KR102670307B1

KR102670307B1 - 난백 리소좀의 제조방법 및 이에 의하여 제조된 난백 리소좀을 포함하는 화장품 조성물

Info

Publication number: KR102670307B1
Application number: KR1020230137153A
Authority: KR
Inventors: 윤지희
Original assignee: 주식회사 오가넬
Priority date: 2023-10-13
Filing date: 2023-10-13
Publication date: 2024-05-29

Abstract

본 발명은 효율적으로 고 기능성의 난백 리소좀을 분리할 수 있는 난백 리소좀의 제조방법 및 제조된 난백 리소좀을 포함하는 화장품 조성물에 관한 것으로서, 보다 상세하게는 난백과 난황을 분리하는 단계, 분리된 난백을 교반하는 제1 교반 단계, 교반된 난백을 원심분리하는 제1 원심분리 단계, 원심분리 후 상층액만을 수득하여 교반하는 2차 교반 단계 및 교반된 난백을 원심분리하는 2차 원심분리 단계에 대한 것이다.

Description

난백 리소좀의 제조방법 및 이에 의하여 제조된 난백 리소좀을 포함하는 화장품 조성물 {Manufacturing Method of Egg White Lysosome, and Cosmetic Composition comprising Egg White Lysosome Manufactured by the Same}

정부의 신남방정책에 힘입어 화장품 업계의 아세안 시장 진출이 가속화되고 있으며, 정부는 2023년까지 세계 3대 화장품 수출 국가로 도약하기 위한 ‘미래 화장품산업 육성방안’을 수립하고 기초소재ㆍ신기술 연구개발 추진, 화장품 규제 시스템 개선 등을 추진할 계획이다.

특히, 미백, 주름개선 등의 효과를 제공하는 기능성화장품의 국내 생산 실적은 2018년 4조 9,803억 원으로 13.7%의 연평균 성장률로 지속적인 성장세를 보이고 있으며 식약처에서 인정하는 기능성화장품 범위가 기존 3종에서 10종으로 확대됨에 따라 기능성 화장품 시장이 지속적으로 성장하고 있다

그러나, 기능성 화장품의 핵심 경쟁우위를 갖추기 위해서는 성분, 효능 확보가 요구되며, 천연소재 발굴과 소재의 안정적 확보를 위한 바이오 생산기술의 활용이 중요한 연구영역으로 지속적인 투자가 이뤄질 전망이다.

한편, 세포소기관 원료인 난백을 화장품 원료로 사용하려는 시도들이 최근 이루어지고 있으며, 한국공개특허공보 제10-2022-0118068호에서는 분리한 난백 내 리소좀을 추출하여 고분자-탄산칼슘 복합체에 담지시켜 안정화하는 기술을 개시하고 있다. 그러나, 이러한 기존의 기술은 안정화가 복잡하고 고비용이 들 뿐만 아니라 효율적으로 고기능성 성분들을 대량으로 생산하기 어려웠다.

이에, 본 발명에서는 난백으로부터 효율적으로 미백, 항산화, 피부장벽 등 다양한 기능성을 가지는 난백 리소좀을 분리하여 안정적으로 화장품 조성물로 사용할 수 있는 기술을 개발하였다.

한국공개특허공보 제10-2022-0118068호

본 발명은 상기와 같은 문제점을 해결하기 위하여, 난백으로부터 효율적으로 고 기능성의 난백 리소좀을 분리하여 안정적으로 사용할 수 있는 난백 리소좀의 제조방법 및 이를 이용한 화장품 조성물을 제공하는 것을 목적으로 한다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 난백과 난황을 분리하는 단계; 분리된 난백을 교반하는 제1 교반 단계; 교반된 난백을 원심분리하는 제1 원심분리 단계; 원심분리 후 상층액만을 수득하여 교반하는 2차 교반 단계; 및 교반된 난백을 원심분리하는 2차 원심분리 단계;를 포함하는 난백 리소좀의 제조방법을 제공한다.

