KR20030079205A - Dendropanax morbifera Lev. extract having a protective effect of hepatic cells, Dendropanax morbifera Lev. fractions, and pharmaceutical composition containing the same - Google Patents

Dendropanax morbifera Lev. extract having a protective effect of hepatic cells, Dendropanax morbifera Lev. fractions, and pharmaceutical composition containing the same Download PDF

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Abstract

PURPOSE: Provided are an extract and fractions of Dendropanax morbifera H Lev having liver protection effect and a pharmaceutical composition containing them, thereby preventing and treating liver diseases, such as fatty liver, hepatitis, hepatocirrhosis and the like. CONSTITUTION: An extract of Dendropanax morbifera H Lev is obtained by extracting Dendropanax morbifera H Lev resin with an alcohol solvent at 50-100 deg.C for 5-24 hours, followed by cooling, filtration and concentration. The extract is fractioned with solvents, particularly, hexane, chloroform, butanol, and water sequentially.

Description

간세포 보호 효과를 갖는 황칠 추출물, 황칠 분획물 및 이들을 함유한 약학 조성물{Dendropanax morbifera Lev. extract having a protective effect of hepatic cells, Dendropanax morbifera Lev. fractions, and pharmaceutical composition containing the same}Hwangchil extract with hepatoprotective effect, Hwangchil fraction and pharmaceutical composition containing them {Dendropanax morbifera Lev. extract having a protective effect of hepatic cells, Dendropanax morbifera Lev. fractions, and pharmaceutical composition containing the same}

본 발명은 간세포 보호 효과를 갖는 황칠 추출물에 관한 것으로, 보다 상세하게는 지방간, 간염, 간경화 등과 같은 간질환을 예방 및 치료할 수 있는 황칠 추출물과 그 분획물 및 이들을 함유한 약학 조성물과 기능성 식품에 관한 것이다.The present invention relates to a Hwangchil extract having a hepatocellular protective effect, and more particularly, to a Hwangchil extract, a fraction thereof, and a pharmaceutical composition and functional food containing the same, which can prevent and treat liver diseases such as fatty liver, hepatitis, and cirrhosis. .

간암을 포함한 만성 간질환은 우리 나라 성인에게 있어서 입원 빈도 5위의 높은 유병율을 나타내는 질환이다(1994년 의료보험 관리공단 통계연보). 1996년 통계청 사망 원인 통계연보를 보면 인구 10만명당 남성의 간암 사망률은 33명으로서 세계에서 가장 높고, 만성 간질환으로 인한 사망률도 인구 10만명당 44명으로 매우 높은 것으로 나타나고 있다.Chronic liver disease, including liver cancer, is one of the highest prevalence rates among hospitalizations among adults in Korea (Statistics Annual Report, 1994). According to the 1996 Statistical Yearbook of Causes of Death, the number of liver cancer mortality in men per 100,000 population is 33, the highest in the world, and the mortality rate from chronic liver disease is 44, per 100,000 population.

급성 바이러스 간염은 간 경변증과 간암 등의 만성 간질환의 중요한 원인이 되는 질환이며, 주로 간을 침범하는 전신적 감염으로서 A, B, C, D 및 E 등의 간염 바이러스가 원인으로 알려져 있다. 바이러스 간염과 더불어 간질환의 주요 원인 중 하나는 알코올이다. 알코올에 기인한 간질환은 알코올성 지방간, 알코올성 간염 및 알코올성 간경변증으로 분류되며, 간에 약간의 지방이 축적된 것부터 진행된 간경화에 이르기까지 여러 형태로 나타난다. 과도한 음주로 인한 알코올성 간질환 중 가장 초기에 흔히 나타나는 질환이 지방간이다. 알코올성 간염은 과량의 만성 알코올 섭취자의 20∼30%에서 발병하며, 알코올성 간경변증은 만성 알코올 섭취자의 10∼15% 정도에서 발병하는 것으로 보고되고 있다.Acute viral hepatitis is a disease that is an important cause of chronic liver disease such as cirrhosis of the liver and liver cancer, and is a systemic infection mainly affecting the liver and is known to be caused by hepatitis viruses such as A, B, C, D and E. In addition to viral hepatitis, one of the main causes of liver disease is alcohol. Hepatic diseases caused by alcohol are classified as alcoholic fatty liver, alcoholic hepatitis and alcoholic cirrhosis, and appear in various forms, ranging from accumulation of some fat in the liver to advanced cirrhosis. Fatty liver is the earliest common alcoholic liver disease caused by excessive drinking. Alcoholic hepatitis is reported in 20-30% of excessive chronic alcohol intake, and alcoholic cirrhosis is reported in 10-15% of chronic alcohol intake.

두릅나무과에 속하는 황칠나무(Dendropanax morbiferaLev.)는 우리나라의 남부 해안 지역과 제주도에서 자생하는 상록활엽교목으로 겨울에도 낙엽이 지지 않는 수종으로 수피에 상처를 주면 황색의 수지액이 나오는데 이것을 황칠(黃漆)이라고 한다. 황칠은 삼국시대부터 황제의 갑옷, 투구, 기타 금속 장신구의 황금색을 발하는 진귀한 도료로 이용되어 왔으며 고려시대에 쓰여진 고려사절요, 중국의 계림유사, 계림지, 해동역사에 황칠의 채취시기, 사용용도 등이 기록되어 있으며 그 이전인 백제의 특산품이었다는 것이 당나라 역사서인 책부원구, 통전에 남아있다. 이시진의 본초강목에는 황칠나무가 번열 제거, 안질 및 화상치료, 나병에 효과가 있으며 무해하다고 기록되어 있다. Dendropanax morbifera Lev. Belonging to the family Elmaceae is an evergreen broad-leaved arboreous tree growing in the southern coastal region of Jeju Island and Jeju Island. ) Is called. Hwangchil has been used as a rare paint that emits the golden color of emperor's armor, helmets, and other metal ornaments since the Three Kingdoms. It is a Korean envoy, written in the Goryeo Dynasty, Guilin History, Guilin, and Haedong History. It is recorded and remains a specialty of Baekje, the old book of Tang Dynasty History Book. It is recorded in the herbaceous tree of Lee Si-jin that Hwangchil-tree is effective and effective for removing heat, treating eye and burns, and leprosy.

황칠의 성분에 대해서는 황금색 도막을 형성하는 도료성분인 비휘발성분 66.7%, 방향성분 10.8%, 수분 8.1%, 고형분 14.4%로 구성되어 있다. 방향성분은 주로 세스퀴테르펜류의 β-쿠베벤(cubebene), γ-셀리넨(selinene), δ-카디넨 (cadinene)으로 이루어져 있으며 이들 성분이 신경계에 대한 진정작용과 강장작용을 나타낸다고 알려져 있다.The components of the yellow lacquer are composed of 66.7% of non-volatile components, 10.8% of aromatic components, 8.1% of moisture, and 14.4% of solid components, which are the coating components forming the golden coating. The aromatic components consist mainly of β-cubebene, γ-selinene, and δ-cadinene of sesquiterpenes, and these components are known to exhibit sedative and tonic effects on the nervous system. .

현재까지 밝혀진 황칠의 약리작용으로는, 잎추출물 분획에서 항암작용과, 황칠 추출분획에서 α-토코페롤보다 다소 약한 항산화작용이 있음이 밝혀졌을 뿐이다(한국특허 공개공보 제2000-0004499호).The pharmacological action of the hwangchil discovered so far, only the anticancer action in the leaf extract fraction, and the antioxidant activity in the hwangchil extract fraction was found to be slightly weaker than α-tocopherol (Korean Patent Publication No. 2000-0004499).

