KR20020065699A - 면역방사계수 측정법을 이용한 갑상선 자극 호르몬 측정키트 - Google Patents

면역방사계수 측정법을 이용한 갑상선 자극 호르몬 측정키트 Download PDF

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Abstract

본 발명은 면역방사계수 측정법을 이용한 갑상선 자극 호르몬 측정키트에 관한 것으로, (a) 표준 갑상선 자극 호르몬 항원, (b) 상기 갑상선 자극 호르몬 항원에 대한 동위원소 표지된 갑상선 자극 호르몬 항체 및 (c) 상기 갑상선 자극 호르몬 항원에 대한 항체를 포함하는 갑상선 자극 호르몬 검사키트 및 검사방법을 제공한다. 본 발명의 갑상선 자극 호르몬 검사키트는 갑상선기능 이상을 쉽게 판단할 수 있다.

Description

면역방사계수 측정법을 이용한 갑상선 자극 호르몬 측정키트{DETECTION KIT OF THYROID STIMULATING HORMONE USING IMMUNORADIOMETRIC ASSAYS}
본 발명은 면역방사계수 측정법을 이용한 갑상선 자극 호르몬 측정키트에 관한 것으로서, 더욱 상세하게는 혈중 갑상선 자극 호르몬의 함량을 정확하게 측정하여 갑상선 이상유무를 판단할 수 있는 검사키트에 관한 것이다.
갑상선 호르몬은 산소소비량, 호흡률, 체온, 심장박출량, 심장박동수, 혈액량, 세포성장 뇌발달 등에 작용하는 호르몬이다. 갑상선 호르몬은 혈중 단백질에 결합된 형태로 존재하며 반감기가 길어 혈중농도가 장기간 일정하게 유지된다. 즉, 갑상선의 기능은 상당히 안정적으로 조절되고 있다.
갑상선의 기능은 시상하부->뇌하수체->갑상선 조절체계에 의하여 조절되고, 혈중 갑상선 호르몬의 농도에 따른 네그티브피드백(negative feedback)으로 갑상선호르몬 분비가 조절된다. 도 1에 조절기작을 간략하게 도시하였다. 갑상선 호르몬 즉, 트리요오드타이로닌(triiodothyronine; 이하 'T3'라 함) 및 타이록신(Thyroxine; 이하 'T4'라 함)의 혈중 농도가 낮아지면, 시상하부에서 갑상선 자극 호르몬 방출 호르몬(thyrotropin -releasing hormone,TRH)이 분비되고, 분비된 TRH는 뇌하수체에 운반되어 뇌하수체의 갑상선 자극 호르몬(thyroid-stimulating hormone,TSH)의 분비를 촉진시킨다.
갑상선은 주로 T4의 형태로 갑상선 호르몬을 생산하고, T4는 간을 비롯한 각 말초조직에서 T3으로 전환되어 호르몬의 조직효과를 나타낸다. 하지만 뇌하수체의 TSH 조절 피드백은 순환하는 T3에 의하여 일부 작용되고, 순환하는 유리 T4가 뇌하수체내로 들어가 뇌하수체내의 이형 5'-탈요드효소에 의하여 전환되는 T3에 의하여 조절된다. 따라서 뇌하수체-갑상선 조절기작의 움직임은 주로 혈중의 유리 T4 농도의 변화에 따르며 혈중 유리 T4에 따라 TSH의 분비가 조절된다. 이러한 현상은 매우 합목적적이며 실제 생물학적 활성을 지닌 갑상선 호르몬, T3이나 갑상선에서 생산되는 호르몬은 대다수가 T4의 형태로 생산되므로 정상적으로 갑상선호르몬의 혈중농도를 좁은 범위내에서 유지하기 위하여 뇌하수체에서는 혈중의 T3 보다 T4에 민감하게 반응하여야 한다.
TSH는 약 28,000 kD에 달하는 당단백질로 15 % 정도의 당을 지니고 있으며, 알파, 베타의 두 개의 펩티드쇄(α-, β-chain)로 이루어져 있다. 알파아단위(α-subunit)는 LH, FSH, hCG 등 다른 당단백호르몬에 공통된 것이고, 베타아단위(β-subunit)는 특이성을 가져 생물학적 활성을 나타내고, 알파, 베타 아단위가 분리되면 TSH는 생물학적 활성이 없어진다.
