KR102615275B1 - 천연방부제를 함유하는 화장료 조성물 - Google Patents
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Abstract
본 발명은 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물 및 편백잎추출물의 조합을 유효성분으로 포함하는 천연방부제 조성물에 관한 것으로 세균, 진균에 대하여 광범위한 방부효과를 나타내며, 이를 함유하는 화장료 조성물에서 피부자극이 없으며 보습력이 우수한 화장품을 제조할 수 있다.
Description
본 발명은 천연방부제 및 이를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다. 더 상세하게는 본 발명은 세균, 진균에 대하여 광범위한 방부효과를 나타내며, 이를 함유하는 화장료 조성물에서 피부자극이 없으며 보습력이 우수한 화장품을 제조할 수 있는 천연방부제 및 이를 함유하는 화장료 조성물에 관한 것이다.
화장품에 사용되는 방부제는 제품에서 미생물의 성장을 억제 또는 감소시켜주는 역할을 하는 성분이다. 제품이 보존되는 기간뿐만 아니라 소비자가 제품을 사용하는 동안 세균, 진균과 같은 미생물의 오염으로부터 제품을 보호하여 제품이 사용되는 동안 미생물에 의해 오염되어 부패, 변질 등 물리적, 화학적으로 변화하는 것을 막기 위해 사용된다. 이러한 이유로 방부제는 화장품뿐만 아니라 식품, 의약품 등 많은 소비재에 사용하고 있다. 제품이 부패하거나 변질되는 등 변화가 생기면 변질, 변색, 변취, 점도 및 질감이 변하거나 곰팡이가 발생하는 등 상품 품질 열화 및 미생물의 대사산물로 인한 독성이 생기며 병원성 미생물 오염은 소비자에 피부질환, 안질환 등 질병 유발된다. 이러한 제품을 사용하는 경우 소비자의 건강에 큰 영향을 미칠 수 있으므로 방부제의 사용은 매우 중요하다. 이런 화장품용 방부제들은 화학적 방법에 의해서 제조된 화학 방부제가 대부분이다. 이러한 화학 방부제는 인체 피부에 장기적으로 사용되는 경우 피부 노화 촉진, 피부 자극, 발암 및 내분비계의 교란시킬 수 있는 문제점과 생분해성 결여 등의 문제점이 있어 인체에 안정하며, 환경친화적인 천연물 유래의 방부제의 개발이 필요하나 많은 업체들은 천연 소재의 비싼 가격과 천연 소재에 대한 가공 기술력의 미비 등으로 인하여 천연 소재를 방부제로 사용하지 못하고 있다. 최근들어 지속적인 경제성장과 더불어 각종 유해성분에 대한 논란이 이슈화되면서 화장품을 구매하기 전에 전성분을 꼼꼼히 살펴보는 소비자가 늘어나면서 자연스럽게 천연성분을 찾고 그 중에서도 천연방부제에 관심이 높아졌다. 천연방부제 성분인 천연활성 물질들의 경우, 대부분 색취, 안정성 저하, 미흡한 방부력, 제형상의 문제점, 재연성 등으로 인하여 상용화되지 못하고 있다.
본 명세서 전체에 걸쳐 다수의 문헌이 참조되고 그 인용이 표시되어 있다. 인용된 문헌의 개시 내용은 그 전체로서 본 명세서에 참조로 삽입되어 본 발명이 속하는 기술 분야의 수준 및 본 발명의 내용이 보다 명확하게 설명된다.
요엽후박나무껍질추출물, 편백잎추출물 등은 각각 항균 및 방부효능을 가지는 것으로 확인되었으나, 세균과 진균류 모두에서는 뛰어난 항균활성을 보이지 못하므로 사용범위에 제한성이 있었다. 이에, 본 발명자들은 여러 천연물 추출물 중 방부 효능을 가지고 자유롭게 사용할 수 있는 천연물추출물을 개발하고자 노력한 결과, 요엽후박나무껍질 추출물, 편백잎추출물에 추가로 소나무잎추출물, 브로콜리추출물을 첨가하고, 혼합하여 사용한 경우 각각의 천연 추출물에 비하여 미생물 생장 억제효과가 우수한 것을 확인하고 본 발명을 완성하게 되었다.
본 발명의 하나의 관점은 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물 및 편백잎추출물의 조합을 유효성분으로 포함하는 천연방부제 조성물을 제공하는 것이다.
소나무는 박테리아, 곰팡이 등과 같은 외부 유해인자로부터 자신을 보호하기 위해 뿜어내는 천연항균성 물질인 피톤치드가 항균, 항산화, 진정 및 보습효과에 효능이 있다고 알려져 있다.
즉, 소나무의 성분에는 α-pinene, β-pinene, Camphene 등의 정유성분과 Quercetin, Kaempferol 등 Flavonoid류, 수지 등이 있으며 수분 58.1%, 당질 19.6%, 섬유소 13.3%, 단백질 4.5%, 지질 3.9%, 회분 0.6% 정도가 함유되어 있으며, 이러한 성분들은 항균효과 및 미생물 성장억제 효과가 있다고 보고되어 있다(농촌영양개선연구원, 1991; 박주성, 2009; Koukos et al.,2000). 또한 솔잎의 항산화 연구에서 솔잎추출물이 활성산소를 소거시키며 세포 내에서 산화적 스트레스에 의한 항산화제의 소모와 손상을 억제하는 것으로 알려져 있다(유지현 등, 2004; Packeret al., 1999; Virgili et al., 1998).
브로콜리는 콜리플라워, 갓 등과 함께 십자화과 다년생 식물로 분류되며 항산화 효과가 탁월한 Vitamin C, α-carotene, β-carotene, α-tocopherol, γ-tocopherol, Chlorophyll, Rutin, Quercetin, Glutathione, Selenium 등이 풍부하며, 자외선을 차단하고 효소를 활성화시켜 피부암을 예방해 주는데 도움을 주며 항산화효소를 증가시켜 외부자극으로부터 피부를 보호하는 Sulforaphane을 함유하여 피부진정 및 보습에도 효과가 우수하다. 브로콜리의 탁월한 항균효과로 식품 병원균에 대한 항균활성 등의 생리활성에 대한 연구가 보고되어 있으며, 염증관련 피부 상재균인 S. aureus, S. epidermidis, E. coli 및 P. acnes에 대한 높은 항균활성을 보이며, 특히 염증성 여드름균인 P. acnes에 대한 항균활성이 가장 높게 나타나고 있다. DPPH 소거활성 평가 에서도 높게 나타났으나 Vitamin C보다 약간 낮은 활성을 나타내었다. Superoxide 소거 활성 에서는 Vitamin C와 비교하였을 때 약간 낮은 활성을 나타내었다. 항염 소거활성 평가에서는 대조군으로 사용된 Propolis보다 높은 소거 활성을 나타내었다. 브로콜리추출물은 P. acne에 대한 항균 활성과, 항산화 활성을 가진다는 것으로 확인하였다. 그러므로 브로콜리는 잠재적인 항산화, 항균 치료물질로서 사용될 수 있다고 사료된다(신라대학교, 2013, 장민우, 브로콜리와 양배추 추출물의 항산화와 항균활성)
요엽후박나무는 목련과 목련속에 속하는 90종의 나무 중 하나로, 우수한 항산화 및 항염 효능을 가져 일본과 중국에서 오랫동안 약초로 이용되어 왔다. 주요 성분으로는 리그난류 성분으로 Magnolol, Honokio, Isomagnolol, 6’-O- methylhonokiol, Magnaldehydes b, c, d, e, Bornylmagnolol, Magnolignan a, b, c, d, e, f, h, i. 정유성분 주성분으로 α-Eudesmol, β-Eudesmol, γ-Eudesmol, β-elemene, γ-elemene, Caryophyllene, Elemol, Guajol, Eudesmolcadinol, 1,4-cineol, Linalool, 4-Terpinenol, Globulol. 알칼로이드(Alkaloids) 성분으로 Magnocurarine, Magnoflorine, Liriodenine, Salicifoline, Michelabine, Anonaine을 함유하여 황색포도상구균, 폐렴쌍구균, 이질간균, 티푸스균, 부티푸스균, 대장균, 녹농간균, 곽란고균, 변형간균, 백일해간균, 고초간균, 용혈성 연쇄 구균, 단저간균 등에 대해 비교적 강력한 억제작용이 있으며 또한 피부진정 및 보습효과가 우수 하다.
