KR19990023798A - 항종양제 - Google Patents

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Abstract

본 발명에의한 항종양제(s)는 활성 효소성분(A)과 그 기질(B)로 구성되어있다. 활성 효소성분(A)은 중합체와 화학적으로 접합되어있는 산화환원효소이며, (B)를 투여하면, 초산화물(superoxide) 등의 활성 분자종(C)을 형성한다.
가장 바람직한 산화환원효소는 크산틴 산화효소이며, 그 기질은 하이포크산틴 혹은 크산틴이며, 가장 바람직한 화학적 접합용 중합체는 폴리(에틸렌글리콜)이다.
중합체와 접합되어있는 활성 효소성분(A)은 종양 기호성 표적 특성을 지닌다. 즉 공지의 (A)용 기질(B)(하이포크산틴 혹은 크산틴)를 주사하면, 활성 자유라디칼 성분(C)(및 H2O2) 을 발생시키는 효소반응에 의해서, 항종양제는 종양조직에 선택적으로 축적하여 항종양작용을 나타낸다. 폴리(에틸렌글리콜)(A)과 접합되어있는 크산틴 산화효소와 그 기질(B)은 그 자체는 무독성이다. 강력한 항종양 활성은 그 기질(B)을 나중에 분리하여 투여할 때 명백히 나타난다. 이렇게 하면, 탁월한 항종양 활성을 발휘하는 반면에 신체조직상의 독성은 거의 나타나지 않는다. 그러므로 본 발명은 커다란 이익을 제공한다.

Description

항종양제
본 발명은 그 자체가 무독성이고, 뒤이은 무독성 기질성분의 투여 직후의 종양조직에 대한 그 기호성 축적 때문에 종양 선택성 세포독성 작용을 발휘하는 항 종양제 군과, 상기 항종양제의 투여에 의한 암 치료 방법에 관한 것이다. 구체적으로는 중합체와 화학적으로 접합되어있는 크산틴 산화효소등의 산화환원효소로 구성된 무독성 항종양제 사용의 향상과, 하이포크산틴 혹은 크산틴 등의 기질의 경시적 주사에 관한 것이다.
미토마이신 및 독소루비신 등의 몇가지 항종양제는 그 반응성 산소종의 발생능력에의해 항종양효과가 발휘된다는 것이 알려져있다. 이전의 알.브레이(R. Bray)와 그 공동연구자들에 의한 연구(Nature, 182, 1144-1146, 1958) 및 최근의 티.요시카와(T. Yoshikawa)와 그 공동연구자들의 연구(Cancer Res., 55: 1617-1620, 1995)에서는 아마도 반응성 산소종의 발생에 의한 크산틴 산화효소( 이후는 XO라 한다.)의 항종양 활성이 보고되어 있다. 그러나, 브레이(R. Bray) 및 스완(J. C. Swann)에의한 native-XO의 항종양 효과에 대한 비판적 재평가에 의하면, 그 효과는 불충분하다는 것을 밝히고 있다(Structure and Bonding, 11, 107∼144, 1972, published by Elsevior, a note added in footnote of page 112). 본 발명인들도 그렇다는 것을 재확인 하였다.
이와 같은 항종양 약물로 부터 발생하는 반응성 산소종은 높은 세포독성 성질에 따른 항종양효과를 발휘한다. 그러나 이들 약물이 신체조직상에 퍼지면 해로운 부작용을 일으킨다(J. Clin. Invest., 98:1253 - 1260, 1996). 예를들면 native- XO는 혈관 내피세포에 강한 결합친화력을 지니므로, 혈액에 투여되면 혈관과 결합한다(Biochem. J., 289: 523-527, 1993). 혈관에 XO가 결합하면 다음과 같은 심각한 부작용이 예상된다.
i) XO부터 발생되는 초산화물 음이온 라디칼은 혈관을 산화시켜 손상을 준다.
ii) 초산화물과 혈관을 팽창시켜 혈압을 떨어뜨려서 혈압을 조절하는 내생적으로 형성된 질소 산화물(Pharmacol. Rev., 43: 109-142, 1991)과의 반응이, 혈관내 질소산화물의 양을 감소시켜서 고혈압을 일으킨다(Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88: 10045-10048, 1991).
iii) 초산화물과 질소산화물과의 반응 생성물인 과산화아질산에스테르( ONOO-)가 한층 더 혈관을 산화시켜 손상을 준다.