본 발명자들은 황칠에 대한 연구를 예의 수행한 결과, 황칠로부터 얻은 추출물이 간세포 보호 효과가 있음을 최초로 확인하여 본 발명을 완성하게 되었다.The present inventors earnestly conducted a study on the yellow lacquer, and as a result, the extract obtained from the yellow lacquer was confirmed for the first time that hepatocellular protective effect was completed the present invention.

따라서, 본 발명은 지방간, 간염, 간경화 등과 같은 간질환을 예방 및 치료할 수 있는 효과를 갖는 황칠 추출물 및 그 분획물과 이들을 포함하는 간 세포 보호용 조성물을 제공하는 데에 그 목적이 있다.Accordingly, an object of the present invention is to provide a hwangchil extract and its fractions and liver cell protective composition comprising them having the effect of preventing and treating liver diseases such as fatty liver, hepatitis, cirrhosis and the like.

도 1은 본 발명의 황칠나무(Dendropanax morbiferaLev.)의 알콜 추출물 및 그의 분획물들을 얻는 방법을 도식화하여 나타낸 도면이다.1 is a diagram schematically illustrating a method for obtaining an alcohol extract and fractions thereof of the yellow larch ( Dendropanax morbifera Lev.) Of the present invention.

본 발명은 황칠나무(Dendropanax morbiferaLev.)의 수지를 알코올 용매로 추출한 간세포 보호효과를 갖는 황칠 추출물을 제공한다.The present invention provides a hwangchil extract having a hepatocyte protective effect extracted from the resin of the Hwangchil wood ( Dendropanax morbifera Lev.) With an alcohol solvent.

본 발명은 또한 황칠나무 수지를 알코올에 넣고 50∼100℃에서 5∼24시간 동안 온탕하여 얻은 추출액을 40∼60℃로 냉각시켜 잔사를 여과한 상등액을 증발농축시킨 농축액임을 특징으로 하는 간세포 보호효과를 갖는 황칠 추출물을 제공한다.The present invention is also a hepatocellular protective effect, characterized in that the concentrated liquid obtained by evaporating and condensing the supernatant obtained by cooling the extract obtained by hot water at 50-100 ° C. and hot water at 50-100 ° C. for 5 to 24 hours. It provides a yellow lacquer extract having.

본 발명은 또한 황칠 추출물을 헥산, 클로로포름, 부탄올 및 물을 용매로 하여 순차적으로 반복 추출하여 얻어진 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 부탄올 분획물 및 물 분획물로 이루어진 군에서 선택되는, 간세포 보호효과를 갖는 황칠 분획물을 제공한다.The present invention also provides a hwangchil fraction having a hepatocyte protection effect, which is selected from the group consisting of hexane fraction, chloroform fraction, butanol fraction and water fraction obtained by sequentially repeatedly extracting the yellow lacquer extract hexane, chloroform, butanol and water as a solvent. to provide.

본 발명은 또한 황칠 추출물 및/또는 황칠 분획물을 유효성분으로 포함하는 간세포 보호효과를 갖는 조성물을 제공한다.The present invention also provides a composition having a hepatocyte protective effect comprising the yellow lacquer extract and / or the yellow lacquer fraction as an active ingredient.

본 발명은 또한 황칠 추출물 및/또는 그의 분획물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 간세포 보호 효과를 갖는 약학 조성물을 제공한다.The present invention also provides a pharmaceutical composition having a hepatocellular protective effect, which comprises a yellow lacquer extract and / or a fraction thereof and a pharmaceutically acceptable carrier.

본 발명은 또한 황칠 추출물 및/또는 그의 분획물을 포함하는 간세포 보호효과를 갖는 식품학적 조성물을 제공한다.The present invention also provides a food composition having a hepatocyte protective effect comprising a yellow lacquer extract and / or a fraction thereof.

이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.

본 발명의 첫번째 양상은 황칠나무(Dendropanax morbiferaLev.)의 수지를 알코올 용매로 추출한 간세포 보호효과를 갖는 황칠 추출물을 제공하는 것이다.The first aspect of the present invention is to provide a hwangchil extract having a hepatocyte protective effect extracted from the resin of Hwangchil wood ( Dendropanax morbifera Lev.) With an alcohol solvent.

본 발명의 황칠의 추출방법의 일예는 하기와 같다.An example of the extraction method of the yellow lacquer of the present invention is as follows.

먼저 황칠을 추출용매, 예컨대, 메탄올, 에탄올, 이소프로판올, 부탄올 등의 알코올 용매에 넣고 50∼120℃에서 5∼24시간 동안 가온하거나, 상온에서 소니케이션 하거나, 상온 또는 4℃ 에서 5∼7일간 냉침하여 추출한 다음, 추출액을 여과하여 상등액을 취한다. 상기와 같은 추출 및 여과조작을 1회 이상 반복 실시하여 얻은 상등액을 모두 합하여 용매를 증발시켜 농축한다. 추출 및 여과조작은 수회 반복 실시하는 것이 바람직하며, 농축액은 건조하여 분말상태로 얻을 수도 있다.First, the yellow lacquer is added to an extraction solvent such as methanol, ethanol, isopropanol, butanol and the like, and heated at 50 to 120 ° C. for 5 to 24 hours, sonicated at room temperature, or cooled at room temperature or 4 ° C. for 5 to 7 days. After extraction, the extract is filtered to obtain a supernatant. All the supernatants obtained by repeating the above extraction and filtering operations one or more times are combined and concentrated by evaporation of the solvent. The extraction and filtration operations are preferably repeated several times, and the concentrate may be dried to obtain a powder.

본 발명의 두번째 양상은 또한 상기 황칠 추출물을 헥산, 클로로포름, 부탄올 및 물을 용매로 하여 순차적으로 반복 추출하여 얻어진 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 부탄올 분획물 및 물 분획물로 이루어진 군에서 선택되는, 간세포 보호효과를 갖는 황칠 분획물을 제공하는 것이다.The second aspect of the present invention is also selected from the group consisting of hexane fraction, chloroform fraction, butanol fraction and water fraction obtained by sequentially repeatedly extracting the yellow lacquer extract using hexane, chloroform, butanol and water as a solvent, hepatocellular protective effect To provide a yellowish fraction having.

이와 같이, 극성 정도에 따른 분획을 얻기 위해 상기 분말상 메탄올 추출물을 유기 용매인 헥산, 클로로포름, 부탄올 및 물로 순차적으로 추출 및 여과하는 조작을 수회 반복하여 실시하여 황칠 분획물을 수득할 수 있다. 수득된 분획물은 건조하여 액상 또는 분말상태로 사용할 수도 있다.In this way, in order to obtain a fraction according to the polarity, the powdery methanol extract may be repeatedly extracted and filtered with organic solvents hexane, chloroform, butanol and water in order to be repeated several times to obtain a yellow lacquer fraction. The obtained fractions may be dried and used in liquid or powder form.

본 발명의 황칠나무(Dendropanax morbiferaLev.)의 알콜 추출물 및 그의 분획물들을 얻는 방법을 도 1에 도식화하여 나타내었다.A method of obtaining an alcohol extract and fractions thereof of the yellow larch ( Dendropanax morbifera Lev.) Of the present invention is shown schematically in FIG.

본 발명의 상기 황칠 추출물 및 그 분획물은 하기 실험예와 같이, 우수한 간 세포 보호 효과를 갖는다. 따라서 지방간, 간염, 간경화 등의 간 질환을 예방 또는 치료하는데 적합하다.The hwangchil extract of the present invention and its fractions, as in the following experimental example, has an excellent liver cell protective effect. Therefore, it is suitable for preventing or treating liver diseases such as fatty liver, hepatitis and cirrhosis.

본 발명의 세번째 양상은 황칠 추출물 및/또는 분획물과 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 간세포 보호 효과를 갖는 약학 조성물을 제공하는 것이다.A third aspect of the present invention is to provide a pharmaceutical composition having a hepatocellular protective effect, characterized in that it comprises a yellow lacquer extract and / or fractions and a pharmaceutically acceptable carrier.

