KR102613224B1 - Detoxification method of biological agents - Google Patents
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Abstract
본 발명은 생물학 작용제의 제독 방법에 관한 것으로, 고농도 그람 음성균 및/또는 바이러스에 대하여, a) 과산화수소, b) 이염화아이소사이아누르산나트륨(NaDCC), 또는 c) 과붕산나트륨 및 테트라아세틸에틸렌디아민(TAED)을 포함한 조성물 중 선택된 하나를 포함하는 제독제를 처리하여 짧은 시간 내에 제독하는 방법을 제공한다. The present invention relates to a method for decontamination of biological agents, against high concentrations of Gram-negative bacteria and/or viruses, using a) hydrogen peroxide, b) sodium dichloroisocyanurate (NaDCC), or c) sodium perborate and tetraacetylethylene. A method of decontamination within a short period of time is provided by treating a decontamination agent containing one selected from compositions containing diamine (TAED).
Description
본 발명은 생물학 작용제의 제독 방법에 관한 것으로, 보다 상세하게는 고농도 그람 음성균 및/또는 바이러스에 대하여, a) 과산화수소; b) 이염화아이소사이아누르산나트륨(sodium dichloroisocyanurate, NaDCC); 또는 c) 과붕산나트륨 및 테트라아세틸에틸렌디아민(tetraacetylethylenediamine, TAED)을 포함한 조성물 중 선택된 하나를 포함하는 제독제를 처리하여 제독하는 방법에 관한 것이다. The present invention relates to a method for decontamination of biological agents, and more specifically, to high concentrations of Gram-negative bacteria and/or viruses, comprising: a) hydrogen peroxide; b) sodium dichloroisocyanurate (NaDCC); or c) a method of detoxification by treating the detoxifier containing one selected from the group consisting of sodium perborate and tetraacetylethylenediamine (TAED).
생물학 무기란 생물학 작용제를 무기화하여 각종 전장에서 의도적으로 사용하기 위한 물질이다. 생물학 작용제에는 세균, 독소, 바이러스 등이 포함되며, 세균은 그람 양성균(또는 그람 양성 세균, Gram-positive bacteria)과 그람 음성균(또는 그람 음성 세균, Gram-negative bacteria)으로 분류될 수 있다. 표 1에서 볼 수 있듯이, 생물학 작용제로 사용되는 주요 세균들은 탄저균을 제외하고는 대부분 그람 음성균에 속한다. Biological weapons are substances that weaponize biological agents for intentional use in various battlefields. Biological agents include bacteria, toxins, viruses, etc., and bacteria can be classified into Gram-positive bacteria (or Gram-positive bacteria) and Gram-negative bacteria (or Gram-negative bacteria). As can be seen in Table 1, most of the major bacteria used as biological agents belong to Gram-negative bacteria, except for anthrax.
또한, 최근 코로나 사태를 비추어 볼 때, 다양한 바이러스가 생물학 무기로 이용될 가능성이 높다고 판단된다. Additionally, in light of the recent coronavirus outbreak, it is believed that there is a high possibility that various viruses will be used as biological weapons.
생물학전이 발생하였을 경우 대량의 생물학작용제 용액이 이용될 수 있으며, 이를 효과적으로 무력화하는 제독 과정이 필수적이다. 하지만 종래 고농도 작용제 제독에 관한 연구는 그람 양성 세균 포자(spore)에 주로 국한되어 진행되었으며, 이용되는 제독제가 인체 또는 환경에 유해하고 제독에 이용된 세균의 농도나 용량이 제한적이었다.In the event of biological warfare, a large amount of biological agent solution may be used, and a decontamination process to effectively neutralize it is essential. However, conventional research on high-concentration agent decontamination was mainly limited to Gram-positive bacterial spores, the decontaminants used were harmful to the human body or the environment, and the concentration or dose of bacteria used for decontamination was limited.
기존의 제독제로서 알킬화 반응 기반인 포름알데히드와 브로민화메틸은 발암성 및 오존층 파괴 물질로 인체에 유해하다는 문제점이 있고, 효율이 낮거나 너무 많은 시간이 소요되는 단점 또한 존재한다. 4% 포름알데히드 수용액은 2시간 동안 108 cfu/mL B. anthracis를 절반 정도 감소시킬 수 있었다 (Rubbo et al., 1967). 브로민화 메틸은 기체로써 3.4-3.8 g/L 농도로 B. anthracis를 24시간 노출 시킨 결과 완전 사멸시킬 수 있었다(Kolb et al., 1950). As existing decontamination agents, formaldehyde and methyl bromide, which are based on alkylation reactions, have the problem of being harmful to the human body as carcinogenic and ozone layer depleting substances, and also have the disadvantage of being low in efficiency or taking too much time. A 4% formaldehyde solution was able to reduce B. anthracis by half at 10 8 cfu/mL for 2 hours (Rubbo et al., 1967). Methyl bromide was able to completely kill B. anthracis when exposed to it as a gas at a concentration of 3.4-3.8 g/L for 24 hours (Kolb et al., 1950).
산화 반응 제독제 중 액상 제독제인 오존의 경우 1∼3 ppm 농도에서 효과를 발휘했으며, 105 cfu/mL농도의 B. cerus는 5분만에 104 cfu/mL로 감소, 108 cfu/mL의 B. subtilis는 1.5시간 만에 사멸에 가까운 감소율을 보였다(Foegeding et al., 1988, Ighizaki et al., 1986). 또한 과초산의 경우 온도에 따라 크게 영향을 받았는데, 저농도의 과초산(0.08%)을 40℃에서 20분 처리했을 때 고농도의 미생물(109 cfu/mL)임에도 불구하고 사멸에 가까운 효과를 나타내었으나, 같은 농도의 과초산을 20℃에서는 45분 이상 처리하여도 0.01% 가량의 미생물이 생존해 있었다(Baldry et al., 1983, Sagripanti et al., 1996). Among oxidation reaction decontamination agents, ozone, a liquid decontamination agent, was effective at a concentration of 1 to 3 ppm, and B. cerus at a concentration of 10 5 cfu/mL decreased to 10 4 cfu/mL in 5 minutes, and decreased to 10 8 cfu/mL. B. subtilis showed a decline rate close to death in 1.5 hours (Foegeding et al., 1988, Ighizaki et al., 1986). Also, in the case of peracetic acid, it was greatly affected by temperature. When treated with low concentration peracetic acid (0.08%) at 40°C for 20 minutes, it showed an effect close to killing microorganisms even though it was a high concentration (10 9 cfu/mL). , even when treated with the same concentration of peracetic acid at 20°C for more than 45 minutes, about 0.01% of microorganisms survived (Baldry et al., 1983, Sagripanti et al., 1996).
이러한 종래의 제독 방법들은 주로 저농도 소량(1 mL이하) 제독 또는 표면 제독에 적용되는 한계가 있었다.These conventional decontamination methods had limitations in that they were mainly applied to low-concentration, small-volume (less than 1 mL) decontamination or surface decontamination.
한편, 최근 코로나 바이러스로 인해 다양한 연구가 이루어지고 있으나, 마스크와 손 세정제, 공기 소독, 신체 소독 등에 대한 저농도 소량의 표면 제독에 그치고 있다. Meanwhile, various studies have been conducted recently due to the coronavirus, but they are limited to low-concentration and small amounts of surface decontamination for masks, hand sanitizers, air disinfection, and body disinfection.
이에, 취급이 용이하고 친환경적인 제독제를 이용하여 고농도 대량의 생물학 작용제 또는 생물학 무기를 효과적으로 제독할 수 있는 생물학 작용제의 제독 방법 개발이 요구되고 있다.Accordingly, there is a need to develop a decontamination method for biological agents that can effectively decontaminate high concentrations and large quantities of biological agents or biological weapons using an easy-to-handle and environmentally friendly decontamination agent.
본 발명의 목적은, 고농도 대량의 생물학 작용제(그람 음성균 및/또는 바이러스)를 짧은 시간 내에 제독하는 방법을 제공하는데 있다.The purpose of the present invention is to provide a method for decontamination of large quantities of biological agents (gram-negative bacteria and/or viruses) at high concentrations in a short period of time.
본 발명의 다른 목적은, 인체와 환경에 무해한 생물학 작용제(그람 음성균 및/또는 바이러스)의 제독 방법을 제공하는데 있다.Another object of the present invention is to provide a method for decontamination of biological agents (gram-negative bacteria and/or viruses) that are harmless to the human body and the environment.
본 발명이 해결하고자 하는 과제는 이상에서 언급한 과제(들)로 제한되지 않으며, 언급되지 않은 또 다른 과제(들)는 이하의 기재로부터 당업자에게 명확하게 이해될 수 있을 것이다.The problem to be solved by the present invention is not limited to the problem(s) mentioned above, and other problem(s) not mentioned will be clearly understood by those skilled in the art from the following description.
상기 과제를 해결하기 위해, 본 발명의 일 측면에 따르면, 본 발명은 제독제로서, 생물학 작용제에 대하여, a) 과산화수소; b) 이염화아이소사이아누르산나트륨(sodium dichloroisocyanurate, NaDCC); 또는 c) 과붕산나트륨 및 테트라아세틸에틸렌디아민(tetraacetylethylenediamine, TAED)을 포함한 조성물 중 선택된 하나를 포함하는 제독제를 처리하는, 생물학 작용제의 제독 방법을 제공한다.In order to solve the above problem, according to one aspect of the present invention, the present invention is a detoxifying agent, for biological agents, a) hydrogen peroxide; b) sodium dichloroisocyanurate (NaDCC); or c) a composition comprising sodium perborate and tetraacetylethylenediamine (TAED).
상기 생물학 작용제는 그람 음성균, 바이러스, 또는 그람 음성균 및 바이러스를 함유한 용액일 수 있다.The biological agent may be a gram-negative bacteria, a virus, or a solution containing gram-negative bacteria and a virus.
상기 그람 음성균은 1Х109 cfu/mL이하인 것 일 수 있다.The gram-negative bacteria may be 1Х10 9 cfu/mL or less.
상기 바이러스는 3Х109 pfu/mL이하인 것 일 수 있다.The virus may be 3Х10 9 pfu/mL or less.
본 발명의 다른 일 측면에 따르면, 본 발명은 제독제를 제조하는 1단계; 제독제와 생물학 작용제를 반응시키는 2단계; 및 반응물을 중화시키는 3단계를 포함하는, 생물학 작용제의 제독 방법를 제공한다.According to another aspect of the present invention, the present invention includes a first step of manufacturing a decontamination agent; Second stage reacting the decontamination agent with the biological agent; and neutralizing the reactant.
상기 2단계의 반응은 0 내지 250 rpm, 15 내지 45℃에서 5 내지 20 분간 수행되는 것 일 수 있다.The reaction in step 2 may be performed at 0 to 250 rpm and 15 to 45°C for 5 to 20 minutes.
상기 3단계의 중화는 티오황산나트륨(sodium thiosulfate)을 첨가하는 것 일 수 있다.Neutralization in the third step may include adding sodium thiosulfate.
본 발명의 또 다른 일 측면에 따르면, 본 발명은 과산화수소를 포함한 제독제를 생물학 작용제에 처리하고, 상기 제독제의 농도는 상기 생물학 작용제에 대하여 1%(v/v) 이상인, 생물학 작용제의 제독 방법을 제공한다.According to another aspect of the present invention, the present invention is a decontamination method of a biological agent, wherein a decontamination agent containing hydrogen peroxide is treated with a biological agent, and the concentration of the decontamination agent is 1% (v/v) or more with respect to the biological agent. provides.
상기 제독제의 농도는 상기 생물학 작용제에 대하여 2%(v/v) 이상이고, 20분 이내에 완전 제독되는 것 일 수 있다.The concentration of the decontamination agent is 2% (v/v) or more relative to the biological agent, and complete detoxification may be achieved within 20 minutes.
상기 생물학 작용제의 제독 방법은 15 내지 45℃에서 교반 없이 수행되는 것 일 수 있다.The decontamination method of the biological agent may be performed without stirring at 15 to 45°C.
본 발명의 또 다른 일 측면에 따르면, 본 발명은 이염화아이소사이아누르산나트륨(NaDCC)을 포함한 제독제를 생물학 작용제에 처리하고, 상기 제독제의 농도는 상기 생물학 작용제에 대하여 0.03%(w/v) 이상인, 생물학 작용제의 제독 방법을 제공한다.According to another aspect of the present invention, the present invention treats a biological agent with a detoxifying agent containing sodium dichloroisocyanurate (NaDCC), and the concentration of the detoxifying agent is 0.03% (w) relative to the biological agent. /v) The above provides a method for decontamination of biological agents.