편백나무는 한국과 일본에 많이 있는 겉씨 식물 구과목인 측백나무과의 상록 교목이라고 한다. 편백나무에는 살균과 항균작용이 우수한 천연항균성 물질인 피톤치드가 많이 함유되어 있다.
피톤치드(Phytoncide)란 Phyton=Plant(식물)과 항균력을 의미하는 Cide=Killer(살인자)의 합성어 로서 “식물이 분비하는 살균물질” 이라고 보면 된다. 1952년 노벨 의학상을 받은 러시아 태생의 미국 세균학자 Waksman이 처음 발견한 이후 선진국에서는 이를 다양하게 활용하고 있는 물질 이다. 효능을 살펴보면 강력한 항균작용[세균(레지오넬라, 칸디다, 황색포도상구균), 진균(각종 유해 곰팡이균)], 면역력 강화와 세포재생 촉진작용(말초혈관을 단련하여 인체조직을 유연하게 만들고 자연치유력을 높여 면역력을 강화, 생장촉진의 물질의 분비를 도와 세포의 재생을 촉진), 피부 보호와 탈모예방 효과(피부세포와 모공에 작용시 각종 트러블을 제거하고 세포에 활력을 불어 넣어 피부를 보호하고 탈모예방). 또한 피부 보습력 효과도 우수하다.
본 발명의 천연방부제 조성물은 유효성분으로서 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물 및 편백잎추출물의 조합을 포함하는데, 본 명세서에서 사용되는 용어 '추출물'은 원물을 착즙, 또는 원물에 추출용매를 처리하여 얻은 추출 결과물이나 이를 제형화(예컨대, 분말화)한 가공물도 포함하는 의미를 갖는다.
본 발명의 조성물에서 이용되는 추출물을 원물에 추출용매를 처리하여 얻는 경우에는, 다양한 추출용매가 이용될 수 있는데 예컨대, 극성 용매 또는 비극성 용매를 이용할 수 있다. 극성 용매로는 (i) 물, (ii) 알코올(바람직하게는, 메탄올, 에탄올, 프로판올, 부탄올, 노말-프로판올, 이소-프로판올, 노말-부탄올, 1-펜탄올, 2-부톡시에탄올 또는 에틸렌글리콜), (iii) 아세트산, (iv) DMFO(dimethyl-formamide) 및 (v) DMSO(dimethyl sulfoxide) 등을 사용할 수 있고, 비극성 용매로는 아세톤, 아세토나이트릴, 에틸 아세테이트, 메틸 아세테이트, 플루오로알칸, 펜탄, 헥산, 2,2,4-트리메틸펜탄, 데칸, 사이클로헥산, 사이클로펜탄, 디이소부틸렌, 1-펜텐, 1-클로로부탄, 1-클로로펜탄, o-자일렌, 디이소프로필 에테르, 2-클로로프로판, 톨루엔, 1-클로로프로판, 클로로벤젠, 벤젠, 디에틸 에테르, 디에틸 설파이드, 클로로포름, 디클로로메탄, 1,2-디클로로에탄, 어닐린, 디에틸아민, 에테르, 사염화탄소 및 THF 등을 사용할 수도 있다.
바람직하게는, 본 발명에서 이용되는 추출물은 물, 탄소수가 1 내지 4의 저급 알코올 및 이들의 혼합물로 이루어진 군 중에서 선택된 어느 하나를 추출 용매로 사용하여 추출한 것일 수 있지만, 이것으로 제한되는 것은 아니다.
또한, 본 명세서에서 사용되는 용어 '추출물'은 상술한 바와 같이 당업계에서 조추출물(crude extract)로 통용되는 의미를 갖지만, 광의적으로는 추출물을 추가적으로 분획(fractionation)한 분획물도 포함한다. 즉, 원물을 착즙 또는 상술한 추출용매를 이용하여 얻은 추출물뿐만 아니라, 여기에 정제과정을 추가적으로 적용하여 얻은 것도 포함한다. 예컨대, 상기 추출물을 일정한 분자량 컷-오프 값을 갖는 한외 여과막을 통과시켜 얻은 분획, 다양한 크로마토그래피(크기, 전하, 소수성 또는 친화성에 따른 분리를 위해 제작된 것)에 의한 분리 등, 추가적으로 실시된 다양한 정제 방법을 통해 얻어진 분획도 본 발명의 추출물에 포함되는 것이다.
또한, 본 발명의 추출물은 이후 추가적인 과정, 예컨대 여과하거나 농축 또는 건조과정을 수행하여 용매를 제거한 것, 또는 여과, 농축 및 건조를 모두 수행한 것일 수도 있다. 여과는 예를 들어 여과지를 이용하거나 감압여과기를 이용할 수 있으며, 농축은 감압 농축기, 건조는 분무건조 하거나 동결건조법 등을 수행하여 분말 상태의 추출물을 얻을 수도 있다.
상기 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물 및 편백잎추출물의 조합은 각각의 단일 물질에 대비하여 상승효과를 가질 수 있는데, 바람직한 구현예에서, 상기 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물 및 편백잎추출물은 1±0.1 : 1±0.1 : 1±0.1 : 1±0.1의 중량비로 포함될 수 있다.
본 발명의 천연방부제 조성물은 착즙 및 건조 공정을 포함하여 원료 식물들로부터 각각의 추출물을 수득하는 단계; 상기 얻어진 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물 및 편백잎추출물을 1±0.1 : 1±0.1 : 1±0.1 : 1±0.1의 중량비로 혼합하여 복합물을 제조하는 단계를 포함하는 것에 의하여 제조될 수 있다.