이때, 상기 제1 교반 단계는 10~500rpm에서 10~60분 동안 이루어지고, 상기 제1 원심분리 단계는 100~5,000g에서 1~60분 동안 이루어지는 것이 바람직하다. 또한, 상기 제2 교반 단계는 100~1,000rpm에서 10~60분 동안 이루어지고, 상기 제2 원심분리 단계는 10,000~20,000g에서 10~100분 동안 이루어지는 것이 바람직하다.

그리고, 모든 단계가 1~10℃에서 이루어지는 것이 바람직하다.

상기 제조방법은 2차 원심분리 후 상층액을 제거하고 남은 침전물을 수득하는 수득단계;를 추가로 포함할 수 있다.

한편, 상기 목적을 달성하기 위하여 본 발명은 상기 방법으로 제조된 난백 리소좀을 포함하는 화장품 조성물을 제공하며, 이는 키토산 또는 비타민C를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명에 따라 제조된 난백 리소좀은 난백으로부터 효율적이고 안정적으로 난백 리소좀을 분리할 수 있을 뿐만 아니라 이를 이용하여 미백, 항산화, 피부장벽 등 다양한 고 기능성 천연 화장품 조성물을 제조할 수 있다.

도 1은 난백 리소좀을 제조하는 공정의 교반단계를 보여주는 사진이다.
도 2a~2b은 난백 리소좀의 a) DPPH assay 결과와 b) ABTs assay 결과를 보여주는 그래프이다.
도 3은 난백 리소좀의 멜라닌 탈색율 결과를 보여주는 그래프이다.
도 4a~4b은 난백 리소좀의 a) Zein과 b) Promois W-32R(하이드롤라이즈드 콜라겐) 분해 후 구성아미노산 농도 변화를 보여주는 그래프이다.

이하, 본 발명의 실시예와 도면을 참조하여 본 발명을 상세히 설명한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위해 예시적으로 제시한 것일 뿐, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 당업계에서 통상의 지식을 가지는 자에 있어서 자명할 것이다.

또한, 달리 정의하지 않는 한, 본 명세서에서 사용되는 모든 기술적 및 과학적 용어는 본 발명이 속하는 기술 분야의 숙련자에 의해 통상적으로 이해되는 바와 동일한 의미를 가지며, 상충되는 경우에는, 정의를 포함하는 본 명세서의 기재가 우선할 것이다.

도면에서 제안된 발명을 명확하게 설명하기 위해서 설명과 관계없는 부분은 생략하였으며, 명세서 전체를 통하여 유사한 부분에 대해서는 유사한 도면 부호를 붙였다. 그리고, 어떤 부분이 어떤 구성 요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성 요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성 요소를 더 포함할 수 있는 것을 의미한다. 또한, 명세서에서 기술한 "부"란, 특정 기능을 수행하는 하나의 단위 또는 블록을 의미한다.

각 단계들에 있어 식별부호(제1, 제2, 등)는 설명의 편의를 위하여 사용되는 것으로 식별부호는 각 단계들의 순서를 설명하는 것이 아니며, 각 단계들은 문맥상 명백하게 특정 순서를 기재하지 않는 이상 명기된 순서와 다르게 실시될 수 있다. 즉, 각 단계들은 명기된 순서와 동일하게 실시될 수도 있고 실질적으로 동시에 실시될 수도 있으며 반대의 순서대로 실시될 수도 있다.

본 발명의 난백 리소좀은 난백과 난황을 분리하는 단계; 분리된 난백을 교반하는 제1 교반 단계; 교반된 난백을 원심분리하는 제1 원심분리 단계; 원심분리 후 상층액만을 수득하여 교반하는 2차 교반 단계; 및 교반된 난백을 원심분리하는 2차 원심분리 단계;를 포함한다. 이하 각 단계를 상세히 살펴본다.

먼저, 할란기를 통해 달걀에서 난백과 난황을 분리한 후 난백만을 수득한다. 일실시예로 총 달걀 9판(270개)에서 난백은 약 8L정도 얻을 수 있다. 난백만을 모아 비커 안에 분주한 후에는, 도 1과 같이 난백의 온도를 1~10℃ 정도의 저온으로 유지 시켜 주는 것이 바람직하다. 온도는 공정의 핵심 요소이기 때문에 모든 공정에서 온도가 유지되어야 한다.