본 발명에 따르는 간세포 보호용 약학 조성물은 상기의 황칠 추출물 또는 그 분획물만으로 구성될 수 있으며, 또한 기타의 다른 약물 및 통상의 약제학적 첨가제를 더 포함할 수도 있다. 또한, 본 발명은 임상적으로 투여시에 약제학적으로 허용되는 담체와 본 발명의 황칠 추출물 또는 그 분획물을 배합하여 경구 또는 비경구 투여에 적합한 고체, 반고체 또는 액체 형태의 약제학적 제제로 제형화시킨 약학 조성물을 제조하여 투여할 수 있다.The pharmaceutical composition for protecting hepatocytes according to the present invention may be composed only of the above-described yellow lacquer extract or a fraction thereof, and may further include other drugs and conventional pharmaceutical additives. In addition, the present invention is formulated into a pharmaceutical preparation in solid, semi-solid or liquid form suitable for oral or parenteral administration by combining the pharmaceutically acceptable carrier and the hwangchil extract of the present invention or a fraction thereof upon clinical administration. Pharmaceutical compositions can be prepared and administered.

상기 약학 조성물의 적합한 제형으로는 정제, 당의정, 경질 또는 연질의 캡슐제, 용액제, 현탁제 또는 유화액제, 주사제, 좌약제 등이 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 상기한 목적에 적합하게 사용할 수 있는 약제학적으로 허용되는 담체는 고체이거나 액체일 수 있으며, 희석제, 향미제, 가용화제, 윤활제, 현탁제, 결합제, 붕해제 등으로 작용할 수 있는 물질 중의 어느 하나 또는 그 이상을 포함할 수 있다.Suitable formulations of the pharmaceutical composition include, but are not limited to, tablets, dragees, hard or soft capsules, solutions, suspensions or emulsions, injections, suppositories, and the like. Pharmaceutically acceptable carriers which may be suitably used for the above purposes may be solid or liquid, any one of which may act as a diluent, flavor, solubilizer, lubricant, suspending agent, binder, disintegrant, or the like. It may include more than that.

본 발명의 황칠 추출물, 그의 분획물 또는 이를 포함하는 간 세포 보호제 조성물은 하루에 황칠 추출물 또는 그의 분획물을 체중 kg당 건조분말로서 0.01∼0.10 g을 투여할 수 있다. 투여량은 환자의 필요정도, 치료되어야할 상태의 정도, 그리고 사용될 화합물에 따라 변할 수 있고, 필요에 따라 일정시간 간격으로 수회 투여할 수 있다.The hwangchil extract of the present invention, fractions thereof or liver cell protective agent composition comprising the same may be administered 0.01 ~ 0.10 g of the hwangchil extract or fractions thereof as dry powder per kg of body weight per day. The dosage can vary depending on the needs of the patient, the condition to be treated, and the compound to be used, and can be administered several times at regular time intervals as needed.

상기 본 발명의 의약 조성물의 용도는 반드시 의약용으로 한정되는 것이 아니고, 스쿠왈렌, 알로에 등의 용법과 같은 건강 보조 식품으로도 사용할 수 있다.The use of the pharmaceutical composition of the present invention is not necessarily limited to a medicament, and can also be used as a dietary supplement such as the usage of squalane, aloe and the like.

본 명세서에 사용된, 용어 "건강 보조 식품"은 의약품 허가를 받지 않고 사용되는 조성물로서, 스쿠왈렌 등과 같은 용법으로 사용되는 캡슐제 등을 의미한다.As used herein, the term "health supplement" is a composition used without a drug license, it means a capsule and the like used in the usage, such as squalene and the like.

본 발명의 네번째 양상은 황칠 추출물 및/또는 분획물을 포함하는 간세포 보호효과를 갖는 식품학적 조성물을 제공하는 것이다.A fourth aspect of the present invention is to provide a food composition having a hepatocellular protective effect comprising a yellow lacquer extract and / or a fraction.

상기 식품학적 조성물은 음료, 약술, 김치, 요구르트, 우유, 아이스크림, 빵, 떡 또는 국수 등이 바람직하며, 이에 제한되지는 않는다.The food composition is preferably a beverage, medicine, kimchi, yogurt, milk, ice cream, bread, rice cake or noodles, but is not limited thereto.

이하, 본 발명의 바람직한 실시예를 상세하고자 하는 바, 본 발명은 다양한 변화와 변경 및 균등물을 사용할 수 있다. 본 발명은 다음 실시예를 적절히 변형하여 동일하게 응용할 수 있음이 명확하다. 따라서, 다음 실시예의 기재내용으로 본 발명이 한정되는 것은 아니다. 단, 본 명세서 및 실시예에 기재된 %는 용량%를 의미한다.Hereinafter, preferred embodiments of the present invention will be described in detail, and the present invention may use various changes, modifications, and equivalents. It is clear that the present invention can be applied in the same manner by appropriately modifying the following examples. Therefore, the present invention is not limited to the description of the following examples. However,% in this specification and an Example means the volume%.

실시예 1 : 황칠 추출물 및 황칠 분획물의 제조Example 1: Preparation of the yellow lacquer extract and the yellow lacquer fraction

본 실시예에서 사용한 황칠은 진도에서 6∼7 월에 직접 채취한 것을 사용하였다. 채취한 황칠 100 g을 80 % 메탄올(메탄올:물=4:1) 500 ml에 넣고 환류 냉각기를 장치한 후 95∼100 ℃ 수욕조에서 12시간 동안 온탕하였다. 이 추출액을 약 50℃정도로 냉각시키고 여러 겹의 거즈로 여과하여 상등액을 취하였다. 이와 같은 추출 및 여과 조작을 3번 반복하여 상등액을 합하고 회전증발장치(rotary evaportor)를 이용하여 감압 하에서 메탄올을 완전히 증발시켜 농축하여 본 발명의 황칠 메탄올 추출물(78g)을 제조하였다.The yellow lacquer used in this example was a sample taken directly from June to July at Jindo. 100 g of the extracted yellow lacquer was put in 500 ml of 80% methanol (methanol: water = 4: 1), and equipped with a reflux condenser, followed by warming in a 95-100 ° C. water bath for 12 hours. The extract was cooled to about 50 ° C. and filtered through several layers of gauze to obtain a supernatant. This extraction and filtration was repeated three times to combine the supernatant and concentrated by completely evaporating methanol under reduced pressure using a rotary evaporator (rotary evaportor) to prepare a hwangchil methanol extract of the present invention (78g).

또한 상기 황칠 메탄올 추출물은 헥산, 클로로포름, 부탄올 및 물을 적량 첨가하여, 이들 용매에 대한 가용부로 순차적으로 분획하고 각 분획물은 감압 농축하여 본 발명의 황칠 헥산 분획물(10g), 클로로포름 분획물(30g), 부탄올 분획물(3g) 및 물 분획물(5g)을 제조하였다.In addition, the hwangchil methanol extract is added appropriate amount of hexane, chloroform, butanol and water, and sequentially fractionated into the soluble part for these solvents, each fraction is concentrated under reduced pressure to the present invention, the hwangchil hexane fraction (10g), chloroform fraction (30g), Butanol fraction (3 g) and water fraction (5 g) were prepared.

실시예 2Example 2

상기 실시예 1에서 최종적으로 얻은 황칠 추출물 농축액 및 분획물을 -80℃에서 얼린 후 동결건조하여 분말을 얻었다.Hwangchil extract concentrate and fractions finally obtained in Example 1 was frozen at -80 ℃ and then lyophilized to obtain a powder.

