KR102612706B1 - Composition for modifying a clock gene expression - Google Patents
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Abstract
시계 유전자의 발현을 변화시키고, 또한, 해당 발현 변화에 의해 일주기 생체 리듬을 변화시키기 위한 조성물을 제공하는 것을 목적으로 하며, 예의 검토한 결과, 자귀나무 수피의 수추출물이, 시계 유전자의 발현량과 위상을 변화시킨다는 것을 밝혀내었다. 또한, 자귀나무 수피의 수추출물의 경구투여에 의해, 피험자의 오후의 졸음이 감소하고, 또한 각성도, 의욕, 기분 및 집중력이 증가하여, 아침형인 경향이 강해진다는 것을 밝혀내었다.The purpose is to provide a composition for changing the expression of clock genes and also changing the circadian rhythm by changing the expression, and as a result of careful examination, it has been found that the water extract of silkworm bark has the same effect as the expression level of clock genes. It was found that the phase changes. In addition, it was found that oral administration of a water extract of silkworm bark reduced the subjects' afternoon drowsiness, and also increased their alertness, motivation, mood, and concentration, making them more likely to be morning-type subjects.
Description
본 발명은, 자귀나무 수피(樹皮)의 수추출물(水抽出物)을 유효 성분으로 포함하는, 시계 유전자((時計遺傳子)의 발현을 변화시키기 위한 조성물에 관한 것이다. 또한, 본 발명은, 해당 추출물을 유효 성분으로 포함하는, 일주기 생체 리듬을 변화시키기 위한 조성물에 관한 것이다.The present invention relates to a composition for changing the expression of clock genes, which contains a water extract of silkworm bark as an active ingredient. In addition, the present invention relates to a composition for changing the expression of clock genes, It relates to a composition for changing circadian rhythm, comprising the extract as an active ingredient.
지구에 존재하는 대부분의 생물은, 외부 환경(주로 명암 사이클)에 따라, 약 24시간 주기로, 생리 기능(수면 각성, 체온 조절, 섭식 배설, 호르몬 분비 등)을 제어하고 있으며, 이러한 생물학적인 일주 변동을 「일주기 생체 리듬(서캐디언 리듬(circadian rhythms)」이라고 부른다. Most living things on Earth control their physiological functions (sleep and awakening, temperature regulation, feeding and excretion, hormone secretion, etc.) in approximately 24-hour cycles, depending on the external environment (mainly light and dark cycle), and these biological diurnal fluctuations These are called “circadian rhythms.”
최근, 이러한 일주기 생체 리듬의 이상(異常)으로 심신의 다양한 부조(不調)가 일어나는 것이 사회적인 문제가 되고 있다. 예를 들면, 항공기 등의 이동에 의한 시차 후유증, 쉬프트 워크(교대 근무) 등에 의한 불규칙한 생활 패턴에 기인한 수면 장해, 야간형 생활(밤샘, 야근 등)에 의한 수면 각성 리듬 등의 변조 등, 생활 환경·노동 환경의 변화 등에 의한 일주기 생체 리듬의 혼란이 일으키는 문제가 많다. 또한, 노화에 따라, 일주기 생체 리듬을 조정하는 멜라토닌 등의 호르몬 분비량이 저하되기 때문에, 수면 각성, 체온 조절 등의 다양한 리듬이, 고령자에 있어서는 감쇠하게 된다. 노후의 수면 장해 등에 의한 QOL의 저하도, 최근의 급속한 고령화와 함께, 사회적인 문제로서 우려되고 있다. 이러한 현상을 감안하면, 일주기 생체 리듬의 변조나 감쇠 등을 해소하고, 나아가서는 상기 수면 장해등을 치료, 개선할 수 있는 방법이 요구되고 있지만, 이러한 방법은 아직도 확립되어 있지 않는 상황에 있다.Recently, the occurrence of various imbalances in the mind and body due to abnormalities in the circadian rhythm has become a social problem. For example, aftereffects of jet lag due to movement on airplanes, etc., sleep disorders due to irregular life patterns due to shift work, etc., and modulation of sleep-wake rhythm due to nocturnal lifestyle (staying up all night, working overtime, etc.), etc. There are many problems caused by disruption of the circadian rhythm due to changes in the environment and work environment. Additionally, with aging, the secretion amount of hormones such as melatonin, which regulates the circadian rhythm, decreases, so various rhythms such as sleep awakening and body temperature regulation decrease in elderly people. Deterioration of QOL due to sleep disorders in old age is also a growing concern as a social problem along with the recent rapid aging population. Considering this phenomenon, there is a need for a method that can eliminate the modulation or attenuation of the circadian rhythm, and further treat and improve the sleep disorders, etc., but such a method has not yet been established.
일주기 생체 리듬은, 포유류에 있어서, 좌우의 눈의 망막에서부터 뻗은 시신경이, 뇌내의 시상하부(視床下部)에서 교차하고 있는 시신경 교차 부위(시 교차) 상에 존재하는 직경이 불과 1밀리 정도의 작은 신경 핵인 시교차상핵(SCN)이 제어의 중심이 되고 있다. 그리고, SCN가 만들어 내고 있는 일주기 생체 리듬은, 시계 유전자(Bmal1, Clock, Period, Cryptochrome 등)라고 하는 유전자군에 의해 형성되고 있다. 보다 구체적으로는, 전사 활성화 인자 BMAL1 및 CLOCK 단백질이, Period 및 Cryptochrome 유전자의 발현을 활성화하고, 이에 따라 전사 번역된 Period(PER1, PER2) 및 Cryptochrome(CRY1, CRY2) 단백질이, BMAL1 및 CLOCK 단백질과 상호작용 하는 것에 의해, 스스로의 전사를 억제한다고 하는 네가티브 피드백을 형성하고 있다. 그 후, PER 및 CRY 단백질은, 인산화 및 유비퀴틴화 수식을 받은 후, 프로테아솜(proteasome)으로 분해되기 때문에, 상기 전사 억제제가 해제되게 된다. 그리고, BMAL1 및 CLOCK 단백질에 의한 다음의 사이클이 개시되어 이 사이클의 1주에 약 24시간을 필요로 하는 것이, 일주기 생체 리듬 형성의 분자 메카니즘이다.In mammals, the circadian rhythm is a region of only about 1 millimeter in diameter that exists at the optic chiasm, where the optic nerves extending from the retinas of the left and right eyes intersect in the hypothalamus in the brain. The suprachiasmatic nucleus (SCN), a small nerve nucleus, is the center of control. And, the circadian rhythm created by the SCN is formed by a group of genes called clock genes (Bmal1, Clock, Period, Cryptochrome, etc.). More specifically, the transcriptional activators BMAL1 and CLOCK proteins activate the expression of Period and Cryptochrome genes, and thus the transcriptionally translated Period (PER1, PER2) and Cryptochrome (CRY1, CRY2) proteins interact with BMAL1 and CLOCK proteins. By interacting, they form a negative feedback that inhibits their own transcription. Afterwards, PER and CRY proteins undergo phosphorylation and ubiquitination modifications and are then degraded by the proteasome, thereby releasing the transcriptional repressors. Then, the next cycle is initiated by BMAL1 and CLOCK proteins, and this cycle requires approximately 24 hours per week, which is the molecular mechanism of circadian rhythm formation.
이러한 시계 유전자의 피드백 기구는, 간장이나 근육, 폐, 심장이라고 하는 말초 조직, 뇌 안의 SCN 이외의 조직에도 존재하고 있어, 해당 기구에 의해 말초 조직 등에 있어서도 일주기 생체 리듬을 형성하는 것이 밝혀지고 있다. 또한, 그 리듬은, 제어의 중심인 SCN가, 여러가지 조직을 개입시켜 신경·호르몬 등에 의한 시그널을 내는 것에 의해 제어되고 있다.This clock gene feedback mechanism also exists in peripheral tissues such as the liver, muscles, lungs, and heart, and in tissues other than the SCN in the brain, and it has been revealed that this mechanism forms circadian rhythms in peripheral tissues as well. . Additionally, the rhythm is controlled by the SCN, which is the center of control, sending out signals by nerves, hormones, etc. through various tissues.
이와 같이, 일주기 생체 리듬은, 시계 유전자의 발현에 의해 제어된다. 그 때문에, 해당 발현을 변화시키는 것에 의해, 일주기 생체 리듬을 변화시키고, 나아가서는 이러한 리듬 이상에 의한 수면 장해 등을 치료 할 수 있는 물질의 탐색이 진행되고 있다(특허 문헌 1~2).In this way, circadian rhythms are controlled by the expression of clock genes. Therefore, the search for substances that can change the circadian biological rhythm by changing its expression and further treat sleep disorders caused by abnormalities in this rhythm is in progress (Patent Documents 1 and 2).
본 발명은, 상기 종래 기술이 가지는 과제를 감안하여 이루어진 것으로, 시계 유전자의 발현을 변화시키고, 또한 해당 발현 변화에 의해 일주기 생체 리듬을 변화시키기 위한 물질을 제공하는 것을 목적으로 한다.The present invention was made in consideration of the problems of the prior art, and aims to provide a substance for changing the expression of clock genes and changing the circadian rhythm by changing the expression.
본 발명자들은, 상기 목적을 달성하기 위하여 예의 연구를 거듭한 결과, 자귀나무 수피의 수추출물을 마우스 배아 섬유 아세포에 첨가하는 것에 의해, 해당 세포의 시계 유전자(Per2 유전자)의 발현 리듬에 있어서, 그 진폭의 경과적 감쇠를 억제할 수 있다는 것을 발견하였다. 게다가 상기 추출물은, 세포에 대한 투여의 타이밍 여하에 따라, Per2 유전자의 발현 리듬의 피크(위상)를, 농도 의존적으로 전진시키는 것도, 또는 후퇴시킬 수도 있다는 것을, 본 발명자들은 밝혀내었다.The present inventors have conducted extensive research to achieve the above object, and as a result, by adding an aqueous extract of silkworm bark to mouse embryonic fibroblast cells, the expression rhythm of the clock gene (Per2 gene) of the cells is affected. It was discovered that the temporal decay of amplitude could be suppressed. Furthermore, the present inventors found that the extract can advance or retract the peak (phase) of the expression rhythm of the Per2 gene in a concentration-dependent manner, depending on the timing of administration to the cells.