난백이 분리되면 다음으로 교반과 원심분리 과정을 거치게 되는데, 이때 최소한의 공정으로 최대한의 활성 성분들을 효율적으로 생성하기 위한 각 조건과 단계가 중요하다. 먼저 난백 균질화를 위하여 제1 교반 단계를 거치게 되는데, 상기 교반 단계는 10~500rpm에서 10~60분 동안 이루어질 수 있다. 이후 불순물 제거를 위하여 제1 원심분리 단계를 거치게 되는데, 상기 원심분리 단계는 100~5,000g에서 1~60분 동안 이루어질 수 있다.

이후, 제1 원심분리 과정에서 상층액을 수득한다. 수득된 상층액은 제2 교반 단계에서 100~1,000rpm에서 10~60분 동안 교반하면서, 난백이 하얀 실을 형성하며 리소좀이 반응하게 된다. 최종 리소좀 수득을 위하여 마지막으로 제2 원심분리 단계가 10,000~20,000g에서 10~100분 동안 이루어진다.

이와 같이 제2 원심분리 단계까지 거친 후 상층액을 제거하고 침전물을 수득하여 난백 리소좀을 최종적으로 제조할 수 있다. 상기 모든 단계들은 1~10℃에서 이루어지는 것이 바람직하다.

또한, 장기 항균력 및 보관성을 더욱 높이기 위하여, 상기 난백 리소좀은 키토산 또는 비타민C 등을 추가로 포함할 수 있다.

한편, 상기 키토산 또는 비타민C 이외에도 필요에 의해 추가적인 천연보존제를 사용할 수 있다.

상기 천연보존제는 고삼근 또는 고련피와 같은 항균효과를 가지는 i) 천연물을 밀폐한 후 물에 넣고 100℃에서 10분~1시간 동안 가열하는 가열단계, ii) 가열된 천연물을 5~10℃에서 10분~1시간 동안 냉각하는 냉각단계, iii) 냉각된 천연물을 100℃에서 2~3시간 동안 진공 건조시키는 건조단계 및 iv) 건조된 천연물을 분쇄하는 단계를 통하여 제조될 수 있다. 상기 고삼근과 고련피는 1:1의 중량 비율로 사용되는 것이 바람직하다.

또한, 상기 각 단계들을 거쳐 분쇄된 천연물은, 천연물 내 기능성 유효성분들을 최적의 효율로 추출하기 위하여, v-1) 분쇄된 천연물을 초음파 추출한 후 농축하여 초음파 추출물을 제조하는 단계, v-2) 분쇄된 천연물을 열수 추출한 후 농축하여 열수 추출물을 제조하는 단계, v-3) 분쇄된 천연물을 환류 추출 후 농축하여 환류 추출물을 제조하는 단계 및 v-4) 상기 초음파 추출물, 열수 추출물 및 환류 추출물을 혼합하는 단계를 추가로 거치게 된다. 이때, 상기 초음파 추출물, 열수 추출물 및 환류 추출물을 1~2:1~2:1~2의 중량비로 혼합되는 것이 바람직하다.

상기 초음파 추출물은 초음파의　충격파에　의한　원물의　세포벽이　붕괴되어　그 내용물이　용제에　투입되는　원리를 이용한 것으로서, 바람직하게는 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 100ml당 천연물 10~30g을 첨가한 후, 초음파(500W, 26.5Hz) 하에서 5~10시간 동안 천연물 내 유효물질을 추출한다. 이후 천연물을 용매 내에 그대로 약 15~25시간 동안 침지시킨 후 여과된 추출액을 최종적으로 50~70℃에서 감압 농축하여 최종 초음파 추출물로 사용하는 것이 바람직하다.