그러므로 native-XO를 임상용으로 사용하면 불리하다.
또한 내생성 anti-XO 항체(Brit. j. Biomed. Sci., 51: 124-127, 1994)를 정맥주사하면, XO의 활성을 감소시킬 수가 있다.
신체조직상의 부작용을 감소하면서 약효를 향상시키기 위하여서는, 항종양 효소를 종양조직에 선택적으로 공급할 필요가 있다. 본 발명의 발명인들은 이전에 고분자 약물 및 지질(lipid)이 다른 정상 기관에 비해 종양조직에 바람직하게 축적되며, 더구나 종양조직에 더 오래동안 보존됨을 발견하였다. 이 현상을 EPR 효과(enhanced permeability and retention effect, Cancer Res., 46:638792, 1986)로 말하며, 항종양제의 분자량을 증가시킴으로서 치료효과의 향상과 부작용의 감소를 기할 수 있었다( J. Controooed., 19: 315-324, 1992).
본 발명인들은 폴리(에틸렌글리콜)(이하 PEG라 한다)접합 ( 화학적으로 접합된 XO와 PEG를 이하 PEG-XO라 한다)후의 XO의 종양 축적이 뛰어나게 향상되어, PEG-XO의 항종양 효과가 현저하다는 것을 발견하였다. XO 분자표면위의 리신 잔기의 ε-아미노기에 PEG를 접합시키면, 높은 음이온 전하(charge)를 함유하는 내피세포와의 결합 친화도를 감소한다. PEG로 양이온성 아미노기를 차폐(masking)하면, 내피세포에 대한 PEG-XO의 결합이 감소하여 혈액순환 시간이 길어지므로 EPR효과에 의해 종양축적이 향상된다. PEG-XO를 투여한 후에 XO의 기질인 하이포크산틴을 투여함으로서, 이 효소의 반응생성물인 초산화물에 의해 종양 선택적인 항종양작용을 달성할 수가 있다(도 1).
또한 상기 효과는 XO 이외의 다른 산화환원 효소를 사용하고, 뒤이어 적당한 기질을 투여하여도 달성할 수가 있다. 그리고 산화환원 효소는 PEG 이외의 각종 중합체와 화학적으로 접합할 수 있다.
도1은 ddY 쥐(mice)의 S-180 충실성 종양 성장에 대한 native-XO와 PEG-XO-high(2회 투여)의 효과를 나타낸 도면.
도2는 ddY 쥐의 S-180 충실성 종양 성장에 대한 PEG-XO-high(3회 투여)의 효과를 나타낸 도면.
도3은 PEG-XO-high/하이포크산틴으로 치료하였을 경우와 치료하지않았을 경우의 ddY 쥐의 체중변화를 나타낸 도면.
도4는 native-XO와 PEG-XO의 겔 여과 크로마토그래피를 나타낸 도면.
도5는 S-180 충실성 종양을 지닌 ddY 쥐에 대한 주사후125I-레벨 native-XO와 PEG-XO-high의 체내 분포를 나타낸 도면.
도6은 정맥주사후 충실성 종양내에 PEG-XO-high의 축적을 나타낸 도면. 도6a 및 도6b는 각각 PEG-XO-high의 주사전 및 주사후 24시간 지난 S-180 충실성 종양조직의 XO 활성을 나타낸 것이다.
도7은 종양조직내의 PEG-XO-high 축적의 시간 의존성을 나타낸 도면.
즉 본 발명은 중합체와 화학적으로 접합된 산화환원 효소, 및 그 기질로 구성된 항종양제이다. 구체적으로 본 발명은 폴리(에틸렌글리콜)과 화학적으로 접합된 크산틴 산화효소, 및 그 기질인 하이포크산틴 혹은 크산틴으로 구성된 항종양제이다.
본 발명은 또한 필요한 환자에게 중합체와 화학적으로 접합된 상기 산화환원 효소를 치료적량 환자에게 투여하고, 뒤이어 그 기질을 투여하는 암치료 방법에 관한 것이다.