또한, 본 발명은 상술한 천연방부제 조성물을 포함하는 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명의 화장료 조성물은 피부자극이 없으며, 보습력이 우수하여 피부에 수분감을 증가시켜주고, 촉촉한 상태를 유지시킬 수 있다. 이러한 피부 보습 효과는 피부의 주름개선, 탄력도 증가에 도움을 줄 수 있다.
본 발명의 화장료 조성물은 일반 피부 화장료에 배합되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체를 1종 이상 추가로 포함할 수 있으며, 통상의 성분으로 예를 들면 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.
발명의 화장료 조성물에 포함되는 화장품학적으로 허용 가능한 담체는 제형에 따라 다양하다.
본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 용매, 용해화제, 또는 유탁화제가 이용되고 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-브틸글리콜 오일이 있으며, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 이용될 수 있지만 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있지만 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 제형이 비누 등 클렌징 제품인 경우에는 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 이용될 수 이용될 수 있지만 이에 제한되는 것은 아니다.
본 발명의 제형이 연고, 페이스트, 크림 또는 젤인 경우에는, 담체성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 이용될 수 있지만 이에 제한되는 것은 아니다.
바람직한 구현예에서 본 발명의 화장료 조성물은 스킨, 로션, 앰플, 에센스, 하이드로 겔, 마스크 팩, 세럼, 크림, 아이크림, 클렌징 로션, 자외선 차단제, 폼 클렌징, 바디워시, 샴푸 및 린스 등의 형태로 제형화될 수 있다.
본 발명에 기재된 모든 성분은, 바람직하게는, 한국, 중국, 미국, 유럽, 일본 등의 관련 법규, 규범(예를 들어, 화장품 안전 기준 등에 관한 규정(한국), 화장품 안전 기술 규범(중국)) 등에서 규정한 최대사용치를 초과하지 않는다. 즉, 바람직하게, 본 발명에 따른 화장료, 또는 퍼스널 케어용 조성물은 각국의 관련 법규, 규범에서 허용되는 함량 한도로 본 발명에 따른 성분들을 포함한다.
본 발명은 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물 및 편백잎추출물의 조합을 유효성분으로 포함하는 천연방부제 조성물에 관한 것으로 세균, 진균에 대하여 광범위한 방부효과를 나타내며, 이를 함유하는 화장료 조성물에서 피부자극이 없으며 보습력이 우수한 화장품을 제조할 수 있다.
도면 1은 천연방부제 유무로 구분되는 비교예 1과 실시예 1에 대한 가용화 스킨 화장료 조성물에 대한 방부력 시험결과 보고서이다.
도면 2는 도면 1에서 비교예 1, 실시예 1의 세균 및 진균 증식 테스트 사진이다.
도면 3은 도면 1에서 비교예 1, 실시예 1의 세균 및 진균 로그 감소 그래프이다.
도면 4는 천연방부제 유무 구분되는 비교예 2와 실시예 2에 대한 유화 로션 화장료 조성물에 대한 방부력 시험결과 보고서이다.
도면 5는 도면 4에서 비교예 2, 실시예 2의 세균 및 진균 증식 테스트 사진이다.
도면 6은 도면 4에서 비교예 2, 실시예 2의 세균 및 진균 로그 감소 그래프이다.
도면 7은 천연방부제를 함유한 가용화 타입의 앰플, 에센스, 하이드로 겔, 마스크 팩 화장료 조성물에 대한 방부력 시험결과 보고서이다.
도면 8는 도면 7에서 앰플 화장료 조성물인 실시예 3의 세균 및 진균 증식 테스트 사진이다.
도면 9은 도면 7에서 실시예 3, 실시예 4, 실시예 5, 실시예 6의 세균 및 진균 로그 감소 그래프이다.
도면 10은 천연방부제를 함유한 유화타입의 세럼, 크림, 아이크림, 클렌징 로션 화장료 조성물에 대한 방부력 시험결과 보고서이다.
도면 11는 도면 10에서 세럼 화장료 조성물인 실시예 7의 세균 및 진균 증식 테스트 사진이다.
도면 12은 도면 10에서 실시예 7, 실시예 8, 실시예 9, 실시예 10의 세균 및 진균 로그 감소 그래프이다.
도면 2는 도면 1에서 비교예 1, 실시예 1의 세균 및 진균 증식 테스트 사진이다.
도면 3은 도면 1에서 비교예 1, 실시예 1의 세균 및 진균 로그 감소 그래프이다.
도면 4는 천연방부제 유무 구분되는 비교예 2와 실시예 2에 대한 유화 로션 화장료 조성물에 대한 방부력 시험결과 보고서이다.
도면 5는 도면 4에서 비교예 2, 실시예 2의 세균 및 진균 증식 테스트 사진이다.
도면 6은 도면 4에서 비교예 2, 실시예 2의 세균 및 진균 로그 감소 그래프이다.
도면 7은 천연방부제를 함유한 가용화 타입의 앰플, 에센스, 하이드로 겔, 마스크 팩 화장료 조성물에 대한 방부력 시험결과 보고서이다.
도면 8는 도면 7에서 앰플 화장료 조성물인 실시예 3의 세균 및 진균 증식 테스트 사진이다.
도면 9은 도면 7에서 실시예 3, 실시예 4, 실시예 5, 실시예 6의 세균 및 진균 로그 감소 그래프이다.
도면 10은 천연방부제를 함유한 유화타입의 세럼, 크림, 아이크림, 클렌징 로션 화장료 조성물에 대한 방부력 시험결과 보고서이다.
도면 11는 도면 10에서 세럼 화장료 조성물인 실시예 7의 세균 및 진균 증식 테스트 사진이다.
도면 12은 도면 10에서 실시예 7, 실시예 8, 실시예 9, 실시예 10의 세균 및 진균 로그 감소 그래프이다.
이하, 실시예를 통하여 본 발명을 더욱 상세히 설명 하고자 한다. 이들 실시예는 오로지 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것으로서, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 의해 제한되지 않는다는 것은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 자명할 것이다.
실시예
I. 천연방부제 조성물의 제조 및 효과 확인
1. 추출물 제조
- 소나무잎추출물: 건조된 소나무잎 100ｇ을 분쇄한 후 70%(v/v)에탄올 수용액으로 12시간 가온 환류추출하고 냉침시키고, 1.2㎛ 투과 사이즈를 갖는 여과지로 여과하여 여과액을 수득하였다. 수득된 여과액을 감압농축 및 감압 건조로 농축하여 2.76ｇ의 소나무잎 추출물을 얻었다.
- 브로콜리추출물: 건조된 브로콜리 100ｇ을 분쇄한 후 70%(v/v)에탄올 수용액으로 12시간 가온 환류추출하고 냉침시키고, 1.2㎛ 투과 사이즈를 갖는 여과지로 여과하여 여과액을 수득하였다. 수득된 여과액을 감압 농축 및 감압 건조로 농축하여 11.77ｇ의 브로콜리 추출물을 얻었다.
