KR102591073B1 - 안전성이 향상된 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물 및 이의 용도 - Google Patents

안전성이 향상된 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물 및 이의 용도 Download PDF

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Abstract

본 발명은 신규한 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 이의 리간드-약물 접합체 화합물, 이를 함유하는 조성물, 및 항암제로서의 이의 치료용도에 관한 것으로서, 본 발명에 따른 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물은 프리 톡신(free toxin) 형태에서는 활성이 떨어져 독성이 크게 감소하는 효과를 나타내면서도 리간드-약물 접합체에 약물로 적용되어 투여되는 경우 항암 활성이 기존 항암제 대비 동등 내지 우수한 것으로 나타났는바 치료지수(therapeutic index)가 현저히 향상되는 효과를 나타내며, 따라서 암과 같은 증식성 질환의 표적화, 특이적 치료, 약효의 극대화 및 부작용 발현의 최소화가 가능하다는 점에서 산업상 매우 유용하다.

Description

안전성이 향상된 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물 및 이의 용도 {Pyrrolobenzodiazepine dimer compounds with improved safety and its use}
본 발명은 신규한 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물 또는 이의 약학적으로 허용되는 염, 이의 리간드-약물 접합체 화합물, 이를 함유하는 조성물, 및 항암제로서의 이의 치료용도에 관한 것으로서, 본 발명에 따른 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물은 프리 톡신(free toxin) 형태에서는 활성이 떨어져 독성이 크게 감소하는 효과를 나타내면서도 리간드-약물 접합체에 약물로 적용되어 투여되는 경우 항암 활성이 기존 항암제 대비 동등 내지 우수한 것으로 나타났는바 치료지수(therapeutic index)가 현저히 향상되는 효과를 나타내며, 따라서 암과 같은 증식성 질환의 표적화, 특이적 치료, 약효의 극대화 및 부작용 발현의 최소화가 가능하다는 점에서 산업상 매우 유용하다.
피롤로벤조디아제핀(pyrrolobenzodiazepine, PBD)은 다양한 방선균(actinomycetes)에 의해 생산되는, 항생 또는 항종양 활성을 갖는 천연물질로 알려져 있다. 피롤로벤조디아제핀은 세포 DNA에 공유 결합하는, 서열 선택성 DNA 알킬화 항암제이다. 피롤로벤조디아제핀은 DNA-교차결합제(DNA-crosslinking agents)로서, 전신 화학요법제보다 현저히 강력한 항암 활성을 나타내는 것으로 알려져 있으며, DNA 힐릭스(helix)를 파괴하지 않고 암세포의 분열을 막을 수 있다.
피롤로벤조디아제핀은 하기의 일반적 구조를 갖는다:
상기 피롤로벤조디아제핀은 방향족 고리 A 및 피롤로 C 고리에서의 치환기의 수, 유형 및 위치, 그리고 C 고리의 포화도에 있어 차이가 있다. B 고리에는 DNA의 알킬화를 담당하는 친전자성 중심인 N10-C11 위치에 이민(N=C), 카르비놀아민(NH-CH(OH)) 또는 카르비놀아민 메틸에테르(NH-CH(OMe))가 존재한다.
애브비(AbbVie), 에이디씨 테라퓨틱스(ADC therapeutics), 이뮤노젠(ImmunoGen), 타케다(Takeda), 메디뮨(Medimmune) 등에서는 피롤로벤조디아제핀을 세포독성 약물로 하는 항체-약물 접합체를 개발하고 있는 것으로 알려져 있다. 이밖에도 스피로젠(Spirogen)은 피롤로벤조디아제핀을 기반으로 하는 급성 골수성 백혈병 치료제 기술을 개발해오고 있다.
이와 관련하여 피롤로벤조디아제핀 및 그의 접합체에 관한 공개특허(메디뮨 리미티드, 특허문헌 1), 증식 질환의 치료를 위한 비대칭 피롤로벤조디아제핀 이량체에 관한 공개특허(메디뮨 리미티드, 특허문헌 2), 피롤로벤조디아제핀에 관한 등록특허(메디뮨 리미티드, 특허문헌3), 증식성 질환 치료용 피롤로벤조디아제핀에 관한 등록특허(메디뮨 리미티드, 특허문헌 4), 피롤로벤조디아제핀에 관한 공개특허(메디뮨 리미티드, 특허문헌 5), 피롤로벤조디아제핀에 관한 등록특허(스피로젠 리미티드, 특허문헌 6) 등이 존재한다. 이들은 피롤로벤조디아제핀 화합물 구조를 변형하여 항종양 활성이 증진된다는 점 등을 개시하고 있거나, 이러한 변형된 구조를 갖는 피롤로벤조디아제핀 화합물을 항체-약물 접합체의 형태로 투여하여 항암 활성을 증진시킬 수 있다는 점을 개시하고 있을 뿐이다.
한편 피롤로벤조디아제핀 이량체(dimer)의 형태에 대해 카바메이트로 연결되는 형태를 갖는 항체-약물 접합체에 관한 기술, 단량체 형태의 피롤로벤조디아제핀 화합물을 전구체(prodrug) 형태로 함으로써 세포독성이 적고 안정한 것으로 나타났다는 점이 개시된 논문, N10-(4-니트로벤질)카바메이트-보호된 피롤로벤조디아제핀 전구체의 제법 및 활성에 대한 연구논문 등이 존재한다(비특허문헌 7, 비특허문헌 8 및 비특허문헌 9 참조).
그러나 상기 기술들의 경우, 피롤로벤조디아제핀 합성 시 낮은 수율로 인해 스케일 업이 쉽지 않은 문제가 있다는 점, 또한 투약 후 혈중에서의 안정성이 떨어지는 문제가 충분히 해결되기에는 부족하다는 점에서 한계가 있다. 또한 최근 ADC 분야의 선구자로 다수의 파이프라인을 보유하고 있었던 Seattle Genetics사의 경우, 백혈병 환자를 대상으로 한 SGN-CD33A의 임상 중 사망률 증가로 임상을 중단한 이후 피롤로벤조디아제핀 이량체가 도입되어 있는 SGN-CD123A(표적 : CD123), SGN-CD19B(표적 : CD19), SGN-CD352A(표적 ; CD352)의 임상을 모두 중단하였는데, 이는 피롤로벤조디아제핀 이량체의 강한 독성 때문으로 파악되고 있다. ADC therapeutics사의 ADCT-502도 피롤로벤조디아제핀 이량체에 의한 독성으로 인하여 안전성의 이슈로 중단하였다. 그러나, ADC therapeutics사가 보유하고 있는 다양한 표적에 대한 피롤로벤조디아제핀 이량체-ADCs의 임상은 진행형이다.
따라서 피롤로벤조디아제핀의 수율을 높일 수 있는 제조방법의 개발, 및 투약 후 혈중 안정성을 높이고 독성을 낮추면서도, 기존 항암제 대비 동등 내지 보다 우수한 효과를 나타낼 수 있는 신규한 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물의 개발이 필요하다.
한편 항체-약물 접합체(ADCs, antibody-drug conjugates)는 항원과 결합하는 항체에 독소 또는 약물을 결합시킨 후 세포 내부에서 독성물질을 방출하면서 암세포 등을 사멸에 이르게 하는 표적지향성 신기술이다. 건강한 세포에는 최소한으로 영향을 주면서 약물을 타깃 암세포에 정확하게 전달하고, 특정한 조건하에서만 방출되도록 해주기 때문에 항체 치료제 자체보다 효능이 우수하고 기존의 항암제들에 비해 부작용의 위험성을 크게 낮출 수 있는 기술이다.
이러한 항체-약물 접합체의 기본 구조는 항체-링커-저분자 약물(독소)로 구성되어 있다. 여기서 링커는 단순히 항체와 약물을 연결시켜주는 기능적인 역할뿐 아니라, 체내 순환시 안정하게 타깃 세포까지 도달 후 약물이 세포내로 들어가 항체-약물간 해리현상(예, 효소에 의한 가수분해에 의한 결과)에 의해 약물이 잘 떨어지면서 타깃 암세포에 약효를 나타내도록 해야 한다.
본 발명의 발명자는 혈장 내에서 보다 안정하고 체내 순환시에도 안정적이며 약물이 암세포 내에서 쉽게 방출되어 약효를 나타낼 수 있는 효과적인 자가-희생 기(self-immolative group)을 포함하는 링커를 개발하여 이에 대해 특허를 확보한 바 있다(한국등록특허 제1,628,872호 등).
한국공개특허 제2013-0040835호 (2013. 4. 24. 공개) 한국공개특허 제2011-0075542호 (2011. 6. 30. 공개) 한국등록특허 제1,700,460호 (2017. 1. 20. 등록) 한국등록특허 제1,687,054호 (2016. 12. 9. 등록) 한국공개특허 제2015-0016245호 (2015. 2. 11. 공개) 한국등록특허 제1,059,183호 (2011. 8. 18. 등록) PCT/US2016/063564호 PCT/US2016/063595호 한국공개특허 제2014-0035393호 (2014. 3. 21. 공개) WO 2017/160569 (2017. 9. 21. 공개) 미국특허 8,697,688호 (2014. 4. 15. 등록) 미국특허 9,713,647호 (2017. 7. 25. 등록) 미국공개특허 2015-0283258 (2015. 10. 8. 공개) 한국공개특허 제2018-0110645호 (2018. 10. 10. 공개)
Kemp Gary C et al., Synthesis and in vitro evaluation of SG3227, a pyrrolobenzodiazepine dimer antibody-drug conjugate payload based on sibiromycin, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters Vol. 27 No. 5, 1154 - 1158 (2017) Julia Mantaj et al., From Anthramycin to Pyrrolobenzodiazepine (PBD)-Containing Antibody-Drug Conjugates (ADCs), Angewandte Chemie International Edition Vol. 56 No. 2, 462 - 488 (2017) Giddens Anna C. et al., Analogues of DNA minor groove cross-linking agents incorporating aminoCBI, an amino derivative of the duocarmycins: Synthesis, cytotoxicity, and potential as payloads for antibody-drug conjugates, Bioorganic & Medicinal Chemistry Vol. 24 No. 22, 6075 - 6081 (2016) Hartley, JA, The development of pyrrolobenzodiazepines as antitumour agents, EXPERT OPIN INV DRUG, 20(6) 733 - 744 (2011) Kamal Ahmed et al., Synthesis, anticancer activity and mitochondrial mediated apoptosis inducing ability of 2,5-diaryloxadiazole-pyrrolobenzodiazepine conjugates, Bioorganic & Medicinal Chemistry Vol. 18 No. 18, 6666 - 6677 (2010) Guichard S.M et al., Influence of P-glycoprotein expression on in vitro cytotoxicity and in vivo antitumour activity of the novel pyrrolobenzodiazepine dimer SJG-136, European Journal of Cancer Vol. 41 No. 12, 1811 - 1818 (2005) Zhang, Donglu et al, Linker Immolation Determines Cell Killing Activity of Disulfide-Linked Pyrrolobenzodiazepine Antibody-Drug Conjugates, ACS Medicinal Chemistry Letters, 7(11), 988-993 (2016) Masterson, Luke A. et al., Synthesis and biological evaluation of novel pyrrolo[2,1-c][1,4]benzodiazepine prodrugs for use in antibody directed enzyme prodrug therapy, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 16(2), 252-256 (2006) Sangnou, M. J. et al., Design and synthesis of novel pyrrolobenzodiazepine (PBD) prodrugs for ADEPT and GDEPT, Bioorganic & Medicinal Chemistry Letters, 10(18), 2083-2086 (2000) Nature Rev. Cancer 2005, 5(5), pp. 405-12; Nature ChemicalBiology, 2010, 17, pp. 498-506; Lane KT, Bees LS, Structural Biology of Protein of Farnesyltransferase and Geranylgeranyltransferase Type I, Journal of Lipid Research, 47, pp. 681-699 (2006); Patrick J. Kasey, Miguel C. Seabra; Protein Prenyltransferases, The Journal of Biological Chemistry, Vol. 271, No. 10, Issue of March 8, pp. 5289-5292 (1996) Benjamin P. Duckworth et al, ChemBioChem 2007, 8, 98; Uyen T. T. Nguyen et al, ChemBioChem 2007, 8, 408; Guillermo R. Labadie et al, J. Org. Chem. 2007, 72(24), 9291; James W. Wollack et al, ChemBioChem 2009, 10, 2934 Iran M. Bell, J. Med. Chem. 2004, 47(8), 1869 Berge, et al., J. Pharm. Sci., 66, 1-19 (1977)
본 발명에서는, 프리 톡신(free toxin) 상태에서 독성이 나타나지 않아 혈중 안정성을 높이고 전신 부작용을 낮추면서도, 기존 항암제 대비 동등 내지 보다 우수한 효과를 나타낼 수 있는 신규한 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물을 개발하고자 한다.