또한, 자귀나무 수피의 수추출물을 마우스에 경구투여하여, 그 말초 조직(간장)에서의 시계 유전자(Per1, Per2, Bmal1)의 발현을 해석하였다. 그 결과, 상기 추출물에 의해, 말초 조직에 대해서도, 시계 유전자의 발현량 및 위상이 변화하는 것을, 본 발명자들은 밝혀내었다.Additionally, an aqueous extract of silkworm bark was orally administered to mice, and the expression of clock genes (Per1, Per2, Bmal1) in the peripheral tissue (liver) was analyzed. As a result, the present inventors found that the expression level and phase of clock genes were changed also in peripheral tissues by the extract.
또, 자귀나무 수피의 수추출물을 사람에게 경구투여한 결과, 상술한 해당 추출물의 시계 유전자의 발현을 변화시키는 작용을 반영한 것과 같이, 피험자의 아침형인 경향이 강해지고(수면 상태에 들어가는 것이 빠르고, 아침 일찍 일어나는 것도 쉬움), 오후의 졸음이 감소하며, 활동성(각성도, 의욕, 기분 및 집중력)은 향상된다는 것을 발견하여 본 발명을 완성하기에 이르렀다.In addition, as a result of orally administering the water extract of silkworm bark to humans, the subject's tendency to be a morning person became stronger (they enter the sleep state more quickly), as reflected by the extract's effect of changing the expression of clock genes described above. The present invention was completed by discovering that it is easier to wake up early in the morning, afternoon drowsiness is reduced, and activity (alertness, motivation, mood, and concentration) is improved.
즉, 본 발명은, 이하를 제공하는 것이다.That is, the present invention provides the following.
＜1＞ 자귀나무 수피의 수추출물을 유효 성분으로서 포함하는, 시계 유전자의 발현을 변화시키기 위한 조성물.<1> A composition for changing the expression of clock genes, comprising a water extract of silkworm bark as an active ingredient.
＜2＞ 시계 유전자가, Per1 유전자, Per2 유전자 및 Bmal1 유전자로 된 군으로부터 선택되는 적어도 1의 유전자인,＜1＞에 기재한 조성물.<2> The composition according to <1>, wherein the clock gene is at least one gene selected from the group consisting of Per1 gene, Per2 gene, and Bmal1 gene.
＜3＞ 일주기 생체 리듬을 변화시키기 위한 조성물인,＜1＞ 또는 ＜2＞에 기재한 조성물.<3> The composition according to <1> or <2>, which is a composition for changing the circadian rhythm.
본 발명에 의하면, 시계 유전자의 발현을 변화시키고, 또한 해당 발현 변화에 의해 일주기 생체 리듬을 변화시키는 것이 가능하게 된다. 그리고, 이러한 변화에 의해, 일주기 생체 리듬에서의 이상(異常)을 해소할 수가 있기 때문에, 본 발명에 의하면, 해당 이상으로 기인하는 질환(일주기 생체 리듬 장해 등)의 치료, 개선(완화) 또는 예방을 하는 것도 가능하게 된다.According to the present invention, it becomes possible to change the expression of clock genes and to change the circadian biological rhythm by changing the expression. And, since abnormalities in the circadian biological rhythm can be resolved by these changes, according to the present invention, diseases (circadian biological rhythm disorders, etc.) caused by the abnormalities can be treated and improved (alleviated). Or, prevention is also possible.
도 1은 시계 유전자의 발현 리듬, 또는 그것에 의해 제어되는 일주기 생체 리듬을 개략적으로 나타낸 파형 그래프이다.
도 2는 자귀나무 수피의 수추출물(50 ㎍/㎖ 혹은 100 ㎍/㎖) 또는 대조로서 증류수(DW)를 첨가한, 마우스 배아 섬유 아세포에서의, Per2 유전자의 발현 리듬을 나타내는, 파형 그래프이다. 도면 중에서 횡축은, 각 세포에서의 Per2 유전자등의 시계 유전자의 발현 사이클을 재설정하여 동조시키기 때문에, 덱사메타손(Dexamethasone)을 배지에 첨가한 후의 일수를 나타낸 것이다.
도 3은 마우스에의 자귀나무 수피의 수추출물 투여 시험의 스케줄을 나타낸, 개략도이다.
도 4는 자귀나무 수피의 수추출물(1 mg 혹은 10 mg) 또는 대조(cont. )로서 증류수를 경구투여한 마우스에서의, Per1 유전자의 발현량을 나타낸, 그래프이다.
도 5는 자귀나무 수피의 수추출물(1 mg 혹은 10 mg) 또는 대조(cont. )로서 증류수를 경구투여한 마우스에서의, Per2 유전자의 발현량을 나타낸, 그래프이다.
도 6은 자귀나무 수피의 수추출물(1 mg 혹은 10 mg) 또는 대조(cont. )로서 증류수를 경구투여한 마우스에서의, Bmal1 유전자의 발현량을 나타낸, 그래프이다.
도 7은 마우스에서의 Per1 유전자의 발현량의 경시적 변화를 나타낸 그래프이다. 또한, 종축은, Per1 유전자의 발현량을, Gapdh 유전자의 것을 기준으로 한 상대값으로 나타낸 것이다. 횡축은, 명암 조건하에서의 시각(ZT；Zeitgeber Time, 명기 개시 시간을 ZT0로 함)을 나타낸 것이다.
도 8은 자귀나무 수피의 수추출물을 오전 중에 섭취한 사람이, 수면 검사(관서학원대학식 졸음이 오는 척도, KSS)를 받은 결과를 나타낸 그래프이다.
도 9는 자귀나무 수피의 수추출물을 오전 중에 섭취한 사람이, 수면 검사(시각적 아날로그 평가 척도, VAS)를 받은 결과(각성도)를 나타낸 그래프이다.
도 10은 자귀나무 수피의 수추출물을 오전 중에 섭취한 사람이, 수면 검사(시각적 아날로그 평가 척도, VAS)를 받은 결과(의욕)를 나타낸 그래프이다.
도 11은 자귀나무 수피의 수추출물을 오전 중에 섭취한 사람이, 수면 검사(시각적 아날로그 평가 척도, VAS)를 받은 결과(기분)를 나타낸 그래프이다.
도 12는 자귀나무 수피의 수추출물을 오전 중에 섭취한 사람이, 수면 검사(시각적 아날로그 평가 척도, VAS)를 받은 결과(집중력)를 나타낸 그래프이다.
도 13은 자귀나무 수피의 수추출물을 오전 중에 섭취한 사람이, 수면 검사(아침형·야간형 질문지, MEQ)를 받은 결과를 나타낸 그래프이다.
도 14는 자귀나무 수피의 수추출물을 석식 때 섭취한 사람이, 수면 검사(아침형·야간형 질문지, MEQ)를 받은 결과를 나타낸 그래프이다.Figure 1 is a waveform graph schematically showing the expression rhythm of a clock gene, or the circadian biological rhythm controlled by it.
Figure 2 is a waveform graph showing the expression rhythm of the Per2 gene in mouse embryonic fibroblasts added with an aqueous extract of silkworm bark (50 μg/ml or 100 μg/ml) or distilled water (DW) as a control. In the figure, the horizontal axis represents the number of days after adding Dexamethasone to the medium to reset and synchronize the expression cycle of clock genes such as the Per2 gene in each cell.
Figure 3 is a schematic diagram showing the schedule of administration test of aqueous extract of silkworm bark to mice.
Figure 4 is a graph showing the expression level of the Per1 gene in mice orally administered with an aqueous extract of silkworm bark (1 mg or 10 mg) or distilled water as a control (cont.).
Figure 5 is a graph showing the expression level of the Per2 gene in mice orally administered with an aqueous extract of silkworm bark (1 mg or 10 mg) or distilled water as a control (cont.).
Figure 6 is a graph showing the expression level of the Bmal1 gene in mice orally administered with an aqueous extract of silkworm bark (1 mg or 10 mg) or distilled water as a control (cont.).
Figure 7 is a graph showing changes in the expression level of the Per1 gene over time in mice. Additionally, the vertical axis represents the expression level of the Per1 gene as a relative value based on that of the Gapdh gene. The horizontal axis represents the time (ZT; Zeitgeber Time, with the light start time being ZT0) under light/dark conditions.
Figure 8 is a graph showing the results of a sleep test (Kanseo Academy School Drowsiness Scale, KSS) of a person who consumed a water extract of silkworm bark in the morning.
Figure 9 is a graph showing the results (alertness) of a person who consumed a water extract of silkworm bark in the morning and underwent a sleep test (visual analog assessment scale, VAS).
Figure 10 is a graph showing the results (motivation) of a person who took a water extract of silkworm bark in the morning and underwent a sleep test (visual analog assessment scale, VAS).
Figure 11 is a graph showing the results (mood) of a sleep test (visual analog assessment scale, VAS) of a person who consumed a water extract of silkworm bark in the morning.
Figure 12 is a graph showing the results (concentration) of a person who consumed a water extract of silkworm bark in the morning and underwent a sleep test (visual analog assessment scale, VAS).
Figure 13 is a graph showing the results of a sleep test (morning/night questionnaire, MEQ) of a person who consumed a water extract of silkworm bark in the morning.
Figure 14 is a graph showing the results of a sleep test (morning/night questionnaire, MEQ) of a person who consumed a water extract of silkworm bark at dinner.
후술하는 실시예에 나타낸 바와 같이, 본 발명에 있어서, 자귀나무 수피의 수추출물은, 시계 유전자의 발현량 및 위상을 변화시킬 수 있다는 것이 밝혀졌다. 또한, 시계 유전자의 발현 변화를 통해서, 해당 유전자가 제어하는 일주기 생체 리듬도, 상기 추출물이 변화시킬 수가 있다. 따라서, 본 발명은, 자귀나무 수피의 수추출물을 유효 성분으로서 포함하는, 시계 유전자의 발현을 변화시키기 위한 조성물을 제공한다. 또한, 본 발명은, 해당 추출물을 유효 성분으로서 포함하는, 일주기 생체 리듬을 변화시키기 위한 조성물을 제공한다.As shown in the examples described later, in the present invention, it has been revealed that the aqueous extract of silkworm bark can change the expression level and phase of clock genes. Additionally, through changes in the expression of clock genes, the extract can also change the circadian rhythm controlled by the genes. Accordingly, the present invention provides a composition for changing the expression of clock genes, comprising an aqueous extract of silkworm bark as an active ingredient. Additionally, the present invention provides a composition for changing circadian rhythm, comprising the extract as an active ingredient.
