KR20010033385A - 펩티드, 사람 펩시노겐 ⅱ 또는 사람 펩신 ⅱ의 측정 방법및 측정용 키트 - Google Patents

펩티드, 사람 펩시노겐 ⅱ 또는 사람 펩신 ⅱ의 측정 방법및 측정용 키트 Download PDF

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Abstract

하기 화학식 I의 펩티드 또는 그 산 부가염.
I
상기식에 기재한 기호는 명세서에 기재한 바와 같다.
화학식 I의 화합물은 사람 펩신 II에 특이적인 기질이기 때문에 사람 펩신 II 또는 사람 펩시노겐 II의 측정에 이용할 수 있고, 위암, 위궤양 등의 위 질환의 진단에 유용하게 사용된다.

Description

펩티드, 사람 펩시노겐 Ⅱ 또는 사람 펩신 Ⅱ의 측정 방법 및 측정용 키트 {PEPTIDES, METHOD FOR ASSAYING HUMAN PEPSINOGEN Ⅱ 0R HUMAN PEPSIN Ⅱ, AND ASSAYING KIT}
펩시노겐의 분비량은 위산 분비량과 거의 일치하고 있으며, 또한 사람 혈중 또는 소변 중의 사람 펩시노겐도 위 펩시노겐 분비량과 일치하고 있는 것으로 알려져 있다. 혈액 또는 소변 등의 위액을 제외한 체액 속에서는 펩시노겐의 상태로 존재하고, 한편 위액 속에서는 펩신의 상태로 존재한다.
위축성 위염의 경우 사람 혈중 또는 소변 중의 사람 펩시노겐 I이 감소하고, 위궤양경우는 사람 펩시노겐 I 및 사람 펩시노겐 II가 함께 증가하는 것으로 개시되어 있다(일본국 특허 공개 평7-304800호). 또한, 위암에서는 사람 펩시노겐 I 및 사람 펩시노겐 II/I 비가 감소한다고도 한다(Jpn. J. Cancer Res., 80, 111-114(1989)).
또, 위궤양, 십이지장궤양 환자의 헬리코박터 피롤리 균을 제거하는 요법에 있어서, 균제거 판정의 지표로서 특히 혈청 펩시노겐 II치 및 펩시노겐 I/II 비가 주목받고 있다. 즉, 헬리코박터 피롤리 균제거 성공예에서는 비균제거예에 비하여 유의적으로 혈청 펩시노겐 II치가 감소하고, 펩시노겐 I/II 비가 상승하고 있다(Prog. Med., 15, 1862-1868(1995)).
따라서, 사람 혈중 또는 소변 중의 사람 펩시노겐 II치의 측정은 위암, 위궤양, 십이지장궤양 등의 질환의 조기 진단을 가능케한다.
사람 펩시노겐의 활성화에 의해서 얻어지는 사람 펩신 활성의 측정법으로는 소변 및 혈청에서는 사람 혈청 단백 등을 이용하여 그 분해 활성으로 평가하는 방법이 알려져 있고(Clin. Chem., 15, 1, 42-55(1969)), 임상 의의도 논의되고는 있지만 그 측정에 드는 시간이 매우 길며, 측정 정밀도 또한 나쁘기 때문에 실용에는 이르지 못하고 있다. 더구나, 어디까지나 단백의 분해 활성이기 때문에 펩신 I과 펩신 II의 전체적인 활성을 반영하고 있어 사람 혈청 중의 펩시노겐 II를 특이적으로 측정하는 것은 불가능하다.
또한 최근, 소변 중의 사람 펩시노겐(우로펩신)을 내산성 효소의 활성화 펩신에 의한 불활성화작용(deactivation)을 이용하여 간접적으로 측정하는 기술(일본국 특허 공개 평7-155198호)도 고안되었지만, 이는 펩신 II에 특이성이 있는 기질을 이용한 측정법은 아니다. 또한 소변 중에 존재하는 펩시노겐은 펩시노겐 I이라고 지칭되고 있지만, 병의 용태에 따라서는 소변 중에 펩시노겐 II도 출현하기 때문에 정확한 평가를 하기 어렵다. 더구나, 사람 혈청 중의 펩시노겐 II를 특이적으로 측정하는 것은 불가능하다.
펩시노겐 II를 측정하는 방법으로는 그 단백량을 특이적 항체를 이용하여 측정하는 방사 면역분석법(radio immunoassay)(핵의학, Vol.26, No.9, 1217-l221(1989)) 및 효소 면역분석법(enzyme immunoassay)(일본국 특허 공개 평7-304800호)으로 실용화되어 있지만, 방사성 물질을 이용함에 따른 측정 시설이나 폐기물에 의한 오염의 문제, 나아가 측정에 드는 시간이 길거나 조작이 번잡하여 여러 가지 제약을 받고 있다.
또, 합성 기질을 이용하여 사람 펩신 II를 측정하는 방법이 이미 제시된바 있다. 예컨대, (A) J. Med. Chem., 36, 2614(1993)에는 하기식 (A-1)의 펩티드를 기질로서 이용하여, 어떤 종류 화합물의 사람 펩신 II에 대한 효소 저해 실험을 수행한 것이 기재되어 있다. 즉, 하기식 (A-1)의 펩티드를 사람 펩신 II으로 절단하여 얻은 하기식 (A-2)의 펩티드를 234∼324 nm에서의 흡광도의 변화를 지표로 효소 저해 활성을 측정하고 있다.
LysProAlaAlaPhePhe(NO2)ArgLeu (A-1)
(식에서, Phe(NO2)는 p-니트로페닐알라닌 잔기이다)
Phe(NO2)ArgLeu (A-2)
(상기식에서, Phe(NO2)는 상기와 동일한 의미이다)
그러나, 이 문헌에는 상기식 (A-1)의 펩티드가 사람 펩신 II에 대하 기질이 될 수 있는지의 여부에 대한 기재는 없고, 이들 펩티드가 사람 펩신 II에 특이적인지의 여부는 분명하지 않게 되어 있다. 또한 발색단(發色團)이 Phe(NO2)이기 때문에, 예컨대 본 발명에서 이용하는 p-니트로아닐린(이하, pNA라 약칭함) 등의 아닐린 유도체에 비해서, 흡광 계수를 볼때 감도가 1/10 이하라고 생각된다. 더욱이, 234∼324 nm에서의 흡광도 측정이기 때문에 자동 분석기로는 측정할 수 없는 결점이 있다.
(B) J. Biochem., 265, 871-878(1990)에는 하기식 (B-1)의 펩티드를 기질로서 이용하여, 어떤 종류 화합물의 사람 펩신 II에 대한 효소 저해 실험을 수행한 것이 기재되어 있다. 즉, 하기식 (B-1)의 펩티드를 사람 펩신 II으로 절단하여 얻은 하기식 (B-2)의 펩티드를 234∼324 nm에서의 흡광도 변화를 지표로 효소 저해 활성을 측정하고 있다.
LysProValValPhePhe(NO2)ArgLeu (B-1)
Phe(NO2)ArgLeu (B-2)
(상기식에서, Phe(NO2)는 상기와 동일한 의미이다)
그러나, 이 문헌에는 상기식 (B-1)의 펩티드가 사람 펩신 II에 대한 기질이 될 수 있는지의 여부에 대한 기재는 없고, 이들 펩티드가 사람 펩신 II에 특이적인가의 여부는 분명하게 되어 있지 않다. 또한 발색단이 Phe(NO2)이기 때문에, 예컨대 본 발명에서 이용하는 p-니트로아닐린(이하, pNA라 약칭함) 등의 아닐린 유도체에 비해서, 흡광 계수를 볼때 감도가 1/10 이하라고 생각된다. 더욱이, 234∼324 nm에서의 흡광도 측정이기 때문에 자동 분석기로는 측정할 수 없는 결점(문헌 (A)와 같은 결점)이 있다.
또, (C)는 체코슬로바키아 특허 CS-261172에 있어서, 하기식 (C-1)의 펩티드를 기질로서 이용하여, 펩신 I, 펩신 II 키모신의 효소 활성을 측정하는 것이 기재되어 있다.
X-A-B-Phe-D-pNA (C-1)
(상기식에서, X는 수소, C3∼5 카르복시알킬카르보닐 또는 C1∼5 알킬카르보 닐이고,
A는 피로글루타민산(이하, pGlu라 약칭함), Asp, Glu, Gly 잔기 또는 2-옥소 이미다졸리딘-1-일-카르보닐이며,
B는 His, Gly 또는 Pro 잔기이고,
D는 Phe, Leu, Nle, Met 또는 S-C1∼3 알킬-Cys 잔기이며,
pNA는 p-니트로아닐린 잔기를 나타낸다.)
그러나, 여기에는 사람 펩신 II에 대한 특이성에 관한 기재 및 시사는 없다.