본 발명은 신규한 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물, 이의 약학적으로 허용되는 염, 또는 이의 용매화물을 제공함으로써 상기 과제를 해결하였다.
보다 구체적으로 본 발명에 따른 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물은, 하기 화학식 I의 구조를 갖는다:
[화학식 I]
본 발명에 따른 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물은 프리 톡신(free toxin) 형태에서는 활성이 떨어져 독성이 크게 감소하는 효과를 나타내면서도 리간드-약물 접합체에 약물로 적용되어 투여되는 경우 항암 활성이 기존 항암제 대비 동등 내지 우수한 것으로 나타났는바 치료지수(therapeutic index)가 현저히 향상되는 효과를 나타내며, 따라서 암과 같은 증식성 질환의 표적화, 특이적 치료, 약효의 극대화 및 부작용 발현의 최소화가 가능한 장점이 있다.
또한 종래 방법으로 제조한 리간드-약물 접합체의 경우 불순물의 함량이 높고 노출된 이민 그룹이 뉴클레오필의 공격을 받아 원치 않는 구조의 약물이 생성될 우려가 있는 반면, 본 발명에 따른 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물을 리간드-약물 접합체의 형태로 제조하는 경우, 순도가 높아 분리가 용이하고, 기존 피롤로벤조디아제핀 화합물에 비하여 물성이 보다 향상되는 것으로 나타났다.
도1은 본 발명에 따른 화합물 28의 합성과정을 도식화하여 나타낸 것이다.
도2는 JIMT-1 xenograft model에서의 in vivo 실험결과를 나타낸 그래프이다.
도3은 SD 랫트에서의 단회 투여 독성을 실험한 결과를 나타낸 그래프이다.
도4는 Bystander effect 정도를 실험한 결과를 나타낸 그래프이다.
이하 본 발명을 보다 상세히 설명한다.
본 발명은 하기 화학식 I의 구조를 갖는 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물에 관한 것이다:
[화학식 I]
상기 식에서,
점선은 C1 및 C2, 또는 C2 및 C3 사이의 이중결합의 임의의 존재를 나타내고,
R1은 수소, OH, =O, =CH2, CN, Rm, ORm, =CH-Rm' =C(Rm')2, O-SO2-Rm, CO2Rm, CORm, 할로 및 디할로(dihalo)로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나,
또는 R1은 하기 R6의 정의에 기재된 것 중 하나 일 수 있으며;
여기에서, Rm은 치환되거나 비치환된 C1-12알킬, 치환되거나 비치환된 C2-12알케닐, 치환되거나 비치환된 C2-12알키닐, 치환되거나 비치환된 C5-20아릴, 치환되거나 비치환된 C5-20헤테로아릴, 치환되거나 비치환된 C3-6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 3 내지 7-원 헤테로사이클릴, 치환되거나 비치환된 3 내지 7-원 헤테로사이클로알킬, 및 치환되거나 비치환된 5 내지 7-원 헤테로아릴로 이루어진 그룹으로부터 선택되고,
여기에서 C1-12알킬, C2-12알케닐, C2-12알키닐, C5-20아릴, C5-20헤테로아릴, C3-6사이클로알킬, 3 내지 7-원 헤테로사이클릴, 3 내지 7-원 헤테로사이클로알킬, 또는 5 내지 7-원 헤테로아릴이 치환되는 경우, C1-12알킬, C1-12알콕시, C2-12알케닐, C2-12알키닐, C5-20아릴, C5-20헤테로아릴, C3-6사이클로알킬, 3 내지 7-원 헤테로사이클릴, 3 내지 7-원 헤테로사이클로알킬, 또는 5 내지 7-원 헤테로아릴의 각 수소원자는 각각 독립적으로 C1-12알킬, C2-12알케닐, C2-12알키닐, C5-20아릴, C5-20헤테로아릴, C3-6사이클로알킬, 3 내지 7-원 헤테로사이클릴, 3 내지 7-원 헤테로사이클로알킬, 및 5 내지 7-원 헤테로아릴로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상으로 치환되고
여기에서, Rm'는 Rm, CO2Rm, CORm, CHO, CO2H, 및 할로로 이루어진 그룹으로부터 선택되며;
R2, R3 및 R5 는 각각 독립적으로 H, Rm, OH, ORm, SH, SRm, NH2, NHRm, NRmRm', NO2, Me3Sn 및 할로로 이루어진 그룹으로부터 선택되며,
여기에서 Rm 및 Rm'은 상기에서 정의한 바와 같고;
R4는 수소, Rm, OH, ORm, SH, SRm, NH2, NHRm, NRmRm', NO2, Me3Sn, 할로, 치환 또는 비치환된 C1-6알킬, 치환 또는 비치환된 C1-6알콕시, 치환 또는 비치환된 C2-6알케닐, 치환 또는 비치환된 C2-6알키닐, 치환 또는 비치환된 C3-6사이클로알킬, 치환 또는 비치환된 3 내지 7-원 헤테로사이클로알킬, 치환 또는 비치환된 C5-12아릴, 치환 또는 비치환된 5 내지 7-원 헤테로아릴, -CN, -NCO, -ORn, -OC(O)Rn, -OC(O)NRnRn', -OS(O)Rn, -OS(O)2Rn, -SRn, -S(O)Rn, -S(O)2Rn, -S(O)NRnRn', -S(O)2NRnRn', -OS(O)NRnRn', -OS(O)2NRnRn', -NRnRn', -NRnC(O)Ro, -NRnC(O)ORo, -NRnC(O)NRoRo', -NRnS(O)Ro, -NRnS(O)2Ro, -NRnS(O)NRoRo', -NRnS(O)2NRoRo', -C(O)Rn, -C(O)ORn 및 -C(O)NRnRn'로 이루어진 그룹으로부터 선택되고,
여기에서 C1-6알킬, C1-6알콕시, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C3-6사이클로알킬, 3 내지 7-원 헤테로사이클로알킬, C5-12아릴, 5 내지 7-원 헤테로아릴이 치환되는 경우, C1-6알킬, C1-6알콕시, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C3-6사이클로알킬, 3 내지 7-원 헤테로사이클로알킬, C5-12아릴, 5 내지 7-원 헤테로아릴의 각 수소원자는 각각 독립적으로 C1-6알킬, C1-6알콕시, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C3-C6사이클로알킬, 3 내지 7-원 헤테로사이클로알킬, C5-10아릴, 5 내지 7-원 헤테로아릴, -ORp, -OC(O)Rp, -OC(O)NRpRp', -OS(O)Rp, -OS(O)2Rp, -SRp, -S(O)Rp, -S(O)2Rp, -S(O)NRpRp', -S(O)2NRpRp', -OS(O)NRpRp', -OS(O)2NRpRp', -NRpRp', -NRpC(O)Rq, -NRpC(O)ORx, -NRpC(O)NRxRx', -NRpS(O)Rx, -NRpS(O)2Rx, -NRpS(O)NRxRx', -NRpS(O)2NRxRx', -C(O)Rp, -C(O)ORp 또는 -C(O)NRpRp로 치환될 수 있으며,
여기에서, Rn, Ro, Rp, Rx, Rn‘, Ro’, Rp‘, 및 Rx’는 각각 독립적으로 H, C1-7알킬, C2-7알케닐, C2-7알키닐, C3-13사이클로알킬, 3 내지 7-원 헤테로사이클로알킬, C6-10아릴, 및 5 내지 7-원 헤테로아릴로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나, 또는
R4는 하기 R6의 정의에 기재된 것 중 하나일 수 있으며;
X 및 X'에는 각각 독립적으로 -C(O)O*, -S(O)O*, -C(O)*, -C(O)NR*, -S(O)2NR*, -P(O)R'NR*, -S(O)NR*, 및 -PO2NR*기로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 어느 하나가 부착되며,
여기에서 *은 링커가 부착되는 부분이고,
여기에서, R, 및 R'은 각각 독립적으로 H, OH, N3, CN, NO2, SH, NH2, ONH2, NHNH2, 할로, 치환되거나 비치환된 C1-8알킬, 치환되거나 비치환된 C3-8사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 C1-8알콕시, 치환되거나 비치환된 C1-8알킬티오, 치환되거나 비치환된 C3-20헤테로아릴, 치환되거나 비치환된 C5-20아릴 또는 모노- 또는 다이-C1-8알킬아미노이고,
여기에서 C1-8알킬, C3-8사이클로알킬, C1-8알콕시, C1-8알킬티오, C3-20헤테로아릴, C5-20아릴이 치환되는 경우, H, OH, N3, CN, NO2, SH, NH2, ONH2, NNH2, 할로, C1-6알킬, C1-6알콕시 및 C5-12아릴로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 치환기로 치환되며;
Y 및 Y'은 각각 독립적으로 O, S, 및 N(H)로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
R6은 하기 화학식 II의 구조를 갖는 극성 작용기이며,
[화학식 II]
-A-B1-B2-C
여기에서,
A는 할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 할로알케닐, 할로알키닐, 아릴, 할로아릴, 아랄킬, 할로아랄킬, 알콕시, 할로알콕시, 카보닐옥시, 할로카보닐옥시, 아릴옥시, 할로아릴옥시, 실릴 및 실록시 중에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환 또는 비치환된,
C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C3-20아릴, C3-8사이클로알킬, 3 내지 7원-헤테로사이클로알킬 또는 5 내지 7원-헤테로아릴이고,
B1은 결합, -O-, -NH-, -S-, -CO2, -CONRm-, -CONRmRm', -CH=CH-, -C≡C-, -N-, -P-이며, 또는 B1은 브랜칭 유닛(branching unit)일 수 있고,
여기에서 브랜칭 유닛은 C2-100알케닐(여기서, 알케닐의 탄소 원자는 하나 또는 그 이상의 N, O 및 S로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 헤테로원자로 치환될 수 있으며, 알케닐은 하나 또는 그 이상의 C1-20알킬로 더 치환될 수 있다), 친수성(hydrophilic) 아미노산, -C(O)-, -C(O)NR''''-, -C(O)O-, -(CH2)s-NHC(O)-(CH2)t-, -(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-, -(CH2)s-NHC(O)-(CH2)t-C(O)-, -(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-C(O)-, -S(O)2NR''''-, -P(O)R'''''NR''''-, -S(O)NR''''-, 또는 -PO2NR''''- (여기서, R'''' 및 R'''''는 각각 독립적으로 H, C1-8알킬, C3-8사이클로알킬, C1-8알콕시, C1-8알킬티오, 모노- 또는 다이-C1-8알킬아미노, C3-20헤테로아릴 또는 C5-20아릴이며, s, t, u 및 v는 각각 독립적으로 0 내지 10의 정수이고),
B2는 결합, -(CH2)r(V(CH2)p)q-, -((CH2)pV)q-, -V(Y(CH2)p)q-, -(CH2)r(V(CH2)p)qY-, -((CH2)pV)q(CH2)r-, -Y((CH2)pV)q-, 또는 -(CH2)r(V(CH2)p)qYCH2- 구조를 갖고, 여기에서 r은 0 내지 10의 정수이고, p는 1 내지 10의 정수이며, q는 1 내지 20의 정수이고, V 및 Y는 각각 독립적으로 단일결합, -O-, -S-, -NR21-, -C(O)NR22-, -NR23C(O)-, -NR23C(O)R24-, -NR24SO2-, 또는 -SO2NR25-이며, R21 내지 R25는 각각 독립적으로 수소, (C1-6)알킬렌, (C1-6)알킬, (C1-6)알킬(C6-20)아릴 또는 (C1-6)알킬(C3-20)헤테로아릴이고;
C는 -RqORr, -ORr, -OC(O)ORr, -RqOC(O)ORr, -C(O)ORr, -RqC(O)ORr, -C(O)Rr, -RqC(O)Rr, -OC(O)Rr, -RqOC(O)Rr, -(RqO)n-ORr, -(ORq)n-ORr, -C(O)-O-C(O)Rr, -RqC(O)-O-C(O)Rr, -SRr, -RqSRr, -SSRr, -RqSSRr, -S(=O)Rr, -RqS(=O)Rr, -RqC(=S)Rr-, -RqC(=S)SRr, -RqSO3Rr, -SO3Rr, -CN, -RqCN, -NNC(=S)Rr, -RqNNC(=S)Rr, -NO2, RqNO2, , , , , , , , , -SO2Rq, -RqSO2Rr, -OSO2Rr, -RqOSO2Rr, -OSO2ORr, -RqOSO2ORr, ,, , , , , , , , , , , , , , 및 로 이루어진 그룹으로부터 선택되고,
여기에서,
Rq 및 Rq‘는 서로 동일하거나 상이하고, 각각 독립적으로
