KR20010109872A - 장기 보관된 말초 혈액세포 또는 조혈모세포의 자가이식을 통한 면역력 회복 방법과 혈액세포 저축은행을통한 말초 혈액세포 또는 조혈모세포 제공 시스템 - Google Patents
장기 보관된 말초 혈액세포 또는 조혈모세포의 자가이식을 통한 면역력 회복 방법과 혈액세포 저축은행을통한 말초 혈액세포 또는 조혈모세포 제공 시스템 Download PDFInfo
- Publication number
- KR20010109872A KR20010109872A KR1020000030590A KR20000030590A KR20010109872A KR 20010109872 A KR20010109872 A KR 20010109872A KR 1020000030590 A KR1020000030590 A KR 1020000030590A KR 20000030590 A KR20000030590 A KR 20000030590A KR 20010109872 A KR20010109872 A KR 20010109872A
- Authority
- KR
- South Korea
- Prior art keywords
- cells
- hematopoietic stem
- blood
- stem cells
- cell
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Withdrawn
Links
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 107
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 56
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 title claims abstract description 41
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 239000008280 blood Substances 0.000 title claims description 30
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 title claims description 29
- 230000007774 longterm Effects 0.000 title description 17
- 210000000777 hematopoietic system Anatomy 0.000 title 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 claims abstract description 45
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 claims abstract description 18
- 238000011134 hematopoietic stem cell transplantation Methods 0.000 claims abstract description 13
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims abstract description 11
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 claims abstract description 9
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 claims abstract description 7
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 claims abstract description 6
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 67
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 claims description 30
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 28
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 25
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 25
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 claims description 17
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 claims description 17
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 14
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 14
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 claims description 12
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims description 12
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 claims description 10
- 238000003860 storage Methods 0.000 claims description 10
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 9
- 238000000018 DNA microarray Methods 0.000 claims description 7
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims description 7
- 238000012252 genetic analysis Methods 0.000 claims description 6
- 238000011160 research Methods 0.000 claims description 6
- 208000032791 BCR-ABL1 positive chronic myelogenous leukemia Diseases 0.000 claims description 5
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 claims description 5
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 claims description 5
- 208000010833 Chronic myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 5
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 claims description 5
- 208000033761 Myelogenous Chronic BCR-ABL Positive Leukemia Diseases 0.000 claims description 5
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims description 5
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 claims description 5
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 claims description 5
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 claims description 5
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 claims description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 5
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 claims description 5
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 claims description 4
- 208000034578 Multiple myelomas Diseases 0.000 claims description 4
- 206010033128 Ovarian cancer Diseases 0.000 claims description 4
- 206010061535 Ovarian neoplasm Diseases 0.000 claims description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 claims description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 4
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 claims description 4
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 4
- 238000011084 recovery Methods 0.000 claims description 4
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 4
- 208000031261 Acute myeloid leukaemia Diseases 0.000 claims description 3
- 208000035143 Bacterial infection Diseases 0.000 claims description 3
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 claims description 3
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 claims description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 claims description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 claims description 3
- 238000007710 freezing Methods 0.000 claims description 3
- 230000008014 freezing Effects 0.000 claims description 3
- 230000011132 hemopoiesis Effects 0.000 claims description 3
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 3
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000010839 B-cell chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 claims description 2
- 208000031422 Lymphocytic Chronic B-Cell Leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 claims description 2
- 208000036142 Viral infection Diseases 0.000 claims description 2
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 claims description 2
- 208000032852 chronic lymphocytic leukemia Diseases 0.000 claims description 2
- 208000024200 hematopoietic and lymphoid system neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 claims description 2
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 2
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 claims description 2
- 230000004064 dysfunction Effects 0.000 claims 1
- 238000003753 real-time PCR Methods 0.000 claims 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 claims 1
- 230000009469 supplementation Effects 0.000 claims 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 claims 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 abstract description 7
- 230000008929 regeneration Effects 0.000 abstract description 3
- 238000011069 regeneration method Methods 0.000 abstract description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 17
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 7
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 6
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 6
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 5
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 5
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 5
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012981 Hank's balanced salt solution Substances 0.000 description 3
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 3
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 239000012980 RPMI-1640 medium Substances 0.000 description 3
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 3
- 210000001772 blood platelet Anatomy 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 3
- 208000032843 Hemorrhage Diseases 0.000 description 2
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 2
- 206010029260 Neuroblastoma Diseases 0.000 description 2
- 206010041067 Small cell lung cancer Diseases 0.000 description 2
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 2
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000612 antigen-presenting cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000003719 b-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 230000002338 cryopreservative effect Effects 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 2
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 238000002826 magnetic-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 244000052769 pathogen Species 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 208000000587 small cell lung carcinoma Diseases 0.000 description 2
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 2
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 2
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 2
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 2
- 230000005748 tumor development Effects 0.000 description 2
- UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 4-isocyanato-4'-methyldiphenylmethane Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1CC1=CC=C(N=C=O)C=C1 UZOVYGYOLBIAJR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010029697 CD40 Ligand Proteins 0.000 description 1
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100032937 CD40 ligand Human genes 0.000 description 1
- 102100035793 CD83 antigen Human genes 0.000 description 1
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 1
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 1
- 102000006354 HLA-DR Antigens Human genes 0.000 description 1
- 108010058597 HLA-DR Antigens Proteins 0.000 description 1
- 101000946856 Homo sapiens CD83 antigen Proteins 0.000 description 1
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 description 1
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 102100022297 Integrin alpha-X Human genes 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 125000002066 L-histidyl group Chemical group [H]N1C([H])=NC(C([H])([H])[C@](C(=O)[*])([H])N([H])[H])=C1[H] 0.000 description 1
- 102000043131 MHC class II family Human genes 0.000 description 1
- 108091054438 MHC class II family Proteins 0.000 description 1
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 1
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 1
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 1
- 208000005718 Stomach Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 description 1
- 102000036693 Thrombopoietin Human genes 0.000 description 1
- 108010041111 Thrombopoietin Proteins 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 206010066901 Treatment failure Diseases 0.000 description 1
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000005809 anti-tumor immunity Effects 0.000 description 1
- 208000022362 bacterial infectious disease Diseases 0.000 description 1
- 208000034158 bleeding Diseases 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 238000004820 blood count Methods 0.000 description 1
- 210000002798 bone marrow cell Anatomy 0.000 description 1
- 231100001018 bone marrow damage Toxicity 0.000 description 1
- 230000005983 bone marrow dysfunction Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 1
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000003850 cellular structure Anatomy 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000009643 clonogenic assay Methods 0.000 description 1
- 231100000096 clonogenic assay Toxicity 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002380 cytological effect Effects 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 230000007850 degeneration Effects 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 125000000118 dimethyl group Chemical group [H]C([H])([H])* 0.000 description 1
- 230000003292 diminished effect Effects 0.000 description 1
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000005611 electricity Effects 0.000 description 1
- 230000002708 enhancing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 108700014844 flt3 ligand Proteins 0.000 description 1
- 206010017758 gastric cancer Diseases 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 230000036449 good health Effects 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 1
- 230000036737 immune function Effects 0.000 description 1
- 208000033065 inborn errors of immunity Diseases 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000012423 maintenance Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000001823 molecular biology technique Methods 0.000 description 1
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 1
- 231100000572 poisoning Toxicity 0.000 description 1
- 230000000607 poisoning effect Effects 0.000 description 1
- 230000010287 polarization Effects 0.000 description 1
- 208000028529 primary immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000010926 purge Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 201000011549 stomach cancer Diseases 0.000 description 1
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002792 vascular Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
- A01N1/10—Preservation of living parts
- A01N1/16—Physical preservation processes
- A01N1/162—Temperature processes, e.g. following predefined temperature changes over time
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2502/00—Coculture with; Conditioned medium produced by
- C12N2502/11—Coculture with; Conditioned medium produced by blood or immune system cells
- C12N2502/1171—Haematopoietic stem cells
Landscapes
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
본 발명은 정상인으로부터 건강할 때 말초 혈액세포(면역세포) 또는 조혈모세포를 채집하여 장기간 냉동 보관하였다가 차후에 본인에 면역세포이식이 필요한 질병이 발생시 이를 사용하여 자가 혈액 세포 또는 조혈모 세포 이식하는 것을 포함하는, 안전하고 효과적인 면역력 회복방법에 관한 것이며, 또한 본 발명은 정상인으로부터 건강할 때 말초 혈액세포 또는 조혈모세포를 채집하여 일정기간 안정하게 냉동 보관하였다가 본인에 면역결핍증후가 나타나는 시기에 골수 재생 및 혈액세포들의 재생을 위한 자가 조혈모 세포 이식을 시행하기 위한 의료기관의 요구에 따라 보관된 말초 혈액세포 또는 조혈모 세포를 분양해 주는 새로운 혈액세포저축은행, 및 이를 통한 말초 혈액세포 또는 조혈모세포 제공 시스템에 관한 것이다.
