KR20020015246A

KR20020015246A - 자기입자를 이용한 ｈｄｌ/ｌｄｌ 콜레스테롤의 동시진단방법 및 그 장치

Info

Publication number: KR20020015246A
Application number: KR1020000048443A
Authority: KR
Inventors: 김주호
Original assignee: 김주호
Priority date: 2000-08-21
Filing date: 2000-08-21
Publication date: 2002-02-27

Abstract

HDL콜레스테롤과 LDL콜레스테롤이 혼합되어 있는 용액에서 이들을 한번의 시료처리로 자기입자를 이용하여 간단히 분리하고 각각의 양을 그 자리에서 측정할 수 있는 면역크로마토그래피 방법을 이용한 새로운 분리방법 및 그 장치를 개발함.

Description

자기입자를 이용한 ＨＤＬ/ＬＤＬ 콜레스테롤의 동시진단 방법 및 그 장치{The diagnostic method and device of HDL-cholesterol and LDL-cholesterol simultaneously using magnetic bead}

본 발명은 동맥경화 등 순환기계통의 이상여부와 순환기의 관리상태를 각각 진단할 수 있는 저밀도 지질단백질 (low density lipoprotein, 이하 LDL이라 함) 콜레스테롤 농도와 고밀도 지질단백질 (high density lipoprotein, 이하 HDL이라 함) 콜레스테롤 농도를 동시 측정하는 시스템을 개발하기 위해 LDL 콜레스테롤과 HDL 콜레스테롤을 혈액으로부터 간단한 시스템을 이용하여 서로 분리하는 방법 및그 장치에 관한 것이다. 혈관벽에 지방성분과 혈전이 침착되어 야기되는 동맥경화증세와 심근경색 등 순환기계통의 질병 발생률은 LDL 콜레스테롤 농도와 큰 상관관계를 나타내는 것으로 보고되고 있다. 또한, 혈액 내 HDL 콜레스테롤 농도도 상당히 중요한 지표인데 이는 운동량과 비례하여 증가되고 따라서 순환기 질병발생률과 반비례할 뿐만 아니라 LDL 콜레스테롤 농도와는 독립적으로 영향을 미친다.

혈중 콜레스테롤의 총량이 정상인인 경우는 200mg/dL이하이고 200∼239mg/dL이면 위험가능성이 있으며 240mg/dL이상이면 상당히 위험한 수준이다. 그러나 이에 더하여 LDL콜레스테롤의 양과 HDL콜레스테롤의 양을 측정하여 그 비율을 측정하여야 더욱 정확한 위험수준을 평가할 수 있는데 LDL과 HDL은 서로 독립적인 변수로 작용하므로 각각의 혈중농도기준이 필요하다. 정상인의 경우는 LDL콜레스테롤은 160mg/dL이하, HDL콜레스테롤은 35mg/ dL이상, 콜레스테롤 총량은 200mg/dL이하이어야 한다. 만일 LDL콜레스테롤양이 160mg/dL이상이거나, HDL콜레스테롤양이 35mg/dL이하이면서 총 콜레스테롤양이 200mg/dL이상이면 동맥경화 등의 위험성이 상당히 높은 것으로 판단한다. 따라서, 동시 측정된 LDL과 HDL 콜레스테롤 농도로부터 그 비율을 결정함으로써 순환기 건강지표를 제시할 수 있다. 혈중 cholesterol 농도는 화학적 방법, chromatography 방법, 그리고 효소분석법에 의해 측정될 수 있다. 첫 두 방법들은 비교적 긴 측정시간을 요구하거나 화학물질 등 인체에 해로운 성분을 사용하여야 하는 단점을 갖는 반면에, 효소분석법은 수행이 간편하고 신속할 뿐 만 아니라 또한 측정자동화가 가능하다는 장점이 있다. 더우기 효소분석법은 다른 방법들에 비해 측정민감도가 높아 병원이나 연구실험실에서 널리 사용되고 있다.

