KR102651728B1 - 이카리딘을 유효성분으로 하는 분무식 애완견용 모기 및 진드기 기피제 조성물 - Google Patents

Abstract

본 발명은 이카리딘을 유효성분으로 하는 동물용 모기 및 진드기 기피제 조성물에 관한 것이다.
본 발명은, 동물용 모기 및 진드기 기피제 조성물에 있어서, 이카리딘(Icaridine)을 유효성분으로 포함하며, 모기 및 진드기에 대해 기피 효과를 갖는 것을 특징으로 한다. 상기한 구성에 있어서, 상기 이카리딘은 기피제 조성물 전체 중량의 10 ~ 20 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다.
본 발명에 의해, 모기 및 진드기 모두에 대해 기피 효과를 갖는 동물용 기피제 조성물이 제공된다. 뿐만 아니라 우수한 기피 효과를 가지면서 동물에 대해 안전성을 갖는 기피제가 제공된다.

Description

이카리딘을 유효성분으로 하는 분무식 애완견용 모기 및 진드기 기피제 조성물{mosquito and acari repellent composition with Icaridin for annimals}

본 발명은 개와 같은 동물에 적용 가능한 모기 및 진드기 기피제 조성물에 관한 것으로, 이카리딘을 유효성분으로 하여 동물에 대하여 모기 와 진드기 모두에 대해 기피 효과를 갖는 기피제 조성물에 관한 것이다.

최근 국내에서 야생 진드기 감영으로 사망자가 발생하고, 붉은 불개미가 도시 지역으로 확산되는 등 모기를 비롯한 각종 유해 해충이 기승을 부리며 소비자들의 불안이 가중되고 있다.

한편, 다양한 모기가 출몰하면서, 국내에서도 모기에 의해 유발되는 지카바이러스 확진 환자의 수가 증가하고, 야생 진드기에 따른 뎅기열, 말라리아 등 전염병에 대한 심각성이 높아지고 있다.

모기, 살인진드기 등을 포함한 다양한 해충을 기피하기 위하여 화학 합성 해충 기피제 성분인 디에틸톨루아미드 (diethyltoluamide, 이하 DEET)를 사용하는 경우가 일반적이다. 그러나 DEET는 점막과 신경계를 자극하기 때문에 인체에 직접적으로 분사할 수 없고, 영유아나 임신부, 노령자들의 경우에는 사용이 제한된다.

한편, 모기 기피제 성분으로 화학 합성 물질이 아닌 천연물질만을 사용하는 경우, 독성이 없어 인체에 곧바로 분사하는 방식으로 사용이 가능하지만, 빠르게 휘발되는 특성 때문에 주기적으로 뿌리거나 발라야 하므로, 꾸준히 사용하기에는 번거롭다는 문제점이 있다.

또한, 천연물질의 경우, 냄새를 활용하여 모기를 쫓아내므로 천연물질로 만들어진 모기 기피제는 사용하는 사용 자에게도 역하게 느껴질 수 있어, 활용성이 제한된다는 문제점이 있다.

나아가, 일부 천연물질들은 접촉 알레르기를 유발할 수도 있어서 성능이 우수하면서도 향기롭고, 안전한 모기 기피제에 대한 수요는 지속해서 높아지고 있다.

인체에 대한 모기 및 진드기 기피제 조성물에 관한 기술로, "인체에 안전한 모기 기피제 조성물"(한국 등록특허공보 제10-2291985호, 특허문헌 1)에는 이카리딘, 라벤더워터, 시트르산 등을 포함하며, 이카리딘이 5 ~ 15 중량% 함유되는 기술이 공개되어 있다.

상기 특허문헌 1에서는 상기 조성물에 대하여 인체에 대한 모기 기피율, 지속시간을 확인한 바 있으며, 인체에 대한 안전성은 평가하지 않았으며, 진드기에 대한 기피율은 확인하지 않은 바 있다.

한편, 최근에 애완동물이나 사육하는 동물이 모기에 물리거나 진드기에 감염되고, 다시 사람에게 전염시키는 사태가 부각되고 있는 바, 동물용 모기 및 진드기 기피제의 개발이 요구되는 실정이다.