할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 할로알케닐, 할로알키닐, 아릴, 할로아릴, 아랄킬, 할로아랄킬, 알콕시, 할로알콕시, 카보닐옥시, 할로카보닐옥시, 아릴옥시, 할로아릴옥시, 실릴 및 실록시 중에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환 또는 비치환된 C1-20의 선형 또는 분지형 알킬렌;
할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 할로알케닐, 할로알키닐, 아릴, 할로아릴, 아랄킬, 할로아랄킬, 알콕시, 할로알콕시, 카보닐옥시, 할로카보닐옥시, 아릴옥시, 할로아릴옥시, 실릴 및 실록시 중에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환 또는 비치환된 C2-20의 선형 또는 분지형 알케닐렌;
할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 할로알케닐, 할로알키닐, 아릴, 할로아릴, 아랄킬, 할로아랄킬, 알콕시, 할로알콕시, 카보닐옥시, 할로카보닐옥시, 아릴옥시, 할로아릴옥시, 실릴 및 실록시 중에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환 또는 비치환된 C2-20의 선형 또는 분지형 알키닐렌;
할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 할로알케닐, 할로알키닐, 아릴, 할로아릴, 아랄킬, 할로아랄킬, 알콕시, 할로알콕시, 카보닐옥시, 할로카보닐옥시, 아릴옥시, 할로아릴옥시, 실릴 및 실록시 중에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환 또는 비치환된 C3-12의 사이클로알킬렌;
할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 할로알케닐, 할로알키닐, 아릴, 할로아릴, 아랄킬, 할로아랄킬, 알콕시, 할로알콕시, 카보닐옥시, 할로카보닐옥시, 아릴옥시, 할로아릴옥시, 실릴 및 실록시 중에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환 또는 비치환된 C6-40의 아릴렌;
할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 할로알케닐, 할로알키닐, 아릴, 할로아릴, 아랄킬, 할로아랄킬, 알콕시, 할로알콕시, 카보닐옥시, 할로카보닐옥시, 아릴옥시, 할로아릴옥시, 실릴 및 실록시 중에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환 또는 비치환된 C1-20의 알콕실렌; 또는
할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 할로알케닐, 할로알키닐, 아릴, 할로아릴, 아랄킬, 할로아랄킬, 알콕시, 할로알콕시, 카보닐옥시, 할로카보닐옥시, 아릴옥시, 할로아릴옥시, 실릴 및 실록시 중에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환 또는 비치환된 C1-20의 카보닐옥실렌이고,
Rr 및 Rs는 서로 동일하거나 상이하고, 각각 독립적으로
수소;
할로겐;
할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 할로알케닐, 할로알키닐, 아릴, 할로아릴, 아랄킬, 할로아랄킬, 알콕시, 할로알콕시, 카복실, 카보닐옥시, 할로카보닐옥시, 아릴옥시, 할로아릴옥시, 실릴 및 실록시 중에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환 또는 비치환된 C1-20의 선형 또는 분지형 알킬;
할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 할로알케닐, 할로알키닐, 아릴, 할로아릴, 아랄킬, 할로아랄킬, 알콕시, 할로알콕시, 카복실, 카보닐옥시, 할로카보닐옥시, 아릴옥시, 할로아릴옥시, 실릴 및 실록시 중에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환 또는 비치환된 C2-20의 선형 또는 분지형 알케닐;
할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 할로알케닐, 할로알키닐, 아릴, 할로아릴, 아랄킬, 할로아랄킬, 알콕시, 할로알콕시, 카복실, 카보닐옥시, 할로카보닐옥시, 아릴옥시, 할로아릴옥시, 실릴 및 실록시 중에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환 또는 비치환된 C2-20의 선형 또는 분지형 알키닐;
할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 할로알케닐, 할로알키닐, 아릴, 할로아릴, 아랄킬, 할로아랄킬, 알콕시, 할로알콕시, 카복실, 카보닐옥시, 할로카보닐옥시, 아릴옥시, 할로아릴옥시, 실릴 및 실록시 중에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환 또는 비치환된 C3-12의 사이클로알킬;
할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 할로알케닐, 할로알키닐, 아릴, 할로아릴, 아랄킬, 할로아랄킬, 알콕시, 할로알콕시, 카복실, 카보닐옥시, 할로카보닐옥시, 아릴옥시, 할로아릴옥시, 실릴 및 실록시 중에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환 또는 비치환된 C6-40의 아릴;
할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 할로알케닐, 할로알키닐, 아릴, 할로아릴, 아랄킬, 할로아랄킬, 알콕시, 할로알콕시, 카복실, 카보닐옥시, 할로카보닐옥시, 아릴옥시, 할로아릴옥시, 실릴 및 실록시 중에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환 또는 비치환된 C1-20의 알콕시; 또는
할로겐, 알킬, 알케닐, 알키닐, 할로알킬, 할로알케닐, 할로알키닐, 아릴, 할로아릴, 아랄킬, 할로아랄킬, 알콕시, 할로알콕시, 카복실, 카보닐옥시, 할로카보닐옥시, 아릴옥시, 할로아릴옥시, 실릴 및 실록시 중에서 선택된 1 이상의 치환기로 치환 또는 비치환된 C1-20의 카보닐옥시이며,
n은 각각 독립적으로 1 내지 10의 정수이고,
R7은 H, 치환 또는 비치환된 C1-6알킬, 치환 또는 비치환된 C2-6 알케닐, 치환 또는 비치환된 C2-6알키닐, 치환 또는 비치환된 C3-6사이클로알킬, 치환 또는 비치환된 3 내지 7-원 헤테로사이클로알킬, 치환 또는 비치환된 C6-10아릴, 치환 또는 비치환된 5 내지 7-원 헤테로아릴, -ORt, -OC(O)Rt, -OC(O)NRtRt', -OS(O)Rt, -OS(O)2Rt, -SRt, -S(O)Rt, -S(O)2Rt, -S(O)NRtRt', -S(O)2NRrRr', -OS(O)NRtRt', -OS(O)2NRtRt', -NRtRt', -NRtC(O)Ru, -NRtC(O)ORu, -NRtC(O)NRuRu', -NRtS(O)Ru, -NRtS(O)2Ru, -NRtS(O)NRuRu', -NRtS(O)2NRuRu, -C(O)Rt , -C(O)ORu 또는 -C(O)NRtRt'이고,
여기에서 C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C3-6사이클로알킬, 3 내지 7-원 헤테로사이클로알킬, C6-10아릴, 5 내지 7-원 헤테로아릴이 치환되는 경우, C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C3-6사이클로알킬, 3 내지 7-원 헤테로사이클로알킬, C6-10아릴, 5 내지 7-원 헤테로아릴의 각 수소원자는 각각 독립적으로 C1-6알킬, C2-6알케닐, C2-6알키닐, C3-6사이클로알킬, 3 내지 7-원 헤테로사이클로알킬, C6-10아릴, 5 내지 7-원 헤테로아릴, -ORv, -OC(O)Rv, -OC(O)NRvRv', -OS(O)Rv , -OS(O)2Rv, -SRv, -S(O)Rv, -S(O)2Rv, -S(O)NRvRv' , -S(O)2NRvRv', -OS(O)NRvRv' , -OS(O)2NRvRv', -NRvRv', -NRvC(O)Rw, -NRvC(O)ORw, -NRv, C(O)NRwRw', -NRvS(O)Rw, -NRvS(O)2Rw, -NRvS(O)NRwRw', -NRvS(O)2NRwRw', -C(O)Rv, - C(O)ORv 또는 -C(O)NRvRv'로 치환되며,
여기에서, Rt, Rt', Ru, Ru', Rv, Rv', Rw 및 Rw'은 각각 독립적으로 H, C1-7알킬, C2-7알케닐, C2-7알키닐, C3-13사이클로알킬, 3 내지 7-원 헤테로사이클로알킬, C5-10아릴, 및 5 내지 7-원 헤테로아릴로 이루어진 그룹으로부터 선택된다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화학식 I의 R1은 H, OH, =O, =CH2, CN, 및 C1-6알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화학식 I의 R2, R3 및 R5는 각각 독립적으로 H, OH, 및 ORm으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있으며, 여기에서 Rm은 상기에 정의된 바와 같다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화학식 I의 R4는 H, Rm, OH, 및 ORm으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있고, 여기에서 Rm은 C1-6알킬일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화학식 I의 Y 및 Y'은 O일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화학식 I의 R6는 하기 화학식 II의 구조를 가지며,
[화학식 II]
-A-B1-B2-C
여기에서,
A는 C1-6알킬 또는 C3-20아릴이고;
B1은 -O-, -NH-, -C≡C-, 및 -CONRmRm'으로 이루어진 그룹으로부터 선택되며, 여기에서 Rm 및 Rm'은 각각 독립적으로 수소 또는 C1-6알킬이고;
B2는 -((CH2)pV)q- 또는 -V(Y(CH2)p)q-이고,
여기에서
V는 O 또는 -NR23C(O)R24-이고(여기에서 R23 및 R24는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-6알킬렌이며,
p는 2이고,
q는 1 내지 10의 정수이며;
C는 RqC(O)ORr 또는 이고,
여기에서,
*Rq 및 Rq'은 각각 독립적으로 C1-6알킬렌, C2-6알케닐렌 또는 C2-6알키닐렌이며,
Rr 및 Rs는 각각 독립적으로 수소, 카복실, 카복실로 치환된 C1-6알킬, 및 C1-6알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화학식 I의 R7은 수소, C1-6알킬, 또는 ORt(여기에서 Rt는 H 또는 C1-7알킬이다)일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화학식 I의 X 및 X'은 각각 독립적으로 -C(O)O*, -C(O)* 및 -C(O)NR*로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, 여기에서 R은 각각 독립적으로 H, OH, N3, CN, NO2, SH, NH2, ONH2, NNH2, 할로, C1-3알킬 또는 C1-3알콕시일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물은
,
,
,
,
, 및
로 구성된 그룹으로부터 선택된 1종일 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 양태에서, 하기 화학식 III의 구조를 갖는 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이 제공된다:
[화학식 III]
Ligand - (L - D) n
상기 식에서,
Ligand는 리간드이고,
L은 링커이며,
D는 상기한 바와 같은 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물이고,
여기에서 링커는 D의 N10 위치, N10' 위치, 또는 N10 및 N10' 위치를 통해 D와 결합되며,
n은 1 내지 20의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화학식 III의 링커는, 상기 기재된 본 발명의 일 양태에 따른 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물의 X 및 X'을 통해 화합물과 결합될 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화학식 III에서 n은 1 내지 10의 정수일 수 있다.
