KR20010102545A - 저분자량 헤파린과 혈소판 응집 저해제간의 상승 효과를이용하여 다양한 혈전색전성 장애를 예방 및 치료하기위한 병용요법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 틴자파린과 같은 저분자량 헤파린과 록시피반과 같은 혈소판 GPIIb/IIIa 길항제를 투여함을 포함하는, 혈전색전성 장애를 치료, 예방 및 감소시키기 위한 병용요법에 관한 것이다.

Description

저분자량 헤파린과 혈소판 응집 저해제간의 상승 효과를 이용하여 다양한 혈전색전성 장애를 예방 및 치료하기 위한 병용요법{Synergy Between Low Molecular Weight Heparin and Platelet Aggregation Inhibitors, Providing a Combination Therapy for The Prevention and Treatment of Various Thromboembolic Disorders}

관련 출원에 대한 교차-참조

본 출원은 1999년 3월 11일에 출원된 미국 가출원 제 60/123,820 호의 이점을 청구한다.

안정형 및 불안정형 협심증, 심근경색증, 뇌졸증 및 폐색전증을 포함하는 혈전색전성 질환은 대부분의 선진국에서 신체장애 및 사망의 주요 원인이다. 혈소판 당단백질 IIb/IIIa(GPIIb/IIIa)은 피브리노겐 및 기타 접착 당단백질, 예를 들면 피브로넥틴, 비트로넥틴 및 폰 빌레브랜(von Willebrand) 인자에 대한 주요 혈소판 수용체이다. 이러한 수용체와 리간드의 결합을 방해하는 것이 혈전색전성 장애의동물 모델(콜러 비 에스(Coller,B.S.)의 문헌[GPIIb/IIIa Antagonists: Pathophysiologic and Therapeutic Insights from Studies of C7E3 FAB. Thromb. Haemost. 78:1, 730-735, 1997]을 참조), 및 인간을 대상으로 하는 제한된 연구(와이트, 에이치 디(White,H.D.)의 문헌[Unmet Therapeutic Needs in the Management of Acute Ixchemia. Am.J.Cardiol. 80:4A, 2B-10B, 1997]; 청, 제이 이(Tcheng,J.E.)의 문헌[Glycoprotein IIb/IIIa Receptor Inhibitors: Putting EPIC, IMPACT II, RESTORE, and EPILOG Trials Into Perspective. Am.J.Cardiol.78:3A, 35-40, 1996]을 참조)에서 이로운 것으로 밝혀졌다.

혈소판 피브리노겐 수용체라고도 불리는 인테그린 GPIIb/IIIa는 혈소판 응집을 매개하는 막 단백질이다. 활성화된 혈소판내의 GPIIb/IIIa는 접착 단백질을 함유하는 4가지의 가용성 RGD, 즉 피브리노겐, 폰 빌레브랜드 인자, 피브로넥틴 및 비트로넥틴과 결합하는 것으로 알려져 있다. "RGD"라는 용어는 아미노산 서열 Arg-Gly-Asp를 말한다. 피브리노겐과 폰 빌레브랜드 인자가 GPIIb/IIIa와 결합하면 혈소판이 응집한다. GPIIb/IIIa 길항제는 혈전색전성 장애를 치료하기 위한 항혈소판 요법에 새롭고 중요한 방안을 제시한다.

혈소판 활성화 및 응집은 불안정성 협심증 및 급성 심근경색증, 혈전용해요법 및 혈관성형술 후의 재폐색, 일과성 허혈성 발작, 및 기타 다양한 혈관폐색장애에 관여한다. 혈관이 혈관성형술과 같이 갑작스런 개재(intervention)에 의해 손상되거나, 죽상동맥경화증의 병태생리학적 과정에 의해 보다 만성적으로 손상되면, 혈소판은 활성화되어 손상된 표면에 접착되거나 혈소판끼리 접착된다. 이러한 활성화, 접착 및 응집은 혈관내에 폐색성 혈전 형성을 야기시킬 수 있다. 피브리노겐이 활성화된 막-결합된 당단백질 착체(GPIIb/IIIa)에 결합하는 것이 정상적인 응집의 필수 요건이기 때문에, GPIIb/IIIa은 항혈전제에 있어서 매력적인 목표물이다.

항혈소판 요법은 다양한 심혈관 질환에서, 관상 동맥 또는 말초 회로조성술, 심장판막 복위(cardiac valve replacement) 및 경피적 경혈관 관상동맥 성형술(percutaneous transluminal coronary angioplasty(PTCA))과 같은 개재 치료술과 함께 사용되어 왔다. 아스피린 및 티클로피딘(ticlopidine)(TICLID, 등록상표)과 같은 시판 약물은 혈관 폐색을 포함하는 증후군에서 효능을 나타내는데, 이것은 아마도 혈소판 기능을 지속적으로 저해하기 때문인 것으로 생각된다. 그러나, 아스피린과 티클로피딘의 저해 효과는 혈소판을 활성화시키는 작용물질에 의존한다. 예를 들면, 아스피린은 사이클로옥시게나제 경로에 의존하는 콜라겐과 같은 작용물질에 의해 유도되는 혈소판 응집을 방해하는데 효과적이다. 그러나, 사이클로옥시게나제와는 독립적으로 일어나는 경로로 작용할 수 있는 트롬빈이 집중된 경우에는 덜 효과적이다. 이와 유사하게, ADP-유도된 혈소판 응집을 저해하는 티클로피딘의 저해 효과는 작용물질의 조합에 의해 극복될 수 있다.

혈액 응고에 대한 헤파린의 효과는 항응고제 및 항혈전제로서 임상적으로 연구되어 왔다. 헤파린은 글리코사미노글리칸(GAG)으로서 알려진 다당류에 속하며, 서로 교대하는 1-4-결합된 헥사우론산과 D-글루코사민으로 이루어져 있다. 헥사우론산과 글루코사민 잔기 둘다 복잡한 양식으로 황산화되어 그 구조가 매우 다양하게 변한다. 헤파린은 높은 음전하 밀도를 갖기 때문에 수많은 단백질 및 세포막상의 염기성 아미노산들, 예를 들면 응고 프로테이나제, 세린 프로테아제 저해제, 성장 인자, 지단백질 및 간 리파제, 아포리포단백질 B 및 E, 접착 기질 단백질, 혈소판 및 내피세포와 상호작용할 수 있다.

표준 미분획 헤파린(unfractionated heparin: UFH)으로부터 얻어진 저분자량 헤파린(low molecular weight heparin: LMWH)은 정맥 혈전색전증의 예방 및 치료에 있어서 표준 미분획 헤파린만큼 효과적이며 부작용은 더 적다(샤퍼 에이 아이(Schafer A.I.)의 문헌[Low molecular-weight heparin for venous thromboembolism. Hospital Practice, January 15, 1997, pp.99-106]을 참조). 현재 사용가능한 저분자량 헤파린에는 예를 들면 틴자파린, 세르토파린(certoparin), 파르나파린(parnaparin), 나드로파린(nadroparin), 아르데파린(ardeparin), 에녹사파린(enoxaparin), 레비파린(reviparin) 및 달테파린(dalteparin) (프라그민(fragmin))이 포함된다.