혈중 TSH의 측정은 갑상선 기능의 이상을 판정하는데 있어서 제일 먼저 시행되는 검사이다. 통상적으로 검사는 TSH의 기저치를 측정하여 정상이하로 억제되어 있으면 갑상선 기능항진증으로 예상되고, 정상범위 이상으로 증가되어 있으면 원발성 갑상선 기능저하증으로의 진단될 수 있다.
방사면역법에 의한 TSH의 측정은 측정한계가 정상치의 하한선보다 높은 1-2 mU/L 이므로 억제되어 있는 TSH를 측정할 수 없었고, 이에 따라 TSH 분비가 억제되어 있음을 밝히기 위하여 TRH 자극실험을 더욱 실시하여야 한다. 그러나 1980년대에 개발된 면역계수법에 의한 측정은 TSH의 측정한계를 0.1 mU/L까지 가능하게 하였고, 이후 제3세대 및 제4세대의 면역계수측정법이 개발되면서 그 측정치의 하한선이 점차 낮아져 0.01-0.001 mU/L 농도의 TSH를 측정할 수 있게 되었다. 따라서 현재 사용하는 방법으로는 정상치 이하로 억제되어 있는 TSH를 측정할 수 있으며 TSH의 기저치는 TRH 자극시 TSH의 최고치와 잘 연관되어 기저 TSH가 정상 이하로 억제되어 있는 경우 TRH 자극에도 정상 이하의 반응을 보이고 기저 TSH가 상승되어 있으면 TRH 자극시 과장된 반응을 보인다.
따라서, 본 발명은 면역방사계수 측정법을 이용한 갑상선 자극 호르몬을 정확하게 측정할 수 있는 키트를 제공하는 것을 목적으로 한다.
도 1은 갑상선 호르몬조절기작을 간략하게 나타낸 것이고,
도 2는 본 발명의 실험예에서 측정된 갑상선 자극 호르몬 항원값에 대한 cpm 값을 그래프로 나타낸 것이다.
상기의 목적을 달성하기 위하여,
본 발명은
(a) 농도순의 표준 갑상선 자극 호르몬 항원, 동위원소로 표지된 정량 갑상선 자극 호르몬 항체 및 갑상선 자극 호르몬 항체를 혼합하여 표준시료를 제조하고, 동시에 검체에 동위원소 표지된 정량 갑상선 자극 호르몬 항체 및 갑상선 자극 호르몬 항체를 반응기에서 혼합하는 단계;
(b) 상기 (a)의 혼합물을 반응기에서 제거하고, 각 반응기들에 대하여 감마 신틸레이션 카운터(gamma scintillation counter)상에서 cpm을 측정하는 단계;
(c) 표준시료의 cpm에 대하여 표준그래프를 작성하는 단계; 및
(d) 상기 표준 그래프에 검체의 cpm 값을 넣어 검체내의 갑상선 자극 호르몬 함량을 환산하는 단계;
를 포함하는 것을 특징으로 하는 갑상선 자극 호르몬 측정방법을 제공한다.
또한 본 발명은
(a) 표준 갑상선 자극 호르몬 항원;
(b) 상기 갑상선 자극 호르몬 항원에 대한 동위원소 표지된 갑상선 자극 호르몬 항체; 및
(c) 상기 갑상선 자극 호르몬 항원에 대한 항체;
를 포함하는 것을 특징으로 하는 갑상선 자극 호르몬 측정방법을 제공한다.
이하 본 발명을 상세하게 설명한다.
면역방사계수 측정법(immunoradiometric assays: IRMA)은 Miles와 Hates에 의해 1968년에 발표된 것으로 실행하기가 용이하고 방사면역법(RIA)보다 더욱 정확하고 높은 예민도를 가진다.