이와 관련된 기술로 "해충 퇴치 기능을 갖는 애완동물용 하네스"(한국 공개특허공보 제10-2023-0039305호, 특허문헌 2)에는 애완동물용 해충 퇴치 물질로 이카리딘, 천연 아로마오일을 포함할 수 있다고만 설명되어 있을 뿐, 적절한 함량, 동물에 대한 안전성, 실질적 효과를 갖는 지의 여부에 대해서는 제시하지 못하고 있다.

KR 10-2291985 (2021.08.13) KR 10-2023-0039035 (2023.03.21)

본 발명의 이카리딘을 유효성분으로 하는 동물용 모기 및 진드기 기피제 조성물은 상기와 같은 종래 기술에서 발생하는 문제점을 해소하기 위한 것으로, 모기 및 진드기 모두에 대해 기피 효과를 갖는 동물용 기피제 조성물을 제공하려는 것이다.

뿐만 아니라 우수한 기피 효과를 가지면서 동물에 대해 안전성을 갖는 기피제를 제공하려는 것이다.

본 발명의 이카리딘을 유효성분으로 하는 동물용 모기 및 진드기 기피제 조성물은 상기한 과제를 해결하기 위하여, 동물용 모기 및 진드기 기피제 조성물에 있어서, 이카리딘(Icaridine)을 유효성분으로 포함하며, 모기 및 진드기에 대해 기피 효과를 갖는 것을 특징으로 한다.

상기한 구성에 있어서, 상기 이카리딘은 기피제 조성물 전체 중량의 10 ~ 20 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다.

상기한 구성에 있어서, 상기 조성물은 모기 및 진드기에 대하여 4시간 동안 95% 이상의 기피율을 제공하는 것을 특징으로 한다.

상기한 구성에 있어서, 상기 유효성분에는 편백오일, 소나무추출오일, 라벤더워터, 시트르산을 더 포함하는 것을 특징으로 한다.

상기한 구성에 있어서, 상기 편백오일, 소나무추출오일, 라벤더워터, 시트르산의 중량을 합한 값은 조성물 전체 중량의 0.2 ~ 5 중량%로 이루어지되, 상기 편백오일, 소나무추출오일, 라벤더워터, 시트르산은 2 : 1 : 5 : 2의 중량비로 함유되는 것을 특징으로 한다.

본 발명에 의해, 모기 및 진드기 모두에 대해 기피 효과를 갖는 동물용 기피제 조성물이 제공된다.

뿐만 아니라 우수한 기피 효과를 가지면서 동물에 대해 안전성을 갖는 기피제가 제공된다.

도 1은 본 발명에서 진드기 기피 효과를 나타내는 실험 사진.
도 2는 본 발명에서 약물 미처리군의 모기 상태를 나타낸 사진.
도 3은 본 발명에서 약물 처리군의 모기 상태를 나타낸 사진.

이하, 본 발명에 대한 이해를 돕기 위해 본 발명을 더욱 상세하게 설명한다. 이때, 본 명세서 및 청구범위에 사용된 용어나 단어는 통상적이거나 사전적인 의미로 한정해서 해석되어서는 아니 되며, 발명자는 그 자신의 발명을 가장 최선의 방법으로 설명하기 위해 용어의 개념을 적절하게 정의할 수 있다는 원칙에 입각하여 본 발명의 기술적 사상에 부합하는 의미와 개념으로 해석되어야만 한다.

명세서 전체에서, 어떤 부분이 어떤 구성요소를 "포함"한다고 할 때, 이는 특별히 반대되는 기재가 없는 한 다른 구성요소를 제외하는 것이 아니라 다른 구성요소를 더 구비할 수 있다는 것을 의미한다.

본 명세서에서 사용한 용어는 단지 특정한 실시예를 설명하기 위해 사용된 것으로, 본 발명을 한정하려는 의도가 아니다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다.

또한, 본 명세서에서, "포함하다", "구비하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 실시된 특징, 숫자, 단계, 구성 요소 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 구성 요소, 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.

본 발명의 동물용 기피제 조성물은 이카리딘을 유효성분으로 하는 것을 특징으로 한다.