따라서, 본 발명은 종양에 선택적으로 축적됨으로서, 종양 선택성 세포독성을 발휘하는 항종양제를 제공하는 것이다. 독성은 하이포크산틴/크산틴의 투여에 의하여 발생한다.
실시의 형태
본 발명에 사용하는 산화환원 효소로서는 크산틴 산화효소, D-아미노산 산화효소, 글루코스 산화효소, 갈락토스 산화효소 등을 들 수있는데, 이중에서 크산틴 산화효소를 바람직하게 사용한다.
크산틴 산화효소를 산화환원효소로 사용할 때는, 그것의 기질은 하이포크산틴 혹은 크산틴이 된다. D-아미노산 산화효소, 글루코스 산화효소 및 갈락토스 산화효소의 기질은 각각 D-아미노산, 글루코스 및 갈락토스가 된다.
이들 산화환원효소는 중합체와 화학적으로 접합되어있다. 본 발명에서 바람직한 접합용 중합체의 절반은 PEG이지만, 항원 혹은 면역활성이 거의 없는 자연산및 기타 합성 중합체도 사용할 수 있다. 예를들어 풀루란, 키토산, 히알루론산, 헤파린, 헤파린 설페이트 혹은 그 유도체 등의 다당류, 젤라틴/콜라겐 및 그 유도체, D-글루탐산 및 L-혹은 D-리신의 공중합체, 및/혹은 D/L-알라닌 등의 아미노산 및 폴리(아스파르트산) 유도체, 그들의 공중합체, 기타 적합한 아미노산을 함유하는 폴리펩티드, 스티렌과 말레인산의 공중합체, 폴리(유산), 하이드록시프로필- 혹은 이소프로필-메타크릴아미드 공중합체(HPMA 공중합체), 폴리(비닐알콜)(PVA), 폴리비닐피로리돈, 피란 공중합체 등 및 이들의 조합을 들 수가 있다.
산화환원효소와 임의 변성제와의 화학적 접합은 시아누릴클로라이드, 카르보디이미드, 산무수물, 알데히드, 아실클로라이드 석신이미드 이소시아네이트 등의 관능기를 가진 각종 화합물을 사용하여, 상술한 종래 방법으로 실행할 수가 있다.이 반응은 아미노, 카르복실, 티올 등을 대상으로하여 비교적 완화된 조건, 낮은 온도, 수용액내 중성 혹은 약알칼리 PH 하에서 실행하여 효소의 변성을 방지한다. 또한 이 반응은 암모니아수를 포함한 다른 용매내에서도 실행할 수가 있다. 또한 효소 활성과 관련되는 아미노산 잔기(s)의 변형은 피해야한다. 바람직한 예로서. XO 와 PEG의 접합을 하기에 설명한다.
하이포크산틴 혹은 크산틴을 기질로서 취하는 산화환원 효소 XO는 요산 및 초산화물() , 보다 소량이지만 H2O2를 함유한 반응성 산소종을 생성한다. XO는 소의 우유(bovine milk)로부터 용이하게 얻을 수 있으나, 본 발명의 XO의 원천은 소의 우유에 한정되지 않는다.
본 발명인들이 이전에 발견한 바에 의하면, PEG는 접합에 사용할 수 있는 적합한 중합체 중의 하나이다. PEG는 생물학적으로 상용성이며, 접합으로 이물 단백질의 면역원을 감소시키며, 접합체의 혈액 순환 시간을 길게하는 것은 잘 알려져 있다(cf: in Poly(ethyleneglycol) Chemistry: Biotechnical and Biomedical Application, by Harris, J.M.Ed., New York, 1992, pp 153-169). 활성 PEG는 카르복실레이티드 PEG와 N-하이드록시석신이미드간의 축합반응등과 같은 몇가지 방법에 의하여 얻을 수 있다.
통상 PEG 이외에 한 개의 접합점에 2중 분기 PEG 사슬을 갖는 2촉각(biantenary) PEG도 사용할 수있다. 이 2촉각 PEG는 석신이미딜 분기 PEG를 사용하여 합성한다. 이것은 면역원의 감소와 온도 혹은 여러 단백질 분해효소에 대한 안정성의 증가를 더해주는 등 산화환원효소의 변형제로서의 몇가지 장점을 지닌다.
