KR20020091463A - 개선된 안정성을 갖는 효소 반응 전혼합물 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 개선된 안정성을 갖는 효소 반응 전혼합물 (pre-mixture)에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 네오트레할로스, 이소트레할로스, 라피노스, 멜레지토스 및 그들의 조합으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 효소 안정화제, 완충용액 및 효소를 포함하는 효소 반응 전혼합물 및 이를 이용한 DNA 증폭용 키트, 염기서열 분석용 키트 및 질병 진단용 키트에 관한 것으로서, 본 발명의 효소 반응 전혼합물은 효소의 안정성을 개선하고, 효소의 반응 혼합물을 미리 혼합하여 보관함으로써 각 반응물을 따로 혼합할 때 발생하는 상호간 오염의 문제를 해소할 수 있으며, 효소 반응 작업의 단계를 획기적으로 단축하여 조작을 간편하게 해줄 뿐만 아니라, 일정한 양의 반응물이 미리 혼합되어 있으므로 여러 반응물을 별도로 혼합할 때 발생될 수 있는 오차를 줄여 실험의 재현성을 높여 결국, 결과의 신뢰도를 증가시킨다.

Description

개선된 안정성을 갖는 효소 반응 전혼합물 {Enzyme Reaction Pre-Mixture with Improved Stability}
본 발명은 개선된 안정성을 갖는 효소 반응 전혼합물 (pre-mixture)에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 특정의 안정화제를 포함하는 효소 반응 전혼합물 및 그를 포함하는 DNA 증폭용 키트에 관한 것이다.
종래에 일반적으로 실시되는 효소 반응은 반응에 필요한 구성 성분들을 따로 혼합하는 다단계 조작을 통해 이루어져 왔다. 이러한 과정은 불편하다는 문제점 뿐만 아니라, 효소 반응마다 반응액을 제조하여야 하므로 구성 성분들이 매번 일정한 양으로 혼합되지 못하고 서로 차이를 보일 가능성이 많다. 특히 효소처럼 미량을 넣어야 하는 경우는 상기한 편차가 더욱 심해 실험 결과가 일정하지 못하는 원인이 되기도 한다. 또한, 구성 성분을 혼합하는 과정에서 구성성분이 상호 오염되는 가능성도 상당히 높아 원하지 않는 결과를 가져올 수도 있다.
이에, 효소 반응액의 전혼합물 (pre-mixture)을 미리 제조하고 수일 또는 수개월 동안 안정되게 저장한 다음, 필요할 때 마다 이를 효소 반응에 이용하는 시도가 이루어지고 있다. 상기 효소 반응 전혼합물의 제조에 있어서, 가장 중요한 고려 사항은 적절한 안정화제의 이용이다.
상기한 안정화제는 세포에서 분리된 효소의 활성을 유지하기 위하여 자연 환경 (natural environment)과 유사한 환경을 만들기 위해서 일반적으로 첨가된다.
상기 안정화제의 예로는 글리세롤 (Gekko, K. et al.,Biochemistry, 20:4677(1981)), 글루코스, 수크로스, 푸럭토스, 소르비톨 등이 있다 (Smith, M.B. et al.,Proc. Aust. Biochem. Soc., 11:4(1978)).
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 논문 및 특허문헌이 참조되고 그 인용은 괄호내에 표시하였다. 인용된 논문 및 특허문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
따라서, 본 발명의 목적은 효소 반응 전혼합물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적은 DNA 중합효소 반응 전혼합물을 제공하는 데 있다.
본 발명의 또 다른 목적은 본 발명에 따라 제조된 DNA 중합효소 반응 전혼합물을 포함하는 DNA 증폭용 키트, 염기서열 분석용 키트 및 질병 진단용 키트를 제공하는 데 있다.
본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기의 발명의 상세한 설명 및 도면을 통하여 보다 명확하게 설명된다.