상기 이카리딘(Icaridin)은 피카리딘(Picaridin)이라고도 불리며, 검은후추나무에서 추출된 피페린(Piperine)과 화학구조적 유사도가 높은 물질로 대한민국 식품의약안전처의 안전성과 유효성 기준을 통과한 모기·진드기 기피제(의약외품) 성분이다. 구체적으로, 해충에 직접 해를 가하는 살충성분은 아니지만, 해충의 후각 수용체에 작용해 모기와 같은 해충이 인체에서 발산하는 냄새를 인지하지 못하게 만들어 해충의 접근을 막는 물질이다.

이카리딘은 화학기피제이지만, 무색, 무취에 끈적임이나 피부 자극이 없다는 특징이 있고, 지속성이 뛰어나며, 코팅이나 플라스틱, 합성 섬유에도 손상이 가지 않아 옷 위에도 뿌려서 사용할 수 있다는 장점이 있다. 특히 이카리딘은 독일 바이엘社에서 개발되어, 2001년 세계보건기구(WHO), 미국 환경 보호청(EPA) 및 대한민국 식품의 약품안전처 등 전 세계적으로도 사용 및 성능을 검증받은 성분이다.

상기 이카리딘은 기피제 조성물 전체 중량의 10 ~ 20 중량% 함유되는 것을 특징으로 하며, 가장 바람직하게는 15 중량% 함유되는 것을 특징으로 한다.

이처럼 이카리딘을 유효성분으로 하는 동물용 기피제 조성물은 하기의 실험을 통해 모기 및 진드기에 대하여 4시간 동안 95% 이상의 기피율을 제공하는 것을 특징으로 한다.

한편, 본 발명의 동물용 기피제 조성물의 유효성분에 편백오일, 소나무추출오일, 라벤더워터, 시트르산이 더 포함될 수 있다.

편백오일 및 소나무오일은 편백나무(Chamaecyparis obtusa) 및 소나무의 잎으로부터 각각 추출한 정유로서, 살균 및 살충 효과를 갖는 피톤치드와, 휘발성 물질인 테르펜(turpentine)을 함유하고 있다.

라벤더워터는 라벤더 꽃이 농축된 물로 리날로울과 리날로울 아세테이트 등의 성분이 다량 함유되어 있어 강력한 진정 작용을 하는 것으로 알려져 있다.

시트르산은 구연산이라고도 불리며, 감귤류의 과일에서 주로 발견되는 약한 유기산이다.

시트르산은 모기가 싫어하는 향취를 가지면서 pH를 조절하여 조성물의 상태를 보존시키는 역할도 한다.

본 발명에서는 상기 편백오일, 소나무추출오일, 라벤더워터, 시트르산은 2 : 1 : 5 : 2의 중량비로 유효성분에 포함되되, 상기 편백오일, 소나무추출오일, 라벤더워터, 시트르산의 중량을 합한 값은 조성물 전체 중량의 0.2 ~ 5 중량%인 것이 바람직하다.

본 발명의 동물용 기피제 조성물은 상기 성분 외에 피이지-8(PEG-8, Polyethylene Glycol-8), 폴리옥시에틸렌경화피마자유, 에틸렌 및 정제수를 포함한다.

상기 성분 중 에틸렌 및 정제수는 상기 유효성분이 용해 또는 분산되도록 하며, 피이지-8(PEG-8, Polyethylene Glycol-8), 폴리옥시에틸렌경화피마자유은 계면활성제로 항료 성분의 가용성, 휘산 성능을 조절하고, 사용감을 향상시키는 역할을 한다.

이하, 본 발명의 실시예 및 실험예에 대해 설명하기로 한다.

<실시예 1>

아래 표 1의 배합으로 원료를 혼합하여 동물용 기피제 조성물을 제조하였다.

성분	중량(g)
이카리딘	150
폴리옥시에틸렌경화피마자유	10
피이지-8	100
에틸렌	305.6
편백오일	1
소나무추출오일	0.5
라벤더워터	2.5
시트르산	1
정제수	429.4

이하, 상기 실시예 1에 대한 실험예에 대해 설명하기로 한다.