또, 실시예에서는 하기식 (C-2)의 펩티드를 이용하여 돼지 펩신의 효소 활성을 측정할 수 있지만, 이 돼지 펩신은 정제되어 있지 않고, 펩신 I 및 펩신 II의 혼합물이라 생각된다. 따라서, 이 펩티드가 사람 펩신 II에 대하여 특이성을 갖고 있다고는 생각되지 않는다.
pGluHisPhePhe-pNA (C-2)
(상기식에서, pGlu 및 pNA는 상기와 동일한 의미임)
(D) Clinica Chimica Acta 213, 103-110(1992)에 있어서, 하기식 (D-1)으로 나타내어지는 펩티드를 기질로서 이용하여, 펩신 I, 펩신 II, 키모신의 효소 활성을 측정한 것이 기재되어 있다. 그러나, 사람 펩신 II에 대한 특이성에 관한 기재도 시사도 없다.
Xd-(AAd)nd-Phe-Dd-pNA (D-1)
(상기식에서, Xd는 pGlu, Glt이고, AAd는 N 말단 기질용 배열이며, nd는 1 또는 2이고, Dd는 Phe, Nle 또는 Met 잔기이며, 그 밖의 기호는 상기와 동일한 의미이다)
또한, 실험예에서는 하기식 (D-2), (D-3)의 펩티드를 이용하여 돼지 펩신의 효소 활성을 측정하고 있지만, 이 돼지 펩신은 정제되어 있지 않고, 펩신 I 및 펩신 II의 혼합물이라고 생각된다. 따라서, 이 기질이 사람 펩신 II에 대하여 특이성을 갖고 있다고는 생각되지 않는다.
pGluHisPhePhe-pNA (D-2), 또는
pGluHisPheMet-pNA (D-3)
(상기식에서, pGlu 및 pNA는 상기와 동일한 의미이다)
(E) Anal. Biochem., 234, 113(1996)에서는 하기식 (E-1) 또는 (E-2) 의 펩티드를 기질로서 이용하여, 형광 검출법으로, 사람 펩신 I, 사람 펩신 II, 사람 카텝신 D 및 HIV 프로테아제의 효소 활성을 측정한 것이 기재되어 있다. 이 문헌에서는 펩티드를 수식함으로써, 형광 강도가 어떻게 변화하는지 검토하고 있다. 특히, 식 (E-1)의 펩티드가 사람 펩신 I에 대하여 특이성을 갖는 것이 실험 결과에서 나타났지만, 상기식 (E-1) 또는 (E-2)의 펩티드가 사람 펩신 II에 대하여 특이성을 갖는다고는 생각되지 않는다.
AbzAlaAlaPhePheAlaAla-Ded (E-1), 또는
AbzAlaAlaPhePheAlaAla-pNA (E-2)
(상기 각 식에서, Abz는 o-아미노벤조일을 나타내고, Ded는 N-2,4-디니트로페닐에틸렌디아민을 나타내고, pNA는 상기와 동일한 의미이다)
(F) J. Biol. Chem., 244, 5, 1085-1091(1969)에서는 하기식 (F-1)∼(F-5) 의 펩티드를 기질로서 이용하여, 사람 펩신 II를 분별하여 측정하고 있다. 그러나, 모두 측정 시간이 걸리고, 번잡한 조작이 필요하며, 또한 사람 검체를 측정하기 위해서는 정밀도 및 감도 모두 낮기 때문에 임상 검체를 측정하기에는 요원하여 실용화에는 이르지 못하고 있다.
Z-TyrAla (F-1),
Z-TyrThr (F-2),
Z-TyrLeu (F-3),
Z-TyrSer (F-4), 또는
Z-TrpAla (F-5)
(상기식에서, Z는 벤질옥시카르보닐기이다)
상기 5건의 선행 기술 (A)∼(F) 중에서 기재되어 있는 기질은 본 발명의 기질(펩티드)과는 전혀 다른 화합물이다. 즉, 화학식 I의 본 발명펩티드 중의 하기식의 아미노산은 잘 알려져 있는 필수 아미노산(예컨대, Phe, Tyr)이 아니라, 할로겐 치환 페닐알라닌 또는 2-나프틸알라닌(나프틸은 할로겐으로 치환되더라도 좋음)인 점에 특징이 있으며, 그와 같은 기는 상기 6건의 선행 기술 (A)∼(F) 중에서는 찾을 수 없다.
I
(상기식에서, 모든 기호는 상기와 동일한 의미이다)
[발명의 요약]
본 발명자는 이들 종래 기술의 결점을 해결하여, 사람 펩신 II에 대하여 보다 고감도(효소 반응 속도 즉 펩신 II의 기질 분해 속도가 빠르고, 및/또는 발색이 좋음)로 특이적인 기질을 찾아내기 위해 예의 검토를 거듭한 결과, 사람 펩신 II와의 반응 조건에 있어서 측정 감도가 좋고 또한 특이성의 매우 높은 기질(펩티드)의 합성에 성공하였고, 나아가 이 기질을 이용함으로써 종래 기술에 비해서 매우 단시간 내에 펩신 II의 측정을 가능케 하므로써, 범용 생화학용 자동 분석기를 이용하는 펩시노겐 II 및 펩신 II의 측정을 가능하게 하였다.
본 발명은 하기 1) 2) 3)에 관한 것이다:
1) 하기 화학식 I의 펩티드 또는 그 산 부가염,
I
(상기식에서, 모든 기호는 상기와 동일한 의미이다)
2) 검체 중의 사람 펩시노겐 II를 활성화하여 얻은 사람 펩신 II 또는 검체 중의 사람 펩신 II으로, 상기 1)에 기재한 화학식 I (식에서, 모든 기호는 상기와 동일한 의미임)의 펩티드 또는 그 산 부가염을 절단하여 얻은 하기 화학식 Ⅱ의 아미노산 유도체를 아미노펩티다아제로 소화하여, 얻은 식 Z-H의 아닐린 유도체, 아미노쿠마린 유도체 또는 아미노나프탈렌 유도체를 검출하는 것을 특징으로 하는 사람 펩시노겐 II 또는 사람 펩신 II의 측정 방법
Ⅱ
(상기식에서, 모든 기호는 상기와 동일한 의미임) 및, 3) 기질로서 상기 1)에 기재한 화학식 I의 펩티드 또는 그 산 부가염 및 아미노펩티다아제를 포함하는 것을 특징으로 하는 사람 펩시노겐 II 또는 사람 펩신 II 측정용 키트.
본 발명은 위암, 위궤양 등의 위 질환 진단의 지표 되는 사람의 체액(예컨대, 위액, 혈액, 소변 등을 들 수 있음)중의 사람 펩신 II 또는 사람 펩시노겐 II의 측정 방법 및 그를 위한 기질로서 이용되는 펩티드에 관한 것이다.
더욱 상세하게는
1) 하기의 1) 2) 3)에 관한것이다:
화학식 I의 펩티드 또는 그 산 부가염.
상기식에서, Q는 Qa-(AA)n-기[기 중, AA는 L-아미노산 잔기이며, n은 0 또는 1∼15의 정수이고, Qa는 수소, C1∼4 알킬, 아미노기의 보호기, D- 또는 L- 아미노산 잔기 또는 NH2-(CH2)r-CO-기(기 중, r은 2∼7의 정수임)를 나타냄)] 이고,
R1및 R2는 (i) 수소 또는 할로겐을 나타내거나 혹은 (ii) R1, R2및 결합하 고 있는 불포화 결합과 함께 할로겐으로 치환 가능한 방향 탄소 고리이며,
R3은 수소 또는 할로겐이고,
R4는 수소, C1∼3 알킬 또는 히드록시메틸을 나타내고,
EE는 D- 또는 L-아미노산 잔기를 나타내고,
m은 0 또는 1을 나타내고,
Z는 아닐린 유도체 잔기, 아미노쿠마린 유도체 잔기 또는 아미노나프탈렌 유 도체 잔기를 나타낸다.
단, (1) n이 2 이상일 때, 각각의 AA는 동일하거나 다르며, (2) R1, R2, R3모두가 수소인 화합물은 제외함)로 나타난다.
2) 검체 중의 사람 펩시노겐 II를 활성화하여 얻은 사람 펩신 II 또는 검체 중의 사람 펩신 II에 의해서, 상기 1)에 기재한 화학식 I(식에서, 모든 기호는 상기와 동일한 의미임)의 펩티드 또는 그 산 부가염을 절단하여 얻은 하기 화학식 Ⅱ의 아미노산 유도체를 아미노펩티다아제로 소화하여, 얻은 식 Z-H의 아닐린 유도체, 아미노쿠마린 유도체 또는 아미노나프탈렌 유도체를 검출하는 것을 특징으로 하는 사람 펩시노겐 II 또는 사람 펩신 II의 측정 방법,
(식에서, 모든 기호는 상기와 동일한 의미를 나타냄) 및
3) 기질로서 상기 1)에 기재한 화학식 I(식에서, 모든 기호는 상기와 동일한 의미임)의 펩티드 또는 그 산 부가염 및 아미노펩티다아제를 포함하는 것을 특징으로 하는 사람 펩시노겐 II 또는 사람 펩신 II 측정용 키트.