효소분석법을 이용하여 HDL콜레스테롤이나 LDL콜레스테롤을 측정하는 것은 크게 두가지 단계로 나눈다. 즉, 첫째 단계는 지질단백질(LDL, HDL 등)을 종류별로 각각 분리하는 것이고, 둘째 단계는 분리된 지질단백질을 계면활성제 등을 처리하여 콜레스테롤을 방출시킨 후, 효소반응을 통하여 H₂O₂의 생성과 발색반응을 순차적으로 진행시켜 콜레스테롤의 양을 측정하는 것이다.

1972년에 Friewald WT가 효소분석법과 침전법을 이용하여 LDL콜레스테롤양을 간접적으로 측정한 이후 1980년에는 초원심분리기를 통해 각각의 지질단백질을 분리하여 콜레스테롤 양을 측정하였는데 이 방법이 현재 표준방법으로 사용되고 있다. 위와같은 방법들은 고가의 장비를 필요로 하거나 고도의 숙련도를 요구하며 자동화시스템에 적용하기에는 부적당한 방법이어서 자동화 시스템에 적용할 수 있는 새로운 침전법 등이 1990년대에 개발되어 오다가 1996년에는 Genzyme에서 LDL콜레스테롤을 직접 측정하는 방법이 개발되었다. 그러나 상기의 방법들은 모두 병원이나 전문적인 기술을 가지고 있는 연구원이나 임상병리사들에 의해서만 측정이 가능하기에 일반인들이 가정에서도 쉽게 LDL콜레스테롤과 HDL콜레스테롤 양을 동시에 진단할 수 있는 자가진단시약의 개발 필요성이 대두되었다. 이와같은 자가진단시약을 개발하기 위해서는 무엇보다도 LDL콜레스테롤과 HDL콜레스테롤을 자가진단시약 자체에서 쉽게 서로 분리할 수 있는 기술 개발이 선행되어야 한다.