호서대학교 바이오의과학연구센터에 실시예 1 제품의 모기, 진드기 기피효과 및 안전성 평가를 의뢰하였다.

실험은 동물용의약품등 임상시험실시기관 지정에 관한 규정에 근거하고, 산업동물에서 살충제 효력시험 가이드라인(안)의 시험기준에 의거하여 진행하였다.

<외부 해충의 준비>

진드기는 국내에서 채집한 작은소피참진드기 자충 및 성충 1,000마리(암컷:수컷=9:1)를 시험 24시간 전에 일정 온도와 습도의 사육실에 옮겨 준비하였다.

모기는 채집한 흰줄숲모기유충과 번데기를 성충으로 우화시킨 것을 시험에 공시하였다.

모기 사육은 채집한 모기유충과 번데기를 항온항습 사육실에서 성충으로 우화시킨 후, 케이지 내에서 우화한 성충에 10% 농도 설탕물을 솜에 적셔 공급하고, 1주일 정도 교미시간을 충분히 제공한 후, 실험용 마우스를 이용하여 10시간 흡협시키고, 매일 산란한 알을 따로 분리하여 유충 사육기에서 사육한 후, 융화된 번데기를 매일 골라내어 성충 케이지 안에서 우화시키고 성충의 연령을 고르게 유지하기 위해 3일 동안 융화한 번데기는 같은 케이지 안에서 우화시켰다.

성충이 들어있는 케이지는 약 4~5일 정도 사육실에서 충분히 휴식 시간을 주었으며, 시험동물에 노출시키기 전 24시간 동안에는 설탕물을 제공하지 않고 굶겼다.

<실험동물의 준비>

실험동물은 비글 도그 1년형 9마리(암컷 3마리, 수컷 6마리)를 사육케이지에 1마리씩 사육하여 준비하였다.

시험동물은 시험용 외부 기생충에 노출되기 전에 개별 망 케이지에 배치하였으며, 케이지 바닥은 흰색 시트를 깔아 외부기생충 관찰이 용이하게 하였다.

개별 케이지는 모든 면이 미세방충망에 둘러쌓여 틈이 없도록 제작된 개별 망케이지를 사용하였다.

<안전성 시험>

안전성을 확인하기 위하여 대조군은 실험대상 동물 4마리에 대해 약물 처리를 하지 않고, 5마리에 대해 약 10 ~ 20cm 거리에서 눈, 코, 입 등 안면 부를 피해서 약물을 몸에 뿌리고 털에 펴 발랐다.

더불어, 약물처리 전후의 약물 중량을 측정해서 중량 감소분을 개별 동물별 약물 처치량으로 계산하고 동물별로 기입하였으며, 동물별 약물 처치량이 일정하도록 하였다.

약물 처치군의 개체당 약물 처치량은 4.82±0.31g이었으며, 체중 kg 당 처치량은 0.591±0.048g/kg bw 이었다.

대조군과 약물처치군의 약물 처치량 및 체중 변화는 아래 표 2에 나타내었다.

시험군	개체번호	투여 당일 체중(kg)	개체당 처치량(g/animal)	체중 kg당 처치량(g/kg bw)	처치 후 24시간 후 체중(kg)
대조군	H-1	7.8	-	-	7.9
	H-2	8.9	-	-	8.9
	H-6	7.5	-	-	7.6
	H-7	9.2	-	-	9.1
	평균	8.2	-	-	8.375
약물처치군	H-3	9.5	4.9	0.516	9.5
	H-4	8.6	5.1	0.593	8.6
	H-5	7.7	5	0.649	7.8
	H-8	8.1	4.8	0.593	8.1
	H-9	7.1	4.3	0.606	7.2
	평균	8.2	4.82	0.5914	8.24

상기 표 2에 나타난 바와 같이 약물 처치 전후의 체중 변화가 거의 없는 것으로 나타났다.

안전성 지표는 약물 처치 후 30분, 1시간, 4시간, 8시간, 24시간 경과 후 안전성 지표에 따라 증상을 확인하였다.