상기 제독제의 농도는 상기 생물학 작용제에 대하여 0.05%(w/v) 이상이고, 15분 이내에 완전 제독되는 것 일 수 있다.The concentration of the decontamination agent is 0.05% (w/v) or more relative to the biological agent, and may be completely decontaminated within 15 minutes.
상기 생물학 작용제의 제독 방법은 15 내지 45℃에서 교반을 수반하여 수행되는 것 일 수 있다.The decontamination method of the biological agent may be carried out with stirring at 15 to 45°C.
본 발명의 또 다른 일 측면에 따르면, 본 발명은 과붕산나트륨 및 테트라아세틸에틸렌디아민(TAED)을 포함한 조성물을 포함한 제독제를 생물학 작용제에 처리하고, 상기 제독제의 농도는 상기 생물학 작용제에 대하여 0.05%(w/v) 이상인, 생물학 작용제의 제독 방법을 제공한다.According to another aspect of the present invention, a detoxifying agent comprising a composition comprising sodium perborate and tetraacetylethylenediamine (TAED) is treated with a biological agent, and the concentration of the detoxifying agent is 0.05% with respect to the biological agent. % (w/v) or more of a biological agent.
상기 제독제의 농도는 상기 생물학 작용제에 대하여 0.3%(w/v) 이상이고, 15분 이내에 완전 제독되는 것 일 수 있다.The concentration of the decontamination agent is 0.3% (w/v) or more relative to the biological agent, and may be completely decontaminated within 15 minutes.
상기 생물학 작용제의 제독 방법은 15 내지 45℃에서 교반 없이 수행되는 것 일 수 있다.The decontamination method of the biological agent may be performed without stirring at 15 to 45°C.
상기 생물학 작용제는 그람 음성균 및 바이러스를 함유한 용액일 수 있다.The biological agent may be a solution containing gram-negative bacteria and viruses.
본 발명에 따르면, 고농도 대량의 그람 음성균(1Х109 cfu/mL 이하) 및/또는 바이러스(3Х109 pfu/mL 이하)에 제독제를 처리하여 20분 이내에 완전 제독할 수 있는 효과가 있다. According to the present invention, a large amount of gram-negative bacteria ( 1Х109 cfu/mL or less) and/or viruses ( 3Х109 pfu/mL or less) are treated with a decontamination agent at a high concentration, resulting in complete decontamination within 20 minutes.
또한, 본 발명에 따르면, 인체와 환경에 무해한 그람 음성균 및/또는 바이러스의 제독 방법을 제공할 수 있다.Additionally, according to the present invention, a method for decontamination of Gram-negative bacteria and/or viruses that are harmless to the human body and the environment can be provided.
본 발명의 효과는 상기한 효과로 한정되는 것은 아니며, 본 발명의 상세한 설명 또는 특허청구범위에 기재된 발명의 구성으로부터 추론 가능한 모든 효과를 포함하는 것으로 이해되어야 한다.The effects of the present invention are not limited to the effects described above, and should be understood to include all effects that can be inferred from the configuration of the invention described in the detailed description or claims of the present invention.
도 1는 본 발명의 일 실시예에 따른 바이러스 플라크 에세이를 위해 준비한 배지의 사진이다[좌측에서 우측으로, T4 배지, CaCl2 용액, T4 탑 아가].
도 2는 본 발명의 일 실시예에 따른 바이러스 플라크 에세이에서 숙주(E. coli)를 획선 도말한 사진이다.
도 3은 본 발명의 일 실시예에 따른 제독제 농도별 시험에서, 그람 음성균에 대한 과산화수소 제독액 농도에 따른 결과를 나타낸 그래프이다.
도 4는 본 발명의 일 실시예에 따른 제독제 농도별 시험에서, 바이러스에 대한 과산화수소 제독액 농도에 따른 결과를 나타낸 그래프이다.
도 5는 본 발명의 일 실시예에 따른 제독제 농도별 시험에서, 그람 음성균에 대한 페라세이프 제독액 농도에 따른 결과를 나타낸 그래프이다.
도 6은 본 발명의 일 실시예에 따른 제독제 농도별 시험에서, 바이러스에 대한 페라세이프 제독액 농도에 따른 결과를 나타낸 그래프이다.
도 7은 본 발명의 일 실시예에 따른 제독제 농도별 시험에서, 그람 음성균에 대한 NaDCC 제독액 농도에 따른 결과를 나타낸 그래프이다.
도 8은 본 발명의 일 실시예에 따른 제독제 농도별 시험에서, 바이러스에 대한 NaDCC 제독액 농도에 따른 결과를 나타낸 그래프이다.
도 9는 본 발명의 일 실시예에 따른 제독 반응 시간별 시험에서, 그람 음성균에 대해 과산화수소 제독액 처리시 반응시간에 따른 결과를 나타낸 사진이다[상: 5분, 중: 10분, 하: 15분].
도 10은 본 발명의 일 실시예에 따른 제독 반응 시간별 시험에서, 바이러스에 대해 과산화수소 제독액 처리시 반응시간에 따른 결과를 나타낸 그래프이다.
도 11은 본 발명의 일 실시예에 따른 제독 반응 시간별 시험에서, 그람 음성균에 대해 NaDCC 제독액 처리시 반응시간에 따른 결과를 나타낸 사진이다[상: 5분, 중: 10분, 하: 15분].
도 12는 본 발명의 일 실시예에 따른 제독 반응 시간별 시험에서, 바이러스에 대해 NaDCC 제독액 처리시 반응시간에 따른 결과를 나타낸 그래프이다.
도 13은 본 발명의 일 실시예에 따른 제독 반응 시간별 시험에서, 그람 음성균에 대해 페라세이프 제독액 처리시 반응시간에 따른 결과를 나타낸 사진이다[상: 5분, 중: 10분, 하: 15분].
도 14는 본 발명의 일 실시예에 따른 제독 반응 시간별 시험에서, 바이러스에 대해 페라세이프 제독액 처리시 반응시간에 따른 결과를 나타낸 그래프이다.
도 15는 본 발명의 일 실시예에 따른 제독 반응 온도 및 교반 유무별 시험에서, 그람 음성균에 대해 과산화수소 제독액 처리시 반응 온도 및 교반 유무에 따른 결과를 나타낸 사진이다[상: 25℃, 0rpm, 하: 35℃, 0rpm].
도 16는 본 발명의 일 실시예에 따른 제독 반응 온도 및 교반 유무별 시험에서, 바이러스에 대해 과산화수소 제독액 처리시 반응 온도 및 교반 유무에 따른 결과를 나타낸 사진이다[상: 25℃, 0rpm, 하: 35℃, 0rpm].
도 17은 본 발명의 일 실시예에 따른 제독 반응 온도 및 교반 유무별 시험에서, 그람 음성균에 대해 NaDCC 제독액 처리시 반응 온도 및 교반 유무에 따른 결과를 나타낸 사진이다[상: 25℃, 0rpm, 하: 35℃, 0rpm].
도 18은 본 발명의 일 실시예에 따른 제독 반응 온도 및 교반 유무별 시험에서, 바이러스에 대해 NaDCC 제독액 처리시 반응 온도 및 교반 유무에 따른 결과를 나타낸 사진이다[상: 25℃, 0rpm, 하: 35℃, 0rpm].
도 19은 본 발명의 일 실시예에 따른 제독 반응 온도 및 교반 유무별 시험에서, 그람 음성균에 대해 페라세이프 제독액 처리시 반응 온도 및 교반 유무에 따른 결과를 나타낸 사진이다[상: 25℃, 0rpm, 하: 35℃, 0rpm].
도 20은 본 발명의 일 실시예에 따른 제독 반응 온도 및 교반 유무별 시험에서, 바이러스에 대해 페라세이프 제독액 처리시 반응 온도 및 교반 유무에 따른 결과를 나타낸 사진이다[상: 25℃, 0rpm, 하: 35℃, 0rpm].Figure 1 is a photograph of a medium prepared for a viral plaque assay according to an embodiment of the present invention [from left to right, T4 medium, CaCl 2 solution, T4 top agar].
Figure 2 is a picture showing a stroke line smear of a host (E. coli) in a viral plaque assay according to an embodiment of the present invention.
Figure 3 is a graph showing the results according to the concentration of hydrogen peroxide decontamination solution for Gram-negative bacteria in a test for each concentration of decontamination agent according to an embodiment of the present invention.
Figure 4 is a graph showing the results according to the concentration of hydrogen peroxide decontamination solution against viruses in a test for each concentration of decontamination agent according to an embodiment of the present invention.
Figure 5 is a graph showing the results according to the concentration of PeraSafe decontamination solution for Gram-negative bacteria in a test for each concentration of decontamination agent according to an embodiment of the present invention.
Figure 6 is a graph showing the results according to the concentration of PeraSafe decontamination solution for viruses in a test for each concentration of decontamination agent according to an embodiment of the present invention.
Figure 7 is a graph showing the results according to the concentration of NaDCC decontamination solution for Gram-negative bacteria in a test for each concentration of decontamination agent according to an embodiment of the present invention.
Figure 8 is a graph showing the results according to the concentration of NaDCC decontamination solution for viruses in a test for each concentration of decontamination agent according to an embodiment of the present invention.
Figure 9 is a photograph showing the results according to reaction time when treating gram-negative bacteria with hydrogen peroxide decontamination solution in a decontamination reaction time test according to an embodiment of the present invention [top: 5 minutes, middle: 10 minutes, bottom: 15 minutes. ].
Figure 10 is a graph showing the results according to reaction time when treating viruses with hydrogen peroxide decontamination solution in a decontamination reaction time test according to an embodiment of the present invention.
Figure 11 is a photograph showing the results according to reaction time when treating Gram-negative bacteria with NaDCC decontamination solution in a decontamination reaction time test according to an embodiment of the present invention [top: 5 minutes, middle: 10 minutes, bottom: 15 minutes. ].
Figure 12 is a graph showing the results according to reaction time when treating a virus with NaDCC detoxification solution in a detoxification reaction time test according to an embodiment of the present invention.
Figure 13 is a photograph showing the results according to reaction time when treating gram-negative bacteria with Perasafe decontamination solution in a decontamination reaction time test according to an embodiment of the present invention [top: 5 minutes, middle: 10 minutes, bottom: 15 minute].
Figure 14 is a graph showing the results according to reaction time when treating a virus with Perasafe decontamination solution in a decontamination reaction time test according to an embodiment of the present invention.
Figure 15 is a photograph showing the results according to the reaction temperature and the presence or absence of stirring when treating gram-negative bacteria with hydrogen peroxide decontamination solution in a test for decontamination reaction temperature and presence or absence of stirring according to an embodiment of the present invention [top: 25°C, 0rpm, Lower: 35℃, 0rpm].
Figure 16 is a photograph showing the results according to the reaction temperature and the presence or absence of stirring when treating the virus with hydrogen peroxide decontamination solution in a test for decontamination reaction temperature and presence or absence of stirring according to an embodiment of the present invention [top: 25°C, 0rpm, bottom : 35℃, 0rpm].
Figure 17 is a photograph showing the results according to the reaction temperature and the presence or absence of stirring when treating Gram-negative bacteria with NaDCC decontamination solution in a test for decontamination reaction temperature and presence or absence of stirring according to an embodiment of the present invention [Phase: 25°C, 0rpm, Lower: 35℃, 0rpm].
Figure 18 is a photograph showing the results according to the reaction temperature and the presence or absence of stirring when treating the NaDCC decontamination solution for viruses in a test for decontamination reaction temperature and agitation according to an embodiment of the present invention [top: 25°C, 0 rpm, bottom : 35℃, 0rpm].
Figure 19 is a photograph showing the results according to the reaction temperature and the presence or absence of stirring when treating gram-negative bacteria with Perasafe decontamination solution in a test for decontamination reaction temperature and presence or absence of stirring according to an embodiment of the present invention [top: 25°C, 0rpm , lower: 35℃, 0rpm].
Figure 20 is a photograph showing the results according to the reaction temperature and the presence or absence of stirring when treating the virus with PeraSafe decontamination solution in a test for decontamination reaction temperature and presence or absence of agitation according to an embodiment of the present invention [Phase: 25°C, 0rpm, Lower: 35℃, 0rpm].