GPIIb/IIIa 길항제를 아스피린 또는 저분자량 헤파린과 함께 투여함을 포함하는 병용요법은 죽상동맥경화성 동맥 질환, 판막성 심질환, 뇌혈관 질환, 예를 들면 뇌졸증, 심방세동, 관상동맥 질환, 예를 들면 심근경색증 및 불안정형 협심증, 관상동맥 회로조성술, 말초혈관 질환, 심장판막 및 혈관이식편과 같은 인공 심혈관 장치의 혈전색전성 합병증을 포함하는 혈전성 장애의 치료에 유용하다. 이러한 병용요법은, 경피적 경혈관 관상동맥 성형술과 같은 혈관내 스텐트 삽입술이 병행될 때, 시술후 동맥에 혈전이 생성되고 동맥이 재폐색되는 것을 방지하는데에 유용할것으로 기대된다.

병용요법을 계획할 경우, 다음과 같은 많은 조건을 고려해야 한다. 즉 (a) 각 약제는 다양한 혈전색전성 장애에 있어 임상적으로 현저한 이점을 나타내야 하고, (b) 두 약제가 상이한 메카니즘 수준으로 상이한 능력을 갖고 작용해야 하고, (c) 두 약제를 조절 투여량으로 조합시 효능 및/또는 안전성을 개선시킬 수 있어야 한다. 이와 관련해서, 특히 급성 관상동맥 증후군(ACS)에 있어서 UFH 및 정맥내 혈소판 GPIIb/IIIa 길항제에 대해 풍부한 임상 경험이 존재한다. ACS에 있어서 혈소판 GPIIb/IIIa 길항제 압식시맵(abciximab)의 잠재적 임상적 이점은 "허혈성 합병증의 예방에 있어서 c7E3 Fab의 평가(Evaluation of c7E3 Fab in the Prevention of Ischemic Complications: EPIC)" 및 "경피 경혈관 관상동맥 성형술에서 압식시맵에 의한 GPIIb/IIIa 억제를 이용한 장기적 결과의 개선 평가(Evaluation in Percutaneous transluminal coronary angioplasty to Improve Long-term Outcome with abciximab GPIIb/IIIa blockade: EPILOG)"라는 중요 임상에서 증명되었다. EPIC 임상에서는, 최대허용량의 UFH가 압식시맵과 함께 사용되었을 때 현저한 과다 출혈이 있어, EPILOG 임상에서는 보다 감소된 양의 UFH가 사용되었다. 보다 적은 양의 UFH를 사용하자 EPIC 임상에서 관찰된 효능이 손상되지 않으면서도 개선된 안전성 프로필을 얻을 수 있었다. 이와 유사하게, "허혈성 증후군 관리에 있어 혈소판 수용체의 저해(Platelet Receptor Inhibition in Ischemic Syndrome Management: PRISM)" 및 "불안정한 징후 및 증상에 의해 제한된 환자에 있어서 PRISM(PRISM in Patients Limited by Unstable Signs and Symptoms: PRISM-PLUS)"라는 임상에서는, 아스피린(PRISM) 또는 UFH와 티로피반(tirofiban)의 조합물 (PRISM-PLUS)를 투여하는 것이 불안정성 협심증의 치료에 있어서 임상적 결과를 개선시킬 수 있는지를 증명하였다. PRISM-PLUS의 대조군은 UFH만을 정맥내 투여받았다. 티로피반과 UFH의 조합물이, 랜덤화후 7일 이내에 사망율, 심근경색증 또는 난치성 허혈을 감소시키는데 있어서, UFH 단일 약제보다 훨씬 더 효과적이었다. 이러한 발견은, UFH와 GPIIb/IIIa 길항제를 병용투여하면 효능을 개선시킬 수 있다는 것을 암시한다. GPIIb/IIIa 길항제와 조절 투여량의 UFH를 사용한 다른 임상이 현재 진행중이다. UFH보다 LMWH가 훨씬 유리하기 때문에(이후에 설명될 것임), LMWH와 혈소판 GPIIb/IIIa 수용체 길항제의 조합물는 적량으로 조합될 경우 훌륭한 잠재적 이점을 갖는다.

발명의 개요

본 발명의 목적은, 혈전증에 걸린 포유동물에게 (i) 압식시맵, 엡티피바티드(eptifibatide), 티로피반, 라미피반(lamifiban), 레프라다피반(lefradafiban), 시브라피반(sibrafiban), 오르보피반(orbofiban), 제밀로피반(xemilofiban), 하기 화학식 A의 화합물 및 하기 화학식 B의 화합물(록시피반)로 이루어진 군에서 선택된 GPIIb/IIIa 길항제와 (ii) 아스피린 또는 GPIIb/IIIa 길항제(i) 및 (iii) 틴자파린, 세르토파린, 파르나파린, 나드로파린, 아르데파린, 에녹사파린, 레비파린 및 달테파린으로 이루어진 군에서 선택된 저분자량 헤파린의 조합물을 치료적 유효량으로 투여함을 포함하는(여기서 하나 이상의 길항제 및 아스피린, 또는 하나 이상의 길항제 및 저분자량 헤파린은 치료적 유효량 이하(subtherapeutic amount)로 투여된다), 포유동물의 혈전증의 치료 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 혈전증에 걸린 포유동물에게 전술된 (i)와 (ii) 또는 (iii)의 조합물을 상승 효과를 제공하는 양으로 투여하여 혈전증을 치료하는 방법을 제공하는 것이다.

본 발명의 또다른 목적은 혈전증에 걸린 포유동물에게 치료적 유효량의 조직 플라스미노겐 활성화인자("TPA")와 화학식 B의 GPIIb/IIIa 길항제 화합물의 조합물을 투여함으로써(여기서 상기 하나 이상의 약제는 치료적 유효량 이하로 투여된다), 포유동물의 혈전증을 치료하는 방법을 제공하는 것이다.

<화학식 B>

본 발명의 또다른 목적은, 급성 허혈성 관상동맥 증후군, 혈전증, 혈전색전증, 혈전성 폐색 및 재폐색, 재발협착증, 일과성 허혈성 발작, 원발성 또는 속발성 혈전성 뇌졸증으로 이루어진 군에서 선택된 1가지 이상의 질환이 진행될 위험이 있는 포유동물에게 치료적 유효량 이하의 저분자량 헤파린과 치료적 유효량 이하의 혈소판 GPIIb/IIIa 길항제를 피하 경로로 병용투여함을 포함하는, 상기 질환의 치료 방법을 제공하는 것이다.

본 발명은 틴자파린(tinzaparin)과 같은 저분자량 헤파린과 록시피반(roxifiban)과 같은 혈소판 GPIIb/IIIa 길항제를 투여함을 포함하는, 혈전색전성 장애를 치료, 예방 및 감소시키기 위한 병용요법에 관한 것이다.

도 1은 트롬빈-유도된 인간 혈소판 응집에 있어서, 틴자파린의 항혈소판 효능에 대한 록시피반의 효과를 도시하는 그래프이다.

도 2는 트롬빈-유도된 혈소판 응집에 있어서, 틴자파린과 록시피반의 상승적 항혈소판 효과를 도시하는 그래프이다.

도 3은 식염수 비히클, 아스피린 단독, GPIIb/IIIa 길항제 단독, 이와 동일한 GPIIb/IIIa 길항제와 아스피린의 조합물에 대해서, 경동맥 혈류를 시간에 대해 도시한 그래프이다.

도 4는 식염수 비히클, 달테파린(프라그민) 단독, GPIIb/IIIa 길항제 단독, 이와 동일한 GPIIb/IIIa 길항제와 달테파린의 조합물에 대해서, 경동맥 혈류를 시간에 대해 도시한 그래프이다.

도 5는 트롬보엘라스토그래피(thromboelastography)에 사용되는 장치 및 측정 변수를 보여준다.