- 요엽후박나무껍질추출물: 건조된 요엽후박나무껍질 100ｇ을 분쇄한 후 70%(v/v) 에탄올 수용액으로 12시간 가온 환류 추출하고 냉침시키고, 1.2㎛ 투과 사이즈를 갖는 여과지로 여과하여 여과액을 수득하였다. 수득된 여과액을 감압농축 및 감압 건조로 농축하여 5.61ｇ의 요엽후박나무껍질추출물을 얻었다.
- 편백잎추출물: 건조된 편백잎 100ｇ을 분쇄한 후 70%(v/v)에탄올 수용액으로 12시간 가온 환류 추출하고 냉침시키고, 1.2㎛ 투과 사이즈를 갖는 여과지로 여과하여 여과 액을 수득하였다. 수득된 여과액을 감압농축 및 감압 건조로 농축하여 3.05ｇ의 편백잎추출물을 얻었다.
2. 천연 방부제의 제조
천연 방부제 조성물의 방부 효과를 확인하기 위해 상기 (1)에서 제조한 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물 및 편백잎추출물을 하기 표 1과 같이 단일물 또는 다양한 비율의 중량비로 배합하여 천연 방부제 조성물을 제조하였다(표 1).
| 시험예 번호 | 소나무잎추출물 | 브로콜리추출물 | 요엽후박나무껍질추출물 | 편백잎추출물 |
| 시험예 1 | 10 | 0 | 0 | 0 |
| 시험예 2 | 0 | 10 | 0 | 0 |
| 시험예 3 | 0 | 0 | 10 | 0 |
| 시험예 4 | 0 | 0 | 0 | 10 |
| 시험예 5 | 6 | 1 | 1 | 2 |
| 시험예 6 | 1 | 6 | 2 | 1 |
| 시험예 7 | 1 | 2 | 6 | 1 |
| 시험예 8 | 2 | 1 | 1 | 6 |
| 시험예 9 | 2.5 | 2.5 | 2.5 | 2.5 |
3. 효과 확인
a) 항균 활성 테스트
각각의 단일물과 복합물에 대한 항균활성 시험 방법으로 원형여과지법(paper disc method)을 이용하였으며, 사용한 균주로는 그람양성균으로 포도상구균(Staphylococcus aureus, ATCC 6538), 그람음성균으로 대장균(Escherichia coli, ATCC 8739), 녹농균(Pseudomonas aeruginosa, ATCC 9027), 효모로는 캔디다 효모(Candida albicans, ATCC 10231), 사상균으로 흑국균(Aspergillus brasiliensis, ATCC 16404)을 사용하였다.
배양한 각각의 균주를 응고된 평판 배지 위에 약 100㎕를 가하여 평판배지에 분주하고 스프레더(spreader)를 이용하여 균일하게 도말 하였다. 측정하고자 하는 천연방부제 각각의 단일물과 복합물을 지름이 10mm인 페이퍼디스크(paper disk)에 60㎕의 동일한 양으로 흡수시킨 후 용매를 건조시키고 균주가 도말된 배지 표면상에 밀착시켜 25℃ ~ 35℃ 조건의 배양기에서 48시간 이상 배양 후 페이퍼디스크 주변에 형성된 투명환(clear zone)의 크기를 측정하여 항균효과를 확인하였다. 대조군으로 종래의 합성 방부제로 사용되는 메틸파라벤(methy paraben; 대조군 1)과 천연 방부제로 알려진 자몽종자추출물(GSE; grapefruit seed extract; 대조군 2)을 사용하여 상기 표 1의 시험예 1~9의 천연 방부제와 항균효과를 비교하였다. 상기 대조군 1~2 및 시험예 1~9의 최종 농도는 모두 0.01 중량%의 동일 농도로 준비하고, 60㎕의 동일한 양으로 흡수시키어 실험을 수행하였으며, 그 결과를 하기 표 2에 나타내었다(직경단위는 mm임).
| 미생물균주 | S. aureus | E. coli | P. aeruginosa | C. albicans | A. brasiliensis | 평균직경 (mm) |
| 처리농도(%) | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 | 0.01 | |
| 대조군 1 (메틸파라벤) |
17 | 16 | 16 | 15 | 15 | 15.8 |
| 대조군 2 (자몽종자추출물) |
13 | 14 | 10 | 12 | 11 | 12 |
| 시험예 1 | 16 | 10 | 10 | 13 | 10 | 11.8 |
| 시험예 2 | 15 | 14 | 14 | 9 | 9 | 12.2 |
| 시험예 3 | 16 | 15 | 15 | 8 | 8 | 12.4 |
| 시험예 4 | 15 | 15 | 10 | 10 | 9 | 11.8 |
| 시험예 5 | 16 | 14 | 12 | 14 | 13 | 13.8 |
| 시험예 6 | 15 | 15 | 15 | 14 | 12 | 14.2 |
| 시험예 7 | 16 | 15 | 14 | 14 | 12 | 14.2 |
| 시험예 8 | 15 | 15 | 14 | 12 | 11 | 13.4 |
| 시험예 9 | 18 | 17 | 17 | 17 | 17 | 17.2 |
실험결과, 상기 표 2에서 확인된 바와 같이, 천연방부제 단일물인 시험예 1 ~ 4는 자몽종자추출물보다 낮거나 유사한 항균효과를 가지고 있으며, 상이한 중량비의 단순 조합의 복합물인 시험예 5 ~ 8는 자몽종자추출물보다 우수한 항균효과를 가지고 있는 것으로 확인되었다. 특히 중량비 1:1:1:1 의 균일 복합물인 시험예 9는 자몽종자추출물보다 훨씬 우수하며 메틸파라벤과 비슷하거나 보다 우수한 항균효과과 있는 것을 확인하였다. 즉 동일한 농도에서 1:1:1:1의 균일 복합물인 시험예 9가 상이한 중량비의 복합물인 시험예 5 ~ 8보다 매우 우수한 항균효과를 보였다. 이러한 결과에 의하여, 네 가지 추출물의 복합물이 1:1:1:1 에서 가장 우수한 상승효과(synergy effect)의 항균 활성을 나타낼 수 있음을 확인하였다.
b) 보습효과: 피부 보습력(각질층의 수분 손실량 측정)
단일물과 다양한 비율로 혼합된 천연 복합 방부제 조성물의 보습효과를 시험하기 위하여, 상기 표 1의 시험예 1~9를 피부에 도포한 후 각질층의 수분 손실량을 시간의 변화에 따라 측정하였다.