안전성 임상 지수는 잦은 눈 깜빡거림, 잦은 피부 긁음, 재채기, 기타 행동 이상 반응을 1점으로, 동공반응 이상, 침흘림, 눈물, 콧물, 피모 이상은 2점을, 구토, 민감 또는 불안, 행동 둔화, 종창 또는 발작은 3점을, 호흡 불규칙은 4점을 매겼다.

인전성 임상 지수에 따른 임상 증상 결과는 아래 표 3에 나타냈다.

관찰항목	대조군(4마리)		약물처리군(5마리)
	임상증상여부	score	임상증상여부	Score
잦은 눈 깜빡거림	없음	0	없음	0
잦은 피부 긁음	없음	0	없음	0
동공반응 이상	없음	0	없음	0
재채기	없음	0	없음	0
침흘림	없음	0	없음	0
눈물	없음	0	없음	0
콧물	없음	0	없음	0
구토	없음	0	없음	0
민감 또는 불안	없음	0	없음	0
행동 둔화	없음	0	없음	0
피모 이상	없음	0	없음	0
종창 또는 발적	없음	0	없음	0
기타 이상 행동	없음	0	없음	0

<진드기 기피효과 시험>

상기 안전성 시험과 마찬가지로 동물 4마리에 대해 약물 처리를 하지 않고, 5마리에 대해 약물 처리를 하여 진드기 기피 효과를 측정하였다.

약물 처치 전 동물 체중을 측정하고 건강 상태를 확인한 후, 진드기 자충과 성체(100±10마리)가 들어있는 보관통을 개별 망케이지 안에 각각 배치하였다.

약물처치군 동물에는 안면부를 피해 실시예1의 조성물을 4 ~ 5회 분무하여 전신에 골고루 뿌리고 털에 펴 발라주었다.

처리 전후 제품의 중량을 측정해서 중량 감소분을 개별 동물별 약물 처치량으로 계산하고 동물별로 기입하였다.

약물 처치량은 아래 표 4와 같다.

개체번호	투여 당일 체중(kg)	개체당 처치량(g/animal)	체중 kg당 처치량(g/kg bw)
H-3	9.4	4.2	0.447
H-4	8.5	5.5	0.647
H-5	7.5	5.1	0.68
H-8	8	4.6	0.575
H-9	7	4.8	0.686
평균	8.08	4.84	0.607

제품처치 완료 후 동물을 망케이지에 넣기 직전에 진드기로 인해 동물이 스트레스를 받거나 과하게 움직이는 것을 방지하기 위하여 30분간 약하게 진정상태를 유지하도록 캐타민 5.5mg/kg과 xylazine 1.1mg/kg을 군육주사하여 진정시켰고, 진정제 주사 후 바로 망케이지 내부에 넣어주었다.

망케이지에 들어있는 진드기 보관통의 뚜껑을 열어 진드기가 케이지로 나오도록 하고, 약물처치 후 4시간 및 24시간 째에 개 몸에 붙어있는 진드기와 케이지 안의 개 몸에 붙지 않은 진드기의 수를 구분하여 계수하였다.

진드기 기피 효율의 계산은 각 시간대에 계수한 대조군과 약물처치군에서 확인된 진드기 수에 대하여 About's 식을 이용하여 기피효율을 계산하고 통계학적으로 95% 유의성 검정을 실시하였다.

이때 진드기 수에는 생존 진드기와 사멸 진드기를 모두 포함시켰다.

진드기 기피효율(%) = 100 × (대조군 동물에서 확인한 진드기 비율 - 약물처치군 동물에서 확인한 진드기 비율)/ 대조군 동물에서 확인한 진드기 비율

= 100 × (1- 약물처치군 동물에서 확인한 진드기 비율/대조군 동물에서 확인한 진드기 비율)

이때, 대조군 동물에서 확인한 진드기 비율은 대조군 동물에서 확인한 진드기수(생존 진드기수 + 죽은 진드기수) / 대조군 동물에 감염시키기 위해 사용한 진드기 수로 결정하였고, 약물처치군 동물에서 확인한 진드기 비율은 약물처치군 동물에서 확인한 진드기 수(생존 진드기수 + 죽은 진드기수) / 처치군 동물에 감염시키기 위해 사용한 진드기 수로 결정하였다.