아스피린 또는 저분자량 헤파린과 GPIIb/IIIa 길항제의 조합물는 죽상동맥경화성 동맥 질환, 판막성 심질환, 뇌혈관 질환, 예를 들면 뇌졸증, 심방세동, 관상동맥 질환, 예를 들면 심근경색증 및 불안정형 협심증, 관상동맥 회로조성술, 말초혈관 질환, 심장판막 및 혈관이식편과 같은 인공 심혈관 장치의 혈전색전성 합병증을 포함하는 혈전성 장애의 치료에 유용하다. 이러한 조합물은, 경피 경혈관 관상동맥 성형술과 같은 혈관내 스텐트 삽입술이 병행될 때, 시술후 동맥에 혈전이 생성되고 동맥이 재폐색되는 것을 방지하는데에 유용할 것으로 기대된다. 전술된, 치료적 유효량의 조직 플라스미노겐 활성화인자와 화학식 B의 GPIIb/IIIa 길항제 화합물의 조합물는 혈전증의 치료에도 유용하다.

본 발명의 조합물에 유용한 아스피린은 시판되고 있으며 당 업계에 잘 알려져 있다. 본 발명의 조합물에서 유용한 달테파린(프라그민)과 같은 저분자량 헤파린은 시판되고 있으며 당 업계에 잘 알려져 있다. 본원에서 유용한, 바람직한 GPIIb/IIIa 길항제 화합물 및 그의 제제는 (본원에서 참조로 인용된) WO 95/14683, US 특허 제 5,849,736 호에 기술되어 있다. 이 문헌에 기술된 바람직한 화합물 및 그 제제는 하기 화학식 A 및 B을 갖는다. 이 화합물의 기타 염 및 전구약물 또한 바람직하다.

<화학식 A>

<화학식 B>

본 발명의 한 실시양태에서는 급성 허혈성 관상동맥 증후군, 혈전증, 혈전색전증, 혈전성 폐색 및 재폐색, 재발협착증, 일과성 허혈성 발작, 원발성 또는 속발성 혈전성 뇌졸증으로 이루어진 군에서 선택된 1가지 이상의 질환이 진행될 위험이 있는 포유동물에게 치료적 유효량 이하의 저분자량 헤파린과 치료적 유효량 이하의 혈소판 GPIIb/IIIa 길항제를 투여함을 포함하는, 상기 상태의 치료 방법이 기술되어 있다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, 혈소판 GPIIb/IIIa 길항제는 록시피반이다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, 저분자량 헤파린은 틴자파린이다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, 투여 경로는 피하 경로이다.

본 발명의 또다른 실시양태에서는 혈소판 GPIIb/IIIa 길항제 및 저분자량 헤파린 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물이 기술된다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, 혈소판 GPIIb/IIIa 길항제는 록시피반이다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서 저분자량 헤파린은 틴자파린이다.

본 발명의 또다른 실시양태에서는 혈소판 GPIIb/IIIa 길항제 및 저분자량 헤파린을 포함하는 피하투여용 키트가 기술된다.

본 발명의 또다른 실시양태에서는, 혈전증에 걸린 포유동물에게 (i) 압식시맵, 엡티피바티드, 티로피반, 라미피반, 레프라다피반, 시브라피반, 오르보피반, 제밀로피반, 하기 화학식 A의 화합물 및 화학식 B의 화합물로 이루어진 군에서 선택된, 치료적 유효량 이하의 GPIIb/IIIa 길항제와 (ii) 아스피린 또는 (iii) 틴자파린, 세르토파린, 파르나파린, 나드로파린, 아르데파린, 에녹사파린, 레비파린 및 달테파린으로 이루어진 군에서 선택된 저분자량 헤파린의 조합물을 투여함을 포함하는, 포유동물의 혈전증의 치료 방법이 기술된다.

<화학식 A>

<화학식 B>

본 발명의 바람직한 실시양태에서, (i)와 (ii) 또는 (iii)의 조합물는 상승 효과를 제공한다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, 조합물는 GPIIb/IIIa 길항제와 저분자량 헤파린의 조합물이다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, GPIIb/IIIa 길항제는 치료적 유효량 이하로 투여된다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, GPIIb/IIIa 길항제는 화학식 A의 화합물이거나 화학식 B의 화합물이다. 본 발명의 바람직한 실시양태에서, 저분자량 헤파린은 달테파린이다. 본 발명의 보다 바람직한 실시양태에서, GPIIb/IIIa 길항제는 화학식 A의 화합물이거나 화학식 B의 화합물이고 저분자량 헤파린은 달테파린이다.

본 발명의 또다른 실시양태에서는, (i) 압식시맵, 엡티피바티드, 티로피반, 라미피반, 레프라다피반, 시브라피반, 오르보피반, 제밀로피반, 하기 화학식 A의 화합물 및 화학식 B의 화합물로 이루어진 군에서 선택된, 치료적 유효량 이하의 GPIIb/IIIa 길항제 및 (ii) 아스피린 또는 (iii) 틴자파린, 세르토파린, 파르나파린, 나드로파린, 아르데파린, 에녹사파린, 레비파린 및 달테파린(프라그민)으로 이루어진 군에서 선택된 저분자량 헤파린의 조합물의, 혈전증 치료제의 제조에서의 용도가 기술된다.

<화학식 A>

<화학식 B>

본 발명의 또다른 실시양태에서는, 혈전증에 걸린 포유동물에게 (i) 조직 플라스미노겐 활성화인자와 (ii) 화학식 B의 화합물(여기서 (i)와 (ii)중 하나 이상은 치료적 유효량 이하로 투여된다)을 투여함을 포함하는, 포유동물의 혈전증의 치료 방법이 기술된다.

<화학식 B>

유용한 GPIIb/IIIa 길항제 화합물의 구체적인 예는 그라울(Graul) 등 및 스카보로우(Scarborough)의 논문(그라울 에이(Graul A), 마텔 에이엠(Martel AM) 및 카스타너 제이(Castaner J); 제밀로피반; [Drugs of the Future 22: 508-517,1997]; 스카보로우 알엠(Scarborough RM); 엡티피바티드; [Drugs of the Future 23: 585-590, 1998])에 기술된, 록시피반, 압식시맵, 엡티피바티드, 티로피반, 라미피반, 레프라다피반, 시브라피반(Ro-48-3657), 오르보피반 및 제밀로피반이다. 이중에서도 록시피반, 라미피반, 레프라다피반, 시브라피반, 오르보피반 및 제밀로피반이 바람직하다. 다른 약물도 당 업계의 숙련자들에게 알려져 있다.