도 1은 액상의 본 발명의 효소 반응 전혼합물의 안정성을 나타내는 겔 사진;
도 2는 동결 건조된 본 발명의 효소 반응 전혼합물의 안정성을 나타내는 겔 사진;
도 3은 본 발명의 안정화제들이 각각 포함된 효소 반응 전혼합물의 안정성을 비교한 겔 사진; 및
도 4는 RT-PCR을 위한 동결 건조된 본 발명의 역전사 효소 반응 전혼합물의 안정성을 나타내는 겔 사진.
본 발명의 일 양태에 따르면, 본 발명은 네오트레할로스, 이소트레할로스, 라피노스, 멜레지토스 및 그들의 조합으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 효소 안정화제, 완충용액 및 효소를 포함하는 효소 반응 전혼합물 (pre-mixture)를 제공한다.
경이롭게도, 본 발명자들은 네오트레할로스, 이소트레할로스, 라피노스, 멜레지토스 및 그들의 조합이 다른 종래의 당 안정화제 보다 훨씬 우수한 안정화 특성을 발휘함을 확인하였다. 상기한 당은 비환원성 2당류 (네오트레할로스 및 이소트레할로스) 및 3당류 (라피노스 및 멜레지토스)에 속한다.
본 발명의 안정화제 중 네오트레할로스 및 이소트레할로스는 각각 α,β-트레할로스 및 β,β-트레할로스로서, 천연 상에 존재하는 α,α-트레할로스 (이는 일반적으로 트레할로스로 칭호됨)와는 다른 아노머이다. 본 발명에서 안정화제로 선택된 두 종의 트레할로스 아노머는 액상에서의 안정화 정도가 우수하다.
본 발명에 있어서, 상기 안정제는 효소의 활성을 안정화시킬 뿐만 아니라, 침강제의 역할도 동시에 수행하므로 반응 산물의 전기영동 시 별도로 침강제를 첨가하지 않아도 되는 장점이 있다.
본 발명의 바람직한 구현예에 따르면, 상기한 효소 안정화제의 양은 효소 반응 전혼합물을 기준으로 하여 1-15 중량%이다. 상기 효소 안정화제의 양이 15 중량%를 초과하는 경우에는 점도가 너무 높아져서 건조시키는데 문제가 있고 다시 물에 용해시키는 데도 문제점이 있으며, 1 중량% 미만인 경우에는 안정제의 양이 부족하여 효과적으로 효소를 안정화시켜주지 못하는 문제점이 있다.
본 발명의 효소 반응 전혼합물에 포함되는 효소는 당업계에 공지된 어떠한 효소도 가능하나, 보다 바람직하게는, DNA 또는 RNA를 기질로 이용하는 DNA 중합효소, 역전사 효소 및 RNA 중합효소 또는 RNAase H이고, 가장 바람직하게는 DNA 중합효소이다. 상기한 효소들은 유전자 관련 실험에서 일반적으로 많이 이용되는 효소로서, 반응 혼합물을 미리 제조하는 경우에 특히 이점을 갖는 효소들이다.
본 발명의 전혼합물에 포함되는 완충액은 당업계에서 통상적으로 이용되는 어떠한 완충액도 사용이 가능하며, 당업자에 공지된 바와 같이 효소의 종류에 따라 완충액의 종류가 일반적으로 결정된다. 예컨데, Na2HPO4-NaH2PO4, MOPS-KOH, HEPES-NaOH, 트리스(히드록시메틸)아미노메탄-HCl, 보레이트 및 글리신-NaOH 등이 있다.
본 발명의 전혼합물은 반응에 필요한 다른 성분들, 예컨데 기질, 조인자 (cofactor), 조효소 (coenzyme) 등을 추가적으로 포함할 수 있다.
본 발명의 전혼합물은 액상 또는 건조 (진공건조 또는 동결 건조)된 형태로 존재할 수 있다. 건조는 제조된 액상의 전혼합물을 당업계에 공지된 방법에 따라 진공건조 또는 동결 건조 함으로써 이루어진다.