본 발명의 갑상선 자극 호르몬 측정 키트는 면역방사계수 측정법을 이용한 혈액내 갑상선 자극 호르몬을 검사하는 키트로, 갑상선 자극 호르몬 항체와 표지된 갑상선 자극 호르몬 항체 사이에 갑상선 자극 호르몬 항원이 비경쟁적 방법으로 샌드위치 결합(sandwich method)되는 원리를 이용한 것이다.
본 발명의 갑상선 자극 호르몬 측정키트는 갑상선 자극 호르몬 항체, 갑상선 자극 호르몬 항원, 및 동위원소 표지된 갑상선 자극 호르몬 항체를 포함하고, 바람직하게는 갑상선 자극 호르몬 항체가 코팅된 튜브, 동위원소로 표지된 갑상선 자극 호르몬 항체, 비표지 갑상선 자극 호르몬 항체이다. 상기 표지된 항체는 통상의 동위원소를 사용하여 제조하는 것이 바람직하며, 바람직하게는 감마 레이를 가지는 동위원소가 좋고, 가장 바람직하게는 I125이다. 또한 상기 키트는 항원항체 반응을 위한 완충용액 및 시험기구 등을 더욱 포함한다. 구체적으로는 세척완충액(0.1 % 트리톤X-100(Triton X-100), 10 X PBS(Phosphate bufferd saline)), 바이얼(vial) 이다.
본 발명의 갑상선 자극 호르몬 측정키트에 포함되는 갑상선 자극 호르몬 항체는 통상적인 항체 제조방법으로 제조하거나 구입하는 것이 바람직하며, 더욱 바람직하게는 갑상선 자극 호르몬은 단일클론항체(monoclonal antibody) 또는 다클론항체(polyclonal antibody)가 좋다. 가장 바람직하게는 갑상선 자극 호르몬에 대한 단일클론항체를 튜브에 피복하고, 갑상선 자극 호르몬에 대한 다클론항체를 동위원소로 표지하는 것이다. 따라서, 튜브에 코팅된 단일클론항체가 갑상선 자극 호르몬의 특정부위를 인식하여 결합하고, 상기 결합에 동위원소 표지된 다클론항체가 갑상선 자극 호르몬의 나머지 부분을 인식하여 결합하게 된다.
본 발명의 면역방사계수 측정방법은 하기와 같다.
항체에 정량의 항원을 결합시키고, 결합된 항체-항원에 동위원소 표지된 항체를 더욱 결합시킨다. 항체-항원-표지된 항체 순으로 샌드위치 결합된 복합체는 표지된 항체의 동위원소에 의해 cpm 값을 가지므로 그 값을 측정한다. 이 때 cpm 값은 항체의 양과 표지된 항체의 양이 고정된 경우, 복합체를 형성시키는 항원의 양에 의존되므로, 순차적인 농도의 항원에 대한 cpm 값을 측정하여 항원에 대한 cpm 값을 표준 그래프로 나타낸다. 여기에 측정하고자 하는 시료의 cpm값을 표준 그래프에 대입하여 항원의 함량을 구한다.
더욱 상세하게 설명하면, 본 발명의 갑상선 자극 호르몬 측정키트는 정량된 항원을 순차적인 농도로 설정하여 항체가 코팅된 튜브에 넣고, 동시에 정량 표지항체를 튜브에 넣고 반응시킨다. 반응이 끝난 후 튜브내의 용액을 제거한 다음 튜브내의 항체-항원-표지항체 복합체의 표지항체의 양을 cpm으로 측정한다. 수득된 cpm 값과 반응시켰던 항원농도에 대한 표준그래프를 그린 후, 측정하고자 하였던 샘플에 대한 cpm 값을 상기 표준그래프에 대입하여 샘플내의 갑상선 자극 호르몬 항원농도를 환산하는 것이다.
본 발명의 갑상선 자극 호르몬 측정키트는 갑상선 자극 호르몬을 0.125 내지 100 uIU(International Uints)/ml 범위로 측정가능하다. 이 때 갑상선 자극 호르몬의 정상 수치는 0.5 내지 6 uIU/ml 이다.
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐 본 발명이 하기의 실시예에 한정되는 것은 아니다.