[도 1] 혈액검체용 종이막 시스템

1: 완충용액흡수패드

2: 시료패드

3: 결합체패드

4: 자기부위 종이막

5: 자석

6: 효소패드

7: 신호패드

8: 흡수패드

[도 2] 완충용액용 종이막 시스템

9: 완충용액흡수패드

10: 효소패드

11: 신호패드

12: 흡수패드

[도 3] HDL/LDL 콜레스테롤 동시진단 시스템

13: 횡막 시스템

[도 4] 횡막시스템 - [도 3] 의 A측면과 B측면

14: 횡막 시스템의 위 층

15: 횡막 시스템의 아래 층

[도 5] [도 3] 의 동시진단 시스템을 고정하는 케이스

16: 혈액검체용 종이막 시스템의 1, 2, 3번 패드가 고정되는 부위

17: 자석이 위치하는 부위

18: 혈액검체용 종이막 시스템의 6, 7, 8번 패드가 고정되는 부위

19: 완충용액용 종이막 시스템의 9번 패드가 고정되는 부위

20: 횡막 시스템이 위치하는 부위

21: 완충용액용 종이막 시스템의 10, 11, 12번 패드가 고정되는 부위

본 발명은 다음과 같은 신규성을 지닌다. 즉, 본 발명에서 개발한 키트를 이용하여 피 한방울로 HDL콜레스테롤과 LDL콜레스테롤을 혈액으로부터 한번에 서로 분리시킬 수 있다. 본 발명품인 키트의 구성은 다음과 같다. ① 혈액검체가 전개되는 하나의 혈액검체용 종이막(이막에는 자석부위가 포함된다) 시스템과 완충용액만 전개되는 또다른 완충용액용 종이막 시스템, ② 이 두 개의 종이막시스템을 연결시키는 하나의 횡막 시스템 ③ HDL콜레스테롤이나 LDL콜레스테롤에 대한 항체를 자기입자에 부착시킨 항체-자기입자 결합체, ④ 항체-자기입자 결합체가 자기장을 통해서 포획되도록 자기장이 발생되는 자석부위 등으로 구성되어 있다. 항체는 혈액내에 있는 LDL콜레스테롤이나 HDL콜레스테롤의 항체결합부위(epitope)와 반응하는 항체를 말하며 이와같은 항체는 그에 대한 항원(여기서는 LDL콜레스테롤이나 HDL콜레스테롤을 말함)과 결합하고, 항체가 부착된 자기입자부위는 혈액검체용 종이막 시스템의 자기장이 형성되는 자석이 있는 위치에서 정지·포획된다. 따라서 항체와 반응하여 결합한 항원(예를 들어 HDL콜레스테롤)은 자석부위에서 정지·포획된 상태로 있고 항체와 반응하지 않는 또다른 종류의 항원(예를 들어 LDL콜레스테롤)은 자석부위를 그대로 통과하게 되어 HDL콜레스테롤과 분리된다. 혈액검체용 종이막 시스템 중 자석이 위치한 종이막 부위(이하 "자석부위 종이막"이라 함)는 혈액검체용 종이막 시스템에서 분리될 수 있게 설계되었고 이 "자석부위 종이막"은 횡막 시스템을 통해서 완충용액용 종이막 시스템으로 이동되어 자석부위에서 벗어나게 된다. 따라서 자석부위에서 정지·포획되었던 항원(예를 들어 HDL콜레스테롤)은 완충용액용 종이막 시스템에서 완충용액을 따라 모세관 현상에 의해서 효소패드로 전개되어 효소작용을 받게된다.

1. 제조방법

① 혈액검체용 종이막 시스템과 완충용액용 종이막 시스템

혈액검체용 종이막 시스템[도 1]은 완충용액흡수패드(1), 시료패드(2), 결합체패드(3), 자기부위종이막(4), 자석(5), 효소패드(6), 신호패드(7), 흡수패드(8) 등으로 구성된다. 각 패드의 연결순서는 "자석부위 종이막(폭 x 길이= 5mm x 1cm)"을 중심으로 위로는 각각 폭 5mm, 길이1∼2cm인 효소패드·신호패드·흡수패드가 끝 부분이 서로 겹치도록 하여 연결되어 있고 아래는 폭 5mm, 길이 1cm인 "항체-자기입자 결합체"를 포함한 결합체패드와, 시료를 흡수하여 "결합체패드" 에 시료를 전달시켜주는 폭 5mm, 길이 5mm인 "시료패드"가 있다. "자석부위 종이막"은 위쪽의 효소패드, 아래쪽의 결합체패드 등과 끝부분은 겹쳐있으나 붙어있지는 않아서 횡막 시스템을 통해서 쉽게 완충용액용 종이막 시스템[도 2]으로 이동할 수 있게 설계되었다. 완충용액용 종이막 시스템[도 2]도 혈액검체용 종이막 시스템과 비슷한 구조를 가진다. 즉 "자석부위 종이막"이 혈액검체용 종이막 시스템에서 횡막 시스템을 통하여 이동하여 완충용액용 종이막 시스템의 효소패드와 완충용액흡수패드 사이의 공간에 들어올 수 있도록 그 자리는 빈공간으로 남아있다. 이때 "자석부위 종이막"은 완충용액용 종이막 시스템의 효소패드와 완충용액흡수패드 사이로 들어와서 각각 끝이 겹쳐지게 되어 자연스럽게 완충용액용 종이막 시스템을 구성한다.

② 이 두 개의 종이막 시스템을 연결시키는 하나의 횡막 시스템

혈액검체용 종이막 시스템과 완충용액용 종이막 시스템은 서로 길이로 평행한 상태로 있고 이 사이를 횡막 시스템[도 3]을 통해서 서로 연결된다. 더 상세하게 말하자면, 혈액검체용 종이막 시스템의 중간에 위치한 "자석부위 종이막"이 횡막 시스템에 붙어 있어서 이 횡막 시스템을 잡아당기면 횡막 시스템에 붙어있는 "자석부위 종이막"이 완충용액용 종이막 시스템의 사이로 들어와서 자연스럽게 완충용액용 종이막 시스템의 위,아래 종이막(9번과 10번 패드)을 연결시켜 주게 한다.

