KR19990028927A - 인터루킨-10을 사용한 급성 백혈병의 치료 방법 - Google Patents

Abstract

본 발명은 급성 백혈병, 예를 들면 급성 골수성 백혈병 및 급성 림프구성 백혈병을 치료하는 방법에 관한 것이다. 방법은 포유류에게 인터루킨-10의 치료학적 유효량을 투여함을 포함한다.

Description

인터루킨-10을 사용한 급성 백혈병의 치료 방법

AML 및 ALL은 효과적인 치료가 없다면 단 수달내에 죽음으로 이를 수 있는 급성 백혈병이다[참조 문헌: Harrisons's Principles of Internal Medicine, 12th ed. (1991), pp. 1552-1561, McGraw Hill, N.Y., N.Y. Wilson et al. (eds.)]. AML의 진단은 골수에서 증가되는 미성숙 백혈병 아세포수의 형태학적 인식을 기본으로 한다[참조 문헌: Br. J. Hematol. 33: 451 (1976)]. AML의 아세포는 또한 성숙한 단구/거대파지와 유사한 형태학적 특징을 포함하여 다양한 형태학적 신호의 분화를 나타낼 수 있다[참조 문헌: Id.]. ALL의 진단은 광학 현미경, 생화학 및 막 분자 분석을 기본으로 한다[참조 문헌: Clinical Medicine, Vol. 5, Chapter 16, Spittell (ed.) Harper & Row Philadelphia, PA (1986)].

AML 및 ALL 모두는 급성 백혈병이나, 각각은 선천성 병력, 예후에 있어서 다른 상이한 질환이고, 다양한 치료제에 반응한다[참조 문헌: Harrisons's Principles of Internal Medicine, 12th ed. (1991), pp. 1552-1561, McGraw Hill, N.Y., N.Y. Wilson et al. (eds.)]. 예를 들면 AML 및 ALL은 상이한 병리학적 프로필(AML은 어린이 보다는 성인에게 더 일반적이다), 상이한 세포 유전학적 변화, 상이한 악성 형질전환 요구, 및 특이적 화학치료제에 상이한 패턴의 반응을 갖는다. 또한 AML 및 ALL은 상이한 단계에서 조혈성 전구체 세포에 영향을 준다.

최근 종양 치료에 대한 면역학적 접근이 발전되어 왔다. 상기 접근은 종양 세포가 이상한 외부 세포 및 분자에 대한 체방어에서 어느 정도 제외되고, 이러한 방어는 치료학적으로 자극되어 종양 세포를 공격할 수 있다는 개념을 기본으로 한다[참조 문헌: 623-648 in Klein,Immunology(Wiley-interscience, New York, 1982)]. 종양 치료에 대한 면역학적 접근은 다양한 면역 효과물질이 종양 성장을 직간접적으로 억제할 수 있다는 최근 연구의 관점에서 재기의 관심을 일으키고 있다[참조 문헌: Herberman,Concepts Immunopathol., Vol. 1, pgs 96-132 (1985)(natural killer cells resist tumor cell growth); Rosenberg et al.,Ann. Rev. Immunol., Vol. 4, pgs. 681-709 (1988)(clinical use of IL-2-activated killer cells to treat cancer); Ralph et al.,J. Exp. Med., Vol. 167, pgs. 712-717 (1988) (tumoricidal activity by macrophages stimulated by lymphokines); Tepper et al.,Cell, Vol. 57, pgs 503-512 (1989) (IL-4 has anti-tumor activity); M. Cohen,"Lymphokines and the Immune Response"(CRC Press, Boca Raton, 1990); 등].

최근 데이터는 신생 조건을 치료하기 위한 특정 면역 효과물질, 인터루킨-10(IL-10)의 용도를 지지한다(참조 문헌: International Patent Application Publication WO 92/12725 및 WO 92/12726). 또한 몇몇의 연구는 IL-10이 정상 단일구에 대한 면역억제 효과를 가지므로 기타의 면역경쟁 세포의 작용에 영향을 준다고 예시한다[참조 문헌: de Waal Malefyt et al., Curr. Opin. Immunol. 4: 314 (1992); Yssel et al., J. Exp. Med. 174: 593 (1991); Fiorentimo et al., J. Immunol. 147: 3815 (1991); 및 Waal Malefyt et al., J. Exp. Med. 174: 1209 (1991)].

그러나 종양 치료에 대한 면역학적 접근에서의 폭넓은 다양한 발전에도 불구하고, AML 및 ALL과 같은 급성 백혈병을 치료하는 방법에 대한 큰 필요성이 남아있다.

발명의 요약

본 발명은 포유류에게 인터루킨-10의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하여, 포유류의 급성 백혈병을 치료하는 방법을 제공함으로써 앞의 요구에 응하는 것이다. 본 발명은 또한 급성 백혈병을 앓고 있는 포유류에게 인터루킨-10의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하여 급성 백혈병 아세포의 증식을 억제하는 방법을 제공하는 것이다.

또한 본 발명자들은 놀랍게도 IL-10의 이러한 항증식 효과는 IL-10의 투여가 중단된 후까지도 지속됨을 밝혀내었다. 따라서 본 발명은 또한 포유류에게 인터루킨-10의 치료학적 유효량을 투여하고, 상기 인터루킨-10이 이의 투여가 중단된 후에도 급성 백혈병 아세포에 대해 항증식 효과를 지속적으로 나타냄을 포함하여 포유류의 급성 백혈병을 치료하는 방법을 제공한다.

본 발명에 따라, 치료되는 급성 백혈병은 급성 골수성 백혈병(AML)과 같은 골수 세포 백혈병 또는 급성 림프구성 백혈병(ALL)과 같은 B 세포 백혈병일 수 있다. 투여된 IL-10은 바이러스성 인터루킨-10 및 사람 인터루킨-10으로 이루어진 그룹으로 부터 선택될 수 있다.

본 발명은 급성 백혈병, 예를 들면 급성 골수성 백혈병(AML) 및 급성 림프구성 백혈병(ALL)을 치료하기 위한 인터루킨-10(IL-10)의 용도에 관한 것이다.

본 발명은 수반된 도면을 참조함으로써 더 쉽게 이해될 수 있다.

도 1A 및 1B는 2명의 특정 환자에 대한 IL-10 농도의 작용으로 AML 아세포 증식에 대한 IL-10의 효과를 나타내는 그래프이다(도면 1A의 환자 2, 도면 1B의 환자 15). 구체적으로 상기 도면은 자발적 증식을 시험했을 경우(△), 및 또한 G-CSF(●), GM-CSF(○) 및 IL-3(▲)의 존재하에 AML 아세포 증식을 시험했을 경우의 결과를 나타낸다. 증식은 배양 7일 후에³H-티미딘의 혼입으로 시험하고, 그 결과는 3회 반복 배양의 평균 cpm±SD으로 나타낸다.