Description
본 발명은 정상인으로부터 건강할 때 말초 혈액세포(면역세포) 또는 조혈모세포를 채취하여 장기간 냉동 보관하고, 차후에 본인이 면역 결핍 시 이를 수혈하거나 이식하는 것을 포함하는 면역력 회복방법과 자가혈액세포저축은행을 통한 말초 혈액세포 및 조혈모세포 제공 시스템에 관한 것이다.
인간의 면역체계는 다양한 질환으로부터 인체를 방어할 수 있음은 잘 알려진 사실이다. 일반적으로 면역반응의 시작은 항원제공세포(antigen presenting cells)가 세포표면의 MHC 클래스 II 및 클래스 I으로 항원을 수여하여 헬퍼(CD4+) 및 세포독성(CD8+) T 림프구를 활성화시키면서 시작한다. 활성화된 CD4+ T 림프구들은 싸이토카인(cytokines)을 통해 B 림프구와 CD8+ T 림프구, 대식 세포 및 다양한 면역세포들을 활성화시킨다(Finkelman, F. D.,J. Exp. Med.182; 279(1995)). 활성화된 세포들은 각자의 기능을 최대화하도록 분화되는데, 예를 들면, CD8+ T 림프구는 세포독성 T 림프구(cytotoxic T lymphocyte)로 분화하여 항원제공세포에 의해 제공받았던 항원과 동일한 항원을 발현하는 모든 세포(감염된 세포, 암세포 등)를 파괴하고 B 림프구는 항체를 대량 생산하여 항원(병원균과 바이러스)의 중화와 제거를, 그리고 대식세포는 식세포 작용을 통해 병원균의 제거를 담당하게 된다.
이러한 면역체계의 결핍으로 인한 질병이 발병하였을 때, 종종 자기의 면역세포 또는 혈액세포를 채집한 후 이를 자가 이식하는 방법이 시행되어 왔는바, 이중에서 조혈모세포 이식은 1970년대 후반 만성 골수성 백혈병에서의 첫 성공이후,1990년대에 이르러서는 백혈병, 림프종, 다발성골수종, 유방암, 소세포성폐암, 난소암, 신경모세포암 등의 암이나 혈액질환을 가진 환자들의 일부에서 효과가 인정되며 경우에 따라서는 최선의 치료방법으로 간주되고 있다(Goldman, J. M., D. Catovsky, J. Hows, A. S. Spiers, and D. A. Galton.,Br Med J1:1310(1979); Kessinger, A., and J. O. Armitage.,Int. J. Cell. Cloning10 (Suppl. 1):127(1992), Shipp MA, Antman KH, Hagenbeek CA, Montserrat LE, Radford JA, Salles G, Symann SM, Armitage JO, Philip T, Coiffiar B. ,J Clin Oncol17:423, 1999).
그러나, 종래에는 자가 대식세포를 채집한 직후 이들을 자극하여 항종양 면역을 유도하려는 시도가 있었으나(Lesimple, T., A. Moisna, and L. Toujas.,Res. Immunol. 149:663(1998)), 이러한 종래 기술에서는 질환에 이환된 후 채혈하므로 체내에 존재하는 종양세포의 혼입으로 이식 후 재발의 원인이 될 수 있으며, 이미 암세포가 골수에 침범된 진행된 암환자에서는 암세포 정화를 위해 CD34+ 추방(purging)을 하더라도 T 세포의 GVL(graft versus leukemic) 효과를 기대할 수 없으며, 또한 환자가 항암 요법, 방사선치료요법 등으로 골수가 심한 손상을 받은 환자에서는 말초혈액내로 조혈모세포 가동화(mobilization) 자체가 되지 않아 채집에 실패하는 문제점이 있었다.
본 발명의 첫번째 목적은 상기 종래 기술의 문제점을 해결하여, 정상인으로부터 건강할 때 말초 혈액세포(면역세포) 또는 조혈모세포를 채집하여 보관하였다가 일정기간이 경과한 후 본인에 특정 질환에 대한 또는 전반적인 면역결핍증후가 나타나는 시기에 이를 자가 이식함으로써, 암세포가 오염(contamination) 또는 혼입 되어 있지 않은 건강한 상태의 혈액세포를 이식할 수 있는 안전하고 효과적인 면역력 회복방법을 제공하는데 있다.
또한, 본 발명의 두번째 목적은 정상인으로부터 건강할 때 말초 혈액세포 또는 조혈모세포를 채집하여 일정기간 안정하게 냉동 보관하였다가 본인에 면역결핍증후가 나타나는 시기에 골수 재생 및 혈액세포들의 재생을 위한 자가 조혈모 세포 이식을 시행하기 위한 의료기관의 요구에 따라 보관된 말초 혈액세포 또는 조혈모 세포를 분양해 주는 새로운 혈액세포저축은행을 제공하는 데 있다.
또한, 본 발명의 세번째 목적은 혈액세포저축은행과 계약을 맺은 정상인 고객, 정상인으로부터 말초 혈액세포 또는 조혈모세포를 채집하여 냉동 보관하는 혈액세포저축은행, 및 혈액세포저축은행으로부터 말초 혈액세포 또는 조혈모세포를 분양 받아 정상인에 자가 골수이식을 시행하는 의료기간이 원격 통신 네트웍을 통하여 상호 연결되는 효과적인 말초 혈액 또는 조혈모 세포 제공 시스템을 제공하는 데 있다.
