KR20020012426A

KR20020012426A - 닭 콕시듐 백신의 제조방법

Info

Publication number: KR20020012426A
Application number: KR1020000045710A
Authority: KR
Inventors: 윤인중
Original assignee: 윤인중
Priority date: 2000-08-07
Filing date: 2000-08-07
Publication date: 2002-02-16

Abstract

본 발명은 닭 콕시듐 원충으로 인한 병아리엣의 닭 콕시듐증 발병으로 경제적 손실을 방지하기위한 면역을 유도하는 물질인 닭 콕시듐 백신을 제조하는 방법에 관한 것으로,

본 발명의 제조공정은 특정 병원균 부제병아리(special pathogenic free chicken) 30마리씩을 8그룹으로 분리 사육하면서 8그룹에 8가지 콕시듐 원충을 투여한 후 각각의 그룹에서 계분을 채집하여 그 채집량의 10배량의 2.5% 포타슘디크로메이트 용액을 가해 여과한 후 원심분리기를 이용하여 침전시킨 다음 이 침전물에 포화식염수를 가하여 혼합한 후 다시 원심하여 상층액을 채취하고 이를 다시 채취한 물에 원심침전시켜 원충을 채집해서 아이메리아 네카트릭스는 15∼30만개, 아이메리아 테넬라는 10만∼15만개, 아이메리아 헤가니는 50만∼100만개, 아이메리아 애셔뷰리나는 50만∼100만개, 아이메리아 멕시마는 25만∼50만개, 아이메리아 브루네티는 50만∼100만개, 아이메리아 파라콕스는 50만∼100만개, 아이메리아 미바티는 50만∼100만개가 되도록 백신을 제조하고, 10ℓ의 물에 원충부유물질인 CMC(Carboxymethyl cellulose) 2g을 혼합하여 잘 섞은다음 상기 제조된 백신을 혼합투여하는 것을 특징으로 하고 있으며,

이와 같은 본 발명은 제품을 표준화한 후 각종시험을 거친후 어린병아리에 투여할 경우 일생동안 콕시듐의 발병을 예방하고 항콕시듐제인 항생제 구입비 절감, 사료비 절감, 닭고기 내의 항생제 잔류문제 해결등 양계 산업 및 국민보건 향상에 크게 기여를 할뿐만 아니라, 수출 품목으로도 부가가치가 매우 높은 제품인 것이다.

Description

닭 콕시듐 백신의 제조방법{Coccidiosis vaccine}

본 발명은 닭 콕시듐 원충으로 인한 병아리에서의 콕시듐증 발병으로 경제적 손실을 방지하기 위한 면역을 유도하는 물질인 닭 콕시듐 백신을 제조하는 방법에 관한 것이다.

닭 콕시듐증은 기생충성 원충에 속하는 아이메리아속 콕시디아 원충으로서 무성생식과 유성생식기의 생활환을 갖고있으며, 무성생식기에 병아리의 소장 세포조직을 파괴하고 기능장애를 초래하며, 소장점막의 출혈, 맹장, 십이지장 등에 기생하여 빈혈, 혈변 및 장염을 동반하여 폐사케 할 뿐 만 아니라 내과 생존 할 지라도 사료효율의 저하, 체중감소, 산란율 감소, 항생제사용의 증가, 면역결핍 등 고질적인 후유증으로 말미암아 막대한 경제적 피해를 가져오는 질병이다.

이와같은 닭 콕시듐증은 사료비 및 항생제 사용증가 등 양계업의 합리적인 경영을 악화시켜 결국 경쟁력을 떨어뜨려 양계업을 더 이상 지속하지 못하는 단계에 이르게된다. 특히, 항생제의 과다사용은 결국 닭고기의 섭취로 항생제가 인체 내에 축적되어 국민보건에도 큰 영향을 끼치므로써 항생제 최다 사용국가라는 불명예를 갖게 되었다.

본 발명자는 본 발명자의 부친에 의하여 1994. 6. 7 자로 등록받은 특허 제 74278호 "닭 콕시듐 백신의 제조방법"(공고번호 94-1305호)을 제조방법 및 백신투여 방법면에서 더욱 개량하여 본건 특허를 출원하기에 이른 것이다.

본 발명의 콕시듐 백신은 어린 병아리시기인 10일령 전후에 투여하여 계획적으로 감염시켜 면역을 형성케 하여 그 닭이 경제적 수명을 다 할 때가지 자연생태계의 콕시듐 원충에 의한 발병을 억제시키는 면역성을 부여하는데 만족할 만한 결과를 얻었다.

이하, 본 발명의 제조방법을 실시예에 의하여 상세히 설명하면 다음과 같다.

실시예

1. 백신제조용 종 원충의 수집

닭 콕시듐증이 발생한 야외 농장의 닭에서 독성이 강한 8가지 콕시듐원충을 분리한다.