자귀나무 수피의 수추출물Water extract of silkworm bark
먼저, 본 발명의 조성물에 대해, 유효 성분으로 포함하는 「자귀나무 수피의 수추출물」에 대해 설명한다. 「자귀나무」는, 콩과 자귀나무 아과에 속하는 낙엽 고목의 식물(Albizia julibrissin)를 의미한다. 이 자귀나무의 수피를, 다음과 같이 추출 처리를 하는 경우에는, 수피 그대로도 좋지만, 추출 효율을 보다 높인다고 하는 관점에서, 믹서, 블렌더(blender), 균질기(homogenizer), 약절구, 초음파 파쇄기 등에 의해 파쇄 한 다음, 추출 처리하는 것도 좋다. First, the composition of the present invention will explain the “aqueous extract of silkworm bark” included as an active ingredient. “Albizia julibrissin” refers to a deciduous old tree plant (Albizia julibrissin) belonging to the legume and silkworm subfamily. When extracting the bark of this silkworm tree as follows, the bark can be used as is, but from the viewpoint of increasing extraction efficiency, it can be used with a mixer, blender, homogenizer, mortar, ultrasonic crusher, etc. It is also good to crush it and then extract it.
본 발명에 있어서, 추출 처리에 이용되는 용매로서는, 물 뿐이어도 좋고, 또는, 물 이외에 다른 용매와의 혼합 용매이어도 좋다. 본 발명에 있어서 추출에 이용되는 물로는, 특히 제한은 없지만, 예를 들면, 증류수, 탈이온수, RO수, 초순수를 들 수 있다. 또한, 물과 혼합되는 다른 용매로는 특히 제한은 없지만, 예를 들면, 에탄올, 메탄올 등의 알콜류, 프로필렌 글리콜 등의 다가 알콜류, 초산메틸 등의 에스테르류를 들 수 있다. 또 혼합 비율도 특히 제한은 없지만, 물：다른 용매 = 90 ~ 50：10 ~ 50(체적비)인 것이 바람직하다.In the present invention, the solvent used in the extraction treatment may be only water, or may be a mixed solvent with a solvent other than water. There is no particular limitation on the water used for extraction in the present invention, but examples include distilled water, deionized water, RO water, and ultrapure water. Additionally, other solvents that can be mixed with water are not particularly limited, and examples include alcohols such as ethanol and methanol, polyhydric alcohols such as propylene glycol, and esters such as methyl acetate. There are no particular restrictions on the mixing ratio, but it is preferable that water:other solvent = 90 to 50:10 to 50 (volume ratio).
추출 조건도 특히 제한은 없고, 상기 이용되는 용매에 따라서 다르지만, 예를 들면, 물 만 이용하는 경우에는, 자귀나무의 수피 1 중량부에 대해서 1 ~ 100 중량부의 물을 이용하여 4 ~ 100℃의 온도로, 10분 ~ 7일에 걸쳐 추출하는 것이 바람직하고, 자귀나무의 수피 1 중량부에 대해서 5 ~ 20 중량부의 물을 이용하여 70 ~ 100℃의 온도에서, 30분 ~ 2시간 동안 추출하는 것이 보다 바람직하다. 또한, 추출 효율을 보다 높인다는 관점에서, 가압, 교반, 초음파 처리 등을, 추출 처리할 때에 함께 수행해도 좋다. 추가로, 이러한 추출 처리 후에, 여과나 원심분리에 의해 찌꺼기와 분리해도 좋다.The extraction conditions are also not particularly limited and vary depending on the solvent used, but for example, when only water is used, 1 to 100 parts by weight of water is used per 1 part by weight of silkworm bark, and the temperature is 4 to 100°C. It is preferable to extract over 10 minutes to 7 days, using 5 to 20 parts by weight of water per 1 part by weight of silkworm bark at a temperature of 70 to 100°C for 30 minutes to 2 hours. It is more desirable. Additionally, from the viewpoint of further increasing extraction efficiency, pressurization, stirring, ultrasonic treatment, etc. may be performed together with the extraction treatment. Additionally, after this extraction treatment, it may be separated from the residue by filtration or centrifugation.
본 발명에 따르면, 「자귀나무 수피의 수추출물」은, 추출액의 형태로 본 발명의 조성물에 이용할 수 있지만, 필요에 따라서, 이온 교환법, 겔 여과법, 막 분획법, 전기 투석법, 용매 유출법, 감압 농축법, 가열 처리법등에 의해, 농축하여도 좋다.According to the present invention, the "water extract of silkworm bark" can be used in the composition of the present invention in the form of an extract, but if necessary, it can be used by ion exchange method, gel filtration method, membrane fractionation method, electrodialysis method, solvent effluent method, It may be concentrated by a reduced pressure concentration method, a heat treatment method, etc.
더욱이, 「자귀나무 수피의 수추출물」은, 필요에 따라서, 분무 건조(spray-dry)나 동결 건조(freeze-dry) 등의 처리를 실시하는 것에 의해 건조시켜서, 분말로 해도 좋다.Furthermore, the “aqueous extract of silkworm bark” may be dried by subjecting it to spray-drying or freeze-drying, if necessary, and may be made into powder.
또한, 안전성의 관점에서, 「자귀나무 수피의 수추출물」에는, 살균 처리를 실시해도 좋다. 이러한 살균 처리로는, 가열 살균, 가압 살균, 방사선 살균, 필터 제균 등을 들 수 있다.Additionally, from the viewpoint of safety, sterilization treatment may be performed on the “water extract of silkworm bark.” Such sterilization treatments include heat sterilization, pressure sterilization, radiation sterilization, and filter sterilization.
또한, 이와 같이 조제된 「자귀나무 수피의 수추출물」은, 예를 들면, 그대로, 본 발명의 조성물로 사용할 수 있고, 후술하는 바와 같이, 다른 성분과 조합하는 것에 의해, 본 발명의 조성물로 사용해도 좋다.In addition, the “aqueous extract of silkworm bark” prepared in this way can be used, for example, as is in the composition of the present invention, and can be used in the composition of the present invention by combining it with other components, as described later. It's also good.
시계 유전자의 발현 또는 일주기 생체 리듬을 변화시키기 위한 조성물Composition for changing clock gene expression or circadian rhythm
다음에, 본 발명의 조성물의 실시형태에 대해 설명한다. 상술한 자귀나무 수피의 수추출물은, 후술하는 실시예에 나타낸 바와 같이, 시계 유전자의 발현을 변화시키는 것에 의해, 일주기 생체 리듬을 변화시키는 활성을 가진다. 따라서, 이것을 유효 성분으로 하는, 본 발명의 조성물은, 후술하는 일주기 생체 리듬 장해의 치료, 개선(완화) 또는 예방을 위한 의약 조성물, 음식품으로서 이용할 수가 있다. 또, 시계 유전자의 발현을 변화시키기 위한 시약, 일주기 생체 리듬을 변화시키기 위한 시약으로서 이용할 수가 있다.Next, embodiments of the composition of the present invention will be described. The above-mentioned water extract of silkworm bark has the activity of changing the circadian rhythm by changing the expression of clock genes, as shown in the Examples described later. Therefore, the composition of the present invention containing this as an active ingredient can be used as a pharmaceutical composition, food or drink for the treatment, improvement (alleviation) or prevention of circadian rhythm disorders described later. Additionally, it can be used as a reagent for changing the expression of clock genes and a reagent for changing circadian rhythms.
본 발명에 있어서, 「시계 유전자」란, 일주기 생체 리듬(체내 시계)을 제어하는 기능을 가진 유전자이면 되는 바, 예를 들면, Period 유전자(Per1, Per2, Per3 등), Bmal 유전자(Arntl, Mop3, Tic, Jap3, Pasd3, bHLHe5으로도 호칭되는 유전자, Bmal1, Bmal2 등), Cryptochrome 유전자(Cry1, Cry2 등), Clock 유전자, Ror 유전자, Reｖ－erb 유전자, E4BP 유전자, GSK3β 유전자, CK1 유전자, Dec 유전자 등을 들 수 있지만, 본 발명에 있어서, 바람직하게는, Per1 유전자, Per2 유전자, Bmal1 유전자이다.In the present invention, a “clock gene” can be any gene that has the function of controlling circadian biological rhythm (internal clock), for example, Period genes (Per1, Per2, Per3, etc.), Bmal genes (Arntl, Genes also called Mop3, Tic, Jap3, Pasd3, bHLHe5, Bmal1, Bmal2, etc.), Cryptochrome genes (Cry1, Cry2, etc.), Clock gene, Ror gene, Rev-erb gene, E4BP gene, GSK3β gene, CK1 gene, Examples include the Dec gene, but in the present invention, the Per1 gene, Per2 gene, and Bmal1 gene are preferred.