본 경우에는 XO와 PEG의 접합을 50 mM 인산나트륨 버퍼 PH 7.4에서, 실온 또는 그 이하로 30 ∼ 60분간 반응시켜 실시한다. 접합 정도는 XO중 리실 잔기에 대한 활성 PEG의 투입속도를 변경함으로써 조절할 수있다. 본 실시예에서는, XO중 리신 1몰당 PEG 1.2 ∼ 6.7 몰 과량 첨가함으로써, 리신 잔기 17 ∼ 50%에 석신이미딜 PEG로 접합한 XO를 얻었다.
PEG-XO 혹은 기타 생화학적으로 상용성의 고분자는 상술한 바와 같은 EPR 효과에 의해, 충실성 종양(solid tumor)에 선택적으로 공급된다( ref., Cancer Res., 46: 6387-92, 1986). 종양에 PEG-XO가 적당히 축적한 후에, 그러나 일반순환기나 정상 기관내에서는 PEG-XO가 제거된후에, 정맥 주사에의해 하이포크산틴 혹은 크산틴을 투여하면, 종양부위의 XO는및 H2O2등의 반응성 산소종을 발생하며, 신체조직상의 부작용을 일으키는 일이없이 특유의 항종양작용을 일으킨다.
쥐의 S-180 충실성 종양에 대해 XO와 하이포크산틴을 사용하는 상기 치료법을 적용하면, 종양 성장이 현저히 억제된다(도 1 및 2). 이들 결과는 다음과 같은 사실을 제시한다.
i) XO와 하이포크산틴 사이의 반응에 의하여 발생되는 반응성 산소종은 강한 항종양 활동성을 갖는다.
ii) XO와 하이포크산틴 사이의 반응은 충실성 종양 혹은 주변부에서 일어난다.
반면에 native-XO는 (도 1) 상기 사용 조건하에서 별다른 항종양활성을 나타내지 않았다.
체중을 파라미터로하여 평가한 PEG-XO/하이포크산틴 치료요법에 의한 신체조직상의 부작용은 그다지 심각하지 않게 보인다. 평가 결과는 8-9일간 일시적인 체중감소만을 보였으나, 10일 후에는 회복되었다(도 3). 심각한 혈액독성 혹은 간독성은 보이지 않았다.
본 발명에서 항종양제를 사용하여 암을 치료하기 위하여, 우선 화학적으로 접합된 산화환원 효소의 치료 적양을 투여하고, 종양에 화학적으로 접합된 산화환원효소를 축적시키기 위한 적당한 시간의 경과후에, 그 기질을 투여한다. 기질의 효과적이고 저독성인 투여량은 10 ∼ 100mg/kg-체중/일 이다. 기질을 투여하는 적합한 시간은 화학적으로 접합된 산화환원효소의 투여 후 6 ∼ 100시간이 바람직하다.
본 발명의 항종양제는 주사 혹은 경구투약의 형태로 투여할 수있다. 주사의 경우에는 피하, 근육, 정맥, 동맥 혹은 국소/직접중 어느 것이라도 적용할 수있다. 경구투여용의 조제형태는 임의로 선택할 수가 있다. 이 형태의 예로는 정제, 과립, 알약, 약액, 유상이나 수용액상의 시럽, 트로치 및 드롭 등을 들 수있다.
실시예
본 발명을 하기의 실시예에 의하여 상세히 설명한다. 단 이 실시예가 본 발명의 범위를 한정하는 것은 아니다.
[합성방법]
실시예 1: PEG-XO의 합성
우선 소의 우유(Sigma Chemical, St. Louis, MO)를 한외 여과에 의해 정제하고, PM30 막이 장착된 아미콘 장치(Amicon system)( cutoff size 30,000)를 사용하여 농축하였다. XO 용액의 농도를 50mM 인산나트륨 버퍼(PH 7.4)를 사용하여 10 mg/ml 단백질로 조절하였다. 이 XO 용액에 석신이미드로 활성화-PEG(MW5000, Shearwater Polymer, Huntsville, AL)를 XO중 리신의 ε-아미노기에 대한 분자비가 1.2 및 6.7이 되게 첨가하여, 각각 낮은 범위와 높은 범위의 PEG 접합을 갖는 PEG-XO 접합을 제조하였다.