본 발명의 또 다른 일 양태에서, 하기 화학식 IV의 구조를 갖는 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커 화합물, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이 제공된다:
[화학식 IV]
상기 식에서,
점선, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, X, Y, R1', R2', R3', R4', R5', R7', X', 및 Y'은 각각 상기 화학식 I의 화합물에 대해 정의한 바와 동일하고,
Xa 및 Xa'은 각각 독립적으로 결합(bond), 또는 치환되거나 비치환된 C1-6알킬렌이며, 여기에서 C1-6알킬렌이 치환되는 경우, 수소, C1-8알킬 또는 C3-8사이클로알킬로 치환되고,
G 및 G'은 글루쿠로나이드(glucuronide)기, 갈락토사이드기 또는 이의 유도체이며,
Z는 H, C1-8알킬, 할로, NO2, CN, , 및 -(CH2)m-OCH3로 이루어진 그룹으로부터 선택되고,
n은 1 내지 3의 정수이고, n이 2 이상의 정수인 경우 각각의 Z는 서로 동일하거나 상이할 수 있으며,
W는 -C(O)-, -C(O)NR''-, -C(O)O-, -S(O)2NR''-, -P(O)R'''NR''-, -S(O)NR''-, 또는 -PO2NR''-이고, 상기 R'' 및 R'''은 각각 독립적으로 H, C1-8알킬, C3-8사이클로알킬, C1-8알콕시, C1-8알킬티오, 모노- 또는 다이-C 1-8알킬아미노, C3-20헤테로아릴, 또는 C6-20아릴이며,
L은 브랜칭 유닛(branching unit), 연결 유닛(connection unit) 및 결합 유닛(binding unit)으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 유닛, 또는 이들 유닛의 조합이며,
여기에서 연결 유닛은 W와 결합 유닛을, W와 브랜칭 유닛을, 브랜칭 유닛과 브랜칭 유닛을, 또는 브랜칭 유닛과 결합 유닛을 연결하고, 여기에서 브랜칭 유닛은 연결 유닛과 W를, 또는 연결 유닛과 또 다른 연결 유닛을 연결하며,
브랜칭 유닛은 C2-100알케닐(여기서, 알케닐의 탄소 원자는 하나 또는 그 이상의 N, O 및 S로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 헤테로원자로 치환될 수 있으며, 알케닐은 하나 또는 그 이상의 C1-20알킬로 더 치환될 수 있다), 친수성(hydrophilic) 아미노산, -C(O)-, -C(O)NR''''-, -C(O)O-, -(CH2)s-NHC(O)- (CH2)t-, -(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-, -(CH2)s-NHC(O)-(CH2)t-C(O)-, -(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v -C(O)-, -S(O)2NR''''-, -P(O)R'''''NR''''-, -S(O)NR''''-, 또는 -PO2NR''''- (여기서, R'''' 및 R'''''는 각각 독립적으로 H, C1-8알킬, C3-8사이클로알킬, C1-8알콕시, C1-8알킬티오, 모노- 또는 다이-C1-8알킬아미노, C3-20헤테로아릴 또는 C5-20아릴이며, s, t, u 및 v는 각각 독립적으로 0 내지 10의 정수이고),
연결 유닛은 -(CH2)r(V(CH2)p)q-이며, 여기에서, r은 0 내지 10의 정수이고, p는 0 내지 12의 정수이며, q는 1 내지 20의 정수이고, V는 단일결합, -O-, 또는 S-이며,
결합 유닛은 , , 또는 이고, 여기에서 L1은 단일결합 또는 C2-30알케닐이며, R11은 H 또는 C1-10알킬이고, L2는 C2-30알케닐이며;
Rv는 -NH2, N3, 치환되거나 비치환된 C1-12알킬, C1-12알키닐, C1-3알콕시, 치환되거나 비치환된 C3-20헤테로아릴, C3-20헤테로사이클릴 또는 치환되거나 비치환된 C5-20아릴이고,
여기에서 C1-12알킬, C3-20헤테로아릴, C3-20헤테로사이클릴 또는 C5-20아릴이 치환되는 경우, C3-20헤테로아릴, C3-20헤테로사이클릴 또는 C5-20아릴에 존재하는 하나 이상의 수소원자는 각각 독립적으로 OH, =O, 할로, C1-6알킬, C1-6알콕시, C2-6알케닐 옥시, 카복시, C1-6알콕시카르보닐, C1-6알킬카르보닐, 포르밀, C3-8 아릴, C5-12아릴옥시, C5-12아릴카르보닐, 또는 C3-6헤테로아릴로 치환된다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화학식 IV의 Xa 및 Xa'은 각각 독립적으로 결합(bond) 또는 C1-3알킬일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화학식 IV의 Z는 H, , 및 -(CH2)m-OCH3로 이루어진 그룹으로부터 선택되며,
R8, R9 및 R10은 각각 독립적으로, H, C1-3알킬, 및 C1-3알콕시로 이루어진 그룹으로부터 선택되고, m은 1 내지 6일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화학식 IV의 W는 -C(O)-, -C(O)NR'''- 또는 -C(O)O-이고, 여기서 R'''은 H 또는 C1-8알킬일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화학식 IV의 L은 브랜칭 유닛(branching unit), 연결 유닛(connection unit) 및 결합 유닛(binding unit)으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 유닛, 또는 이들 유닛의 조합이며,
여기에서 연결 유닛은 W와 결합 유닛을, W와 브랜칭 유닛을, 브랜칭 유닛과 브랜칭 유닛을, 또는 브랜칭 유닛과 결합 유닛을 연결하고,
여기에서 브랜칭 유닛은 연결 유닛과 W를, 또는 연결 유닛과 또 다른 연결 유닛을 연결하며, 브랜칭 유닛은 C2-8알케닐(여기서, 알케닐의 탄소 원자는 하나 또는 그 이상의 N, O 및 S로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 헤테로원자로 치환될 수 있으며, 알케닐은 하나 또는 그 이상의 C1-6알킬로 더 치환될 수 있다), 친수성(hydrophilic) 아미노산, -C(O)-, -C(O)NR''''-, -C(O)O-, -(CH2)s-NHC(O)-(CH2)t-, -(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-, -(CH2)s-NHC(O)-(CH2)t-C(O)-, -(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-C(O)-이고(여기서, R''''는 H, C1-8알킬, C3-8사이클로알킬, C1-8알콕시, C1-8알킬티오, 모노- 또는 다이-C1-8알킬아미노, C3-20헤테로아릴 또는 C5-20아릴이며, s, t, u 및 v는 각각 독립적으로 0 내지 5의 정수이고),
연결 유닛은 -(CH2)r(V(CH2)p)q-이며, 여기에서, r은 0 내지 10의 정수이고, p는 0 내지 12의 정수이며, q는 1 내지 20의 정수이고, V는 단일결합, 또는 -O-이며, 결합 유닛은 , , 또는 이고, 여기에서 L1은 단일결합 또는 C2-8알케닐이며, R11은 H 또는 C1-6알킬이고, L2는 C2-8알케닐이며; 여기서, 연결 유닛은 -(CH2)r(V(CH2)p)q-이며, 여기서, r은 0 내지 8의 정수이고, p는 1 내지 12의 정수이며, q는 1 내지 10의 정수이고, V는 단일결합 또는 -O-일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커 화합물은
,
,
,
,
,
,
,
,
,
, 및
로 구성된 그룹으로부터 선택된 1종일 수 있다.
본 발명에 따른 또 다른 일 양태에서, 하기 화학식 V의 구조를 갖는 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물이 제공된다:
[화학식 V]
상기 식에서,
점선, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, X, Y, R1', R2', R3', R4', R5', R7', X', Y'은 각각 상기 화학식 I의 화합물에 대해 정의한 바와 동일하고,
Xa, G, Z, W, L, Xa', G', Z'은 각각 상기 화학식 IV의 화합물에 대해 정의한 바와 동일하며;
Ligand는 항원 결합 모이어티이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화학식 V의 Ligand는 단백질일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 단백질은 올리고펩티드, 폴리펩티드, 항체, 항원성 폴리펩티드의 단편 또는 인공항체(repebody)일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 화학식 V의 Ligand는 항체일 수 있고, 여기에서 항체는 항-HER2 항체, 항-DLK1 항체, 항-ROR1 항체, 항-MUC1 항체, CD19 항체 또는 항-CD276 항체일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 단백질은 이소프레노이드 트랜스퍼라아제에 의하여 인식될 수 있는 하나 이상의 아미노산 모티프를 갖는 것일 수 있고, 즉, 단백질의 C-말단(단편, 이의 유사체 또는 유도체)은 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 아미노산 모티프에 결합될 수 있다. 또한, 상기 단백질과 아미노산 모티프 사이에 아미노산, 올리고펩티드 또는 폴리펩티드로 구성된 스페이서 유닛을 더 포함할 수 있다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 단백질은 아미노산 모티프를 통하여 링커에 공유결합된다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 아미노산 모티프는 단백질의 C-말단에 공유결합되거나, 단백질의 C-말단에 공유결합되는 적어도 하나의 스페이서 유닛에 공유결합될 수 있다. 단백질은 아미노산 모티프와 바로 공유결합되거나 스페이서 유닛과 공유결합되어 아미노산 모티프와 연결될 수 있다. 상기 아미노산 스페이서 유닛은 1 내지 20개의 아미노산으로 구성되며, 그 중에서 글리신 유닛이 바람직하다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 단백질의 C-말단은 항체의 경쇄 또는 중쇄의 것이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 단백질은 단일클론 항체이다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 이소프레노이드 트랜스퍼라아제는 FTase(farnesyl protein transferase) 또는 GGTase(geranylgeranyl transferase)일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 이소프레노이드 트랜스퍼라아제는 FTase(farnesyl protein transferase) 또는 GGTase(geranylgeranyl transferase)를 포함하고, 이들은 각각 파네실 또는 게라닐-게라닐 잔기의 표적 단백질의 C-말단 시스테인(들)로의 전이를 수반한다. GGTase는 GGTase I 및 GGTase II로 분류될 수 있다. FTase 및 GGTase I은 CAAX 모티프를 인식할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 아미노산 모티프가 CYYX, XXCC, XCXC 또는 CXX이고, 여기에서 C는 시스테인, Y는 지방족 아미노산, X는 이소프레노이드 트랜스퍼라아제의 기질 특이성을 결정하는 아미노산일 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 아미노산 모티프를 갖는 단백질은 A-HC-(G)ZCVIM, A-HC-(G)ZCVLL, A-LC-(G)ZCVIM 및 A-LC-(G)ZCVLL로 이루어진 군으로부터 선택되고, 상기 A는 항체를 나타내며, HC는 중쇄를 나타내고, LC는 경쇄를 나타내며, G는 글리신 유닛을 나타내고, z는 0 내지 20의 정수이다.