도 2A, 2B, 2C 및 2D는 자발적 및 사이토킨-의존성 AML 아세포 증식에 대한 IL-10(10ng/㎖)의 효과를 나타내는 그래프이다. 각 도면에서 수직축은³H-티미딘 혼입으로 나타나는 증식을 측정한다. 그러나 수평축은 증가하는 측정값을 나타내진 않는다. 오히려 수평축의 왼편에 상응하는 데이터 포인트가 IL-10 부재시의 증식을 나타내고, 반면 수평축의 오른편에 상응하는 데이터 포인트는 IL-10 존재시의 증식을 나타낸다. 상기 도면의 각 결과는 3회 반복 배양의 중간치 cpm으로 나타낸다.

도 3A 및 3B는 환자 2(도 3A) 및 환자 15(도 3B)에 대한 자발적이고 사이토킨-의존성 AML 아세포 증식에 대한 IL-10(20 ng/㎖)의 효과를 나타내는 그래프이다. AML 아세포는 전체배양 기간 동안 또는 초기 48시간 동안만 IL-10 존재하(빗금없는 막대)에 배양되고 그후 IL-10 부재하(빗금 막대)에 배양된다. AML 아세포는 배지중에서 단독(Sp) 또는 조혈성 성장 인자(G-CSF, GM-CSF, IL-3)와 함께 배양된다. IL-10중에 전배양된 세포에서, 성장 인자를 48시간 후에 가하고, 반면 IL-10이 전체배양 기간 동안 존재할 경우 성장인자를 IL-10과 함께 가한다. 증식은 배양 7일 후에³H-티미딘의 혼입으로 검정된다. 결과는 IL-10 부재시의 배지에서의 증식에 대한 IL-10을 함유하는 상응하는 배지에서의 증식으로 정의되는 상대적 반응(RR)으로 나타난다. 모든 배양은 3회 반복으로 수행되고, 중간 cpm은 상대적 반응을 계산하기 위해 사용된다.

도 4는 3명의 상이한 ALL 환자로 부터 유도된 아세포의 성장 인자 의존적 증식에 대한 IL-10의 효과를 나타내는 그래프이다. 그 결과 3회 반복한 배양의 평균 cpm±SD로 나타낸다.

도 5A 및 도5B는 AML 아세포로 부터 IL-1α(도 5A, n=10) 및 IL-1β(도 5B, n=27)의 분비에 대한 IL-10의 효과를 나타내는 그래프이다. 그 결과는 IL-10 존재 및 부재시 48시간 동안 배양된 AML 아세포로 부터의 배양 상등액에서 IL-1 농도로 나타낸다.

도 6A, 도 6B 및 도 6C는 AML 아세포로 부터 각각 IL-6(도 6A, n=25), TNFα(도 6B, n=25) 및 GM-CSF(도 6C, n=18)의 분비에 대한 IL-10의 효과를 나타내는 그래프이다. 그 결과는 IL-10(20ng/㎖) 존재 및 부재시 48시간 동안 배양된 AML 아세포로 부터의 배양 상등액에서 IL-10 농도로 나타낸다.

본원에서 인용된 모든 참고 문헌은 참조로 인용된다.

본원에서 "인터루킨-10" 또는 "IL-10"은 (a) 미국 특허 제5,231,012호에서 기술된 성숙한 IL-10의 아미노산 서열(예: 분비성 리더 서열 결핍)을 갖고, (b) 본래의 IL-10에 일반적인 생물학적 활성을 갖는 단백질로 정의된다. 본 발명의 목적을 위해 글리코실화(예: CHO 세포와 같은 진핵 세포에서 생성) 및 비글리코실화(예: E. coli에서 화학적으로 합성되거나 생성) IL-10은 동량이고, 상호변화적으로 사용될 수 있다. 또한 IL-10의 생물학적 활성을 보유하는 엡스타인-바르 바이러스(Epstein-Barr Virus) 단백질 BCRF1(바이러스성 IL-10)을 포함하는 뮤테인 및 기타 유사물을 포함한다.

본 발명에서 사용하기 적합한 IL-10은 단백질을 분비하는 활성 세포로 조건화되고, 표준 방법으로 정제된 배양 배지로부터 수득할 수 있다. 또한, IL-10 또는 이의 활성 단편은 당해 기술분야에서 공지된 표준 기술을 사용하여 화학적으로 합성될 수 있다[참고 문헌: Merrifield, Science 233: 341 (1986) 및 Atherton et al., Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach, 1989, I.R.L Press, Oxford., 미국 특허 제5,231,012호].

바람직하게는, 단백질 또는 폴리펩티드는 IL-10 폴리펩티드를 암호화하는 분리된 핵산을 사용하는 재조합 기술로 수득할 수 있다. 분자 생물학의 일반적인 방법이 문헌[참조: Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor, New York, 2d ed., 1989, 및 Ausubel et al., (eds.) Current Protocols in Molecular Biology, Green/Woley, New York (1987 and periodic supplements)에 기술되어 있다. 적합한 서열은 게놈성 또는 cDNA 라이브러리로 부터의 표준 기술을 사용하여 수득될 수 있다. 폴리머라제 연쇄 반응(PCR) 기술이 사용될 수 있다[참고 문헌: PCR Protocols: A Guide to Methods and Application, 1990 Innis et al., (Ed.), Academic Press, New York, New York].

라이브러리는 적합한 세포로 부터 추출된 핵산으로 부터 형성된다. 문헌(참조: 미국 특허 제5,231,012)에서는 IL-10을 제조하기 위한 재조합 방법을 기술한다. 유용한 유전자 서열은, 예를 들면 다양한 서열 데이터 베이스[예: GenBank 및 BMPL 또는 핵산 및 PIR 및 단백질용 Swiss-Prot, c/o 인텔리제네틱스(Intelligenetics), 마운틴 뷰(Mountain Veiw), 캘리포니아( California), 또는 제네틱 컴퓨터 그룹(Genetics Computer Group), 위스콘신대학 생물공학 센터(University of Wisconsin Biotechnology Center, Madison, Wisconsin)]에서 찾을 수 있다.

사람 IL-10을 암호화하는 서열을 포함하는 클론은 미국 메릴랜드주 록크빌에 소재하는 아메리칸 타입 컬춰 콜렉션(ATCC)에 기탁번호 제68191호 및 제68192호로 기탁되어 있다. IL-10 암호화 서열을 보유하는 기타 클론의 동정은 발현 벡터가 사용된 경우, 핵산 하이브리드화 또는 암호화된 단백질의 면역학적 검출로 수행된다. 미국 특허 제5,231,012호에 기술된 기탁 서열을 기본으로 하는 올리고뉴클레오티드 프로브가 특히 유용하다. 올리고뉴클레오티드 프로브 서열은 또한 기타 종에서의 관련 유전자의 보유 부위로부터 제조될 수 있다. 또는, IL-10의 아미노산 서열을 기본으로 하는 축퇴한 프로브를 사용할 수 있다.