[실시예]
갑상선 자극 호르몬에 대한 단일콜론항체 제조
(1) 갑상선 자극 호르몬(이하 'TSH'라 함)을 포함하는 PBS용액에 동량의 완전 프로인드 보강체를 혼합하여 생후 6-8주령의 BALB/C 마우스의 복강에 마리당 100 ㎕의 항원을 주사하였다. 주입 부피는 200 내지 400 ㎕이다.
(2) 2주 후에 동일하게 주입하고, 불완전 프로인드 보강체를 사용하였다.
(3) 2주 후에 항원(50 ul)을 포함하는 PBS를 마우스 꼬리에 정맥주사하고, 2일 뒤에 꼬리에서 혈청을 수득한 다음 항체 역가를 결정하였다. 항체의 역가가 음성대조구의 OD 값에 0.2 배 이상 되면 면역화된 것으로 본다.
(4) 융합하기 2주전에 골수종세포(Sp2/0-Ag14)를 완전 DMEM에서 배양하여 1 ×107개의 세포로 분주하였다.
(5) 건강한 쥐를 경추탈구법으로 죽인 후 배의 가죽을 벗겨서 복막이 드러나게 한 다음 18G 바늘 주사기로 0.34 M 슈크로즈 용액 8 ml을 주입하고 흡입하여 튜브에 수득하였다. 상기 튜브에 차가운 HAT를 20 ml 넣고, 상온에서 100 g로 5분간 원심분리하여 상등액을 제거하였다. 차가운 HAT 35 ml에 재현탁한 공급세포(feeder cell)는 96 웰 플레이트의 웰에 100 ㎕씩 접종하고 CO2배양기에 두었다.
(6) 생후 6-8주령의 BALB/C 마우스의 비장을 수득하고 DMEM을 주사기로 곳곳에 주사한 후 비장을 으깨었다.
(7) 1×107개의 골수종세포와 1×108개의 비장세포(splenocyte)를 50 ml 튜브에 옮긴 후 세척 배지를 넣고, 배지는 제거하였다. 상기 튜브에 1 ml PEG 용액을 1분간 가하여 세포융합을 유도하였다.
(8) 상기 튜브에 10 ml 세척 배지를 5분간 넣고, 200 g, 5분으로 원심분리하여 배지를 제거한 다음 30 ml HAT로 현탁시킨 다음 이산화탄소 배양기에서 30분간 배양하였다.
(9) 상기(8)에서 준비한 융합세포를 상기 (5)에서 준비한 96 웰 플레이트에 100 ㎕씩 접종하고, 4-5일 후 HAT 70 ㎕씩 첨가하였다.
(10) 2일에 한번씩 HAT를 교체하여 주고 세포의 증식에 따라 항체테스트를 하여 하이브리도마가 웰을 확인한 다음 하나의 클론을 수득하였다.
(11) 생후 6-8주령의 BALB/C 마우스의 복강에 면역증강제인 프리스테인 (pristane; sigma. P-1403) 0.5-1.0 ml을 주사하였다. 하이브리도마 세포(hybri doma cell)는 컴플리트 DMEM에서 배양시키고, 500 g, 5분간 원심분리하여 1-5 ×106세포를 0.5 ㎖ PBS에 현탁하여 마우스 복강에 주사하였다. 1-2주 후, 마우스의 배가 탱탱하게 부풀어오르면 18G 바늘로 복부에서 복수를 채취하였다. 채취한 복수는 1500 g에서 10분간 원심분리하여 상등액을 취하고, 1.5 ml 튜브(eppendorftube)에 단일클론항체를 넣어 -70 ℃에 보관하였다.
TSH에 대한 다클론항체 제조
(1) 정제된 TSH 항원 50 ∼150 ㎍을 500 ㎕의 PBS에 녹이고 완전 프로인드 보강체 500 ㎕에 혼합하였다. 상기 혼합액을 토끼 등에 3-5 군데에 나누어 피하주사하였다.(primary injection) 2-3주 후, 상기와 동일하게 불완전 프로인드 보강체 500 ㎕와 혼합하여 주사하였다.(secondary injection) 2-3주 후에 같은 양의 항원을 500 ㎕ PBS에 녹여 토끼에 주사하였다.(booster injection) 부스팅 주사하고 3일 후 토끼의 귀 정맥에서 혈액을 채취하여 항체생성 여부를 확인하였고, 심장 또는 대정맥에서 혈액을 채혈하였다. 채취한 혈액을 상온에서 30분 방치한 후 2500 g 에서 30분간 원심분리하여 혈청을 분리한 다음 -70 ℃에 보관하였다.