틴자파린과 혈소판 GPIIb/IIIa 길항제인 록시피반의 조합물이 혈병 형성 및 혈소판-혈소판 응집체 형성에 대해 갖는 효과를, 혈소판-피브린 혈병 동적 연구를 위해서 트롬보엘라스토그래피(TEG)를 사용하고, 혈소판-혈소판 상호작용 연구를 위해서 광-투과 어그리고메트리(light-transmittance aggregometry: LTA)를 사용하여 연구하였다. 치료적 유효량 이하 농도의 록시피반 및 IC₅₀의 틴자파린에 의한 GPIIb/IIIa 억제 효과로 IC₅₀이 현저하게 2배로 변동하였다. 이러한 상호작용을 연구하기 위해 LTA를 사용하였다. 록시피반은 다른 GPIIb/IIIa 길항제와 마찬가지로 가파른 투여량-반응 관계를 갖는다. 치료적 유효량 이하 농도의 록시피반이 상이한 농도의 틴자파린과 조합되면 틴자파린의 효능이 현저하게 향상되었고(도 1), 이는 틴자파린에 의해 록시피반의 항혈소판 효능이 상승적으로 향상되고 그 반대의 경우도 그러하다는 것을 암시한다(도 2). 압식시맵과 같은 잠재적 GPIIb/IIIa 길항제를 LMWH와 조합하면 유사한 상승적 상호작용이 나타난다. 조직 인자 경로 저해제(Tissue factor pathway inhibitor:TFPI)는 조직 인자(TF)를 저해하고, 인테그린을 변조시키고, 향(pro)-염증성 자극을 하향-조정하고,세포보호적(cytoprotective) 항혈소판 효과를 제공하고, Xa 및 백혈구 기능을 변조시킬 수 있다. 상이한 LMWH를 인간이 아닌 영장류에 동일한 항-Xa 단위로 정맥내 투여할 경우, 다른 LMWH에 비해 유리 TFPI를 방출하는데 있어 상이한 수준의 활성이 나타났다. 또한, 틴자파린은 백혈구-혈소판 결합의 변조 및 염증성 자극의 유도에 중요한 혈소판 P-선택의 TF-유도된 발현을 저해하였다.

혈소판 GPIIb/IIIa 수용체 길항제와 LMWH간의 상호작용은 엄청난 임상적 의미를 내포할 수 있다. LMWH는 트롬빈 및 Xa를 저해함으로써 GPIIb/IIIa 길항제의 항혈소판 활성을 향상시킬 수 있다. 이와 동시에, GPIIb/IIIa 길항제는 활성화 자극과 상관없이 피브리노겐 결합 및 응집을 차단함으로써 LMWH의 항응고 작용을 강화할 수 있고, 또한 이들은 혈소판 표면상에서 향-응고 활성을 하향-조정하는데에도 관여한다. 감소된 투여량의 LMWH와 감소된 투여량의 GPIIb/IIIa 길항제의 조합물는 보다 높은 치료 효과를 나타낼 수 있다.

정맥 혈전증 및 어느 정도까지 급성 허혈성 증후군을 치료하는데 있어서, 저분자량 헤파린(LMWH)은 미분획 헤파린에 비해, 외래환자가 사용하기에 보다 편리한 전달 방법(피하) 및 개선된 효능 및 안전성을 갖추고 있다. 컴퓨터화된 트롬보엘라스토그래피(TEG)를 사용하여 혈병의 전단 탄성률을 증대시키는 혈소판 및 피브린의 능력을 검증하였다. 이러한 증대 효과를, 재조합 인간 조직 인자(TF)에 의해 가속화된 혈병 형성에 의해 조성된 최대 혈소판 활성화 조건하에서 정량하였다. TFG 측정법을 사용하여 인간 혈액중에서 상이한 매개체에 의해 유도된 혈병 형성의 저해에 대해 LMWH의 효능을 비교하였다. 그 결과 전단 조건하에서 다양한 매개체-유도된 혈병 형성의 저해에 있어서 상이한 LMWH의 효능을 알 수 있었다. 틴자파린은 전단 조건하에서 TF, 지다당류(LPS), Xa 및 트롬빈-유도된 혈병 형성을 저해하는데 있어서 비교적 보다 높은 효능을 나타내었다. 시험 데이타는 LMWH가 다른 항응고제보다 더 광범위한 효능을 가짐을 암시하였다. 이러한 조건하에서, 혈소판은 혈병 강도를 (혈소판이 없는 피브린 혈병에 비해) 8배 증강시켰다. 압식시맵과 록시피반은 혈소판 GPIIb/IIIa 수용체를 통한 피브린으로의 혈소판 수축력의 전달에 영향을 줌으로써 혈병 강도의 증강을 저해한다. 틴자파린은 TF, Xa 또는 트롬빈에 의해 매개되는 혈병 형성을 저해하는데에 있어 높은 효능을 나타내었다. 치료적 유효량 이하의 틴자파린과 치료적 유효량 이하의 록시피반 또는 압식시맵의 조합물는 TF, Xa 또는 트롬빈에 의해 매개되어 항혈소판 및 항응고 효능을 개선시키는데 있어 특별한 상승 효과를 나타내었다. 시험 데이타는 저투여량의 틴자파린과 저투여량의 GPIIb/IIIa 길항제, 예를 들면 압식시맵 또는 록시피반의 조합물이 여러가지 혈전색전성 장애의 예방 및 치료에 유용할 수 있음을 뒷받침한다.

미분획 헤파린(UFH)에 비해서, LMWH는 개선된 피하(SC) 생체이용률; 보다 낮은 단백질 결합률; 보다 긴 반감기; 다양한 수의 항트롬빈 III 결합 부위; 다양한 글리코사미노글리칸 함량; 다양한 항-세린 프로테아제 활성(항-Xa, 항-IIa, 및 항-Xa/항-IIa 비); TPFPI의 방출에 있어 다양한 효능; 다양한 수준의 혈관 내피 세포 결합 동력학을 나타내기 때문에 다양한 혈관 보호 효과를 갖는다. 이러한 이유로, 지난 수십년동안 LMWH는 정맥 혈전색전성 장애(VTE)의 예방 및 치료에서 UFH 대신에 점점 더 많이 사용되고 있다. 랜덤화된 임상 시험에서, 최적 투여량으로 사용되는 단독의 LMWH는 적어도 UFH만큼은 효과적이고 아마도 UFH보다 더 안전한 것으로 증명되었다. LMWH는 모니터링을 필요로 하지 않고, 그 투여 방법이 1일 1회 또는 2회 피하 투여로 편리하므로, 보다 널리 사용되게 되었다. LMWH의 제조방법이 다양하기 때문에, 상이한 LMWH는 그 물리적 성질 및 화학적 성질이 다양하다는 것은 잘 알려져 있다. 이러한 차이 때문에 그의 약력학적 및 약동학적 특성도 다를 수 밖에 없다. 세계보건기구(World Health Organization: WHO) 및 미국 식품의약국(Food and Drug Administration: FDA)은 LMWH를 대체해서 사용할 수 없는 단독 의약품(individual drug)으로 규정해놓고 있다.

본원에서 사용된 "치료적 유효량"이란 포유동물의 혈전증을 치료하는데 효과적인 화합물의 조합물의 양을 포함하는 것이다. 화합물의 조합물는 바람직하게는 상승적 조합물이다. "상승작용(synergy)"은, 예를 들면 쵸(Chou) 및 탈라레이(Talalay)의 문헌[Adv.Enzyme Regul. 22:27-55(1984)]에 기술된 바와 같이, 각 화합물이 조합물로서 투여될 때 발휘하는 효과가, 단일 약제로서 단독으로 투여될 때 발휘하는 효과들의 합보다 더 큰 것을 말한다(본 발명의 경우 항혈전증 효과). 일반적으로, 상승 효과는 하나 이상의 조합된 화합물들이 치료적 유효량 이하로 존재할 때 보다 극명하게 드러난다. 상승작용은 개별적인 성분에 비해 조합물의 항고혈압 효과, 항혈전증 효과 또는 기타 비-부가적 효과라는 용어로 사용될 수 있다.

본원에서 기술된 화합물을 언급할 때 사용된, "병용투여된(administered in combination)", "조합(combination)" 또는 "조합된(combined)"이라는 용어는 화합물 또는 성분이 치료 동물에 동시에 투여되는 것을 의미한다. 각 화합물 또는 성분이 병용투여될 때, 원하는 치료 효과를 얻기 위해서 이들은 동일한 시간에 또는 임의의 순서로 또는 상이한 시간에 순차적으로 투여될 수 있다. "치료적 유효량 이하 (subtherapeutically effective amound)"란 각 성분들이 포유동물에게 단독으로 투여될 때 치료할 질환에 대해 원하는 치료 효과를 제공하지 못하는 양을 말한다.