실시예 3Example 3

황칠 100 g을 80% 메탄올 (메탄올:물=4:1) 500ml에 넣고 실온에서 1일간 또는 4℃에서 7일간 냉침한 후 여러 겹의 거즈로 여과하여 상등액을 취하였다. 이와 같은 추출 및 여과 조작을 3번 반복하여 얻은 상등액을 합하고 회전증발장치(rotary evaportor)를 이용하여 감압 하에서 메탄올을 완전히 증발시켜 농축한 다음 이를 소량의 증류수에 용해하여 본 발명의 황칠 추출물을 제조하였다.100 g of yellow lacquer was added to 500 ml of 80% methanol (methanol: water = 4: 1), and then cooled at room temperature for 1 day or 7 days at 4 ° C., and then filtered through a layer of gauze to obtain a supernatant. The supernatant obtained by repeating this extraction and filtration three times was combined and concentrated by evaporating methanol completely under reduced pressure using a rotary evaporator, and then dissolving it in a small amount of distilled water. .

실시예 4Example 4

상기 실시예 3에서 얻은 황칠 추출물 농출액을 -80℃에서 얼린 후 동결건조하여 분말을 얻었다.The yellow lacquer extract concentrate obtained in Example 3 was frozen at −80 ° C. and lyophilized to obtain a powder.

실시예 5Example 5

상기 실시예 4에서 얻은 황칠 추출물의 건조분말을 분액여두에 넣고 용매인 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 및 물을 적량 첨가하여, 순차적으로 실온에서 1일간 추출한 후 여러겹의 여과지로 여과하여 상등액을 취했다. 이와 같은 추출 및 여과조작을 3번 반복하여 수득한 상등액을 합하고 회전증발장치(rotaryevaporator)를 이용하여 감압하에서 용매를 완전히 증발하여 농축하였다.The dried powder of the Hwangchil extract obtained in Example 4 was added to a separatory filter, and hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol and water as appropriate solvents were added in an appropriate amount. The extract was sequentially extracted at room temperature for 1 day and then filtered through a filter paper of several layers. Drunk. The supernatant obtained by repeating this extraction and filtration three times was combined and concentrated by completely evaporating the solvent under reduced pressure using a rotary evaporator.

실시예 6Example 6

상기 실시예 5에서 최종적으로 얻은 헥산, 클로로포름, 에틸아세테이트, 부탄올 또는 물 분획물을 -80℃에서 얼린 후 동결건조하여 분말을 얻었다.The hexane, chloroform, ethyl acetate, butanol or water fractions finally obtained in Example 5 were frozen at -80 ° C and lyophilized to obtain a powder.

실시예 7 : 정제의 제조Example 7: Preparation of Tablets

상기 실시예 1에 따라 제조된 황칠 추출물 또는 그 분획물을 체질하고, 락토오스, 전분 및 전젤라틴화 옥수수 전분과 혼합한 후, 정제수를 적량 첨가하고 분말로 과립화시켰다. 과립을 건조시킨 후 스테아르산마그네슘과 혼합하고 압착하여 정제를 얻었다. 정제에 사용된 구성성분과 그 사용량은 다음과 같다.Hwangchil extract prepared according to Example 1 or a fraction thereof was sieved, mixed with lactose, starch and pregelatinized corn starch, and then purified water was added appropriately and granulated into powder. The granules were dried and then mixed with magnesium stearate and compressed to obtain tablets. The components used in the purification and the amount thereof used are as follows.

실시예 1의 황칠 추출물 또는 그 분획물 5.0 ㎎Hwangchil extract of Example 1 or a fraction thereof 5.0 mg

락토오스 BP 150.0 ㎎Lactose BP 150.0 mg

전분 BP 30.0 ㎎Starch BP 30.0 mg

전젤라틴화 옥수수 전분 BP 15.0 ㎎Pregelatinized Corn Starch BP 15.0 mg

스테아르산 마그네슘 1.0 ㎎1.0 mg magnesium stearate

실시예 8 : 캡슐제의 제조Example 8 Preparation of Capsules

상기 실시예 2의 황칠 추출물 또는 그 분획물을 체질한 다음 부형제와 혼합한 후, 젤라틴 캡슐중에 충전하여 캡슐을 제조하였다. 사용된 구성성분과 그 사용량은 다음과 같다.Hwangchil extract of Example 2 or a fraction thereof was sieved and mixed with excipients, and then filled into gelatin capsules to prepare capsules. The ingredients used and their amounts used are as follows.

실시예 2의 황칠 추출물 또는 그 분획물 5.0 ㎎5.0 mg of Hwangchil extract or fractions thereof

전분 1500 100.0 ㎎Starch 1500 100.0 mg

스테아르산마그네슘 BP 1.0 ㎎Magnesium Stearate BP 1.0 mg

실시예 9 : 시럽제의 제조Example 9 Preparation of Syrup

정제수 500 ㎖에 백당을 용해시키고, 별도의 용기에 카르복시메틸셀룰로오스나트륨는 따로 정제수 400 ㎖에 용해시킨 다음 상기 백당을 용해시킨 용액과 혼합한 다음 메틸파라벤과 프로필파라벤을 가하여 용해시킨 후 에탄올을 가한 다음 정제수를 전체 용액의 용량이 1000 ㎖가 되도록 하였다. 여기에 체질한 실시예 2의 황칠 추출물 또는 그 분획물을 현탁시켜 시럽제를 얻었다. 사용된 구성성분과 그 사용량은 다음과 같다.Dissolve the white sugar in 500 ml of purified water, and separately dissolve the carboxymethylcellulose sodium in 400 ml of purified water in a separate container, mix it with the solution in which the white sugar was dissolved, add methylparaben and propylparaben to dissolve, add ethanol, and then purified water. The volume of the total solution was set to 1000 ml. Hwangchil extract of Example 2 or a fraction thereof sieved thereto was suspended to obtain a syrup. The ingredients used and their amounts used are as follows.

실시예 2의 황칠 추출물 또는 그 분획물 5.0 g5.0 g of yellow lacquer extract of Example 2 or a fraction thereof

백당 637.5 g637.5 g per bag

카르복시메틸셀룰로오스나트륨 2.0 g2.0 g of sodium carboxymethylcellulose

메틸파라벤 0.28 g0.28 g of methyl paraben

프로필파라벤 0.12 g0.12 g of propylparaben

에탄올 20 ㎖20 ml of ethanol

실시예 10 : 기능성 음료의 제조Example 10 Preparation of Functional Beverages

상기 실시예 1의 황칠 추출물 또는 그 분획물 0.01 중량%와 식용색소 0.05 중량%, 오렌지 에센스 0.05 중량%, 과당 7.0 중량%, 구연산 0.1중량%, 비타민 C 0.05 중량%를 포함하는 일반 기능성 음료 베이스를 첨가한 조성물을 제조한 다음 정제수를 첨가하여 음료를 제조하였다.A general functional beverage base comprising 0.01% by weight of the hwangchil extract or fractions thereof, 0.05% by weight of food coloring, 0.05% by weight of orange essence, 7.0% by weight of fructose, 0.1% by weight of citric acid, and 0.05% by weight of vitamin C One composition was prepared and then purified water was added to prepare a beverage.

실시예 11 : 약술의 제조Example 11 Preparation of Medicine

탈취 정제된 40 중량% 알코올을 증류수로 희석하고, 실시예 1에 따라 제조된 본 발명의 황칠 추출물 0.01 중량%를 첨가하고, 스테비오사이드, 고과당, 아미노산, 구연산, 소금 등을 첨가하여 알코올 함유 농도 15 내지 30중량%로 제조하였다.The deodorized purified 40% by weight alcohol was diluted with distilled water, 0.01% by weight of the yellow lacquer extract of the present invention prepared according to Example 1 was added, and stevioside, high fructose, amino acids, citric acid, salt and the like were added to the alcohol-containing concentration. Prepared from 15 to 30% by weight.