동위원소 표지
1.5 ml 튜브에 0.5 M 소듐 포스페이트(pH 7.5) 25 ㎕ 및 TSH 다클론항체 10 ㎍을 넣고, Na125I 500 uCi를 넣어주었다. 또한 25 ㎕ 클로라민 T(2 mg/ml)을 상기 튜브에 혼합하였다. 클로라민 용액은 사용하기전 만들어 사용한다. 상기 튜브는 상온에서 60초 동안 반응시키고, 클로라민 정지완충액(2.4 mg/ml sodium metabisulfite, 10 mg/ml tyrosine(saturated), 10 % glycerol, 0.1 % xylene cylanol in PBS) 50 ㎕를 튜브에 혼합하였다. 상기 혼합물은 젤 여과컬럼으로 정제하여 아이오도타이로신(iodotyrosine)으로부터 동위원소표지 항체를 분리하였다. 제조된 동위원소표지 항체를 톨루엔 에탄올로 1/10배 희석시키고, 다시분석완충액(assay buffer: 0.1 % BSA, 0.05 M 트리스완충액, pH 8.0)에 희석하여 10 ml 에 10 내지 15 uCi가 들어가도록 분주하여 13 ml병에 넣었다.
항체가 피복된 튜브준비
상기에서 준비한 TSH 단일클론항체를 카보네이트 완충액(Carbonate buffer; Na2CO31.59 g, NaHCO32.93 g /1000 ml, pH 9.6)에 1:1000으로 희석(carbonate buffer)하여 1 ml씩 튜브의 맨 아랫부분부터 천천히 넣어준 다음 암실에서 16시간 상온 보관하였다. 튜브는 세척완충액(Washing buffer; NaCl 20.2 g, KCl 0.2 g, Na2HPO4·2H2O 1.15 g, KH2PO40.2 g, Triton X-100 0.5 ml /1000 ml, pH 7.2)으로 3회 세척한 다음 블록킹 완충액(Blocking buffer; 0.1 % BSA, 0.05 M sodium phosphate buffer, 0.05 % NaN3) 1 ml을 넣고 상온, 암실에서 4시간 반응시켰다. 반응이 끝나면 세척완충액으로 3회 세척하고 파라필름으로 봉하여 4 ℃에 보관하였다.
표준 TSH 용액 준비
TSH(thyrotropin, sigma T9265)를 0.1 N NaOH에 녹인 후 0, 0.125, 0.5, 1.5, 5.0, 25.0, 100.0 uIU/ml으로 희석하여 바이알(vial)에 1 ml 씩 담았다.
세척완충액 준비
0.1 % 트리톤X-100(Triton X-100)을 포함하는 10X PBS(Phosphate bufferd saline)을 50 ml 씩 병에 분주하여 키트에 첨가하였다.
키트구성
원료약품의 분량은 사람 50명을 실험할 수 있도록 키트화 하였다.
① TSH 단일클론항체가 코팅된 폴리에틸렌 튜브 100개
② 표준 바이얼(A∼G) 14개: 0, 0.125, 0.5, 1.5, 5.0, 25.0, 100.0 uIU/ml 농도의 갑상선 자극 호르몬이 용해된 0.1 N NaOH용액 1 ml이 각 바이얼에 있다.
③ 동위원소가 표지된 갑상선 자극 호르몬 다클론항체용액(55 ml)
④ 세척완충액(50 ml)
⑤ 사용설명서
[실험예]
1) 키트의 모든 재료는 사용 전에 상온에 옮겨 놓는다.
2) 양성대조군(Total count) 튜브를 2개씩 표기한다.
3) TSH 항체가 코딩된 14개의 튜브(튜브 A, B∼G 각각 2개씩)에 표시하고, 시료측정용으로 2개의 튜브에 표시한다.
4) 준비된 튜브에 하기 표 1과 같은 조성물을 차례로 넣는다. 이때 시약은 밑바닥에 직접 넣는다.
