KR20010058421A - 연골 세포의 제조 방법 - Google Patents
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Abstract
Description
Claims (29)
- (가) 환자로부터 연골조직을 채취하여 HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)에 콜라제나제(collagenase), 히알루로니다제(hyaluronidase), 트립신(trypsin) 및 EDTA를 함유한 콘드졸 용액으로 연골 세포를 분리하는 단계;(나) 상기 분리된 연골 세포들을 배양 용기에 분주하여 배양액을 일정한 주기로 교환하면서 상기 연골세포를 상기 배양 용기에 정착시키는 단계;(다) 상기 연골세포가 정착된 배양용기에 세포 배양액을 넣어 상기 연골세포를 증식시키는 단계; 및(라) 상기 증식된 연골세포들을 상기 배양용기들로부터 채취하여 배양 용기에 상기 연골세포를 분주하여 분화시키는 단계;를포함하는 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제1항에 있어서, 상기 (가) 단계는,(가-1) 횡단면 모양이 6~8각형인 강관으로 형성되어 생체의 경성 조직을 절취하기 위한 삽입부; 상기 삽입부와 연결되어 상기 삽입부에 충격력을 전달하는 둥근 파이프형의 막대; 상기 삽입부와 동일 모양을 가지고 상기 삽입부 내에 삽입되어 상기 삽입부에 끼인 생체 조직 조직을 밀어내는 머리부와 이 머리부와 연결되어 상기 머리부에 힘을 가할 수 있도록 상기 막대의 내부에 배치되는 봉으로 구성된 푸셔; 및 상기 막대의 가장자리부와 채결되어 회전력 및 충격력을 상기 삽입부에 전달할 수 있는 홈과 이 홈에 연장선 상에서 상기 막대로부터 상기 봉의 돌출된 가장자리부가 닿지않도록 하는 둥근 홈이 내부에 형성되는 동시에 외형이 상기 충격력과 회전력을 줄 수 있도록 형성된 캡부;를 구비한 경성 조직 채취기를 사용하여 상기 환자로부터 상기 연골조직을 채취하는 서브 단계; 및(가-2) 상기 채취된 연골조직에서 콘드졸 용액으로 기질부분을 제거하는 서브 단계;를포함하는 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제2항에 있어서,상기 삽입부는 원위부에서 근위부 쪽으로 갈수록 작아지도록 형성된 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제2항에 있어서, 상기 (가-2) 서브 단계는,(가-2-1) 상기 환자로부터 채취된 연골조직에서 채취시 어스러진 뼈조각들을 제거하고 소독하는 서브 단계;(가-2-2) 상기 소독된 연골 조직을 항생제가 함유된 HBSS 용액이 담근 상태에서 상기 연골 조직의 상면에 칼집을 내어 상기 연골 조직을 복수개의 조각들로 분할하는 서브 단계;(가-2-3) 상기 (가-2-2) 단계에 의해 분할된 상기 연골 조각들을 칼로 수평 방향으로 깎아내어 연골 조직의 조각들을 얻는 서브 단계;(가-2-4) 상기 (가-2-3) 단계에서 얻어진 연골 조직의 조각들을 소독하는 서브 단계; 및(가-2-5) 상기 연골 조직의 조각들이 담긴 용기에 상기 콘드졸 용액을 넣어서 상기 연골 조직의 조각들에서 세포를 제외한 기질부분을 녹인 다음 망사에 걸러서 상기 녹여진 기질부분을 제거하여 연골세포를 분리하는 서브 단계;를포함하는 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제4항에 있어서,상기 (가-2-2) 서브 단계는 칼날이 1~2mm 간격으로 복수개 배열된 다중 칼날 조직 절삭기로 눌러서 이루어지는 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제1항에 있어서,상기 (나) 단계에서 상기 연골세포들이 분주되는 배양용기는 교원섬유 제2형(collagen type 2)에 히알루로닉산(hyaluronic acid) 혹은/및 인슈린(insulin)이 함유된 콘왁스 Ⅰ이 피막된 배양용기인 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제1항 또는 제6항에 있어서,상기 (다) 단계에서 상기 세포배양액은 IGF-1(insulin-like growth factor type 1), TGF-β(transforming growth factor-β), b-FGF(basic fibroblast growth factor), EGF(epidermal growth factor), PDGF(platelet derived growth factor), a-FGF(acidic fibroblast growth factor), bone morphogeniic protein, keratinocyte growth factor, bepatocytic growth factor로 구성된 성장인자들 중 선택된 성장 인자들에 인슐린을 혼합한 케디아를 함유하는 연골 세포 배양 증식액인 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제1항 또는 제6항에 있어서,상기 (라) 단계에서 상기 분화를 위하여 상기 연골세포들이 분주되는 배양용기는 히알루로닉산(hyaluronic acid) 