도 1은 펩시노겐 II 농도(ng/㎖)에 대하여 흡광도 변화를 플롯한 실시예 4에 의한 검량선을 나타낸 도면이다.
도 2는 시판되는 펩시노겐 II 측정용 키트(다이나봇트사 제조)를 이용한 혈청 중의 펩시노겐 II의 측정법(RIA법)과 본 발명의 측정 방법의 상관 관계를 나타내는 그래프이다. 횡축은 RIA법의 측정치(ng/㎖)를 나타내고, 종축은 본 발명의 방법에 의한 흡광도 변화를 나타낸다.
도 3은 펩시노겐 II 농도(ng/㎖)에 대하여 흡광도 변화를 플롯한 실시예 6에 의한 검량선을 나타낸 도면이다.
도 4는 시판되는 펩시노겐 II 측정용 키트(다이나봇트사 제조)를 이용한 혈청 중의 펩시노겐 II의 측정법(RIA법)과 본 발명 방법과의 상관 관계를 나타낸 것으로 횡축은 RIA법의 측정치(ng/㎖)를 나타내고, 종축은 본 발명의 방법에 의한 흡광도 변화를 나타낸다.
본 발명의 측정 방법 대상이 되는 검체란 사람 펩시노겐 II의 농도 및 사람 펩신 II의 효소 활성을 측정하고 싶은 것인 한 특별히 제한은 없다. 예컨대 사람의 체액(예컨대, 위액, 혈액 또는 소변 등)이 포함된다. 혈액 또는 소변 등의 위액을 제외한 체액 속에서는 펩시노겐 II의 상태로 존재하고, 한편 위액 속에서는 펩신 II의 상태로 존재한다.
본 명세서에 기재되어 있는 3문자로 이루어진 약호는 일반적으로 자주 사용되고 있는 아미노산(특별히 안 될 이유가 없는 한, L형의 α-아미노산을 의미함)을 나타내는 3문자 표기이며, 그 정의는 다음과 같다.
Gly=글리신,
Ala=알라닌,
Val=발린,
Leu=로이신,
Ile=이소로이신,
Ser=세린,
Thr=트레오닌,
Asp=아스파라긴산,
Glu=글루타민산,
Asn=아스파라긴,
Gln=글루타민,
Lys=리신,
Arg=아르기닌,
Cys=시스테인,
Met=메티오닌,
Phe=페닐알라닌,
Tyr=티로신,
Trp=트립토판,
His=히스티딘,
Pro=프롤린.
상기 이외의 약호에 관해서는 다음에 기재한 바와 같다.
Sar=Nα-메틸-글리신,
Me-Val=Nα-메틸-발린,
Me-Ala=Nα-메틸-알라닌,
Nle= 놀로이신,
γ-Abu=γ-아미노부탄산,
Glt=클루타릴(-CO(CH2)3CO-),
pNA=p-니트로아닐린 잔기,
Ac=아세틸,
3,4-DCP=3,4-디클로로페닐,
m-ASD=m-아니시딘 잔기,
DCHA=3,5-디클로로-4-히드록시아닐린 잔기.
Q 중의 Qa및 후술하는 Qb가 나타내는 C1∼4 알킬이란, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸 또는 이들의 이성체를 의미한다.
Q 중의 Qa가 나타내는 아미노기의 보호기로서는 예컨대 C1∼6 알킬카르보닐, Cl∼6 알킬설포닐, 벤질옥시카르보닐, tert-부톡시카르보닐, 9-플루오레닐메톡시카르보닐 또는 벤조일 또는 그 유도체(벤질옥시카르보닐 또는 벤조일의 각 기 중의 벤젠 고리가 무치환이거나 또는 니트로기, 아미노기, 1개 또는 2개의 C1∼6 알킬로 치환된 아미노기, C1∼6 히드록시알킬아미노기, 카르복실기, 수산기, 할로겐, C1∼6 알킬기, C1∼6 알콕시기, 티올기, 설포닐기, C1∼6 알킬설포닐기, 또는 식 -CH2CH2COOH 또는 식 -CH=CH-COOH로 나타나는 기로 이루어지는 군에서 선택되는 1∼5개의 치환기로 치환된 벤젠 고리를 갖는 기를 의미함)를 들 수 있다.
Q 중의 Qa가 나타내는 NH2-(CH2)r-CO-기란 β-아미노프로피온산 잔기(β-Ala-), γ-아미노부탄산 잔기(γ-Abu-), δ-아미노펜탄산 잔기, δ-아미노카프론산 잔기, 6-아미노헵탄산 잔기, 7-아미노옥탄산 잔기를 의미한다.
Q 중의 AA, EE가 나타내는 아미노산 잔기란, 20개의 필수 아미노산(Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Asp, Glu, Asn, Gln, Lys, Arg, Cys, Met, Phe, Tyr, Trp, His, Pro) 잔기를 의미한다.
이들 아미노산 중,
1) Gly, Ala, Val, Leu, Ile, Ser, Thr, Asp, Glu, Asn, Gln, Lys, Arg, Cys, Met는 지방족 아미노산이고,
2) Phe, Tyr는 방향족 아미노산이고,
3) Trp, His, Pro는 복소환식 아미노산이다.
1)의 지방족 아미노산 중,
a) Val, Leu, Ile는 분지쇄 아미노산,
b) Ser, Thr는 히드록시아미노산,
c) Asp, Glu는 산성 아미노산,
d) Asn, Gln은 아미드,
e) Lys, Arg는 염기성 아미노산,
f) Cys, Met는 황 함유 아미노산이다.
Q로서, 바람직하게는
Qb-(AA)s-A1-기[기 중, A1은 Gly, Ala, Ser, Asp, Glu, Asn, Gln 또는 Met 잔기이며, s는 정수 2, 3, 4 또는 5이고, Qb는 수소, C1∼4 알킬, C1∼6 알킬카르보닐, D- 또는 L-아미노산 잔기 또는 NH2-(CH2)r-CO-기(기 중, r은 상기와 동일한 의미임)이며, 각 AA는 상기와 동일한 의미임]로 나타나는 폴리펩티드이며, 보다 바람직하게는
Qb-(AA)t-A2-A11-기[기 중, A11은 Gly, Ala, Glu, Asn 잔기이며, A2는 Gly, Ala, Leu, Ser, Asp, Glu, Asn 또는 Gln 잔기이고, t는 정수 1, 2, 3 또는 4이며, Qb및 각 AA는 상기와 동일한 의미임]로 나타나는 폴리펩티드이며, 더욱 바람직하게는
Qb-(AA)t-A22-A11-기[기 중, A11은 Gly, Ala, Glu 또는 Asn 잔기이며, A22는 Gly, Ser, Glu 또는 Gln 잔기이고, t, Qb및 각 AA는 상기와 동일한 의미임]로 나타나는 폴리펩티드이다.
R1, R2및 결합하고 있는 불포화 결합과 함께 이루는 방향 탄소 고리로서는 벤젠 고리, 나프탈랜 고리 등을 들 수 있다. 바람직하게는 벤젠 고리이다.
m은 어느 것이나 바람직하다.
식 Z-H로 나타내어지는 아닐린 유도체, 아미노쿠마린 유도체, 아미노나프탈렌 유도체란 각각 무치환의 아닐린, 아미노쿠마린, 아미노나프탈렌 또는 각각의 기 중의 벤젠 고리, 쿠마린 고리, 나프탈랜 고리가 니트로기, 아미노기, 1개 또는 2개의 C1∼6 알킬로 치환된 아미노기, C1∼6 히드록시알킬아미노기, 카르복실기, 수산기, 할로겐, C1∼6 알킬기, C1∼6 알콕시기, 티올기, 설포닐기, C1∼6 알킬설포닐기 또는 식 -CH2CH2COOH 또는 -CH=CH-COOH로 표기되는 기로 이루어지는 군에서 선택되는 1∼5개의 치환기로 치환된 아닐린, 아미노쿠마린, 아미노나프탈렌을 의미한다. 이 치환기의 개수는 바람직하게는 1개, 2개 또는 3개이다.
상기 식 Z-H로 표기되는 아닐린 유도체, 아미노쿠마린 유도체 또는 아미노나프탈렌 유도체 및 Q 중의 Qa가 나타내는 아미노기의 보호기의 설명 중의 C1∼6 알킬 및 C1∼6 알킬카르보닐(후술하는 Qb가 나타내는 경우도 포함함) 중, C1∼6 알킬설포닐 중, C1∼6 히드록시알킬아미노 중의 C1∼6 알킬이란, 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸 또는 헥실 또는 이들의 이성체를 의미한다.