본원에서 사용된 "전구약물(prodrug)"이라는 용어는 포유동물에게 투여될 때 생체내에서 본 발명의 활성 모(parent) 약물을 방출하는 임의의 공유결합된 담체를 포함하는 것으로 의미된다. 전구약물은 의약품의 수많은 요구되는 성질들(즉, 용해성, 생체이용률, 제조 등)을 향상시키는 것으로 알려져 있기 때문에, 본 발명의 화합물은 전구약물 형태로 전달될 수 있다. 전구약물은, 하이드록시, 아미노 또는 설프하이드릴기가 임의의 기에 결합되어 있어서, 포유동물에게 투여되면, 절단되어 유리 하이드록시, 유리 아미노, 또는 유리 설프하이드릴기를 각각 형성하는 본 발명의 화합물을 포함한다. 전구약물의 예에는 본 발명의 화합물내의 알콜 및 아민 작용기의 아세테이트, 포르메이트 및 벤조에이트 유도체가 포함되지만 여기에만 국한되는 것은 아니다.

투여량 및 제제화

GPIIb/IIIa 길항제와 아스피린 또는 저분자량 헤파린의 조합물 뿐만 아니라 TPA와 화학식 B의 GPIIb/IIIa 길항제 화합물의 조합물는 포유동물의 신체내에서 약제가 그의 활성 부위, 즉 GPIIb/IIIa 수용체와 접촉할 수 있게 하는 임의의 수단에의해, 혈전증의 치료제로서 투여된다. 이들은 개별적인 치료제 또는 치료제들의 조합물로서, 의약품과 관련해 사용가능한 임의의 통상적인 수단에 의해 투여될 수 있다.

투여에 적합한 조성물의 투여 형태는 단위당 약 1㎎ 내지 약 100㎎의 활성 성분을 함유한다. 제약 조성물에서, 활성 성분은 통상적으로 조성물의 총 중량을 기준으로 약 0.5 내지 95 중량%의 양으로 존재할 것이다. 활성 성분은 캡슐, 정제 및 분말과 같은 고체 형태, 또는 엘릭시르제(elixir), 시럽 및 현탁액과 같은 액체 형태로서 경구 투여될 수 있다. 이는 멸균 액체 투여 형태로 비경구적으로 투여될 수도 있다.

젤라틴 캡슐은 활성 성분 및 분말 담체, 예를 들면 락토스, 전분, 셀룰로스 유도체, 마그네슘 스테아레이트, 스테아르산 등을 함유한다. 유사한 희석제를 사용하여 압축 정제를 만들 수 있다. 정제 및 캡슐은 둘 다 일정 시간동안 약물을 계속 방출하는 서방형 제제로서 제조될 수 있다. 압축 정제는 임의의 나쁜 맛을 가리고 정제를 대기로부터 보호하도록 당으로 피복되거나 막으로 피복되거나, 위장관내에서 선택적으로 분해되도록 장용성-피복될 수 있다. 경구 투여용 액체 투여 형태는 환자가 보다 더 잘 받아들일 수 있도록 색소 및 향미제를 함유할 수 있다.

일반적으로, 물, 적합한 오일, 식염수, 수성 덱스트로스(글루코스) 및 관련 당 용액 및 글리콜, 예를 들면 프로필렌 글리콜 또는 폴리에틸렌 글리콜이 비경구 투여용 용액에 적합한 담체이다. 비경구 투여용 용액은 바람직하게는 활성 성분의수용성 염, 적합한 안정화제 및, 경우에 따라서는 완충 물질을 함유한다. 단독으로 또는 조합된, 아황산수소나트륨, 아황산나트륨 또는 아스코르브산과 같은 항산화제가 적합한 안정화제이다. 시트르산 및 그의 염, 및 나트륨 EDTA도 사용된다. 또한 비경구 투여용 용액은 보존제, 예를 들면 벤즈알코늄 클로라이드, 메틸- 또는 프로필-파라벤 및 클로로부탄올을 함유할 수 있다. 적합한 제약학적 담체는, 본원에서 참고로 인용된, 당 업계에서의 표준 참고문헌인 문헌[Remington's Pharmaceutical Sciences, 19th ed., Mack Publishing Company, Easton, PA, 1995]에 기술되어 있다.

본 발명의 화합물을 투여하기에 유용한 제약 제형은 다음과 같다.

캡슐

표준 이부재(two-piece) 경질 젤라틴 캡슐에 각각 활성 성분 분말 0.1 내지 100㎎, 락토스 150㎎, 셀룰로스 50㎎ 및 마그네슘 스테아레이트 6㎎을 채움으로써 다수의 단위 캡슐을 제조할 수 있다.

연질 젤라틴 캡슐

대두유, 면실유 또는 올리브유와 같은 소화가능한 오일에서 활성 성분 혼합물을 제조하고 이를 정변위 펌프에 의해 젤라틴에 주입함으로써 활성 성분 0.1 내지 100㎎을 함유하는 연질 젤라틴 캡슐을 만들 수 있다. 이어서 캡슐을 세척하고 건조시킨다.

정제

투여 단위가 활성 성분 0.1 내지 100㎎, 콜로이드성 이산화규소 0.2㎎, 마그네슘 스테아레이트 5㎎, 미세정질 셀룰로스 275㎎, 전분 11㎎ 및 락토스 98.8㎎이 되도록 통상적인 방법으로 다수의 정제를 제조할 수 있다. 풍미를 증대시키거나 흡수를 지연시키기 위해 적당한 피막을 도포할 수 있다.

현탁액

각 5㎖에 미분된 활성 성분 0.1 내지 100㎎, 소디움 카복시메틸 셀룰로스 200㎎, 소디움 벤조에이트 5㎎, 소르비톨 용액 1.0g(미국 약전) 및 바닐린 0.025㎎을 함유하는 경구 투여용 수성 현탁액을 제조할 수 있다.

주사제

10부피%의 프로필렌 글리콜 및 물에서 활성 성분 0.1 내지 100㎎(중량 기준)을 교반함으로써, 주사 투여에 적합한 비경구용 조성물을 제조할 수 있다. 용액을 통상적으로 사용되는 방법으로 멸균시킨다.

본 발명의 조합된 화합물을, 활성 성분이 단일 투여 단위내에 조합되지만 활성 성분들간의 물리적 접촉은 최소화되도록 제제화할 수 있다. 접촉을 최소화하기 위해서는, 예를 들면, 경구 투여용 제품의 경우, 한 활성 성분을 장용성-피복시킬 수 있다. 한 활성 성분을 장용성-피복시킴으로써, 조합된 활성 성분들간의 접촉을 최소화할 수 있을 뿐만 아니라, 성분들중 하나가 위에서는 방출되지 않고 장에서 방출되도록 위장관내에서 성분의 방출을 조절할 수 있다. 경구 투여가 요구되는 본 발명의 또다른 실시양태에서는 한 활성 성분이 서방성 물질로 피복되어, 위장관내에서 활성 성분이 서서히 방출되고 조합된 활성 성분들간의 물리적 접촉이 최소화된 조합물이 제공된다. 더욱이, 이 서방성 성분은 추가로 장용성-피복됨으로써장에서만 방출되게 된다. 또다른 방법은 활성 성분들을 추가로 분리시키도록, 한 화합물을 서방성 및/또는 장용성 중합체로 피복시키고, 다른 화합물을 저점성 하이드록시프로필 메틸셀룰로스와 같은 중합체 또는 당 업계에 공지된 기타 적합한 물질로 피복시킴으로써 조합물을 제제화하는 것을 포함한다. 중합체 피막은 활성 성분들이 서로 상호작용하는 것을 막는 추가의 장벽을 형성한다.