실시예 12 : 건강 보조 식품의 제조Example 12 Preparation of Dietary Supplements

상기 실시예 8의 방법과 유사하게, 젤라틴 캡슐중에 실시예 1의 황칠 추출물 또는 그 분획물(5.0 ㎎)을 전분 1500(100.0 ㎎) 및 스테아르산마그네슘 BP(0.5 ㎎)과 혼합, 충전하여 캡슐을 제조하였다. 이 캡슐은 의약품 허가가 필요없이 건강 보조 식품으로 사용할 수 있다.Similar to the method of Example 8, the capsule was prepared by mixing and filling the yellow lacquer extract of Example 1 or its fraction (5.0 mg) with starch 1500 (100.0 mg) and magnesium stearate BP (0.5 mg) in a gelatin capsule. It was. This capsule can be used as a dietary supplement without requiring drug approval.

실험예 1 : 본 발명의 황칠 추출물 및 황칠 분획물 투여에 의한 에탄올 유발 간독성 억제작용의 측정Experimental Example 1: Determination of ethanol-induced hepatotoxicity inhibitory effect by the administration of Hwangchil extract and Hwangchil fraction of the present invention

본 실험예에서는 황칠 메탄올 추출물 및 분획물과 에탄올 동시투여에 대한 간보호 효과를 실험하였다.In this experimental example, hepatoprotective effects on the co-administration of ethanol extract and fractions and ethanol were tested.

(1) 혈중 GOT, GPT 및 ALP의 농도의 측정(1) Measurement of the concentration of GOT, GPT and ALP in the blood

간은 효소의 농도가 현저히 높고 혈중으로도 유출이 쉬운 혈행구조를 가지고 있으므로 손상된 간으로부터 혈액에 방출되는 간의 효소 활성도 측정은 간 손상 연구에 있어서 가장 유용한 방법 중 하나이며, 특히 혈청 중 GOT, GPT는 간 손상으로 인한 간세포의 괴사와 간 조직의 파괴가 진행됨에 따라 혈중으로 유리되어 높은 활성을 나타내게 된다(Plaa 등, 1982). 따라서, 혈중 GOT, GPT의 측정으로 간기능을 측정할 수 있다. 또한 ALP는 조직 손상시에 혈중으로 배출되는 효소로서, 혈중 ALP의 측정으로 간세포의 손상 정도를 알 수 있다. 구체적인 측정 방법은 하기와 같았다.Since the liver has a high concentration of enzymes and a hematogenous structure that is easy to leak into the blood, measuring the enzyme activity of the liver released from the damaged liver is one of the most useful methods for studying liver damage. Necrosis of liver cells and destruction of liver tissue due to hepatic damage are released into the blood and show high activity (Plaa et al., 1982). Therefore, liver function can be measured by measuring GOT and GPT in blood. In addition, ALP is an enzyme released into the blood at the time of tissue damage, and the level of hepatic cell damage can be known by measuring ALP in the blood. The specific measuring method was as follows.

체중 150∼250g의 Sparague-Dawley계 수컷 흰쥐(각 심험군당 10마리씩 사용)를 22±2℃에서 2주 이상 사육하여 실험실 환경에 적응시킨 뒤 실험에 사용하였고, 고형사료(삼양사료) 및 물을 충분히 공급하였다. 실시예 1의 황칠 메탄올 추출물 및 각 분획물들(황칠 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 부탄올 분획물 및 물 분획물)은 증류수에 현탁하여 100mg/kg씩 1회 경구투여 하였다. 에탄올은 상기 황칠 추출물 및 분획물 투여 직후 6g/kg씩 복강 투여하고 절식시켜 간손상을 유발시켰다. 에탄올 투여 24시간 후 에테르로 마취시키고, 복부 정중선을 절개하여 심장에서 채혈하고 3,000rpm에서 20분간 원심분리하여 얻은 혈장을 시료로 사용하였다. 상기 혈장중의 혈장 글루타메이트 옥살레이트 트랜스아미네이즈(glutamate oxalate transaminase: GOT), 글루타메이트 피루베이트 트랜스아미네이즈(Rglutamate pyruvate transaminase: GPT) 및 알칼리 포스파테이즈(alkaline phosphatase: ALP)를 kit(영동제약)를 이용하여 분석하였다.Sparague-Dawley male rats (10 rats per test group), weighing 150-250 g, were kept at 22 ± 2 ° C for at least 2 weeks to adapt to the laboratory environment and used for experiments. Solid feed (Samyang feed) and water It was supplied sufficiently. Hwangchil methanol extract of Example 1 and each of the fractions (hwangchil hexane fraction, chloroform fraction, butanol fraction and water fraction) was suspended in distilled water and administered once orally at 100mg / kg. Ethanol was intraperitoneally administered and fasted at 6 g / kg immediately after administration of the hwangchil extract and fractions to cause liver damage. After 24 hours of ethanol administration, anesthesia was anesthetized, the abdominal midline was excised to collect blood from the heart, and the plasma obtained by centrifugation at 3,000 rpm for 20 minutes was used as a sample. Plasma glutamate oxalate transaminase (GOT), glutamate pyruvate transaminase (GPT) and alkaline phosphatase (ALP) in the plasma The analysis was carried out.

GOT 기질액 1.0ml를 37℃ 수조에서 2∼3분간 가온하고, 피검 혈청을 0.2ml 가하고, 37℃ 수조에서 60분간 가온하고, 발색액을 1.0ml 가한 후 실온에서 20분간 방치한 후, 0.4N-NaOH 10.0ml를 가하고 충분히 혼합 후 증류수를 대조로 하여 505nm에서 흡광도를 UV/VIS 스텍트로포토미터(Jasco V-530)으로 읽어, 혈중 GOT의 농도를 측정하였다.1.0 ml of GOT substrate solution was heated in a 37 ° C. water bath for 2 to 3 minutes, 0.2 ml of test serum was added and warmed in a 37 ° C. water bath for 60 minutes, 1.0 ml of a coloring solution was added, and left at room temperature for 20 minutes. After adding 10.0 ml of NaOH and mixing well, the absorbance was read by UV / VIS spectrophotometer (Jasco V-530) at 505 nm with distilled water as a control and the concentration of blood GOT was measured.

또한 GPT 기질액 1.0ml를 37℃ 수조에서 2∼3분간 가온하고, 피검 혈청을 0.2ml 가하고, 37℃ 수조에서 30분간 가온하고, 발색액을 1.0ml 가한 후 실온에서 20분간 방치한 후, 0.4N-NaOH 10.0ml를 가하고 충분히 혼합 후 증류수를 대조로 하여 505nm에서 흡광도를 읽어 혈중 GPT의 농도를 측정하였다.In addition, 1.0 ml of GPT substrate solution was heated in a 37 ° C. water bath for 2-3 minutes, 0.2 ml of test serum was added, warmed in a 37 ° C. water bath for 30 minutes, 1.0 ml of a coloring solution was added, and left at room temperature for 20 minutes. After 10.0 ml of N-NaOH was added and mixed well, the absorbance was read at 505 nm with distilled water as a control to measure the concentration of blood GPT.

또한 ALP 기질액 2.0ml를 37℃수조에서 2∼3분간 가온하고, 피검혈청을 0.05ml를 가하고, 37℃ 수조에서 정확하게 15분간 가온하고, 발색액을 2.0ml 가한 후 10분이상 방치한 후, 상기와 동일한 방법으로 조작한 맹검액을 대조로 하여 570nm에서 흡광도를 읽어 혈중 ALP의 농도를 측정하였다.In addition, 2.0 ml of ALP substrate solution was heated in a 37 ° C. water bath for 2-3 minutes, 0.05 ml of the test serum was added, followed by warming for 15 minutes in a 37 ° C. water bath, and 2.0 ml of a coloring solution was added and left for at least 10 minutes. Using the blank solution operated in the same manner as described above, the absorbance was read at 570 nm to measure the concentration of blood ALP.