이하 첨부된 도면을 참조하면서 본 발명에 따른 바람직한 실시예를 상세히 설명하기로 한다.Hereinafter, preferred embodiments according to the present invention will be described in detail with reference to the attached drawings.
본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것을 달성하는 방법은 첨부된 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다.The advantages and features of the present invention and how to achieve it will become clear by referring to the embodiments described in detail below along with the accompanying drawings.
그러나 본 발명은 이하에 개시되는 실시예들에 의해 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.However, the present invention is not limited to the embodiments disclosed below and will be implemented in various different forms, but the present embodiments only serve to ensure that the disclosure of the present invention is complete and are within the scope of common knowledge in the technical field to which the present invention pertains. It is provided to fully inform those who have the scope of the invention, and the present invention is only defined by the scope of the claims.
또한, 본 발명을 설명함에 있어 관련된 공지 기술 등이 본 발명의 요지를 흐리게 할 수 있다고 판단되는 경우 그에 관한 자세한 설명은 생략하기로 한다.Additionally, in describing the present invention, if it is determined that related known techniques may obscure the gist of the present invention, detailed description thereof will be omitted.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.Hereinafter, the present invention will be described in detail.
본 발명은, 생물학 작용제에 대하여, 제독제로서, a) 과산화수소; b) 이염화아이소사이아누르산나트륨(sodium dichloroisocyanurate, NaDCC); 또는 c) 과붕산나트륨 및 테트라아세틸에틸렌디아민(tetraacetylethylenediamine, TAED)을 포함한 조성물 중 선택된 하나를 포함하는 제독제를 처리하는, 생물학 작용제의 제독 방법을 제공한다.The present invention provides, as a detoxifying agent against biological agents, a) hydrogen peroxide; b) sodium dichloroisocyanurate (NaDCC); or c) a composition comprising sodium perborate and tetraacetylethylenediamine (TAED).
상기 생물학 작용제는 그람 음성균, 바이러스, 또는 그람 음성균 및 바이러스를 함유한 용액일 수 있다. The biological agent may be a gram-negative bacteria, a virus, or a solution containing gram-negative bacteria and a virus.
상기 그람 음성균의 예로는 페스트균(Yersinia pestis), 큐열균(Coxiella burnetii), 야토균(Francisella tularensis), 브루셀라균(Brucella melitensis), 발진티푸스균(Rickettsia prowazekii), 이질균(Shigella dysenteriae), 살모넬라균(Salmonella typhi), 콜레라균(Vibrio cholera), 대장균(Escherichia coli) 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.Examples of the gram-negative bacteria include Yersinia pestis, Coxiella burnetii, Francisella tularensis, Brucella melitensis, Rickettsia prowazekii, Shigella dysenteriae, and Salmonella ( Salmonella typhi, Vibrio cholera, Escherichia coli, etc., but are not limited thereto.
상기 바이러스의 예로는 동물성 바이러스로 홍역 바이러스(Paramixovirus), 광견병 바이러스(Rabies virus), 독감 바이러스(Influenza viruses), 코로나 바이러스(Coronavirus), 천연두 바이러스(Variola major, Variola minor), 소아마비 바이러스(poliovirus), 뇌염 바이러스(HSV-1, Arbovirus, Eastern equine encephalitis, West Nile virus) 등이 있고, 식물성 바이러스로는 TMV(Tobacco mosaic virus), 감자 감염 바이러스(PVY) 등이 있으며, 세균성 바이러스로는 박테리오파지 T2, T4, T6, MS2, M13 등이 있으나, 이에 한정되지 않는다.Examples of the above viruses include animal viruses such as measles virus (Paramixovirus), rabies virus, influenza virus, coronavirus, smallpox virus (Variola major, Variola minor), poliovirus, There are encephalitis viruses (HSV-1, Arbovirus, Eastern equine encephalitis, West Nile virus), plant viruses include TMV (Tobacco mosaic virus) and potato infection virus (PVY), and bacterial viruses include bacteriophages T2 and T4. , T6, MS2, M13, etc., but are not limited to these.
본 발명의 실시예에서는 그람 음성균의 모의 작용제로 대장균을 사용하였고, 바이러스의 모의 작용제로 T4 박테리오파지를 사용하였다. 대장균은 다루기에 비교적 안전하고 연구 도구로 널리 사용되는 대표적인 그람 음성 세균이고, T4 박테리오파지 또한 대표적인 바이러스 모의 작용제로서 미오비리데 패밀리(Myoviridae family)에 속하며 이중나선 DNA와 수축성의 꼬리를 가지고 있고 대장균(E. coli)을 숙주세포로 하는 바이러스이다. 이들 모의 작용제를 효과적으로 불활성화시키는 제독 방법이라면 유사한 세포 구조와 유사한 성질을 가지는 상기 나열된 그람 음성균 및/또는 바이러스들을 모두 제독할 수 있을 것으로 예측된다. In the examples of the present invention, E. coli was used as a gram-negative bacterial simulant, and T4 bacteriophage was used as a virus simulant. Escherichia coli is a representative Gram-negative bacterium that is relatively safe to handle and is widely used as a research tool, and T4 bacteriophage is also a representative virus mimic agent, belonging to the Myoviridae family, having double-stranded DNA and a contractile tail, and E. coli (E It is a virus whose host cell is .coli). It is expected that a detoxification method that effectively inactivates these simulated agents will be able to detoxify all of the above-listed Gram-negative bacteria and/or viruses that have similar cell structures and similar properties.
상기 그람 음성균은 1Х109 cfu/mL이하의 농도일 수 있고, 바람직하게는 1Х107 내지 1Х109 cfu/mL의 농도일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 1Х108 내지 1Х109 cfu/mL의 농도일 수 있다.The gram-negative bacteria may have a concentration of 1Х10 9 cfu/mL or less, preferably 1Х10 7 to 1Х10 9 cfu/mL, and more preferably 1Х10 8 to 1Х10 9 cfu/mL. .
상기 바이러스는 3Х109 pfu/mL이하의 농도일 수 있고, 바람직하게는 1Х107 내지 3Х109 pfu/mL의 농도일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 1Х108 내지 3Х109 pfu/mL의 농도일 수 있다.The virus may have a concentration of 3Х10 9 pfu/mL or less, preferably 1Х10 7 to 3Х10 9 pfu/mL, and more preferably 1Х10 8 to 3Х10 9 pfu/mL.
본 발명의 실시예에서 1Х109 cfu/mL의 그람 음성균과 3Х109 pfu/mL의 바이러스에 대하여 본 발명의 제독방법을 사용하여 완전 제독하였다. 따라서 본 발명의 제독방법은 1Х109 cfu/mL 이하의 그람 음성균과 3Х109 pfu/mL 이하의 바이러스에 대해서도 완전 제독할 수 있음은 자명하다.In an example of the present invention, 1Х10 9 cfu/mL of gram-negative bacteria and 3Х10 9 pfu/mL of viruses were completely decontaminated using the decontamination method of the present invention. Therefore, it is clear that the decontamination method of the present invention can completely detoxify Gram-negative bacteria of 1Х10 9 cfu/mL or less and viruses of 3Х10 9 pfu/mL or less.
본 발명에서 생물학 작용제는 모두 상기와 동일한 의미이므로, 이하에서 생물학 작용제에 대한 설명은 생략한다.In the present invention, biological agents all have the same meaning as above, so description of biological agents will be omitted below.
본 발명은 제독액을 제조하는 1단계; 제독액과 생물학 작용제를 반응시키는 2단계; 및 반응물을 중화시키는 3단계를 포함하는, 생물학 작용제의 제독 방법을 제공한다.The present invention includes the first step of producing a decontamination solution; The second step is to react the decontamination solution with the biological agent; and neutralizing the reactants.
상기 제독액은 a) 과산화수소; b) 이염화아이소사이아누르산나트륨(NaDCC); 또는 c) 과붕산나트륨 및 테트라아세틸에틸렌디아민(tetraacetylethylenediamine, TAED)을 포함한 조성물 중 선택된 하나를 포함하는 것 일 수 있다.The decontamination solution includes a) hydrogen peroxide; b) Sodium dichloroisocyanurate (NaDCC); or c) a composition containing sodium perborate and tetraacetylethylenediamine (TAED).
상기 제독액을 제조하는 1단계에서는, 제독제가 분말인 경우에는 수용액에 용해시켜 농축액을 제조하고, 제독제가 액체인 경우에는 이를 그대로 생물학 작용제에 처리하거나 필요에 따라 수용액으로 희석하여 제조한다. 상기 수용액은 물, 정제수, 증류수 등 일 수 있다.In the first step of preparing the decontamination solution, if the decontamination agent is a powder, it is dissolved in an aqueous solution to prepare a concentrated solution. If the decontamination agent is a liquid, it is treated with a biological agent as is or diluted with an aqueous solution as necessary. The aqueous solution may be water, purified water, distilled water, etc.
상기 제독액과 생물학 작용제를 반응시키는 2단계에서는, 생물학 작용제에 상기 제1단계에서 제조된 제독액을 첨가하고 혼합하여 반응시킨다. 상기 2단계의 반응은 0 내지 250 rpm, 15 내지 45℃에서 5 내지 20 분간 수행되는 것 일 수 있고, 바람직하게는 0 내지 200 rpm, 25 내지 40℃에서 5 내지 15 분간 수행될 수 있다. 상기 범위 미만에서는 제독 반응이 잘 일어나지 않을 수 있고, 상기 범위 초과에서는 에너지 요구량이 높아 추가 설비 및 에너지 공급으로 인한 제독 비용이 대폭 증가할 수 있다.In the second step of reacting the decontamination solution with the biological agent, the decontamination solution prepared in the first step is added to the biological agent and mixed to react. The reaction in the second step may be performed at 0 to 250 rpm and 15 to 45°C for 5 to 20 minutes, preferably at 0 to 200 rpm and 25 to 40°C for 5 to 15 minutes. Below the above range, the decontamination reaction may not occur easily, and above the above range, energy requirements are high, so decontamination costs may significantly increase due to additional equipment and energy supply.
상기와 같이 혼합하여 반응시킬 때에는 교반을 수행할 수 있고, 교반을 수행하지 않을 수도 있다. 본 발명의 일 실시예에서 제독제로 과산화수소 또는 페라세이프를 사용하는 경우에는 교반 없이도 상온에서 우수한 제독 효율을 나타냄을 확인하였다(실시예 3-1, 3-2, 3-5, 3-6, 표 12, 표 13). 반면, 제독제로 NaDCC를 사용하는 경우 효율적인 제독을 위하여 교반이 수반되어야 함을 확인하였다(실시예 3-3, 3-4).When mixing and reacting as described above, stirring may be performed or stirring may not be performed. In one embodiment of the present invention, it was confirmed that when hydrogen peroxide or Perasafe was used as a decontamination agent, excellent decontamination efficiency was exhibited at room temperature even without stirring (Examples 3-1, 3-2, 3-5, 3-6, Table 12, Table 13). On the other hand, it was confirmed that when using NaDCC as a decontamination agent, stirring must be accompanied for efficient decontamination (Examples 3-3 and 3-4).
상기 반응물을 중화시키는 3단계에서는, 상기 2단계에서 생성된 반응물에 중화제를 첨가하여 수행할 수 있다. 상기 중화제로는 티오황산나트륨(sodium thiosulfate)을 사용할 수 있다. 또한 상기 반응물 중화 후에는 물, 정제수, 증류수 등의 수용액을 첨가하여 희석할 수 있다. The third step of neutralizing the reactant can be performed by adding a neutralizing agent to the reactant produced in step 2. Sodium thiosulfate can be used as the neutralizing agent. Additionally, after neutralizing the reactant, it can be diluted by adding an aqueous solution such as water, purified water, or distilled water.
과산화수소를 포함한 제독제를 처리하는 방법How to dispose of decontamination agents containing hydrogen peroxide
본 발명은 과산화수소를 포함한 제독제를 생물학 작용제에 처리하고, 상기 제독제의 농도는 상기 생물학 작용제에 대하여 1%(v/v) 이상인, 생물학 작용제의 제독 방법을 제공한다.The present invention provides a method for decontamination of biological agents, wherein a decontamination agent containing hydrogen peroxide is treated with a biological agent, and the concentration of the decontamination agent is 1% (v/v) or more with respect to the biological agent.