상기 열수 추출물은 열을 통하여 원물 내 유효물질을 추출하는 방법으로서, 일 실시예로 알칼리 이온수와 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올의 서로 다른 두 종류의 용매를 사용함으로써 더욱 다양한 기능성분을 효율적으로 추출할 수 있다. 구체적으로, 상기 열수 추출은 알칼리 이온수와 저급 알코올 각각 100ml당 천연물 10~30g을 첨가한 후 60~80℃에서 2~4시간 동안 천연물 내 유효물질을 추출하여 이루어질 수 있다. 이후 천연물을 용매 내에서 약 15~25시간 침지시킨 후 여과된 추출액을 최종적으로 50~70℃에서 감압 농축하여 최종 열수 추출물로 사용하는 것이 바람직하다. 상기 열수 추출물은 알칼리 이온수를 용매로 사용한 열수 추출물과 저급 알코올을 용매로 사용한 열수 추출물을 1~2:1~2의 중량비로 혼합하여 사용할 수 있다.

상기 환류 추출물은 용매가　끓으면서　기화되어　냉각관과　만나　생긴　액체가 떨어지면　특정성분을　추출하는　방식으로서, 바람직하게는 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 100ml당 천연물 10~30g을 첨가한 후, 50~70℃에서 3~7시간 동안 천연물 내 유효물질을 환류 추출하여 이루어질 수 있으며, 추출액을 최종적으로 50~70℃에서 감압 농축하여 최종 환류 추출물로 사용하는 것이 바람직하다.

이와 같이 다양한 추출방식과 추출조건을 통하여 얻은 천연보존제는 별도의 발효 과정 등을 거치지 않고도 천연물 내 기능성 성분의 수득률 및 기능적 효과를 최대화하면서도 냄새와 이취 또한 완화시킬 수 있다.

이상에서 본 발명에 대하여 구현예를 중심으로 설명하였으나 이는 단지 예시일 뿐 본 발명의 구현예를 한정하는 것이 아니며, 본 발명의 실시예가 속하는 분야의 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 본질적인 특성을 벗어나지 않는 범위에서 이상에 예시되지 않은 여러 가지의 변형과 응용이 가능함을 알 수 있을 것이다. 예를 들어, 본 발명의 구현예에 구체적으로 나타난 각 구성 요소는 변형하여 실시할 수 있는 것이다. 그리고 이러한 변형과 응용에 관계된 차이점들은 첨부된 청구 범위에서 규정하는 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 할 것 이다.

[실험예]

난백 리소좀의 제조

할란기를 통해 달걀에서 난백과 난황을 분리한 후 난백만을 얻었다. 난백만을 모아 비커 안에 분주한 후 저온(4℃)을 유지하기 위해 아이스버킷에 얼음을 담아 난백의 저온을 유지 시켜 주었다. 이후, 난백을 500rpm에서 10분 동안 교반한 후, 500g에서 30분 동안 원심분리하였다. 원심분리 후 상층액을 수득한 후 다시 500rpm에서 10분 동안 교반한 후, 마지막으로 10,000g에서 30분 동안 원심분리하였다. 이후 상층액을 제거하고 침전물을 수득하였다.

항균 효능 평가 - 난백 리소좀

1) 대량생산한 난백 리소좀으로 총 4가지 균주에 대한 실험 테스트를 신청하였다. 균주는 S. epidermidis(Staphylococcus epidermidis ATCC 12228), C.acnes(Cutibacterium acnes ATCC 6919), M.furfur(Malassezia furfur ATCC 14521), E.coli(Escherichia coli ATCC 25922)로 지정하였다.

시험방법은, 시료 20mL에 시험균액 0.2mL를 첨가하여 혼합한 후 (22±2)℃에서 4시간 방치하였다. 이후 혼합액 0.1mL를 취한 50mL의 0.05% polysorbate 80 solution을 membrane filteration apparatus에 분주하고 필터하였다. 곧바로 150mL의 0.05% polysorbate 80 solution을 필터하고 50mL의 멸균증류수를 추가로 필터하였다. membrane filter를 분리하여 배지 표면에 밀착시켜 균주 배양 온도에 맞게 배양하였다. 각 균주당 2회 반복하여 실시하였으며, 초기 및 대조 생균수를 측정하였으며 생균수 계산식(LR)은 다음과 같이 계산하였다.