전형적으로, 사람의 Per1 유전자는, RefSeq ID：NP＿002607으로 특정되는 아미노산 서열로부터 되는 단백질을 코드하는 유전자(RefSeq ID：NM＿002616으로 특정되는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 유전자)이며, 사람의 Per2 유전자는, RefSeq ID：NP＿073728로 특정되는 아미노산 서열로부터 되는 단백질을 코드하는 유전자(RefSeq ID：NM＿003894 또는 NM＿022817으로 특정되는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 유전자)이며, 사람의 Bmal1 유전자는, RefSeq ID：NP＿001025443, NP＿001025444, NP＿001169, NP＿001284648또는 NP＿001284651으로 특정되는 아미노산 서열로부터 되는 단백질을 코드하는 유전자(RefSeq ID：NM＿001030272, NM＿001030273, NM＿001178, NM＿001297719또는 NM＿001297722로 특정되는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 유전자)이며, 마우스의 Per1 유전자는, RefSeq ID：NP＿001152839 또는 NP＿035195로 특정되는 아미노산 서열로부터 되는 단백질을 코드하는 유전자(RefSeq ID：NM＿001159367또는 NM＿011065로 특정되는 뉴클레오티드 서열을 포함한 유전자)여, 마우스의 Per2 유전자는, RefSeq ID：NP＿035196으로 특정되는 아미노산 서열로부터 되는 단백질을 코드하는 유전자(RefSeq ID：NM＿011066으로 특정되는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 유전자)이며, 마우스의 Bmal1 유전자는, RefSeq ID：NP＿001229977 또는 NP＿031515로 특정되는 아미노산 서열로부터 되는 단백질을 코드하는 유전자(RefSeq ID：NM＿001243048 또는 NM＿007489로 특정되는 뉴클레오티드 서열을 포함하는 유전자)이다. 또한, 자연계에서(즉, 비인공적으로) 뉴클레오티드 서열은 변화한다. 따라서, 본 발명에 따른 시계 유전자에는, 전형예로서 열거한 상기 서열에 특정되는 것은 아니며, 이러한 천연의 변이체도 포함된다.Typically, the human Per1 gene is a gene that codes for a protein made from the amino acid sequence specified by RefSeq ID: NP_002607 (a gene containing the nucleotide sequence specified by RefSeq ID: NM_002616), and the human Per2 gene is RefSeq ID: : It is a gene that codes for a protein made from the amino acid sequence specified by NP_073728 (a gene containing a nucleotide sequence specified by RefSeq ID: NM_003894 or NM_022817), and the human Bmal1 gene is RefSeq ID: NP_001025443, NP_001025444, NP＿001169, NP＿001284648 or It is a gene encoding a protein made from the amino acid sequence specified by NP_001284651 (RefSeq ID: a gene containing a nucleotide sequence specified by NM_001030272, NM_001030273, NM_001178, NM_001297719 or NM_001297722). , mouse Per1 gene, RefSeq ID: NP _ 001152839 or NP _ 035195 A gene encoding a protein derived from an amino acid sequence specified by RefSeq ID: NM_001159367 or a gene containing a nucleotide sequence specified by NM_011065), the mouse Per2 gene encodes a protein derived from an amino acid sequence specified by RefSeq ID: NP_035196. is a gene (a gene containing a nucleotide sequence specified by RefSeq ID: NM_011066), and the mouse Bmal1 gene is a gene (RefSeq ID: NM_001243048 or NM) that codes for a protein composed of an amino acid sequence specified by RefSeq ID: NP_001229977 or NP_031515. ＿007489 It is a gene containing a nucleotide sequence specified as. Additionally, in nature (i.e., non-artificially) nucleotide sequences vary. Therefore, the clock gene according to the present invention is not specific to the above sequences listed as typical examples, and also includes such natural variants.
본 발명에 있어서, 「시계 유전자의 발현」에는, 전사 레벨에서의 발현(mRNA로의 발현) 뿐만 아니라, 번역 레벨에서의 발현(단백질로의 발현)도 포함된다. 또한, 「시계 유전자의 발현의 변화」에는, 시계 유전자의 발현량의 증가 또는 저감에 추가해서, 시계 유전자의 발현 리듬(진폭, 위상 및 주기 길이 중 적어도 하나 1개)이 변화하는 것도 포함된다.In the present invention, “clock gene expression” includes not only expression at the transcription level (expression as mRNA) but also expression at the translation level (expression as protein). Additionally, “changes in clock gene expression” include changes in the expression rhythm (at least one of amplitude, phase, and cycle length) of clock genes in addition to an increase or decrease in the expression level of clock genes.
「진폭」이란, 도 1에 나타낸 바와 같이, 리듬에 있어서의 피크(peak)에서 바탐(bottom)까지의 길이(진동의 크기)를 말하며, 시계 유전자의 발현 리듬에 대해서는, 그 피크로부터 피크, 또는 바탐으로부터 바탐까지의 기간(일주기)에 있어서의 시계 유전자의 발현량의 폭을 나타낸다. 시계 유전자의 발현 리듬 및 그것에 의해 제어되는 일주기 생체 리듬에 대해서는, 노화에 따라, 그 진폭이 감쇠하는 것으로 알려져 있다. 한편, 후술하는 실시예에 나타낸 바와 같이, 자귀나무의 수피 수추출물은, 이러한 감쇠를 억제할 수 있다.As shown in Figure 1, "amplitude" refers to the length (magnitude of vibration) from the peak to the bottom in a rhythm, and for the expression rhythm of a clock gene, from the peak to the peak, or It represents the range of expression level of clock genes in the period from Batam to Batam (circadian cycle). It is known that the amplitude of the expression rhythm of clock genes and the circadian biological rhythm controlled by it decreases with aging. On the other hand, as shown in the examples described later, the bark extract of silkworm tree can suppress such attenuation.
「위상」이란, 일주기의 특정의 위치(예를 들면, 피크, 보텀)를 말한다. 또한, 「주기 길이」란, 도 1에 나타낸 바와 같이, 리듬에 있어서의 일주기의 길이(기간)를 말하며, 사람이라면 본래(정상) 약 24.3시간이다. 후술하는 실시예에 나타낸 바와 같이, 자귀나무 수피 수추출물은, 투여하는 또는 섭취하는 타이밍에 의해서, 시계 유전자의 발현 리듬 및 그것에 의해 제어되는 일주기 생체 리듬의 위상을 전진(도 1에 있어서는 파형을 좌측으로 쉬프트) 또는 후진(도 1에 있어서는 파형을 우측으로 쉬프트)시킬 수가 있기 때문에, 본 발명에 의하면, 후술하는 일주기 생체 리듬 장해 등에 대해 어긋난 위상을, 본래(정상)의 위상으로 조절할 수가 있다.“Phase” refers to a specific position (e.g., peak, bottom) of the daily cycle. In addition, as shown in FIG. 1, “cycle length” refers to the length (period) of the daily cycle in the rhythm, and for humans, it is originally (normally) about 24.3 hours. As shown in the examples described later, the silkworm bark extract advances the expression rhythm of the clock gene and the phase of the circadian rhythm controlled by it depending on the timing of administration or ingestion (waveform in Figure 1). Since the waveform can be shifted to the left or backward (the waveform is shifted to the right in Fig. 1), according to the present invention, the phase that is shifted due to circadian rhythm disorders, etc., which will be described later, can be adjusted to the original (normal) phase. .
이와 같이, 자귀나무 수피의 수추출물에 의해, 시계 유전자의 발현 리듬 및 그것에 의해 제어되는 일주기 생체 리듬에 있어서의 이상(진폭의 감쇠나, 위상의 차이 등)을 해소할 수가 있기 때문에, 상기 추출물을 유효 성분으로 하는 본 발명의 조성물에 의하면, 해당 이상으로 기인하는 질환(일주기 생체 리듬 장해 등)의 치료, 개선(완화) 또는 예방을 할 수가 있다.In this way, abnormalities (amplitude attenuation, phase difference, etc.) in the expression rhythm of clock genes and the circadian biological rhythm controlled by it can be resolved by the water extract of silkworm bark. According to the composition of the present invention containing as an active ingredient, it is possible to treat, improve (alleviate) or prevent diseases (circadian rhythm disorders, etc.) caused by the above abnormality.
일주기 생체 리듬 장해로는, 예를 들면, 수면상 전진 증후군(ASPS), 수면상 후퇴 증후군(DSPS), 비24시간 수면 각성 장해, 불규칙형 수면 각성 장해, 시차 후유증(시간대역 변화 증후군, 제트 시차 증후군), 쉬프트 워크에 의한 리듬 변조(교대 근무 수면 장해), 야간형 생활(밤샘, 야근 등)에 의한 생활 리듬의 변조, 고령자의 리듬 소실 등을 들 수 있다. 또한 이들 일주기 생체 리듬 장해에 부수 하는 불면, 컨디션 부진, 주의 결손, 의욕 저하, 피부염 등의 제증상의 치료, 개선(완화) 또는 예방 등에 대해도, 본 발명의 조성물은 유효하다.Circadian circadian rhythm disorders include, for example, sleep advance syndrome (ASPS), sleep recession syndrome (DSPS), non-24-hour sleep-wake disorder, irregular sleep-wake disorder, and jet lag sequelae (time zone shift syndrome, jet lag). Jet lag syndrome), rhythm modulation due to shift work (shift work sleep disturbance), life rhythm modulation due to nocturnal lifestyle (staying up all night, working overtime, etc.), and loss of rhythm in the elderly. In addition, the composition of the present invention is also effective for the treatment, improvement (alleviation) or prevention of symptoms such as insomnia, poor physical condition, attention deficit, decreased motivation, and dermatitis that accompany these circadian rhythm disorders.
또, 후술하는 실시예에 나타낸 바와 같이, 정상인이었다고 해도, 자귀나무 수피의 수추출물을 섭취시키는 것에 의해, 대상의 아침형 경향은 강해지며, 오후의 졸음은 감소하고, 활동성(각성도, 의욕, 기분 및 집중력)은 증가한다. 따라서, 본 발명의 조성물은, 생활 리듬(생활 습관)을 아침형으로 이행시키기 위한 조성물로서도 유용하다. 또한, 본 발명에 있어서, 「아침형」이란, 아침 일찍에 기상하여, 오전서부터 활동하여, 밤에는 일찍 잠자리에 들어가는 생활 리듬(생활 습관)을 의미하며, 예를 들면, 아침형·야간형 질문지(MEQ；Morningness－Eｖeningness Questionnaire)에 의해 평가할 수 있다(이시하라 카네요시(石原金由) 등, 「일본어판 아침형-야간형(morningness－eveningness) 질문지에 의한 조사 결과」, 심리학 연구, 1986년, 57권, 87~91 페이지 참조).In addition, as shown in the examples described later, even if the subject was a normal person, by ingesting the water extract of silkworm bark, the subject's tendency to be a morning type is strengthened, afternoon drowsiness is reduced, and activity (alertness, motivation, mood) is increased. and concentration) increases. Therefore, the composition of the present invention is also useful as a composition for shifting the life rhythm (lifestyle) to a morning style. In addition, in the present invention, "morning type" refers to a life rhythm (lifestyle habit) of waking up early in the morning, being active in the morning, and going to bed early at night. For example, the morning type / night type questionnaire (MEQ) ；Can be evaluated by Morningness-Eveningness Questionnaire (Kaneyoshi Ishihara et al., “Survey results using the Japanese version of the morningness-eveningness questionnaire”, Psychological Research, 1986, Vol. 57, (see pages 87-91).