다량의 폴리펩티드를 발현하는 형질전환된 원핵, 포유류, 효모 또는 곤충 세포주를 제조하는데 표준 방법이 사용될 수 있다. 발현 및 클로닝에 적합한 E. Coli 균주의 예는 W3110(ATCC Bi, 27325), X1776(ATCC No. 31244), X2282 및 RR1(ATCC Mp/31343)을 포함한다. 포유류 세포주의 예는 COS-7 세포, 마우스 L 세포 및 CHP 세포를 포함한다[참고 문헌: Sambrook (1989), 및 Ausubel et al., 1987].

다양한 발현 벡터는 DNA 암호화 IL-10을 발현하기 위해 사용될 수 있다. 원핵 또는 진핵 세포에 재조합 단백질의 발현에 사용되는 통상적인 벡터가 사용될 수 있다. 바람직한 벡터는 문헌[참조: Okayama et al., Mol. Cell. Biol. 3: 280 (1983) 및 Takebe et al., Mol. Cell. Biol. 8: 466 (1988)]에 기술된 pcD 벡터를 포함한다. 기타 SV 40-기본의 포유류 발현 벡터는 문헌[참조: Kaufuman et al., Mol. Cell. Biol. 2: 1304 (1982) 및 미국 특허 제4,675,285호]의 벡터를 포함한다. 상기 SV-기본의 벡터는 마우스 L 세포와 같은 기타 포유류 세포 이외의 COS-7 몽키 세포(ATCC 제CRL 1651호)에서 특히 유용하다. 참고 문헌[Pouwels et al., (1989 간행) Cloning Vectors: A Laboratory Manual, Elsevier, New York].

IL-10은 가용성 형태, 예를 들면 형질전환되거나 형질감염된 효모, 곤충 또는 포유류 세포의 분비된 생성물로 제조될 수 있다. 그 후 펩티드는 당해 기술분야에서 공지된 표준 방법으로 정제될 수 있다. 예를 들면, 정제 단계는 황산 암모늄 침전, 이온 교환 크로마토그래피, 겔 여과, 전기영동, 흡착 크로마토그래피 등을 포함한다. 참고 문헌[Method in Enzymology Purification Principles and Practices(Springer-verlag, New York, 1982)].

또는, IL-10은 불용성 형태, 예를 들면 집합물 또는 함유물체로 제조될 수 있다. 상기 형태의 IL-10은 당해 기술분야에서 공지된 표준 방법으로 정제한다. 정제 단계의 예는, 원심분리에 의해 파괴된 호스트 세포로 부터 함유물체를 분리하고, 함유물체를 카오트로픽제 및 환원제로 용해시켜 펩티드가 생물학적 활성 형태로 추정됨을 포함한다. 상기 방법의 구체적인 내용은 문헌[참조: Winkler et al., Biochemistry 25: 4041 (1986), Winkler et al., Bio/Technology 3: 9923 (1985); Koths et al., 및 미국 특허 제4,569,790호]에 기술되어 있다.

호스트 세포를 형질감염시키기 위해 사용되는 뉴클레오티드 서열은 다양한 목적하는 특성을 갖는 IL-10 또는 이의 단편을 제조하기 위해 표준 기술을 사용하여 변형될 수 있다. 상기 변형된 IL-10은 1차 구조 수준, 예를 들면 아미노산, 삽입, 치환, 손실 및 융합에 의해 천연적으로 발생하는 서열로 다양하다. 상기 변형은 최종 변형된 단백질쇄를 제조하기 위한 다수의 조합물로 사용될 수 있다.

아미노산 서열 변종은 혈청 반감기를 증가시키고, 정제 또는 제조를 용이하게하고, 치료학적 효율을 개선시키고, 치료학적으로 이용하는 동안 고통 또는 부작용의 발생을 감소시킴을 포함하여 다양한 목적으로 제조될 수 있다. 기타는 후-해독 변종, 예를 들면 글리코실화된 변종 또는 폴리에틸렌 글리콜(PEG) 등과 결합된 단백질일 수 있지만, 아미노산 서열 변종은 자연적으로 발견되지 않는 변종으로 일반적으로 예측된다. 상기 변종은 IL-10의 생물학적 활성을 보유하는 한 본 발명에서 사용될 수 있다.

폴리펩티드를 암호화하는 서열의 변형은 다양한 기술, 예를 들면 부위-지시된 돌연변이화로 미리 수행될 수 있다[참조 문헌: Gillman et al., Gene 8:81(1987)]. 대부분의 변형은 목적하는 특징에 대한 적합한 검정으로 통상의 스크리닝에 의해 평가된다. 예를 들면 미국 특허 제5,231,012호는 IL-10 활성을 측정하기에 적합한 다수의 시험관내 검정을 기술한다.

사람의 치료에는 바이러스성 또는 마우스 IL-10 또는 기타 여러 포유류 종으로 부터의 IL-10이 사용될 수 있지만, 바람직하게는 사람 IL-10이 사용된다. 가장 바람직하게는, 사용된 IL-10은 재조합 사람 IL-10이다. 사람 및 마우스 IL-10의 제조는 미국 특허 제5,231,012호에 기술되 있다. 업스타인-바르 바이러스로부터 바이러스성 IL-10(BCRF1 단백질)의 클로닝 및 발현은 문헌[참조: Moore et al., Science 248: 1230 (1990)]에 나타나 있다.

IL-10의 경우, 이의 활성 단편, 유사물 및 동족체를 포함한다. IL-10에 대한 활성 단편, 유사물 및 동족체는 상기 단백질, 폴리펩티드, 또는 하나 이상의 다양한 특성의 IL-10 활성을 갖는 펩티드를 포함한다. 어떠한 상기 단백질성 실체라도 글리코실화되거나 비글리코실화될 수 있다. IL-10 활성의 예는 IL-2, 림포톡신, IL-3 또는 GM-CSF 수준의 억제 또는 실질적 감소를 포함한다. IL-10 활성은 또한 활성화 마크로파지, 예를 들면 IL-1, IL-6 및 TNF-α에 의한 사이토킨 생성의 억제를 포함한다.

IL-10 활성을 측정하는 방법 및 검정의 예는 문헌[참조: 미국 특허 제5,231,012호]을 참조한다. 이 특허는 또한 IL-10 활성을 갖는 단백질과 재조합 및 합성 기술을 포함하는 상기 단백질의 생산을 제공한다.