③ 항체-자기입자 결합체

항체-자기입자 결합체를 만들기 위해 먼저 자기입자를 5% glutaraldehyde로 처리하여 활성화시킨다. 실온에서 3시간동안 회전시켜 반응시킨 후, 자기입자와 반응하지 않은 glutaraldehyde는 제거한다. 항체는 결합반응용 완충용액에 용해시켜 항체용액을 만든 후 glutaraldehyde로 미리 활성화시킨 자기입자에 항체용액을 넣고 잘 흔들어주면서 실온에서 16-24시간동안 반응시킨다. 반응이 끝난 후 Quenching용액을 넣고 잘 흔들어 주고 나서 30분간 실온에서 반응시켜 항체-자기입자의 더 이상의 결합반응을 정지시킨다.

④ 항체-자기입자 결합체를 포획하는 기능을 하는 자기장이 발생되는 자석부위

혈액검체용 종이막 시스템중 "자석부위 종이막" 아래에 일정한 크기와 자기장 세기를 지닌 자석(5)을 위치시킨다.

2. 검사방법

상기의 구조로 제조된 키트를 이용하여 HDL콜레스테롤과 LDL콜레스테롤을 분리하는 방법은 다음과 같다. HDL콜레스테롤과 LDL콜레스테롤 혼합액(이하 "콜레스테롤 혼합액" 이라 함)을 약 10∼20㎕를 시료패드에 떨어뜨린 후 "콜레스테롤 혼합액"을 시료패드를 통과해 결합체패드로 전달되게 하고 계속해서 모세관현상에 의해서 위쪽으로 전개되도록 완충용액을 완충용액흡수패드로부터 계속하여 공급하여 준다. "콜레스테롤 혼합액"은 완충용액을 따라 결합체패드로 계속 전개되어 "콜레스테롤 혼합액"에 있는 HDL콜레스테롤은 결합체패드의 상단부에 있는 "항체-자기입자 결합체"의 HDL콜레스테롤에 대한 항체와 결합하게 되어 HDL콜레스테롤-항체-자기입자결합체와 같은 복합체(이하 "HDL자기복합체"라 함)를 형성한다. HDL자기복합체는 완충용액을 따라 계속해서 결합체패드를 거슬러 올라가다가 자석부위종이막에서 HDL자기복합체가 자기장에 의해 이동이 정지·포획되고 LDL콜레스테롤은 계속해서 자석부위종이막을 거슬러 올라가 효소패드로 이동하게 된다. LDL콜레스테롤은 효소패드에서 효소작용에 의해서 과산화수소가 발생되고 과산화수소는 신호패드에서 신호발색물질을 산화시켜 발색이 일어나게 된다. LDL콜레스테롤이 모두 효소패드로 이동하면 횡막 시스템을 잡아당겨서 자석부위종이막을 혈액검체용 종이막 시스템에서 완충용액용 종이막 시스템으로 이동시킨다. 이렇게 이동한 자석부위종이막상에는 자기장이 사라지므로 자기장으로 인해 포획되었던 HDL자기복합체는 완충용액을 따라 완충용액용 종이막 시스템의 효소패드로 거슬러 올라가서 LDL콜레스테롤과 완전히 분리된 상태에서 효소패드와 신호패드의 효소작용으로 HDL콜레스테롤의 존재를 확인할 수 있다.

본 발명을 실시예에 의하여 상세히 설명한다.

다만, 다음의 실시예는 본 발명을 설명하기 위하여 제시한 한 예로서 이로써본 발명의 범위를 제한하지는 아니한다.