한 활성 성분이 장용성-피복된 본 발명의 조합물의 투여 형태는, 장용성-피복된 화합물 및 기타 활성 성분이 함께 블렌딩된 후에 정제로 압축된 정제 형태이거나, 장용성-피복된 성분이 하나의 정제층으로 압축되고 다른 활성 성분이 추가의 층에 압축된 정제 형태일 수 있다. 임의적으로는, 두 층을 추가로 분리시키기 위해서, 하나 이상의 플라시보 층을 활성 성분의 층들 사이에 넣을 수 있다. 또한, 본 발명의 제형은 한 활성 성분이 하나의 정제로 압축된 캡슐 형태 또는 다수의 미소정제(microtablet), 입자, 과립 또는 비-페릴(non-peril) 형태(이들은 이어서 장용성-피복됨)일 수 있다. 이어서 이러한 장용성-피복된 미소정제, 입자, 과립 또는 비페릴은 다른 활성 성분의 과립과 함께 캡슐내에 충전되거나 캡슐로 압축된다.

이러한 방법외에도, 단일 투여 형태로 투여되든지 개별적인 형태이지만 동시에 투여되든지 또는 동일한 방식으로 동시에 투여되든지간에, 조합된 화합물간의 접촉을 최소화하는 다른 방법은, 본원의 내용을 기본으로 하여 당 업계의 숙련자들은 쉽게 알 수 있는 것들이다.

병용요법

본 발명의 각 치료용 화합물은 독립적으로, 전술된 바와 같은 임의의 제형일수 있고, 전술된 바와 같은 다양한 방법으로 투여될 수 있다. 예를 들면, 화합물은 조합물로서 단일 투여 단위로 함께 제제화될 수 있다(즉 하나의 캡슐, 정제, 분말 또는 액체 등에 함께 조합될 수 있다). 다른 방법으로는, 단일 투여 단위로 함께 제제화되지 않을 경우, 개별적인 GPIIb/IIIa 길항제가 아스피린, 저분자량 헤파린 또는 TPA과 동시에 투여되거나, 임의의 순서대로 순차적으로 투여될 수 있다. 동시에 투여되지 않을 경우, 바람직하게는 화합물의 개별적 투여는 약 1시간 미만의 간격으로 이루어진다.

바람직하게는, 본 발명의 치료용 조합물의 투여 경로는 피하 주사이다. 화합물은 동일한 경로로 투여되는 것이 일반적으로 바람직하기는 하지만, 반드시 그럴 필요는 없다. 예를 들면 GPIIb/IIIa 길항제와 아스피린이 치료용 조합물로서 투여되는 경우, 길항제는 정맥내 투여되고 아스피린은 경구 투여되는 것이 바람직할 수도 있다.

당 업계의 전문의가 알고 있는 바와 같이, 본 발명의 조합물의 투여량은 전술된 바와 같이, 특정 약제의 약력학적 특성, 그의 투여 방식 및 경로, 환자의 연령, 건강 상태 및 체중, 증상의 본질 및 중증도, 병행 치료의 종류, 치료 빈도 및 원하는 효과와 같은 다양한 인자에 따라 달라질 수 있다.

GPIIb/IIIa 길항제와 아스피린의 조합물, GPIIb/IIIa 길항제와 저분자량 헤파린의 조합물 또는 TPA와 화학식 B의 화합물의 조합물의 적정 투여량은 당 업계의 전문의라면, 본 발명의 내용을 기본으로 하여 쉽게 알 수 있을 것이다. 일반적인 지침으로서 제시하자면, 전형적으로 1일 투여량은 각 성분 약 0.01㎎ 내지 약 1g일수 있다. 일반적인 지침으로서 제시하자면, 화합물이 조합물로서 투여될 때, 각 성분의 투여량은, 조합물의 상승 효과를 고려할 때, 혈전증의 치료를 위해 단일 약제로서 단독으로 투여되는 경우의 성분의 통상적인 투여량의 약 70 내지 80%로 감소된 양일 수 있다.

전술된 내용을 바탕으로, 본 발명을 여러가지로 변경 및 변화시킬 수 있음은 자명하다. 따라서 첨부된 청구의 범위의 범주내에서, 본 발명을 본원에서 구체적으로 기술된 것과는 다르게 실시할 수 있음을 알아야 한다.

본 발명을 하기 실시예를 참조로 하면 더 잘 이해할 수 있을 것이다. 당 업계의 숙련자라면 기술내용 및 실시양태는 단지 예시를 목적으로 제시된 것이지 본 발명을 제한하려는 것은 아니므로 본 발명의 다른 양태도 가능하다는 것을 알 것이다. 식염수(0.9 중량% NaCl)는 모든 실시예에서 비히클이다.

실시예 1

아스피린과 GPIIb/IIIa 길항제의 조합물

래빗을 케타민(50㎎/㎏, 근육내 주사) 및 자일라진(10㎎/㎏, 근육내 주사)로 마취시키고 외과수술로 동맥 및 정맥 카테터를 삽입하였다. 전자기류 탐침을 분리된 경동맥에 놓고 혈류를 모니터링하였다. 외부 스테인레스강 쌍극전극판을 사용하여 4mA에서 3분동안 경동맥을 전기 자극함으로써 혈전 형성을 유도하였다. 경동맥 혈류를 90분에 걸쳐 계속 측정하여 혈전 폐색을 모니터링하였다. 시험 약제를, 경동맥을 전기 자극하기 1시간전에 90분동안 계속 정맥내 주입하였다.

도 3에 나타난 바와 같이, 식염수 비히클로 처리된 동물의 경우, 전기 자극 후 혈전 형성이 유도되었고 경동맥 혈류는 서서히 감소되었다. 자극 후 약 40분이 지났을 때, 동맥은 완전히 폐색되었고 혈류는 0이 되었다. 아스피린 1㎎/㎏/hr(정맥내)(식염수중 농도는 0.167㎎/㎖) 또는 화학식 A의 화합물(GPIIb/IIIa 길항제) 0.03㎎/㎏/hr(정맥내)(식염수중 농도는 0.005㎎/㎖)은 동맥의 폐색을 막지 못했으며, 아스피린 또는 화학식 A의 화합물로 처리된 동물의 혈류는 비히클로 처리된 동물과 거의 동시에 0으로 감소되었다. 놀랍게도, 화학식 A의 화합물 0.03㎎/㎏/hr(정맥내)과 아스피린 1㎎/㎏/hr(정맥내)의 조합물는 동맥의 폐색을 막고 혈류를 대조 수준의 60 내지 70% 수준에서 90분 이상동안 유지하였다. 이 결과를 보아, 동맥 혈전증의 래빗 모델에서, 각각 치료 효과량 이하로 조합된 화학식 A의 화합물과 아스피린의 조합물는 예상치못하게 우수한 항혈전 효과를 나타냄을 알 수 있다.