폴리펩티드 IL-10을 포함하는 약제학적 조성물을 제조하기 위해 폴리펩티드는 바람직하게는 비활성인 약제학적으로 허용되는 담체 또는 부형제와 혼합한다. 약제학적 담체는 환자에게 폴리펩티드를 전달하기 적합한 상용성의 어떠한 무독성 물질일 수 있다. 상기 약제학적 조성물의 제조는 당해 기술분야에서 공지되어 있다[참고 문헌: Remington's Pharmaceutical Sciences, and U.S. Pharmacopeia: National Formulary, Mack Publishing Company, Easton, PA(1984)].

폴리펩티드와 첨가제의 비율은 모두가 약제학적 유효량으로 존재하는 한 넓은 범위에서 다양할 수 있다. 1회 복용량 기준으로 펩티드의 양은 약 1㎎(㎍) 내지 약 10㎎일 수 있다.

조성물은 체내로 경구적으로 또는 주사로 투여될 수 있다. 경구 용도의 제제는 위장에서 분비되는 프로테아제로 부터 폴리펩티드를 보호하는 화합물을 포함한다. 일반적으로 근육내, 피하, 피부내 또는 정맥내로 주사될 수 있다. 또한 관절내로의 주사 또는 기타 경로는 적당한 환경에서 사용될 수 있다.

비경구로 투여될 경우, 조성물은 약제학적 담체와 함께 주사 가능한 형태(용액, 현탁액, 유액)의 단위 복용량으로 제형화될 수 있다. 예를 들면 폴리펩티드는 다양한 첨가제 및/또는 희석제 존재 또는 부재하에 물, 식염수와 같은 수성 비히클 또는 완충 비히클로 투여될 수 있다. 적합한 담체의 예는 일반 식염수, 링거액, 덱스트로즈 용액 및 행크액이다. 고정 오일 및 에틸 올레에이트와 같은 비 수용성 담체도 사용될 수 있다. 바람직한 담체는 5% 덱스트로즈/식염수이다. 담체는 등장성 및 화학적 안정성을 강화하는 물질, 예를 들면 완충액 및 보존액과 같은 소량의 첨가제를 함유할 수 있다. 그러나, IL-10은 바람직하게는 실질적으로 침전물 및 단백질이 없는 정제된 형태로 제형화될 수 있다. 또한 현탁액, 예를 들면 아연 현탁액은 폴리펩티드를 포함하여 제조될 수 있다고 공지되어 있다. 상기 현탁액은 피하(SQ) 또는 근육내(IM)로 주사하기에 유용할 수 있다.

본 원에 사용된 "치료학적 유효량"은 급성 백혈병의 증후 또는 신호를 개선하에 충분한 양을 의미한다. AML 및 ALL은 둘다 골수에서 아세포가 신생 세포의 >30%으로 증가됨으로 정의된다. 증후 및 임상학적 신호는 각 개인마다 다를 수 있다. 사이토킨 치료 동안 임상학적 상태가 악화되면, 예를 들면 열, 골수 손상, 말초 혈액 또는 골수에서 아세포가 증가될 수 있다. AML 치료의 효과를 평가할 경우, 이것은 일반적으로 골수 및 말초 혈액 값으로 조사된다. 골수 아세포의 감소 및 말초 혈액수의 감소가 50% 이상일 경우, 혈액수가 정상보다 낮을 경우라도 수혈 의존성이 감소되는 것과 같이, AML 및 ALL은 개선되거나 부분적으로 완화될 수 있다. AML 및 ALL의 경우 치료에 대한 완전한 완화는 5% 이하의 아세포를 갖는 골수의 정상 세포질, 및 과립구 및 혈소판에 대해 정상 말초 혈액수로 종종 정의된다.

치료될 수 있는 전형적 포유류는 개 및 고양이와 같은 컴패니언 동물 및 사람을 포함한 영장류를 포함한다. 바람직하게는, 치료하는 목적 동물종으로 부터 추출된 IL-10이 사용될 수 있다. 각 환자에 대한 유효량은 치료될 조건, 환자의 건강, 투여하는 방법, 경로 및 복용량, 및 부작용의 통증과 같은 인자에따라 다양할 수 있다. 적합한 복용량의 측정은 당해 분야에서 공지된 기준을 사용하여 임상의에 의해 수행된다. 일반적으로 복용량은 적당량보다 어느정도 적은 양에서 시작해서 목적하는 또는 적당한 효과를 달성할 때까지 소량씩 증가시킨다(참고 문헌: The Merck Manual §269 "Pharmacokinetics and Drug Administration").

소수의 AML 환자에서 아세포 증식의 증가를 나타내는 하기 기술된 시험관내 데이터의 관점에서, 요법이 명백하게 취해져, IL-10으로 치료받고 있는 환자가 아세포 증식의 증가를 나타내는가에 대해 모니터해야 한다. 추가의 조치에 따라 유망한 환자는, 예를 들면 시험관내 시험으로 먼저 스크리닝할 수 있다. 하기의 실시예로 기술한 방법은 이 목적으로 사용될 수 있다. 예를 들면 하기 실시예에 나타낸 바와 같이 적합한 시험관내 시험은 환자로 부터 백혈병 아세포를 제거하고, IL-10 존재 및 부재시 시험관내에서 세포를 배양하고, 세포증식을 측정하고, IL-10 부재시 배양된 세포의 증식에 대한 IL-10과 배양된 세포의 증식을 비교함을 포함할 수 있다. 이 방법에서 증식의 측정은, 예를 들면 하기 실시예에서 기술된 방법에 따라서³H-티미딘 혼합으로 검정하므로 수행될 수 있다. 환자를 스크리닝하는 대안적 방법에 따라 콜로니 형성 또는 사이토킨 분비에 대한 영향은 IL-10의 존재 및 부재하에 시험될 수 있다.

IL-10의 바람직한 총 1일 복용량은 체중 1㎏당 약 1㎍ 내지 약 500㎍의 범위에서 선택된다. 더욱 바람직하게는, 치료학적으로 허용되는 양은 체중 1㎏당 약 10㎍ 내지 약 200㎍의 범위에서 선택된다. 가장 바람직하게는, 치료학적으로 허용되는 양은 체중 1㎏당 약 25㎍ 내지 약 100㎍의 범위에서 선택된다. 복용량은 목적하는 치료에 효과를 나타내는 스케쥴에 따르고, 단기 또는 장기의 기간일 수 있다. 1일 주입율은 부효과, 혈액 세포수 및 효율의 모니터링을 기준으로 다양할 수 있다[참고 문헌: Gilman et al. (eds.) (1990)Goodman and Gilman's: The Pharmacological Based of Therapeutics8th ed., Pergamon Press; (1990)Remigton's Pharmacological Sciences,17th ed., Mack Publishing Co., Easton, Penn.; Avis et al.(eds) (1993)Pharmaceutical Dosage Forms:Parenteral Medications. Dekker, New York; Leiberman et al.(eds.) (1990)Pharmaceutical Dosage Forms: TabletsDekker, New York; and Lieberman et al.(eds) (1990)Pharmaceutical Dosage Forms: Disperse SystemsDekker, New York].