실시예 1. 혈액검체용 종이막 시스템의 제조

혈액검체용 종이막 시스템[도 1]은 완충용액흡수패드(1), 시료패드(2), 결합체패드(3), 자기부위종이막(4), 자석(5), 효소패드(6), 신호패드(7), 흡수패드(8) 등으로 구성된다. 완충용액흡수패드는 나이트로셀룰로오즈 재질로 된 막을 폭 5mm x 길이 1cm 크기로 잘라서 제작한다. 시료패드는 혈액에서 적혈구, 백혈구 등과 같은 혈구제거용 막을 폭 5mm x 길이 5mm로 제작하여 결합체패드의 하단부에 위치시킨다. 결합체패드는 유리섬유재질의 막을 폭 5mm x 길이 1cm 크기로 잘라서 제작한 후 하단부는 시료패드를 위치시키고 상단부는 항체-자기입자 결합체용액을 충분히 포함하도록 하여 건조시켜서 제작한다. 이렇게 준비된 완충용액흡수패드와 시료패드를 포함하는 결합체패드를 끝부분이 약 1mm정도 겹치도록 하여 같은 크기의 폴리프로필렌 필름위에 고정시켜 [도 5]와 같은 케이스의 16번 위치에 고정시킨다. 효소패드는 유리섬유재질의 막을 폭 5mm x 길이 1cm 크기로 잘라서 제작하고 그 위에 cholesterol esterase 효소(이하 CE효소라 함)와 cholesterol oxidase 효소(이하 CO효소라 함)의 역가비율을 약 2:1정도로 조절하여 만든 혼합액 약 2∼10㎕정도와 신호발색용 기질인 diaminobenzidine(이하 DAB라 함)을 약 2∼10㎕정도 떨어뜨려 흡수시킨 후 건조시킨다. 신호패드는 나이토로셀룰로오즈 재질의 막을 폭 5mm x 길이 1cm 크기로 잘라서 제작하고 그 위에 양고추냉이 과산화수소분해효소(이하 HRP라 함)를 적당한 농도로 희석하여 [도 1]의 신호패드(7)에서와 같이 여러 선(line)모양으로 분주시켜서 만든다. 흡수패드는 셀룰로오즈 재질의 필터용 막을 폭 5mm x길이 2cm 크기로 잘라서 제작한다. 상기의 방법대로 제작한 효소패드와 신호패드 그리고 흡수패드를 순서대로 서로 끝부분이 약 1mm정도씩 겹치게 하여 일렬로 위치시킨 후 같은 크기의 폴리프로필렌 필름위에 고정시켜 [도 5]와 같은 케이스의 18번 위치에 고정시킨다. 자석부위종이막은 나이트로셀룰로오즈 재질의 막을 폭 5mm x 길이 1cm정도 크기로 잘라서 밑면을 폴리프로필렌 필름 위에 고정시키고 다시 [도 3]과 같이 횡막 시스템에 고정시킨다. 이같이 준비된 자석부위종이막은 [도 5]의 자석이 놓이는 자리(17) 위에 위치시킨다.

실시예 2. 완충용액용 종이막 시스템의 제조

완충용액용 종이막 시스템[도 2]은 완충용액흡수패드(9), 효소패드(10), 신호패드(11), 흡수패드(12) 등으로 구성된다. 완충용액흡수패드는 나이트로셀룰로오즈 재질로 된 막을 폭 5mm x 길이 2cm 크기로 잘라서 제작한다. 같은 크기의 폴리프로필렌 필름위에 완충용액흡수패드를 고정시켜 [도 5]와 같은 케이스의 19번 위치에 고정시킨다. 효소패드는 유리섬유재질의 막을 폭 5mm x 길이 1cm 크기로 잘라서 제작하고 그 위에 CE효소와 CO효소의 역가비율을 약 2:1정도로 조절하여 만든 혼합액 약 2∼10㎕정도와 신호발색용 기질인 DAB를 약 2∼10㎕정도 떨어뜨려 흡수시킨 후 건조시킨다. 신호패드는 나이트로셀룰로오즈 재질의 막을 폭 5mm x 길이 1cm 크기로 잘라서 제작하고 그 위에 HRP를 적당한 농도로 희석하여 [도 2]의 신호패드와 같이 여러 선(line)모양으로 분주시켜서 만든다. 흡수패드는 셀룰로오즈 재질의 필터용 막을 폭 5mm x 길이 2cm 크기로 잘라서 제작한다. 상기의 방법대로 제작한 효소패드와 신호패드 그리고 흡수패드를 순서대로 서로 끝부분이 약 1mm정도씩 겹치게 하여 일렬로 위치시킨 후 같은 크기의 폴리프로필렌 필름위에 고정시켜 [도 5] 같은 케이스의 21번 위치에 고정시킨다. [도 5]의 20번 자리는 자석부위종이막이 혈액검체용 종이막 시스템에서 횡막 시스템을 통해 완충용액용 종이막 시스템과 연결될 수 있도록 제작된 공간이다.