실험 방법은 다음과 같았다. 22~24℃, 상대습도 50%, 공기의 흐름이 없는 실내에서 피부가 건강한 여성 30명(평균연령 29.5세)을 대상으로 5명씩 4그룹으로 나누어, 시험예 1~9를 각각 얼굴 전체에 도포하게 하고, 도포 0.1시간, 0.5시간, 1시간, 3시간후 Tewameter ®TM 300 (Courage + Khazaka electronic GmbH. Germany)를 이용하여 경표피 수분 손실량(TEWL, Transepidermal Water Loss)을 볼 부위에서 측정하였다. 실험 결과는 하기 표 3에 나타내었다(경표피 수분 손실량(TEWL, Transepidermal Water Loss)(단위: g/㎡, hr)).
| 시료 | 도포 0.1시간 | 도포 0.5시간 | 도포 1시간 | 도포 3시간 |
| 경과후 TEWL | 경과후 TEWL | 경과후 TEWL | 경과후 TEWL | |
| 시험예 1 | 24 ± 1.0 | 28 ± 1.0 | 26 ± 1.0 | 24 ± 1.0 |
| 시험예 2 | 25 ± 1.0 | 29 ± 1.0 | 27 ± 1.0 | 25 ± 1.0 |
| 시험예 3 | 26 ± 1.0 | 27 ± 1.0 | 24 ± 1.0 | 24 ± 1.0 |
| 시험예 4 | 25 ± 1.0 | 27 ± 1.0 | 25 ± 1.0 | 24 ± 1.0 |
| 시험예 5 | 23 ± 1.0 | 25 ± 1.0 | 23 ± 1.0 | 22 ± 1.0 |
| 시험예 6 | 22 ± 1.0 | 25 ± 1.0 | 24 ± 1.0 | 23 ± 1.0 |
| 시험예 7 | 22 ± 1.0 | 25 ± 1.0 | 24 ± 1.0 | 22 ± 1.0 |
| 시험예 8 | 23 ± 1.0 | 26 ± 1.0 | 25 ± 1.0 | 21 ± 1.0 |
| 시험예 9 | 20 ± 1.0 | 22 ± 1.0 | 18 ± 1.0 | 16 ± 1.0 |
상기 표 3에서 피부보습 실험결과, 단일물인 시험예 1~4, 상이한 중량비로 혼합된 시험예 5~8, 1:1:1:1의 균일 복합물인 시험예 9의 순으로 수분유지력의 지표인 경피 손실량이 적은 것으로 나타났으며, 이로서 균일혼합물이 피부보습 효과에서 가장 우수한 상승효과(synergy effect)를 나타내는 것으로 확인되었다.
이러한 결과에 의하여, 네 가지 추출물의 복합물이 1:1:1:1에서 다른 혼합 비율에서 보다 우수한 항균 활성 및 보습 효과를 나타낼 수 있음을 확인하고, 이를 천연 복합 방부제 조성물로 확립하여(표 4) 하기 추가 실험에 사용하였다.
| 원료명(한글명) | 함량(중량%) |
| 소나무잎추출물 | 25 |
| 브로콜리추출물 | 25 |
| 요엽후박나무껍질추출물 | 25 |
| 편백잎추출물 | 25 |
II. 가용화 제품인 스킨에서 방부력 테스트
하기 표 5에서와 같이 가용화 제품인 스킨 화장료 조성물의 방부력을 비교 확인하기 위해, 상기 표 4의 천연방부제 조성물을 실시예 1에 2.0%를 함유하여 시험하였다. 또한 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물 및 편백잎추출물을 넣은 이유는 방부력 향상과 카프릴릴글라이콜의 피부 자극을 완화하기 위해 첨가하였다.
| 원료명(한글명) | 비교예1(중량%) | 실시예1(중량%) |
| 폴리글리세릴-3폴리리시놀리에이트 | 1.5 | 1.5 |
| 향 | 0.03 | 0.03 |
| 글리세린 | 3 | 3 |
| 부틸렌글라이콜 | 2 | 2 |
| 베타인 | 0.5 | 0.5 |
| 시트릭애씨드 | 0.05 | 0.05 |
| 소듐피씨에이 | 0.5 | 0.5 |
| 소듐하이알루로네이트 | 0.05 | 0.05 |
| 셀룰로오스검 | 0.2 | 0.2 |
| 프로판다이올 | 2 | 2 |
| 펜틸렌글라이콜 | 3 | 3 |
| 카프릴릴글라이콜 | 0.2 | 0.2 |
| 천연방부제 | 0 | 2 |
| 정제수 | 86.97 | 84.97 |
1. 실험조건
2. 시험균주
1) Bacteria : Escherichia coli (ATCC 8739)
Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027)
Staphylococcus aureus (ATCC 6538)
2) Fungi : Candida albicans (ATCC 10231)
Aspergillus brasiliensis (ATCC 16404)
3. 시험기준
1) Bacteria : 7일차에 99.9%이상 감소하고, 14, 21, 28일차에 더 이상 증가가 없을 것
2) Fungi : 7일차에 90%이상 감소하고, 14, 21, 28일차에 더 이상 증가가 없을 것
4. 실험결과
상기 실험결과는 도면 1~3에서와 같으며, 각각의 요약은 하기 표 6에 나타내었다.
| 생균수 실험균 |
Aerobic Plate Count ( cfu / g or ml) | |||||||
| 0일 | 3일 | 7일 | 14일 | 21일 | 28일 | 판정 | ||
| 비교예1 (가용화 스킨) |
Escherichia coli | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | 불합격 |
| Pseudomonas aeruginosa | 6.5ⅹ106 | 3.3ⅹ103 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Staphylococcus aureus | 9.5ⅹ106 | 7.5ⅹ103 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Candida albicans | 2.5ⅹ105 | 8.3ⅹ104 | 7.7ⅹ102 | 4.3ⅹ10 | <10 | <10 | ||
| Aspergillus brasiliensis | 7.0ⅹ107 | 1.9ⅹ104 | 1.7ⅹ104 | 1.7ⅹ102 | <10 | <10 | ||
| 실시예1 (가용화 스킨) |
Escherichia coli | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | 합격 |
| Pseudomonas aeruginosa | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Staphylococcus aureus | 9.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Candida albicans | 2.5ⅹ105 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Aspergillus brasiliensis | 7.0ⅹ107 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| * TNTC(Too many Number To Count), NI(No Increase) | ||||||||
실험결과 도면 1~3에서와 같이 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물, 편백잎 추출물로 구성된 천연방부제를 함유한 실시예 1에서 실험균들이 급속하게 감속하였으며 더 이상의 증식이 발생하지 않았다. 즉 제품에서 매우 우수한 방부력을 확인하였다.