LR(Log Reduction) = mean log(microbial population) - mean log(surviving test population)

항균시험분석 결과를 정리하여 하기 표 1에 나타내었다. 모든 균주에서 난백리소좀의 항균력이 모두 99.9% 이상 나온 것을 확인할 수 있었다.

농도별 항균 효능 평가 - 천연 첨가물 추가

1) 난백 리소좀의 효능 확인 및 활성을 증대시키기 위해 천연첨가물을 추가하여 난백 리소좀의 활성이 증가하는데 도움이 되는지 확인하고자 하였다. 천연첨가물을 Ascorbic acid(비타민 C)과 키토산으로 지정하여 난백 리소좀와 혼합할 경우 항균력이 어떻게 나오는지 확인하였다.

키토산은 T-Norm, Kitosome 총 두 종류로 실시하였으며 난백 리소좀 1%와 혼합하여 항균력 결과를 비교하였다.

2) 그 결과 키토산과 비타민C 모두 난백 리소좀와 혼합했을 경우에 항균력이 더 증가한 것을 확인할 수 있었다.

기간별 항균 효능 평가 - 천연 첨가물 추가

1) 난백 리소좀의 활성을 장기간으로 유지하고 증대시키기 위해 i) 천연 첨가물을 단독으로 사용할 경우 ii) 난백 리소좀을 단독으로 사용할 경우 또는 iii) 난백 리소좀과 천연 첨가물을 혼합 사용하여 장기 보관할 경우 항균 효능이 어떻게 나타나는지 long-term test를 진행하였다.

샘플의 반응 온도는 상온 보관과 냉장 보관시 결과를 확인하기 위해 4℃, 25℃를 유지하였으며 1주일 간격으로 최대 91일까지 long-term test를 진행하였다.

2) 그 결과는 난백 리소좀만 long-term test를 실시했을 때는 냉장 보관일 때는 항균 활성이 서서히 감소하는 형태를 보였으나 상온 보관일 경우에는 항균 활성이 급격하게 감소하는 형태를 나타내는 것을 확인할 수 있었다.

비타민C, 키토산 또는 비티민 C+키토산의 천연첨가물을 혼합했을 경우 그대로 항균력이 100%를 보이는 것은 물론이며 91일까지 항균력 테스트를 실시하여 확인했을 경우 계속 100%의 항균력을 유지하는 것을 확인할 수 있었다.

이 실험을 통해 난백 리소좀은 냉장 보관일 경우 활성이 천천히 감소한다는 것을 알 수 있었으며 또한 천연첨가물(비타민C, 키토산)을 난백 리소좀와 혼합할 경우 항균 활성을 100%를 장기간 유지하는 것을 알 수 있었다.

항산화 효능 평가 - 난백 리소좀

1) 난백 리소좀이 항산화 효능을 가진다면 노화 억제 효과를 가질 뿐만 아니라 화장품 자체의 산화를 방지하여 화장품의 상태와 성능을 더 뛰어나게 유지시킬 수 있다. 이에 난백 리소좀을 복합 기능성화장품 소재로 활용하기 위해서 항산화 효능을 가지는지 확인하고자 하였다.

2) KATR(한국분석시험연구원)에 항산화효능 검증 실험인 DPPH assay와 ABTs assay를 의뢰하였다. DPPH assay는 radical의 변화로 인한 용액의 색변화를 흡광도를 이용해 측정하는 것으로서, DPPH 용액을 Methanol을 이용하여 시험 전에 517nm에서 흡광도 0.98±0.02로 조정한 후 시료 50μl에 DPPH 용액 1.5mL을 가하고 실온의 암소에서 30분간 반응하였다. UV-spectrophotometer를 이용하여 517nm에서 흡광도를 측정하였다. 결과계산식 값은 아래와 같다.

3) ABTs assay 방법은 7mM ABTs 용액을 2.45mM potassium persulfate와 혼합하여 실온의 암소에서 12~16시간 반응시켜 ABTs radical cation을 생성시켰다. ABTs radical cation 용액은 PBS buffer(pH 7.4)를 이용하여 시험 전 734nm에서 흡광도 0.70 ± 0.02로 조정하여 사용하였으며 시료 10μl에 ABTs용액 1.0ml을 가하고 30℃ 암소에서 10분간 반응하였다. UV-spectrophotometer를 이용하여 734nm에서 흡광도를 측정하였으며 결과 계산식은 위 계산식과가 동일하다.