본 발명의 일 양태에서, 이소프레노이드 트랜스퍼라제는 이소기질(isosubstrate)뿐만 아니라 기질을 인식할 수 있다. 이소기질은 기질에 변형을 갖는 기질 유사체를 말한다. 이소프레노이드 트랜스퍼라제는 단백질의 C-말단에서 특정 아미노산 모티프 (예: CAAX 모티프)를 알킬화시킨다 (참조: Benjamin P. Duckworth et al, ChemBioChem 2007, 8, 98; Uyen T. T. Nguyen et al, ChemBioChem 2007, 8, 408; Guillermo R. Labadie et al, J. Org. Chem. 2007, 72(24), 9291; James W. Wollack et al, ChemBioChem 2009, 10, 2934). 관능화 단백질은 C-말단 시스테인(들)에서 알킬화를 통하여 이소프레노이드 트랜스퍼라제 및 이소기질을 사용하여 생성할 수 있다.
예를 들면, C-말단 CAAX 모티프의 시스테인 잔기는 이소프레노이드 트랜스퍼라제를 사용하여 이소기질과 반응시킬 수 있다. 특정 경우, AAX는 이어서 프로테아제에 의하여 제거할 수 있다. 수득한 시스테인은 이어서 효소에 의하여 카복시 말단에서 메틸화시킬 수 있다(참조: Iran M. Bell, J. Med. Chem. 2004, 47(8), 1869).
본 발명의 단백질은 당해 기술분야에 익히 공지된 어떠한 분자 생물 또는 세포 생물법을 사용하여 제조할 수 있다. 예를 들면, 일시적 트랜스펙션법이 사용될 수 있다. 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 특정 아미노산 모티프를 인코딩하는 유전적 서열은 이의 C-말단에 특정 아미노산 모티프를 갖는 단백질(단편 또는 이의 유사체)을 발현하도록 표준 PCR 기술을 사용하여 공지된 플라스미드 벡터로 삽입할 수 있다. 이와 같이, 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 하나 이상의 아미노산 모티프를 갖는 단백질이 발현될 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 단백질이 단일클론 항체인 경우, 단일클론 항체의 하나 이상의 경쇄, 단일클론 항체의 하나 이상의 중쇄 또는 둘 다는 이소프레노이드 트랜스퍼라제에 의하여 인식될 수 있는 아미노산 모티프를 갖는 아미노산 부위를 포함할 수 있으며, 당업자는 관심 있는 표적을 선택적으로 결합시키는 단백질(예: 피검체의 표적 세포)을 즉시 선택할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 관심 있는 표적에 특이적으로 결합하는 항체 또는 항원의 단편을 포함할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 아미노산 모티프는 CYYX, XXCC, XCXC 또는 CXX(여기서, C가 시스테인이고, Y가 지방족 아미노산이며, X가 이소프레노이드 트랜스퍼라제의 기질 특이성을 결정하는 아미노산이다)로, 상기 아미노산 모티프가 CYYX인 것이 보다 바람직하다.
본 발명의 또 다른 일 양태에서, 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 포함하는, 증식성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물이 제공된다.
본 발명의 또 다른 일 양태에서, 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물; 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 증식성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물이 제공된다.
본 발명의 또 다른 일 양태에서, 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물; 1종 이상의 치료적 공동 작용제(therapeutic co-agent); 및 약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는, 증식성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물이 제공된다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 치료적 공동-작용제는 증식성 질환에 대한 예방, 개선 또는 치료효과를 나타내는 작용제, 또는 증식성 질환 치료제 투약 시 나타나는 부작용의 발현을 감소시킬 수 있는 작용제, 또는 면역력 증진 효과를 나타내는 작용제 등일 수 있으나 이로 제한되는 것은 아니고, 피롤로벤조디아제핀과 함께 배합제의 형태로 적용하였을 때 치료적으로 유용한 효과를 나타내고/거나, 피롤로벤조디아제핀의 안정성을 보다 향상시키고/거나, 피롤로벤조디아제핀 투여 시 나타날 수 있는 부작용을 감소시키고/거나, 면역력의 증진을 통해 치료효과를 극대화할 수 있는 효과를 나타내는 제제라면 어떤 것이든 배합하여 적용할 수 있음을 의미한다.
본 발명의 또 다른 일 양태에서, 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물의 증식성 질환의 치료 용도가 제공된다.
본 발명의 또 다른 일 양태에서, 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는, 증식성 질환을 치료하는 방법이 제공된다. 즉, 본 발명에서는 증식성 질환을 치료하기 위한 유효량의 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 개체에 투여하는 단계를 포함하는 증식성 질환을 갖는 개체에서의 증식성 질환의 치료 방법이 제공된다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 약학적 조성물을 환자에 투여하는 단계를 포함하는, 암 치료방법이 제공된다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 증식성 질환은 신생물, 종양, 암, 백혈병, 건선, 뼈 질환, 섬유증식성 장애, 및 죽상동맥경화증으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있으나, 이로 제한되는 것은 아니다. 본 발명의 일 양태에서, 상기 증식성 질환은 시험관내이든 생체내이든, 신생물 또는 과형성성 성장과 같은 바람직하지 않게 과도하거나 비정상적인 세포가 원치 않게 제어되지 않는 세포 증식관련 질환을 말한다. 신생물 및 종양의 예로는 조직구종, 신경교종, 성상세포종, 골종 등을 들 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 상기 암은 폐암, 소세포성 폐암, 위장관암, 대장암, 장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 고환암, 간암, 신장암, 방광암, 췌장암, 뇌암, 육종, 골육종, 카포시 육종 및 흑색종으로 이루어진 그룹으로부터 선택될 수 있으나, 이로 제한되는 것은 아니고 피롤로벤조디아제핀이 치료효과를 나타낼 수 있는 암종이라면 모두 적용이 가능하다.
[정의]
본 명세서에서 하기 정의가 적용된다:
본 명세서에서 “접합체”는 세포독성 화합물의 하나 이상의 분자에 공유결합되는 세포 결합제를 말한다. 여기서, “세포 결합제”는 생물학적 타깃에 대한 친화도를 갖는 분자로서, 예를 들어 리간드, 단백질, 항체, 구체적으로 모노클로날 항체, 단백질 또는 항체 단편, 펩타이드, 올리고뉴클레오티드, 올리고사카라이드일수 있으며, 결합제는 생물학적 활성 화합물을 생물학적 타깃으로 유도하는 기능을 한다. 본 발명의 일 양태에서, 접합체는 세포 표면 항원을 통해 종양 세포를 표적화하도록 설계될 수 있다. 항원은 비정상적인 세포 타입에서 과다 발현되거나 또는 발현되는 세포 표면 항원일 수 있다. 구체적으로, 표적 항원은 증식성 세포(예컨대 종양 세포) 상에서만 발현되는 것일 수 있다. 표적 항원은 통상 증식성 조직 및 정상 조직 사이의 상이한 발현에 기초하여 선택될 수 있다. 본 발명에서 리간드는 링커에 결합된다.
본 명세서에서 “항체”는 이뮤노글로불린 분자의 가변 영역에 위치하는 적어도 1개의 항원 인식 부위를 통해 표적, 예컨대 탄수화물, 폴리뉴클레오티드, 지질, 폴리펩티드 등에 특이적으로 결합할 수 있는 이뮤노글로불린 분자이다. 본 명세서에 사용된 용어 “항체”는 무손상 폴리클로날 또는 모노클로날 항체뿐만 아니라, 소정의 항원에 특이적으로 결합하는 능력을 보유하는 무손상 항체의 임의의 항원 결합 부분 (예를 들어, "항원-결합 단편") 또는 그의 단일 쇄, 항체를 포함하는 융합 단백질, 및 항원 인식 부위를 포함하는 이뮤노글로불린 분자의 임의의 다른 변형된 배열, 예를 들어 비제한적으로, Fab; Fab'; F(ab')2 Fd 단편; Fv 단편; 단일 도메인 항체 (dAb) 단편; 단리된 상보성 결정 영역 (CDR); 단일 쇄 (scFv) 및 단일 도메인 항체 (예를 들어, 상어 및 낙타류 항체), 맥시바디, 미니바디, 인트라바디, 디아바디, 트리아바디, 테트라바디, v-NAR 및 비스-scFv를 포괄한다 (예를 들어, 문헌 [Hollinger and Hudson, 2005, Nature Biotechnology 23(9): 1126-1136] 참조).
항체는 임의의 부류의 항체, 예컨대 IgG, IgA 또는 IgM (또는 그의 하위부류)[0207] 을 포함하며, 항체가 임의의 특정한 부류일 필요는 없다. 항체의 중쇄의 불변 영역의 아미노산 서열에 따라, 이뮤노글로불린은 상이한 부류로 배정될 수 있다. 5가지 주요 부류의 이뮤노글로불린: IgA, IgD, IgE, IgG 및 IgM이 존재하고, 이들 중 몇몇은 하위부류 (이소형), 예를 들어 IgG1, IgG2, IgG3, IgG4, IgA1 및 IgA2로 추가로 분류될 수 있다. 상이한 부류의 이뮤노글로불린에 상응하는 중쇄 (HC) 불변 도메인은 각각 알파, 델타, 엡실론, 감마 및 뮤로 불린다. 상이한 부류의 이뮤노글로불린의 서브유닛 구조 및 3차원 배위는 널리 공지되어 있다. 본 발명의 항체는 관련 기술분야에 널리 공지된 기술, 예컨대 재조합 기술, 파지 디스플레이 기술, 합성 기술 또는 상기 기술들의 조합 또는 관련 기술분야에 용이하게 공지되어 있는 다른 기술을 이용하여 제조될 수 있다.
본 명세서에서 "단리된 항체"는 상이한 항원 특이성을 갖는 다른 항체를 실질적으로 함유하지 않는 항체를 지칭하며, 다른 세포 물질 및/또는 화학물질을 실질적으로 함유하지 않을 수 있다.
본 명세서에서 "생물학적 타깃"은 종양, 암세포, 세포간질(extracellular matrix) 표면에 위치하는 항원을 말한다.
본 명세서에서 "링커"는 세포독성 화합물을 리간드에 공유결합시키는 화합물을 말한다. 본 발명의 일 양태에서, 링커로는 PCT/US2016/063564호 및 PCT/US2016/063595호에 개시된 링커를 사용할 수 있다.
본 명세서에서 "개체"는 인간 및 비-인간 동물, 특히 포유동물을 포함하는 것으로 의도된다. 개체의 예로는 인간 개체를 들 수 있으며, 예컨대 본 명세서에 기재된 장애, 보다 구체적으로는 암을 갖는 인간 환자 또는 정상 개체를 포함하는 개념이다. "비-인간 동물"은 모든 척추동물, 예를 들어, 비-포유동물(예를 들어, 닭, 양서류, 파충류) 및 포유동물, 예를 들어, 비-인간 영장류, 가축 및/또는 농업에 유용한 동물(예를 들어, 양, 개, 고양이, 소, 돼지 등) 및 설치류(예를 들어, 마우스, 랫트, 햄스터, 기니피그 등)를 포함한다. 특정 구현예에서, 개체는 인간 환자이다.