바람직하게는, 약제학적 유효량은 앰플인 단위 복용량이다. 또한 약제학적 유효량은 다중 복용량을 함유하는 바이알일 수 있거나 일부 기타 형으로 제공될 수 있다. 1일 총 복용량은 단일 주사, 연속 주입으로 제공될 수 있거나 환 정맥 투여 또는 근육내 주사와 같은 일부 다른 경로로 투여하기 위해서 몇몇 소량의 복용량으로 분리될 수 있다. 본 발명의 조성물은 또한 이식 가능하거나 주사가능한 약물 전달 시스템으로 환자의 체내로 도입될 수 있다[참고 문헌: Urquhart et al., Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 24: 199 (1984); Lewis (Ed.), Controlled Release of Pesticides and Pharmaceuticals (Plenum Press, N.Y., 1981); 미국 특허 제3,270, 960호 등]. 적합한 환경에서 IL-10은 또한 리포좀으로 캡슐화될 수 있다.

적합한 환경에서 다중 약제는 혼합하여 투여될 수 있다. 예를 들면 IL-10은 기타 화학치료 또는 화학보호 물질과 혼합하거나 결합하여 공동-투여되거나 사용될 수 있다. 상기 물질의 예는 콜티코스테로이드, 설파살라진, 설파살라진의 유도체, 사이클로스포린 A, 머캅토퓨린 및 아자티오프린과 같은 면역억제 약물, 및 다른 사이토킨을 포함한다[참고 문헌: Thorn et al. (eds.)Harrison's Principles of Internal Medicine, McGraw-Hill, New York; Wyngaarden et al. (eds)Cecil Textbook of MedicineSaunders, Philadelphia and Weatherall et al. (eds.)Oxford Textbook of MedicineOxford University Press, New York]. 공동-투여는 연속적이거나 동시일 수 있다. 공동-투여는 일반적으로 다중(이중 이상) 치료제가 구체화된 시간 간격 동안 부형제에 존재함을 의미한다. 전형적으로, 2차 물질이 1차 물질의 반감기내에 투여될 경우, 두 물질은 공동-투여되리라 생각된다.

추가로 IL-10은 동종의 골수 이식과 함께 투여될 수 있다. "와 함께"는 IL-10이 이식 전, 동안, 또는 후(또는 경우에 따라 화학치료 전, 동안, 또는 후)에 투여함을 의미한다. 본 발명의 치료는 또한 재발한 환자의 급성 백혈병을 조절하는데 사용될 수 있다.

본 발명의 넓은 범위는 하기의 실시예의 참조로 잘 이해되나 본 발명을 특정 양태로 제한하고자 함은 아니다.

재료 및 방법

환자 - AML 27명 및 ALL 5명을 연구한다. 각 환자의 임상적 특징을 하기 표 1에 나타낸다.

급성 백혈병 환자의 임상적 특징

환자	성별	나이	이전의 혈액학적 질병	FAB 분류	CD3	CD13	CD14	CD15	CD19	CD20	CD33	CD34
1	M	73	만성 골수섬유증	AML-M2	-	+	-	nt	-	-	+	nt
2	F	67		AML-M1	-	+	-	nt	-	-	-	-
3	F	83	1차 골수이식 부전증	AML-M2	-	+	-	nt	-	-	+	-
4	M	56		AML-M4	-	+	-	+	-	-	+	-
5	F	72	다중 골수종	AML-M2	-	-	+	nt	-	-	+	-
6	F	67		AML-M2	-	+	-	nt	-	-	+	-
7	M	30		AML-M2	-	-	-	nt	-	-	+	-
8	M	67	1차 골수이식 부전증	AML-M2	-	+	-	nt	-	-	+	-
9	M	82		AML-M4	-	+	-	-	-	-	+	+
10	F	37		AML-M5	-	+	+	+	-	-	+	-
11	F	54		AML-M2	-	+	-	nt	-	-	+	-
12	F	64		AML-M2	-	+	-	nt	-	-	-	-
13	M	75	비-호지킨스 림프종,CHOP 치료	AML-M4	-	+	-	nt	-	-	+	nt
14	M	47		AML-M4	-	+	+	nt	-	-	-	-
15	M	80		AML-M4	-	-	+	nt	-	-	-	-
16	F	56	1차 골수이식 부전증	AML-M4	-	+	+	-	-	-	+	+
17	M	47		AML-M2	-	+	+	nt	-	-	+	+
18	M	64		AML-M4	-	+	-	+	-	-	+	+
19	M	33		AML-M4	-	+	+	+	-	-	+	+
20	M	23		AML-M4	-	+	-	+	-	-	+	-
21	M	32		AML-M4	-	+	+	+	-	-	+	+
22	F	66		AML-M2	-	+	-	+	-	-	+	+
23	F	44		AML-M4	-	-	-	-	-	-	+	+
24	F	52		AML-M4	-	+	+	+	-	-	+	+
25	F	69		AML-M2	-	+	-	+	-	-	+	+
26	F	25		AML-M4	-	+	+	-	-	-	+	+
27	M	33	CML	CML	-	+	-	+	+	-	+	+
28	M	84		ALL	-	-	-	-_	+	nt	-	-
29	F	16		ALL	+	-	-	-	+	+	-	-
30	F	58		ALL	-	-	-	-	+	+	-	-
31	F	29		ALL	+	-	-	-	-	-	-	-
32	M	78		ALL	-	-	-	-	+	nt	-	+

상기 표 1에서 +로 염색된 아세포가 20% 이상으로 플로우 사이토메트릭 분석으로 판단된 경우 급성 백혈병 세포는 +로 간주한다. 분류에 대한 더 많은 정보에 대한 참고 문헌이 표 1에 사용된다. 참고 문헌[Hayhoe, Blood Reviews, 2:186-193, Scotland (Sept. 1988) 및 Knapp et al. Leukocyte Typing Ⅳ White cell differentiation antigens, (Oxford University Press 1989)].

배양 배지- 배양 배지는 젠타미신 100㎍/㎖ 및 10% 불활성 송아지 태아 혈청 (HiClone; USA)를 가한 글루타민 및 헤페스(Gibco; UK)를 갖는 RPMI 1640이다.

조건화된 배지- 건강한 개인으로 부터 말초 혈액 단핵 세포(PBMCs) 1×10⁶/㎖을 파이토헤마글루티닌(PHA HA 16; Wellcome, UK) 1㎕/㎖과 함께 배양배지에서 3일간 배양한다. 그 후 배양 상등액을 회수하고, 이후부터 "조건화된 배지"라고 칭한다.