즉 아이메리아 테넬라(Eimeria tenella), 아이메리아 네카트릭스(Eimeria necatrix), 아이메리아 헤가니(Eimeria hagani), 아이메리아 애셔뷰리나 (Eimeria acervulina), 아이메리아 멕시마 (Eimeria maxima), 아이메리아 부루네티 (Eimeria brunetti), 아이메리아 파라콕스 (Eimeria parecox), 아이메리아 미바티 (Eimeria mivati)를 현미경과 증상부위별로 분리하여 각각 2.5% 포타슘 디크로메이트 (potassium dichromate) 용액에 부유시켜 원충을 수집한다.

2. 종원충의 제조

위에서 수집된 원충을 8∼10주령 특정병원균 부제병아리 (special pathogenic free chicken) 30마리씩 8 그룹으로 엄격히 분리 사육하면서 각각의 원충을 각각의 그룹에 100만∼200만 개씩 경구투여 한 후 각각의 그룹을 4∼5일간 사육한다. 이때 항콕시듐제가 들어있지 않은 순수한 사료를 이용하여 사육한다.

3. 종원충의 수집

엄격히 분리 사육한 감염 군에서 각 군별로 계분을 채집하여 그 채집량의 10배량의 2.5% 포타슘 디크로메이트 용액을 가하여 잘 혼합하고 윗물을 버린 후 여과하여 그 여과액을 원심분리기를 이용하여 침전시킨 다음 이 침전물에 포화식염수를 가하여 혼합한 후 다시 원심하여 상층액을 채취한 후 이것을 물에 넣어 다시 원심 침전시켜 원충만을 채집한다.

4. 원충의부화

상기와 같이 채집된 8종의 원충을 각각 포타슘 디크로메이트 2.5% 용액에 넣어 산소 발생기로 양압의 산소를 공급하면서 30℃에서 3일간 부화시킨다.

5. 제품의 표준화

부화된 8종의 원충을 보존용 용액(포타슘 디크로메이트 2.5% 용액) 4ml에 아이메리아 네카트릭스는 15∼30만개, 아이메리아 테넬라는 10만∼15만개, 아이메리아 헤가니는 50만∼100만개, 아이메리아 애셔뷰리나는 50만∼100만개, 아이메리아 멕시마는 25만∼50만개, 아이메리아 브루네티는 50만∼100만, 아이메리아 파라콕스는 50만∼100만, 아이메리아 미바티는 50만∼100만개가 되도록 각각 혼합제조하여10ml 관유리병에 분병하여 제품을 표준화한다.

6. 투여량

상기와 같이 제조된 백신을 10l의 물에 원충부유물질(suspending agent)인 CMC(Carboxymethyl cellulose) 2g을 혼합하여 잘 섞은 다음 백신을 혼합하여 1000마리가 골고루 먹을 수 있도록 투여한다.

7. 제조백신의 원충 함유량 시험

2병 이상의 백신에서 일정한 용량을 채취하여 혼합한 것을 원액으로 하여 증류수로 100배 희석한 다음 프랑크톤 계산판에 0.04ml를 떨어뜨리고 그 위에 카바글라스(18×18mm)를 덮은 다음 100배 현미경으로 18구획의 총수를 조사한 후 그 수에 25(1ml의 환원수)를 곱하고, 다시 100(희석배수)을 곱한다.

8. 시험성적

가. 안전시험

콕시듐에 감염되지 않은 10일령 병아리 20마리를 선정하여 사용법에 따라 suspending agent를 음수에 잘 혼합한 다음 백신을 가하여 충분히 섞어 적당히 단수한 시험계에 음수투여하고 14일간 관찰한다. 관찰기간 중 백신에 기인한 질병의 발생이 없이 모두 건강하게 생존하였다.

나. 안정시험

표1)과 같이 콕시?? 백신은 1/2수분, 1수분, 2수분을 병아리에 경구투여 하여 콕시듐 백신으로 인한 접종반응을 8일 동안 관찰한바 2배량의 투여 병아리에서 1∼2일 동안 약간의 설사증상이 있었으나 곧 회복되어 안정성이 인정되었다.

표 1) 백신접종 병아리의 임상증상

접종량	공시수	접종후 임상증상 관찰	비고
		4일		5일	6일	7일	8일
		설사		혈변	폐사	설사	혈변	폐사	설사	혈변	폐사	설사	혈변	폐사	설사	혈변	폐사
1/2수분	1	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	설사 0/5혈변 0/5폐사 0/5
	2	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
	3	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
	4	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
	5	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
1수분	1	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	설사 0/5혈변 0/5폐사 0/5
	2	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
	3	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
	4	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
	5	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
2수분	1	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	설사 2/5혈변 0/5폐사 0/5
	2	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
	3	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
	4	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-
	5	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-	-

다. 백신의 효력시험

표2)와 같이 백신을 접종한 것과 하지 않은 대조군에 접종 후 14일과 21일에 각각의 시험계군에 공격을 한 바 백신 접종군 에서는 아무런 임상증상이 나타나지 않았지만 대조군 에서는 심한 설사와 혈변을 배설하였다.