관능기를 갖는 미반응 PEG 유도체와, 분해성분과, 그리고 기타의 불순물은 상술한 PM-10 막(membrane)을 사용한 한외 여과에 의하여 제거하였다. 이렇게 얻어진 접합체를 4℃에서 1mM의 나트륨 살리실레이트를 함유한 50mM 인산나트륨 버퍼(PH 7.4)내에서 저장하였다.
[물리화학적 및 생화학적 특성]
실시예 2: PEG 접합 범위의 결정
PEG-커플링의 결과에 의해, 자유 아미노기의 손실로부터 PEG 접합 범위를 구하였다. Field에 의하여 기술되어있는 바와같이(Methods Enzymol., 25:464-468,1972). 2,4,6-트리니트로벤젠설폰산을 사용하여 PEG-XO기내의 자유 아미노기를 분광학적으로 정량화하였다. 글리신을 표준 아미노산으로 사용하였다. native-XO와 PEG-XO의 단백질의 농도는 DC 단백질 분석기(Bio-Rad Laboratories, Hercules, CA, USA)를 사용하여 정량화하였다. XO중 라이신의 ε-아미노기에 대한 석시니미딜 PEG의 분자비가 1.2 혹은 6.7가 되도록 과량 투입한 결과, XO와 PEG의 접합은 각각 17% 혹은 49% 였다. 17% 혹은 49% PEG 접합범위를 갖는 PEG-XO를 이후에는 각각 PEG-XO-low 혹은 PEG-XO-high라 한다.
이들 PEG-XO 접합체의 분자량은 접합도를, 즉 TNBS 분석으로 얻은 아미노기의 손실을 기준으로 평가한 결과, 각각 383 kDa 혹은 543 kDa 이었다. 그 결과를 표 1에 나타낸다.
실시예 3: 겔 여과 크로마토그래피
PEG 접합후의 XO 분자 크기의 증가는 Superose 6 HR 10/30 칼럼( Pharmacia LKB)이 장착된 FPLC 장치(Pharmacia LKB, Uppsala, Sweden)을 사용해서 , 50mM 인산나트륨 버퍼(PH 7.4)를 이동상으로 겔 여과 크로마토그래피에 의하여 평가하였다. 접합체의 용출은 280 nm에서 검출되었다.( 도 4 )
실시예 4: PEG-XO의 효소 활성
효소 활성은 요산의 흡수 극대인 290nm에서 흡광도의 증가를 측정함으로써 하이포크산틴으로부터 요산의 형성을 정량화하여 구하였다. 기질 하이포크산틴의 초기 농도는 50μM이었다. 효소반응은 50mM 인산나트륨 버퍼(PH 7.4)내에서 실온으로 실시하였다. XO 활성의 1단위를 요산 1μM의 1분당의 형성 속도로 정의한다. 그 결과를 표1에 나타낸다. PEG-XO-low는 native-XO에 비해 약간의 활성 증가(110%)를 나타내었다. PEG-XO-high는 아미노기가 49% 접합된 후에도, native-XO의 원래의 효소 활성인 54%를 유지하였다.
[약물동태학적 검토]
실시예 5: 정맥주사후의 PEG-XO접합체의 생체내 분포
native-XO 및 PEG-XO-high의 생체내 분포는 방사선 방출형125I-레벨의 유도체를 사용하여 검사하였다. 방사선 레벨의 native-XO 및 PEG-XO-high는 클로르아민 T법에 의하여 제조하였다.
육종(Sarcoma) 180 종양세포를 세포수 2×106로 SLC Inc., Shinzuoka,Japan으로부터 중량 30-35g, 6주된 수컷 쥐(mice) ddY 에 피하주사로 이식하였다. 종양 접종후 7-10일 경과후에 기관또는 조직의 분포를 검사하였던 바, 종양의 직경은 5-7mm이며, 괴사(necrotic)부위는 없었다.