본 명세서에서 "치료" 또는 "치료한다"는 치료적 처치 및 예방학적 또는 예방적 조치 둘 모두를 지칭한다. 치료를 필요로 하는 개체는 이미 질병을 갖는 개체, 및 질병을 갖기 쉬운 개체 또는 질병이 예방되어야 할 개체를 포함한다. 따라서, 질병 또는 치료를 필요로 하는 개체에 관하여 사용되는 경우, 상기 용어는 미처리 개체에 비하여, 질병 진행의 저지 또는 둔화, 증상의 예방, 질병 및/또는 증상 중증도의 감소 또는 질병 기간의 감소를 포함하나 이로 한정되지 않는다.
본 명세서에서, "투여" 또는 "투여하는"은 요망되는 효과를 달성하기 위하여 임의의 적절한 경로에 의해 화합물 또는 화합물들을 제공하고/거나 접촉시키고/거나 전달하는 것을 지칭한다. 투여는 경구, 설하, 비경구(예를 들어, 정맥내, 피하, 피내, 근육내, 관절내, 동맥내, 활막내, 흉골내, 척수강내, 병변내 또는 두개내 주사), 경피, 국소, 협측, 직장, 질, 비강, 안과적, 흡입 및 이식물을 통한 투여를 포함할 수 있지만, 이로 제한되지 않는다.
본 명세서에서 "비치환되거나 치환된"은 비치환될 수 있거나 또는 치환될 수 있는 모기(parent group)를, "치환된"은 1 이상의 치환기를 갖는 모기(parent group)를, 치환기는 모기(parent group)에 공유결합되거나 모기(parent group)에 융합된 화학적 부분을 의미한다.
본 명세서에서 "할로"는 플루오린, 클로라인, 브로마인, 요오드 등을 말한다.
본 명세서에서 "알킬"은 지방족 또는 지환족, 포화 또는 불포화(불포화, 완전 불포화) 탄화수소 화합물의 탄소원자로부터 수소 원자를 제거하여 얻어진 1가 부분으로서, 포화 알킬의 예로는 메틸, 에틸, 프로필, 부틸, 펜틸, 헥실, 헵틸 등을, 포화 직쇄형 알킬의 예로는 메틸, 에틸, n-프로필, n-부틸, n-펜틸(아밀), n-헥실, n-헵틸 등, 포화 분지쇄형 알킬의 예로는 이소프로필, 이소부틸, sec-부틸, tert-부틸, 이소펜틸, 네오펜틸 등을 들 수 있다.
본 명세서에서 "알콕시"는 -OR[여기서, R은 알킬기]을 의미하며, 예로는 메톡시, 에톡시, n-프로폭시, 이소프로폭시, n-부톡시, sec-부톡시, 이소부톡시, tert-부톡시 등을 들 수 있다.
본 명세서에서 "아릴"은 고리 원자를 갖는 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거하여 얻어진 1가 부분을 의미한다.
본 명세서에서 "알케닐"은 1 이상의 탄소-탄소 이중 결합을 갖는 알킬로서, 불포화 알케닐기의 예로는 에테닐 (비닐, -CH=CH2), 1-프로페닐(-CH=CH-CH3), 2-프로페닐, 이소프로페닐, 부테닐, 펜테닐, 헥세닐 등을 들 수 있다.
본 명세서에서 "알키닐"은 1 이상의 탄소-탄소 삼중 결합을 갖는 알킬기로서, 불포화 알키닐기의 예는 에티닐 및 2-프로피닐 등을 들 수 있다.
본 명세서에서 "카복시"는 -C(=O)OH를 말한다.
본 명세서에서 "포르밀"은 -C(=O)H를 말한다.
본 명세서에서 "아릴"은 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거하여 얻어진 1가 모이어티에 관한 것이다. 예를 들어 "C5-7아릴"은 모이어티가 5 내지 7 개의 고리 원자를 갖는 것으로서, 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 1 가 모이어티를 의미하고,"C5-10아릴"은 모이어티가 5 내지 10 개의 고리 원자를 갖는 것으로서, 방향족 화합물의 방향족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거함으로써 수득되는 1 가 모이어티를 의미한다. 여기에서 접두사(C5-7, C5-10 등)는 탄소 원자 또는 헤테로 원자인지 여부와 상관없이 고리원자의 수 또는 고리 원자의 수의 범위를 지칭한다. 예를 들어 "C5-6아릴"은 5 또는 6개의 고리 원자를 갖는 아릴기에 관한 것이다. 여기에서, 고리 원자는 "카보아릴기"에서와 같이 모두 탄소 원자일 수 있다. 카보아릴기의 예는 벤젠, 나프탈렌, 아줄렌, 안트라센, 페난트렌, 나프타센 및 피렌으로부터 유도된 것들을 포함하나, 이로 제한되지 않는다. 적어도 하나가 방향족 고리인 융합 고리를 포함하는 아릴기의 예는 인단, 인덴, 이소인덴, 테트랄린, 아세나프텐, 플루오렌, 페날렌, 아세페난트렌 및 아세안트렌으로부터 유도된 기를 포함하나, 이로 제한되지 않는다. 또는, 고리 원자는 "헤테로아릴기"에서와 같이 하나 이상의 헤테로 원자를 포함할 수 있다.
본 명세서에서 "헤테로아릴"은 1 이상의 헤테로 원자를 포함하는 아릴로서, 예로는 피리딘, 피리미딘, 벤조티오펜, 푸릴, 디옥살라닐, 피롤릴, 옥사졸릴, 피리딜, 피리다지닐, 피리미디닐 등, 보다 구체적으로 벤조푸란, 이소벤조푸란, 인돌, 이소인돌, 인돌리진, 인돌린, 이소인돌린, 푸린(아데닌 또는 구아닌), 벤즈이미다졸, 인다졸, 벤즈옥사졸, 벤즈이속사졸, 벤조디옥솔, 벤조푸란, 벤조트리아졸, 벤조티오푸란, 벤조티아졸, 벤조티아디아졸로부터 유도된 2개의 융합고리를 갖는 C9, 크로멘, 이소크로멘, 크로만, 이소크로만, 벤조디옥산, 퀴놀린, 이소퀴놀린, 퀴놀리진, 벤족사진, 벤조디아진, 피리도피리딘, 퀴녹살린, 퀴나졸린, 신놀린, 프탈라진, 나프티리딘, 프테리딘으로부터 유도된 2개의 융합고리를 갖는 C10, 벤조디아제핀으로부터 유도된 2개의 융합고리를 갖는 C11, 카르바졸, 디벤조푸란, 디벤조티오펜, 카르볼린, 페리미딘, 피리도인돌로부터 유도된 3개의 융합고리를 갖는 C13, 아크리딘, 크산텐, 티오크산텐, 옥산트렌, 페녹사티인, 페나진, 페녹사진, 페노티아진, 티안트렌, 페난트리딘, 페난트롤린, 페나진으로부터 유도된 3개의 융합고리를 갖는 C14를 들 수 있다.
본 명세서에서, "사이클로알킬"은 사이클릴기인 알킬기이고, 고리(cyclic) 탄화수소 화합물의 지환족 고리 원자로부터 수소 원자를 제거하여 얻어진 1가 부분에 관한 것이다. 사이클로알킬기의 예는 하기로부터 유도된 것들을 포함하나, 이로 제한되지 않는다:
포화 단일고리 탄화수소 화합물: 사이클로프로판, 사이클로부탄, 사이클로펜탄, 사이클로헥산, 사이클로헵탄, 메틸사이클로프로판, 디메틸사이클로프로판, 메틸사이클로부탄, 디메틸사이클로부탄, 메틸사이클로펜탄, 디메틸사이클로펜탄 및 메틸사이클로헥산;
불포화 단일고리 탄화수소 화합물: 사이클로프로펜, 사이클로부텐, 사이클로펜텐, 사이클로헥센, 메틸사이클로프로펜, 디메틸사이클로프로펜, 메틸사이클로부텐, 디메틸사이클로부텐, 메틸사이클로펜텐, 디메틸사이클로펜텐 및 메틸사이클로헥센; 및
포화 헤테로사이클릭 탄화수소 화합물: 노르카란, 노르피난, 노르보르난.
본 명세서에서, "헤테로사이클릴"은 헤테로사이클릭 화합물의 고리원자로부터 수소 원자를 제거하여 얻어진 1가 부분에 관한 것이다.
본 명세서에서 접두사(예를 들어 C1-12, C3-8 등)는 탄소 원자 또는 헤테로 원자인지 여부와 상관없이 고리 원자의 수 또는 고리 원자의 수의 범위를 지칭한다. 예를 들어 본 명세서에서 사용된 용어 "C3-6헤테로사이클릴"은 3 내지 6개의 고리 원자를 갖는 헤테로사이클릴기에 관한 것이다.
단일고리 헤테로사이클릴기의 예는 하기로부터 유도된 것들을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다:
N1: 아지리딘, 아제티딘, 피롤리딘, 피롤린, 2H- 또는 3H-피롤, 피페리딘, 디하이드로피리딘, 테트라하이드로피리딘, 아제핀;
N2: 이미다졸리딘, 피라졸리딘, 이미다졸린, 피라졸린, 피페라진;
O1: 옥시란, 옥세탄, 옥솔란, 옥솔, 옥산, 디하이드로피란, 피란, 옥세핀;
O2: 디옥솔란, 디옥산 및 디옥세판;
O3: 트리옥산;
N1O1: 테트라하이드로옥사졸, 디하이드로옥사졸, 테트라하이드로이속사졸, 디하이드로이속사졸, 모르폴린, 테트라하이드로옥사진, 디하이드로옥사진, 옥사진;
S1: 티이란, 티에탄, 티올란, 티안, 티에판;
N1S1: 티아졸린, 티아졸리딘, 티오모르폴린;
N2O1: 옥사디아진;
O1S1: 옥사티올, 옥사티안; 및
N1O1S1: 옥사티아진.
본 명세서에서 "약학적으로 허용되는 염"으로는 약학적으로 허용가능한 유리산(free acid)에 의하여 형성된 산부가염을 사용할 수 있고, 상기 유리산으로는 유기산 또는 무기산을 사용할 수 있다.
상기 유기산은 이로 제한되는 것은 아니나, 구연산, 초산, 젖산, 주석산, 말레인산, 푸마르산, 포름산, 프로피온산, 옥살산, 트리플로오로아세트산, 벤조산, 글루콘산, 메타술폰산, 글리콜산, 숙신산, 4-톨루엔술폰산, 글루탐산 및 아스파르트산을 포함한다. 또한 상기 무기산은 이로 제한되는 것은 아니나, 염산, 브롬산, 황산 및 인산을 포함한다.
예컨대, 화합물이 음이온이거나 또는 음이온일 수 있는 작용기를 갖는 경우(예컨대 -COOH는 -COO-일 수 있음), 적절한 양이온으로 염을 형성할 수 있다. 적절한 무기 양이온의 예는 알칼리 금속 이온, 예컨대 Na+ 및 K+, 알칼리 토금속 양이온, 예컨대 Ca2+ 및 Mg2+ 및 다른 양이온, 예컨대 Al3+을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다. 적절한 유기 양이온의 예는 암모늄 이온(즉, NH4+) 및 치환된 암모늄 이온(예컨대 NH3R+, NH2R2 +, NHR3 +, NR4 +)을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다.