결과값은 KATR시험분석에 의한 값을 그래프화 시킨 것으로 도 2a,2b에 나타내었으며, DPPH/ABTs assay 결과 난백 리소좀의 농도가 증가함에 따라 항산화 효능이 증가하는 것을 확인할 수 있었다.

미백 효능 평가 - 난백 리소좀

1) 난백 리소좀의 미백효능을 확인하기 위해서 난백 리소좀을 멜라닌에 처리했을 때 얼마나 멜라닌을 탈색시키는지 확인하고자 하였다. 공인인증기관인 KTR(한국화학융합시험연구원)을 통해 멜라닌 탈색율 시험을 의뢰하였으며 실험방법은 다음과 같이 실시하였다.

2) 먼저 멜라닌에 처리하기 전 난백 리소좀의 농도를 측정하기 위해 Bradford assay를 실시하였다. 먼저 BSA 0, 1, 5, 10mg/mL로 표준곡성을 작성하여 난백 리소좀의 농도를 계산하였다. 그리고 멜라닌 200μg/mL를 희석시켜 0, 10, 50, 100μg/mL의 멜라닌 용액을 만들고 96-well plate에 100μl씩 분주하고 450nm에 흡광도를 측정하여 멜라닌 흡광도의 표준곡선을 작성하였다. Bradford assay를 통해 측정한 농도의 1μg/mL의 난백 리소좀을 멜라닌 100μg/mL를 처리한 후 microtube에 0.5mL씩 분주하고 Rotator를 이용하여 30rpm으로 실온에서 10일간 반응시켰다. 10일동안 반응시킨 다음 table centrifuge를 이용하여 부유물을 침전시킨 후 상층액을 96-well plate에 멜라닌 standard 0, 10, 50, 100μg/mL 및 멜라닌과 반응시킨 난백 리소좀을 100μl씩 분주하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다.

3) 각 시료들의 흡광도 값으로 다음과 같은 식을 이용하여 대조군, 양성대조군, 시험물질군(난백 리소좀)의 흡광도값을 보정하였으며, 군 구성은 아래와 같다.

멜라닌으로 표준곡선을 작성하여 보정한 흡광도 값을 넣어 각 시료의 멜라닌 농도를 계산하였다. 멜라닌 탈색율은 반응 전과 후의 시료의 멜라닌 농도를 이용하여 다음과 같은 식으로 계산하였다.

멜라닌 탈색율(%) = (반응 전 멜라닌 농도 - 반응 후 멜라닌 농도) / (반응 전 멜라닌 농도)

그 결과, 도 3과 같이 난백 리소좀의 멜라닌 탈색율은 70% 정도 보이는 것으로 확인되었다.

아미노산 분해 효능 평가 - 난백 리소좀

1) 난백 리소좀이 가지고 있는 분해효소들이 원료와 반응하여 단백질을 아미노산으로 분해할 수 있다면 화장품으로 바를 경우 분해된 아미노산으로 인해 피부 영양 공급 효과를 줄 수 있다는 점을 착안하여 이를 확인하고자 하였다.

2) 충남대학교 농업과학연구소에서 실험을 진행하였으며, 원료로서 Promois W-32R(하이드롤라이즈드 콜라겐)은 1% 농도, Zein(제인)은 0.2%의 농도로 사용하였고, 각 농도에 맞게 용해시킨 후 난백 리소좀을 처리하여 24시간 동안 반응시킨 후 구성 아미노산을 분석하였다.

3) 난백 리소좀을 처리한 제인의 아미노산 분석 결과는 도 4a와 같으며, control에 비해 난백 리소좀을 처리한 제인의 아미노산 농도가 높은 것으로 확인되었다. 하이드롤라이즈드콜라겐 원료에 난백 리소좀을 처리한 경우의 결과는 4b과 같으며, Control에 비해 난백 리소좀을 처리한 하이드롤라이즈드콜라겐의 구성 아미노산 농도가 높은 것으로 확인되었다.