125I-레벨의 native-XO 혹은 PEG-XO-high를 꼬리 정맥을 통하여 쥐에 투여하였다(100μ 1/mouse). 24시간 경과후 쥐가 죽었으며, 혈액 시료를 심장 천자(cardiac puncture)에 의해 채취하고. 그 혈액을 식염수를 함유한 헤파린으로 재관류시켜서 혈관 조직중의 혈액성분을 제거하였다. 뇌, 간, 지라, 근육, 피부, 심장, 폐, 결장 및 신장을 포함한 정상의 조직과 동시에 종양 조직을 채취하여 평량하였다. 이들 조직의 방사능을 감마 계수기로 측정하였다.
도 5에 나타난 것 처럼, PEG-XO-high는 native-XO의 경우에 비해 혈액 및 종양 축적이 현저히 개선된 것을 알 수 있었으며, 반면에 기타의 정상 조직에서는 거의 무시할 정도로 적은 PEG-XO-high의 축적이 관찰되었다. 그리고 신장에서는 PEG-XO-high가 native-XO보다 적게 축적됨이 관찰되었다.
실시예 6: PEG-XO접합체의 종양축적 과정
PEG-XO-high의 종양축적 과정은 종양조직중의 PEG-XO-high로 부터 유도된 효소활성을 측정함으로써 검사하였다. 종양을 보유한 쥐는 상술한 바와 같이 준비하였다. 쥐에게 PEG-XO-high(2U/ml, 100 μ1)를 정맥주사(i.v.)하였다. 소정의 시간이 경과된 후 종양조직을 상술한 바와 같이 제거 하였다. 다음에 종양조직을 2mM 에틸렌디아민테트라아세트산, 2mM 아미다노페닐메탄설포닐 플루오라이드, 10mM 디티오트레이톨, 0.5 μg/ml 로이펩틴을 함유한 20 mM 인산칼륨 버퍼(PH 7.6)의 3개 용적으로 균질화하였다. 균질액을 10,000 × g에서 20분간 원심분리해서, 각 상징액(supernatant)을 상기한 바와같은 방법으로 Superlose 6 HR 10/30 칼럼이 장착된 FPLC 장치에 투입하였다. PEG-XO-high 분획(fraction)의 효소 활성을 형광분석에 의해, 즉 프테린(pterine)으로부터의 형광 이소크산토프테린의 형성을 345 nm의 여기, 390 nm의 발산으로 측정하여 구하였으며, 이때 기질로서는 하이포크산틴 대신에 프테린을 사용하였다.
정량화는 순수 이소크산토프테린(Aldrich Chemical, Milwaukee,WI)의 보정곡선을 사용하여 실시하였다.
효소활성에 의한 PEG-XO-high의 종양 축적은 PEG-XO-high의 주사전 및 주사후 24시간의 종양 균질액의 XO활성을 측정함으로써 알 수가 있다. 그 결과를 도 6에 나타낸다.
PEG-XO-high를 투여하지 않은 S-180 충실성 종양조직내에서는, XO의 활성은 native-XO에 대응하는 분획내에서만 나타난다. 이는 XO의 소량이 종양조직에 내생적으로 존재하고 있었음을 의미한다(도 6A). 한편 PEG-XO-high 주사(0.2 U/mouse)후의 충실성 종양조직내에는 XO활성의 새로운 큰 피크가 native-XO와 다른 분자량 범위에서 관찰되었다. 분획 번호 11, 12, 13을 구성하는 새로운 피크는 도 4에 나타난 바와 같이 PEG-XO-high의 분자량 범위에 대응한다.
이렇게하여 도 6a 및 b는 PEG-XO-high 분자량 범위에 대응하는 종양의 XO활성이 PEG-XO-high 투여후에 나타난 것을 도시한 것이다.
그리고 PEG-XO-high활성은 시간 의존성적으로 증가하였다(도 7).