상기 식 Z-H의 아닐린 유도체, 아미노쿠마린 유도체 또는 아미노나프탈렌 유도체 및 Q 중의 Qa가 나타내는 아미노기의 보호기의 설명 중의 C1∼6 알콕시란, 메톡시, 에톡시, 프로폭시, 부톡시, 펜틸옥시 또는 헥실옥시 또는 이들의 이성체를 의미한다.
식 Z-H로 표기되는 아닐린 유도체로서는 예컨대, p-니트로아닐린, m-아니시딘, 3,5-디클로로-4-히드록시아닐린, 3,5-디브로모-4-히드록시아닐린, N',N'-디에틸페닐렌디아민 또는 3-카르복시-4-히드록시아닐린을 들 수 있다.
식 Z-H로 표기되는 아미노쿠마린 유도체, 아미노나프탈렌 유도체로서는 예컨대, 7-아미노-4-메틸쿠마린, 4-메틸-2-아미노나프탈렌, 4-메톡시-2-아미노나프탈렌을 들 수 있다.
식 Z-H의 기로서는 바람직하게는 p-니트로아닐린, m-아니시딘, 3,5-디클로로-4-히드록시아닐린, 7-아미노-4-메틸쿠마린, 4-메틸-2-아미노나프탈렌, 4-메톡시-2-아미노나프탈렌이며, 보다 바람직하게는 p-니트로아닐린, m-아니시딘, 3,5-클로로-4-히드록시아닐린이다.
본 발명 펩티드는 산 부가염이라도 좋으며, 이러한 산 부가염으로는 수용성인 것이 바람직하다. 예컨대 염산염, 브롬화수소산염, 인산염, 황산염, 질산염 등의 무기산염 및 호박산염, 시트르산염, 젖산염, 말산염, 벤젠설폰산염, 아세트산염, 트리플루오로아세트산염, 트리플루오로메탄설폰산염 등의 유기산염 등을 들 수 있다. 바람직하게는 트리플루오로아세트산염, 트리플루오로메탄설폰산염이다.
[본 발명 펩티드의 제법]
본 발명의 기질로서 이용하는 펩티드는 일반적으로 펩티드 화학에 있어서 잘 알려져 있는 방법에 의해 합성된다. 예컨대, 후술하는 반응 공정식 1 또는 실시예에 기재한 바와 같이, 맨처음에 고상(固相)이 되는 수지(예컨대, 옥심 수지)에, 하기 화학식 Ⅲ의 아미노산을 결합시키고, 계속해서 축차적으로 아미노산을 커플링해 나가는 방법으로 합성된다.
상기식에서, Qd는 아미노기의 보호기이고, 다른 기호는 상기와 동일한 의미를 나타냄
또한, 후술하는 반응 공정식 2에 기재한 바와 같이 맨처음에 발색기가 되는 식 Z-H로 나타내어지는 아닐린 유도체, 아미노쿠마린 유도체 또는 아미노나프탈렌 유도체를 하기 화학식 Ⅳ-1 또는 Ⅳ-2 의 아미노산에 결합시키고, 계속해서 축차적으로 아미노산을 커플링하여, 최종적으로 수지로부터 잘라내고, 경우에 따라 보호기를 이탈하여 합성하거나, 또는 미리 수개의 아미노산을 커플링하여 얻은 여러 종류의 부분 폴리펩티드를 순차로 커플링하는 방법에 의해 합성할 수도 있다.
또는
[반응 공정식 1]
상기반응 공정식 1 중, Qd, Q1, Q2, Qn은 아미노기의 보호기이며, OxR은 옥심 수지이고, AA1, AA2, AAn은 아미노산 잔기이며, 그 밖의 기호는 상기와 동일한 의미를 나타낸다. 또, (축합), (Q1의 이탈) 등, 괄호 안의 반응은 임의의 반응임을 의미한다.
[반응 공정식 2]
상기반응 공정식 2 중, Qaa, Qbb, Qcc, Q1, …Qn은 아미노기의 보호기이며 나타내고, 그 밖의 기호는 상기와 동일한 의미를 나타낸다. 또, (축합), (Q1의 이탈) 등, 괄호 안의 반응은 임의의 반응임을 의미한다.
상기한 커플링 또는 결합 반응을 행할 때에는 반응에 직접 관여하지 않는 아미노기 및 카르복실기는 펩티드 합성에서 통상 사용되는 보호기로 보호한다. Qd, Q1, Q2, Qn, Qaa, Qbb, Qcc의 아미노기 보호기로서는 예컨대, 벤질옥시카르보닐기(CBZ), tert-부톡시카르보닐기(Boc) 또는 9-플로오레닐메톡시카르보닐기(Fmoc) 등을 들 수 있다. Arg나 Lys를 반응에 이용할 때에는 Arg의 δ-구아니디노기, Lys의 ε-아미노기를 보호기로 보호한다. Rc로 표기되는 카르복실기의 보호기로서는 예컨대, 벤질기 또는 tert-부틸기 등의 에스테르기를 들 수 있다. Glu를 반응에 이용할 때는 그 측쇄의 카르복실기를 보호기로 보호한다. 이들 보호기는 반응후 공지의 방법에 의해서 이탈할 수 있다.
발색기 및 아미노산의 커플링에는 펩티드 합성에 통상 이용되는 방법, 예컨대
(1) 산 할라이드를 이용하는 방법,
(2) 혼합산 무수물을 이용하는 방법,
(3) 축합제(EDC, PyBrop, DCC 등)를 이용하는 방법 등을 들 수 있다.
이들 방법을 구체적으로 설명하면,
(1) 산 할라이드를 이용하는 방법은, 예컨대 아미노기를 보호한 아미노산(예컨대, 식 Q1-AA1-OH, 식 Q2-AA2-OH, 식 Qn-AAn-OH 등의 아미노산)을 불활성 유기 용매(클로로포름, 염화메틸렌, 디에틸에테르, THF(테트라히드로푸란) 등) 중 또는 무용매로, 산 할라이드(옥사릴클로라이드, 티오닐클로라이드 등)와 -20℃∼환류 온도로 반응시켜 얻은 산 할라이드를 삼급 아민(피리딘, 트리에틸아민, 디메틸아닐린, 디메틸아미노피리딘, 디이소프로필에틸아민 등)의 존재하에서 식 Z-H의 아닐린 유도체, 아미노쿠마린 유도체 또는 아미노나프탈렌 유도체, 또는 커플링하여, 아미노기의 보호기를 이탈한 (폴리)펩티드(예컨대, H-EE-Z,
등의 (폴리)펩티드)와 불활성 유기 용매(클로로포름, 염화메틸렌, 디에틸에테르, THF 등) 중에서 0∼40℃에서 반응시킴으로써 행해진다.
(2) 혼합 산 무수물을 이용하는 방법은, 예컨대, 아미노기를 보호한 아미노산(예컨대, 식 Q1-AA1-OH, 식 Q2-AA2-OH, 식 Qn-AAn-OH 등의 아미노산)을 불활성 유기 용매(클로로포름, 염화메틸렌, 디에틸에테르, THF 등) 중에서 또는 무용매로, 삼급 아민(피리딘, 트리에틸아민, 디메틸아닐린, 디메틸아미노피리딘 등)의 존재하에서 산 할라이드(피바로일클로라이드, 토실클로라이드, 메실클로라이드 등), 또는 산 유도체(클로로포름산에틸, 클로로포름산이소부틸 등)와 0∼40℃에서 반응시켜 얻은 혼합 산 무수물과 식 Z-H의 아닐린 유도체, 아미노쿠마린 유도체 또는 아미노나프탈렌 유도체 또는 커플링하여 아미노기의 보호기를 이탈한 (폴리)펩티드(예컨대, 식 H-EE-Z,
등의 (폴리)펩티드)를 불활성 유기 용매(클로로포름, 염화메틸렌, 디에틸에테르, THF 등) 중에서 0∼70℃에서 반응시킴으로써 행해진다.
(3) EDC(1-(3-디메틸아미노프로필)-3-에틸카르보디이미드), PyBrop(브로모-트리스-피롤리디노-포스포늄헥사플루오로포스페이트), DCC(디시클로헥실카르보디이미드) 등의 축합제를 이용하는 방법은 예컨대, 아미노기를 보호한 아미노산(예컨대, 식 Q1-AA1-OH, 식 Q2-AA2-OH, 식 Qn-AAn-OH 등의 아미노산)과 식 Z-H의 아닐린 유도체, 아미노쿠마린 유도체 또는 아미노나프탈렌 유도체 또는 커플링하여, 아미노기의 보호기를 이탈한 (폴리)펩티드(예컨대, 식 H-EE-Z,
등의 (폴리)펩티드)를 불활성 유기 용매(클로로포름, 염화메틸렌, 디에틸에테르, THF 등) 중 또는 무용매로 삼급 아민(피리딘, 트리에틸아민, 디메틸아닐린, 디메틸아미노피리딘, 디이소프로필에틸아민 등)의 존재하 또는 삼급 아민을 이용하지 않고서 EDC, PyBrop, DCC 등을 이용하여 0∼40℃에서 반응시킴으로써 행해진다.