실시예 3. 횡막 시스템의 제조

횡막 시스템([도 3]의 13)은 자기부위 종이막을 혈액검체용 종이막에서 완충용액용 종이막으로 이동시키는 기능을 한다. 재질은 약간 휘어질 수 있는 탄력성이 강한 플라스틱재질로 만든다. 구조는 [도 4] 처럼 두 개의 층으로 구성되는데 위층(14)은 약7mm 정도의 폭이고 혈액검체용 종이막을 가로 지나가는 부분에 자석부위 종이막(4)이 붙어있다. 아래층(15)은 약 5mm 정도의 폭이고 케이스의 홈(20)에 꼭 맞게 제작되어 횡막 시스템을 혈액검체용 종이막 시스템에서 완충용액용 종이막 시스템으로 잡아당길 때 부드럽고 흔들리지 않도록 하는 기능을 한다.

실시예 4. 항체-자기입자 결합체 제조

1. 용액제조

1) 결합반응용 완충용액제조

결합반응용 완충용액은 0.01M pyridine용액이다. 이용액의 제조는 다음과 같다. 0.8mL의 pyridine을 900mL 증류수에 넣어 용해시킨 후 6N HCl로 pH6으로 적정한다. 여기에 증류수를 더 넣어서 최종 1L 용액으로 만든다.

2) 5% glutaraldehyde 용액제조

후드에서 glutaraldehyde 5mL를 20mL의 결합반응용 완충용액에 넣어서 제조한다.

3) Quenching 용액제조

glycine 7.5g을 90mL의 증류수에 용해시킨 후 10N NaOH로 pH8로 적정한다. 여기에 증류수를 더 넣어서 최종 100mL 용액으로 만든다.

4) 세척액 제조

1.21 g Tris, 1.0 g NaN_3,1 g BSA, 8.7 g NaCl, 0.37 g EDTA를 증류수 900mL에 용해시킨다. 10N NaOH나 6N HCl로 pH7.4로 적정한 후 증류수를 최종 1L가 되도록 넣어준다.

2. 항체-자기입자 결합방법

1)자기입자의 활성화

후드에서 자기입자 10mg을 50mL 튜브에 넣고 여기에 결합반응용 완충용액을 최종 50mL이 되도록 넣어준 후 세게 흔들어준다. 자석으로 자기입자를 결합반응용 완충용액에서 약 10분정도 분리시켜 상등액이 투명해지면 상등액을 제거한다. 이와 같은 과정을 3회 정도 더 반복한 후 남아있는 자기입자의 젖은 덩어리에 5% glutaraldehyde를 20mL 넣고 세게 흔들어주고 나서 3시간 동안 실온에서 회전시키면서 반응시킨다. 반응이 끝난 후 자석을 이용해 위 반응으로 활성화된 자기입자를 반응용액에서 분리하여 반응하지 않고 남아있는 glutaraldehyde를 제거한다. 이와 같은 과정을 4번 더 반복한다.

2) 항체의 결합반응

25∼100mg의 항체용액을 결합반응용 완충용액 10mL에 넣고 용해시킨 후 이중75㎕를 따로 덜어내어 결합반응용 완충용액 1mL에 넣고 "반응전 단백질용액"으로 표시해둔다. 나머지 단백질용액은 glutaraldehyde로 미리 활성화 시킨 자기입자에 넣고 세게 흔들어 섞어준 후 실온에서 16∼24시간동안 회전시키면서 반응시킨다. 결합반응이 끝난 후 자석을 이용하여 결합반응용 완충용액을 제거하여 "결합반응후 상등액"이라고 표시해 둔다. Quenching 용액을 50mL 넣고 세게 흔들어 섞어주고 실온에서 30분간 회전시키면서 반응시킨다.