및 인슈린(insulin)이 함유된 콘왁스 Ⅱ가 피막된 배양용기인 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제1항에 있어서,상기 (다) 단계에서 상기 세포배양액은 IGF-1, (insulin-like growth factor type 1), TGF-β(transforming growth factor-β), b-FGF(basic fibroblast growth factor), EGF(epidermal growth factor) , PDGF(platelet derived growth factor), a-FGF(acidic fibroblast growth factor), bone morphogeniic protein, keratinocyte growth factor, bepatocytic growth factor로 구성된 성장인자들 중 선택된 성장 인자들에 인슐린을 혼합한 케비아를 함유하는 연골 세포 배양 증식액이고, 상기 (라) 단계에서 상기 분화를 위하여 상기 연골세포들이 분주되는 배양용기는 히알루로닉산(hyaluronic acid) 및 인슈린(insulin)이 함유된 콘왁스 Ⅱ가 피막된 배양용기인 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제1항에 있어서,상기 (라) 단계 다음에 상기 분화된 연골 세포들을 상기 배양 용기로부터 상기 환자의 환부에 주입할 수 있도록 밀폐 용기에 포장하는 단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- (가) 환자로부터 연골조직을 채취하여 이 연골조직에서 연골 세포를 분리하는 단계;(나) 상기 분리된 연골 세포들을 교원섬유 제2형(collagen type 2)에 히알루로닉산(hyaluronic acid) 혹은/및 인슈린(insulin)이 함유된 콘왁스 I이 피막된 세포 배양 용기에 분주하여 배양액을 일정한 주기로 교환하면서 상기 연골세포를 상기 콘왁스 Ⅰ이 피막된 배양 용기에 정착시키는 단계;(다) 상기 연골세포가 정착된 배양용기에 배양액을 넣어 상기 연골세포들을 증식시키는 단계; 및(라) 상기 증식된 연골세포들을 상기 배양용기들로부터 채취하여 배양 용기에 상기 연골세포를 분주하여 분화시키는 단계;를포함하는 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제11항에 있어서, 상기 (나) 단계는,(나-1) 상기 (가) 단계에서 분리된 상기 연골세포에 성장 배양액을 넣고 부유시킨 후 살아있는 연골 세포의 수를 계산하는 서브 단계;(나-2) 상기 살아있는 연골세포를 상기 Chonwax I이 피막된 세포 배양 용기들에 도말하여 분주하는 단계; 및(나-3) 상기 연골 세포 도말후 일정기간에 트립신(trypsin)/EDTA 용액으로 상기 (나-2) 단계에서의 상기 세포배양용기들에서 유리한 후 이 유리된 연골세포들을 콘왁스 I(Chonwax I)이 피막된 세포 배양 용기들에 각각 분주하는 서브 단계;를포함하는 것을 특징으로 하는 연골 세포의 제조 방법.
- 상기 제12항에 있어서,상기 성장 배양액은 FBS(fetal bovine serum)가 함유된 DMEM 배양액 혹은 F-12 배양액인 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제11항에 있어서,상기 (다) 단계에서 상기 세포배양액은 IGF-1(insulin-like growth factor type 1), TGF-β(transforming growth factor-β), b-FGF(basic fibroblast growth factor), EGF(epidermal growth factor), PDGF(platelet derived growth factor), a-FGF(acidic fibroblast growth factor), bone morphogeniic protein, keratinocyte growth factor, bepatocytic growth factor로 구성된 성장인자들 중 선택된 성장 인자들에 인슐린이 혼합된 케디아가 함유된 연골 세포 배양 증식액인 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제11항 또는 제14항에 있어서,상기 (라) 단계에서 상기 분화를 위하여 상기 연골세포들이 분주되는 배양용기는 히알루로닉산(hyaluronic acid) 및 인슈린(insulin)이 함유된 콘왁스 Ⅱ가 피막된 배양용기인 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제11항에 있어서,상기 (라) 단계 다음에 상기 분화된 연골 세포들을 상기 배양 용기로부터 상기 환자의 환부에 주입할 수 있도록 밀폐 용기에 포장하는 단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- (가) 환자로부터 연골조직을 채취하여 이 연골조직에서 연골 세포를 분리하는 단계;(나) 상기 분리된 연골 세포들을 세포 배양 용기에 분주하여 배양액을 일정한 주기로 교환하면서 상기 연골세포를 상기 배양 용기에 정착시키는 단계;(다) 상기 연골세포가 정착된 배양용기에 