실시예 2

달테파린(프라그민)과 GPIIb/IIIa 길항제의 조합물

본 실시예에서는 실시예 1에 기술된 것과 동일한 실험 프로토콜을 사용하였다. 도 4에 나타난 바와 같이, 식염수 비히클로 처리된 동물의 경우, 전기 자극 후 혈전 형성이 유도되었고 경동맥 혈류는 서서히 감소되었다. 자극 후 약 40분이 지났을 때, 동맥은 완전히 폐색되었고 혈류는 0이 되었다. 프라그민 60U/㎏/hr(정맥내)(식염수중 농도는 10U/㎖)는 혈류를 증가시키는데 매우 효과적이지는 않았다. 화학식 A의 화합물(GPIIb/IIIa 길항제) 0.03㎎/㎏/hr(정맥내)(식염수중 농도는 0.005㎎/㎖)은 효과적이지 않았으며, 프라그민 또는 화학식 A의 화합물로 처리된동물의 혈류는 비히클로 처리된 동물과 거의 동시에 0으로 감소되었다. 놀랍게도, 화학식 A의 화합물 0.03㎎/㎏/hr(정맥내)과 달테파린(프라그민) 60U/㎏/hr(정맥내)의 조합물는 동맥의 폐색을 막고 혈류를 대조 수준의 60 내지 70% 수준에서 90분 이상동안 유지하였다. 이 결과를 보아, 동맥 혈전증의 래빗 모델에서, 각각 치료적 유효량 이하로 조합된 화학식 A의 화합물과 달테파린(프라그민)의 조합물는 예상치못하게 우수한 항혈전 효과를 나타냄을 알 수 있다.

실시예 3

조직 플라스미노겐 활성화인자와 GPIIb/IIIa 길항제의 조합물

케타민(110㎎/㎏, 근육내 주사) 및 자일라진(10㎎/㎏, 근육내 주사)로 마취시킨 래트를 대상으로 실험하였다. 프로토콜은 앞의 실시예 1에서 기술된 래빗 프로토콜과 유사하지만, 단 하기 화학식 B의 화합물의 유리 산 또는 시브라피반의 유리 산 및/또는 TPA를 예비형성된 혈병이 형성된 후 5분이 지나서 투여하였다.

<화학식 B>

측정된 변수는 재관류까지 소요되는 시간, 개방(patency) 지속시간 및 재폐색 발생율이었다. 사용된 TPA, 시브라피반 및 화학식 B의 화합물의 투여량은 각각 1, 0.3 및 0.3㎎/㎏(정맥내)였다. 본 연구에서 상기 투여량의 시브라피반 및 화학식 B의 화합물은 래트 모델의 혈전증의 예방에 있어서 동일하게 효과적이었다.

하기 표 1에서 보는 바와 같이, 화학식 B의 화합물과 TPA의 조합물는 시브라피반과 TPA의 조합물보다 예상치못하게 더 좋은 혈전용해 효과를 나타내었다. 이 결과는 화학식 B의 화합물이 TPA 또는 다른 혈전용해제에 의해 유도된 혈전용해를 가속화시키는데 유용한 보조약으로서 유망하다는 것을 암시한다. 또한, 이 결과는 화학식 B의 화합물은 치료적 유효량 이하의 TPA에 의해 유도된 혈전용해를 시브라피반보다 더 잘 향상시켰음을 보여준다.

	TPA(n=17)	시브라피반+TPA(n=14)	화학식 B의 화합물 + TPA(n=14)
재관류까지 소요 시간(분)	32±6	30±4	16±2*
개방 지속시간(%)	29±2	63±6*	84±2*,**
재폐색 발생율	15/17	6/14*	1/14*,**
*P<0.05, TPA에 비해.**P<0.05, 시브라피반+TPA에 비해.

실시예 4

컴퓨터화된 트롬보엘라스토그래피(도 5)

컴퓨터화된 트롬보엘라스토그래프(미국 일리노이주 스토키 소재의 헤모스코프(Haemoscope) CTEG 모델 3000)를 사용하여, 37℃에서의 혈병 형성을 진동하는 플라스틱 원통형 큐벳(oscillating plastic cylindrical cuvette)("컵(cup)")과, 이 컵 표면들과의 틈새가 1㎜인 동축으로 매달린 정적 피스톤(coaxially suspended stationary piston)("핀(pin)")에서 모니터링하였다. 컵은 4.5초마다 어느 한쪽 방향으로 4°45'(1/12 라디안)로 진동하였고, 정지 시간은 1초 반-주기(mid-cycle)였고, 진동수는 0.1Hz 였고 최대 전단 속도는 0.1/초였다. 핀은 토르크 변환기로서 작용하는 토션 와이어(torsion wire)에 의해 매달려 있었다. 혈병이 형성되면, 피브린 피브릴은 컵을 핀에 물리적으로 연결시키고, (컵에 전달되는) 컵의 회전은 IBM-호환성 개인용 컴퓨터 및 시판 소프트웨어(미국 일리노이주 스토키 소재의 헤모스코프 코포레이션)에 의해 온라인으로 표시된다. (컵의 진동에 대해) 핀에 의해 발휘되는 토르크는 시간의 함수로서 도시된다. TEG 추적 결과에서 진폭은 혈병의 강도의 척도이며, 혈병에 의해 획득된 피크 강도 또는 전단 탄성률 G는 혈병 강도의 함수이고, TEG 추적 결과의 최대 진폭(MA)으로부터 계산될 수 있다.

다음 척도들을 TEG 추적 결과로부터 측정하였다(도 5):

● 반응 시간 R(겔화 시간)은 3차원적 피브린 겔 망상구조가 확립되기 전까지의 잠복기를 나타낸다(측정가능한 진폭의 강도=2㎜).

● 최대 진폭(AM, 단위 ㎜)은 혈병에 의해 나타나는 피크 강도이다.

● 전단 탄성률 또는 혈병 강도(G, 단위 dynes/㎠)는 컴퓨터화된 TEG에 의해서 G=(5000*MA)/(96-MA)로서 정의된다.

혈액 견본 추출: 윌리엄 보몬트 병원(William Beaumont Hospital)의 인간 연구 위원회(the Human Investigations Committee)에 의해 승인된 프로토콜에 의해, 혈액을 지원자로부터 채취하였다. 2-주사기 방법을 사용해서, 21 게이지 버터플라이(butterfly) 바늘을 통해 견본을 채취하고, 처음 3㎖의 혈액을 폐기시켰다. 전혈(WB)을, 시트레이트:전혈 비율이 1:9(v/v)로 유지되도록 3.8% 트리소디움 시트레이트를 함유하는 실리콘 바큐테이너(Vacutainer) 관(미국 뉴저지주 러더포드 소재의 벡톤 디킨슨(Becton Dickinson))에 수거하였다. 혈액 수거후 3시간 이내에 TEG를 수행하였다.