본 발명의 조성물은, 공지의 제제학적 방법에 의해 제제화할 수가 있다. 예를 들면, 캡슐제, 정제, 환제, 액제, 산제, 과립제, 세립제, 필름 코팅제, 펠릿제, 트로키(troche)제, 설하제, 저작제(chewable), 구강제(buccal), 페이스트제, 시럽제, 현탁제, 에리키실제(elixir), 유제, 도포제, 연고제, 경고제, 퍼프제(cataplasm), 경피 흡수형 제제, 로션제, 흡인제, 에어졸제, 주사제, 좌제 등으로서 경구적 또는 비경구적으로 사용할 수가 있다. 그렇지만, 투여 대상에 대한 부담을 적게 한다는 관점에서, 본 발명의 조성물은, 경구용 조성물로서 이용하는 것이 바람직하다.The composition of the present invention can be formulated by known pharmaceutical methods. For example, capsules, tablets, pills, solutions, powders, granules, fine granules, film coatings, pellets, troche, sublingual, chewable, buccal, paste. , syrup, suspension, elixir, emulsion, liniment, ointment, warning agent, puff (cataplasm), percutaneously absorbed preparation, lotion, aspirant, aerosol, injection, suppository, etc. orally. It can be used parenterally. However, from the viewpoint of reducing the burden on the administration subject, it is preferable to use the composition of the present invention as an oral composition.
이들 제제화에 대해서는, 약리학상 혹은 음식품으로서 허용되는 담체, 구체적으로는, 멸균수나 생리 식염수, 식물유, 용제, 기제, 유화제, 현탁제, 계면 활성제, 안정제, 향미제, 방향제, 부형제, 비히클, 방부제, 결합제, 희석제, 등장화제, 무통화제, 증량제, 붕괴제, 완충제, 코팅제, 활택제, 착색제, 감미제, 점조제, 교미 교취제, 용해 보조제 혹은 그 외의 다른 첨가제 등을 적당히 조합할 수가 있다.For these formulations, carriers permitted pharmacologically or as food or beverages, specifically, sterilized water or physiological saline, vegetable oil, solvent, base, emulsifier, suspending agent, surfactant, stabilizer, flavoring agent, fragrance, excipient, vehicle, preservative. , binders, diluents, isotonic agents, analgesics, bulking agents, disintegrants, buffers, coating agents, lubricants, colorants, sweeteners, thickeners, deodorizing agents, solubilizers, or other additives can be appropriately combined.
또한, 본 발명의 조성물을 음식품으로서 이용하는 경우, 해당 음식품은, 예를 들면, 건강식품, 기능성 식품, 특정 보건용 식품, 기능성 표시 식품, 영양 보조 식품, 환자용 식품, 식품 첨가물 또는 동물용 사료일 수 있다. 본 발명의 음식품은, 상기와 같은 조성물로서 섭취할 수가 있는 것 외에, 여러 가지의 음식품으로 섭취할 수도 있다. 음식품의 구체적인 예로서는, 식용유, 드레싱, 마요네즈, 마가린 등의 유분을 포함한 제품；스프류, 유음료, 청량 음료수, 차음료, 알코올 음료, 드링크제, 젤리상 음료, 기능성 음료 등의 액상 식품; 밥류, 면류, 빵류 등의 탄수화물 함유 식품；햄, 소세지등의 축산 가공 식품；어묵, 건어물, 젓갈 등의 수산 가공 식품；채소 절임 등의 야채 가공 식품；젤리, 요구르트 등의 반고형상 식품；된장, 발효 음료등의 발효식품；양과자류, 일본식 과자류, 캔디류, 껌류, 사탕, 냉과, 빙과 등의 각종 과자류；카레, 고명, 중화 스프 등의 리토르트 제품；인스턴트 스프, 인스턴트 된장국 등의 인스턴트 식품이나 전자 렌지 대응 식품 등을 들 수 있다. 또한, 분말, 과립, 정제, 캡슐제, 액상, 페이스트상 또는 젤리상으로 조제된 건강 음식품도 들고 있다.In addition, when the composition of the present invention is used as a food or drink, the food or drink may be, for example, health food, functional food, food for specified health use, food with functional claim, nutritional supplement, food for patients, food additives, or animal feed. You can. The food or drink of the present invention can be consumed not only as a composition as described above, but also as a variety of food and drink. Specific examples of food and beverages include oil-containing products such as cooking oil, dressing, mayonnaise, and margarine; liquid foods such as soups, milk drinks, soft drinks, tea drinks, alcoholic drinks, drinks, jelly-like drinks, and functional drinks; Carbohydrate-containing foods such as rice, noodles, and bread; Processed livestock foods such as ham and sausage; Processed seafood foods such as fish cakes, dried fish, and salted fish; Processed vegetable foods such as pickled vegetables; Semi-solid foods such as jelly and yogurt; Soybean paste, Fermented foods such as fermented beverages; Various confectionery such as Western confectionery, Japanese confectionery, candies, gum, candies, frozen confectionery, and frozen dessert; Retort products such as curry, garnish, and Chinese soup; Instant food and electronic products such as instant soup and instant miso soup Range-compatible foods, etc. can be mentioned. We also carry health food products prepared in powder, granule, tablet, capsule, liquid, paste or jelly form.
본 발명의 조성물은, 어느 생물을 대상으로도 사용할 수가 있지만, 특히 사람을 포함하는 동물에 매우 적합하게 이용된다. 사람 이외의 동물로서는 특히 제한은 없지만, 여러 종류의 가축, 가금, 애완동물, 실험용 동물 등을 대상으로 할 수가 있다. 구체적으로는, 돼지, 소, 말, 양, 염소, 닭, 오리, 타조, 집오리, 개, 고양이, 토끼, 햄스터, 마우스, 래트, 원숭이를 들 수 있지만, 이것들에 제한되지 는 않는다.The composition of the present invention can be used on any living organism, but is particularly suitable for use on animals including humans. There are no particular restrictions on animals other than humans, but various types of livestock, poultry, pets, laboratory animals, etc. can be used. Specifically, examples include, but are not limited to, pigs, cows, horses, sheep, goats, chickens, ducks, ostriches, domestic ducks, dogs, cats, rabbits, hamsters, mice, rats, and monkeys.
본 발명에 있어서의 음식품의 제조는, 해당 기술 분야에 공지의 제조 기술에 의해 실시할 수가 있다. 해당 음식품에 대해서는, 일주기 생체 리듬 장해 등의 개선 또는 예방에 유효한, 1종 또는 2종 이상의 성분 혹은 다른 기능성 식품을 첨가하여도 좋다. 또, 해당 개선 등 이외의 기능을 발휘하는 다른 성분 혹은 다른 기능성 식품과 조합하여서 되는 다기능성의 음식품이라고 해도 좋다.The production of food and beverages in the present invention can be carried out using manufacturing techniques known in the relevant technical field. To the food or drink, one or two or more ingredients or other functional foods that are effective in improving or preventing circadian rhythm disorders, etc. may be added. In addition, it may be said to be a multi-functional food or drink that can be combined with other ingredients or other functional foods that exert functions other than the above-mentioned improvement, etc.
본 발명의 조성물을 투여 또는 섭취하는 경우, 그 투여량 또는 섭취량은, 대상의 연령, 체중, 증상, 건강 상태, 조성물의 종류(의약품, 음식품 등) 등에 따라서, 적당히 선택해야 하지만, 사람(성인)을 대상으로 하는 경우, 1일에 1회 혹은 수회로 나누어, 자귀나무 수피의 수추출물을, 10 ~ 1000 mg 투여하는 것이 바람직하고, 50 ~ 200 mg 투여하는 것이 보다 바람직하다. 또한, 본 발명의 조성물의 투여 등의 타이밍은, 일주기 생체 리듬이 어떻게 어긋났는지(전진 또는 후퇴)에 따라야 하지만, 바람직하게는 오전 중, 보다 바람직하지는 오전 7 ~ 10시 사이, 보다 더 바람직하지는 오전 8 ~ 9시 사이이다. 더욱이 본 발명의 조성물은 계속적으로(적어도 3일간 계속해서, 보다 바람직하게는 10일 이상 계속해서) 투여등 하는 것이 바람직하다.When administering or ingesting the composition of the present invention, the dosage or intake should be appropriately selected depending on the subject's age, weight, symptoms, health condition, type of composition (drug, food, etc.), etc., but human (adult) ), it is preferable to administer 10 to 1000 mg of aqueous extract of silkworm bark once a day or divided into several times, and more preferably 50 to 200 mg. In addition, the timing of administration of the composition of the present invention should depend on how the circadian rhythm is out of sync (advance or retreat), preferably during the morning, more preferably between 7 and 10 a.m., and even more preferably between 7 and 10 a.m. It is between 8 and 9 am. Furthermore, it is preferable to administer the composition of the present invention continuously (for at least 3 days, more preferably for 10 days or more).
본 발명의 조성물의 제품(의약품, 음식품, 시약) 또는 그 설명서는, 시계 유전자의 발현을 변화, 및/또는, 일주기 생체 리듬을 변화시키기 위해 사용되는 취지의 표시를 붙인 것일 수 있다. 여기서 「제품 또는 설명서에 표시를 붙였다」라는 것은, 제품의 본체, 용기, 포장 등에 표시를 부착하거나, 혹은 제품의 정보를 공개하는 설명서, 첨부 문서, 선전물, 그 외의 인쇄물 등으로 표시를 붙인 것을 의미한다.The product (drug, food, drink, reagent) of the composition of the present invention or its instructions may contain an indication that it is used to change the expression of clock genes and/or change the circadian rhythm. Here, “a mark is attached to the product or manual” means that a mark is attached to the product body, container, packaging, etc., or a mark is attached to the manual, attached documents, promotional material, or other printed matter that discloses product information. do.