효과의 판정 기준은 4시간 시점에 대조군과 약물처치군 간에 통계학적으로 5% 수준에서 유의한 차이가 있으며, 기피효율이 95% 이상일 때 효과가 있는 것으로 판정하였다.

24시간째의 기피효율은 제품의 기피효과 지속력을 확인하기 위한 참고 성적으로 활용하였다.

실험군과 대조군의 진드기 기피효과 실험 결과는 아래 표 5에 나타내었다.

시험군	개체번호	사용진드기수	확인된 진드기수		진드기 비율		기피율
			4시간	24시간	4시간	24시간	4시간	24시간
대조군	H-1	105	43	38	40.95	36.19	-
	H-2	102	41	39	40.20	38.24
	H-6	95	39	37	41.05	38.95
	H-7	101	38	40	37.62	39.60
	평균	101	40	39	39.96	38.24
약물처치군	H-3	101	1	29	0.99	28.71	97.52	24.92
	H-4	103	2	30	1.94	29.13	95.14	23.84
	H-5	101	2	37	1.98	36.63	95.04	4.21
	H-8	94	1	35	1.06	37.23	97.34	2.64
	H-9	97	1	40	1.03	41.24	97.42	-7.83
	평균	99	1	36.5	1.40	34.59	96.49	9.56

상기 표 5에 나타난 바와 같이 대조군에서는 평균 40마리 정도의 진드기가 확인되어 노출시킨 진드기의 최소 25% 이상이어야 하는 조건을 충족하였다.

실시예 1의 조성물을 처치한 약물처치군에서는 약물 적용 후 4시간째에 약물처치군 몸에서 확인된 진드기는 1 ~2 마리였다.

이에따라 약물처치 후 4시간 째 개 몸에서 확인된 진드기수는 대조군에 비해 유의하게 감소하였고, 기피효율은 96.49%로, 기피효율 판정 기준인 95%를 초과하였다.

또한, 개의 등쪽 털을 깎아 매직으로 선을 긋고 왼쪽에만 약을 도포한 후 진드기 15마리를 인섹트 브리딩 박스에 넣고 박스를 몸에 부착한 후 4시간 뒤 확인하였고, 실험 결과를 도 1에 도시하였다.

도면에 도시된 바와 같이 약물 처치한 왼쪽에는 진드기가 없었고, 약물을 처치하지 않은 오른쪽으로 진드기가 모여있는 모습을 관찰할 수 있었다.

이에 따라 실시예 1이 진드기 기피효과가 있음을 확인할 수 있었다.

<모기 기피효과 시험>

상기 안전성 시험과 마찬가지로 동물 4마리에 대해 약물 처리를 하지 않고, 5마리에 대해 약물 처리를 하여 모기 기피 효과를 측정하였다.

약물 처치 전 체중을 측정하고 건강 상태를 확인한 후, 굵은 모기 100±10마리씩 담은 보관통을 개별 망케이지 안에 준비하였다.

암컷 모기는 3 ~ 10일령으로 시험 전 흡혈하지 않았고, 기피효과시험 24시간 전부터 설탕물 공급을 중단하여 굵은 상태를 유지한 것을 사용하였다.

약물처치군 동물에 안면부를 피해 약물을 5 ~6회 분부하여 전신에 골고루 뿌리고 털에 펴 발라주었다.

제품 처치 전후 제품의 중량을 측정해서 전후의 중량감소분을 개별 동물별 약물 처치량으로 계산하고 동물별로 기입하였다.

모기 기피효과시험에서 약물 처치량은 아래 표 6에 나타내었다.

개체번호	체중(kg)	개체당 처치량(g/animal)	체중 kg당 처치량(g/kg)
H-3	9.6	4.3	0.448
H-4	8.6	4.9	0.57
H-5	7.8	5	0.641
H-8	8.2	4.8	0.585
H-9	7.1	4.9	0.69
평균	8.3	4.78	0.587

제품 처치 후 4시간 째에 개별 망케이지에 동물을 넣기 직전 진정상태를 유도하기 위하여 캐타민 11mg/kg과 xylazine 2.2mg/kg을 군육주사하여 진정시켰고, 진정제 주사 후 바로 망케이지 내부에 넣어주었다.