일부 적절한 치환된 암모늄 이온의 예는 하기로부터 유도된 것들이다: 에틸아민, 디에틸아민, 디사이클로헥실아민, 트리에틸아민, 부틸아민, 에틸렌디아민, 에탄올아민, 디에탄올아민, 피페라진, 벤질아민, 페닐벤질아민, 콜린, 메글루민 및 트로메타민 뿐 아니라, 아미노산, 예컨대 리신 및 아르기닌. 통상적인 4급 암모늄 이온의 예는 N(CH3)4 +이다.
화합물이 양이온이거나 또는 양이온일 수 있는 작용기를 갖는 경우(예컨대 -NH2는 -NH3 +일 수 있음), 적절한 음이온으로 염을 형성할 수 있다. 적절한 무기 음이온의 예는 하기 무기 산으로부터 유도된 것들을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다: 염산, 브롬화수소산, 요오드화수소산, 황산, 아황산, 질산, 아질산, 인산 및 아인산 등을 예로 들 수 있다.
적절한 유기 음이온의 예는 하기 유기산으로부터 유도된 것들을 포함하지만, 이로 한정되지 않는다: 2-아세티옥시벤조산, 아세트산, 아스코르브산, 아스파르트산, 벤조산, 캠퍼설폰산, 신남산, 시트르산, 에데트산, 에탄디설폰산, 에탄설폰산, 푸마르산, 글루쳅톤산, 글루콘산, 글루탐산, 글리콜산, 히드록시말레산, 히드록시나프탈렌 카복실산, 이세티온산, 락트산, 락토비온산, 라우르산, 말레산, 말산, 메탄설폰산, 점액산, 올레산, 옥살산, 팔미트산, 팜산, 판토텐산, 페닐아세트산, 페닐설폰산, 프로피온산, 피루브산, 살리실산, 스테아르산, 숙신산, 설파닐산, 타르타르산, 톨루엔설폰산 및 발레르산 등을 예로 들 수 있다. 적절한 중합체 유기 음이온의 예는 하기 중합체 산으로부터 유도된 것들을 포함하지만, 이로 제한되지 않는다: 타닌산, 카복시메틸 셀룰로오스 등을 예로 들 수 있다.
본 명세서에서 "용매화물(solvate)"은 본 발명에 따른 화합물과 용매 분자(solvent molecules) 사이의 분자 복합체(molecular complex)를 말하며, 용매화물의 예는 물, 이소프로판올, 에탄올, 메탄올, 디메틸설폭사이드(dimethylsulfoxide), 에틸 아세테이트, 아세트산, 에탄올아민 또는 이의 혼합용매와 결합한 본 발명에 따른 화합물을 포함하나, 이로 제한되는 것은 아니다.
활성 화합물의 상당하는 용매화물을 제조, 정제 및/또는 취급하는 것이 편리하거나 또는 바람직할 수 있다. 용어 "용매화물"은 본 명세서에서 용질(예컨대 활성 화합물, 활성 화합물의 염) 및 용매의 착체를 지칭하기 위해 통상적인 의미로 사용된다. 용매가 물인 경우, 용매화물을 편리하게 수화물, 예컨대 일수화물, 이수화물, 삼수화물 등으로 지칭할 수 있다.
상기 본 발명의 약학적 조성물은 약학적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있다. 약학적으로 허용 가능한 담체는 통상적으로 서서히 대사되는 거대분자, 예를 들어 단백질, 다당류, 폴리락트산, 폴리글리콜산, 중합체성 아미노산, 아미노산 공중합체, 지질 응집물 등을 포함할 수 있으며, 이러한 약학적으로 허용 가능한 담체는 당업자가 적절히 선택하여 사용할 수 있다.
약학적으로 허용 가능한 담체를 포함하는 상기 조성물은 경구 또는 비경구의 여러 가지 제형일 수 있다. 제제화할 경우에는 보통 사용하는 충진제, 증량제, 결합제, 습윤제, 붕해제, 계면활성제 등의 희석제 또는 부형제를 사용하여 조제된다.
경구투여를 위한 고형제제에는 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제 등이 포함되며, 이러한 고형제제는 하나 이상의 화합물에 적어도 하나 이상의 부형제 예를 들면, 전분, 탄산칼슘, 수크로오스 또는 락토오스, 젤라틴 등을 섞어 조제된다. 또한 단순한 부형제 이외에 스테아린산 마그네슘, 탈크 등과 같은 윤활제들도 사용될 수 있다.
경구투여를 위한 액상제제로는 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제 등이 해당되는데 흔히 사용되는 단순 희석제인물, 리퀴드 파라핀 이외에 여러 가지 부형제, 예를 들면 습윤제, 감미제, 방향제, 보존제 등이 포함될 수 있다.
비경구투여를 위한 제제에는 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제, 좌제가 포함된다. 비수성용제, 현탁용제로는 프로필렌글리콜(propylene glycol), 폴리에틸렌 글리콜, 올리브 오일과 같은 식물성 기름, 에틸올레이트와 같은 주사 가능한 에스테로 등이 사용될 수 있다. 좌제의 기제로는 위텝솔(witepsol), 마크로골, 트윈(tween) 61, 카카오지, 라우린지, 글리세로젤라틴 등이 사용될 수 있다.
상기 약학적 조성물은 주사제, 정제, 환제, 산제, 과립제, 캡슐제, 현탁제, 내용액제, 유제, 시럽제, 멸균된 수용액, 비수성용제, 현탁제, 유제, 동결건조제제 및 좌제로 이루어진 군으로부터 선택되는 어느 하나의 제형을 가질 수 있다.
정맥내, 피부 또는 피하 주사 등을 위해, 활성 성분은 무발열성(pyrogen-free)이고 적절한 pH, 등장성 및 안정성을 갖는 비경구 투여용의, 허용가능한 수용액의 형태일 수 있다. 당업자는 예를 들어 염화나트륨 수용액, 링거액, 락테이트 링거액 등과 같은 등장성 비히클을 사용하여 적절한 용액을 제조할 수 있으며, 보존제, 안정화제, 완충제, 산화 방지제 또는 기타 다른 첨가제로 필요한 경우 포함될 수 있다. 주사에 적합한 고체 형태는 또한 에멀젼으로서 또는 리포솜에 캡슐화된 폴리펩티드의 형태로 제조될 수 있다.
본 명세서에 사용된 어구 "유효량" 또는 "치료 유효량"은 목적 치료 결과를 달성하는데 (투여량 및 투여 기간 및 수단에 대해) 필요한 양을 지칭한다. 유효량은 적어도 개체에게 치료 이익을 부여하는데 필요한 활성제의 최소량이며, 독성량 미만이다. 예를 들어 투여량은 환자 당 약 100 ng 내지 약 100 mg/kg 범위로, 보다 전형적으로 약 1 μg/kg 내지 약 10 mg/kg의 범위로 투여할 수 있다. 활성 화합물이 염, 에스테르, 아미드, 전구체 약물(prodrug) 등인 경우에 투여양은 모 화합물을 기준으로 계산되므로, 사용되는 실제 중량은 비례하여 증가된다. 본 발명에 따른 피롤로벤조디아제핀 화합물은 단위 제형(dosage form)당 활성 성분 0.1 mg 내지 3000 mg, 1 mg 내지 2000 mg, 10 mg 내지 1000 mg을 포함하도록 제형화될 수 있으나 이로 제한되지 않는다. 활성 성분은 약 0.05 μM 내지 100 μM, 1 μM 내지 50 μM, 5 μM 내지 30 μM의 활성 화합물의 피크 플라즈마 농도를 얻도록 투여될 수 있다. 예를 들어 임의로 식염수내에서 활성 성분 0.1 w/v% 내지 5 w/v% 용액의 정맥 주사에 의해 투여될 수 있다.
약학 조성물에서 활성 화합물의 농도는 약물의 흡수, 불활성화 및 배출율 및 당 기술분야의 숙련자에게 알려진 다른 인자에 의해 결정될 수 있다. 투여량은 증상/질환의 심각도에 따라 달라질 수 있다. 또한, 어떤 특정 환자에 대한 투여량 및 투여요법은 환자의 증상/질환의 정도, 필요성, 나이, 약물에 대한 반응성 등을 종합적으로 고려하여 투여 감독자의 직업적 판단에 따라 조정될 수 있으며, 본 발명에서 제시된 농도 범위는 단지 일예이며 청구된 조성물의 실시양태를 이로 한정하는 것을 의도하지 않는다. 또한, 활성 성분은 1회 투여될 수 있거나, 보다 적은 투여량을 수 회 나누어 투여할 수도 있다.
본 발명에 따른 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물, 또는 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물-링커 화합물, 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물-링커-리간드 접합체 화합물은 증식성 질환, 특히 암 질환을 치료하기 위해 사용될 수 있다. 용어 "증식성 질환"은 시험관내 또는 생체 내에서 신생 또는 과다형성 성장과 같은 바람직하지 않은 과도하거나 비정상적인 세포의 원치 않거나 조절되지 않는 세포 증식을 말한다. 증식성 질환은 예를 들어 신생물, 종양, 암, 백혈병, 건선, 뼈 질환, 섬유증식성 장애, 죽상동맥경화증 등을 포함하며, 양성, 전악성 또는 악성 세포 증식을 포함할 수 있으나 이로 제한되지 않는다. 상기 암은 폐암, 소세포성 폐암, 위장관암, 대장암, 장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 고환암, 간암, 신장암, 방광암, 췌장암, 뇌암, 육종, 골육종, 카포시 육종 또는 흑색종일 수 있으나 이로 제한되는 것은 아니다.
본 명세서에서 달리 정의되지 않는 한, 본 발명과 관련하여 사용된 과학용어 및 전문용어는 이 기술분야에 속하는 통상의 기술자에 의해 통상적으로 이해되는 의미를 가진다.
본 발명에 따른 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커 화합물, 및 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체는, 본 명세서에서 제공되는 기술을 사용하여 당업자의 지식을 이용해 제조될 수 있다.
예를 들어 링커는, 본 명세서에 전체적으로 참고로서 포함되는 PCT/US2016/063564호 및 PCT/US2016/063595호에 기술되어 있으며, 여기에 기술되어 있지 않다 하더라도 본 명세서에 인용되거나 이 기술분야의 숙련된 기술자는 공지된 참고문헌에 따라 제조할 수 있다.
본 발명의 일 양태에서, 본 발명에 따른 피롤로벤조디아제핀 유도체와 그의 전구체, 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커 화합물, 및 피롤로벤조디아제핀-링커-리간드 접합체는 다음과 같은 과정에 따라 합성될 수 있다.
피롤로벤조디아제핀 전구체-링커 및 피롤로벤조디아제핀 전구체-링커-리간드 접합체의 합성 경로
피롤로벤조디아제핀 유도체와 그의 전구체의 합성 경로
이하 본 발명을 실시예를 통해 보다 상세히 설명한다. 다만 하기 실시예는 본 발명의 이해를 돕기 위한 것이고, 본 발명의 권리범위를 이로 한정하는 것을 의도하지 않는다.
<실시예 1> 화합물 4의 제조
화합물 1의 제조
트라이에틸렌 글리콜 (7.0 g, 46.6 mmol)을 다이클로로메테인 (50 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기하에서 산화은 (I) (16 g, 69.9 mmol)과 벤질 브로마이드 (6.1 mL, 51.3 mmol)을 차례로 첨가하였다. 반응 용액을 상온으로 올리고 20 시간 동안 교반한 후, 셀라이트로 여과하였다. 여과된 용액을 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 1 (8.2 g, 73%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.24-7.36 (m, 5H), 4.57 (s, 2H), 3.76-3.56 (m, 12H), 2.60 (br s, 1H).