이들 (1), (2) 및 (3)의 반응은 모두 불활성 가스(아르곤, 질소 등) 분위기하에서 무수 조건으로 행하는 것이 바람직하다.
보호기의 이탈은 공지된 방법에 의해 행해진다. 예컨대, CBZ기 또는 Bzl기의 제거는 수소 분위기하에 유기 용매(메탄올, 에탄올, THF 등) 중에서 촉매(Pd-탄소, Pd, 니켈 등)를 이용하여 0∼50℃의 온도로 행한다. Boc기의 제거는 물과 혼화할 수 있는 유기용매(메탄올, 에탄올, THF, 디옥산 등) 중 유기산(아세트산, p-톨루엔설폰산, 트리플루오로아세트산, 트리클로로아세트산 등) 또는 무기산(염산, 브롬화수소산 등)을 이용하여 0∼90℃의 온도로 행해진다. 또한, Boc기 및 Bzl기를 동시에 제거하려면 티오아니솔, m-크레졸 등의 존재하에 트리플루오로메탄설폰산의 트리플루오로아세트산 용액 중에서 또는 불화수소 속에서 반응시켜 행해진다.
본 명세서의 각 반응에 있어서, 반응 생성물은 통상의 정제 수단, 예컨대 상압하 또는 감압하에 있어서의 증류, 실리카겔 또는 규산마그네슘을 이용한 고속 액체 크로마토그래피, 박층 크로마토그래피 또는 컬럼 크로마토그래피 또는 세정, 재결정 등의 방법에 의해 정제할 수 있다. 정제는 각 반응마다 행하더라도 좋고, 몇 개의 반응 종료후에 행하더라도 좋다.
화학식 I의 펩티드는 공지된 방법에 의해 상당하는 산 부가염으로 변환된다. [출발 물질 및 시약]
본 발명에서 이용하는 출발 물질 및 시약은 그 자체가 공지이거나 또는 공지의 방법에 의해 제조할 수 있다.
[측정 방법]
본 발명의 측정 방법에서 이용하는 효소 반응을 반응 공정식 3에 나타낸다.
[반응 공정식 3]
(상기반응 공정식 3에서, 모든 기호는 상기와 동일한 의미를 나타낸다)
검체가 위액을 제외한 체액, 예컨대 혈액, 소변 등인 경우에는 사람 펩시노겐 II는 우선 제1 반응에 있어서 사람 펩신 II로 활성화되어 상기 화학식 I (상기식에서, 모든 기호는 상기와 동일한 의미임)의 펩티드 또는 그 산 부가염을 기질로 하여 특이적으로 인식하여 소화한다. 이 사람 펩시노겐 II의 활성화는 예컨대, 산성 조건하에서 행해져 기질의 분해와 동시에 행하더라도 좋고 또 따로따로 하더라도 좋다. 이 산성의 조건으로서는 pH 1.0∼6.0이 바람직하며 사용되는 완충액으로서는 타르타르산, 글리신, 시트르산, 옥살산, 포름산, 아세트산 완충액이 바람직하다.
소화되어 유리되어 오는 하기 화학식 Ⅱ의 아미노산 유도체를, 제2 반응에 있어서 아미노펩티다아제(예컨대, 돼지 신장에서 유래하는 아미노펩티다아제 M을 들 수 있음)로써 pH 6∼9로 소화하여, 식 Z-H로 나타내어지는 아닐린 유도체, 아미노쿠마린 유도체 또는 아미노나프탈렌 유도체를 유리시킨다. 이 유리되어 오는 아닐린 유도체, 아미노쿠마린 유도체 또는 아미노나프탈렌 유도체를 검출함으로써, 검체 중의 사람 펩시노겐 II를 측정할 수 있다.
Ⅱ
(상기식에서, 모든 기호는 상기와 동일한 의미이다)
또한, 검체가 위액인 경우는, 사람 펩신 II는 우선 제1 반응에 있어서 산성 조건하에서 상기한 화학식 I(식에서, 모든 기호는 상기와 동일한 의미를 나타냄)의 펩티드 또는 그 산 부가염을 기질로 하여 특이적으로 인식하여 소화한다. 이 산성의 조건으로서는 pH 1.5∼6.0이 바람직하며, 사용되는 완충액으로서는 타르타르산, 글리신, 시트르산, 옥살산, 포름산, 아세트산 완충액이 바람직하다. 소화되어 유리되어 오는 상기한 화학식 Ⅱ의 아미노산 유도체를 같은 식으로 소화하여 아닐린 유도체, 아미노쿠마린 유도체 또는 아미노나프탈렌 유도체를 유리시켜, 이 아닐린 유도체, 아미노쿠마린 유도체 또는 아미노나프탈렌 유도체를 검출함으로써 검체 중의 사람 펩신 II를 측정할 수 있다.
아닐린 유도체의 검출은 아닐린 유도체 그 자체의 흡광도의 변화를 이용하여 측정하더라도 좋고, 또한, 적당한 착색물로 유도함으로써 측정하더라도 좋다. 적당한 착색물로 유도하는 방법으로는 생성한 아닐린 유도체와, 예컨대 산성 조건하에서 반응하여 발색되어 디아조 색소를 생성하는 것이다. 디아조 커플링 성분의 구체적인 예료는 3,5-크실레놀이나 N-에틸-N-(2-히드록시-3-설포프로필)-3,5-디메틸아닐린 또는 그 염류(MAOS) 등이 알려져 있고, 또 펜타시아노아민펠로에이트 등의 금속 킬레이트 착체를 첨가하여 발색시키더라도 좋으며, 또한 페놀 유도체, N-에틸-N-(3-설포프로필)-3-메톡시아닐린(ADPS) 등의 아닐린 유도체 또는 키실레놀 유도체 등과 NaIO4를 이용하여 산화 축합시키거나 또는 빌리루빈옥시다아제, 폴리페놀옥시다아제 또는 아스코르빈산옥시다아제 등의 산화 효소를 이용하여 산화 축합시켜 발색시키더라도 좋다.
아미노쿠마린 유도체, 아미노나프탈렌 유도체의 검출은 형광법(예컨대, 7-아미노-4-메틸쿠마린에서는 λex=380 nm, λem= 460 nm, 4-메틸-2-아미노나프탈렌에서는 λex=335 nm, λem=410 nm의 각 파장)으로 측정할 수 있다.
이하, 본 발명을 실시예에 의해 설명하지만, 본 발명을 한정하는 것은 아니다. NMR의 괄호 내의 용매는 측정에 사용한 용매를 나타내고 있다. 또한 사용하는 약호의 의미는 다음과 같다.
2-Naph=2-나프틸,
p-NA=p-니트로아닐린,
Boc=tert-부톡시카르보닐,
OxR=옥심수지,
Bop=봅 시약 : 벤조트리아졸-1-일옥시트리스(디메틸아미노)포스포늄헥사플루오로포스페이트,
DMF=N,N-디메틸포름아미드,
DIPEA=디이소프로필에틸아민,
Bzl=벤질,
TFA=트리플루오로아세트산,
TFMSA=트리플루오로메탄설폰산.
실시예 1: 식 ProLeuSerGluAla(2-Naph)Ala-pNA로 표기되는 펩티드의 합성
1(1) : 수지로의 고상화(BocAla(2-Naph)-OxR)
옥심수지(100 mg)를 폴리스티렌 컬럼에 충진하고, 여기에 디클로로메탄(1.0 ㎖)을 가하여 팽윤시킨다. 부탄올(1 M) 및 Bop의 DMF(1 M) 용액(150 ㎕)에 BocAla(2-Naph)-OH의 DMF(1 M) 용액(150 ㎕)을 가하고, 이어서 0℃에서 DIPEA(43 ㎕)를 첨가한후, 교반하여 이를 앞의 폴리스티렌 컬럼에 첨가한다. 18시간 교반하여 DMF으로 3회 교반 여과 세정하면 또한 톨루엔으로 3회 교반 여과 세정하여, BocAla(2-Naph)-OxR를 얻었다. 얻은 화합물은 정제하지 않고 그대로 다음 반응에 이용했다.