[생체내의 항종양 활성]
실시예 7: 생체내의 PEG-XO 항종양 활성
육종180을 세포수 2×106로 중량 30-35g, 6주된 수컷 쥐 ddY 의 피하주사에 의해 이식하였다. 종양이 촉지 가능하게 되었을 때(직경 5-7mm), 즉 통상 이식후 7일이 되었을 때, 그 치료를 재개하였다.
native-XO 혹은 PEG-XO-high를 쥐에 정맥주사하였다.( 2회, 0.6 U/mouse, 종양 접종후 7일에 제1회, 9일에 제2회) 하이포크산틴(13.3mg/kg)을 별표(*)로 지시한 바와같이 6시간 이상 간격으로 6회 복강내에 주사하였다. PEG-XO-high를 투여한 쥐에게서 종양성장의 현저한 억제(p0.05)가 관찰되었다. 그러나 native-XO에 의해 마찬가지로 치료하면, 종양성장은 별로 감소하지 않았다(도 1). 종양접종 15일째 종양의 중량은 각각 0.36±0.12g(control), 0.31±0.03g(native-XO 치료), 및 0.22 ± 0.05g(PEG-XO-high 치료)이었으며, 이는 PEG-XO-high의 2회만의 투여로 종양성장을 39% 억제할 수 있다는 것을 가르킨다.
PEG-XO-high의 3회투여(종양 접종 7, 8 ,9일 경과후, 0.6U/mouse) 하고, 뒤이어 하이포크산틴(13.3mg/kg)를 별표(*)로 지시한 바와같이 6회 복강내에 주사함으로써, PEG-XO-high의 현저한 항종양 활성이 관찰되었다(도 2). 종양접종후 13일째 종양의 중량은 0.57±0.24g(control)및 0.13±0.08g(PEG-XO-high 치료)이었으며, 이는 PEG-XO-high에 의하여 종양성장을 77% 억제할 수 있었다는 것을 가르킨다.
실시예 8: PEG-XO 신체 조직상의 부작용
PEG-XO-high의 투여로 인한 신체 조직상의 부작용을 검사하기 위하여, PEG-XO-high의 투여후의 체중변화를 조사하였다. PEG-XO-high를 30.6kg/cm2G회 정맥주사하였다(종양 접종후 7, 8, 9일째, 0.6U/mouse). 하이포크산틴(13.3mg/kg)을 별표(*)로 지시한 바와 같이 6회 복강내에 주사를 하였다.
도 3에 나타난 바와 같이, 8일과 9일째에 체중이 약간 심각하게 감소한 것이 관찰되었으나, 약 10일째에는 정상으로 회복되었다. 따라서 독성은 반전할 수 있으며, 일시적이라는 것을 알 수 있다.
중합체와 접합되어있는 활성 효소성분(A)은 종양 기호성 표적 특성을 지닌다. 즉 공지의 (A)용 기질(B)(하이포크산틴 혹은 크산틴)를 주사하면, 활성 자유라디칼 성분(C)(및 H2O2) 을 발생시키는 효소반응에 의해서, 항종양제는 종양조직에 선택적으로 축적하여 항종양작용을 나타낸다. 폴리(에틸렌글리콜)(A)과 접합되어있는 크산틴 산화효소와 그 기질(B)은 그 자체는 무독성이다. 강력한 항종양 활성은 그 기질(B)을 나중에 분리하여 투여할 때 명백히 나타난다. 이렇게 하면, 탁월한 항종양 활성을 발휘하는 반면에 신체조직상의 독성은 거의 나타나지 않는다. 그러므로 본 발명은 커다란 이익을 제공한다.

Claims (6)

  1. 중합체와 화학적으로 접합된 산화환원효소와 그 기질로 구성되는 것을 특징으로 하는 항종양제.
  2. 제1항에 있어서, 산화환원효소는 크산틴 산화효소이며, 그 기질은 하이포크산틴 혹은 크산틴인 것을 각각 특징으로 하는 항종양제.
  3. 제1항 또는 2 항에 있어서, 중합체가 폴리(에틸렌글리콜)인 것을 특징으로 하는 항종양제.
  4. 필요한 환자에게 중합체와 화학적으로 접합된 산화환원효소를 치료적량 투여하고, 뒤이어 그 기질을 투여하는 것을 특징으로 하는 암 치료방법.
  5. 제4항에 있어서, 산화환원효소는 크산틴 산화효소이며, 그 기질은 하이포크산틴 혹은 크산틴인 것을 각각 특징으로 하는 암 치료방법.
  6. 제4항에 있어서, 중합체가 폴리(에틸렌글리콜)인 것을 특징으로 하는 암 치료방법.
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