본 발명의 전혼합물은 바람직하게는 각각의 성분들이 일정한 양을 갖도록 각각의 수개의 튜브에 넣어 두어, 보관 또는 저장할 수 있다. 따라서, 각각의 실험에서 본 발명의 전혼합물을 함유하는 튜브를 이용하는 경우에는 각각의 실험마다 반응 혼합물을 제조하는 불편함을 해소할 수 있고, 편차를 피할 수 있으며, 결국 각각의 실험마다 일정한 조건으로부터의 결과를 얻을 수 있어 실험 결과의 재현성을 높일 수 있다.
한편, 본 발명의 전혼합물의 저장 온도는 전혼합물이 액상인 경우에는 저온 (약 4℃ 내지 약 -20℃) 저장, 그리고 건조된 상태인 경우에는 저온 (약 4℃ 내지약 -20℃) 저장 뿐만 아니라 상온 저장도 가능하다.
또한, 효소를 포함하는 대부분의 반응 전혼합물은 동결 건조된 상태로 제조되는 경우가 일반적이나, 본 발명의 전혼합물은 액상에서도 우수한 안정성을 나타내므로 액상의 전혼합물로도 충분한 효과를 달성할 수 있다.
본 발명의 다른 양태에 따르면, 본 발명은 네오트레할로스, 이소트레할로스, 라피노스, 멜레지토스 및 그들의 조합으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 효소 안정화제, 완충용액 및 DNA 중합효소를 포함하는 DNA 중합효소 반응 전혼합물을 제공한다.
본 발명의 DNA 중합효소 반응 전혼합물에 있어서, 상기 효소 안정화제의 양은 상기 DNA 중합효소 반응 전혼합물에 대하여 1-15 중량%이다. 상기 효소 안정화제의 양이 15 중량%를 초과하는 경우에는 점도가 너무 높아져서 건조시키는데 문제가 있고 다시 물에 용해시키는 데도 문제점이 있으며, 1 중량% 미만인 경우에는 안정제의 양이 부족하여 효과적으로 효소를 안정화시켜주지 못하는 문제점이 있다.
본 발명의 DNA 중합효소 반응 전혼합물은 바람직하게는 DNA 중합효소 반응물에 일반적으로 포함되는 MgCl2및 4종의 dNTP를 추가적으로 포함한다.
또한, 바람직한 본 발명의 DNA 중합효소 반응 전혼합물에 따르면, DNA 중합반응의 산물을 확인하기 위한 전기영동시 염료로서 이용되는 크실렌 시아놀, 브로모페놀 블루, 브로모크레졸 레드 또는 크레졸 레드를 추가적으로 포함한다.
본 발명의 DNA 중합효소 반응 전혼합물은 특히 PCR (polymerase chain reaction)에 특히 유용하며, PCR에 적용하는 경우에는 DNA 중합효소는 고온성균 (Thermophiles)로부터 분리된 DNA 중합효소가 바람직하다. 이러한 DNA 중합효소는 예컨데, 써머스 아콰티커스 (Thermus aquaticus: 미합중국 특허 제 4,889,818호) 및 써머코커스 리토랄리스 (Thermococcus litoralis: 미합중국 특허 제 5,322,785호)로 분리된 열 안정성 DNA 중합효소가 있다.
본 발명의 DNA 중합효소 반응 전혼합물에 있어서, 효소 반응 전혼합물은 바람직하게는 DNA 중합효소에 대한 프라이머를 추가적으로 포함한다. DNA 중합효소 자체의 특성 상 주형의 일부 서열과 상보적인 서열을 갖는 프라이머가 반응액에 첨가되어야 반응이 진행된다. 특히, PCR에 적용되는 경우에는 2종의 프라이머, 즉 센스 프라이머 및 안티센스 프라이머가 필요하다.
일반적으로 DNA 중합효소 반응 전혼합물은 당업계에서 동결 건조된 상태로 제조되나, 본 발명의 DNA 중합효소 반응 전혼합물은 동결 건조된 상태 뿐만 아니라 액상에서도 우수한 안정성을 나타내므로 액상의 전혼합물로도 충분한 효과를 달성할 수 있다.