도 1a는 장기 냉동 보존된 말초혈액과 신선한 말초혈액의 세포회수율을 비교한 그라프이고,
도 1b는 장기 냉동 보존된 말초혈액과 신선한 말초혈액에서 분리한 조혈모세포의 순수도를 비교한 그라프이고,
도 2는 장기 냉동 보존된 말초혈액과 신선한 말초혈액에서 분리한 조혈모세포의 조혈 기능을 비교한 그라프이고,
도 3은 장기 냉동 보존된 말초혈액과 신선한 말초혈액으로부터 분화한 수상돌기세포의 면역 증강 효과를 비교한 그라프이고,
도 4는 본 발명의 혈액세포저축은행을 통한 말초 혈액세포 또는 조혈모세포 제공 시스템에 대한 구성도이다.
본 발명의 첫 번째 목적 달성하기 위하여, 본 발명의 면역력 회복방법은 정상인으로부터 건강할 때 말초 혈액세포(면역세포) 또는 말초 조혈모세포를 채집하는 단계, 채집된 말초 면역세포 또는 조혈모 세포를 일정기간 냉동 보관하는 단계, 및 본인에 면역세포이식이 필요한 질병이 발병 시 이를 사용하여 자가 혈액세포 또는 자가 조혈모세포 이식을 시행하는 단계를 포함한다.
본 발명에서 정상인이란 암세포가 전혀 없고 환자의 면역체계상태가 정상인 사람을 의미하나, 골수세포가 거의 손상 받지 않은 상태의 초기 암 환자도 포함한다. 자가 이식의 대상은 바람직하게는 유전적으로 암 발생률이 높은 가계 구성원이 되지만, 그렇지 않은 일반인의 경우에도 동일하게 적용될 수 있다.
본 발명에서 채집되는 말초 혈액세포(면역세포)란 말초혈액내의 적혈구 및 단핵구의 유핵세포를 말하며, 이들의 구성은 적혈구 또는 피콜-하이페크로 분리한 단핵세포군집을 통칭한다. 이들의 성분은 대식세포, 림프구, 과립구, 자연 독살세포 및 소량의 조혈모세포 등을 포함하며, 면역기능을 직접 담당하는 세포들이다.
또한, 본 발명에서 채집되는 말초 조혈모세포란 혈액생성의 기원 세포로서 인간의 혈액을 이루고 있는 세포 성분인 적혈구, 혈소판, 백혈구로 증식, 분화할 수 있는 세포를 말한다. 예컨대, 태아의 간세포를 들 수 있으나, 특히 분리된 단핵구중의 CD34 양성 조혈모세포가 바람직하다.
본 발명에서 말초 조혈모세포를 채집하기 전에 정상인에 G-CSF를 투여하여 말초 혈액으로 건강한 조혈모세포를 가동화(mobilization)시킨 후 채혈하는 것이 바람직하다. 건강한 사람의 경우 과립구-콜로니 자극 인자 (granulocyte colony stimulating factor:G-CSF)를 단독으로 사용하는 경우 G-CSF를 5-10 μg/kg/day 씩 투여하면, 대개 4-6일째에 전형적으로 말초혈액의 조혈모세포수가 최고치에 도달하여 CFU-GM이 2-50배, CD34양성세포가 10-30배 증가한다.
본 발명에서 채집된 말초 면역세포 또는 조혈모 세포의 냉동보관은 조혈모세포의 조혈재건 기능이 안정하게 유지될 수 있는 냉동보관방법에 의하여 수행된다. 채집된 말초 조혈모세포는 바람직하게는 -160 ℃ 이하, 가장 바람직하게는 -196 ℃ 이하의 액체 질소에서 보관되며, 이 경우 5년 이상 장기간 안정하게 보관될 수 있다. 또한, 5년 정도의 기간이 경과될 때마다, 냉동된 혈액세포를 해동하여 배양(culture)하고 증폭(expansion)한 후 젊은 혈액세포를 다시 냉동시키면 수십년간 보관도 가능할 것이다.
본 발명에서 면역세포이식이 필요한 질병이란 보관이후 또는 노년기에 발생하는 림프종, 급성 및 만성 골수성 백혈병, 급성 및 만성 림프구성 백혈병, 다발성골수종과 같은 모든 혈액종양, 난소암, 유방암, 폐암 등에 대한 고용량 항암치료 후 발생되는 골수 기능 저하증, 및 세균성 질환, 바이러스 감염, 혈액 장애 등과 같은 각종 면역 결핍 질환을 포함한다.
항암 화학요법으로 골수기능이 완전히 저하된 경우 항암 화학요법을 중단하여 불완전 치료로부터 재발되거나, 대부분의 환자에서는 혈액세포수 감소로 인한 감염(백혈구 감소 시), 출혈(혈소판 감소 시)로 사망할 위험이 높아지게 된다. 이 때 채집된 말초 조혈모세포, 즉 혈액생성의 조상세포(기원세포)를 이식하게 하면 환자의 혈액세포 감소증의 기간을 단축시켜 감염 및 출혈의 위험으로부터 빠르게 회복할 수 있는 전기가 되며 특히 혈액암의 경우에는 말초조혈모세포 이식이 가장 좋은 치료법 중의 하나이다. 그러나 질환에 이환된 환자에 있어서 항암 화학요법으로 완전 관해(치유)를 유도한 후 채집된 조혈모세포는 현재의 의학으로는 암세포의 혼입을 100% 제거할 방법이 없어 이 경우에 혼입된 암세포에 의한 재발이 가장심각한 치료 실패의 원인이 된다.
노년기의 인체의 면역력은 청, 장년기의 그것에 비해 상당한 정도로 약화(또는 결핍)되어 있어 암, 세균성 질환, 혈액장애 등과 같은 질환에 상대적으로 감수성이 높으며, 그 근본적인 이유는 골수에서 면역세포의 생산능력 저하, 면역세포들의 분열능 저하 등과 같은 복합적인 요인이 작용한다. 따라서, 정상인이 건강을 유지하고 있을 때 면역세포들을 채집하여 장기간 냉동 보관하였다가, 노년기에 본인이 질환을 앓게되는 경우 자가 혈액 이식 또는 수혈(autologous transplantation or transfusion)을 하게 되면, 면역력을 다시 회복할 수 있는 근거를 마련할 수 있다.
본 발명의 두 번째 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 정상인으로부터 건강할 때 말초 혈액세포 또는 조혈모세포를 채집하여 이를 일정기간 냉동 보관하였다가 본인에 면역결핍증후가 나타나는 시기에 자가 조혈모 세포 이식을 시행하기 위한 의료기간의 요구가 따라 보관된 말초 혈액세포 또는 조혈모 세포를 분양해 주는 혈액세포 저축은행을 제공한다.