[표 1]
표준 FT4 용액 시료
A B C D E F G X
시험관 번호 1, 2 3, 4 5, 6 7, 8 9, 10 11, 12 13, 14 15, 16
표준 TSH 용액(㎕)/TSH양(μIU/ml) 200/0 200/0.125 200/0.5 200/1.5 200/5 200/25 200/100 -
측정시료 혈청(㎕) - - - - - - 200
표지된 TSH 항체용액(㎕) 100 100 100 100 100 100 100 100
세척완충액(㎕) 1500 1500 1500 1500 1500 1500 1500 1500
상기 A 튜브는 TSH 항원이 첨가되지 않아 튜브상에 코팅된 TSH에 결합되지않는 음성대조군(nonspecific binding; NSB)이다. 측정시료는 2씩 준비하고, 상기 표지된 항체를 넣는 동안 10분 이상이 경과되지 않도록 한다. 환자의 혈청은 채혈 후 원심분리하여 응집된 혈구들을 침전시키고 남은 상등액을 사용하였다. 양성대조군은 표지항체만을 튜브에 넣고 카운팅한 것이다. 즉 반응할 수 있는 총 동위원소의 cpm값이다.
5) 상온에서 2시간정도 교반기에서 반응시킨다.
6) 반응이 끝나면 튜브내의 용액을 완전히 제거한다.
7) 사용직전에 세척완충액을 증류수로 10배로 희석하여 각 튜브마다 1.5 ml 씩 넣어준 다음 완전히 제거한다. 이 과정을 3회 반복한다.
8) 각 튜브는 감마 신틸레이션 카운터(Gamma scintillation counter)에 넣어 1분간 카운팅한다.
각 튜브들의 카운팅 결과는 하기 표 2와 같았으며, TSH 양에 따라 측정된 cpm 값의 상관관계는 도 2의 그래프로 나타내었다. 도 2의 그래프에 측정시료의 cpm 값을 대입하여 시료의 TSH 값을 환산한 결과 0.34 uIU/ml로 나타났다.
[표 2]
튜브 측정된 CPM 평균 CPM TSHuIU/ml
양성대조군 281988/278183 280085 -
A(음성대조군) 152/134 143 0
B 422/449 435 0.125
C 1395/1413 1399 0.50
D 3688/3565 3626 1.50
E 11376/11050 11213 5.00
F 51162/51182 51172 25.00
G 143278/142765 143021 100.00
측정시료
X 875/859 867 0.34
체내의 갑상선 자극 호르몬의 정상수치 범위는 문헌에 따라 차이가 있으나 통상적으로 0.25 내지 5이다. 상기 시료의 수치는 0.34로 나타나 1차적인 시험으로 정상으로 나타났다. 이는 갑상선 항진증 또는 갑상선 저하증 판단을 위한 다양한 인자 중 갑상선 자극 호르몬의 수치를 정확하게 나타내는 것이다.
상기에 언급한 바와 같이, 본 발명의 갑상선 자극 호르몬 측정키트는 혈액내 갑상선 자극 호르몬을 신속, 정확하게 측정하여 갑상선 이상유무를 쉽게 확인할 수 있다.

Claims (9)

  1. (a) 농도순의 표준 갑상선 자극 호르몬 항원, 동위원소로 표지된 정량 갑상선 자극 호르몬 항체 및 갑상선 자극 호르몬 항체를 혼합하여 표준시료를 제조하고, 동시에 검체에 동위원소 표지된 정량 갑상선 자극 호르몬 항체 및 갑상선 자극 호르몬 항체를 반응기에서 혼합하는 단계;
    (b) 상기 (a)의 혼합물을 반응기에서 제거하고, 각 반응기에 대하여 감마 신틸레이션 카운터(gamma scintillation counter)상에서 cpm을 측정하는 단계;
    (c) 표준시료의 cpm 에 대하여 표준그래프를 작성하는 단계; 및
    (d) 상기 표준 그래프에 측정된 검체의 cpm 값을 넣어 검체내의 갑상선 자극 호르몬 함량을 환산하는 단계;
    를 포함하는 것을 특징으로 하는 갑상선 자극 호르몬 측정방법.