상기 제독제의 농도는, 상기 생물학 작용제에 대하여 1%(v/v) 이상일 수 있고, 바람직하게는 2%(v/v) 이상일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 2 내지 5%(v/v) 또는 2 내지 3%(v/v) 일 수 있다. 도 3및 표 3을 참조하면, 1Х109 cfu/mL 농도의 그람 음성균 용액에 대해 1 - 3%(v/v) 농도로 과산화수소를 처리한 결과, 2%(v/v) 농도에서 완전 제독을 나타내었다. 또한, 도 4 및 표 4를 참조하면, 3Х109 pfu/mL 농도의 바이러스 용액에 대해 1 - 3%(v/v) 농도로 과산화수소를 처리한 결과, 2%(v/v) 농도에서 완전 제독을 나타내었다.The concentration of the detoxifying agent may be 1% (v/v) or more, preferably 2% (v/v) or more, and more preferably 2 to 5% (v/v) relative to the biological agent. Or it may be 2 to 3% (v/v). Referring to Figure 3 and Table 3, as a result of treating a gram-negative bacteria solution with a concentration of 1Х10 9 cfu/mL with hydrogen peroxide at a concentration of 1 - 3% (v/v), complete decontamination was achieved at a concentration of 2% (v/v). indicated. Additionally, referring to Figure 4 and Table 4, as a result of treating a virus solution with a concentration of 3Х10 9 pfu/mL with hydrogen peroxide at a concentration of 1 - 3% (v/v), complete decontamination was achieved at a concentration of 2% (v/v). indicated.
상기 고농도 그람 음성균 용액 및/또는 바이러스 용액에 상기 제독제를 반응시킬 때 20분 이내로 수행될 수 있고, 바람직하게는 5분 이상 15분 이하로 수행할 수 있다. 도 9를 참조하면, 1Х109 cfu/mL 농도의 그람 음성균 용액에 대해 2%(v/v) 농도의 과산화수소 용액으로 처리한 결과, 5분 만에 완전 제독을 나타내었다. 또한, 도 10 및 표 9를 참조하면, 3Х109 pfu/mL 농도의 바이러스 용액에 대해 2%(v/v) 농도의 과산화수소 용액으로 처리한 결과, 15분 만에 완전 제독을 나타내었다. When reacting the detoxifying agent with the high concentration Gram-negative bacteria solution and/or virus solution, it can be performed within 20 minutes, and preferably can be performed within 5 minutes or more and 15 minutes or less. Referring to FIG. 9, when a solution of gram-negative bacteria at a concentration of 1Х10 9 cfu/mL was treated with a hydrogen peroxide solution at a concentration of 2% (v/v), complete decontamination was achieved in 5 minutes. Additionally, referring to Figure 10 and Table 9, when a virus solution with a concentration of 3Х10 9 pfu/mL was treated with a hydrogen peroxide solution with a concentration of 2% (v/v), complete decontamination was achieved in 15 minutes.
상기 고농도 그람 음성균 용액 및/또는 바이러스 용액에 상기 제독제를 반응시킬 때 15 내지 45℃에서, 바람직하게는 20 내지 40℃에서 수행될 수 있고, 교반을 수반하거나 교반 없이 수행될 수 있다. 도 15를 참조하면, 1Х109 cfu/mL 농도의 그람 음성균 용액에 대해 2%(v/v) 농도의 과산화수소 용액으로 25℃, 35℃에서 교반 없이 처리한 결과 콜로니가 나타나지 않으므로, 교반 없이도 우수한 제독효율을 나타냄을 확인하였다. 또한, 도 16을 참조하면, 3Х109 cfu/mL 농도의 바이러스 용액에 대해 2%(v/v) 농도의 과산화수소 용액으로 25℃, 35℃에서 교반 없이 처리한 결과, 교반 없이도 제독이 효율적으로 이루어짐을 알 수 있다.When reacting the detoxifying agent with the high concentration Gram-negative bacteria solution and/or virus solution, it may be performed at 15 to 45°C, preferably at 20 to 40°C, and may be performed with or without stirring. Referring to Figure 15, when a solution of Gram-negative bacteria at a concentration of 1Х109 cfu/mL was treated with a hydrogen peroxide solution at a concentration of 2% (v/v) at 25°C and 35°C without stirring, no colonies appeared, resulting in excellent decontamination even without stirring. It was confirmed that it shows efficiency. In addition, referring to Figure 16, as a result of treating a virus solution with a concentration of 3Х10 9 cfu/mL with a hydrogen peroxide solution with a concentration of 2% (v/v) at 25°C and 35°C without stirring, detoxification was efficiently achieved even without stirring. can be seen.
이염화아이소사이아누르산나트륨(NaDCC) 포함한 제독제를 처리하는 방법How to dispose of decontamination agents containing sodium dichloroisocyanurate (NaDCC)
본 발명은 이염화아이소사이아누르산나트륨(NaDCC)을 포함한 제독제를 생물학 작용제에 처리하고, 상기 제독제의 농도는 상기 생물학 작용제에 대하여 0.03%(w/v) 이상인, 생물학 작용제의 제독 방법을 제공한다.The present invention is a method for decontamination of biological agents, wherein a detoxifying agent containing sodium dichloroisocyanurate (NaDCC) is treated with a biological agent, and the concentration of the detoxifying agent is 0.03% (w/v) or more with respect to the biological agent. provides.
상기 제독제의 농도는, 상기 생물학 작용제에 대하여 0.03%(w/v) 이상일 수 있고, 바람직하게는 0.05%(w/v) 이상일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 0.05% 내지 0.1%(w/v) 또는 0.05% 내지 0.075%(w/v) 일 수 있다. 도 7 및 표 7을 참조하면, 1Х109 cfu/mL 농도의 그람 음성균 용액에 대해 0.03 - 0.075%(w/v) 농도로 이염화아이소사이아누르산나트륨을 처리한 결과, 0.075%(w/v) 농도에서 완전 제독을 나타내었다. 또한, 도 8 및 표 8을 참조하면, 3Х109 pfu/mL 농도의 바이러스 용액에 대해 0.03 - 0.075%(w/v) 농도로 이염화아이소사이아누르산나트륨을 처리한 결과, 0.05%(w/v) 농도에서 완전 제독을 나타내었다.The concentration of the detoxifier may be 0.03% (w/v) or more, preferably 0.05% (w/v) or more, and more preferably 0.05% to 0.1% (w/v) relative to the biological agent. ) or 0.05% to 0.075% (w/v). Referring to Figure 7 and Table 7, as a result of treating a solution of gram-negative bacteria with a concentration of 1Х10 9 cfu/mL with sodium dichloroisocyanurate at a concentration of 0.03 - 0.075% (w/v), the result was 0.075% (w/v). v) showed complete decontamination in concentration. In addition, referring to Figure 8 and Table 8, as a result of treating the virus solution with a concentration of 3Х10 9 pfu/mL with sodium dichloroisocyanurate at a concentration of 0.03 - 0.075% (w/v), the result was 0.05% (w /v) concentration indicated complete decontamination.
상기 고농도 그람 음성균 용액 및/또는 바이러스 용액에 상기 제독제를 반응시킬 때 15분 이내로 수행될 수 있고, 바람직하게는 5분 이상 15분 이하, 더욱 바람직하게는 5분 이상 15분 또는 10분 이하로 수행할 수 있다. 도 11을 참조하면, 1Х109 cfu/mL 농도의 그람 음성균 용액에 대해 0.075%(w/v) 농도의 이염화아이소사이아누르산나트륨 용액으로 처리한 결과, 5분 만에 완전 제독을 나타내었다. 또한, 도 12 및 표 10을 참조하면, 3Х109 pfu/mL 농도의 바이러스 용액에 대해 0.075%(w/v) 농도 농도의 이염화아이소사이아누르산나트륨 용액으로 처리한 결과, 10분 경과 후 완전 제독을 나타내었다. When reacting the decontamination agent with the high concentration Gram-negative bacteria solution and/or virus solution, it can be performed within 15 minutes, preferably 5 minutes or more and 15 minutes or less, more preferably 5 minutes or more and 15 minutes or 10 minutes or less. It can be done. Referring to Figure 11, when a solution of gram-negative bacteria at a concentration of 1Х109 cfu/mL was treated with a solution of sodium dichloroisocyanurate at a concentration of 0.075% (w/v), complete decontamination was achieved in 5 minutes. . Additionally, referring to Figure 12 and Table 10, as a result of treating a virus solution with a concentration of 3Х10 9 pfu/mL with a sodium dichloroisocyanurate solution with a concentration of 0.075% (w/v), after 10 minutes, It represented a complete admiral.
상기 고농도 그람 음성균 용액 및/또는 바이러스 용액에 상기 제독제를 반응시킬 때 15 내지 45℃에서, 바람직하게는 20 내지 40℃에서 수행될 수 있다. 또한, 교반을 수반하여 수행될 수 있고, 이 때 교반은 0 내지 250 rpm 또는 0 내지 200 rpm으로 수행될 수 있다. 도 17을 참조하면, 1Х109 cfu/mL 농도의 그람 음성균 용액에 대해 0.075%(w/v) 농도의 이염화아이소사이아누르산나트륨 용액으로 25℃, 35℃에서 교반 없이 처리한 결과 콜로니가 나타나므로 교반이 병행되는 것이 바람직함을 알 수 있다. 또한 도 18을 참조하면, 3Х109 cfu/mL 농도의 바이러스 용액에 대해 0.05%(w/v) 농도의 이염화아이소사이아누르산나트륨 용액으로 25℃, 35℃에서 교반 없이 처리한 결과, 효율적인 제독이 되지 않으므로 교반의 필요성을 알 수 있다.When reacting the detoxifying agent with the high concentration gram-negative bacteria solution and/or virus solution, it may be performed at 15 to 45°C, preferably at 20 to 40°C. Additionally, it may be performed with stirring, and in this case, stirring may be performed at 0 to 250 rpm or 0 to 200 rpm. Referring to Figure 17, when a solution of 1Х10 9 cfu/mL of Gram-negative bacteria was treated with a 0.075% (w/v) solution of sodium dichloroisocyanurate at 25°C and 35°C without stirring, colonies were obtained. Therefore, it can be seen that it is desirable to carry out stirring in parallel. Also, referring to Figure 18, as a result of treating a virus solution with a concentration of 3Х10 9 cfu/mL with a solution of sodium dichloroisocyanurate at a concentration of 0.05% (w/v) at 25°C and 35°C without stirring, efficient Since it is not decontaminated, the need for agitation can be seen.
과붕산나트륨 및 테트라아세틸에틸렌디아민(TAED)을 포함한 조성물을 포함한 제독제를 처리하는 방법Method of processing decontamination agents containing compositions containing sodium perborate and tetraacetylethylenediamine (TAED)
본 발명은 과붕산나트륨 및 테트라아세틸에틸렌디아민(TAED)을 포함한 조성물을 포함한 제독제를 생물학 작용제에 처리하고, 상기 제독제의 농도는 상기 생물학 작용제에 대하여 0.05%(w/v) 이상인, 생물학 작용제의 제독 방법을 제공한다.The present invention provides a biological agent for treating a biological agent with a detoxifying agent comprising a composition comprising sodium perborate and tetraacetylethylenediamine (TAED), wherein the concentration of the detoxifying agent is 0.05% (w/v) or more relative to the biological agent. Provides a decontamination method.
상기 과붕산나트륨 및 테트라아세틸에틸렌디아민(TAED)을 포함한 조성물은 본 발명의 기술분야에서 페라세이프(Perasafe®)로 불리는 소독제 또는 살균제로 사용되는 것 일 수 있다. The composition containing sodium perborate and tetraacetylethylenediamine (TAED) may be used as a disinfectant or sterilizer called Perasafe ® in the technical field of the present invention.
상기 과붕산나트륨 및 테트라아세틸에틸렌디아민(TAED)을 포함한 조성물은 과붕산나트륨:테트라아세틸에틸렌디아민(TAED)을 1:9, 3:7, 4:6, 5:5, 6:4, 7:3, 9:1 중 어느 하나의 중량비로 포함할 수 있다. The composition containing sodium perborate and tetraacetylethylenediamine (TAED) includes sodium perborate:tetraacetylethylenediamine (TAED) at a ratio of 1:9, 3:7, 4:6, 5:5, 6:4, 7: It can be included in any of the following weight ratios: 3 or 9:1.