IGF-1(insulin-like growth factor type 1), TGF-β(transforming growth factor-β), b-FGF(basic fibroblast growth factor), EGF(epidermal growth factor), PDGF(platelet derived growth factor), a-FGF(acidic fibroblast growth factor), bone morphogeniic protein, keratinocyte growth factor, bepatocytic growth factor로 구성된 성장인자들 중 선택된 성장 인자들에 인슐린(insulin)을 혼합한 케디아(Chedia)를 함유하는 세포 배양액을 넣고 상기 연골세포를 증식시키는 단계; 및(라) 상기 증식된 연골세포들을 상기 배양용기들로부터 채취하여 배양 용기에 상기 연골세포를 분주하여 분화시키는 단계;를포함하는 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제17항에 있어서,상기 (라) 단계에서 상기 분화를 위하여 상기 연골세포들이 분주되는 배양용기는 히알루로닉산(hyaluronic acid) 및 인슈린(insulin)이 함유된 콘왁스 Ⅱ가 피막된 배양용기인 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제17항에 있어서,상기 (라) 단계 다음에 상기 분화된 연골 세포들을 상기 배양 용기로부터 상기 환자의 환부에 주입할 수 있도록 밀폐 용기에 포장하는 단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- (가) 환자로부터 연골조직을 채취하여 이 연골조직에서 연골 세포를 분리하는 단계;(나) 상기 분리된 연골 세포들을 세포 배양 용기에 분주하여 배양액을 소정의 주기로 교환하면서 상기 연골세포를 상기 배양 용기에 정착시키는 단계;(다) 상기 연골세포가 정착된 배양용기에 세포 배양액을 넣고 상기 연골세포들을 증식시키는 단계; 및(라) 상기 증식된 연골세포들을 상기 배양용기들로부터 채취하여 히알루로닉산 및 인슐린이 함유된 콘왁스 Ⅱ가 피막된 배양 용기에 연골세포를 분주하여 분화시키는 단계;를포함하는 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제20항에 있어서,상기 (라) 단계 다음에 상기 분화된 연골 세포들을 상기 배양 용기로부터 상기 환자의 환부에 주입할 수 있도록 밀폐 용기에 포장하는 단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- (가) 환자로부터 연골조직을 채취하여 HBSS(Hank's Balanced Salt Solution)에 collagenase, hyaluronidase, trypsin 및 EDTA를 함유한 콘드졸 용액으로 상기 채취된 연골조직에서 연골 세포를 분리하는 단계;(나) 상기 분리된 연골 세포들을 교원섬유 제2형(collagen type 2)에 히알루로닉산(hyaluronic acid) 혹은/및 인슈린(insulin)이 함유된 콘왁스 I이 피막된 세포 배양 용기에 분주하여 배양액을 일정한 주기로 교환하면서 상기 연골세포를 상기 콘왁스 Ⅰ이 피막된 배양 용기에 정착시키는 단계;(다) 상기 연골세포가 정착된 배양용기에 IGF-1(insulin-like growth factor type 1), TGF-β(transforming growth factor-β), b-FGF(basic fibroblast growth factor), EGF(epidermal growth factor), PDGF(platelet derived growth factor), a-FGF(acidic fibroblast growth factor), bone morphogeniic protein, keratinocyte growth factor, bepatocytic growth factor로 구성된 성장인자들 중 선택된 성장 인자들에 인슐린을 혼합한 케디아(Chedia)를 함유하는 세포 배양액을 넣고 상기 연골세포를 증식시키는 단계; 및(라) 상기 증식된 연골세포들을 상기 세포배양용기로부터 채취하여 히알루로닉산(hyaluronic acid) 및 인슈린(insulin)이 함유된 콘왁스 Ⅱ가 피막된 배양 용기에 상기 연골세포를 분주하여 분화시키는 단계;를포함하는 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제22항에 있어서, 상기 (가) 단계는,(가-1) 횡단면 모양이 6~8각형인 강관으로 형성되어 생체의 경성 조직을 절취하기 위한 삽입부; 상기 삽입부와 연결되어 상기 삽입부에 충격력을 전달하는 둥근 파이프형의 막대; 상기 삽입부와 동일 모양을 가지고 상기 삽입부 내에 삽입되어 상기 삽입부에 끼인 생체 조직 조직을 밀어내는 머리부와 이 머리부와 연결되어 상기 머리부에 힘을 가할 수 있도록 상기 막대의 내부에 배치되는 봉으로 구성된 푸셔; 및 상기 막대의 가장자리부와 채결되어 회전력 및 충격력을 상기 삽입부에 전달할 수 있는 홈과 이 홈에 연장선 상에서 상기 막대로부터 상기 봉의 돌출된 가장자리부가 닿지않도록 하는 둥근 