상기한 본 발명의 DNA 중합효소 반응 전혼합물은 DNA 증폭용 키트로서 이용될 수 있다. 즉, 현재 일반적으로 이용되는 PCR 기법에서 제조되는 DNA 증폭용 반응액 키트로서 이용될 수 있다.
또한, 상기한 본 발명의 DNA 중합효소 반응 전혼합물은 염기서열 분석용 키트로서 이용될 수 있다. PCR을 이용한 DNA 염기서열의 결정은 당업계에 공지되어 있고 (Gyllensten U.,Biotechniques, 7:700(1989)), 이 때 본 발명의 DNA 중합효소 반응 전혼합물이 반응액 키트로서 이용될 수 있다.
한편, PCR 및 RT (reverse transcriptase)-PCR은 질병, 특히 암 진단에서 많이 이용되는 기술로서, 공지된 암의 바이오 마커 (예: HER-2/neu)를 확인할 때 이용된다. 본 발명의 DNA 중합효소 반응 전혼합물은 상기한 PCR 및 RT-PCR을 수행할 때 질병 진단용 키트로서 이용될 수 있다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 요지에 따라 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예 1: 액상의 본 발명의 효소 반응 전혼합물의 안정성
200 ㎕ PCR 튜브에 완충용액 (100 mM Tris-Cl, pH 8.3, 500 mM KCl 및 15 mM MgCl2) 2 ㎕, 250 μM dNTP (dATP, dGTP, dCTP 및 dTTP) 2 ㎕, 10% 라피노스 5 ㎕, 0.1% 크실렌 시아놀 0.5 ㎕ 및 Taq DNA 중합효소 (Perkin Elmer, USA) 2.5 unit를 혼합한 다음, 최종 부피가 10 ㎕가 되도록 증류수로 맞추어 4℃에서 보관하였다. 이어, 7일 동안 보관한 후, 다음과 같은 조건으로 PCR을 수행하였다:
사람에서 분리한 지놈 DNA를 주형으로 이용하였고, 프라이머는 센스 프라이머 GATGATACCCACTTCAGGAAG 및 안티센스 프라이머 GATGTGTAGGAATTAGCCAGG를 이용하였다. 지놈 DNA와 프라이머를 넣고 최종 부피 20 ㎕가 되도록 증류수를 채운 다음, 94℃에서 5분 동안 1회, 94℃에서 30초, 60℃에서 40초, 72℃에서 45초로 35 사이클 동안 반응시키고, 72℃에서 5분 동안 반응시켰다. PCR이 반응이 종결된 다음, PCR 산물을 2% 아가로스 겔에서 전기영동시켜 생성물을 확인하였으며, 그 결과는 도 1에 나타나 있다.
도 1에서 M 레인은 크기 마커로서 100 bp 래더를 로딩한 것이고, 1번 레인은 네가티브 대조군으로서 주형이 없는 PCR 반응물을 로딩한 것이며, 2번 레인은 본 발명의 PCR 반응물을 제조한 직후에 PCR을 수행한 결과이고, 3번 레인은 본 발명의 PCR 반응물을 제조한 다음 7일 동안 4℃ 냉장 보관한 후에 PCR을 수행한 결과이다. 도 1의 밴드 패턴 및 세기에서 명확하게 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명의 PCR 반응 혼합물은 7일 동안의 냉장 보관 후에도 제조 직후의 PCR 반응물과 동일한 정도의 PCR 결과를 나타낸다. 즉, 본 발명의 PCR 반응 혼합물은 개선된 안정성을 나타냄을 알 수 있다.
실시예 2: 동결 건조된 본 발명의 효소 반응 전혼합물의 안정성
200 ㎕ PCR 튜브에 완충용액 (100 mM Tris-Cl, pH 8.3, 500 mM KCl 및 15 mM MgCl2) 2 ㎕, 250 μM dNTP (dATP, dGTP, dCTP 및 dTTP) 2 ㎕, 10% 라피노스 5 ㎕, 0.1% 크실렌 시아놀 0.5 ㎕ 및 Taq DNA 중합효소 (Perkin Elmer, USA) 2.5 unit를 혼합한 다음, 동결 건조시켰다 (Telstar, Spain). 이어, 상온에서 7일 동안 보관하고 다음과 같은 조건으로 PCR을 수행하였다.