상기 제독제의 농도는, 상기 생물학 작용제에 대하여 0.05%(w/v) 이상일 수 있고, 바람직하게는 0.1%(w/v) 이상, 0.2%(w/v) 이상 또는 0.3%(w/v) 이상일 수 있으며, 더욱 바람직하게는 0.1 내지 0.5%(w/v), 0.1 내지 0.3%(w/v), 0.2 내지 0.5%(w/v), 0.2 내지 0.3%(w/v) 또는 0.3 내지 0.5%(w/v) 일 수 있다. 도 5 및 표 5을 참조하면, 1Х109 cfu/mL 농도의 그람 음성균 용액에 대해 0.05 - 0.3%(w/v) 농도로 페라세이프를 처리한 결과, 0.3%(w/v) 농도에서 완전 제독을 나타내었다. 또한, 도 6 및 표 6을 참조하면, 3Х109 pfu/mL 농도의 바이러스 용액에 대해 0.05 - 0.3%(w/v) 농도로 페라세이프를 처리한 결과, 0.3%(w/v) 농도에서 완전 제독을 나타내었다.The concentration of the detoxifying agent may be 0.05% (w/v) or more, preferably 0.1% (w/v) or more, 0.2% (w/v) or more, or 0.3% (w/v) relative to the biological agent. ) or more, and more preferably 0.1 to 0.5% (w/v), 0.1 to 0.3% (w/v), 0.2 to 0.5% (w/v), 0.2 to 0.3% (w/v) or 0.3. It may be from 0.5% (w/v). Referring to Figure 5 and Table 5, as a result of treating a Gram-negative bacteria solution with a concentration of 1Х109 cfu/mL with Perasafe at a concentration of 0.05 - 0.3% (w/v), complete decontamination was achieved at a concentration of 0.3% (w/v). indicated. In addition, referring to Figure 6 and Table 6, as a result of treating the virus solution with a concentration of 3Х10 9 pfu/mL with PeraSafe at a concentration of 0.05 - 0.3% (w/v), the virus solution was completely recovered at a concentration of 0.3% (w/v). indicated the admiral.
상기 고농도 그람 음성균 용액 및/또는 바이러스 용액에 상기 제독제를 반응시킬 때 20분 이내로 수행될 수 있고, 바람직하게는 15분 이내로 수행할 수 있고, 더욱 바람직하게는 5분 이상 15분 이하로 수행할 수 있다. 도 13을 참조하면, 1Х109 cfu/mL 농도의 그람 음성균 용액에 대해 0.3%(w/v) 농도의 페라세이프 용액으로 처리한 결과, 5분 만에 완전 제독을 나타내었다. 또한, 도 14 및 표 11을 참조하면, 3Х109 pfu/mL 농도의 바이러스 용액에 대해 0.3%(w/v) 농도의 페라세이프 용액으로 처리한 결과, 10분 경과 후 완전 제독을 나타내었다. When reacting the decontamination agent with the high concentration Gram-negative bacteria solution and/or virus solution, it can be performed within 20 minutes, preferably within 15 minutes, and more preferably between 5 minutes and 15 minutes. You can. Referring to FIG. 13, when a solution of Gram-negative bacteria at a concentration of 1Х109 cfu/mL was treated with a PeraSafe solution at a concentration of 0.3% (w/v), complete decontamination was achieved in 5 minutes. Additionally, referring to Figure 14 and Table 11, when a virus solution with a concentration of 3Х10 9 pfu/mL was treated with a Perasafe solution with a concentration of 0.3% (w/v), complete decontamination was achieved after 10 minutes.
상기 고농도 그람 음성균 용액 및/또는 바이러스 용액에 상기 제독제를 반응시킬 때 15 내지 45℃에서, 바람직하게는 20 내지 40℃에서 수행될 수 있고, 교반을 수반하거나 교반 없이 수행될 수 있다. 도 19를 참조하면, 1Х109 cfu/mL 농도의 그람 음성균 용액에 대해 0.3%(w/v) 농도의 페라세이프 용액으로 25℃, 35℃에서 교반 없이 처리한 결과 콜로니가 나타나지 않으므로, 교반 없이도 우수한 제독효율을 나타냄을 확인하였다. 또한, 도 20을 참조하면, 3Х109 cfu/mL 농도의 바이러스 용액에 대해 0.3%(w/v) 농도의 페라세이프 용액으로 25℃, 35℃에서 교반 없이 처리한 결과, 교반 없이도 제독이 효율적으로 이루어짐을 알 수 있다.When reacting the detoxifying agent with the high concentration Gram-negative bacteria solution and/or virus solution, it may be performed at 15 to 45°C, preferably at 20 to 40°C, and may be performed with or without stirring. Referring to Figure 19, when a solution of Gram-negative bacteria at a concentration of 1Х109 cfu/mL was treated with a PeraSafe solution at a concentration of 0.3% (w/v) at 25°C and 35°C without stirring, no colonies appeared, showing excellent bacteria even without stirring. It was confirmed that it shows decontamination efficiency. In addition, referring to Figure 20, as a result of treating a virus solution with a concentration of 3Х10 9 cfu/mL with a PeraSafe solution with a concentration of 0.3% (w/v) at 25°C and 35°C without stirring, decontamination was efficient even without stirring. It can be seen that it is done.
실시예Example
이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시하나, 하기 실시예는 본 발명을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, preferred examples are presented to aid understanding of the present invention. However, the following examples are merely illustrative of the present invention and the scope of the present invention is not limited to the following examples.
이하 실시예에서는 세 종류의 화합물, 과산화수소(hydrogen peroxide), 이염화아이소사이아누르산나트륨(sodium dichloroisocynurate, NaDCC), 과붕산나트륨 및 테트라아세틸에틸렌디아민(TAED)을 포함한 조성물로서 페라세이프(Perasafe)를 사용하여 생물학 작용제인 그람 음성균와 바이러스에 대한 제독 성능을 시험하였고, 이를 위하여 제독제 농도, 반응 시간, 반응 온도 및 교반 유무 등의 인자들에 대한 효과를 측정하였다.In the following examples, Perasafe is a composition containing three types of compounds, hydrogen peroxide, sodium dichloroisocynurate (NaDCC), sodium perborate, and tetraacetylethylenediamine (TAED). was used to test the decontamination performance against biological agents, gram-negative bacteria and viruses, and for this purpose, the effects of factors such as decontamination agent concentration, reaction time, reaction temperature, and presence or absence of stirring were measured.
독소 제독은 (1) 제독제(제독액) 제조, (2) 제독제와 생물학 작용제의 혼합 및 반응, (3) 중화제 투입 및 혼합의 세 단계로 수행하였다. Toxin decontamination was carried out in three steps: (1) preparation of decontamination agent (decontamination solution), (2) mixing and reaction of decontamination agent with biological agent, and (3) injection and mixing of neutralizer.
<재료 및 방법><Materials and Methods>
1. 모의 작용제 준비 1. Mock agent preparation
고려비앤피에서 그람 음성균 용액 (E. coli, 1E+10 cfu/mL)과 바이러스 용액(T4 phage, 3E+11 pfu/mL)을 공급받았다. 상기 각 용액을 10배, 100배 희석한 1Х109 cfu/mL 농도의 그람 음성균 용액 10 mL, 3Х109 cfu/mL 농도의 바이러스 용액 10 mL에 대하여 아래 실시예의 제독 시험을 수행하였다. Gram-negative bacteria solution (E. coli, 1E+10 cfu/mL) and virus solution (T4 phage, 3E+11 pfu/mL) were supplied from Korea B&P. The detoxification test in the example below was performed on 10 mL of a gram-negative bacterial solution with a concentration of 1Х10 9 cfu/mL and 10 mL of a virus solution with a concentration of 3Х10 9 cfu/mL, which were diluted 10-fold and 100-fold, respectively.
2. 제독제 준비2. Preparation of decontamination agent
과산화수소는 원액(30%)을 그대로 이용하거나 필요에 따라 정제수를 첨가하여 희석 후 사용하였다.Hydrogen peroxide was used as is as a stock solution (30%) or after dilution by adding purified water if necessary.
분말인 이염화아이소사이아누르산나트륨(NaDCC)와 과붕산나트륨 및 테트라아세틸에틸렌디아민을 포함한 조성물은 아래와 같이 제조하였다.A composition containing powdered sodium dichloroisocyanurate (NaDCC), sodium perborate, and tetraacetylethylenediamine was prepared as follows.
이염화아이소사이아누르산나트륨(이하, 'NaDCC' 라 함) 분말은 TCI 에서 구입하였고, 정제수에 용해시켜 농축액을 제조하였다.Sodium dichloroisocyanurate (hereinafter referred to as 'NaDCC') powder was purchased from TCI and dissolved in purified water to prepare a concentrate.
과붕산나트륨 및 테트라아세틸에틸렌디아민을 포함한 조성물로 페라세이프(Perasafe®)를 나노팜에서 구입하였고(이하 '페라세이프'라 함), 정제수에 용해시켜 농축액을 제조하였다.Perasafe ® , a composition containing sodium perborate and tetraacetylethylenediamine, was purchased from Nanopharm (hereinafter referred to as 'Perasafe') and dissolved in purified water to prepare a concentrate.
상기 NaDCC 농축액과 페라세이프 농축액을 희석하여 필요한 농도로 제조하여 사용하였다.The NaDCC concentrate and Perasafe concentrate were diluted and used to prepare the required concentration.
3. 제독 반응3. Admiral reaction
진탕배양기(shaking incubator)에, 상기 모의 작용제를 넣고, 상기 제독제를 투입한 후, 교반하여 반응시켰다. The simulated agent was placed in a shaking incubator, the detoxifying agent was added, and the reaction was stirred.
4. 중화 반응4. Neutralization reaction
상기 제독 반응 후, 50% 티오황산나트륨(sodium thiosulfate) 용액으로 중화하였다. 과산화수소 중화는 1:2, 페라세이프 중화는 2:1, NaDCC 중화는 2:1(각 비율은 제독액 부피%: 중화액 부피%)으로 하였다. After the detoxification reaction, it was neutralized with 50% sodium thiosulfate solution. Hydrogen peroxide neutralization was 1:2, PeraSafe neutralization was 2:1, and NaDCC neutralization was 2:1 (each ratio was decontamination solution volume %: neutralization solution volume %).
5. 그람 음성균 농도 측정 방법5. Method for measuring gram-negative bacteria concentration
중화반응을 마친 용액을 TSA 배지에 도말 후 37℃에서 18시간 배양한 후 콜로니를 카운트하였다.After completing the neutralization reaction, the solution was spread on TSA medium, incubated at 37°C for 18 hours, and colonies were counted.
6. 바이러스 플라크 에세이 방법6. Viral Plaque Essay Method
(1) 배지 및 버퍼 준비(1) Preparation of medium and buffer
바이러스 및 숙주 (E. coli) 배양을 위한 배지 및 버퍼를 준비하였다(표 1). T4 탑 아가(T4 top agar)는 대량 제조 후 전자레인지로 녹여 사용하였다.Media and buffers for virus and host (E. coli) culture were prepared (Table 1). T4 top agar was mass-produced and melted in a microwave before use.
(2) 숙주 배양(2) Host culture
㉮ 시험 2일 전 오후 대장균(E. coli)을 획선 도말(streaking)하였다.㉮ E. coli was streaked in the afternoon two days before the test.
㉯ 시험 전날 오전, 상기 도말한 콜로니를 이용하여 3mL T4 배지(broth)에 배양하였다(37℃, 200rpm).㉯ On the morning of the day before the test, the smeared colonies were cultured in 3 mL T4 broth (37°C, 200 rpm).
㉰ 시험 전날 오후, 5mL T4 배지에 오전에 수행한 대장균(E. coli) 배양액 (50uL)을 배양하였다(37℃, 200rpm).㉰ On the afternoon of the day before the test, the E. coli culture (50uL) performed in the morning was cultured in 5mL T4 medium (37℃, 200rpm).
(3) 바이러스 배양(3) Virus culture
㉮ 제조된 T4 탑 아가(T4 top agar)를 녹인 후 3.5mL씩 옮겨 담아 50℃ 워터 배스(water bath)에 맞춰놓았다.㉮ After dissolving the prepared T4 top agar, 3.5 mL each was transferred and placed in a 50°C water bath.
㉯ T4 바텀 아가 플레이트(bottom agar plate)는 37℃에 건조하였다.㉯ The T4 bottom agar plate was dried at 37°C.
㉰ 분석하고자 하는 바이러스 시료를 SM 버퍼를 이용하여 희석하였다.㉰ The virus sample to be analyzed was diluted using SM buffer.