모든 실험 결과는 평균값과 표준오차를 계산하고, 각 군간의 차이는 Student's t-test를 사용하여 p값이 0.05 미만일 때 통계적으로 유의성이 있다고 판정하였다. 상기 측정 결과를 하기 표 1에 나타내었다.All experimental results calculated the mean and standard error, and the differences between the groups were statistically significant when the p-value was less than 0.05 using Student's t-test. The measurement results are shown in Table 1 below.

처리process Number GOT(IU/L)GOT (IU / L) GPT(IU/L)GPT (IU / L) ALP (IU/L)ALP (IU / L) 정상normal 1010 60.7±3.260.7 ± 3.2 26.4±6.426.4 ± 6.4 62.7±31.862.7 ± 31.8 에탄올(대조군)Ethanol (Control) 1010 105.0±1.6105.0 ± 1.6 47.5±5.747.5 ± 5.7 177.3±27.3177.3 ± 27.3 황칠 메탄올총추출물 + 에탄올Hwangchil Methanol Total Extract + Ethanol 1010 87.3±8.387.3 ± 8.3 32.3±4.3* 32.3 ± 4.3 * 152.21±21.3152.21 ± 21.3 황칠 물분획물+ 에탄올Hwangchil Water Fraction + Ethanol 1010 92.8±10.492.8 ± 10.4 36.8±3.9* 36.8 ± 3.9 * 143.25±23.9143.25 ± 23.9 황칠 부탄올 분획물+ 에탄올Hwangchil Butanol Fraction + Ethanol 1010 85.0±13.1* 85.0 ± 13.1 * 35.5±6.7* 35.5 ± 6.7 * 136±15.3* 136 ± 15.3 * 황칠 클로로포름분획물 + 에탄올Hwangchil Chloroform Fraction + Ethanol 1010 88.8±9.6* 88.8 ± 9.6 * 32.3±9.4* 32.3 ± 9.4 * 157±29.0157 ± 29.0 황칠 헥산 분획물+ 에탄올Hwangchil Hexane Fraction + Ethanol 1010 73.7±6.2** 73.7 ± 6.2 ** 27.3±6.6** 27.3 ± 6.6 ** 148±22.1148 ± 22.1

(* : p<0.05, ** : p<0.01)(*: p <0.05, **: p <0.01)

상기 표 1에서 알 수 있듯이, 황칠 메탄올 총 추출물 및 그 분획물들을 에탄올과 동시에 투여한 경우, GOT의 경우 황칠 부탄올 총 추출물 및 그의 분획물 투여군 모두에서 현저한 감소를 보였고, GPT의 경우에도 황칠 부탄올 총 분획물 및 그의 분획물 투여군 모두 현저한 감소를 보였다. 특히, 황칠 헥산 분획물의 투여의 경우. GOT, GPT 모두 정상값에 가깝게 감소되어 에탄올에 의한 간손상 보호 효능이 매우 탁월함을 알 수 있었다.As can be seen from Table 1, when the total extract and the fractions of the hwangchil methanol and its fractions were administered simultaneously with ethanol, the GOT showed a significant decrease in both the total extract and the group of Hwangchil butanol extract and its fraction administration group, even in the case of GPT All of the fraction administration groups showed a significant decrease. In particular, for the administration of the lactose hexane fraction. Both GOT and GPT were reduced to near normal values, indicating that ethanol is highly effective in protecting liver damage.

또한 ALP의 경우도 황칠 추출물 및 그 분획물 투여군에서 모두 현저하게 감소하였다. 따라서, 황칠 분획물 및 그 분획물들이 에탄올 투여에 의한 간조직 손상으로부터 간세포를 보호하는 것을 알 수 있다.In addition, ALP also significantly decreased in both the group and the fraction administration group. Thus, it can be seen that the hwangchil fraction and its fractions protect the hepatocytes from liver tissue damage by ethanol administration.

(2) 간세포의 말론디알데하이드(Malondialdehyde: MDA)의 농도의 측정(2) Measurement of the concentration of malondialdehyde (MDA) in hepatocytes

세포막의 인지질은 유리 라디칼(free radical)의 공격에 의해서 리피드 퍼옥시 라디칼을 거쳐 리피드 엔도퍼옥사이드(lipid endoperoxide) 라디칼 및 리피드엔도퍼옥사이드로 된 후 분해되어 MDA를 생성하게 되므로, MDA는 지질과산화의 정도를 측정하는 지표가 되며, 지질과산화는 산화적 스트레스의 지표로서 널리 사용되고 있다(Johansson, .I 등, 1985; Ayene, I. S. 등, 1992). 생체 내에서 과산화지질은 세포의 구성 성분인 단백질, RNA 및 DNA 등과 작용하여 미토콘드리아 등의 기능이상과 생화학적 결론을 일으키며 이로 인해서 질병과 노화를 촉진시키는 물질로 주목받고 있다. 특히 생체 막에서 과산화지질이 잘 형성되며 생체막의 주요구성 성분인 다가불포화지방산이 유리 라디칼로 형성된 과산화지질에 의해 지방조성이 변화되기 때문에 생체막의 기능이 저하되고, 유동성을 감소시켜서 막의 주요 기능인 물질수송 및 투과성이 감소됨으로써, 항상성 유지에 지장을 초래하게 된다(Plaa, G. L., 1976; Curtis, M. T., 1984; Lacko, A. G., 1984).The phospholipids of the cell membrane are formed through lipid peroxy radicals and lipid endoperoxide radicals and lipid endoperoxides by the attack of free radicals, which are then decomposed to form MDA. Lipid peroxidation is widely used as an indicator of the degree of oxidative stress (Johansson, .I et al., 1985; Ayene, IS et al., 1992). In vivo, lipid peroxide acts on proteins, RNA, and DNA, which are components of cells, resulting in dysfunction and biochemical conclusions such as mitochondria, which has attracted attention as a substance that promotes disease and aging. In particular, since lipid peroxide is well formed in the biological membrane and polyunsaturated fatty acid, which is a major component of the biological membrane, is changed in fat composition by lipid peroxide formed of free radicals, the function of the biological membrane is degraded and fluidity is reduced to reduce fluidity. And reduced permeability, which impedes maintenance of homeostasis (Plaa, GL, 1976; Curtis, MT, 1984; Lacko, AG, 1984).

에탄올은 간대사효소인 CYP 2E1에 의해 대사중간체로 되는 과정에서 산소 라디칼을 생성하여 간세포의 지질과산화를 초래하고 지질과산화물이 생체막에 구조적인 변화를 일으키며 내부의 효소계가 파괴됨으로써 혈액 및 조직내 과산화지질 함량이 증가하게 되므로, 간세포의 MDA 농도가 높을 수록 간기능이 저하된 것을 의미하므로, MDA 농도가 간기능 검사의 지표가 될 수 있다.Ethanol generates oxygen radicals in the process of metabolic intermediates by CYP 2E1, a hepatic metabolic enzyme, resulting in lipid peroxidation of hepatocytes, structural changes in biological membranes, and destruction of the enzyme system inside, resulting in lipid peroxidation in blood and tissues. Since the content is increased, the higher the MDA concentration of hepatocytes means that the liver function is lowered, MDA concentration may be an indicator of liver function test.

본 발명의 황칠 추출물 및 그의 분획물 투여에 의한 MDA 억제작용을 측정하는 구체적인 방법은 하기와 같았다.The specific method for measuring the MDA inhibitory effect by administration of the hwangchil extract and fractions thereof of the present invention was as follows.