이후, 굶은 모기 암컷 100 ±10마리를 보관하고 있는 보관통의 뚜껑을 열어서 개별 망케이지 내의 동물에 노출시켰다.

모기노출 1시간 후 개가 있는 망케이지를 영하의 야외환경으로 옮겨 모기의 활동성을 저하시킨 후 망케이지 내의 진정상태의 개를 꺼내었다.

이후, 망케이지 내의 모든 모기를 회수하여 시험관에 모아 분석전까지 영하 20℃의 냉동고에 보관하였다.

시험과 내 보관되어 있는 회수된 모기 중 40마리를 무작위로 채취하여 0.1% thimerosal(wt;vol)이 있는 pH7.4의 PBS 200㎕를 함유하는 1.5mL 튜브에 넣어 30분간 얼음 위에서 방치한 후 무균 pestle로 균질화한 후 8,000rpm에서 5분간 원심분리하여 상층액을 회수하였다.

100% 흡혈모기에서의 개 IgG 함량을 확인하기 위하여 무처치 개에 노출시켜 흡혈이 완료된 모기(붉은 혈액으로 배가 불룩한 모기) 40 마리에 대하여 0.1%thimerosal(wt;vol) pH7.4의 PBS 200㎕를 함유하는 1.5mL 튜브에 넣어 30분간 얼음 위에서 방치한 후 무균 pestle로 균질화한 후 8,000rpm에서 5분간 원심분리하여 상층액을 회수하였다.

회수된 상층액을 가지고 개 IgG 함량을 Finetest Canine IgG ELISA kit로 분석하였다.

즉, Canine IgG가 antibody가 부착된 well에 960배 희석된 흡혈모기 유제, 240배 희석된 모기 유제 standard solution을 각각 100㎕씩 분주하고, 37℃에서 90분간 반응시키고 2회 세척하였다.

이후 Biotin labeled antibody 100㎕씩을 첨가하여 37℃에서 1시간 동안 반응시키고 3회 세척하였으며, 세척 후 HRP-steptavidein conjugate(SABC) 100㎕ 씩을 각 well에 분주한 후 37℃에서 30분간 반응시키고 5회 세척하였다.

37℃에서 30분간 방치한 TMB substrate를 90㎕씩 모든 well에 분주한 후 15분간 반응시키고, stop solution 50㎕를 첨가하여 발색반응을 멈추게 한 후 ELISA reader를 이용하여 450nm에서 흡광도를 측정하였다.

모기 기피효율의 개산은 약물처치 후 4시간째에 1시간 동안 모기를 노출시킨 후 수집한 모기에서의 IgG 함량을 근거로 흡혈율을 계산하여 Abott's 식을 이용하여 기피효율을 계산하였다.

모기 기피효율(%) = 100 × (대조군 동물에서 확인한 흡혈율 - 약물처치군 동물에서 확인한 흡혈율) / 대조군 동물에서 확인한 흡혈율

= 100 × (1 - 약물처치동물에서 확인한 흡혈율 / 대조군 동물에서 확인한 흡혈율)

이때, 대조군 동물에서 확인한 흡혈율은 대조군 모기에서의 개 IgG 함량 /100% 흡혈 모기에서의 개 IgG 함량) × 100으로 계산하고, 약물처치군군 동물에서 확인한 흡혈율은 약물처치군 모기에서의 개 IgG 함량 /100% 흡혈 모기에서의 개 IgG 함량) × 100으로 계산하였다.

효과 판정 기준은 약물처치 후 4시간 시점에 모기 노출 후 대조군과 약물처치군 간에 모기에서 개 IgG 함량이 통계학적으로 5% 수준에서 유의한 차이가 있으며, 모기 기피효율이 95% 이상일 때 효과가 있는 것으로 판정하였다.

실험 결과는 아래 표 7에 나타내었다.