1(2) : 아미노산의 신장(BocProLeuSer(Bzl)Glu(Bzl)Ala(2-Naph)-OxR)
BocAla(2-Naph)-OxR(실시예 1(1)로 제조함)의 폴리스티렌 컬럼 중에 20% TFA/톨루엔 용액(3 ㎖)을 가하고, 2시간 교반한 후 톨루엔으로 2회 교반 여과 세정하여 이소프로판올로 1회 교반 여과 세정하고, 또한 DMF로 3회 교반 여과 세정했다. 부탄올(1 M) 및 Bop의 DMF(1 M) 용액(150 ㎕)에 BocGlu(Bzl)-OH의 DMF(1 M) 용액(150 ㎕)을 가하고, 0℃에서 DIPEA(43 ㎕)를 첨가하고 교반한후, 앞의 폴리스티렌 컬럼에 가하고, 20시간 교반한 후, DMF로 3회 교반 여과 세정하고, 이어서 톨루엔으로 3회 교반 여과 세정하여 BocGlu(Bzl)Ala(2-Naph)-OxR를 얻었다.
상기와 같은 식으로 Ser(Bzl), Leu, Pro를 축합하여 BocProLeuSer(Bzl)Glu(Bzl)Ala(2-Naph)-OxR를 얻었다. 얻은 화합물은 정제하지 않고서 그대로 다음 반응에 이용했다.
1(3) : 수지로부터 잘라냄
BocProLeuSer(Bzl)Glu(Bzl)Ala(2-Naph)-OxR(실시예 1(2)로 제조함)에, AlapNA·HCl(0.25 M), DIPEA(0.25 M) 및 아세트산의 DMF(0.25 M) 용액(1000 ㎕)을 가하여 24시간 교반한 후 DMF로 3회 추출했다. 추출액을 감압 증류 제거하고 증류수(10 ㎖)를 가한 후, 교반 여과하고 잔류물을 증류수로 세정했다. 잔류물을 아세트니트릴(20 ㎖)에 용해하여 톨루엔(10 ㎖)을 가한 후 감압 건조했다. 얻은 거친 정제물을 TFA(4 ㎖)에 녹여 0℃에서 m-크레졸(200 ㎕) 및 TFMSA(80 ㎖)를 가하고 2시간 교반하여 TFA를 감압 증류 제거했다. 잔류물을 0℃에서 디에틸에테르(300 ㎖) 속에서 교반하면서 적하하고, 침전물을 원심 분리한 후 빙냉한 에테르(10 ㎖)로 3회 세정하여 감압 건조했다. 얻은 거친 정제물을 30% 아세트니트릴에 용해하여 C18-HPLC-분취용 컬럼으로 정제하여 하기 화학적 데이터를 갖는 표제 화합물 20.3 ㎎을 얻었다.
MS: (M+H)m/z=833;
NMR: (CD3OD)) δ=8.18(2H,d), 7.81(2H,d), 7.78-7.70(4H,m), 7.41-7.37(3H,m), 4.77(1H,dd), 4.50-4.26(5H,m), 3.86(1H,dd), 3.75(1H,dd), 3.39(2H,dd), 3.12(2H,dd), 2.48-2.37(1H,m), 2.25(2H,t), 2.16-2.08(1H,m), 2.07-1.94(4H,m), 1.88-1.60(5H,m), 1.45(3H,d), 0.97-0.92(6H,m).
실시예 2(1)∼2 (83) : 여러 가지 아미노산 및 화학식 Ⅱ-A의 아미노산 유도체를 이용하여 실시예 1과 같은 식으로 하기 화학적 데이터를 갖는 화학식 I-B로 정의되는 펩티드를 얻었다.
(상기식에서, Za는 아닐린 유도체 잔기를 나타내고, 그 밖의 기호는 상기와 동일한 의미를 나타낸다)
그 결과를 표 2(표 2-1∼표 2-6)에 나타내었다.
상기 표 2에서, 각종 약호는 상기와 동일한 의미를 나타낸다.
실시예 3 : 펩신 I 및 II의 본 발명 기질에 대한 반응성의 측정
[시약]
실시예 1, 2(3) 등(후술하는 표 3 중의 실시예)으로 제조한 어떤 펩티드를 0.5 mM 함유하는 타르타르산 완충액 또는 글리신 완충액(pH 2.0).
[효소액 I]
0.01 ㎎/㎖의 사람 펩신 I 또는 사람 펩신 II 수용액
[측정법]
(1) HPLC에 의한 측정
시액(1.0 ㎖)에 효소액 I(0.1 ㎖)을 첨가한 후, 37℃에서 10, 30, 60분 가온한 후, 혼합액을 0.3 ㎖ 취하고, 2N-NaOH를 0.025 ㎖ 첨가하여 반응을 정지하고, 2N-HCl(0.025 ㎖)를 첨가하여 초여과법에 의해 단백 제거를 했다. 단백 제거후의 용액을 C18 컬럼을 이용한 HPLC에 의해, 사람 펩신에 의해 소화되어 생성된 화학식 Ⅱ-A의 아미노산 유도체의 정량을 실시했다.
(상기식에서, 모든 기호는 상기와 동일한 의미를 나타낸다)
펩신 II/펩신 I 상대 반응비는 HPLC에 의한 측정 결과에 기초하여 산출했다. 이것은 기질이 정확하게 펩신 I 또는 펩신 II로 소화되어 상기 화학식 (Ⅱ-A)의 아미노산 유도체가 유리되어 나오는 것을 확인하기 위해서이다. 측정 결과를 표 3(표 3-1∼표 3-3)에 나타낸다.
상기 표 3에서, 모든 약호는 상기와 동일한 의미를 나타낸다.
상기 표에서 분명한 바와 같이 본 발명 펩티드는 펩신 II에 특이적이다는 것을 알 수 있다.
실시예 4 : 본 발명 방법에 의한 사람 펩시노겐 II의 정량(검량선)
[시액 I]
Nα-Me-GlyLeuSerGluAla(2-Naph)Ala-pNA·TFMSA(실시예 2(70)로 제조함)가 0.5 mM의 농도가 되도록, 타르타르산 완충액(50 mM, pH 2.0)에 용해했다.
[시액 II]
아미노펩티다아제(시그마사 제조)가 3.4 U/㎖의 농도가 되도록 Tris-HCl 완충액(1.0 M, pH 8.5)에 용해했다.
[시료]
사람 정제 펩시노겐 II
[측정 방법]
시료(0.025 ㎖)에 시액 I(0.25 ㎖)를 가하고 37℃에서 5분간 가온한 후 시액 II(0.05 ㎖)를 가하여 이 온도에서 5분간 가온한 후 405 nm의 흡광도에서 480 nm의 흡광도를 뺀 흡광도 차(Es)를 구했다. 한편, 생리 식염수를 이용하여, 같은 식으로 조작하여, 맹검치 E(BL)를 구해, 다음 식에 따라 5분간의 흡광도 변화(E)를 산출했다.
E=Es-E(BL)
도 1에 펩시노겐 II 농도와 흡광도 변화의 관계를 나타낸다.
도 1에서 알수있는 같이 각 펩시노겐 II 농도(ng/㎖)에 대하여 플롯한 흡광도 변화를 연결하는 검량선은 원점을 지나는 직선이 되어 검량선은 양호한 정량성을 보이고 있다.
실시예 5 : 본 발명 방법에 의한 사람 혈중 펩시노겐 II의 정량(RIA 법과의 상관)
[시액 I 및 시액 II]
실시예 4와 같음.
[시료]
사람 혈청 52 검체
[측정 방법]
실시예 4와 같은 식으로 조작하여, 5분간의 흡광도 변화(E)를 산출했다.
[비교]
시판되는 펩시노겐 II 측정용 키트(다이나봇트사 제조)(RIA법)를 이용하여 설명서의 방법에 따라, 혈청 중의 펩시노겐 II를 측정했다. 본 방법과 RIA법과의 상관도를 도 2에 나타내었다.
도 2에서 알수있는 바와 같이, 본 방법에 의한 측정치와 RIA법의 측정치는 양호한 상관 관계에 있으며, 본 방법에 의해 혈청 중의 펩시노겐 II가 측정되고 있음을 알 수 있다.
실시예 6 : 본 발명법에 의한 펩시노겐 II의 정량
[시액 III]
Nα-Me-GlySerGlyAla(2-Naph)AlaAla-DCHA·TFMSA(실시예 2(84)로 제조함) 및 N-에틸-N-(3-설포프로필)-3-메톡시아닐린의 나트륨염·1 수화물(동인화학연구소사 제조)이 각각 0.36 mM, 40 mM의 농도가 되도록 시트르산 완충액(50 mM, pH 2.0)에 용해했다.
[시액 IV]
아미노펩티다아제 M(베링거사 제조) 및 폴리페놀옥시다아제(다까라슈조사 제조)가 각각 0.67 U/㎖, 0.2 U/㎖의 농도가 되도록, Tris-HCl 완충액(2.0 M, pH 8.33)에 용해했다.