  2. 제 1항에 있어서, 상기 갑상선 자극 호르몬 항체는 단일클론항체이고, 상기 동위원소 표지된 갑상선 자극 호르몬 항체는 다클론항체인 것을 특징으로 하는 갑상선 자극 호르몬 측정방법.
  3. 제 1항에 있어서, 상기 (a)의 표준 갑상선 자극 호르몬 항원은 0.1 N NaOH 상에 갑상선 자극 호르몬 항원이 0, 0.125, 0.5, 1.5, 5, 25, 100 uIU/ml 농도로 각각 포함되어진 표준용액들인 것을 특징으로 하는 갑상선 자극 호르몬 측정방법.
  4. (a) 표준 갑상선 자극 호르몬 항원;
    (b) 상기 갑상선 자극 호르몬 항원에 대한 동위원소 표지된 갑상선 자극 호르몬 항체; 및
    (c) 상기 갑상선 자극 호르몬 항원에 대한 항체;
    을 포함하는 갑상선 자극 호르몬 검사키트.
  5. 제 4항에 있어서, 상기 갑상선 자극 호르몬 항체는 단일클론항체이고, 상기 동위원소 표지된 갑상선 자극 호르몬 항체는 다클론항체인 것을 특징으로 하는 갑상선 자극 호르몬 측정방법.
  6. 제 4항에 있어서, 상기 갑상선 자극 호르몬 항체는 튜브(tube)에 코팅되어 있는 것을 특징으로 하는 갑상선 자극 호르몬 검사키트.
  7. 제 4항에 있어서, 상기 (a)의 표준 갑상선 자극 호르몬 항원은 0.1 N NaOH 상에 갑상선 자극 호르몬 항원이 0, 0.125, 0.5, 1.5, 5, 25, 100 uIU/ml 농도로 각각 포함되어진 표준용액들인 것을 특징으로 하는 갑상선 자극 호르몬 측정 키트.
  8. 제 4항에 있어서, 검체 또는 표준 갑상선 자극 호르몬 항원을 각각 갑상선 자극 호르몬 항체와 반응시키고, 상기 반응물들에 동위원소 표지된 갑상선 자극 호르몬 항체를 결합시킨 다음 검체 반응물 및 표준갑상선 자극 호르몬 반응물의 동위원소 감마레이를 측정하고, 비교함으로써 검체의 갑상선 자극 호르몬 항원 함량을 환산하는 것을 특징으로 하는 갑상선 자극 호르몬 측정키트.
  9. 제 4항에 있어서, 상기 갑상선 자극 호르몬 측정키트는 갑상선 자극 호르몬을 0.125 내지 100 uIU(International Uints)/ml 범위로 측정하는 것을 특징으로 하는 갑상선 자극 호르몬 측정 키트.
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* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3911096A (en) * 1972-06-23 1975-10-07 Professional Staff Ass Of The Radioimmunoassay for measurement of thyroxine (T{HD 4{B ) and triiodothyonine (T{HD 3{B ) in blood serum
US4244940A (en) * 1978-09-05 1981-01-13 Bio-Rad Laboratories, Inc. Single-incubation two-site immunoassay
US4656143A (en) * 1983-03-15 1987-04-07 Baker Terence S Heterogeneous binding assay
KR20020065698A (ko) * 2001-02-07 2002-08-14 주식회사 바이오라인 방사면역측정법을 이용한 갑상선 호르몬 측정키트

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3911096A (en) * 1972-06-23 1975-10-07 Professional Staff Ass Of The Radioimmunoassay for measurement of thyroxine (T{HD 4{B ) and triiodothyonine (T{HD 3{B ) in blood serum
US4244940A (en) * 1978-09-05 1981-01-13 Bio-Rad Laboratories, Inc. Single-incubation two-site immunoassay
US4656143A (en) * 1983-03-15 1987-04-07 Baker Terence S Heterogeneous binding assay
KR20020065698A (ko) * 2001-02-07 2002-08-14 주식회사 바이오라인 방사면역측정법을 이용한 갑상선 호르몬 측정키트

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