시험군	개체	투입모기수	회수모기수	검사모기수	IgG(ng/mL)	흡혈율(%)	기피효율(%)
100% 흡혈모기	-	-	-	40	17195.5	100	-
대조군	H-1	103	98	40	11800.08	68.62	-
	H-2	100	94	40	11417.52	66.4
	H-6	99	95	40	11314.32	65.8
	H-7	97	93	40	12400.56	72.12
	평균	99	95	40	11733.12	68.23
약물처치군	H-3	92	78	40	509.52	2.96	95.66
	H-4	101	83	40	168.24	0.98	98.57
	H-5	100	76	40	494.64	2.88	95.78
	H-8	95	86	40	422.88	2.46	96.4
	H-9	99	84	40	543.36	3.16	95.37
	평균	97.4	84.4	40	427.73	2.49	96.35

흡혈율(%) = (각 시험군의 IgG 농도/흡혈모기 IgG 농도) × 100

상기 표 7에 나타난 바와 같이 흡혈이 100% 확인된 모기 40마리에서의 개 IgG 농도는 17195.5ng/mL 였으며, 대조군과 약물처치군의 모기 유제 내 IgG 농도는 각각 11733.12ng/mL과 427.73ng/mL 이었다.

대조군 흡혈율은 68.23%로 대조군 흡혈율이 기준치인 60% 이상을 충족하였고, 약물처치군의 흡혈율은 2.49%로 대조군에 비하여 유의하게 낮았다.

약물처치군의 모기 기피효율은 평균 96.35%로 모기 기피 효율 기준치인 95% 이상이었다.

도 2 및 도 3은 대조군과 약물처치군의 모기 확대 사진이 도시되어 있다.

이상의 실험 결과 약물 처치 후 24시간 동안 체중과 임상 면에서 아무런 증상 변화가 없어 부작용이 없음을 확인할 수 있었으며, 진드기(작은소참진드기) 및 모기(흰줄숲모기)에 대해 기준치로 삼은 95% 이상의 기피율을 갖는 것을 확인하였다.

<관능평가>

한편, 상기 유효성분 중 편백오일, 소나무추출오일, 라벤더워터, 시트르산의 배합비를 실시예 1과 달리하여 실시예를 추가 제조한 후, 애완견주로 직접 본인의 애완견에 제품을 분무시켜 분무시키는 동안 개의 반응을 살펴 기호도를 평가하였다.

평가대상 개와 견주는 10개의 세트로 준비하고, 각 세트별 시험이 끝난 후 1시간 동안 대기 시간을 갖게 하여 뿌린 냄새의 영향을 최소화하도록 하였다.

평가 항목은 반응이 없음과 싫어함(몸부림침, 짖음) 두 가지 항목으로 하여 5점 평점법을 적용하였다.

아래 표 8은 실시예의 배합(중량비)을 나타낸 것이며, 표 9는 관능평가 결과를 나타낸 것이다.

실시예	편백오일	소나무추출오일	라벤더워터	시트르산
1	2	1	5	2
2	1	1	5	2
3	3	1	5	2
4	2	2	5	2
5	2	3	5	2
6	2	1	4	2
7	2	1	6	2
8	2	1	5	1
9	2	1	5	3

실시예	관능평가지수
1	4.8
2	2.1
3	2.4
4	1.5
5	2.2
6	1.5
7	0.7
8	1.4
9	2.4

(5 : 반응이 없음, 0 : 싫어함)

상기 표 9에 나타난 바와 같이 실시예 1의 배합에서 약물 분무시 특이한 반응이 없어 분무 도포에 어려움이 없는 것으로 보여지나, 나머지 배합에서는 분무시 싫어하는 반응이 많은 것으로 나타났다.

Claims (5)

1. 애완견용 모기 및 진드기 기피제 조성물에 있어서,
   이카리딘(Icaridine) 15 중량%, 폴리옥시에틸렌경화피마자유 1 중량%, 피이지-8 10 중량%, 에틸렌 30.56 중량%, 편백오일 0.1 중량%, 소나무추출오일 0.05 중량%, 라벤더워터 0.25 중량%, 시트르산 0.1 중량% 및 잔량의 정제수로 구성되고,
   상기 조성물은 모기 및 진드기에 대하여 4시간 동안 95% 이상의 기피율을 제공하는 것을 특징으로 하는,
   이카리딘을 유효성분으로 하는 분무식 애완견용 모기 및 진드기 기피제 조성물.
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