㉱ 희석된 바이러스 시료와 전날 배양한 대장균 배양액을 0.1mL:0.1mL로 혼합 후 37℃에서 20분간 정치하였다.㉱ The diluted virus sample and the E. coli culture medium cultured the previous day were mixed in a ratio of 0.1mL:0.1mL and left at 37°C for 20 minutes.
㉲ 정치한 용액 0.1ml와 탑 아가 3.5mL를 혼합한 후 바텀 아가(bottom agar)에 부은 후 고르게 분포시켰다.㉲ After mixing 0.1 mL of the standing solution and 3.5 mL of top agar, it was poured into the bottom agar and distributed evenly.
㉳ 37℃에서 18시간 배양한 후 플라크를 카운트하였다.㉳ After culturing at 37°C for 18 hours, plaques were counted.
<실시예 1: 제독제 농도별 효과><Example 1: Effect of decontamination agent concentration>
(실시예 1-1) 과산화수소 - 그람 음성균(Example 1-1) Hydrogen peroxide - Gram-negative bacteria
상기 준비된 그람 음성균 모의 작용제에 1% - 3%(v/v) 농도의 과산화수소 제독액을 투입하여 제독하였다. 반응 온도 25℃, 교반 200 rpm에서 15분 동안 반응을 실시하였다. 상기 반응 후 제독 반응액을 중화하고 정제수로 희석한 뒤 세포 수를 측정하고, 그 결과를 도 3 및 표 3으로 나타내었다.The prepared gram-negative bacteria simulant was decontaminated by adding a hydrogen peroxide detoxification solution at a concentration of 1% - 3% (v/v). The reaction was performed at a reaction temperature of 25°C and stirring at 200 rpm for 15 minutes. After the above reaction, the detoxification reaction solution was neutralized and diluted with purified water, and then the number of cells was measured, and the results are shown in Figure 3 and Table 3.
도 3 및 표 3를 참조하면, 1%, 2%, 3%(v/v) 농도의 과산화수소 제독액으로 그람 음성균 시료를 제독한 결과, 1%(v/v) 농도에서는 평균 2600 cfu/mL의 콜로니가 나타났고, 2%, 3%(v/v) 농도에서 완전 제독이 확인되었다. Referring to Figure 3 and Table 3, as a result of decontamination of Gram-negative bacteria samples with hydrogen peroxide decontamination solution at concentrations of 1%, 2%, and 3% (v/v), the average concentration was 2600 cfu/mL at 1% (v/v) concentration. Colonies appeared, and complete decontamination was confirmed at concentrations of 2% and 3% (v/v).
(실시예 1-2) 과산화수소 - 바이러스(Example 1-2) Hydrogen peroxide - Virus
상기 준비된 바이러스 모의 작용제에 1% - 3%(v/v) 농도의 과산화수소 제독액을 투입하여 제독하였다. 반응 온도 25℃, 교반 200 rpm에서 15분 동안 반응을 실시하였다. 상기 반응 후 제독 반응액을 중화하고 정제수로 희석한 뒤 플라크 에세이를 수행하였고, 그 결과를 도 4 및 표 4로 나타내었다.The prepared virus simulation agent was detoxified by adding hydrogen peroxide decontamination solution at a concentration of 1% - 3% (v/v). The reaction was performed at a reaction temperature of 25°C and stirring at 200 rpm for 15 minutes. After the above reaction, the detoxification reaction solution was neutralized and diluted with purified water, and then a plaque assay was performed, and the results are shown in Figure 4 and Table 4.
도 4 및 표 4을 참조하면, 1%, 2%, 3%(v/v) 농도의 과산화수소 제독액으로 바이러스 시료를 제독한 결과, 2% 이상의 농도에서 완전 제독이 확인되었다.Referring to Figure 4 and Table 4, when virus samples were decontaminated with hydrogen peroxide decontamination solutions at concentrations of 1%, 2%, and 3% (v/v), complete decontamination was confirmed at concentrations of 2% or more.
(실시예 1-3) 페라세이프 - 그람 음성균(Example 1-3) PeraSafe - Gram-negative bacteria
상기 준비된 그람 음성균 모의 작용제에 0.05% - 0.3%(w/v) 농도의 페라세이프 제독액을 투입하여 제독하였다. 반응 온도 25℃, 교반 200 rpm에서 15분 동안 반응을 실시하였다. 상기 반응 후 제독 반응액을 중화하고 정제수로 희석한 뒤 세포 수를 측정하였고, 그 결과를 도 5 및 표 5로 나타내었다.The gram-negative bacteria simulant prepared above was detoxified by adding Perasafe decontamination solution at a concentration of 0.05% - 0.3% (w/v). The reaction was performed at a reaction temperature of 25°C and stirring at 200 rpm for 15 minutes. After the above reaction, the detoxification reaction solution was neutralized, diluted with purified water, and the number of cells was measured, and the results are shown in Figure 5 and Table 5.
도 5 및 표 5를 참조하면, 0.05%, 0.1%, 0.3%(w/v) 농도의 페라세이프 제독액으로 그람 음성균 시료를 제독한 결과, 점진적으로 콜로니가 감소했으며, 0.1%(v/v)에서는 평균 210 cfu/mL의 콜로니가 나타났고 0.3%(w/v)에서는 완전 제독이 확인되었다.Referring to Figure 5 and Table 5, as a result of decontamination of Gram-negative bacteria samples with PeraSafe decontamination solution at concentrations of 0.05%, 0.1%, and 0.3% (w/v), colonies gradually decreased, and 0.1% (v/v) ), an average of 210 cfu/mL of colonies appeared, and complete decontamination was confirmed at 0.3% (w/v).
(실시예 1-4) 페라세이프 - 바이러스(Example 1-4) PeraSafe - Virus
상기 준비된 바이러스 모의 작용제에 0.05% - 0.3%(w/v) 농도의 페라세이프 제독액을 투입하여 제독하였다. 반응 온도 25℃, 교반 200 rpm에서 15분 동안 반응을 실시하였다. 상기 반응 후 제독 반응액을 중화하고 정제수로 희석한 뒤 플라크 에세이를 수행하였고, 그 결과를 도 6 및 표 6으로 나타내었다.The prepared virus simulation agent was detoxified by adding PeraSafe decontamination solution at a concentration of 0.05% - 0.3% (w/v). The reaction was performed at a reaction temperature of 25°C and stirring at 200 rpm for 15 minutes. After the above reaction, the detoxification reaction solution was neutralized and diluted with purified water, and then a plaque assay was performed, and the results are shown in Figure 6 and Table 6.
도 6 및 표 6을 참조하면, 0.05%, 0.1%, 0.3%(w/v) 농도의 페라세이프 제독액으로 바이러스 시료를 제독한 결과, 2%(w/v) 이상의 농도에서 완전 제독이 확인되었다.Referring to Figure 6 and Table 6, as a result of decontamination of virus samples with PeraSafe decontamination solution at concentrations of 0.05%, 0.1%, and 0.3% (w/v), complete decontamination was confirmed at concentrations of 2% (w/v) or higher. It has been done.
(실시예 1-5) NaDCC - 그람 음성균(Example 1-5) NaDCC - Gram-negative bacteria
상기 준비된 그람 음성균 모의 작용제에 0.03% - 0.075%(w/v) 농도의 NaDCC 제독액을 투입하여 제독하였다. 반응 온도 25℃, 교반 200 rpm에서 15분 동안 반응을 실시하였다. 상기 반응 후 제독 반응액을 중화하고 정제수로 희석한 뒤 세포 수를 측정하였고, 그 결과를 도 7 및 표 7로 나타내었다.NaDCC decontamination solution at a concentration of 0.03% - 0.075% (w/v) was added to the prepared Gram-negative bacteria simulative agent to detoxify it. The reaction was performed at a reaction temperature of 25°C and stirring at 200 rpm for 15 minutes. After the above reaction, the detoxification reaction solution was neutralized and diluted with purified water, and then the number of cells was measured, and the results are shown in Figure 7 and Table 7.
도 7 및 표 7을 참조하면, 0.03%, 0.05%, 0.075%(w/v) 농도의 NaDCC 제독액으로 그람 음성균 시료를 제독한 결과, 0.03%, 0.05%(w/v) 농도에서는 셀 수 없이 많은 콜로니가 확인되었으며 0.075%(w/v) 농도에서 완전 제독이 확인되었다.Referring to Figure 7 and Table 7, as a result of decontamination of Gram-negative bacteria samples with NaDCC decontamination solution at concentrations of 0.03%, 0.05%, and 0.075% (w/v), the number of cells at concentrations of 0.03% and 0.05% (w/v) was Many colonies were identified, and complete decontamination was confirmed at a concentration of 0.075% (w/v).
(실시예 1-6) NaDCC - 바이러스(Example 1-6) NaDCC - Virus
상기 준비된 바이러스 모의 작용제에 0.03% - 0.075%(w/v) 농도의 NaDCC 제독액을 투입하여 제독하였다. 반응 온도 25℃, 교반 200 rpm에서 15분 동안 반응을 실시하였다. 상기 반응 후 제독 반응액을 중화하고 정제수로 희석한 뒤 플라크 에세이를 수행하였고, 그 결과를 도 8 및 표 8로 나타내었다.The prepared virus simulation agent was detoxified by adding NaDCC decontamination solution at a concentration of 0.03% - 0.075% (w/v). The reaction was performed at a reaction temperature of 25°C and stirring at 200 rpm for 15 minutes. After the above reaction, the detoxification reaction solution was neutralized and diluted with purified water, and then a plaque assay was performed, and the results are shown in Figure 8 and Table 8.
도 8 및 표 8을 참조하면, 0.03%, 0.05%, 0.075%(w/v) 농도의 NaDCC제독액으로 바이러스 시료를 제독한 결과, 0.03%(w/v)에서는 바이러스가 생존하여 대장균이 효과적으로 배양되지 못함이 확인되었으며, 0.05%(w/v) 이상의 농도에서 완전 제독이 확인되었다.Referring to Figure 8 and Table 8, as a result of detoxifying the virus sample with NaDCC decontamination solution at concentrations of 0.03%, 0.05%, and 0.075% (w/v), the virus survived at 0.03% (w/v) and E. coli was effectively killed. It was confirmed that it could not be cultured, and complete detoxification was confirmed at a concentration of 0.05% (w/v) or higher.
<실시예 2: 제독 반응 시간별 효과><Example 2: Effect of decontamination reaction time>
(실시예 2-1) 과산화수소 - 그람 음성균(Example 2-1) Hydrogen peroxide - Gram-negative bacteria
2%(v/v) 농도의 과산화수소 제독액으로 200 rpm, 25℃에서 5분 - 15분간 그람 음성균 모의 작용제를 제독하였다. 반응 시간 경과 후 제독 반응액을 중화하고 정제수로 희석한 뒤 세포 수를 측정하였고, 그 결과를 도 9로 나타내었다.Gram-negative bacteria simulant was detoxified with a 2% (v/v) concentration hydrogen peroxide decontamination solution at 200 rpm and 25°C for 5 to 15 minutes. After the reaction time, the detoxification reaction solution was neutralized, diluted with purified water, and the number of cells was measured, and the results are shown in Figure 9.
도 9를 참조하면, 2%(v/v) 농도의 과산화수소 제독액으로 그람 음성균 시료를 제독한 결과, 5분 이내에 완전 제독이 확인되었다.Referring to Figure 9, when a Gram-negative bacteria sample was decontaminated with a 2% (v/v) concentration hydrogen peroxide decontamination solution, complete decontamination was confirmed within 5 minutes.
(실시예 2-2) 과산화수소 - 바이러스(Example 2-2) Hydrogen peroxide - Virus
2%(v/v) 농도의 과산화수소 제독액으로 200 rpm, 25℃에서 5분 - 15분간 바이러스 모의 작용제를 제독하였다. 반응 시간 경과 후 제독 반응액을 중화하고 정제수로 희석한 뒤 플라크 에세이를 수행하였고, 그 결과를 도 10 및 표 9로 나타내었다.The virus simulation agent was decontaminated with a 2% (v/v) concentration of hydrogen peroxide decontamination solution at 200 rpm and 25°C for 5 to 15 minutes. After the reaction time had elapsed, the detoxification reaction solution was neutralized and diluted with purified water, and then a plaque assay was performed, and the results are shown in Figure 10 and Table 9.