또한, 본 발명은, 이와 같이, 본 발명의 의약 조성물을 대상(예를 들면, 일주기 생체 리듬 장해를 앓고 있는 사람)에 투여하는 것을 특징으로 하는, 대상의 일주기 생체 리듬의 변화를 수반하는, 질환의 치료 또는 예방의 방법도 제공한다.In addition, the present invention is characterized in that the pharmaceutical composition of the present invention is administered to a subject (e.g., a person suffering from a circadian rhythm disorder), resulting in a change in the subject's circadian rhythm. , methods of treating or preventing diseases are also provided.
실시예Example
이하, 실시예에 근거하여 본 발명을 보다 구체적으로 설명하겠지만, 본 발명은 이하의 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the present invention will be described in more detail based on examples, but the present invention is not limited to the following examples.
(실시예 1)(Example 1)
＜자귀나무 수피의 수추출물의 조제＞＜Preparation of water extract of silkworm bark＞
자귀나무의 수피(주식회사 영 포레스트 제)에, 그의 10배의 중량의 증류수를 첨가하고, 오토클레이브(100℃, 60분)에서 처리하였다. 얻어진 추출물을, 스텐레스 메쉬(망 크기：150 ㎛, 토쿄 스크린 주식회사 제, 망체, 품번：635－54－18－41)에 통과시켰다. 얻어진 여과액을 No. 193 여과지(ADVANTEC사 제)에 추가로 통과시켜서, 합계 2회의 여과 처리를 실시한 후, 로터리 증발기(도쿄이화기계 주식회사 제, N－1300형)를 이용하여 고형분이 5%가 될 때까지 농축하였다. 그 다음에, 얻어진 농축액을, 덱스트린(삼화전분공업 주식회사 제, 선테크(Sundek))과 혼합하고, 가열살균 처리(90℃, 60분)에 제공한 다음, 동결 건조기(AGC 테크노 글래스 주식회사 제, FRD－82M)에서, 건조 분말로 하였다.To the bark of silkworm tree (manufactured by Young Forest Co., Ltd.), 10 times the weight of distilled water was added and treated in an autoclave (100°C, 60 minutes). The obtained extract was passed through a stainless steel mesh (mesh size: 150 μm, manufactured by Tokyo Screen Co., Ltd., mesh sieve, product number: 635-54-18-41). The obtained filtrate was labeled No. It was further passed through 193 filter paper (manufactured by ADVANTEC), subjected to a total of two filtration treatments, and then concentrated using a rotary evaporator (model N-1300, manufactured by Tokyo Ewha Machinery Co., Ltd.) until the solid content reached 5%. Next, the obtained concentrate was mixed with dextrin (manufactured by Samwha Starch Industry Co., Ltd., Sundek), subjected to heat sterilization (90°C, 60 minutes), and then placed in a freeze dryer (manufactured by AGC Techno Glass Co., Ltd.). FRD-82M), it was made into dry powder.
또한, 이와 같이 하여서 얻어진 건조 분말에서, 자귀나무 수피의 수추출물과 덱스트린과의 비율은 1：3이다. 자귀나무 수피의 수추출물은, 흡습성이 높고 물성이 변화하기 쉽기(굳어버림) 때문에, 상기와 같이 부형제로서 덱스트린을 첨가하였다. 또한, 건조 분말에 있어서의 자귀나무 수피의 수추출물은, 추출 처리에 제공한 자귀나무 수피의 6~8 질량%이었다.In addition, in the dry powder obtained in this way, the ratio of the water extract of silkworm bark and dextrin is 1:3. Because the water extract of silkworm bark is highly hygroscopic and prone to changes in physical properties (hardening), dextrin was added as an excipient as described above. Additionally, the water extract of silkworm bark in the dry powder was 6 to 8% by mass of the silkworm bark used for extraction treatment.
(실시예 2)(Example 2)
＜세포 감작 시험＞＜Cell sensitization test＞
PER2：：LUC MEF(마우스 배아 섬유 아세포)를, 10%의 소 태아 혈청(FBS), 0.1 mM의 D－루시페린·나트륨염을 함유하는 DMEM(둘베코 변형 이글 배지)에서 유지 배양하였다. 그리고, 덱사메타손을 상기 배지에 200 nM가 되도록 첨가하고 2시간 동안 배양한 후, 덱사메타손을 함유하지 않는 상기 배지로 교환하여 배양하였다. 이어서, 덱사메타손을 첨가하고, 2.4일 후±2시간 동안, 상기와 같이 제조한 자귀나무 수피의 수추출물을 포함하는 건조 분말을, 50㎍/㎖, 100㎍/㎖가 되도록 배지에 첨가하여 30분간 배양한 후, 자귀나무 수피의 수추출물을 함유하지 않는 상기 배지로 교환하여 배양을 계속하였다. 또한, 덱사메타손 처리 후 5.5일동안, 세포는, 37℃, 5% CO2로 설정되어, 루미사이클(LumiCycle32, Actimetrics)이 설치된 배양기 내에서 배양하고, PER2 유전자의 발현 리듬을 해석하였다. 얻어진 결과를 도 2에 나타내었다. PER2::LUC MEFs (mouse embryonic fibroblasts) were maintained and cultured in DMEM (Dulbecco's modified Eagle's medium) containing 10% fetal bovine serum (FBS) and 0.1 mM D-luciferin sodium salt. Then, dexamethasone was added to the medium to a concentration of 200 nM and cultured for 2 hours, then the medium was exchanged for the medium not containing dexamethasone and cultured. Next, dexamethasone was added, and 2.4 days later ± 2 hours, the dry powder containing the water extract of silkworm bark prepared as above was added to the medium to a concentration of 50 μg/ml and 100 μg/ml for 30 minutes. After culturing, the medium was replaced with the above medium that does not contain the aqueous extract of silkworm bark, and the culture was continued. Additionally, for 5.5 days after dexamethasone treatment, cells were cultured in an incubator equipped with LumiCycle32 (Actimetrics) at 37°C and 5% CO 2 , and the expression rhythm of the PER2 gene was analyzed. The obtained results are shown in Figure 2.
또한, PER2：：LUC MEF는, Per2：：루시페라제 녹크 인 마우스(luciferase knock-in mouse)에서 단리된 배아 섬유 아세포이다. 또한, 해당 마우스는, Per2 유전자 하류에 반딧불 루시페라제 유전자가 도입되어 있기 때문에, Per2 유전자의 발현 리듬은 루시페린-루시페라제 반응에 의한 발광 리듬에 따르는 것이 가능하다(Narishige S. 들, Br J Pharmacol., 2014년 12월, 171권, 24호, 5858~5869 페이지 참조).Additionally, PER2::LUC MEFs are embryonic fibroblasts isolated from Per2::luciferase knock-in mice. In addition, since the firefly luciferase gene is introduced downstream of the Per2 gene in the mouse, it is possible that the expression rhythm of the Per2 gene follows the luminescence rhythm caused by the luciferin-luciferase reaction (Narishige S. et al., Br J Pharmacol., December 2014, Volume 171, Issue 24, pages 5858-5869).
또한, 합성 부신 피질 호르몬(합성 당질 코르티코이드(corticoid))인 덱사메타손은, 말초 장기(세포)의 일주기 생체 리듬 동조 인자로도 기능하기 때문에, 각 세포에 있어서의 시계 유전자의 발현 사이클을 재설정하고 동조시키기 위해, 상기한 바와 같이, PER2：：LUC MEF에 첨가하였다.In addition, dexamethasone, a synthetic corticosteroid (synthetic glucocorticoid), also functions as a circadian rhythm synchronization factor in peripheral organs (cells), resetting and synchronizing the expression cycle of clock genes in each cell. To do so, PER2::LUC was added to MEF as described above.
또한, Per2 유전자의 발현 리듬(발광 리듬)의 해석에 대해서는, 루미노사이클에서의 계측 데이터(RAW 데이터)에서 24시간 분량의 이동 평균값을 만드는 데이트랜드(daytrend) 처리를 실시한 후, 2시간 분량의 이동 평균값을 평활화하는 평활화 처리를 실시하고, 이 파형 데이터의 발광값의 peak값을 산출하였다(Hayasaka N. 들, Endocrinology, 2007년, 148권, 7호, 3316 ~ 3326 페이지, Ohta H. 들, PLoS ONE, 2008년, 3：e2601 참조). 또한, 도 2에 나타낸 바와 같이 peak2 및 peak3의 값의 변화를 해석하였다. 그 결과를 표 1에 나타내었다.In addition, for the analysis of the expression rhythm (luminescence rhythm) of the Per2 gene, daytrend processing was performed to create a 24-hour moving average from the Luminocycle measurement data (RAW data), and then 2-hour data was obtained. Smoothing processing was performed to smooth the moving average value, and the peak value of the luminescence value of this waveform data was calculated (Hayasaka N. et al., Endocrinology, 2007, Volume 148, No. 7, pages 3316 to 3326, Ohta H. et al. (see PLoS ONE, 2008, 3: e2601). Additionally, as shown in Figure 2, changes in the values of peak2 and peak3 were analyzed. The results are shown in Table 1.
(실시예 3)(Example 3)
＜마우스에의 투여 시험＞＜Administration test to mice＞
도 3에 나타낸 바와 같이, 7주령 암컷 ICR 마우스에, 자귀나무 수피의 수추출물(상기한 바에 따라 제조한 건조 분말 1 mg 혹은 10 mg를 증류수에 용해한 것) 또는 증류수를, ZT4(12：00)의 타이밍에, 3일간 존데(체내의 진단이나 치료에 쓰이는 막대기 모양의 기구)를 이용하여 강제적으로 경구투여하였다. 그리고, 투여 마지막 날의 ZT5.5에, 이러한 마우스를 해부하고, 간을 적출하였다. 그 다음에, 적출한 간으로부터 토탈 RNA를 추출하고, cDNA에 역전사한 후, Per1, Per2 및 Bmal1 유전자의 발현량을 리얼타임 PCR에서 해석하였다. 얻어진 결과를 도 4 ~ 6에 나타내었다.As shown in Figure 3, 7-week-old female ICR mice were administered aqueous extract of silkworm bark (1 mg or 10 mg of dry powder prepared as described above dissolved in distilled water) or distilled water at ZT4 (12:00). At the timing of , oral administration was compulsorily administered using a sonde (a stick-shaped device used for internal diagnosis or treatment) for 3 days. Then, at ZT5.5 on the last day of administration, these mice were dissected and the livers were removed. Next, total RNA was extracted from the extracted liver, reverse transcribed into cDNA, and the expression levels of Per1, Per2, and Bmal1 genes were analyzed by real-time PCR. The obtained results are shown in Figures 4 to 6.