본 발명의 혈액세포저축은행은 정상인으로부터 채집된 혈액(면역)세포 또는 조혈모세포를 일정기간 계약된 기간까지 냉동 보관하였다가, 환자가 수혈 또는 말초조혈모세포이식술이 필요한 질환이 발생되었을 경우 치료받게 될 의료기관까지 공급하는 업무를 담당한다.
본 발명의 혈액세포저축은행은 정상인으로부터 채집된 말초 면역세포 또는 조혈모 세포를 안정하게 장기간 보관할 수 있는 냉동보관장치를 구비하고 있으며,바람직하게는 채집된 말초 조혈모세포는 -160℃ 이하의 액체 질소에서 5년 이상 보관된다.
본 발명의 혈액세포저축은행은 정상인으로부터 혈액을 채취하고 혈액중의 면역세포 또는 조혈모세포를 채집, 순수분리하며, 필요시 채집된 말초 조혈모 세포 중 희귀한 특정세포만을 증폭하여 분화시키는 방식을 통해 다량의 특정 세포를 확보할 수도 있다.
또한, 본 발명의 혈액세포저축은행은 채집된 혈액세포중의 일부(전체의 1% 미만)를 면역학, DNA 칩(chip) 등을 이용한 분자유전학적인 분석을 통하여 종양발생가능성 및 고객의 혈청학적인 데이터를 수집, 분석하여 고객의 바이오인포메틱스(Bioinformatics)를 제작, 관리할 수도 있다. 제작된 고객의 바이오인포메틱스는 고객이 의료기관을 통하여 종양의 진단을 받았을 경우, 채집한 고객의 면역세포 또는 조혈모세포의 일부 또는 전부와 함께 의료기관에 제공될 수도 있다.
본 발명의 세 번째 목적을 달성하기 위하여, 본 발명의 혈액세포저축은행을 통한 말초 혈액세포 또는 조혈모세포 제공 시스템은, 상기 혈액세포 저축은행과 혈액세포 보관계약을 맺는 정상인 고객과, 상기 정상인으로부터 말초 혈액세포 또는 조혈모세포를 채집하여 이를 일정기간 냉동 보관하는 혈액세포 저축은행과, 상기 혈액세포 저축은행으로부터 혈액 조혈모 세포를 분양 받아 상기 정상인에 자가 골수이식을 시행하는 의료기간이 원격 통신 네트웍을 통하여 상호 연결되어 구성된 것을 특징으로 하는 말초 혈액세포 또는 조혈모 세포 제공 시스템을 제공한다.
본 발명의 말초 혈액세포 또는 조혈모세포 제공 시스템에 있어서, 혈액세포 저축은행은 세포의 채집, 순수분리, 분화 유도등의 분자세포학적 기술, DNA 칩, 유전자 자동 서열결정기(Automated sequencer), 실시간(Real time) PCR 등을 이용하여 고객의 종양발생가능성, 혈청학적 데이터, 유전학적 분석등의 바이오인포메틱스를 가공하기 위한 분자생물학적 기술, 및 제3세대 항암제 및 종양 치료법의 개발 등을 위한 면역종양학적 기술을 보유하기 위한 부설 연구소를 설립할 수도 있다.
본 발명의 말초 혈액세포 또는 조혈모세포 제공 시스템에 있어서, 혈액세포 저축은행은 필요시 정상인에 G-CSF를 투여하여 말초혈액내로 건강한 조혈모세포를 가동화 시킨 후에 채혈할 수도 있으며, 또한 필요시 채집된 말초 조혈모 세포 중 희귀한 특정세포만을 증폭하여 분화시키는 방식을 통해 다량의 세포를 확보할 수도 있다.
본 발명의 말초 혈액세포 또는 조혈모세포 제공 시스템에 있어서, 혈액세포 저축은행 또는 그 부설 연구소는 채집된 세포중의 일부(전체의 1% 미만)를 면역학, DNA 칩 등을 이용한 분자유전학적인 분석을 통하여 종양발생가능성 및 고객의 혈청학적인 데이터를 수집, 분석하여 고객의 바이오인포메틱스를 제작, 관리할 수도 있으며, 이렇게 제작된 고객의 바이오인포메틱스는 고객이 의료기관을 통하여 종양의 진단을 받았을 경우, 채집한 고객의 면역세포 또는 조혈모세포의 일부 또는 전부와 함께 의료기관에 제공될 수도 있다.
도 4에서 도시된 바와 같이, 본 발명의 말초 혈액세포 또는 조혈모세포 제공 시스템은 정상인 고객(1), 혈액세포저축은행(2), 및 의료기관(3)으로 구성되며, 임의로 부설 연구소(4)를 더 포함할 수 있다. 본 발명의 일 태양에서 정상인 고객(1)은 혈액세포저축은행(2)과 조혈모세포의 장기간유지보증계약을 맺으며, 혈액세포저축은행(2)은 정상인 고객(1)으로부터 말초 혈액세포 또는 조혈모세포를 채집하고, 가공하여 면역세포를 추출, 분리하여 장기간 냉동보관하고, 고객의 바이오인포메틱스를 제작, 관리하며, 임의로 부설 연구소(4)에서는 혈액세포저축은행(2)의 협조요청에 의해 고객의 유전질환을 DNA chip등을 이용하여 조기진단하며, 정상인 고객(1)이 의료기관(3)에 내원하여 면역결핍 진단을 받은 경우 의료기관(3)은 혈액세포저축은행(2)으로부터 조혈모세포 및 바이오인포메틱스를 제공받아 정상인 고객(1)에 자가골수이식 또는 유전자치료를 시행한다.
이하, 본 발명의 면역력 회복방법을 단계별로 나누어 상세히 설명한다.
1) 말초 면역 세포 또는 조혈모세포의 채집
말초 면역세포 또는 조혈모세포의 채집은 종래에 알려진 일반적인 성분 채집술을 통하여 비교적 용이하게 수집할 수 있다. 국내에서 흔히 이용되는 성분채집기종으로는 Fenwal CS-3000(Baxter Healthcare Corporation, Deerfield, IL), COBE Spectra(COBE Laboratories, Lakewood, CO), Haemonetics Model V50(Haemonetics Corporation, Braintree, MA) 등이 있는데, 세 기기 모두 채집효율이 우수하나, 다만 자동화 정도와 채집된 백혈구 성분에 차이가 있는 것으로 보고되고 있다.
조혈모세포의 채집을 위하여 최근에는 총 혈액량의 3-5배 이상 또는 15L 이상을 처리하는 대용량 백혈구성분 채집을 통하여 1-3회의 적은 횟수의 성분채집을통하여 이식에 필요한 충분한 양의 조혈모세포를 얻을 수 있다. 그러나 골수기능이 정상인인 경우 성분채집을 더욱 용이하게 시행할 수 있으며 가동화 방법이 정립되는 경우 외래방문으로 1-2회로 충분한 조혈모세포를 얻을 수 있다.