III. 유화 제품인 로션에서 방부력 테스트
하기 표 7과 같이 유화 제품인 로션 화장료 조성물의 방부력을 비교 확인하기 위해, 상기 표 4의 천연방부제 조성물을 실시예 2에 2.0%를 함유하여 시험하였다. 또한 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물, 편백잎추출물을 넣은 이유는 방부력 향상과 카프릴릴글라이콜의 피부 자극을 완화하기 위해 첨가하였다.
| 원료명(한글명) | 비교예2(중량%) | 실시예2(중량%) |
| 세테아릴알코올 | 0.5 | 0.5 |
| 하이드로제네이티드코코넛오일 | 1 | 1 |
| 시어버터 | 0.5 | 0.5 |
| 스쿠알란 | 2 | 2 |
| 세틸에틸헥사노에이트 | 3 | 3 |
| 카프릴릭/카프릭트라이글리세라이드 | 2 | 2 |
| 메도우폼씨오일 | 3 | 3 |
| 글리세릴스테아레이트 | 0.5 | 0.5 |
| 폴리글리세릴-3폴리리시놀리에이트 | 3 | 3 |
| 폴리글리세릴-4카프레이트 | 0.5 | 0.5 |
| 부틸렌글라이콜 | 3 | 3 |
| 글리세린 | 2 | 2 |
| 소듐피씨에이 | 1 | 1 |
| 소듐하이알루로네이트 | 0.1 | 0.1 |
| 트로메타민 | 0.2 | 0.2 |
| 카보머 | 0.2 | 0.2 |
| 향 | 0.2 | 0.2 |
| 프로판다이올 | 2 | 2 |
| 펜틸렌글라이콜 | 3 | 3 |
| 카프릴릴글라이콜 | 0.2 | 0.2 |
| 천연방부제 | 0 | 2 |
| 정제수 | 72.1 | 70.1 |
1. 실험조건
2. 시험균주
1) Bacteria: Escherichia coli (ATCC 8739)
Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027)
Staphylococcus aureus (ATCC 6538)
2) Fungi: Candida albicans (ATCC 10231)
Aspergillus brasiliensis (ATCC 16404)
3. 시험기준
1) Bacteria: 7일차에 99.9%이상 감소하고, 14, 21, 28일차에 더 이상 증가가 없을 것
2) Fungi: 7일차에 90%이상 감소하고, 14, 21, 28일차에 더 이상 증가가 없을 것
4. 실험결과
상기 실험결과는 도면 4~6에서와 같으며, 각각의 요약은 하기 표 8에 나타내었다.
| 생균수 실험균 |
Aerobic Plate Count ( cfu / g or ml) | |||||||
| 0일 | 3일 | 7일 | 14일 | 21일 | 28일 | 판정 | ||
| 비교예2 (유화 로션) |
Escherichia coli | 6.5ⅹ106 | 9.4ⅹ105 | 6.6ⅹ105 | 6.6ⅹ104 | <10 | <10 | 불합격 |
| Pseudomonas aeruginosa | 6.5ⅹ106 | 4.7ⅹ104 | 4.3ⅹ102 | 7.2ⅹ10 | <10 | <10 | ||
| Staphylococcus aureus | 9.5ⅹ106 | 8.5ⅹ104 | 2.3ⅹ102 | <10 | <10 | <10 | ||
| Candida albicans | 2.5ⅹ105 | 2.3ⅹ103 | 1.3ⅹ102 | 1.5ⅹ10 | <10 | <10 | ||
| Aspergillus brasiliensis | 7.0ⅹ107 | 3.4ⅹ104 | 2.4ⅹ104 | 8.5ⅹ102 | <10 | <10 | ||
| 실시예2 (유화 로션) |
Escherichia coli | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | 합격 |
| Pseudomonas aeruginosa | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Staphylococcus aureus | 9.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Candida albicans | 2.5ⅹ105 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Aspergillus brasiliensis | 7.0ⅹ107 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| * TNTC(Too many Number To Count), NI(No Increase) | ||||||||
실험결과 도면 4~6에서와 같이 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물, 편백잎 추출물로 구성된 천연방부제를 함유한 실시예 2에서 실험균들이 급속하게 감속하였으며 더 이상의 증식이 발생하지 않았다. 즉 제품에서 매우 우수한 방부력을 확인하였다.
IV. 가용화 제품인 앰플, 에센스, 하이드로 겔, 마스크 팩의 방부력 테스트
하기 표 9와 같이 가용화 제품인 앰플, 에센스, 하이드로 겔, 마스크 팩 화장료 조성물의 방부력을 비교 확인하기 위해, 상기 표 4의 천연방부제 조성물을 실시예 3~6에 각각 2.0%를 함유하여 시험하였다. 또한 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물, 편백잎추출물을 넣은 이유는 방부력 향상과 카프릴릴글라이콜의 피부자극을 완화하기 위해 첨가하였다.
| 원료명(한글명) |
실시예3
(앰플) |
실시예4
(에센스) |
실시예5
(하이드로 겔) |
실시예6
(마스크팩) |
| 폴리글리세릴-3폴리리시놀리에이트 | 1.5 | 1.5 | 1.5 | 1.5 |
| 향 | 0.01 | 0.05 | 0.02 | 0.02 |
| 글리세린 | 10 | 3 | 15 | 3 |
| 캐롭검 | 0 | 0 | 2 | 0 |
| 카라기난 | 0 | 0 | 2 | 0 |
| 포타슘하이드록사이드 | 0 | 0 | 0.1 | 0 |
| 부틸렌글라이콜 | 5 | 3 | 2 | 2 |
| 베타인 | 3 | 2 | 0.5 | 0.5 |
| 시트릭애씨드 | 0.05 | 0 | 0 | 0.05 |
| 소듐피씨에이 | 1 | 0.5 | 0.1 | 0.1 |
| 소듐하이알루로네이트 | 0.5 | 0.25 | 0.1 | 0.05 |
| 셀룰로오스검 | 0.5 | 0.5 | 0.1 | 0.1 |
| 프로판다이올 | 2 | 2 | 2 | 2 |
| 펜틸렌글라이콜 | 3 | 3 | 3 | 3 |
| 카프릴릴글라이콜 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
| 천연방부제 | 2 | 2 | 2 | 2 |
| 정제수 | 71.24 | 82 | 69.38 | 85.48 |
1. 실험조건
2. 시험균주
1) Bacteria: Escherichia coli (ATCC 8739)
Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027)
Staphylococcus aureus (ATCC 6538)
2) Fungi: Candida albicans (ATCC 10231)
Aspergillus brasiliensis (ATCC 16404)
3. 시험기준
1) Bacteria: 7일차에 99.9%이상 감소하고, 14, 21, 28일차에 더 이상 증가가 없을 것
2) Fungi: 7일차에 90%이상 감소하고, 14, 21, 28일차에 더 이상 증가가 없을 것
4. 실험결과
상기 실험결과는 도면 7~9에서와 같으며, 각 그룹별 요약은 하기 표 10에 나타내었다
| 생균수 실험균 |
Aerobic Plate Count ( cfu / g or ml) | |||||||
| 0일 | 3일 | 7일 | 14일 | 21일 | 28일 | 판정 | ||
| 실시예3 (앰플) |
Escherichia coli | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | 합격 |
| Pseudomonas aeruginosa | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Staphylococcus aureus | 9.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Candida albicans | 2.5ⅹ105 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Aspergillus brasiliensis | 7.0ⅹ107 | 9.0ⅹ102 | 5.0ⅹ10 | <10 | <10 | <10 | ||
| 실시예4 (에센스) |
Escherichia coli | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | 합격 |
| Pseudomonas aeruginosa | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Staphylococcus aureus | 9.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Candida albicans | 2.5ⅹ105 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Aspergillus brasiliensis | 7.0ⅹ107 | 2.0ⅹ10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| 실시예5 (하이드로겔) |
Escherichia coli | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | 합격 |
| Pseudomonas aeruginosa | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Staphylococcus aureus | 9.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Candida albicans | 2.5ⅹ105 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Aspergillus brasiliensis | 7.0ⅹ107 | 3.0ⅹ103 | 6.0ⅹ10 | <10 | <10 | <10 | ||
| 실시예6 (마스크팩) |
Escherichia coli | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | 합격 |
| Pseudomonas aeruginosa | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Staphylococcus aureus | 9.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Candida albicans | 2.5ⅹ105 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Aspergillus brasiliensis | 7.0ⅹ107 | 3.7ⅹ103 | 1.1ⅹ102 | 2.0ⅹ10 | <10 | <10 | ||
| * TNTC(Too many Number To Count), NI(No Increase) | ||||||||
실험결과 도면 7~9에서와 같이 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물, 편백잎 추출물로 구성된 천연방부제를 함유한 실시예 3~6에서 실험균들이 급속하게 감속하였으며 더 이상의 증식이 발생하지 않았다. 즉 제품에서 매우 우수한 방부력을 확인하였다.