사이토킨- 재조합 사람 사이토킨은 AML 아세포 배지에서 하기의 농도로 사용된다: IL-2 (R&D System Europe, UK) 20ng/㎖; IL-3 (R&D System Europe, UK) 40ng/㎖; G-CSF (Sandoz;Switzerland) 100ng/㎖; GM-CSF (Sandoz;Switzerland) 100ng/㎖; IL-10 (Schering0Plough Corp., USA.) 100ng/㎖. 참조문헌[Bruserud et al., Leukemia Res. 17: 507 (1993), Lemoll et al., Leukimia 5: 386 (1991); Assano et al., Blood 72: 1682 (1988).

세포 제조- PBMCs를 밀도 구배 분리(Ficoll-Hypague, NyCoMed, Norway; specific density 1.077)로 분리한다. 상기 단핵 세포(>95%)중 높은 %의 백혈병 아세포를 수득하기 위해 말초 혈액중의 다수의 아세포를 갖는 환자만을 연구에 포함시킨다. 세포를 액체 질소에 동결 저장한다. 사용된 동결 및 해동 방법은 문헌[참조: Bruserud, Acta Oncol. 31: 53(1992)]에 기술되있다.

증식 검정- 문헌[참조: Bruserud et al., Leukemia Res.17: 507 (1993) 및 Bruserud, Acta Oncol. 31: 53(1993)]에 기술된 바대로 급성 백혈변 아세포 5×10⁴/웰을 각 웰당 150㎕ 배지를 함유하는 바닥이 납작한 미세적정 플레이트(Costar; USA)에서 저장한다. 세포를 5% CO₂의 37℃의 습한 대기에서 배양한다. 배지를 회수하기 전에³H-티미딘 37kBq/웰(TRA 310; Amersham, UK)를 24시간 동안 가하고, 핵 방사성을 액체 섬광 카운팅하여 측정한다.

콜로니-형성 검정- AML 아세포(2×10⁶/웰)을 각 웰에 200㎕ 배양배지를 함유하는 24웰 조직 배양 플레이트(Costar, USA)에서 배양한다. 모든 배지는 2회반복한다. 콜로니수 20개 이상은 배양 9일 후에 계수한다.

사이토킨 생성의 분석- 문헌[참조: Bruserud et al., Leukemia Res.19: 15 (1995)]에 기술된 바대로 AML 아세포 1×106/㎖을 각 웰에 배지 2㎖을 함유하는 24웰 조직 배양 플레이트에서 배양한다. 상등액을 회수하기 전48시간 동안 배양한다. 사이토킨 분비는 배양 상등액에서 사이토킨 농도를 측정하므로 분석한다. IL-1α, IL-1β, IL-1RA, IL-4, IL-6, TNFα 및 GM-CSF의 농도는 ELISA 검정(Quantikine ELISA kits, R&D System Europe; UK)를 사용하여 측정한다. 모든 검정은 제조자의 지시에 따라 엄격하게 수행된다. 간략히 표준 샘플 및 상등액의 희석은 배양 배지에서 제조된다. 표준 곡선는 2회 반복 측정치의 평균을 사용하여 측정하고, 2회 반복간의 차이는 일반적으로 평균의 <10% 이다. 상등액을 희석하여 분석하고, 그 결과를 표준 곡선 범위내의 농도로 측정된다. 각 검정의 최소 검출 농도는 IL-α 0.3pg/㎖, IL-β 0.3pg/㎖, IL-1RA 6.5pg/㎖, IL-4 3pg/㎖,, IL-6 0.35 pg/㎖, TNFα 4.8pg/㎖ 및 GM-CSF 1.5pg/㎖이다.

데이터 발표- 증식 검정은 3회 반복 수행한다. 3회 배양의 분(cpm)당 배지 계수는 통계적 분석으로 사용된다. 현저한 증식은 >1000 cpm에 상응하는³H-티미딘으로 정의되고, 초과의 -는 표준편차(standard deviation) 3이하로 조절한다. 중요한 증가/감소는 (ⅰ) 1500cpm 이하의 변화, 대조구 배지에서 초과의 10% 반응의 변화; 또는 (ⅱ) 비증식에서 현저한 증식으로의 전환으로 정의된다. 통계적 분석을 위해 짝지은 샘플의 윌코슨 시험을 사용하고(참조 문헌: Wonnacott and Wonnacott, Introductory statistics, Third Edition, Wiley 1977), 상기 통계적 계산으로 중간 cpm을 증식 검정용으로 사용한다.

결과

시험관 내에서 AML-아세포의 자발적 증식에 대한 IL-10의 영향

16명의 환자(환자 1 내지 16)의 AML 아세포는 배지중에 단독 및 IL-10(100 내지 0.01ng/㎖)의 다양한 농도로 생체내에서 배양되고,³H-티미딘 혼입은 7일 후에 검정된다. 7명의 환자에서 AML 아세포가 배지에서 단독으로 배양도리 경우 비증식이 나타난다. 생체내에서 증식이 자발적으로 나타나는 9명의 환자에서 IL-10은 초과의 1ng/㎖ 농도에서 증식 상태에 대해 복용량-의존성 효과를 나타낸다. 2명의 환자(환자 2 및 15)에 대한 결과는 각각 도 1A 및 1B에 나타낸다(△).

도 2A는 배지중 단독으로 배양될 경우 세포가 이미 증식된 9명의 환자에 대한 AML 아세포 자발적 증식에 대한 IL-10(10ng/㎖)의 효과를 나타낸다. 도 2A의 왼편은 IL-10 부재시 배양에서의 증식(3H-티미딘 혼입 예시)으로 나타나는 반면, 이 도의 오른편은 IL-10(10ng/㎖) 존재시 배양에서의 증식으로 나타난다. 상기 데이터에 나타낸 바대로 IL-10은 선택된 9명의 환자중 2명(환자 1 및 2)에서 소량의 그러나 통계적으로 현저한 AML 아세포 증식의 증가를 일으킨다. 잔류의 7명 환자에서 IL-10은 AML 아세포 증식(p=0.049)의 복용량-의존적 억제의 결과를 수득한다. 6명의 환자(환자 번호 1, 2, 5, 10, 14, 16)에서 IL-10의 효과는 반복된 실험에서 재생된다(데이타 미제시).

시험관 내에서 사이토킨-의존적 AML 아세포 증식에 대한 IL-10의 효과

G-CSF 의존적 증식- 환자 1 내지 16으로 부터 AML 아세포를 G-CSF(100ng/㎖) 및 상이한 농도(100 내지 0.01 ng/㎖)의 IL-10과 배양한다. 그 후³H-티미딘 혼입하여 7일 후 에 검정한다. G-CSF만이 10명의 환자에 대해 현저한 AML 아세포 증식을 일으키고, 10명의 환자중 9명에 대해 IL-10은 1ng/㎖ 초과의 농도에서 정체상태를 갖는 AML 아세포 증식에 대한 복용량-의존적 효과를 나타낸다. 환자 2 및 15에 대한 결과는 도 1A 및 도 1B에 각각 나타낸다(●). 전반적 결과(100 내지 0.1ng/㎖에서의 IL-10)를 비교해볼 경우, IL-10은 단 4명의 환자(환자 2, 8, 13 및16)에 대해 G-CSF 증식의 증가를 나타내고, 반면 6명의 환자의 증식은 변화가 없거나 감소된다. 10ng/㎖의 농도에서 IL-10을 시험할 경우의 결과를 도 2B에 나타내고, 도면에서 알 수 있듯이 증가된 증식은 10명의 환자중 단 3명에서만 나타난다.