사람에서 분리한 지놈 DNA를 주형으로 이용하였고, 프라이머는 센스 프라이머 GATGATACCCACTTCAGGAAG 및 안티센스 프라이머 GATGTGTAGGAATTAGCCAGG를 이용하였다. 지놈 DNA와 프라이머를 넣고 최종 부피 20 ㎕가 되도록 증류수를 채운 다음, 94℃에서 5분 동안 1회, 94℃에서 30초, 60℃에서 40초, 72℃에서 45초로 35 사이클 동안 반응시키고, 72℃에서 5분 동안 반응시켰다. PCR이 반응이 종결된 다음, PCR 산물을 2% 아가로스 겔에서 전기영동시켜 생성물을 확인하였으며, 그 결과는 도 2에 나타나 있다.
도 2에서 1번 레인은 동결 건조 직후의 본 발명의 PCR 반응 혼합물을 로딩한 것이고, 2번 레인은 동결 건조 후 7일 동안 4℃에서 냉장 보관한 본 발명의 PCR 반응 혼합물에 의한 PCR 결과이며, 3번 레인은 동결 건조 후 7일 동안 상온에서 보관한 본 발명의 PCR 반응 혼합물에 의한 PCR 결과이고, 4번 레인은 반응 혼합물을 혼합한 다음 바로 PCR 반응시킨 결과를 각각 나타낸다. 도 2에서 확인할 수 있듯이, 본 발명의 PCR 반응 혼합물은 동결 건조 처리를 한 경우에도 안정성에 변화가 없고, 4℃가 아닌 상온에서도 7일 동안 안정성을 유지하였다. 즉, 동결 건조 처리된 본 발명의 PCR 반응 혼합물은 개선된 안정성을 나타냄을 알 수 있다.
실시예 3: 본 발명의 효소 반응 전혼합물에 함유된 안정화제의 비교
4개의 200 ㎕ PCR 튜브에 완충용액 (100 mM Tris-Cl, pH 8.3, 500 mM KCl 및 15 mM MgCl2) 2 ㎕, 250 μM dNTP (dATP, dGTP, dCTP 및 dTTP) 2 ㎕, 0.1% 크실렌시아놀 0.5 ㎕ 및 Taq DNA 중합효소 (Perkin Elmer, USA) 2.5 unit를 각각 혼합한 다음, 각 튜브에 10% 라피노스, 10% 멜레지토스, 10% 이소트레할로스, 10% 네오트레할로스 및 10% α,α-트레할로스를 각각 5 ㎕ 씩 넣고 4℃에서 7일 동안 보관하고 다음과 같은 조건으로 PCR을 수행하였다.
사람에서 분리한 지놈 DNA를 주형으로 이용하였고, 프라이머는 센스 프라이머 GATGATACCCACTTCAGGAAG 및 안티센스 프라이머 GATGTGTAGGAATTAGCCAGG를 이용하였다. 지놈 DNA와 프라이머를 넣고 최종 부피 20 ㎕가 되도록 증류수를 채운 다음, 94℃에서 5분 동안 1회, 94℃에서 30초, 60℃에서 40초, 72℃에서 45초로 35 사이클 동안 반응시키고, 72℃에서 5분 동안 반응시켰다. PCR이 반응이 종결된 다음, PCR 산물을 2% 아가로스 겔에서 전기영동시켜 생성물을 확인하였으며, 그 결과는 도 3에 나타나 있다.