상기 (1)에서 기술된 방법에 따라 황칠 메탄올 추출물과 그의 분획물들, 및 에탄올을 투여하고, 에탄올 최종투여 24시간 후 적출한 간조직을 생리식염수로 씻고 세절한 후 일부분을 정량하여 무게 5배에 해당하는 인산완충용액을 넣고 균질화시켰다. 균질화된 시료 0.5ml와 SDS 0.4ml를 넣고 37℃ 수욕상에서 가용화시켰다. 0.1N HCl 2ml와 0.67% TBA액을 넣고 혼합한 후, 95℃의 수욕상에서 50분간 가열시켰다. 얼음 수욕상에서 반응을 중지시키고 5ml의 부탄올을 넣었다. 이후 3,000rpm에서 10분간 원심분리한 후 535nm에서 흡광도를 측정했다. 블랭크(blank)는 지질을 제외한 모든 시약을 함유하고 동일 반응과정을 거쳐 구했다. 상기 측정 결과를 하기 표 2에 나타내었다.Hwangchil methanol extract and its fractions, and ethanol were administered according to the method described in (1) above, and the liver tissues extracted 24 hours after the final ethanol administration were washed with physiological saline, severed and quantitated, and weighed by 5 times. The corresponding phosphate buffer solution was added and homogenized. 0.5 ml of homogenized sample and 0.4 ml of SDS were added and solubilized in a 37 ° C. water bath. 2 ml of 0.1N HCl and 0.67% TBA solution were added and mixed, followed by heating for 50 minutes on a 95 ° C. water bath. The reaction was stopped on an ice water bath and 5 ml of butanol was added. After centrifugation at 3,000 rpm for 10 minutes, the absorbance at 535 nm was measured. Blanks were obtained by the same reaction procedure, containing all reagents except lipids. The measurement results are shown in Table 2 below.

처리process Number MDAMDA 정상normal 1010 0.0154±0.0020.0154 ± 0.002 에탄올(대조군)Ethanol (Control) 1010 0.0358±0.0010.0358 ± 0.001 황칠 메탄올총추출물 + 에탄올Hwangchil Methanol Total Extract + Ethanol 1010 0.0302±0.003* 0.0302 ± 0.003 * 황칠 물 분획물+ 에탄올Crude Water Fraction + Ethanol 1010 0.0277±0.002** 0.0277 ± 0.002 ** 황칠 부탄올 분획물+ 에탄올Hwangchil Butanol Fraction + Ethanol 1010 0.0270±0.004* 0.0270 ± 0.004 * 황칠 클로로포름 분획물+ 에탄올Hwangchil Chloroform Fraction + Ethanol 1010 0.0290±0.003* 0.0290 ± 0.003 * 황칠 헥산 분획물+ 에탄올Hwangchil Hexane Fraction + Ethanol 1010 0.0325±0.0020.0325 ± 0.002

(* : p<0.05, ** : p<0.01)(*: p <0.05, **: p <0.01)

상기 표 2와 같이, 본 발명의 황칠 추출물 및 그 분획물들을 투여하고 간세포의 MDA의 농도를 측정한결과, MDA의 유의성 있는 감소를 보였다. 특히, 황칠 부탄올 및 클로로포름 분획물이 50%이상 과산화지질 생성을 억제하여, 간보호작용을 나타냄을 알 수 있고, 이 작용이 CYP 2E1효소 기능과 연관이 있음을 보여주었다.As shown in Table 2, when the Hwangchil extract of the present invention and its fractions were administered and the concentration of MDA in hepatocytes was measured, a significant decrease in MDA was observed. In particular, it was found that hwangchil butanol and chloroform fractions inhibited the formation of lipid peroxide by more than 50%, showing hepatoprotective action, and this action is related to CYP 2E1 enzyme function.

실험예 2. 본 발명의 황칠 추출물 및 황칠 분획물 전투여에 대한 에탄올 유발 간독성 억제작용의 측정Experimental Example 2. Determination of ethanol-induced hepatotoxicity inhibitory effect on combating the yellow and yellow extract of the present invention

본 실험예에서는 황칠 메탄올 추출물 및 분획물의 전투여에 의한 간보호 효과를 실험하였다.In this experimental example, the hepatoprotective effect of the hwangchil methanol extract and the fraction of the filtrate was tested.

체중 150∼250g의 Sparague-Dawley계 수컷 흰쥐를 22±2℃에서 2주 이상 사육하여 실험실 환경에 적응시킨 뒤 실험에 사용하였고, 고형사료(삼양사료) 및 물을 충분히 공급하였다. 실시예 1의 황칠 메탄올 추출물 및 각 분획물들(황칠 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 부탄올 분획물 및 물 분획물)은 증류수에 현탁하여 100mg/kg씩 1회 경구투여 하였다. 에탄올은 황칠 추출물 및 분획물 투여 24시간 후 복강 투여하고 절식시켜 간손상을 유발시켰다. 채혈과 혈정의 분리 및 혈액의 GOT, GPT 및 ALP의 생화학적 분석과, 간세포의 MDA의 생화학적 분석은 실험예 1과 동일하게 실시하였고, GOT, GPT 및 ALP에 대한 결과를 하기 표 3에 나타내었고, MDA에 대한 결과는 하기 표 4에 나타내었다.Sparague-Dawley male rats weighing 150-250 g were reared at 22 ± 2 ° C. for at least 2 weeks to adapt to the laboratory environment, and were used in the experiment. Solid feed (Samyang feed) and water were sufficiently supplied. Hwangchil methanol extract of Example 1 and each of the fractions (hwangchil hexane fraction, chloroform fraction, butanol fraction and water fraction) was suspended in distilled water and administered once orally at 100mg / kg. Ethanol was intraperitoneally administered and fasted 24 hours after hwangchil extract and fractions to induce liver damage. Isolation of blood and blood serum, biochemical analysis of GOT, GPT and ALP of blood, and biochemical analysis of MDA of hepatocytes were performed in the same manner as in Experiment 1, and the results for GOT, GPT and ALP are shown in Table 3 below. The results for MDA are shown in Table 4 below.

처리process Number GOT(IU/L)GOT (IU / L) GPT(IU/L)GPT (IU / L) ALP (IU/L)ALP (IU / L) 정상normal 1010 60.7±3.260.7 ± 3.2 26.4±6.426.4 ± 6.4 62.7±31.862.7 ± 31.8 에탄올(대조군)Ethanol (Control) 1010 106.0±5.1106.0 ± 5.1 42.0±8.842.0 ± 8.8 177.3±27.3177.3 ± 27.3 황칠 메탄올총추출물 + 에탄올Hwangchil Methanol Total Extract + Ethanol 1010 91.6±20.391.6 ± 20.3 29.4±6.729.4 ± 6.7 156.8±37.0156.8 ± 37.0 황칠 물 분획물+ 에탄올Crude Water Fraction + Ethanol 1010 102.0±23.8102.0 ± 23.8 30±5.030 ± 5.0 157.8±53.0157.8 ± 53.0 황칠 부탄올 분획물+ 에탄올Hwangchil Butanol Fraction + Ethanol 1010 87.0±16.987.0 ± 16.9 27.5±8.1* 27.5 ± 8.1 * 150.3±69.3150.3 ± 69.3 황칠 클로로포름 분획 + 에탄올Hwangchil Chloroform Fraction + Ethanol 1010 91.5±38.091.5 ± 38.0 38.3±5.138.3 ± 5.1 169.3±19.1169.3 ± 19.1 황칠 헥산 분획물+ 에탄올Hwangchil Hexane Fraction + Ethanol 1010 86.0±8.6* 86.0 ± 8.6 * 28.5±6.73* 28.5 ± 6.73 * 158.0±38.3158.0 ± 38.3

(* : p<0.05)(*: p <0.05)

상기 표 3에서 알 수 있듯이, 황칠 추출물 및 그 분획물들을 에탄올보다 먼저 투여한 경우도, GOT의 경우 황칠 부탄올 총 추출물 및 그의 분획물 투여군에서 실험예 1의 동시투여한 경우와 마찬가지로, 모두 현저한 감소를 보였고, GPT의 경우에는 황칠 부탄올 분획물 및 그의 분획물 투여군 모두 현저한 감소를 보였다. 또한 ALP의 경우도 황칠 추출물 및 그 분획물 투여군에서 모두 감소하는 경향을 보였다.As can be seen in Table 3, even when the hwangchil extract and its fractions were administered before ethanol, as in the case of co-administration of Experimental Example 1 in the GOT for the hwangchil butanol total extract and its fraction administration group, all showed a significant decrease In the case of, GPT showed a significant decrease in both the group and the group treated with Hwangchil butanol fraction. In addition, ALP also showed a tendency to decrease in both the group and the fraction administration group.