표 2) 백신의 효력시험

구분	접종횟수	접 종 량	공 시 수	백신접종후 일수	공격일수	공격후일수
구분	접종횟수	접 종 량	공 시 수	4	공격일수	5	6	7	4	5	6	7
A	1	1/2 수분	55	-	-	-	-	14	-	-	-	-
		1/2 수분	55	-	-	-	-	21	-	-	-	-
		1 수분	55	-	-	-	-	14	-	-	-	-
		1 수분	55	-	-	-	-	21	-	-	-	-
B	2	1/2 수분	55	-	-	-	-	14	-	-	-	-
		1/2 수분	55	-	-	-	-	21	-	-	-	-
		2 수분	55	-	-	-	-	14	-	-	-	-
		2 수분	55	-	-	-	-	21	-	-	-	-
C	대조군	0	55					1421	++++++	++++++	++++++	++++++

※ +++ : 심한 설사 및 혈변을 배설하는 군

공격이란 원충중 독력이 강한 원충 즉, 아이메리아 네키트릭스, 아이메리아 레네라는 30,000 ∼ 50,000개, 아이메리아 부루네티, 아이메리아 멕시마는 100,000개 이상, 아이메리아 애셔뷰리나는 100,000 ∼ 200,000개가 함유되도록 접종하는 것을 말함.

라. 증체율 비교 시험

10일령에 백신을 투여한 군과 투여하지 않은 대조군에 각각 21일령에 공격한 후 증체율을 비교시험 한 바 백신접종군의 평균체중은 585.2g이었으며, 대조군은 425.7g으로서 백신 접종군은 백신을 접종하지 않은 대조군에 비하여 27.25%의 증체효과를 나타냈다. (표3, 표4 참조)

표3) 백신투여군의 체중 증가표

계균1	31일째의 체중	공격	체 중 증 가
계균1	31일째의 체중		1	2	3	4	5	6	7
1	495		512	522	535	545	551	563	581
2	480		506	518	532	543	549	564	583
3	485		507	518	533	544	550	565	585
4	475		501	513	525	540	549	564	587
5	482		498	510	523	537	548	562	583
6	481		497	509	533	546	553	568	586
7	490		501	513	527	540	548	565	588
8	487		505	517	530	543	550	567	589
9	484		502	514	526	539	541	558	580
10	487		506	519	533	545	554	570	590
평 균	484.60		503.50	515.30	529.70	549.30	549.30	564.60	585.20

표4) 대조군의 체중 증가표

계균2	31일째의 체중	공격	체 중 증 가
계균2	31일째의 체중		1	2	3	4	5	6	7
1	495		510	520	525	511	485	459	431
2	490		512	520	527	512	490	455	428
3	487		513	523	530	515	485	451	427
4	489		512	520	525	512	480	455	420
5	485		509	520	526	509	483	447	425
6	483		516	526	530	516	495	460	431
7	485		511	520	525	507	481	452	425
8	487		513	522	523	507	480	453	430
9	484		510	517	520	503	481	442	421
10	487		512	520	523	507	482	443	419
평 균	487.00		511.80	520.80	525.40	509.90	484.20	451.70	425.70

상술한 바와 같은 방법으로 제조되는 본 발명은 제품을 표준화한 후 각종시험을 거친후 어린병아리에 투여할 경우 일생동안 콕시듐의 발병을 예방하고 항콕시듐제인 항생제 구입비 절감, 사료비 절감, 닭고기 내의 항생제 잔류문제 해결등 양계 산업 및 국민보건 향상에 크게 기여를 할뿐만 아니라, 수출 품목으로도 부가가치가 매우 높은 제품인 것이다.

Claims

특정 병원균 부제병아리(special pathogenic free chicken) 30마리씩을 8그룹으로 분리 사육하면서 8그룹에 8가지 콕시듐 원충을 투여한 후 각각의 그룹에서 계분을 채집하여 그 채집량의 10배량의 2.5% 포타슘디크로메이트 용액을 가해 여과한 후 원심분리기를 이용하여 침전시킨 다음 이 침전물에 포화식염수를 가하여 혼합한 후 다시 원심하여 상층액을 채취하고 이를 다시 채취한 물에 원심침전시켜 원충을 채집해서 아이메리아 네카트릭스는 15∼30만개, 아이메리아 테넬라는 10만∼15만개, 아이메리아 헤가니는 50만∼100만개, 아이메리아 애셔뷰리나는 50만∼100만개, 아이메리아 멕시마는 25만∼50만개, 아이메리아 브루네티는 50만∼100만개, 아이메리아 파라콕스는 50만∼100만개, 아이메리아 미바티는 50만∼100만개가 되도록 백신을 제조하고, 10ℓ의 물에 원충부유물질인 CMC(Carboxymethyl cellulose) 2g을 혼합하여 잘 섞은다음 상기 제조된 백신을 혼합투여하는 것을 특징으로 하는 닭 콕시듐 백신의 제조방법.