V. 유화 제품인 세럼, 크림, 아이크림, 클렌징 로션의 방부력 테스트
하기 표 11과 같이 유화 제품인 유화 세럼, 크림, 아이크림, 클렌징 로션 화장료 조성물의 방부력을 비교 확인하기 위해, 상기 표 4의 천연방부제 조성물을 실시예 7~10에 각각 2.0%를 함유하여 시험하였다. 또한 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물, 편백잎추출물을 넣은 이유는 방부력 향상과 카프릴릴글라이콜의 피부자극을 완화하기 위해 첨가하였다.
| 원료명(한글명) |
실시예7
(세럼) |
실시예8
(크림) |
실시예9
(아이크림) |
실시예10
(클렌징 로션) |
| 세테아릴알코올 | 0.5 | 1.5 | 1 | 2 |
| 하이드로제네이티드코코넛오일 | 1 | 1.5 | 1 | 0.5 |
| 시어버터 | 0.5 | 1 | 1 | 0 |
| 스쿠알란 | 3 | 2 | 3 | 0 |
| 세틸에틸헥사노에이트 | 1 | 4 | 1 | 25 |
| 카프릴릭/카프릭트라이글리세라이드 | 1 | 4 | 4 | 20 |
| 메도우폼씨오일 | 3 | 2 | 3 | 0 |
| 글리세릴스테아레이트 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0.5 |
| 폴리글리세릴-3폴리리시놀리에이트 | 2.5 | 3 | 3 | 4 |
| 폴리글리세릴-4카프레이트 | 0.5 | 1 | 1 | 1 |
| 부틸렌글라이콜 | 3 | 5 | 2 | 5 |
| 글리세린 | 3 | 5 | 8 | 0 |
| 베타인 | 0 | 1 | 0.5 | 0 |
| 소듐피씨에이 | 1 | 0.5 | 0.5 | 0 |
| 소듐하이알루로네이트 | 0.3 | 0.2 | 0.2 | 0 |
| 트로메타민 | 0.1 | 0.3 | 0.3 | 0.5 |
| 카보머 | 0.1 | 0.3 | 0.3 | 0.5 |
| 하이드롤라이즈드콩전분 | 0 | 0 | 0.5 | 0 |
| 하이드롤라이즈드우유단백질 | 0 | 0 | 0.5 | 0 |
| 하이드롤라이즈드엘라스틴 | 0.5 | 0.5 | 0.5 | 0 |
| 향 | 0.1 | 0.25 | 0.1 | 0.2 |
| 프로판다이올 | 2 | 2 | 2 | 2 |
| 펜틸렌글라이콜 | 3 | 3 | 3 | 3 |
| 카프릴릴글라이콜 | 0.2 | 0.2 | 0.2 | 0.2 |
| 천연방부제 | 2 | 2 | 2 | 2 |
| 정제수 | 71.2 | 59.25 | 60.9 | 33.6 |
1. 실험조건
2. 시험균주
1) Bacteria: Escherichia coli (ATCC 8739)
Pseudomonas aeruginosa (ATCC 9027)
Staphylococcus aureus (ATCC 6538)
2) Fungi: Candida albicans (ATCC 10231)
Aspergillus brasiliensis (ATCC 16404)
3. 시험기준
1) Bacteria: 7일차에 99.9%이상 감소하고, 14, 21, 28일차에 더 이상 증가가 없을 것
2) Fungi: 7일차에 90%이상 감소하고, 14, 21, 28일차에 더 이상 증가가 없을 것
4. 실험결과
상기 실험결과는 도면 10~12에서와 같으며, 각 그룹별 요약은 하기 표 12에 나타내었다
| 생균수 실험균 |
Aerobic Plate Count ( cfu / g or ml) | |||||||
| 0일 | 3일 | 7일 | 14일 | 21일 | 28일 | 판정 | ||
| 실시예7 (세럼) |
Escherichia coli | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | 합격 |
| Pseudomonas aeruginosa | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Staphylococcus aureus | 9.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Candida albicans | 2.5ⅹ105 | 4.0ⅹ10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Aspergillus brasiliensis | 7.0ⅹ107 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| 실시예8 (크림) |
Escherichia coli | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | 합격 |
| Pseudomonas aeruginosa | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Staphylococcus aureus | 9.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Candida albicans | 2.5ⅹ105 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Aspergillus brasiliensis | 7.0ⅹ107 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| 실시예9 (아이크림) |
Escherichia coli | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | 합격 |
| Pseudomonas aeruginosa | 6.5ⅹ106 | 2.1ⅹ102 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Staphylococcus aureus | 9.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Candida albicans | 2.5ⅹ105 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Aspergillus brasiliensis | 7.0ⅹ107 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| 실시예10 (클렌징로션) |
Escherichia coli | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | 합격 |
| Pseudomonas aeruginosa | 6.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Staphylococcus aureus | 9.5ⅹ106 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Candida albicans | 2.5ⅹ105 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| Aspergillus brasiliensis | 7.0ⅹ107 | <10 | <10 | <10 | <10 | <10 | ||
| * TNTC(Too many Number To Count), NI(No Increase) | ||||||||
실험결과 도면 10~12에서와 같이 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물, 편백잎추출물로 구성된 천연방부제를 함유한 실시예 7~10에서 실험균들이 급속하게 감속하였으며 더 이상의 증식이 발생하지 않았다. 즉 제품에서 매우 우수한 방부력을 확인하였다.