이와 같이 황칠 추출물 및 그 분획물의 전투여에서도 모두 현저하게 간세포 보호작용을 나타내는 것을 알 수 있어, 본 발명의 황칠 추출물 및 그 분획물들을 간질환의 예방제로서 사용할 수 있음을 알 수 있다.As described above, it can be seen that both hwangchil extracts and their fractions exhibit markedly hepatocellular protective action, and that the hwangchil extracts and the fractions of the present invention can be used as a preventive agent of liver disease.

처리process Number MDAMDA 정상normal 1010 0.0154±0.0020.0154 ± 0.002 에탄올(대조군)Ethanol (Control) 1010 0.0358±0.0010.0358 ± 0.001 황칠 메탄올총추출물 + 에탄올Hwangchil Methanol Total Extract + Ethanol 1010 0.0232±0.003* 0.0232 ± 0.003 * 황칠 물 분획물+ 에탄올Crude Water Fraction + Ethanol 1010 0.0222±0.002** 0.0222 ± 0.002 ** 황칠 부탄올 분획물+ 에탄올Hwangchil Butanol Fraction + Ethanol 1010 0.0361±0.0220.0361 ± 0.022 황칠 클로로포름 분획물+ 에탄올Hwangchil Chloroform Fraction + Ethanol 1010 0.0200±0.002** 0.0200 ± 0.002 ** 황칠 헥산 분획물+ 에탄올Hwangchil Hexane Fraction + Ethanol 1010 0.0209±0.004** 0.0209 ± 0.004 **

(* : p<0.05, ** : p<0.01)(*: p <0.05, **: p <0.01)

상기 표 4와 같이, 본 발명의 황칠 추출물 및 그 분획물들을 전투여한 경우도, 간세포의 MDA의 농도가 유의성 있게 감소하였다.As shown in Table 4, even when the Hwangchil extract of the present invention and the fractions of the present invention, the concentration of MDA of hepatocytes was significantly reduced.

이와 같이 황칠 추출물 및 그 분획물의 전투여에서도 모두 현저하게 간세포 보호작용을 나타내는 것을 알 수 있고, 본 발명의 황칠 추출물 및 그 분획물들을 간질환의 예방제로서 사용할 수 있음을 알 수 있다.As described above, it can be seen that both hwangchil extracts and their fractions exhibit markedly hepatocellular protective action, and that the hwangchil extract of the present invention and its fractions can be used as a preventive agent of liver disease.

이상에서 살펴본 바와 같이, 본 발명의 황칠 추출물 또는 그 분획물은 우수한 간세포 보호 효과를 가진다. 따라서, 본 발명의 황칠 추출물 또는 그 분획물 및 이들을 포함하는 약학 조성물은 부작용을 보이지 않으면서 탁월한 간세포 보호 효과를 갖고 있기 때문에 지방간, 간염, 간경화 등과 같이 간세포 보호와 관련된 질환의 예방 및 치료를 목적으로 기존의 치료제에 대체, 또는 병용하여 안심하고 사용할 수 있다.As described above, the hwangchil extract of the present invention or a fraction thereof has an excellent hepatocyte protective effect. Therefore, since the yellow lacquer extract of the present invention or a fraction thereof and a pharmaceutical composition comprising the same have an excellent hepatocyte protective effect without showing side effects, the present invention is intended to prevent and treat diseases related to hepatocyte protection such as fatty liver, hepatitis, cirrhosis, etc. It can be used in peace or in combination with a therapeutic agent of.

또한 본 발명의 황칠 추출물 및 그 분획물은 간보호를 위한 약술, 음료 또는기능성식품 등으로서도 사용할 수 있다.In addition, the hwangchil extract and fractions thereof of the present invention can be used as a medicine, drink or functional food for liver protection.

Claims (9)

황칠나무(Dendropanax morbiferaLev.)의 수지를 알코올 용매로 추출한 간세포 보호효과를 갖는 황칠 추출물. Hwangchil extract having a hepatocyte protective effect extracted from the resin of the Hwangchil wood ( Dendropanax morbifera Lev.) With an alcohol solvent. 제 1 항에 있어서, 상기 황칠 추출물은 황칠나무 수지를 알코올에 넣고 50∼100℃에서 5∼24시간 동안 온탕하여 얻은 추출액을 40∼60℃로 냉각시켜 잔사를 여과한 상등액을 증발농축시킨 농축액임을 특징으로 하는 간세포 보호효과를 갖는 황칠 추출물.The extract of claim 1, wherein the extract is a concentrated solution obtained by evaporating and condensing the supernatant obtained by cooling the extract obtained by adding Hwangchil resin to alcohol and warming it at 50 to 100 ° C for 5 to 24 hours at 40 to 60 ° C. Hwangchil extract having a hepatocyte protective effect. 제 1 항의 황칠 추출물을 헥산, 클로로포름, 부탄올 및 물을 용매로 하여 순차적으로 반복 추출하여 얻어진 헥산 분획물, 클로로포름 분획물, 부탄올 분획물 및 물 분획물로 이루어진 군에서 선택되는, 간세포 보호효과를 갖는 황칠 분획물.Hwangchil fraction having a hepatocyte protection effect is selected from the group consisting of hexane fraction, chloroform fraction, butanol fraction and water fraction obtained by sequentially repeatedly extracting the yellow lacquer extract of claim 1 as a solvent of hexane, chloroform, butanol and water. 제 1 항 또는 제 2 항의 황칠 추출물, 또는 제 3 항의 황칠 분획물을 유효성분으로 포함하는 간세포 보호효과를 갖는 조성물.A composition having a hepatocyte protective effect, comprising the extract of claim 1 or 2, or the extract of claim 3 as an active ingredient. 제 4 항에 있어서, 상기 조성물 및 약제학적으로 허용되는 담체를 포함하는 것을 특징으로 하는 간세포 보호 효과를 갖는 약학 조성물.The pharmaceutical composition according to claim 4, wherein the composition comprises a composition and a pharmaceutically acceptable carrier. 제 5 항에 있어서, 희석제, 향미제, 가용화제, 윤활제, 현탁제, 결합제 및 붕해제 중에서 선택된 하나 또는 둘 이상의 첨가제를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 간세포 보호 효과를 갖는 약학 조성물.6. The pharmaceutical composition according to claim 5, further comprising one or two or more additives selected from diluents, flavors, solubilizers, lubricants, suspensions, binders and disintegrants. 제 4 항에 있어서, 상기 조성물을 포함하는 것을 특징으로 하는 간세포 보호 효과를 갖는 건강 보조 식품.The dietary supplement having hepatocellular protective effect according to claim 4, comprising the composition. 제 4 항에 있어서, 상기 조성물이 식품학적 조성물인 것을 특징으로 하는 조성물.5. A composition according to claim 4, wherein said composition is a food composition. 제 8 항에 있어서, 상기 식품학적 조성물이 음료, 약술, 김치, 요구르트, 우유, 아이스크림, 빵, 떡 및 국수로 이루어진 군에서 선택되는 것임을 특징으로 하는 조성물.The composition of claim 8, wherein the food composition is selected from the group consisting of beverage, medicine, kimchi, yogurt, milk, ice cream, bread, rice cake and noodles.
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