^２であり、Ｒ^１及びＲ^２は独立して、水素、アルキル又はシクロアルキルであり、Ｒ^３は、Ｈ、アルキル、アリール若しくはアシルであるか、又はモノホスフェート、ジホスフェート若しくはトリホスフェートを包含するホスフェートであるか、又は安定化されたホスフェート部分構造である］で表されるβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリン又はその製薬上許容される塩若しくはプロドラッグの、１種以上の有効なイノシン一リン酸脱水素酵素（ＩＭＰＤＨ）阻害剤との併用又は交互における使用。
30. 宿主におけるＨＩＶ感染症を治療又は予防するための医薬の製造における、場合により製薬上許容される担体又は希釈剤の中の、有効量の式：
    ［式中、Ｒは、Ｈ、ＯＨ、Ｃｌ、ＮＨ_２又はＮＲ^１Ｒ^２であり、Ｒ^１及びＲ^２は独立して、水素、アルキル又はシクロアルキルであり、Ｒ^３は、Ｈ、アルキル、アリール若しくはアシルであるか、又はモノホスフェート、ジホスフェート若しくはトリホスフェートを包含するホスフェートであるか、又は安定化されたホスフェート部分構造である］で表されるβ−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリン又はその製薬上許容される塩若しくはプロドラッグの、１種以上の有効なイノシン一リン酸脱水素酵素（ＩＭＰＤＨ）阻害剤との併用又は交互における使用。
31. 前記β−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリンが（−）−（２Ｒ，４Ｒ）−２−アミノ−９−［（２−ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−アデニン（ＤＡＰＤ）である、請求項２９又は３０に記載の使用。
32. 前記β−Ｄ−１，３−ジオキソラニルプリンが（−）−（２Ｒ，４Ｒ）−９−［（２−ヒドロキシメチル）−１，３−ジオキソラン−４−イル］−グアニン（ＤＸＧ）である、請求項２９又は３０に記載の使用。
33. 前記ＩＭＰＤＨ阻害剤の少なくとも１種が、リバビリン、マイコフェノール酸、ベンズアミドリボシド、チアゾフリン、セレナゾフリン、５−エチニル−１−β−Ｄ−リボフラノシルイミダゾール−４−カルボキサミド（ＥＩＣＡＲ）及び（Ｓ）−Ｎ−３−［３−（３−メトキシ−４−オキサゾル−５−イル−フェニル）−ウレイド］−ベンジル−カルバミン酸テトラヒドロフラン−３−イル−エステル（ＶＸ−４９７）からなる群から選択される、請求項２９又は３０に記載の使用。
34. 前記ＩＭＰＤＨ阻害剤がマイコフェノール酸である、請求項２９又は３０に記載の使用。
35. 前記ＩＭＰＤＨ阻害剤がリバビリンである、請求項２９又は３０に記載の使用。
36. 前記ＨＩＶ感染症がＤＡＰＤ抵抗性及び／又はＤＸＧ抵抗性である、請求項２９又は３０に記載の使用。
37. 前記宿主がヒトである、請求項２９〜３６のいずれか１項に記載の使用。