본 발명은 상기에서 언급한 바와 같이 바람직한 실시예와 관련하여 설명되었으나, 발명의 기술적 사상은 이에 한정하거나 제한되지 않고, 당업자에 의해 변형되어 다양하게 실시될 수 있음은 물론이다.

Claims

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난백과 난황을 분리하는 단계, 분리된 난백을 교반하는 제1 교반 단계, 교반된 난백을 원심분리하는 제1 원심분리 단계, 원심분리 후 상층액만을 수득하여 교반하는 2차 교반 단계, 교반된 난백을 원심분리하는 2차 원심분리 단계 및 상기 2차 원심분리 후 상층액을 제거하고 남은 침전물을 수득하는 수득단계를 통하여 제조되는 난백 리소좀을 포함하는 화장품 조성물로서,
상기 모든 단계가 1~10℃에서 이루어지고, 상기 제1 교반 단계는 10~500rpm에서 10~60분 동안 이루어지고, 상기 제1 원심분리 단계는 100~5,000g에서 10~60분 동안 이루어지며, 상기 제2 교반 단계는 100~1,000rpm에서 10~60분 동안 이루어지고, 상기 제2 원심분리 단계는 10,000~20,000에서 10~100분 동안 이루어지며,
천연보존제를 추가로 포함하고, 상기 천연보존제는 i) 고삼근 및 고련피를 밀폐한 후 물에 넣고 100℃에서 10분~1시간 동안 가열하는 가열단계, ii) 가열된 천연물을 5~10℃에서 10분~1시간 동안 냉각하는 냉각단계, iii) 냉각된 천연물을 100℃에서 2~3시간 동안 진공 건조시키는 건조단계, iv) 건조된 천연물을 분쇄하는 단계 및 v) 분쇄된 천연물을 추출하는 단계를 통하여 제조되며,
상기 분쇄된 천연물을 추출하는 단계는, v-1) 분쇄된 천연물을 초음파 추출한 후 농축하여 초음파 추출물을 제조하는 단계, v-2) 분쇄된 천연물을 열수 추출한 후 농축하여 열수 추출물을 제조하는 단계, v-3) 분쇄된 천연물을 환류 추출 후 농축하여 환류 추출물을 제조하는 단계 및 v-4) 상기 초음파 추출물, 열수 추출물 및 환류 추출물을 1~2:1~2:1~2의 중량비로 혼합하는 단계;를 포함하며,
상기 초음파 추출물은 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 100ml당 천연물 10~30g을 첨가한 후, 초음파(500W, 26.5Hz) 하에서 5~10시간 동안 천연물 내 유효물질을 추출하는 단계; 및 천연물을 용매 내에 그대로 15~25시간 동안 침지시킨 후 여과된 추출액을 50~70℃에서 감압 농축하는 단계;를 포함하고,
상기 열수 추출물은 알칼리 이온수와 저급 알코올 각각 100ml당 천연물 10~30g을 첨가한 후 60~80℃에서 2~4시간 동안 천연물 내 유효물질을 추출하는 단계; 및 천연물을 용매 내에서 15~25시간 침지시킨 후 여과된 추출액을 최종적으로 50~70℃에서 감압 농축하는 단계;를 포함하며,
상기 열수 추출물은 알칼리 이온수를 용매로 사용한 열수 추출물과 저급 알코올을 용매로 사용한 열수 추출물을 1~2:1~2의 중량비로 혼합하고,
상기 환류 추출물은 탄소수 1 내지 4의 저급 알코올 100ml당 천연물 10~30g을 첨가한 후, 50~70℃에서 3~7시간 동안 천연물 내 유효물질을 환류 추출하는 단계; 및 추출액을 최종적으로 50~70℃에서 감압 농축하는 단계;를 포함하는 것을 특징으로 하는 난백 리소좀을 포함하는 화장품 조성물.
제8항에 있어서,
키토산 또는 비타민C를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 난백 리소좀을 포함하는 화장품 조성물.