도 3에서 M 레인은 크기 마커로서 50 bp 래더를 로딩한 것이고, 1번 레인은 라피노스가 함유된 본 발명의 PCR 반응 혼합물에 의한 PCR 결과이고, 2번 레인은 멜레지토스가 함유된 본 발명의 PCR 반응 혼합물에 의한 PCR 결과이며, 3번 레인은 네오트레할로스가 함유된 본 발명의 PCR 반응 혼합물에 의한 PCR 결과이고, 4번 레인은 이소트레할로스가 함유된 본 발명의 PCR 반응 혼합물에 의한 PCR 결과이며, 5번 레인은 α,α-트레할로스가 함유된 PCR 반응 혼합물에 의한 PCR 결과이며, 6번 레인은 안정제의 첨가 없이 반응 혼합물을 혼합하여 바로 PCR 반응시킨 결과를 각각 나타낸다. 도 3에서 확인할 수 있듯이, 본 발명의 PCR 반응 혼합물은 4℃에서 보관한 경우에도 안정성에 변화가 없음을 알 수 있고, 또한 α,α-트레할로스와 비교하여 라피노스, 멜레지토스, 네오트레할로스 및 이소트레할로스 모두 안정제로서 보다 우수한 성능을 나타내었다.
실시예 4: RT-PCR을 위한 동결 건조된 역전사 효소의 안정성
200 ㎕ PCR 튜브에 완충용액 (500 mM Tris-Cl, pH 8.3, 1 M KCl 및 100 mM MgCl2, 100mM DTT) 2 ㎕, 2.5 mM dNTP (dATP, dGTP, dCTP 및 dTTP) 2 ㎕, 10% 라피노스 5 ㎕ 및 AMV 역전사 효소 (Promega, USA) 20 unit를 각각 혼합한 다음, 동결 건조시켰다 (Telstar, Spain). 이어, 4℃에서 7일 동안 보관하고 다음과 같은 조건으로 역전사 반응을 수행하였다: 사람으로부터 분리한 RNA 5 ㎍ 및 0.5 ㎍/㎕ 올리고-dT 프라이머 1 ㎕를 혼합하고 최종 부피가 20 ㎕가 되도록 증류수를 첨가하였다. 이어, 70℃에서 10분간 반응시키고 얼음에 10분간 두었다가 역전사 효소가 동결 건조되어 있는 상기 튜브로 옮기고 건조물을 완전히 녹였다. 42℃에서 1시간 동안 반응시키고 반응산물 중 1 ㎕를 DNA 주형으로 사용하여 실시예 2에서와 같이 PCR을 수행하였다. PCR이 종결된 다음, PCR 산물을 2% 아가로스 겔에서 전기영동시켜 생성물을 확인하였으며, 그 결과는 도 4에 나타나 있다.
도 4에서 M 레인은 크기 마커로서 50 bp 래더를 로딩한 것이고, 1번 레인은 동결 건조하지 않은 역전사 효소를 이용하여 역전사 반응을 시킨 후, 동결 건조하지 않은 DNA 중합효소로 PCR 반응을 한 결과이며, 2번 레인은 동결 건조하지 않는 역전사 효소를 이용하여 역전사 반응을 시킨 후, 동결 건조한 본 발명의 PCR 반응물로 PCR을 수행한 결과이고, 3번 레인은 본 발명으로 동결 건조시킨 역전사 효소를 이용하여 역전사 반응 후, 본 발명의 PCR 반응물로 PCR을 수행한 결과이다. 본 발명의 역전사 반응 혼합물은 본 발명의 PCR 반응 혼합물과 마찬가지로 동결 건조 처리를 한 경우에도 안정성에 변화가 없었고, 장기간의 저장에서도 안정성을 계속하여 유지하였다. 즉, 동결 건조 처리된 본 발명의 역전사 반응 혼합물은 개선된 안정성을 나타냄을 알 수 있다.