1회의 성분채집에 걸리는 시간은 혈액 처리량과 혈류에 따라 2-4시간이 걸리는데, 성인의 경우 채집시간이 연장되더라도 말초혈액의 조혈모세포수가 감소하지 않으며 오히려 채집시간이 길수록 채집효율이 좋아졌다는 보고가 있다. 이식에 필요한 충분한 CFU-GM수는 20-50 10exp4/kg 정도로 알려졌으나 배양법(clonogenic assay)은 배양에 걸리는 시간이 2주일이나 되고 재현성이 떨어지며 표준화된 방법이 없어 객관적이지 못한 단점이 있다.
또한 가동화된 말초 조혈모세포의 경우 CD34-양성세포 2.5 x 10exp6/kg 정도이면 중성구와 혈소판의 생착이 2주 이내에 이루어진다고 보고된 바 있다.
성분 채집된 조혈모세포의 용량은 약 50-100 mL 되며 이보다 용량이 많은 경우에는 원심분리를 하여 상층액을 제거함으로써 쉽게 부피를 줄일 수 있는데 세포농도가 2-4 10exp7/mL 이상이 되지 않도록 주의하는 것이 좋으며, CD34양성세포만을 분리하면 더욱 효과적으로 용량을 줄일 수 있다.
2) 말초 면역세포 또는 조혈모세포의 보관
말초 면역세포 또는 조혈모 세포의 보관은 일반적인 인간 세포의 냉동보관방법에 의하여 수행한다(Du Bois, M. J., Schellekens, P. T., De Wit, J. J. and V. P. Eijsvoogel.Scand. J. Immunol.Suppl 5:17 (1976); Glassman, A. B. and C.E. Bennett.Transfusion19:178(1979); Ichino, Y. and T. Ishikawa.J. Immunol. Methods77:283(1985); Stopford, C. R., MacQueen, J. M., Amos, D. B. and F. E. Ward.Tissue Antigens2:20(1972)). 예컨대, 적정농도의 세포수가 되도록 자가혈장(20%)와 배양액(RPMI-1640)으로 조절하면서 냉동 보존제인 DMSO(dimethyl surfoxide, Sigma Chemical Inc., St. Louis, MO, USA)를 최종농도 10%가 되도록 섞는다. 냉동 보존제와 섞인 조혈모세포는 제어율 냉장고(controlled rate refrigerate)에 의해 냉동되며 이를 각각 알루미늄 용기에 넣어 -160℃ 이하의 액체질소가스에 넣어 보관한다. 이렇게 냉동 보관된 조혈모세포는 5년 이상까지 정상적인 기능을 유지하며 보관될 수 있다.
3) 말초 면역세포 또는 조혈모세포의 이식
말초 면역세포 또는 조혈모 세포의 이식은 냉동 보관된 조혈모세포를 해동하는 단계가 추가되는 것을 제외하고는 일반적인 조혈모세포 이식방법에 따라 수행한다(Goldman, J. M., D. Catovsky, J. Hows, A. S. Spiers, and D. A. Galton.,Br Med J1:1310(1979); Kessinger, A., and J. O. Armitage.,Int. J. Cell. Cloning10 (Suppl. 1):127(1992)). 조혈모세포 이식은 1970년대 후반 만성 골수성 백혈병에서의 첫 성공이후, 1990년대에 이르러서는 백혈병, 림프종, 다발성골수종, 유방암, 소세포성폐암, 난소암, 신경모세포암 등의 암이나 혈액질환을 가진 환자들의 일부에서 효과가 인정되며 경우에 따라서는 최선의 치료방법으로 간주되고 있다.
국내에서는 급성, 만성 골수성 백혈병, 림프종, 유방암, 위암 환자를 대상으로 말초조혈모세포이식술이 시행되고 있으며, 혈연 및 비혈연간 골수 이식의 한 형태로서 동종말초조혈모세포 이식술도 시행되고 있다. 즉 이는 환자와 동일한 HLA 면역계를 가진 건강한 형제나 부모, 자식간에 골수 이식을 위해 이 모델과 동일한 방법으로 말초혈액내로 G-CSF로 가동화 시킨 후 채집하여 환자에게 말초조혈모세포 이식을 하는 것으로서 국내외적으로 건강인에서의 G-CSF에 의한 말초 조혈모세포 가동화는 직접적인 공여자의 건강에 무해한 것으로 인정되고 있는 방법이다.
본 발명의 말초 면역 세포의 이식은 자가이식(수혈) 방식에 근거하며, 본 발명에서 제시하는 시도는 이전에 시행된 바 없다. 그러나, 면역결핍 증상이 있는 환자에게 한시적으로 혈액의 면역력 상승 기회를 제공할 뿐만 아니라, 그 중에 포함되어 있는 미량의 조혈모세포를 가동할 수 있는 기회를 제공하고 또한 현재 진행 중에 있는 질환에 반응할 수 있는 면역능력을 제공할 수 있는 가능성을 보유한다. 이들 면역세포들은 자가의 혈액에서 추출하였기 때문에 예상되는 부작용은 없다.
4) 자가혈액 냉동보관
본인이 건강할 때 1주간격이나 4주 간격으로 약 3회에 걸쳐 헌혈의 방식으로 혈액을 자가혈액저축은행에 예치하는 것으로서, 자가혈액저축은행에서는 채집된 혈액을 원심분리하여 적혈구 성분에 대해서만 glycerol을 이용하여 냉동보관한다. 의뢰인이 수술을 받거나 사고 등으로 혈액을 보충해야할 일이 발생하였을 때 건강할 때 냉동보관하여 둔 본인의 혈액으로 수혈을 받는 것으로서 타인의 혈액으로 수혈받을 때 우려되는 감염의 문제나 면역저하 등의 문제를 극복할 수 있다.
(실시예)
이하 실시예에 의해 본 발명을 상세히 설명하지만, 이에 의해 본 발명이 제한되는 것으로 해석되지는 않는다.
(실시예1)
: 말초 조혈모세포의 채집 및 보관
말초 조혈모세포는 Fenwal CS-3000(Baxter Healthcare Corporation, Deerfield, IL) 및 COBE Spectra(COBE Laboratories, Lakewood, CO)를 이용하여 성분 채집술을 통하여수집하였다. 이를 위해 건강한 헌혈자에 과립구-콜로니 자극 인자 (granulocyte colony stimulating factor:G-CSF)를 5-10 μg/kg/day 씩 투여하고 4-6일째에 전형적으로 말초혈액의 조혈모세포수가 최고치에 도달하도록 유도한 다음 말초 혈액을 채취하였다.
채집된 혈액을 행크스식염수(HBSS, Hank's balanced salt solution)으로 2-4배 희석한 다음 피콜-하이페크(비중 1.077g/ml; Pharmacia, Uppsala)에 중첩시켜 실온에서 400 g 로 30분간 원침하였다. 피콜-하이페크와 혈장 사이의 세포층을 채취하고, 2회 행크스 용액을 이용하여 반복 세척하였다. 세포의 총 수를 산출한 다음 DMSO(10%)와 자가혈장(20%)을 첨가하여 ml 당 유핵세포 1 x 10exp7 정도의 농도로 보정하고 제어율 냉장고(controlled rate refrigerate)에 의해 냉동한 직후 이를 각각 알루미늄 용기에 넣어 -160℃ 이하의 액체질소가스에 넣어 보관하였다.