GM-CSF 의존적 증식- 16명의 환자(환자 1에서 16)로 부터 AML 아세포는 이 환자중 12명에 나타난 현저한 증식을 갖는 GM-CSF(100ng/㎖)과 배양한다. IL-10(100 내지 0.01ng/㎖의 농도에서 시험)은 5명의 환자(환자 2, 6, 8, 13, 16)에 대한 증식을 증가시키는 반면, 7명의 환자(참조: 도 2C)는 변하지 않거나 감소된 증식을 나타낸다. IL-10은 현저하게 아세포 증식을 변화시키고, 이 영향은 1ng/㎖ 초과의 최대 농도에서 복용량-의존적으로 나타낸다. 환자 2 및 환자 15에 대한 결과는 도 1A 및 1B를 각각 나타낸다(○).

IL-3 의존적 증식- AML 아세포를 IL-3(20ng/㎖)과 배양한 후 시험한 16명의 환자중 11명에 대해 현저한 증식을 나타낸다(데이터 미제시). IL-10(100 내지 0.003ng/㎖의 농도로 시험)은 시험한 11명의 3명의 환자(환자 2, 6 및 9)에 대한 증식을 증가시킨 반면, 8명의 환자의 증식은 변하지 않거나 감소된다(참조: 도 2D). IL-10이 AML 세포 증식의 현저한 변화를 일으킬 경우, 이 효과는 1ng/㎖ 초과의 농도에서 정체현상을 갖는 복용량-의존성임을 나타낸다. 환자 2 및 15의 결과는 도 1A 및 1B를 각각 나타낸다. 6명의 환자(환자 1, 2, 5, 20, 14, 16)에서, 사이토킨-의존성 증식(G-CSF, GM-CSF, IL-3)에 대한 IL-10의 효과는 반복된 실험에서 재생성된다(데이터 미제시).

정상 PBMC의 PHA-자극된 증식에 대한 IL-10의 효과

IL-10의 항-증식 효과가 시험관내의 세포에 대한 IL-10 제조의 독성 효과에 의하지 않는다는 것을 추가로 나타내기 위해서 정상 PBMCs(시험한 10명의 건강한 사람)을 적당한 농도의 파이토해마글루티닌으로 자극하고 3일 후에 증식을 검정한다. IL-10(20ng/㎖)은 PBMC 증식을 변화시키지 않는다(데이터 미제시).

IL-10으로 전배양한 후 AML 아세포 증식은 억제된다.

IL-10(100 및 20ng/㎖) 존재 및 부재시 AML 아세포를 배양 배지에서 배양한다. 48시간 후 세포를 세척하고, 세포 농도를 조절하고 추가로 5일 동안 배양된 아세포를³H-티미딘 혼입으로 검정한다. 마지막 5일 동안 AML세포는 단독 및 G-CSF, GM-CSF, G-CSF+GM-CSF 또는 IL-3과 함께 배지에서 배양된다. 10명의 환자를 연구하였다. 환자 2에 대한 결과는 도 3A에 나타내고, 환자 15에 대한 결과는 도 3B에 나타낸다. AML 아세포가 마지막 5일 동안 단독 또는 IL-3과 함께 배양될 경우, IL-10과의 전배양은 증식을 현저하게 변화시키지 않고 감소시킨다. IL-10이 모든 배양 기간동안 존재할 경우 증가된 증식을 나타내는 환자일지라도 자발적 증식의 억제가 나타난다(참조: 도 3A). L-10 전배양후 사이토킨-의존성 AML 아세포 증식에서의 소폭의 증식이 아세포를 G-CSF(1/11), GM-CSF(1/11) 및 G-CSF+GM-CSF(3/11)과 5일동안 배양한 경우, 나타날 수 있으나, 모든 배양 시기에서 IL-10과 배양된 AML 아세포보다 낮은 증식을 나타낸다. 4명의 환자(환자 1, 2, 11, 13)는 반복 실험한 후 IL-10 전배양의 AML 아세포 증식에 대한 억제 효과가 재생될 수 있다(데이터 미제시).

시험관 내에서 AML 아세포의 콜로니 형성에 대한 IL-10의 효과

IL-10이 클론원성의 AML 세포의 성장을 억제할 수 있는지를 연구하기 위하여 5명의 환자로 부터 아세포를 콜로니 형성 검정에서 조혈성 성장 인자와 배양한다. 배양액은 IL-10(20ng/㎖) 존재 및 부재시 제조된다. 모든 환자에서 아세포를³H-티미딘 검정으로 부터 판단된 가장 강한 증식 반응을 일으키는 사이토킨과 배양한다. 결과를 하기 표 2에 나타낸다. 데이터에 나타낸 바대로 IL-10을 연구된 모든 5명의 환자에서 콜로니 형성을 억제한다.

AML 아세포 콜로니 형성에 대한 IL-10의 효과

	콜로니 형성**
환자	사이토킨	배양 배지 단독	배양 배지+IL-10 20ng/㎖
9	G-CSF	29.5±2.1	19.0±2.8
10	IL-3	8.0±2.8	0
14	G-CSF	7.5±0.7	4.5±0.7
15	G-CSF	16.0±4.2	3.5±2.1
16	IL-3	8.0±2.8	0
**결과를 웰±SD당 평균 콜로니수로 나타낸다.모든 시험은 2회 반복으로 수행된다.

시험관 내에서 ALL 아세포에 대한 IL-10의 효과

ALL을 갖는 5명의 환자로 부터 추출된 아세포를 10% 조건화된 배지 및 IL-2 20ng/㎖ 존재하의 IL-10(100 내지 0.03ng/㎖) 존재 및 부재시 시험관에서 배양하고, 5일 후에³H-티미딘 혼입한다. 모든 환자에 대한 ALL 아세포 증식의 복용량-의존적 억제을 일으키는 IL-10을 연구한다. 환자중 3명의 결과를 도 4에 나타낸다. 구체적으로 도 4는 ALL 환자 28(●), 29(▲) 및 30(○)으로 부터 추출된 아세포의 성장인자 의존적 증식에 대한 IL-10의 효과를 나타낸다. 결과는 3회 반복 배지의 평균 cpm±SD로 나타낸다.