본 발명은 효소 반응 전혼합물을 제공한다. 또한, 본 발명은 DNA 중합효소 반응 전혼합물을 제공한다. 한편, 본 발명은 DNA 중합효소 반응 전혼합물을 포함하는 DNA 증폭용 키트, 염기서열 분석용 키트 및 질병 진단용 키트를 제공한다. 본 발명의 효소 반응 전혼합물은 효소의 안정성을 개선하고, 효소의 반응 혼합물을 미리 혼합하여 보관함으로써 각 반응물을 따로 혼합할 때 발생하는 상호간 오염의 문제를 해소할 수 있으며, 효소 반응 작업의 단계를 획기적으로 단축하여 조작을 간편하게 해줄 뿐만 아니라, 일정한 양의 반응물이 미리 혼합되어 있으므로 여러 반응물을 별도로 혼합할 때 발생될 수 있는 오차를 줄여 실험의 재현성을 높여 결국, 결과의 신뢰도를 증가시킨다. 또한, 본 발명의 전혼합물은 액상 상태에서도 냉장 저장시 장기간의 안정성을 나타내며, 건조된 경우에는 상온 또는 냉장 저장시 장기간의 안정성을 나타내므로 저장 및 운반 시에 편리하게 이용할 수 있다.

Claims (15)

  1. 네오트레할로스, 이소트레할로스, 라피노스, 멜레지토스 및 그들의 조합으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 효소 안정화제, 완충용액 및 효소를 포함하는 효소 반응 전혼합물.
  2. 제 1 항에 있어서, 상기 효소 안정화제의 양은 효소 반응 전혼합물을 기준으로 하여 1-15 중량% 인 것을 특징으로 하는 효소 반응 전혼합물.
  3. 제 1 항에 있어서, 상기 효소는 DNA 중합효소, 역전사 효소 및 RNA 중합효소 및 RNAase H로 구성된 그룹으로부터 선택되는 효소인 것을 특징으로 하는 효소 반응 전혼합물.
  4. 제 3 항에 있어서, 상기 효소는 DNA 중합효소인 것을 특징으로 하는 효소 반응 전혼합물.
  5. 네오트레할로스, 이소트레할로스, 라피노스, 멜레지토스 및 그들의 조합으로 구성된 그룹으로부터 선택되는 효소 안정화제, 완충용액 및 DNA 중합효소를 포함하는 DNA 중합효소 반응 전혼합물.
  6. 제 5 항에 있어서, 상기 효소 안정화제의 양은 상기 DNA 중합효소 반응 전혼합물에 대하여 1-15 중량%인 것을 특징으로 하는 DNA 중합효소 반응 전혼합물.
  7. 제 5 항에 있어서, 상기 DNA 중합효소 반응 전혼합물은 MgCl2및 4종의 dNTP를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 DNA 중합효소 반응 전혼합물.
  8. 제 5 항에 있어서, 상기 DNA 중합효소 반응 전혼합물은 크실렌 시아놀, 브로모페놀 블루, 브로모크레졸 레드 및 크레졸 레드로 구성된 그룹으로부터 선택되는 염료를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 DNA 중합효소 반응 전혼합물.
  9. 제 7 항에 있어서, 상기 효소 반응 전혼합물은 DNA 중합효소에 대한 프라이머를 추가적으로 포함하는 것을 특징으로 하는 DNA 중합효소 반응 전혼합물.
  10. 제 5 항에 있어서, 상기 DNA 중합효소는 고온성균으로부터 분리된 열안정성 DNA 중합효소인 것을 특징으로 하는 DNA 중합효소 반응 전혼합물.
  11. 제 1 항 내지 제 4 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 효소 반응 전혼합물은 액상, 진공 건조 또는 동결 건조된 상태를 갖는 것을 특징으로 하는 효소 반응 전혼합물.
  12. 제 5 항 내지 제 10 항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 DNA 중합효소 반응 전혼합물은 액상, 진공 건조 또는 동결 건조된 상태를 갖는 것을 특징으로 하는 DNA 중합효소 반응 전혼합물.
  13. 제 12 항의 DNA 중합효소 반응 전혼합물을 포함하는 DNA 증폭용 키트.
  14. 제 12 항의 DNA 중합효소 반응 전혼합물을 포함하는 염기서열 분석용 키트.
  15. 제 12 항의 DNA 중합효소 반응 전혼합물을 포함하는 질병 진단용 키트.
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