(실시예2)
: 장기 냉동 보존된 말초혈액 세포의 안정성 분석
장기 보존된 말초 혈액 세포의 안정성을 분석하기 위하여, 장기 보존(10-50주)된 말초 혈액세포와 신선한 말초혈액 세포들 간의 성상 차이를 비교하였다. 상기 방식으로 채집하여 10-50주 동안 냉동보관된 말초혈액 세포(frozen)를 37℃ 항온 수조에서 급격히 해동시킨 다음 1회 세척하였다. 말초 혈액 중의 조혈모세포의 순수 분리를 위해, 제조사의 권장방법에 따라 유핵세포 10exp8 당 100 μl의 블로킹 항체(blocking antibody)와 100 μl의 초미세금속이 부착된 항 사람의 CD34에 대한 단일클론 항체(Miltenyi Biotec GmbH, Bergisch Glabach, Germany)로 30 분간 4℃에서 염색하였다. 염색 직후 세포를 1회 원심분리-세척하고 다시 300-500 μl의 생리완충액에 부유시킨 다음 이를 전 분리필터(Pre-separation filter, Miltenyi Biotec)에 통과 시켜 세포잔해를 제거하였다. 통과된 세포들을 자기장의 적용을 받는 소형 MACS 컬럼 (MS 형, miniMACS, Miltenyi Biotec)에 주입하였다. 세포의 통과와 함께 적정량의 5 mM EDTA(Sigma)를 함유하는 MACS 세척용액 (PBS)를 컬럼에 주입하였다. 통과된 세포(CD34-음성)들은 제거하고 컬럼에 남은 세포를 자기장으로부터 컬럼을 제거한 후 피스톨로 회수한 다음 이를 다시 자기장의 적용을 받는 새로운 컬럼에 주입하여 자기장에 의해 고정된 세포 (CD34-양성) 세포만을 순수하게 분리하였다. 분리된 세포는 백서에서 유래한 항 사람CD34 단일클론항체(Becton Dickinson, San Jose, CA, USA)로 염색한 후 유세포 분석기를통해 분석한 결과 전형적으로 70-95% CD34-양성 세포 순수도를 확인하였다. 비교를 위해 실험 당일 또는 24시간 이내에 채집한 혈액(fresh)에서 상기와 동일한 방식으로 CD34-양성 세포를 순수 분리하였다.
도 1 a 은 4회의 반복 실험을 통하여 장기 냉동 보존된 말초 혈액세포(frozen)와 신선한 말초혈액(fresh)으로부터 회수한 총 유핵세포의 수 및 유핵세포들 중에서 CD34 항체를 이용하여 회수된 조혈모세포 집단의 수를 비교 분석하였으며, 그 결과는 두 군(frozen과 fresh)사이에는 통계적으로 유의한(significant) 차이를 보이지 않았다.
도 1 b 는 4회의 반복 실험을 통하여 장기 냉동 보존된 말초 혈액세포(frozen)와 신선한 말초혈액(fresh)으로부터 CD34 항체를 이용하여 순수 분리한 조혈모세포 집단 중의 CD34-양성 세포의 비율을 비교 분석하였으며, 그 결과는 두 군(frozen과 fresh)사이에는 통계적으로 유의한(significant) 차이를 보이지 않았다.
따라서, 본 발명에서 사용하는 냉동 보존 방식이 장기 보관에 따라 제품(혈액 세포) 의 변성이나 변질을 가져오지 않으며, 오랜 기간동안 그 성상을 유지함을 의미한다.
(실시예 3)
: 장기 냉동 보존된 말초 혈액 중 조혈모세포의 안정성 분석
장기 냉동 보존된 말초 혈액 중 조혈모 세포의 안정성을 분석하기 위하여,상기한 방식으로 냉동 보존된 말초혈액 세포(frozen)와 신선한 말초 혈액세포(fresh)로부터 순수 분리한 조혈모세포를 단기 배양하여 조혈재건 기능을 비교 분석하였다. 순수 분리한 조혈모세포를 조혈모세포 성장인자인 flt-3 ligand (10 ng/ml), thrombopoietin (10 ng/ml) 및 stem cell factor (10 ng/ml)을 함유하는 IMDM 배지에서 12일간 배양한후 증폭된 세포의 수를 편광 현미경을 이용하여 측정하였다. 도2에서 보여지듯이, 3회 반복 실험 결과, 두 군(frozen과 fresh)사이에는 통계적으로 유의한 차이를 보이지 않음으로서, 장기 냉동 보존 방식으로 유지하였던 말초 혈액 세포 중 조혈모세포들이 안정한 상태로 유지될 수 있음을 입증하였다.
(실시예 4)
: 장기 냉동 보존된 혈액세포의 면역능력 분석
장기 냉동 보존된 혈액세포의 면역능력을 분석하기 위하여, 상기 방식으로 채집한 냉동 보존된 면역세포 또는 신선한 면역 세포들로부터 강력한 면역반응을 유도하는 수상돌기 세포로의 분화를 유도한 다음 이들에 의한 allogeneic 면역세포들의 반응을 mixed leukocyte reaction(MLR)로 분석하였다. 분리된 면역세포들 중 플라스틱 표면의 흡착성이 있는 대식세포를 배양용 디시(culture dish)에 60 분간 배양한 후 비 부착성 세포들을 분리해 낸 다음 대식세포를 과립구/대식세포-콜로니 자극 인자 (granulocyte/macrophage colony stimulating factor: GM-CSF, 600 unit/ml, Pharmingen, San Diego, CA, USA) 및 인터류킨 4 (interleukin-4: IL-4,100 unit/ml, Pharmingen)와 10% 우혈청, 100 unit/ml의 페니실린, 100 μg/ml의 스트렙토마이신 및 2 mM L-글루타민(Life Technologies, Grand Island, NY)이 포함된 RPMI-1640(Life Technologies)에서 3일간격 2회 반복 배양하였다. 배양 6일째 부유세포만을 수집한 다음 과립구/대식세포-콜로니 자극 인자 (600 unit/ml) 및 인터류킨 4 (100 unit/ml) 및 100 ng/ml의 CD40 리간드 (recombinant CD40Ligand; Chemicon, Temecular, CA, USA)가 포함된 RPMI-1640 배지에서 3일간 추가 배양한 다음 부유세포만을 회수하고 2회 반복 세척하였다. 채집된 세포군들은 현미경하에서 수상돌기세포(dendritic cell)들의 특성인 돌기의 형상을 보였으며, 유세포 분석을 통해 CD1a, CD83, CD40, CD80, CD86, CD11c 및 HLA-DR을 발현하는 수상돌기세포임을 확인하였다. 이들을 자극원(stimulator)으로 사용하기 위해 ??-선 조사기에서 3000Rad에 조사한 후 고정된 수의 allogeneic 말초혈액 단핵구를 반응군(responder)으로 하여 5일간 96 웰 마이크로 타이터 플레이트에서 공동 배양한 다음 16 시간동안 0.5 μCi의 3H-thymidine을 첨가하여 DNA 합성을 방사선 잔류량으로 측정하였다. 도 3에서, 개방된 원형(??)은 신선한 면역세포에서 출발한 수상돌기세포에 의한 반응군의 증식을, 검정색 원형(??)은 장기 냉동 보존된 면역세포에서 출발한 수상돌기세포에 의한 반응군의 증식을 나타내며, 두 군(frozen과 fresh)사이에는 면역능력에 있어 유의한(significant) 차이를 보이지 않았다.