[시료]
사람 정제 펩시노겐 II
[측정 방법]
시료(0.025 ㎖)에 시액 III(0.25 ㎖)을 가하고, 37℃에서 5분간 가온한 후, 시액 IV(0.05 ㎖)를 가하여 이 온도에서 5분간 가온하고, 이어서 700 nm의 흡광도에서 800 nm의 흡광도를 뺀 흡광도 차(Es)를 구했다. 한편, 생리 식염수를 이용하여 같은 식으로 조작하여, 맹검치 E(BL)를 구하고, 실시예 4와 같은 식으로 흡광도 변화(E)를 산출했다.
도 3에 펩시노겐 II 농도와 흡광도 변화의 관계를 나타내었다.
도 3에서도 알 수 있듯이 각 펩시노겐 II 농도(ng/㎖)에 대하여 플롯한 흡광도 변화를 연결하는 검량선은 원점을 지나는 직선이 되어 검량선은 양호한 정량성을 보이고 있다.
실시예 7 : 본 발명 방법에 의한 펩시노겐 II의 정량(RIA법과의 상관)
[시액 III 및 IV]
실시예 6과 같음 ．
[시료]
사람 혈청 52 검체
[측정 방법]
실시예 6과 같은 식으로 조작하여 5분간의 흡광도 변화(E)를 산출했다.
[비교]
실시예 5와 같은 식으로 혈청 중 펩시노겐 II를 측정했다. 본 방법과 RIA법의 상관도를 도 4에 나타낸다.
도 4에서도 알 수 있듯이, 본 방법에 의한 측정치와 RIA법의 측정치는 양호한 상관 관계에 있으며, 본 방법에 의해 혈청 중 펩시노겐 II가 측정되고 있음을 알 수 있다.
본 발명의 화학식 I의 펩티드 또는 그 산 부가염은 사람 펩신 II에 대하여, 우수한 특이성과 감도를 갖는(펩신 II의 기질 분해 속도가 빠르고, 발색이 좋음) 기질이다. 따라서 본 발명 펩티드 또는 그 산 부가염을 기질로서 이용하는 사람 펩신 II 또는 사람 펩시노겐 II의 측정 방법은 위암, 위궤양 등의 위 질환 진단에 매우 유용하며, 의료 분야에 있어서 기여하는 바가 크다.
SEQUENCE LISTING
〈110〉 ONO Pharmaceutical Co.,Ltd.
〈120〉 Peptides, methods for assaying human pepsinogen II or human
pepsin II, and
assay kits
〈130〉 ONF-2829PCT
〈140〉 PCT/JP98/05780
〈141〉 1998-12-21
〈150〉 JP P1997-364796
〈151〉 1997-12-22
〈160〉 93
〈210〉 1
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 1
Pro Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 2
〈211〉 4
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 3
〈223〉 4-Iodo-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 4
〈223〉 Gly which binds to p-nitroaniline
〈400〉 2
Leu Ser Xaa Xaa
1
〈210〉 3
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉Gly which binds to p-nitroaniline
〈400〉 3
Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 4
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 4-Iodo-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Gly which binds to p-nitroaniline
〈400〉 4
Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 5
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 4-Chloro-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Gly which binds to p-nitroaniline
〈400〉 5
Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 6
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 6
Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 7
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 4-Iodo-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 7
Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 8
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 4-Chloro-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 8
Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 9
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 2Abu which binds to p-nitroaniline
〈400〉 9
Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 10
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 4-Iodo-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 2Abu which binds to p-nitroaniline
〈400〉 10
Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 11
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 4-Chloro-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 2Abu which binds to p-nitroaniline
〈400〉 11
Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 12
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Nva which binds to p-nitroaniline
〈400〉 12
Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 13
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 4-Iodo-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Nva which binds to p-nitroaniline
〈400〉 13
Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 14
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 4-Chloro-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Nva which binds to p-nitroaniline
〈400〉 14
Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 15
〈211〉 7
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 ACETYLATION
〈222〉 1
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 4-Iodo-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 15
Lys Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 16
〈211〉 7
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 4-Iodo-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 16
Leu Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 17
〈211〉 7
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 4-Iodo-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 17
Asn Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 18
〈211〉 7
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 4-Iodo-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 18
Gln Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 19
〈211〉 7
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 4-Iodo-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 19
Ala Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 20
〈211〉 7
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 4-Iodo-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 20
Val Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 21
〈211〉 7
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 4-Iodo-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 21
Gly Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 22
〈211〉 7
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 4-Iodo-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 22
Phe Pro Gln Gln Ala Xaa Xaa
1 5
〈210〉 23
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 23
Pro Gln Gln Asn Xaa Xaa
1 5
〈210〉 24
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 24
Pro Gln Gln Gln Xaa Xaa
1 5
〈210〉 25
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 25
Pro Gln Gln Gly Xaa Xaa
1 5
〈210〉 26
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 26
Pro Gln Gln Met Xaa Xaa
1 5
〈210〉 27
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 27
Pro Gln Gln Ser Xaa Xaa
1 5
〈210〉 28
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 28
Pro Gln Gln Asp Xaa Xaa
1 5
〈210〉 29
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 29
Pro Gln Gln Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 30
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 30
Pro Gln Asn Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 31
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 31
Pro Gln Ala Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 32
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 32
Pro Gln Gly Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 33
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 33
Pro Gln Leu Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 34
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 34
Pro Gln Glu Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 35
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 35
Pro Gln Asp Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 36
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 36
Pro Gln Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 37
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 37
Pro Asn Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 38
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 38
Pro Ala Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 39
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 39
Pro Val Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 40
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 40
Pro Met Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 41
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 41
Pro Ile Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 42
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 42
Pro Gly Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 43
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 43
Pro Glu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 44
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 44
Pro Asp Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 45
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 45
Pro Ser Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 46
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 46
Pro Thr Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 47
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 47
Asn Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 48
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 48
Ala Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 49
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 49
Val Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 50
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 50
Met Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 51
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 51
Ile Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 52
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 52
Gly Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 53
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 53
Leu Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 54
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 54
Gln Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 55
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 55
Lys Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 56
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 56
Glu Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 57
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 57
Ser Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 58
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 58
Thr Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 59
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 59
Tyr Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 60
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 ACETYLATION
〈222〉 1
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 60
Lys Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 61
〈211〉 7