(실시예 4)(Example 4)
＜사람에의 투여 시험＞＜Administration test on humans＞
아래와 같은 조건으로, 자귀나무 수피의 수추출물을 10일간 매일 사람에게 섭취하도록 하고, 수면 검사를 받도록 하였다(수면 검사법에 대해서는, 마츠우라 마사토(松捕雅人) 편집, 「수면 검사학의 기초와 임상」, 주식회사 신흥 의학 출판사, 2009년 8월 10일 발행, 149~155 페이지 참조만 함).Under the following conditions, people were asked to consume the water extract of silkworm bark every day for 10 days and undergo a sleep test (for sleep test methods, see “Basics and Clinical Practice of Sleep Testing,” edited by Masato Matsuura, Shinheung Medical Publishing Co., Ltd., published August 10, 2009, pages 149-155 for reference only).
피험자：29~49세, 정상인(남성 5명, 여성 4명, 합계 9명)Subjects: 29 to 49 years old, normal people (5 men, 4 women, 9 people in total)
섭취：상기한 바와 같이 제조한 건조 분말 100 mg를 캡슐(주식회사 힐하프 종합연구소제, 젤라틴 캡슐)에 넣은 것을, 10일간, 오전 8：30 ~ 9：00시 사이에 경구로 물과 함께 섭취하도록 하였다.Intake: Take 100 mg of the dry powder prepared as above in a capsule (gelatin capsule, manufactured by Hillharp Research Institute Co., Ltd.) orally with water between 8:30 and 9:00 a.m. for 10 days. did.
수면 검사：자귀나무 수피의 수추출물의 섭취 전날 및 10 일째의 13 ~ 16시의 타이밍에, 아래와 같이 KSS 및 VAS를 실시하여, 졸음을 평가하였다. 또, 자귀나무 수피의 수추출물의 섭취 전날 및 10 일째에, 아래와 같은 MEQ에서의 아침형·야간형의 경향을 조사하였다.Sleep test: Between 13:00 and 16:00 on the day before and on the 10th day of ingestion of the water extract of silkworm bark, KSS and VAS were performed as follows to evaluate drowsiness. In addition, on the day before and 10 days after ingestion of the water extract of silkworm bark, the trends of morning type and night type in MEQ as shown below were investigated.
간세이 학원대학식 졸음 척도(KSS；Kwansei－Gakuin sleeping scale)Kansei Gakuin University Sleeping Scale (KSS；Kwansei-Gakuin sleeping scale)
KSS는, 스탠포드 졸음 척도를 참고해서 일본어판으로 작성된 졸음의 질문지로서 22개 항목으로부터 구성되어 있다. 각각의 항목에는 0~7점의 척도값이 부여되고 있으며, 숫자가 클수록 강한 졸음을 나타낸다. 선택한 항목(복수 선택가능)의 평균 척도값을 졸음 점수로 산출한다(이시하라 카네요시(石原金由) 등, 「수면의 척도와 그 실험적 검토」, 심리학 연구, 1982년, 52권, 362 ~ 365 페이지 참조). 얻어진 결과(합계 9명의 피험자의 평균값)를, 도 8에 나타내었다.KSS is a sleepiness questionnaire written in Japanese with reference to the Stanford Sleepiness Scale and consists of 22 items. Each item is given a scale value of 0 to 7 points, with larger numbers indicating stronger drowsiness. The average scale value of the selected items (multiple selections possible) is calculated as the sleepiness score (Kaneyoshi Ishihara et al., “Sleep scale and experimental review”, Psychological Research, 1982, Vol. 52, 362 ~ see page 365). The obtained results (average value of a total of 9 subjects) are shown in Figure 8.
시각적 아날로그 평가 척도(VAS；Visual analog scale)Visual Analog Assessment Scale (VAS)
시각적 아날로그 평가 척도(VAS)에 의해, 피험자의 주관적인 수면을 평가한다. 보다 구체적으로는, 100 mm의 직선의 좌우 양단에 「전혀 졸리지 않다」, 「매우 졸리다」등의 단어를 적어 두었다가 지금의 상태에 가깝다고 생각되는 위치에 수직선을 그어 주는 방법으로 한다. 0의 지점으로부터 수직선까지의 거리를 mm 단위로 측정하고, 그 수치를 졸음 점수로 한다. 점수는 1 mm 당 1점으로 하고, 0 ~ 100점의 점수로 한다. 이번에는 각성도 이외에 의욕, 기분, 기대, 신체적 피로, 집중력, 식욕, 자신도의 총 8개 항목으로 조사를 실시하였다. 얻어진 결과(총 9명의 피험자의 평균값)를, 도 9 ~ 12에 나타내었다.Subjects' subjective sleep is assessed by the Visual Analog Assessment Scale (VAS). More specifically, write words such as “not at all sleepy” or “very sleepy” on both left and right ends of a 100 mm straight line and then draw a vertical line at a position that is considered close to the current state. The distance from the point of 0 to the vertical line is measured in mm, and the value is taken as the drowsiness score. The score is 1 point per 1 mm, and the score is 0 to 100 points. This time, in addition to alertness, a survey was conducted on a total of eight items: motivation, mood, expectations, physical fatigue, concentration, appetite, and confidence. The obtained results (average values of a total of 9 subjects) are shown in Figures 9 to 12.
아침형·야간형 질문지(MEQ；Morningness－Eｖeningness Questionnaire)Morningness/Nightness Questionnaire (MEQ；Morningness－Eveningness Questionnaire)
MEQ는, 수면·각성 리듬의 개인차, 생활 스타일의 리듬 지향을 검토하는 질문지이며, 19개 항목의 질문으로 구성되어 있다. 각각의 항목에 대한 답변에 따라 점수가 부여되고, 그 총 점수가 높을수록 아침형의 경향이 있다고 평가한다(이시하라 카네요시(石原金由) 등, 「일본어판 아침형-야간형(morningness－eveningness) 질문지에 의한 조사 결과」, 심리학 연구, 1986년, 57권, 87~91 페이지 참조). 얻어진 결과를, 도 13에 나타내었다. 또한, MEQ에 관해서는, 오전중(8:30 ~ 9：00)에 섭취하는 대신에, 석식 시에 자귀나무 수피의 수추출물을 섭취하는 피험자도 준비하고, 이 검사를 받아달라고 하였다. 얻어진 결과(총 9명의 피험자의 평균값)를 도 14에 나타내었다.The MEQ is a questionnaire that examines individual differences in sleep/wake rhythm and the rhythm orientation of life style, and consists of 19 question items. Points are given according to the answer to each item, and the higher the total score, the more likely you are to be a morning person (Kaneyoshi Ishihara et al., Japanese version of the morningness-eveningness questionnaire) 'Research results by', Psychological Research, 1986, Vol. 57, pp. 87-91). The obtained results are shown in Figure 13. In addition, regarding MEQ, subjects were also prepared to consume the water extract of silkworm bark during dinner instead of taking it during the morning (8:30 to 9:00), and were asked to undergo this test. The obtained results (average value of a total of 9 subjects) are shown in Figure 14.
도 2에 나타낸 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 자귀나무 수피의 수추출물을 마우스 배아 섬유 아세포에 첨가하는 것에 의해, 해당 세포의 시계 유전자(Per2 유전자)의 발현 리듬에 있어서, 그 진폭의 경과적 감쇠를 억제하였다(Per2의 유전자 발현 레벨을 유지하였다). 또한, 표 1에 나타낸 결과로부터 알 수 있는 바와 같이, 자귀나무 수피의 수추출물을 Per2 발현 리듬의 점차 감소 과정에서 세포에 첨가했을 경우에는, 이 발현 리듬의 피크(위상)는 농도 의존적으로 전진하였다. 한편, 도면에는 표시되어 있지 않지만, 이 추출물을 Per2 발현 리듬의 점차 증가 과정에서 세포에 첨가했을 경우에는, 이 발현 리듬의 피크(위상)는 농도 의존적으로 후퇴하는 것으로 밝혀졌다.As can be seen from the results shown in Figure 2, by adding the water extract of silkworm bark to mouse embryonic fibroblast cells, the amplitude of the expression rhythm of the clock gene (Per2 gene) in those cells is gradually attenuated. was suppressed (gene expression level of Per2 was maintained). In addition, as can be seen from the results shown in Table 1, when the water extract of silkworm bark was added to the cells during the gradual decrease of the Per2 expression rhythm, the peak (phase) of this expression rhythm advanced in a concentration-dependent manner. . On the other hand, although not shown in the figure, when this extract was added to cells during the gradual increase of the Per2 expression rhythm, the peak (phase) of this expression rhythm was found to retreat in a concentration-dependent manner.
따라서, 투여의 타이밍에 의한 위상을 전후 어느 쪽으로도 작동시킬 수 있다는 것에서 부터, 자귀나무 수피의 수추출물은, 시계 유전자의 발현량 및 위상의 조절에 이용할 수 있다는 것이 밝혀졌다.Therefore, it was revealed that the water extract of silkworm bark can be used to regulate the expression level and phase of clock genes, since the phase can be operated either forward or backward depending on the timing of administration.
또한, 도 4 및 5에 나타낸 바와 같이, 자귀나무 수피의 수추출물을 마우스에 경구투여한 결과, 말초 조직(간)의 Per1 유전자 및 Per2 유전자의 발현량은, 투여량 의존적으로 감소하였다. 한편, 도 6에 나타낸 바와 같이, 자귀나무 수피의 수추출물 투여에 의해 말초 조직에서 Bmal1 유전자의 발현량은 증가하였다.Additionally, as shown in Figures 4 and 5, when the aqueous extract of silkworm bark was orally administered to mice, the expression levels of Per1 and Per2 genes in peripheral tissue (liver) decreased in a dose-dependent manner. Meanwhile, as shown in Figure 6, the expression level of Bmal1 gene in peripheral tissues increased by administration of aqueous extract of silkworm bark.