본 발명에 따르면, 정상인이 건강을 유지하고 있는 상태에서 면역세포를 채집하여 장기간 냉동 보관하였다가, 노년기 등 본인이 면역세포이식이 필요한 질환을 앓게되는 경우에 자가 혈액 이식 또는 수혈(autologous transplantation or transfusion)의 과정을 통해, 암세포가 오염(contamination) 또는 혼입되어 있지 않은 건강한 상태의 혈액세포를 이식할 수 있게 됨으로써, 안전하고 효과적으로 면역력을 회복할 수 있는 근거를 마련할 수 있다.
또한, 본 발명에 따르면, 암세포가 전혀 오염(contamination) 또는 혼입되어 있지 않은 건강인의 혈액을 이식할 수 있으므로, 이미 암세포가 골수에 침범된 진행된 암 환자에서는 암세포 정화를 위해 CD34+ purging을 하는 경우 T 세포의 GVL(graft versus leukemic) effect를 기대할 수 없는 것과 달리, T cell의 기능을 기대할 수 있는 장점이 있으며, 또한, 자기혈액을 이식하므로 immunomodulation 측면에서도 자기와 100% 같은 면역체계로서 적응증이 되는 암 발생 후 이식할 수 있는 가장 좋은 조혈모세포의 source가 될 수 있다.
또한, 본 발명에 따르면, 정상인으로부터 건강할 때 말초 혈액세포 또는 조혈모세포를 채집하여 장기간 안정하게 냉동 관하였다가 본인에 면역결핍증후가 나타나는 시기에 자가 조혈모 세포 이식을 시행하기 위한 의료기관의 요구에 따라 보관된 말초 혈액세포 또는 조혈모 세포를 분양해 주는 새로운 혈액세포저축은행 및 이를 통한 효과적인 조혈모 세포 제공 시스템을 제공할 수 있다.
Claims (16)
- 정상인으로부터 건강할 때 말초 혈액세포 또는 조혈모세포를 채집하는 단계, 채집된 말초 혈액세포 또는 조혈모 세포를 일정 기간 냉동 보관하는 단계, 및 본인에 수혈이나 면역세포이식이 필요한 질병이 발병 시 이를 사용하여 자가 혈액세포 또는 조혈모세포 이식을 시행하는 단계를 포함하는 면역력 회복 방법.
- 제1항에 있어서, 말초 혈액세포 또는 조혈모세포는 분리된 적혈구, 단핵구, T 림프구 또는 CD34-양성 조혈모세포임을 특징으로 하는 면역력 회복 방법.
- 제1항에 있어서, 필요시 정상인에 G-CSF를 투여하여 말초혈액내로 건강한 조혈모세포를 가동화시킨후에 채혈하는 것을 특징으로 하는 면역력 회복 방법.
- 제1항에 있어서, 냉동 보관은 -160℃ 이하의 액체 질소 용기에서 5년 이상 보관함을 특징으로 하는 면역력 회복 방법.
- 제1항에 있어서, 수혈은 혈액보충이 필요한 질병이 발생하였을 때, 면역세포이식이 필요한 질병은 보관이후 또는 노년기에 발생하는 림프종, 급성 및 만성 골수성 백혈병, 급성 및 만성 림프구성 백혈병, 다발성골수종과 같은 모든 혈액종양, 난소암, 유방암, 폐암 등에 대한 고용량 항암치료 후 발생되는 골수 기능 저하증, 및 세균성 질환, 바이러스 감염, 혈액 장애 등과 같은 각종 면역 결핍 질환을 포함함을 특징으로 하는 면역력 회복 방법.
- 정상인으로부터 건강할 때 말초 혈액세포 또는 조혈모세포를 채집하여 이를일정기간 냉동 보관하였다가 본인에 수혈이나 면역결핍증후가 나타나는 시기에 자가 조혈모 세포 이식을 시행하기 위한 의료기간의 요구가 따라 보관된 말초 혈액세포 또는 조혈모 세포를 분양해 주는 자가혈액세포 저축은행.
- 제6항에 있어서, 냉동 보관은 -160 ℃ 이하의 액체 질소 용기에서 5년 이상 보관함을 특징으로 하는 혈액세포 저축은행.
- 제6항에 있어서, 필요시 채집된 말초 조혈모세포 중 CFU-GM 및 CD34 양성 세포와 같은 희귀한 특정세포만을 증폭하여 분화시키는 방식을 통해 다량의 세포를 확보하는 것을 특징으로 하는 혈액세포 저축은행.
- 제6항에 있어서, 채집된 혈액세포중의 일부(전체의 1% 미만)를 면역학, DNA 칩 등을 이용한 분자유전학적인 분석을 통하여 종양발생가능성 및 고객의 혈청학적인 데이터를 수집, 분석하여 고객의 바이오인포메틱스를 제작, 관리하는 것을 특징으로 하는 혈액세포 저축은행.
- 제6항에 있어서, 고객이 의료기관을 통하여 종양의 진단을 받았을 경우, 그 의료기간에 고객의 건강상태일때의 면역세포 또는 조혈모세포의 일부 또는 전부와 함께 부설 연구소가 작성한 고객의 바이오인포메틱스를 제공하는 것을 특징으로 하는 혈액세포 저축은행.
- 혈액세포저축은행을 통한 말초 혈액세포 또는 조혈모세포 제공 시스템에 있어서, 상기 혈액세포 저축은행과 혈액세포 보관계약을 맺는 정상인 고객과, 상기 정상인으로부터 말초 혈액세포 또는 조혈모세포를 채집하여 이를 일정기간 냉동 보관하는 혈액세포 저축은행과, 상기 혈액세포 저축은행으로부터 혈액 조혈모 세포를 분양받아 상기 정상인에 자가 골수이식을 시행하는 의료기간이 원격 통신 네트웍을 통하여 상호 연결되어 구성된 것을 특징으로 하는 말초 혈액세포 또는 조혈모 세포 제공 시스템.
- 제11항에 있어서, 혈액세포 저축은행은 세포의 채집, 순수분리, 분화 유도 등의 분자세포학적 기술, DNA 칩, 자동 서열결정기, 실시간 PCR 등을 이용하여 고객의 종양발생가능성, 혈청학적 데이터, 유전학적 분석 등의 바이오인포메틱스를 가공하기 위한 분자생물학적 기술, 및 제3세대 항암제 및 종양 치료법의 개발 등을 위한 면역종양학적 기술을 보유하기 위한 부설 연구소를 설립하는 것을 특징으로 하는 말초 혈액세포 또는 조혈모 세포 제공 시스템.