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 61
Pro Asn Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 62
〈211〉 7
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 ACETYLATION
〈222〉 1
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 62
Lys Asn Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 63
〈211〉 8
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 8
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 63
Pro Ser Asn Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 64
〈211〉 8
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 8
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 64
Pro Asn Asn Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 65
〈211〉 8
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 8
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 65
Pro Gly Asn Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 66
〈211〉 7
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 ACETYLATION
〈222〉 1
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 66
Lys Ala Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 67
〈211〉 7
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 1
〈223〉 bAla
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 67
Ala Asn Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 68
〈211〉 7
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 1
〈223〉 MeGly
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 68
Gly Asn Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 69
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 1
〈223〉 MeVal
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 69
Val Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 70
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 1
〈223〉 N-Methyl-Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 70
Xaa Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 71
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 1
〈223〉 MeGly
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 71
Gly Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 72
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 4-Chloro-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 72
Pro Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 73
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 3,4-DichloroPhenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 73
Pro Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 74
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 4-Chloro-Phenyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 74
Val Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 75
〈211〉 7
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈222〉 1
〈223〉 D-Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 75
Ala Asn Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 76
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈222〉 1
〈223〉 D-Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 76
Ala Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 77
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 1
〈223〉 bAla
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 77
Ala Leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 78
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 1
〈223〉 4Abu
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 78
Xaa leu Ser Glu Xaa Xaa
1 5
〈210〉 79
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 4
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Leu which binds to p-nitroaniline
〈400〉 79
Leu Ser Glu Xaa Ala Xaa
1 5
〈210〉 80
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 4
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 80
Leu Ser Glu Xaa Ala Xaa
1 5
〈210〉 81
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 4
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Gly which binds to p-nitroaniline
〈400〉 81
Leu Ser Glu Xaa Ala Xaa
1 5
〈210〉 82
〈211〉 7
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD?RES
〈222〉 1
〈223〉 MeGly
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈400〉 82
Gly Leu Ser Glu Xaa Ala Xaa
1 5
〈210〉 83
〈211〉 7
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD?RES
〈222〉 1
〈223〉 MeGly
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 Gly which binds to p-nitroaniline
〈400〉 83
Gly Leu Ser Glu Xaa Ala Xaa
1 5
〈210〉 84
〈211〉 7
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD?RES
〈222〉 1
〈223〉 MeGly
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 5
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 7
〈223〉 Ala which binds to m-anisidine
〈400〉 84
Gly Leu Ser Glu Xaa Ala Xaa
1 5
〈210〉 85
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD?RES
〈222〉 1
〈223〉 MeGly
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 4
〈223〉 2-naphthyl Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to 3,5-Dichloro-4-hydroxyaniline
〈400〉 85
Gly Ser Gly Xaa Ala Xaa
1 5
〈210〉 86
〈211〉 8
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 p-nitrophenylalanine
〈300〉
〈303〉 Journal of Medicinal Chemistry
〈304〉 36
〈306〉 2614
〈307〉 1993
〈400〉 86
Lys Pro Ala Ala Phe Xaa Arg Leu
1 5
〈210〉 87
〈211〉 8
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 p-nitrophenylalanine
〈300〉
〈303〉 The Journal of Biochemistry
〈304〉 265
〈306〉 871-878
〈307〉 1990
〈400〉 87
Lys Pro Val Val Phe Xaa Arg Leu
1 5
〈210〉 88
〈211〉 4
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 1
〈223〉 Pyroglutamic acid, Asp, Glu, Gly or 2-oxoimidazolidin-1-yl-carbonyl
which
bind to hydrogen, C3-5 carboxyalkylcarbonyl or C1-5 alkylcarbonyl
〈220〉
〈221〉 UNSURE
〈222〉 2
〈223〉 His, Gly or Pro
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 4
〈223〉 Phe, Leu, Nle, Met or S-C1-3 Alkyl-Cys which bind to
p-nitroaniline
〈300〉
〈310〉 CS-261172
〈400〉 88
Xaa Xaa Phe Xaa
1
〈210〉 89
〈211〉 4
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 PYRROLIDONE CARBOXYLIC ACID
〈222〉 1
〈223〉 Pyroglutamic acid
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 4
〈223〉 Phe which binds to p-nitroaniline
〈300〉
〈310〉 CS-261172
〈400〉 89
Xaa His Phe Xaa
1
〈210〉 90
〈211〉 4
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 PYRROLIDONE CARBOXYLIC ACID
〈222〉 1
〈223〉 Pyroglutamic acid
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 4
〈223〉 Phe which binds to p-nitroaniline
〈300〉
〈303〉 Clinica Chimica Acta
〈304〉 213
〈306〉 103-110
〈307〉 1992
〈400〉 90
Xaa His Phe Xaa
1
〈210〉 91
〈211〉 4
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 PYRROLIDONE CARBOXYLIC ACID
〈222〉 1
〈223〉 Piroglutamic acid
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 4
〈223〉 Met which binds to p-nitroaniline
〈300〉
〈303〉 Clinica Chimica Acta
〈304〉 213
〈306〉 103-110
〈307〉 1992
〈400〉 91
Xaa His Phe Xaa
1
〈210〉 92
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 1
〈223〉 N-o-aminobenzoyl-Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to N-2,4-dinitrophenyl ethylenediamine
〈300〉
〈303〉 Analytical Biochemistry
〈304〉 234
〈306〉 113
〈307〉 1996
〈400〉 92
Xaa Ala Phe Phe Ala Xaa
1 5
〈210〉 93
〈211〉 6
〈212〉 PRT
〈213〉 Artificial Sequence
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 1
〈223〉 N-o-aminobenzoyl-Ala
〈220〉
〈221〉 MOD RES
〈222〉 6
〈223〉 Ala which binds to p-nitroaniline
〈300〉
〈303〉 Analytical Biochemistry
〈304〉 234
〈306〉 113
〈307〉 1996
〈400〉 93
Xaa Ala Phe Phe Ala Xaa
1 5

Claims (10)

  1. 하기 화학식 I의 펩티드 또는 그 산 부가염
    I
    상기식에서, Q는 Qa-(AA)n-기[기 중, AA는 L-아미노산 잔기이며, n은 0 또는 1∼15의 정수이고, Qa는 수소, C1∼4 알킬, 아미노기의 보호기, D- 또는 L-아미노산 잔기 또는 NH2-(CH2)r-CO-기(기 중, r은 2∼7의 정수임)]이며,
    R1및 R2는 (i) 수소 또는 할로겐이거나 또는 (ii) R1, R2및 결합하고 있는 불포화 결합과 함께 할로겐으로 치환되어도 되는 방향 탄소 고리이고,
    R3은 수소 또는 할로겐이며,
    R4는 수소, C1∼3 알킬 또는 히드록시메틸이고,
    EE는 D- 또는 L-아미노산 잔기이며,
    m은 0 또는 1이고,
    Z는 아닐린 유도체 잔기, 아미노쿠마린 유도체 잔기 또는 아미노나프탈렌 유도체 잔기이며,
    단, (1) n이 2 이상일 때, 각각의 AA는 동일하거나 또는 다르며, (2) R1, R2, R3모두가 수소인 화합물은 제외한다.
  2. 제1항에 있어서, m이 0인 것을 특징으로 하는 펩티드.
  3. 제1항에 있어서, m이 1인 것을 특징으로 하는 펩티드.
  4. 제1항 내지 제3항 중 어느 한 항에 있어서, Q가 Qb-(AA)s-A1-기[기 중, A1은 Gly, Ala, Ser, Asp, Glu, Asn, Gln 또는 Met 잔기이고, s는 정수 2, 3, 4 또는 5이며, Qb는 수소, C1∼4 알킬, C1∼6 알킬카르보닐, D- 또는 L-아미노산 잔기 또는 NH2-(CH2)r-CO-기(기 중, r은 청구의 범위 제1항의 기재와 동일한 의미를 나타냄)이고, AA는 청구의 범위 제1항의 기재와 동일한 의미임]인 것을 특징으로 하는 펩티드.
  5. 제1항 내지 제4항 중 어느 한 항에 있어서, Q가 Qb-(AA)t-A2-A11-기[기 중, A11은 Gly, Ala, Glu 또는 Asn 잔기이고, A2는 Gly, Ala, Leu, Ser, Asp, Glu, Asn 또는 Gln 잔기이며, t는 정수 1, 2, 3 또는 4이고, Qb는 수소, C1∼4 알킬, C1∼6 알킬카르보닐, D- 또는 L-아미노산 잔기 또는 NH2-(CH2)r-CO-기(기 중, r은 청구의 범위 제1항의 기재와 동일한 의미임)이며, AA는 청구의 범위 제1항의 기재와 동일한 의미임]인 것을 특징으로 하는 펩티드.
  6. 제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, Q가 Qb-(AA)t-A22-A11-기[기 중, A11은 Gly, Ala, Glu 또는 Asn 잔기이고, A22는 Gly, Ser, Glu 또는 Gln 잔기이며, t는 정수 1, 2, 3 또는 4이고, Qb는 수소, C1∼4 알킬, C1∼6 알킬카르보닐, D- 또는 L-아미노산 잔기 또는 NH2-(CH2)r-CO-기(기 중, r은 청구의 범위 제1항의 기재와 동일한 의미임)이며, AA는 청구의 범위 제1항의 기재와 동일한 의미임)인 것을 특징으로 하는 펩티드.
  7. 하기 화학식 I-A로 나타나는 펩티드.
    I-A
    상기식에서, 각 기호는 하기 표 1(표 1-1∼표 1-4)에 기재한 바와 같다.
    상기 표 1 중의 약호는 다음의 의미를 나타낸다.
    Me=메틸,
    Et=에틸,
    n-Pr=n-프로필,
    Ac=아세틸,
    Sar=Nα-메틸-글리신,
    Me-Val=Nα-메틸-발린,
    Me-Ala=Nα-메틸-알라닌,
    γ-Abu=γ-아미노부탄산,
    p-NA=p-니트로아닐린 잔기,
    3,4-DCP=3,4-디클로로페닐,
    m-ASD=m-아니시딘 잔기,
    DCHA=3,5-디클로로-4-히드록시아닐린 잔기.
  8. 검체 중의 사람 펩시노겐 II를 활성화하여 얻은 사람 펩신 II 또는 검체 중의 사람 펩신 II에 의해서, 청구의 범위 제1항에 기재한 화학식 I(이 식에서, 모든 기호는 청구의 범위 제1항의 기재와 동일한 의미임)의 펩티드 또는 그 산 부가염을 절단하여 얻은 하기 화학식 Ⅱ의 아미노산 유도체를 아미노펩티다아제로 소화하여, 얻은 식 Z-H의 아닐린 유도체, 아미노쿠마린 유도체 또는 아미노나프탈렌 유도체를 검출하는 것을 특징으로 하는 사람 펩시노겐 II 또는 사람 펩신 II의 측정 방법.
    Ⅱ
    상기식에서, 모든 기호는 청구의 범위 제1항의 기재와 동일한 의미를 나타냄.
  9. 제8항에 있어서, 청구의 범위 제7항에 기재한 화학식 I-A(이 식에서, 모든 기호는 청구의 범위 제7항의 기재와 동일한 의미임)의 펩티드 또는 그 산 부가염을 이용하는 것을 특징으로 하는 사람 펩시노겐 II 또는 사람 펩신 II의 측정 방법.
  10. 기질로서 청구의 범위 제1항에 기재한 화학식 I(이 식에서, 모든 기호는 청구의 범위 제1항의 기재와 동일한 의미를 나타냄)의 펩티드 또는 그 산 부가염 및 아미노펩티다아제를 포함하는 것을 특징으로 하는 사람 펩시노겐 II 또는 사람 펩신 II 측정용 키트.
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