또한, 포유동물에 있어서, BMAL1 단백질은 CLOCK 단백질과 헤테로 이량체를 형성하고, Period 유전자(Per1, Per2)의 전사를 촉진한다. 또한, 다른 한편으로, PER 단백질은 CRYPTOCHROME 단백질과 헤테로 이량체를 형성하고, BMAL1 단백질 및 CLOCK 단백질의 활성을 억제한다. 그리고, 이러한 피드백 루프에 의해 일주기 생체 리듬은 조정되고 있으며, 또 Period 유전자와 Bmal1 유전자의 발현 리듬은, 거의 12시간 어긋나 있는 것으로 알려지고 있다. 따라서, 도 4 ~ 6에서 나타내는 시계 유전자(Per1 및 Per2와 Bmal1)의 발현량에서의 변화의 불일치는, 발현 리듬에서, Per1 및 Per2와 Bmal1가 역상의 관계에 있다는 것을 반영한 것으로 생각된다.Additionally, in mammals, BMAL1 protein forms a heterodimer with CLOCK protein and promotes the transcription of Period genes (Per1, Per2). Additionally, on the other hand, PER protein forms heterodimers with CRYPTOCHROME protein and inhibits the activities of BMAL1 protein and CLOCK protein. In addition, the circadian biological rhythm is adjusted by this feedback loop, and it is known that the expression rhythms of the Period gene and the Bmal1 gene are shifted by approximately 12 hours. Therefore, the discrepancy in changes in the expression levels of clock genes (Per1, Per2, and Bmal1) shown in Figures 4 to 6 is thought to reflect the inverse relationship between Per1, Per2, and Bmal1 in the expression rhythm.
또한, 마우스(자귀나무 수피의 수추출물 비투여)에서의 ZT0 ~ 24의 3시간 마다의 Per1 유전자 발현량의 변화(도 7 참조)를 참작하면, 자귀나무 수피의 수추출물 투여 마우스에 있어서 ZT5.5의 Per1 유전자 발현량은 감소하고 있었기 때문에, 이 유전자의 발현 리듬의 위상은 후퇴하고 있음을 시사한다.In addition, taking into account the change in Per1 gene expression every 3 hours from ZT0 to 24 in mice (not administered aqueous extract of silkworm bark) (see Fig. 7), ZT5. Since the expression level of the Per1 gene in 5 was decreasing, this suggests that the phase of the expression rhythm of this gene is regressing.
이상의 마우스에 있어서의 결과로부터, 자귀나무 수피의 수추출물을 경구섭취하는 것에 의해, 말초 조직의 시계 유전자의 발현량 및 위상의 조절에 이용할 수 있다는 것도 밝혀졌다.From the above results in mice, it was also revealed that oral ingestion of the aqueous extract of silkworm bark can be used to regulate the expression level and phase of clock genes in peripheral tissues.
또한, 도 8 ~ 12에서 볼 수 있는 바와 같이, 자귀나무 수피의 수추출물을 사람에 경구투여한 결과, 해당 추출물에 의해 오후의 졸음은 개선되었고(KSS 스코어의 감소), 또 각성도, 의욕, 기분, 집중력에 대해도 의미가 있게 개선된 것(VAS 스코어의 증가)이 밝혀졌다.In addition, as can be seen in Figures 8 to 12, when the water extract of silkworm bark was orally administered to humans, the extract improved afternoon drowsiness (reduction in KSS score), and also improved alertness, motivation, and Significant improvements in mood and concentration (increase in VAS score) were also revealed.
또한, 도 13에 나타낸 바와 같이, 자귀나무 수피의 수추출물을 오전중, 사람에게 경구투여한 결과, 아침형 경향이 보다 강해지는 것(MEQ 스코어의 증가)이 밝혀졌다. 다른 한편으로, 도 14에 나타낸 바와 같이, 이 추출물을 오후(석식 때)에 투여하여도, MEQ 스코어의 의미가 있는 변화는 관찰되지 않았다.Additionally, as shown in Figure 13, when the water extract of silkworm bark was orally administered to humans in the morning, it was revealed that the morning-type tendency became stronger (increased MEQ score). On the other hand, as shown in Figure 14, even when this extract was administered in the afternoon (at dinner), no significant change in MEQ score was observed.
이상대로, 자귀나무 수피의 수추출물의 경구투여에 의해, 오후의 졸음은 감소하고, 또 각성도, 의욕, 기분 및 집중력이 증가하여, 아침형 경향이 강해졌다. 이 때문에, 해당 추출물의 섭취에 의해, 시계 유전자의 발현 리듬이 변화하고, 한층 더 일주기 생체 리듬이 변화한 결과, 잠자리에 빨리, 아침 일찍 일어나기 쉬워져, 한층 더 오후의 졸음이 감소하는 한편, 활동성이 향상된 것으로 추측된다.As mentioned above, oral administration of the water extract of silkworm bark reduced afternoon drowsiness, increased alertness, motivation, mood, and concentration, and strengthened the morning-type tendency. For this reason, by ingestion of the extract, the expression rhythm of the clock gene changes, and as a result of the further change in the circadian biological rhythm, it becomes easier to go to bed early and wake up early in the morning, and afternoon drowsiness is further reduced. It is assumed that activity has improved.
이상에서 설명한 바와 같이, 본 발명에 의하면, 시계 유전자의 발현을 변화시키고, 또한 해당 발현 변화에 의해 일주기 생체 리듬을 변화시킬 수가 있다. 또한 이러한 변화를 일으키는 것에 의해, 일주기 생체 리듬의 이상을 해소할 수가 있기 때문에, 본 발명의 조성물은, 해당 이상으로 기인하는 질환(일주기 생체 리듬 장해 등)의 치료, 개선(완화) 또는 예방을 하기 위한 의약품, 식품 등으로 유용하다. 또한, 본 발명의 조성물은, 시계 유전자의 발현을 변화시키기 위한, 또한, 해당 발현 변화에 의해 일주기 생체 리듬을 변화시키기 위한 시약으로도 유용하다. As explained above, according to the present invention, it is possible to change the expression of clock genes and also change the circadian rhythm by changing the expression. In addition, since the abnormality of the circadian biological rhythm can be resolved by causing such a change, the composition of the present invention treats, improves (alleviates) or prevents diseases (circadian biological rhythm disorder, etc.) caused by the abnormality. It is useful as medicine, food, etc. Additionally, the composition of the present invention is also useful as a reagent for changing the expression of clock genes and for changing the circadian rhythm by changing the expression.
Claims (12)
시계 유전자의 발현 리듬의 위상을 전진 또는 후퇴시킴으로써 수면상 전진 증후군(ASPS), 수면상 후퇴 증후군(DSPS), 비24시간 수면 각성 장해, 불규칙형 수면 각성 장해, 시간대역 변화 증후군, 제트 시차 증후군, 교대 근무 수면 장해, 야간형 생활에 의한 생활 리듬의 변조, 고령자의 리듬 소실, 불면, 컨디션 부진, 주의 결손, 의욕 저하, 또는 피부염을 개선 또는 예방하기 위한 음식품.A food or drink containing only the water extract of silkworm bark as an active ingredient,
By advancing or retracting the phase of the clock gene expression rhythm, sleep phase advancement syndrome (ASPS), sleep phase regression syndrome (DSPS), non-24-hour sleep-wake disorder, irregular sleep-wake disorder, time zone shift syndrome, jet lag syndrome, Foods and drinks for improving or preventing shift work sleep disorders, modulation of life rhythm due to night-time living, loss of rhythm in the elderly, insomnia, poor physical condition, attention deficit, low motivation, or dermatitis.
시계 유전자의 발현량의 진폭의 감쇠를 억제시킴으로써 수면상 전진 증후군(ASPS), 수면상 후퇴 증후군(DSPS), 비24시간 수면 각성 장해, 불규칙형 수면 각성 장해, 시간대역 변화 증후군, 제트 시차 증후군, 교대 근무 수면 장해, 야간형 생활에 의한 생활 리듬의 변조, 고령자의 리듬 소실, 불면, 컨디션 부진, 주의 결손, 의욕 저하, 또는 피부염을 개선 또는 예방하기 위한 음식품.A food or drink containing only the water extract of silkworm bark as an active ingredient,
By suppressing the attenuation of the amplitude of clock gene expression, sleep phase advancement syndrome (ASPS), sleep phase regression syndrome (DSPS), non-24-hour sleep-wake disorder, irregular sleep-wake disorder, time zone shift syndrome, jet lag syndrome, Foods and drinks for improving or preventing shift work sleep disorders, modulation of life rhythm due to night-time living, loss of rhythm in the elderly, insomnia, poor physical condition, attention deficit, low motivation, or dermatitis.
일주기 생체 리듬을 변화시킴으로써 수면상 전진 증후군(ASPS), 수면상 후퇴 증후군(DSPS), 비24시간 수면 각성 장해, 불규칙형 수면 각성 장해, 시간대역 변화 증후군, 제트 시차 증후군, 교대 근무 수면 장해, 야간형 생활에 의한 생활 리듬의 변조, 고령자의 리듬 소실, 불면, 컨디션 부진, 주의 결손, 의욕 저하, 또는 피부염을 개선 또는 예방하기 위한 음식품.A food or drink containing only the water extract of silkworm bark as an active ingredient,
By changing the circadian rhythm, sleep advancement syndrome (ASPS), sleep regression syndrome (DSPS), non-24-hour sleep-wake disorder, irregular sleep-wake disorder, time zone shift syndrome, jet lag syndrome, shift work sleep disorder, Foods and drinks to improve or prevent modulation of life rhythm due to nocturnal lifestyle, loss of rhythm in the elderly, insomnia, poor physical condition, attention deficit, low motivation, or dermatitis.
The pharmaceutical composition according to claim 11, wherein the water extract is an extraction component obtained from silkworm bark using water as the extraction solvent and an extraction temperature of 4 to 100°C.
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