- 제11항 또는 제12항에 있어서, 혈액세포 저축은행은 필요시 정상인에 G-CSF를 투여하여 말초혈액내로 건강한 조혈모세포를 가동화시킨후에 채혈하는 것을 특징으로 하는 말초 혈액세포 또는 조혈모 세포 제공 시스템.
- 제11항 또는 제12항에 있어서, 혈액세포 저축은행은 필요시 채집된 말초 조혈모세포 중 CFU-GM 및 CD34 양성 세포와 같은 희귀한 특정세포만을 증폭하여 분화시키는 방식을 통해 다량의 세포를 확보하는 것을 특징으로 하는 말초 혈액세포 또는 조혈모 세포 제공 시스템.
- 제11항 또는 제12항에 있어서, 혈액 조혈모 세포 저축 은행 또는 그 부설 연구소는 채집된 세포중의 일부(전체의 1% 미만)를 면역학, DNA 칩 등을 이용한 분자유전학적인 분석을 통하여 종양발생가능성 및 고객의 혈청학적인 데이터를 수집, 분석하여 고객의 바이오인포메틱스를 제작, 관리하는 것을 특징으로 하는 말초 혈액세포 또는 조혈모 세포 제공 시스템.
- 제11항과 제12항에 있어서, 고객이 의료기관을 통하여 종양의 진단을 받았을 경우, 그 의료기간에 고객의 건강상태일때의 면역세포 또는 조혈모세포의 일부 또는 전부와 함께 부설 연구소가 작성한 고객의 바이오인포메틱스를 제공하는 것을 특징으로 하는 말초 혈액세포 또는 조혈모 세포 제공 시스템.
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020000030590A KR20010109872A (ko) | 2000-06-03 | 2000-06-03 | 장기 보관된 말초 혈액세포 또는 조혈모세포의 자가이식을 통한 면역력 회복 방법과 혈액세포 저축은행을통한 말초 혈액세포 또는 조혈모세포 제공 시스템 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020000030590A KR20010109872A (ko) | 2000-06-03 | 2000-06-03 | 장기 보관된 말초 혈액세포 또는 조혈모세포의 자가이식을 통한 면역력 회복 방법과 혈액세포 저축은행을통한 말초 혈액세포 또는 조혈모세포 제공 시스템 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| KR20010109872A true KR20010109872A (ko) | 2001-12-12 |
Family
ID=45927017
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| KR1020000030590A Withdrawn KR20010109872A (ko) | 2000-06-03 | 2000-06-03 | 장기 보관된 말초 혈액세포 또는 조혈모세포의 자가이식을 통한 면역력 회복 방법과 혈액세포 저축은행을통한 말초 혈액세포 또는 조혈모세포 제공 시스템 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR20010109872A (ko) |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100569609B1 (ko) * | 2004-07-20 | 2006-05-02 | (주)이노셀 | 세포면역치료제의 제조를 위한 림프구 장기 보관 방법 |
| KR101295803B1 (ko) * | 2009-03-31 | 2013-08-12 | (주)차바이오앤디오스텍 | 인터넷을 통한 줄기세포은행 운용 시스템 및 운용 방법 |
-
2000
- 2000-06-03 KR KR1020000030590A patent/KR20010109872A/ko not_active Withdrawn
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100569609B1 (ko) * | 2004-07-20 | 2006-05-02 | (주)이노셀 | 세포면역치료제의 제조를 위한 림프구 장기 보관 방법 |
| KR101295803B1 (ko) * | 2009-03-31 | 2013-08-12 | (주)차바이오앤디오스텍 | 인터넷을 통한 줄기세포은행 운용 시스템 및 운용 방법 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5866115A (en) | Process for preparing dendritic cells, cells thus produced and containers for carrying out this process | |
| US8075921B2 (en) | Rapamycin-resistant T cells and therapeutic uses thereof | |
| Motta et al. | Generation of dendritic cells from CD14+ monocytes positively selected by immunomagnetic adsorption for multiple myeloma patients enrolled in a clinical trial of anti‐idiotype vaccination | |
| US20070148772A1 (en) | Leukocyte cell banks | |
| US20030194395A1 (en) | Th1 cell adoptive immunotherapy | |
| KR100363587B1 (ko) | 대식세포와 종양세포의 융합에 의한 항종양 세포성 치료제 | |
| Rondelli et al. | Rapid induction of CD40 on a subset of granulocyte colony-stimulating factor–mobilized CD34+ blood cells identifies myeloid committed progenitors and permits selection of nonimmunogenic CD40− progenitor cells | |
| Glaser et al. | Collection of MNCs with two cell separators for adoptive immunotherapy in patients with stage IV melanoma | |
| KR20010109872A (ko) | 장기 보관된 말초 혈액세포 또는 조혈모세포의 자가이식을 통한 면역력 회복 방법과 혈액세포 저축은행을통한 말초 혈액세포 또는 조혈모세포 제공 시스템 | |
| Ageitos et al. | Restoration of T and NK cell function in GM-CSF mobilized stem cell products from breast cancer patients by monocyte depletion | |
| Bracho et al. | A comparison of ex vivo expanded DCs derived from cord blood and mobilized adult peripheral blood plastic-adherent mononuclear cells: decreased alloreactivity of cord blood DCs | |
| WO2001070243A2 (en) | A method for treating early breast cancer | |
| CA2529244C (en) | Rapamycin resistant t cells and therapeutic uses thereof | |
| WO2001088099A1 (en) | Cells, culture methods and their uses | |
| US20030129166A1 (en) | Human circulating dendritic cell compositions and methods | |
| EP3943932A1 (en) | Method for providing immune cells | |
| JP4106488B2 (ja) | 同種移植片に対する免疫寛容の誘導および／または白血病処置のための、幹細胞およびｃｄ６枯渇幹細胞の使用 | |
| Ebrahimi et al. | Immediate Exposure to TNF-α Activates Dendritic Cells Derived from Non-Purified Cord Blood Mononuclear Cells | |
| KR20010046514A (ko) | 인간의 대식세포로부터 수상돌기 세포 추출 및 분화 유도 | |
| Areman et al. | Differential effects of IL-2 incubation on hematopoietic potential of autologous bone marrow and mobilized PBSC from patients with hematologic malignancies | |
| Shpall et al. | Peripheral blood stem cell harvesting and CD34-positive cell selection | |
| Gulati et al. | Marrow Contamination: Pharmacological Treatment | |
| EP1795589A1 (en) | Method for the direct culture of dendritic cells without a preceding centrifugation step | |
| KR20210067776A (ko) | 냉동 및 해동 과정을 포함하는 자연살해세포의 대량생산방법 | |
| Barrow et al. | CMRF44+ dendritic cells from peripheral blood stem cell harvests of patients with myeloma as potential cellular vectors for idiotype vaccination |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PA0109 | Patent application |
Patent event code: PA01091R01D Comment text: Patent Application Patent event date: 20000603 |
|
| PG1501 | Laying open of application | ||
| PC1203 | Withdrawal of no request for examination | ||
| WITN | Application deemed withdrawn, e.g. because no request for examination was filed or no examination fee was paid |