홈이 내부에 형성되는 동시에 외형이 상기 충격력과 회전력을 줄 수 있도록 형성된 캡부;를 구비한 경성 조직 채취기를 사용하여 상기 환자로부터 상기 연골조직을 채취하는 서브 단계; 및(가-2) 상기 채취된 연골조직에서 상기 콘드졸 용액으로 기질부분을 제거하는 서브 단계;를포함하는 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제23항에 있어서,상기 삽입부는 원위부에서 근위부 쪽으로 갈수록 작아지도록 형성된 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제23항에 있어서, 상기 (가-2) 서브 단계는,(가-2-1) 상기 환자로부터 채취된 연골조직에서 채취시 어스러진 뼈조각들을 제거하고 소독하는 서브 단계;(가-2-2) 상기 소독된 연골 조직을 항생제가 함유된 HBSS 용액이 담근 상태에서 상기 연골 조직의 상면에 칼집을 내어 상기 연골 조직을 복수개의 조각들로 분할하는 서브 단계;(가-2-3) 상기 (가-2-2) 단계에 의해 분할된 상기 연골 조각들을 칼로 수평 방향으로 깎아내어 연골 조직의 조각들을 얻는 서브 단계;(가-2-4) 상기 (가-2-3) 단계에서 얻어진 연골 조직의 조각들을 소독하는 서브 단계; 및(가-2-5) 상기 연골 조직의 조각들이 들어있는 용기에 상기 콘드졸 용액을 넣어서 상기 연골 조직의 조각들에서 세포를 제외한 기질부분을 녹인 다음 망사에 걸러서 상기 녹여진 기질부분을 제거하여 연골세포를 분리하는 서브 단계;포함하는 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제25항에 있어서,상기 (가-2-2) 서브 단계는 칼날이 1~2mm 간격으로 복수개 배열된 다중 칼날조직 절삭기로 눌러서 이루어지는 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제22항에 있어서, 상기 (나) 단계는,(나-1) 상기 (가) 단계에서 분리된 상기 연골세포에 성장 배양액을 넣고 부유시킨 후 살아있는 연골 세포의 수를 계산하는 서브 단계;(나-2) 상기 연골세포를 상기 Chonwax I이 피막된 세포 배양 용기들에 도말하여 분주하는 단계; 및(나-3) 상기 연골 세포 도말후 일정기간에 트립신(trypsin)/EDTA 용액으로 상기 (나-2) 단계에서의 상기 세포배양용기들에서 유리한 후 이 유리된 연골세포들을 콘왁스 I(Chonwax I)이 피막된 세포 배양 용기들에 각각 분주하는 서브 단계;를포함하는 것을 특징으로 하는 연골 세포의 제조 방법.
- 상기 제27항에 있어서,상기 성장 배양액은 FBS(fetal bovine serum)가 함유된 DMEM 배양액 혹은 F-12 배양액인 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
- 제22항에 있어서,상기 (라) 단계 다음에 상기 분화된 연골 세포들을 상기 콘왁스 Ⅱ가 피막된 배양 용기로부터 상기 환자의 환부에 주입할 수 있도록 밀폐 용기에 포장하는 단계;를 더 포함하는 것을 특징으로 하는 연골세포의 제조 방법.
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WO2013002553A3 (ko) * | 2011-06-30 | 2013-02-28 | Kim Jeehyong | 반월상 연골 이식을 위한 연골세포의 증식방법 |
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J201 | Request for trial against refusal decision | ||
J301 | Trial decision |
Free format text: TRIAL DECISION FOR APPEAL AGAINST DECISION TO DECLINE REFUSAL REQUESTED 20040310 Effective date: 20060228 Free format text: TRIAL NUMBER: 2004101001050; TRIAL DECISION FOR APPEAL AGAINST DECISION TO DECLINE REFUSAL REQUESTED 20040310 Effective date: 20060228 |
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N231 | Notification of change of applicant | ||
S901 | Examination by remand of revocation | ||
GRNO | Decision to grant (after opposition) | ||
GRNT | Written decision to grant | ||
FPAY | Annual fee payment |
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FPAY | Annual fee payment |
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FPAY | Annual fee payment |
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