VI. 피부 자극 평가(인체 첩포 시험)
본 발명에 따른 천연방부제의 안전성과 관련한 피부 자극성을 알아보기 위하여 인체 첩포 시험을 하였다. 피부가 건강한 여성 30명(평균연령 29.5세)의 상박 부위에 상기 표 4의 천연방부제, 비교예 1, 실시예 1의 가용화 제품인 스킨과 비교예 2, 실시예 2의 유화제품인 로션과 및 대조군으로 프로필렌글리콜, 정제수를 각각 일정량(약 40 ㎍)씩 24시간 동안 첩포하였다. 이어서, 이를 제거하고 피부자극을 측정한 후, 24시간, 48시간 경과 후에 다시 피부 반응을 조사하였다. 피부 자극의 판정 기준 및 자극도 계산식은 다음과 같으며, 인체 첩포 시험 결과를 하기 표 13에 나타내었다.
※ 판정기준
- : 홍반이나 특이현상 없음
+- : 주위보다 약간 붉어짐
+ : 주위보다 현저히 붉어짐
++ : 주위보다 심하게 붉어지고 부풀음
| 시료 | 피검자수 | 조사시기 | 판정결과 | 자극도(%) | |||
| ++ | + | + - | - | ||||
| 천연 방부제 |
30명 | 제거직후 | 0명 | 0명 | 0명 | 0명 | 0.00 |
| 30명 | 24시간후 | 0명 | 0명 | 0명 | 0명 | 0.00 | |
| 30명 | 48시간후 | 0명 | 0명 | 0명 | 0명 | 0.00 | |
| 비교예 1 | 30명 | 제거직후 | 0명 | 1명 | 2명 | 27명 | 12.90 |
| 30명 | 24시간후 | 0명 | 1명 | 1명 | 28명 | 9.68 | |
| 30명 | 48시간후 | 0명 | 1명 | 1명 | 28명 | 9.68 | |
| 실시예 1 | 30명 | 제거직후 | 0명 | 0명 | 1명 | 29명 | 3.33 |
| 30명 | 24시간후 | 0명 | 0명 | 0명 | 30명 | 0.00 | |
| 30명 | 48시간후 | 0명 | 0명 | 0명 | 30명 | 0.00 | |
| 비교예 2 | 30명 | 제거직후 | 0명 | 1명 | 1명 | 28명 | 9.68 |
| 30명 | 24시간후 | 0명 | 1명 | 1명 | 28명 | 9.68 | |
| 30명 | 48시간후 | 0명 | 0명 | 2명 | 29명 | 6.67 | |
| 실시예 2 | 30명 | 제거직후 | 0명 | 0명 | 1명 | 30명 | 3.33 |
| 30명 | 24시간후 | 0명 | 0명 | 0명 | 30명 | 0.00 | |
| 30명 | 48시간후 | 0명 | 0명 | 0명 | 30명 | 0.00 | |
| 프로필렌 글라이콜 |
30명 | 제거직후 | 0명 | 2명 | 5명 | 23명 | 28.13 |
| 30명 | 24시간후 | 0명 | 2명 | 5명 | 23명 | 28.13 | |
| 30명 | 48시간후 | 0명 | 2명 | 5명 | 23명 | 28.13 | |
| 정제수 | 30명 | 제거직후 | 0명 | 0명 | 0명 | 29명 | 0.00 |
| 30명 | 24시간후 | 0명 | 0명 | 0명 | 30명 | 0.00 | |
| 30명 | 48시간후 | 0명 | 0명 | 0명 | 30명 | 0.00 | |
상기 표 13에 따르면, 본 발명에 따른 천연 복합 방부제는 피부자극이 거의 없는 것으로 판명되었다.
VII. 피부 보습력(각질층의 수분 손실량 측정)
상기 표 4의 천연방부제, 가용화 제품 스킨인 비교예 1, 실시예 1 및 유화제품 로션인 비교예 2, 실시예 2를 피부에 도포한 후 각질층의 수분 손실량을 시간의 변화에 따라 측정하였다.
실험 방법은 다음과 같았다.
22~24℃, 상대습도 50%, 공기의 흐름이 없는 실내에서 피부가 건강한 여성 30명(평균연령 29.5세)을 대상으로 5명씩 4그룹으로 나누어, 비교예 1, 실시예 1과 비교예 2, 실시예 2를 각각 얼굴 전체에 도포하게 하고, 도포 0.1시간, 0.5시간, 1시간, 3시간후 Tewameter ®TM 300 (Courage + Khazaka electronic GmbH. Germany)를 이용하여 경표피 수분 손실량(TEWL, Transepidermal Water Loss)을 볼 부위에서 측정하였다. 실험 결과는 하기 표 14에 나타내었다(경표피 수분 손실량(TEWL, Transepidermal Water Loss)(단위: g/㎡, hr)).
| 시료 | 도포 0.1시간 경과후 TEWL |
도포 0.5시간 경과후 TEWL |
도포 1시간 경과후 TEWL |
도포 3시간 경과후 TEWL |
| 천연방부제 | 20 ±1.0 | 22 ±1.0 | 18 ±1.0 | 16 ±1.0 |
| 비교예 1 | 20 ±1.0 | 26 ±1.0 | 24 ±1.0 | 22 ±1.0 |
| 실시예 1 | 20 ±1.0 | 22 ±1.0 | 16 ±1.0 | 14 ±1.0 |
| 비교예 2 | 10 ±1.0 | 18 ±1.0 | 16 ±1.0 | 14 ±1.0 |
| 실시예 2 | 10 ±1.0 | 12 ±1.0 | 10 ±1.0 | 8 ±1.0 |
상기 표 14에서, 실시예 1과 실시예 2가 비교예 1과 비교예 2보다 각질층의 수분유지력의 지표인 경표피 손실량이 적은 것으로 나타났다. 또한 표1의 천연방부제 역시 실시예 1과 유사한 효과를 나타냈다. 따라서, 본 발명에 따른 천연방부제는 물론이고 이를 포함하는 화장료 조성물인 스킨과 로션에서 피부 보습력 효과가 있음을 확인하였다.
Claims (10)
- 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물 및 편백잎추출물의 조합을 유효성분으로 포함하는, 피부 보습용 천연방부제 화장료 조성물로서,
상기 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물 및 편백잎추출물은 1±0.1 : 1±0.1 : 1±0.1 : 1±0.1의 중량비로 포함되는 것을 특징으로 하는 조성물.
- 제1항에 있어서, 상기 소나무잎추출물, 브로콜리추출물, 요엽후박나무껍질추출물 및 편백잎추출물의 조합은 각각의 단일 물질에 대비하여 방부 효과 및 피부 보습 효과에 있어서 상승효과를 갖는 것을 특징으로 하고, 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.1 내지 25중량%로 포함되는 것을 특징으로 하는 피부 보습용 천연방부제 화장료 조성물.
- 제2항에 있어서, 상기 화장료 조성물은 스킨, 로션, 앰플, 에센스, 하이드로 겔, 마스크 팩, 세럼, 크림, 아이크림, 클렌징 로션, 자외선 차단제, 폼 클렌징, 바디워시, 샴푸 및 린스로 이루어진 군으로부터 선택되는 하나의 형태로 제형화되는 것을 특징으로 하는 피부 보습용 천연방부제 화장료 조성물.
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