도 10 및 표 9를 참조하면, 2%(v/v) 농도의 과산화수소 제독액으로 바이러스 시료를 제독한 결과, 시간에 따라 점진적으로 감소함을 확인하였으며, 15분에서 완전 제독이 확인되었다.Referring to Figure 10 and Table 9, as a result of decontamination of the virus sample with a hydrogen peroxide decontamination solution at a concentration of 2% (v/v), it was confirmed that the virus sample gradually decreased over time, and complete decontamination was confirmed in 15 minutes.
(실시예 2-3) NaDCC - 그람 음성균(Example 2-3) NaDCC - Gram-negative bacteria
0.075%(w/v) 농도의 NaDCC 제독액으로 200 rpm, 25℃에서 5분 - 15분간 그람 음성균 모의 작용제를 제독하였다. 반응 시간 경과 후 제독 반응액을 중화하고 정제수로 희석한 뒤 세포 수를 측정하였고, 그 결과를 도 11로 나타내었다.Gram-negative bacteria mock agent was detoxified with NaDCC decontamination solution at a concentration of 0.075% (w/v) at 200 rpm and 25°C for 5 to 15 minutes. After the reaction time, the detoxification reaction solution was neutralized and diluted with purified water, and the number of cells was measured, and the results are shown in Figure 11.
도 11을 참조하면, 0.075%(w/v) 농도의 과산화수소 제독액으로 그람 음성균 시료를 제독한 결과, 5분 이내에 완전 제독이 확인되었다.Referring to Figure 11, when a Gram-negative bacteria sample was decontaminated with a hydrogen peroxide decontamination solution at a concentration of 0.075% (w/v), complete decontamination was confirmed within 5 minutes.
(실시예 2-4) NaDCC - 바이러스(Example 2-4) NaDCC - Virus
0.05%(w/v) 농도의 NaDCC 제독액으로 200 rpm, 25℃에서 5분 - 15분간 바이러스 모의 작용제를 제독하였다. 반응 시간 경과 후 제독 반응액을 중화하고 정제수로 희석한 뒤 플라크 에세이를 수행하였고, 그 결과를 도 12 및 표 10으로 나타내었다.The virus simulation agent was detoxified with NaDCC decontamination solution at a concentration of 0.05% (w/v) at 200 rpm and 25°C for 5 to 15 minutes. After the reaction time had elapsed, the detoxification reaction solution was neutralized and diluted with purified water, and then a plaque assay was performed, and the results are shown in Figure 12 and Table 10.
도 12 및 표 10을 참조하면, 0.05%(w/v) 농도의 NaDCC 제독액으로 바이러스 시료를 제독한 결과, 5분에서 일부 플라크(52 pfu/mL)가 발견되었으나 10분 이상에서 완전 제독이 확인되었다.Referring to Figure 12 and Table 10, as a result of decontamination of a virus sample with NaDCC decontamination solution at a concentration of 0.05% (w/v), some plaques (52 pfu/mL) were found at 5 minutes, but complete decontamination was achieved at 10 minutes or more. Confirmed.
(실시예 2-5) 페라세이프 - 그람 음성균(Example 2-5) Perasafe - Gram-negative bacteria
0.3%(w/v) 농도의 페라세이프 제독액으로 200 rpm, 25℃에서 5분 - 15분간 그람 음성균 모의 작용제를 제독하였다. 반응 시간 경과 후 제독 반응액을 중화하고 정제수로 희석한 뒤 세포 수를 측정하였고, 그 결과를 도 13으로 나타내었다.Gram-negative bacteria mock agent was detoxified with 0.3% (w/v) concentration of Perasafe decontamination solution at 200 rpm and 25°C for 5 to 15 minutes. After the reaction time had elapsed, the detoxification reaction solution was neutralized and diluted with purified water, and then the number of cells was measured, and the results are shown in Figure 13.
도 13을 참조하면, 0.3%(w/v) 농도의 페라세이프 제독액으로 그람 음성균 시료를 제독한 결과, 5분 이내에 완전 제독이 확인되었다.Referring to Figure 13, when a Gram-negative bacteria sample was decontaminated with a 0.3% (w/v) concentration of PeraSafe decontamination solution, complete decontamination was confirmed within 5 minutes.
(실시예 2-6) 페라세이프 - 바이러스(Example 2-6) PeraSafe - Virus
0.3%(w/v) 농도의 페라세이프 제독액으로 200 rpm, 25℃에서 5분 - 15분간 바이러스 모의 작용제를 제독하였다. 반응 시간 경과 후 제독 반응액을 중화하고 정제수로 희석한 뒤 플라크 에세이를 수행하였고, 그 결과를 도 14 및 표 11로 나타내었다.The virus simulation agent was detoxified with 0.3% (w/v) concentration of Perasafe decontamination solution at 200 rpm and 25°C for 5 to 15 minutes. After the reaction time had elapsed, the detoxification reaction solution was neutralized and diluted with purified water, and a plaque assay was performed, and the results are shown in Figure 14 and Table 11.
도 14 및 표 11을 참조하면, 0.3%(w/v) 농도의 페라세이프 제독액으로 바이러스 시료를 제독한 결과, 다수의 콜로니가 확인되었으나, 10분 이상에서 완전 제독이 확인되었다.Referring to Figure 14 and Table 11, when a virus sample was decontaminated with a 0.3% (w/v) concentration of Perasafe decontamination solution, a large number of colonies were confirmed, but complete decontamination was confirmed in more than 10 minutes.
<실시예 3: 제독 반응 온도 및 교반 유무별 효과><Example 3: Effect of decontamination reaction temperature and presence or absence of stirring>
(실시예 3-1) 과산화수소 - 그람 음성균(Example 3-1) Hydrogen peroxide - Gram-negative bacteria
2%(v/v) 농도의 과산화수소 제독액으로 25℃, 37℃에서 교반 없이 5분간 그람 음성균 모의 작용제를 제독하였다. 반응 시간 경과 후 제독 반응액을 중화하고 정제수로 희석한 뒤 세포 수를 측정하였고, 그 결과를 도 15로 나타내었다.Gram-negative bacteria mock agent was decontaminated with a 2% (v/v) concentration of hydrogen peroxide decontamination solution at 25°C and 37°C for 5 minutes without stirring. After the reaction time, the detoxification reaction solution was neutralized and diluted with purified water, and the number of cells was measured, and the results are shown in Figure 15.
도 15를 참조하면, 2%(v/v) 농도의 과산화수소 제독액으로 그람 음성균 시료를 제독한 결과, 25℃, 37℃에서 모두 콜로니가 나타나지 않았다. 따라서 과산화수소를 이용한 제독은 교반 없이 수행되어도 될 것으로 판단된다.Referring to Figure 15, when a Gram-negative bacteria sample was decontaminated with a 2% (v/v) concentration hydrogen peroxide decontamination solution, no colonies appeared at both 25°C and 37°C. Therefore, it is judged that decontamination using hydrogen peroxide can be performed without stirring.
(실시예 3-2) 과산화수소 - 바이러스(Example 3-2) Hydrogen peroxide - Virus
2%(v/v) 농도의 과산화수소 제독액으로 25℃, 37℃에서 교반 없이 15분간 바이러스 모의 작용제를 제독하였다. 반응 시간 경과 후 제독 반응액을 중화하고 정제수로 희석한 뒤 플라크 에세이를 수행하였고, 그 결과를 도 16으로 나타내었다.The virus simulation agent was decontaminated with a 2% (v/v) concentration of hydrogen peroxide decontamination solution at 25°C and 37°C for 15 minutes without agitation. After the reaction time had elapsed, the detoxification reaction solution was neutralized and diluted with purified water, and then a plaque assay was performed, and the results are shown in Figure 16.
도 16을 참조하면, 2%(v/v) 농도의 과산화수소 제독액으로 바이러스 시료를 제독한 결과, 온도에 무관하게 제독이 효율적으로 이루어짐을 확인하였다.Referring to Figure 16, as a result of decontamination of a virus sample with a hydrogen peroxide decontamination solution at a concentration of 2% (v/v), it was confirmed that decontamination was performed efficiently regardless of temperature.
(실시예 3-3) NaDCC - 그람 음성균(Example 3-3) NaDCC - Gram-negative bacteria
0.075%(w/v) 농도의 NaDCC 제독액으로 25℃, 37℃에서 교반 없이 5분간 그람 음성균 모의 작용제를 제독하였다. 반응 시간 경과 후 제독 반응액을 중화하고 정제수로 희석한 뒤 세포 수를 측정하였고, 그 결과를 도 17로 나타내었다.Gram-negative bacteria simulant was detoxified with NaDCC decontamination solution at a concentration of 0.075% (w/v) at 25°C and 37°C for 5 minutes without stirring. After the reaction time, the detoxification reaction solution was neutralized and diluted with purified water, and the number of cells was measured, and the results are shown in Figure 17.
도 17을 참조하면, 0.075%(w/v) 농도의 NaDCC 제독액으로 그람 음성균 시료를 제독한 결과, 교반이 없는 경우에는 25℃, 37℃에서 모두 콜로니가 나타났다. 한편, 실시예 2-3 및 도 11을 참조하면, 교반이 수반되는 경우[0.075%(w/v), 25℃, 5-15분, 200 rpm] NaDCC 제독액으로 그람 음성균을 완전 제독하였으므로, NaDCC 제독액으로 그람 음성균을 처리하는 경우 교반이 병행되어야 함을 알 수 있다.Referring to Figure 17, as a result of decontamination of a Gram-negative bacteria sample with NaDCC decontamination solution at a concentration of 0.075% (w/v), colonies appeared at both 25°C and 37°C in the absence of agitation. Meanwhile, referring to Example 2-3 and FIG. 11, when agitation was involved [0.075% (w/v), 25°C, 5-15 minutes, 200 rpm], Gram-negative bacteria were completely detoxified with NaDCC decontamination solution, It can be seen that when treating Gram-negative bacteria with NaDCC detoxification solution, stirring must be done in parallel.
(실시예 3-4) NaDCC - 바이러스(Example 3-4) NaDCC - Virus
0.05%(w/v) 농도의 NaDCC 제독액으로 25℃, 37℃에서 교반 없이 10분간 바이러스 모의 작용제를 제독하였다. 반응 시간 경과 후 제독 반응액을 중화하고 정제수로 희석한 뒤 플라크 에세이를 수행하였고, 그 결과를 도 18로 나타내었다.The virus simulation agent was detoxified with NaDCC decontamination solution at a concentration of 0.05% (w/v) at 25°C and 37°C for 10 minutes without stirring. After the reaction time had elapsed, the detoxification reaction solution was neutralized and diluted with purified water, and then a plaque assay was performed, and the results are shown in Figure 18.
도 18을 참조하면, 0.05%(w/v) 농도의 NaDCC 제독액으로 바이러스 시료를 제독한 결과, 교반 없이는 효율적인 제독이 이루어지지 않았다. 한편, 실시예 2-4, 도 12 및 표 10을 참조하면, 같은 조건에서 교반이 수반되는 경우[0.05%(w/v), 25℃, 5-15분, 200 rpm] NaDCC 제독액으로 바이러스를 완전 제독하였으므로, NaDCC 제독액으로 바이러스를 처리하는 경우 교반이 필요함을 알 수 있다.Referring to FIG. 18, when a virus sample was decontaminated with NaDCC decontamination solution at a concentration of 0.05% (w/v), efficient decontamination was not achieved without stirring. Meanwhile, referring to Example 2-4, Figure 12, and Table 10, when stirring is performed under the same conditions [0.05% (w/v), 25°C, 5-15 minutes, 200 rpm], the virus is Since it was completely decontaminated, it can be seen that agitation is necessary when treating the virus with NaDCC decontamination solution.
(실시예 3-5) 페라세이프 - 그람 음성균(Example 3-5) PeraSafe - Gram-negative bacteria
0.3%(w/v) 농도의 페라세이프 제독액으로 25℃, 37℃에서 교반 없이 5분간 그람 음성균 모의 작용제를 제독하였다. 반응 시간 경과 후 제독 반응액을 중화하고 정제수로 희석한 뒤 세포 수를 측정하였고, 그 결과를 도 19로 나타내었다.Gram-negative bacteria simulant was detoxified with 0.3% (w/v) concentration of Perasafe decontamination solution at 25°C and 37°C for 5 minutes without stirring. After the reaction time had elapsed, the detoxification reaction solution was neutralized and diluted with purified water, and the number of cells was measured, and the results are shown in Figure 19.