AML 아세포로 부터 사이토킨 분비에 대한 IL-10의 효과

AML 아세포를 48시간 동안 시험관 내에서 배양하고, 다양한 사이토킨의 농도를 배양 상등액에서 측정한다. 세포는 IL-10(20ng/㎖)의 존재 및 부재시 배양된다. IL-1 분비의 전체적 결과를 AML 아세포로 부터 배양 상등액에 IL-10의 농도로 도 5A 및 5B에 나타낸다. 구체적으로, 도 5A는 10 사례(환자 18 내지 27, p=0.01)에서 IL-1α의 분비에 대한 IL-10의 효과를 나타내고, 도 5B는 환자 1 내지 27(p<0.0005)에 대한 IL-1β의 분비에 대한 IL-10의 효과를 나타낸다. IL-10의 부재시 IL-1α 및 IL-1β의 분비는 실험된 모든 환자에서 검출될 수 있다. 이에 반해 IL-10의 존재가 모든 환자에 대한 IL-1α 및 IL-1β의 분비를 억제한다고 연구되었다.

IL-6, TNFα 및 GM-CSF의 아세포 분비는 또한 상기 기술도니 바대로 연구되었다. 그 결과를 IL-10(20ng/㎖)의 존재 및 부재시 48시간 동안 배양된 AML 아세포 배양액으로 부터의 상등액에서 사이토킨의 농도로 도 6A, 6B 및 6C로 나타낸다. 세포가 배지중 단독으로 배양될 경우, IL-6은 시험된 모든 환자에서 검출될 수 있고, 도 6A에서 나타낸 바대로 IL-10은 IL-6의 농도를 현저하게 감소시킨다(n=25; p<0.0005). 세포가 배지중 단독으로 배양될 경우, TNFα는 27명의 환자(환자1 내지 27)중 25명에서 검출될 수 있고, 도 6B는 IL-10이 TNFα의 분비를 현저하게 감소시킨다고 나타낸다(n=25; p<0.001). GM-CSF는 연구된 21명의 환자중 18명에서 검출되나 도 6C에서 나타낸 바대로 IL-10은 18명이 모든 환자에서 GM-CSF의 감소된 분비를 일으킨다(n=18; p<0.0005).

6명의 환자에 있어 IL-1β, IL-6 및 TNFα의 분비는 반복된 실험으로 시험되고, 그후 IL-10의 억제 효과는 재생될 수 있다(참조: 표 3).

시험관내에서 백혈성 PBMC 및 풍부한 AML 아세포에 의한 사이토킨 분비에 대한 IL-10의 효과

환자	AML 세포	IL 10 20㎎/㎖	사이토킨1
			IL 1β	IL 6	TNFα
1	PBMC	-+	nd2nd	ndnd	ndnd
	풍부한 아세포	-+	ndnd	ndnd	ndnd
2	PBMC	-+	1220±28nd	996±21.216±1.4	300±17nd
	풍부한 아세포	-+	495±21nd	285±14.211±1.4	172±0nd
5	PBMC	-+	145±0nd	3750±70.0nd	4320±11314.2±3.1
	풍부한 아세포	-+	510±42nd	4050±7.07nd	4500±141nd
10	PBMC	-+	ndnd	87.5±1.410.5±1.4	584±22.682±2.8
	풍부한 아세포	-+	ndnd	81±1.44.4±2.8	568±11.336.2±1.4
14	PBMC	-+	220±28nd	636±17.037±7.1	ndnd
	풍부한 아세포	-+	45±13nd	170±2.89.2±0.6	ndnd
16	PBMC	-+	300±14nd	1580±28nd	780±28.3nd
	풍부한 아세포	-+	455±2185±1.4	1660±1411230±42.4	640±28.361±1.4
1. 사이토킨 분비는 상등액을 회수하기 전 IL 10 20ng/㎖의 존재 및 부재시48시간 동안 배양된 배지에서 백혈성 PBMC 또는 풍부한 아세포를 배양하므로분석하고, 사이토킨 농도를 측정한다. 결과를 2회 반복 평균 농도(pg/㎖)±표준편차로 표시한다.2. nd: 비검출

환자 18 내지 27에서 증식은 사이토킨 측정과 함께 IL-10 존재 및 부재시 배지에서 검정된다. 상기 실험에서 AML 아세포는 1×10⁶/㎖ 농도에서 배양되고,³H-티미딘을 24시간 후에 가하고, 배지를 48시간 후에 회수한다. IL-10 부재시 배양하는 동안 현저한 증식은 환자 21, 23 및 25에서 검출될 수 없는 반면, IL-10은 현저한 증식을 나타내는 7명의 모든 환자에서 아세포 증식을 억제한다(n=7; 평균 억제율 26%; 범위 1 내지 63%).

본 발명의 많은 변형과 변화는 당해 기술분야에서 명백하다. 본 원에 기술한 특정 양태는 실시예로만 제공되며, 본 발명이 이에 제한되지 않는다.

Claims (16)

1. 포유류에게 치료학적 유효량의 인터루킨-10을 투여함을 포함하여 포유류의 급성 백혈병을 치료하는 방법.
2. 제1항에 있어서, 급성 백혈병이 급성 골수성 백혈병인 방법.
3. 제1항에 있어서, 급성 백혈병이 급성 림프구성 백혈병인 방법.
4. 제1항에 있어서, 인터루킨-10이 바이러스성 인터루킨-10 및 사람 인터루킨-10으로 이루어진 그룹으로 부터 선택되는 방법.
5. 제1항에 있어서, 2차 치료학적 활성 물질의 치료학적 유효량을 투여함을 추가로 포함하는 방법.
6. 제5항에 있어서, 2차 치료학적 활성 물질이 사이토킨인 방법.
7. 제5항에 있어서, 2차 치료학적 활성 물질이 화학치료제인 방법.
8. 제1항에 있어서, 인터루킨-10을 정맥내 투여하는 방법.
9. 제1항에 있어서, 인터루킨-10이 급성 백혈병 아세포에 대해 항증식 효과를 갖는데, 이 효과가 인터루킨-10의 투여가 중지된 후에도 지속되는 방법.
10. 제1항에 있어서, 인터루킨-10의 유효량이 약 10㎍ 내지 약 200㎍/㎏/일인 방법.
11. 제1항에 있어서, 인터루킨-10의 유효량이 약 25㎍ 내지 약 100㎍/㎏/일인 방법.
12. 제1항에 있어서, 인터루킨-10이 동종의 골수 이식과 함께 투여되는 방법.
13. 급성 백혈병을 앓고 있는 포유류에게 인터루킨-10의 치료학적 유효량을 투여함을 포함하여, 급성 백혈병 아세포의 증식을 억제하는 방법.
14. 제13항에 있어서, 인터루킨-10의 투여가 중지된 후에도 억제가 지속되는 방법.
15. 제13항에 있어서, 급성 백혈병이 급성 골수성 백혈병인 방법.
16. 제13항에 있어서, 급성 백혈병이 급성 림프구성 백혈병인 방법.