3) 세척 및 희석

Quenching 반응이 끝난 후 자석을 이용해 상등액을 제거하고 세척액 50mL를 넣고 세게 흔들어 섞어준 후 자석을 이용해 세척액을 제거한다. 이와 같은 과정을 3번 더 반복하고 나서 소량의 세척액을 넣고 사용 전 까지 4℃로 저장한다. 사용할 때는 잘 흔들어서 사용하고 보관할 때는 얼리거나 건조되지 않게 조심한다.

4) 결합반응 효율(%) 검증

광학측정기(spectrophotometer)의 파장을 280nm로 맞추고 결합반응용 완충용액으로 blank를 잡아준다. "반응전 단백질용액"의 흡광도를 측정하고 "결합반응후 상등액"의 흡광도를 측정한다. 결합반응의 효율은 다음과 공식에 의해서 산출한다.

[반응전 단백질용액의 흡광도-결합반응후 상등액의 흡광도] x 100/

[반응전 단백질용액의 흡광도]

실시예 5. HDL/LDL콜레스테롤 분리장치의 케이스 제작

케이스는 [도 5]와 같이 제작한다. 혈액검체용 종이막 시스템이 위치하는 자리는 [도 5]의 16, 18이고 완충용액용 종이막 시스템이 위치하는 자리는 [도 5]의19, 21이다. [도 5]이 17은 자석이 위치하는 자리이고 자기부위 종이막은 자석이 있는 자리 위에 위치하여 혈액검체용 종이막 시스템의 위·아래를 연결하여 준다. [도 5]의 20 은 횡막 시스템이 놓이는 자리이며 횡막 시스템의 아래층(15)은 폭이 5mm이고 위층(14)은 폭이 7mm이다. 이와 같은 설계대로 케이스를 제작한다.

본 발명은 HDL콜레스테롤과 LDL콜레스테롤이 혼합되어 있는 용액에서 이들을 한번의 시료처리로 간단히 분리하여 각각의 양을 그 자리에서 측정할 수 있는 새로운 분리방법 및 그 장치에 관한 것이다. 이같은 발명을 통하여 다음과 같은 여러 가지 효과를 기대할 수 있다.

첫째, 혈액내에 있는 HDL콜레스테롤과 LDL콜레스테롤을 쉽게 분리하여 각각의 양을 측정함으로써 HDL콜레스테롤과 LDL콜레스테롤의 양 및 비율을 단 한번의 시료처리로 얻을 수 있다.

둘째, 이와 같은 방법 및 장치개발은 독창적인 아이디어의 산물이므로 세계적인 경쟁성을 지닌다.

셋째, 종이막을 이용한 신속자가진단시약시장에서 동시진단의 새로운 장을 제시하고 있고 선도기술의 입지를 확보할 수 있게 되었다.

넷째, 콜레스테롤 이외의 다른 진단지표들에 대한 기술적용이 가능하여 상당한 기술적,산업적 파급효과를 기대할 수 있다.

Claims

HDL콜레스테롤과 LDL콜레스테롤의 혼합액에서 자기입자를 이용하여 각각을 분리하고 동시에 각각의 양을 신속하게 분석할 수 있는 것을 특징으로 하는 방법
HDL콜레스테롤과 LDL콜레스테롤의 혼합액에서 각각을 분리하고 동시에 각각의 양을 신속하게 분석하기 위한 동시진단 시스템을 특징으로 하는 장치
[청구항 2]에 있어서 동시진단 시스템은 혈액검체용 종이막 시스템과 완충용액용 종이막 시스템, 횡막 시스템 그리고 자석으로 구성되는 것을 특징으로 함
[청구항 3]에 있어서 혈액검체용 종이막 시스템은 완충용액흡수패드, 시료패드, 결합체패드, 자기부위종이막, 효소패드, 신호패드, 흡수패드로 구성되는 것을 특징으로 함
[청구항 3]에 있어서 완충용액용 종이막 시스템은 완충용액흡수패드, 효소패드, 신호패드, 흡수패드로 구성되는 것을 특징으로 함
[청구항 2]에 있어서 동시진단 시스템을 고정시킬 수 있는 케이스