실시예 5

혈병 강도에 대한 혈소판의 기여도

피크 혈병 강도 G에 대한 TF 변화의 효과를 측정하기 위해서, 쌍을 이룬 WB 및 혈소판-풍부 혈장(PRP)의 견본에 TF를 가하거나 가하지 않고 G를 측정하였다. 활성화된 혈소판이 피브린 혈병의 탄성률에 기여하는 정도를 기록하기 위해서, 혈소판-풍부 혈장(PRP)을 혈소판-부족 혈장(PPP)으로 순차적 희석시킴으로써 혈소판 갯수 효과를 측정하였다. 각 희석액의 혈소판 갯수를 TEG 수행전에 측정하였다. TF의 농도를 점차 증가시키면서(0, 0.625, 1.25, 2.5, 5 및 10μM) 첨가함과 동시에, 각 TEG 견본내에서의 최종 DMSO 농도가 0.3%(v/v)가 되도록 DMSO를 TEG 컵에 첨가하면서 조직 인자-자극된 TEG를 수행하였다. 점차 증가하는 농도의 c7E3 Fab(미국 팬실바니아주 말번 소재의 센토코(Centocor)의 압식시맵), 환상 펩티드, 펩티도미메틱 및 비-펩티드 GPIIb/IIIa 길항제(미국 델라웨어주 윌밍톤 소재의 듀퐁(DuPont)) 및 다양한 LMWH를 CaCl₂및 TF와 함께 TEG 컵에 첨가함으로써, GPIIb/IIIa 억제가 혈병 강도에 미치는 효과를 검사하였다. 한 트롬보엘라스토그래피 웰에서 결정된 혈소판-부족 혈장 견본의 MA(PPP)를, 이와 동시에 별도의 트롬보엘라스토그래피 웰에서 결정된 전혈의 MA(WB)로부터 뺌으로써, 혈소판에 대한 트롬보엘라스토그래프 최대 진폭(PLT)을 계산하였다.

실시예 6

혈소판 응집

작용물질-유도된 혈소판 응집을 PRP의 투광률 변화(%)(혈소판 갯수 2×105/㎕)로서 측정하였다. LMWH와 GPIIb/IIIa 길항제가 혈소판 응집에 미치는 효과를 연구하기 위해서, 이들을 0.5IU/㎖ 트롬빈을 첨가한 지 5분 후에 점차 증가하는 농도로 PRP에 첨가하였다. 100% 투광률을 달성하기 위해서 PPP를 사용하여, 응집 반응을 트롬빈에 의해 유도되는 투광률의 최대 증가로서 측정하였다.

실시예 7

트롬보엘라스토그래피를 사용한, 인간 전혈에서 상이한 자극에 의해 유도되는 혈병의 형성을 저해하는데 있어서 상이한 LMWH들간의 효능 비교

혈병 형성 저해의 매개체(평균(IC₅₀[㎍/㎖])±SEM)

	TF 2.5ng	LPS 6.25㎍	Xa 0.25nM	트롬빈 0.3mU
LMWH
에녹사파린	0.95±0.39	2.86±0.35	0.52±0.15	1.19±0.13
틴자파린	0.49±0.06*	0.94±0.28*	0.15±0.05*	0.33±0.02*
프락시파린	2.85±0.83	3.32±0.85	0.98±0.45	0.78±0.21
TFPI	ND	0.09±0.01	ND	--
데이타가 명시하는 바는, 평균±SEMn=3.4; --=불활성; ND=데이타를 얻지 못함*P<0.01, 에녹사파린 또는 프락시파린에 비해

트롬보엘라스토그래피를 사용한, 인간 전혈에서 상이한 자극에 의해 유도되는 혈병의 형성을 저해하는데 있어서 상이한 LMWH들간의 효능 비교: GPIIb/IIIa 길항제의 상승 효과

LMWH	트롬빈	트롬빈+록시피반
	IC50(㎍/㎖)	IC50(㎍/㎖)
에녹사파린	1.19±0.13	0.72±0.18
틴자파린	0.33±0.03	0.15±0.10
프락시파린	0.57±0.11	0.34±0.08
달테파린	0.52±0.16	0.24±0.09

트롬보엘라스토그래피를 사용한, 인간 혈액에서 트롬빈-유도된 혈병 형성 저해에 대한 LMWH와 GPIIb/IIIa 길항제 록시피반의 상승 효과

	트롬빈	트롬빈+틴자파린(0.1㎍/㎖)	트롬빈+에녹사파린(0.5㎍/㎖)
	IC50(㎍/㎖)	IC50(㎍/㎖)	IC50(㎍/㎖)
록시피반	110±20	61±6.1	50±0.5

Claims (17)

1. 급성 허혈성 관상동맥 증후군, 혈전증, 혈전색전증, 혈전성 폐색 및 재폐색, 재발협착증, 일과성 허혈성 발작, 원발성 또는 속발성 혈전성 뇌졸증으로 이루어진 군에서 선택된 질환의 치료를 필요로 하는 포유동물에게 치료적 유효량 이하의 저분자량 헤파린과 치료적 유효량 이하의 혈소판 GPIIb/IIIa 길항제를 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환의 치료 방법.
2. 제 1 항에 있어서, 혈소판 GPIIb/IIIa 길항제가 록시피반인 방법.
3. 제 1 항에 있어서, 저분자량 헤파린이 틴자파린인 방법.
4. 제 1 항에 있어서, 투여 경로가 피하 경로인 방법.
5. 혈소판 GPIIb/IIIa 길항제 및 저분자량 헤파린 및 제약학적으로 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
6. 제 5 항에 있어서, 혈소판 GPIIb/IIIa 길항제가 록시피반인 제약 조성물.
7. 제 5 항에 있어서, 저분자량 헤파린이 틴자파린인 제약 조성물.
8. 혈소판 GPIIb/IIIa 길항제 및 저분자량 헤파린을 포함하는 피하 주사용 키트.
9. 혈전증에 걸린 포유동물에게 (i) 압식시맵, 엡티피바티드, 티로피반, 라미피반, 레프라다피반, 시브라피반, 오르보피반, 제밀로피반, 하기 화학식 A의 화합물 및 화학식 B의 화합물로 이루어진 군에서 선택된, 치료적 유효량 이하의 GPIIb/IIIa 길항제와 (ii) 아스피린 또는 (iii) 틴자파린, 세르토파린, 파르나파린, 나드로파린, 아르데파린, 에녹사파린, 레비파린 및 달테파린으로 이루어진 군에서 선택된 저분자량 헤파린의 조합물을 투여함을 포함하는, 포유동물의 혈전증의 치료 방법.

   <화학식 A>

   <화학식 B>
10. 제 9 항에 있어서, (i)와 (ii) 또는 (iii)의 조합물이 상승 효과를 제공하는 방법.
11. 제 9 항에 있어서, 투여되는 조합물이 GPIIb/IIIa 길항제와 저분자량 헤파린의 조합물인 방법.
12. 제 11 항에 있어서, GPIIb/IIIa 길항제가 치료적 유효량 이하로 투여되는 방법.
13. 제 11 항에 있어서, GPIIb/IIIa 길항제가 화학식 A의 화합물 또는 화학식 B의 화합물인 방법.
14. 제 11 항에 있어서, 저분자량 헤파린이 달테파린(프라그민)인 방법.
15. 제 11 항에 있어서, GPIIb/IIIa 길항제가 화학식 A의 화합물 또는 화학식 B의 화합물이고 저분자량 헤파린이 달테파린(프라그민)인 방법.
16. (i) 압식시맵, 엡티피바티드, 티로피반, 라미피반, 레프라다피반, 시브라피반, 오르보피반, 제밀로피반, 하기 화학식 A의 화합물 및 화학식 B의 화합물로 이루어진 군에서 선택된, 치료적 유효량 이하의 GPIIb/IIIa 길항제와 (ii) 아스피린 또는 (iii) 틴자파린, 세르토파린, 파르나파린, 나드로파린, 아르데파린, 에녹사파린, 레비파린, 프라그민 및 달테파린으로 이루어진 군에서 선택된 저분자량 헤파린의 조합물의, 혈전증 치료용 의약의 제조에서의 용도.

    <화학식 A>

    <화학식 B>
17. 혈전증에 걸린 포유동물에게 (i) 조직 플라스미노겐 활성화인자와 (ii) 화학식 B의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 포유동물의 혈전증의 치료 방법.

    <화학식 B>