도 19을 참조하면, 0.3%(w/v) 농도의 페라세이프 제독액으로 교반 없이 그람 음성균 시료를 제독한 결과, 25℃, 37℃에서 모두 콜로니가 나타나지 않았다. 따라서 페라세이프를 이용한 제독은 교반 없이 수행되어도 됨을 확인하였다.Referring to Figure 19, as a result of decontamination of a Gram-negative bacteria sample without stirring with a 0.3% (w/v) concentration of Perasafe decontamination solution, no colonies appeared at both 25°C and 37°C. Therefore, it was confirmed that decontamination using PeraSafe can be performed without agitation.
(실시예 3-6) 페라세이프 - 바이러스(Example 3-6) PeraSafe - Virus
0.3%(w/v) 농도의 페라세이프 제독액으로 25℃, 37℃에서 교반 없이 10분간 바이러스 모의 작용제를 제독하였다. 반응 시간 경과 후 제독 반응액을 중화하고 정제수로 희석한 뒤 플라크 에세이를 수행하였고, 그 결과를 도 20으로 나타내었다.The virus simulation agent was detoxified with 0.3% (w/v) concentration of Perasafe decontamination solution at 25°C and 37°C for 10 minutes without stirring. After the reaction time had elapsed, the detoxification reaction solution was neutralized and diluted with purified water, and then a plaque assay was performed, and the results are shown in Figure 20.
도 20을 참조하면, 0.3%(w/v) 농도의 페라세이프 제독액으로 바이러스 시료를 제독한 결과, 교반 유무에 관계 없이 효율적으로 제독이 이루어졌다.Referring to Figure 20, as a result of decontamination of a virus sample with PeraSafe decontamination solution at a concentration of 0.3% (w/v), decontamination was performed efficiently regardless of the presence or absence of agitation.
상기 실시예에 따른 그람 음성균에 대한 제독제 성능 시험 결과를 표 12로, 바이러스에 대한 제독제 성능 시험 결과를 표 13으로 나타내었다. Table 12 shows the results of the decontamination performance test against Gram-negative bacteria according to the above examples, and Table 13 shows the results of the performance test of the decontamination agent against viruses.
표 12를 참조하면, 그람 음성균(109 cfu/mL)에 대하여 과산화수소는 2%(v/v) 이상, 페라세이프는 0.3%(w/v) 이상, NaDCC는 0.075%(w/v) 이상에서 모두 5분 내에 완전 제독이 확인되었다. 표 13을 참조하면, 바이러스(109 pfu/mL)의 경우 과산화수소는 2%(v/v) 이상의 고농도로 15분 만에 완전 제독되었고, NaDCC와 페라세이프는 각각 0.05%(w/v) 이상, 0.3%(w/v) 이상의 낮은 농도에서 10분 만에 완전 제독이 확인되었다. 그람 음성균과 바이러스에 대하여, NaDCC는 가장 낮은 농도에서 제독이 가능하였으나 교반이 병행되어야 효율을 나타내었으며, 과산화수소와 페라세이프는 교반 없이도 효율적으로 제독되었다. Referring to Table 12, for Gram-negative bacteria (10 9 cfu/mL), hydrogen peroxide is more than 2% (v/v), Perasafe is more than 0.3% (w/v), and NaDCC is more than 0.075% (w/v). Complete decontamination was confirmed within 5 minutes. Referring to Table 13, in the case of viruses (10 9 pfu/mL), hydrogen peroxide was completely decontaminated in 15 minutes at a high concentration of 2% (v/v) or more, and NaDCC and Perasafe were each 0.05% (w/v) or more. , complete decontamination was confirmed in 10 minutes at low concentrations of 0.3% (w/v) or higher. For Gram-negative bacteria and viruses, NaDCC was capable of decontamination at the lowest concentration, but was effective only when agitated. Hydrogen peroxide and PeraSafe were efficiently decontaminated even without agitation.
지금까지 본 발명에 따른 생물학 작용제의 제독 방법에 관한 구체적인 실시예에 관하여 설명하였으나, 본 발명의 범위에서 벗어나지 않는 한도 내에서는 여러 가지 실시 변형이 가능함은 자명하다.Although specific embodiments of the method for decontamination of biological agents according to the present invention have been described so far, it is obvious that various modifications can be made without departing from the scope of the present invention.
그러므로 본 발명의 범위는 설명된 실시예에 국한되어 정해져서는 안 되며, 후술하는 특허청구범위뿐만 아니라 이 특허청구범위와 균등한 것들에 의해 정해져야 한다.Therefore, the scope of the present invention should not be limited to the described embodiments, but should be determined by the claims and equivalents thereof as well as the claims described later.
즉, 전술된 실시예는 모든 면에서 예시적인 것이며, 한정적인 것이 아닌 것으로 이해되어야 하며, 본 발명의 범위는 상세한 설명보다는 후술될 특허청구범위에 의하여 나타내어지고, 그 특허청구범위의 의미 및 범위 그리고 그 등가 개념으로부터 도출되는 모든 변경 또는 변형된 형태가 본 발명의 범위에 포함되는 것으로 해석되어야 한다.That is, the above-described embodiments should be understood in all respects as illustrative and not restrictive, and the scope of the present invention is indicated by the claims to be described later rather than the detailed description, and the meaning and scope of the claims and All changes or modified forms derived from the equivalent concept should be construed as falling within the scope of the present invention.
Claims (17)
a) 과산화수소;
b) 이염화아이소사이아누르산나트륨(sodium dichloroisocyanurate, NaDCC); 또는
c) 과붕산나트륨 및 테트라아세틸에틸렌디아민(tetraacetylethylenediamine, TAED)을 포함한 조성물 중 선택된 하나를 포함하는 제독제를 처리하는,
생물학 작용제의 제독 방법.
For biological agents in vitro,
a) hydrogen peroxide;
b) sodium dichloroisocyanurate (NaDCC); or
c) treating with a detoxifying agent comprising a selected one of the compositions comprising sodium perborate and tetraacetylethylenediamine (TAED),
Methods of decontamination of biological agents.
상기 생물학 작용제는
그람 음성균, 바이러스, 또는 그람 음성균 및 바이러스를 함유한 용액인 것을 특징으로 하는,
생물학 작용제의 제독 방법.
According to paragraph 1,
The biological agent is
Characterized in that it is a solution containing gram-negative bacteria, viruses, or gram-negative bacteria and viruses.
Methods of decontamination of biological agents.
상기 그람 음성균은 1Х109 cfu/mL 이하인 것을 특징으로 하는,
생물학 작용제의 제독 방법.
According to paragraph 2,
The gram-negative bacteria are characterized in that they are 1Х10 9 cfu/mL or less,
Methods of decontamination of biological agents.
상기 바이러스는 3Х109 pfu/mL 이하인 것을 특징으로 하는,
생물학 작용제의 제독 방법.
According to paragraph 2,
The virus is characterized in that it is 3Х10 9 pfu/mL or less,
Methods of decontamination of biological agents.
제독제와 체외의 생물학 작용제를 반응시키는 2단계; 및
반응물을 중화시키는 3단계를 포함하고,
상기 제독제는
a) 과산화수소;
b) 이염화아이소사이아누르산나트륨(sodium dichloroisocyanurate, NaDCC); 또는
c) 과붕산나트륨 및 테트라아세틸에틸렌디아민(tetraacetylethylenediamine, TAED)을 포함한 조성물 중 선택된 하나를 포함하는 것을 특징으로 하는,
생물학 작용제의 제독 방법.
Step 1: manufacturing decontamination agent;
a second step of reacting the decontamination agent with an in vitro biological agent; and
It includes three steps of neutralizing the reactants,
The decontamination agent
a) hydrogen peroxide;
b) sodium dichloroisocyanurate (NaDCC); or
c) comprising a composition selected from the group consisting of sodium perborate and tetraacetylethylenediamine (TAED),
Methods of decontamination of biological agents.
상기 2단계의 반응은
0 내지 250 rpm, 15 내지 45℃에서
5 내지 20 분간 수행되는 것을 특징으로 하는,
생물학 작용제의 제독 방법.
According to clause 5,
The reaction in step 2 above is
0 to 250 rpm, 15 to 45°C
Characterized in that it is carried out for 5 to 20 minutes,
Methods of decontamination of biological agents.
상기 3단계의 중화는
티오황산나트륨(sodium thiosulfate)을 첨가하는 것을 특징으로 하는,
생물학 작용제의 제독 방법.
According to clause 5,
The neutralization in the above three steps is
Characterized by adding sodium thiosulfate,
Methods of decontamination of biological agents.
상기 제독제의 농도는 상기 생물학 작용제에 대하여 1%(v/v) 이상인 것을 특징으로 하는,
생물학 작용제의 제독 방법.
Treating biological agents outside the body with detoxifying agents containing hydrogen peroxide,
Characterized in that the concentration of the detoxifying agent is 1% (v/v) or more relative to the biological agent,
Methods of decontamination of biological agents.
상기 제독제의 농도는 상기 생물학 작용제에 대하여 2%(v/v) 이상이고,
20분 이내에 완전 제독되는 것을 특징으로 하는,
생물학 작용제의 제독 방법.
According to clause 8,
The concentration of the detoxifying agent is 2% (v/v) or more relative to the biological agent,
Characterized by complete decontamination within 20 minutes,
Methods of decontamination of biological agents.
15 내지 45℃에서 교반 없이 수행되는 것을 특징으로 하는,
생물학 작용제의 제독 방법.
According to clause 8,
Characterized in that it is carried out without stirring at 15 to 45 ° C.
Methods of decontamination of biological agents.
상기 제독제의 농도는 상기 생물학 작용제에 대하여 0.03%(w/v) 이상인 것을 특징으로 하는,
생물학 작용제의 제독 방법.
Detoxifying agents containing sodium dichloroisocyanurate (NaDCC) are treated with biological agents outside the body;
Characterized in that the concentration of the detoxifying agent is 0.03% (w/v) or more relative to the biological agent,
Methods of decontamination of biological agents.
상기 제독제의 농도는 상기 생물학 작용제에 대하여 0.05%(w/v) 이상이고,
15분 이내에 완전 제독되는 것을 특징으로 하는,
생물학 작용제의 제독 방법.
According to clause 11,
The concentration of the detoxifying agent is 0.05% (w/v) or more relative to the biological agent,
Characterized by complete decontamination within 15 minutes,
Methods of decontamination of biological agents.
15 내지 45℃에서 교반을 수반하여 수행되는 것을 특징으로 하는,
생물학 작용제의 제독 방법.
According to clause 11,
Characterized in that it is carried out with stirring at 15 to 45 ° C.
Methods of decontamination of biological agents.
상기 제독제의 농도는 상기 생물학 작용제에 대하여 0.05%(w/v) 이상인 것을 특징으로 하는,
생물학 작용제의 제독 방법.
A decontamination agent comprising a composition comprising sodium perborate and tetraacetylethylenediamine (TAED) is used to treat biological agents in vitro;
Characterized in that the concentration of the detoxifying agent is 0.05% (w/v) or more relative to the biological agent,
Methods of decontamination of biological agents.
상기 제독제의 농도는 상기 생물학 작용제에 대하여 0.3%(w/v) 이상이고,
15분 이내에 완전 제독되는 것을 특징으로 하는,
생물학 작용제의 제독 방법.
According to clause 14,
The concentration of the detoxifying agent is 0.3% (w/v) or more relative to the biological agent,
Characterized by complete decontamination within 15 minutes,
Methods of decontamination of biological agents.
15 내지 45℃에서 교반 없이 수행되는 것을 특징으로 하는,
생물학 작용제의 제독 방법.
According to clause 14,
Characterized in that it is carried out without stirring at 15 to 45 ° C.
Methods of decontamination of biological agents.
상기 생물학 작용제는 그람 음성균 및 바이러스를 함유한 용액인 것을 특징으로 하는,
생물학 작용제의 제독 방법.
According to any one of claims 8 to 16,
Characterized in that the biological agent is a solution containing gram-negative bacteria and viruses.
Methods of decontamination of biological agents.
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|---|---|---|---|
| KR1020230065274A KR102613224B1 (en) | 2023-05-19 | 2023-05-19 | Detoxification method of biological agents |
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| KR20210085075A (en) * | 2019-12-30 | 2021-07-08 | 주식회사 에이치피앤씨 | Peracetic acid disinfectant composition for medical devices with improved stability |
| KR20230006463A (en) | 2020-03-18 | 2023-01-10 | 코르티칼리스 에이에스 | Improved Liquid Compositions for Cleaning, Disinfection and/or Sterilization |
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2023
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