화합물 2의 제조
화합물 1 (8.0 g, 33.3 mmol)을 톨루엔 (40 mL)로 묽힌 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 포테슘 t-뷰톡사이드 (1 M 테트라하이드로퓨란 용액, 99 mL, 99 mmol)와 메틸 브로모아세테이트 (15 mL, 166 mmol)를 차례로 첨가하였다. 반응 용액을 상온으로 올리고 18 시간 동안 교반하였다. 소금물 (200 mL)를 반응 용액에 넣은 후 다이클로로메테인 (3 x 200 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (200 mL)로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 2 (5.9 g, 56%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.25-7.36 (m, 5H), 4.57 (s, 2H), 4.14 (s, 2H), 3.76-3.62 (m, 12H).
화합물 3의 제조
화합물 2 (9.0 g, 28.8 mmol)을 메탄올 (200 mL)에 녹인 후 팔라듐/차콜 (10 % w/w, 900 mg)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온, 수소 대기 하에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과한 후 농축하여 화합물 3 (5.18 g, 81%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.18 (s, 2H), 3.78-3.65 (m, 12H), 3.64-3.60 (m, 1H).
화합물 4의 제조
화합물 3 (5.0 g, 22.5 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (50 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 테트라브로모메테인 (11 g, 33.7 mmol)과 트라이페닐포스핀 (7.3 g, 27.0 mmol)을 차례로 첨가하였다. 반응 용액을 3 시간 동안 교반한 후 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽히고, 증류수 (50 mL)로 닦아 주었다. 모인 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조한 후 여과 및 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 4 (3.4 g, 53%)를 수득하였다.
<실시예 2> 화합물 10의 제조
화합물 5의 제조
다이메틸-5-하이드록시아이소프탈레이트 (10 g, 47.6 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (250 mL)에 녹인 후 리튬 알루미늄 하이드라이드 (1 M 테트라하이드로퓨란 용액, 95.2 mL, 95.2 mmol)를 -30 ℃, 질소 대기 하에서 서서히 첨가하였다. 반응 용액을 상온으로 서서히 올리면서 5 시간 동안 교반한 후, 0 ℃로 낮추고 증류수 (3.6 mL), 수산화 나트륨 수용액 (15% w/w, 3.6 mL), 그리고 증류수 (10.8 mL)를 반응 용액에 서서히 첨가하였다. 생긴 고체를 여과하고 남은 유기층을 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 5 (4.4 g, 60%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.18 (s, 1H), 6.65 (s, 1H), 6.57 (s, 2H), 5.05 (br s, 2H), 4.37 (s, 4H).
화합물 6의 제조
화합물 5 (6.8 g, 44.1 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (40 mL)에 녹인 후 이미다졸 (18.0 g, 265 mmol)과 t-뷰틸다이메틸실릴 클로라이드 (21.2 g, 141 mmol)을 첨가하였다. 상온에서 반응 용액을 16 시간 교반한 후 에틸 아세테이트 (200 mL)를 첨가하였다. 유기층을 증류수 (200 mL), 그리고 소금물 (200 mL)순으로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 6 (20.6 g, 94%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.84 (s, 1H), 6.69 (s, 2H), 4.66 (s, 4H), 0.97 (s, 9H), 0.93 (s, 18H), 0.17 (s, 6H), 0.08 (s, 12H).
화합물 7의 제조
화합물 6 (11.0 g, 22.1 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드/증류수 (150 mL/10 mL)에 녹인 후 소듐 아세테이트 (2.0 g, 24.3 mmol)를 첨가하고, 반응 용액을 70 ℃, 질소 대기 하에서 교반하였다. 3 시간 후, 반응 온도를 상온으로 내리고, 에틸 아세테이트 (300 mL)를 첨가하였다. 유기층을 증류수 (200 mL), 그리고 소금물 (200 mL)순으로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 7 (7.6 g, 89%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.81 (s, 1H), 6.69 (s, 2H), 5.09 (s, 1H), 4.68 (s, 4H), 0.93 (s, 18H), 0.10 (s, 12H).
화합물 8의 제조
화합물 7 (2.7 g, 7.3 mmol)과 화합물 4 (2.5 g, 8.8 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (30 mL)에 녹인 후 세슘 카보네이트 (3.4 g, 11.0 mmol)를 첨가하고 질소 대기, 상온 하에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 증류수 (100 mL)로 묽힌 뒤 에틸 아세테이트 (2 x 100 mL)로 추출하였다. 추출된 유기층을 소금물 (100 mL)로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 8 (2.3 g, 49%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.85 (s, 1H), 6.76 (s, 2H), 4.68 (s, 4H), 4.16 (s, 2H), 4.14-4.08 (m, 2H), 3.88-3.82 (m, 2H), 3.76-3.64 (m, 11H), 0.93 (s, 18H), 0.09 (s, 12H).
화합물 9의 제조
화합물 8 (2.25 g, 3.83 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (50 mL)에 녹인 후 테트라뷰틸암모늄 플루오라이드 (1 M 테트라하이드로퓨란 용액, 8.0 mL, 8.0 mmol)를 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하였다. 1 시간 교반 후 포화 염화암모늄 수용액 (100 mL)으로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2 x 100 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (100 mL)로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 9 (1.4 g, 100%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.98 (s, 1H), 6.83 (s, 2H), 4.62 (s, 4H), 4.16 (s, 2H), 4.12 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.83 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.74-3.64 (m, 13H).
화합물 10의 제조
화합물 9 (1.0 g, 2.79 mmol)을 다이클로로메테인 (20 mL)에 녹인 후 트라이에틸아민 (1.2 mL, 8.37 mmol)과 메탄설포닐 클로라이드 (0.5 mL, 6.14 mmol)를 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하였다. 1 시간 교반 후 증류수 (30 mL)으로 희석하고, 다이클로로메테인 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 여과 후 농축하여 화합물 10 (crude 1.54 g, 100%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.01 (s, 1H), 6.97 (s, 2H), 5.18 (s, 4H), 4.16-4.12 (m, 4H), 3.83 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.74-3.64 (m, 11H), 2.97 (s, 6H).
<실시예 3> 화합물 16의 제조
화합물 13의 제조
화합물 11 (48.7 g, 132 mmol)과 화합물 12 (25 g, 110 mmol, 화합물 12는 대한민국 공개특허 제10-2018-0110645호에 기술된 방법으로 제조하였다)를 다이클로로메테인 (450 mL)에 녹인 후 1-하이드록시벤조트리아졸 (19.3 g, 143 mmol), N-(3-다이메틸아미노프로필)-N’-에틸카보다이이미드 염산염 (29.5 g, 154 mmol), 그리고 트라이에틸아민 (27 mL, 194 mmol)을 차례로 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하였다. 반응 용액을 12 시간 동안 상온 교반한 후 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (400 mL)를 반응 용액에 넣고 다이클로로메테인 (2 x 300 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (400 mL)로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 13 (57.1 g, 89%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) (rotamers) δ 7.69 (s, 1H), 6.73 (s, 1H), 4.98 (s, 1H), 4.83 (s, 1H), 4.58 (bs, 1H), 3.89 (s, 4H), 3.75 (bs, 1H), 3.71 (s, 1H), 3.31-3.27 (m, 1H), 2.82-2.53 (m, 2H), 1.30-1.26 (m, 3H), 1.10 (d, J = 7.6 Hz, 18H), 0.91 (s, 9H), 0.09 (s, 6H).
화합물 14의 제조
화합물 13 (29.5 g, 51.0 mmol)을 에탄올 (220 mL)에 녹인 후 아연 가루 (Zinc dust, 66.6 g, 1.01 mol)와 포름산 (5 % in EtOH, 500 mL)을 첨가하였다. 상온에서 반응 용액을 30 분간 교반한 후, 셀라이트로 여과하고 에틸 아세테이트 (1 L) 를 첨가하였다. 유기층을 증류수 (500 mL), 포화 탄산수소나트륨 수용액 (500 mL), 그리고 소금물 (500 mL) 순으로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 14 (27.9 g, 99%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) (rotamers) δ 6.71 (s, 1H), 6.25 (s, 1H), 4.96 (s, 1H), 4.89 (s, 1H), 4.53 (bs, 1H), 4.21-4.09 (m, 4H), 3.71 (s, 3H), 3.62 (bs, 1H) 2.73-2.63 (m, 2H), 1.29-1.21 (m, 3H), 1.10 (d, J = 7.2 Hz, 18H), 0.87 (s, 9H), 0.02 (s, 6H).
화합물 15의 제조
화합물 14 (27.9 g, 50.9 mmol)를 다이클로로메테인 (300 mL)에 녹인 후 피리딘 (9.0 mL, 111.3 mmol)과 알릴 클로로포메이트 (5.9 mL, 55.5 mmol)를 -78 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하였다. 반응 용액을 1 시간 동안 교반한 후 반응 온도를 상온으로 올리고, 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 15 (31.8 g, 98%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) (rotamers) δ 8.67 (bs, 1H), 7.75 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 5.97-5.89 (m, 1H), 5.32 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 5.21 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.98 (s, 1H), 4.90 (bs, 1H), 4.66-4.61 (m, 3H), 4.19-4.15 (m, 1H), 4.01 (bs, 1H), 3.86 (bs, 1H), 3.76 (s, 3H), 3.65 (bs, 1H) 2.68 (s, 2H), 1.33-1.24 (m, 3H), 1.10 (d, J = 6.8 Hz, 18H), 0.87 (s, 9H), 0.03 (s, 6H).
화합물 16의 제조
화합물 15 (31.8 g, 50.3 mmol)를 N,N-다이메틸폼아마이드/증류수 (300 mL/6 mL)에 녹인 후 소듐 아세테이트 (5.0 g, 60.0 mmol)를 첨가하고, 반응 용액을 70 ℃, 질소 대기 하에서 교반하였다. 3 시간 후, 반응 온도를 상온으로 내리고, 에틸 아세테이트 (300 mL)를 첨가하였다. 유기층을 증류수 (200 mL), 그리고 소금물 (200 mL)순으로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 16 (18.6 g, 77%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) (rotamers) δ 8.71 (bs, 1H), 7.75 (s, 1H), 6.78 (s, 1H), 6.14 (s, 1H), 5.94-5.90 (m, 1H), 5.32 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 5.21 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 4.97 (s, 1H), 4.90 (bs, 1H), 4.64-4.58 (m, 3H), 4.18-4.15 (m, 1H), 4.01 (bs, 1H), 3.83 (s, 4H), 3.65 (bs, 1H) 2.68 (s, 2H), 0.87 (s, 9H), 0.02 (s, 6H).
<실시예 4> 화합물 19의 제조
*
화합물 17의 제조
화합물 16 (3.2 g, 6.70 mmol)과 화합물 10 (1.4 g, 2.79 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (10 mL)에 녹인 후 0 ℃에서 포테슘 카보네이트 (1.9 g, 13.6 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 20 시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (30 mL)를 가한 후 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (50 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 17 (2.72 g, 76%)을 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.88 (br s, 2H), 7.24 (s, 2H), 7.13 (s, 1H), 6.99 (s, 2H), 6.81 (s, 2H), 5.97-5.87 (m, 2H), 5.32 (dd, J = 17.2, 1.2 Hz, 1H), 5.21 (dd, J = 10.0, 1.2 Hz, 1H), 5.12 (s, 4H), 4.96 (br, 2H), 4.89 (br, 2H), 4.64-4.54 (m, 5H), 4.21-4.12 (m, 7H), 3.84 (t, J = 4.4 Hz, 4H), 3.81 (s, 6H), 3.73-3.63 (m, 13H), 2.67 (br, 4H) 0.86 (s, 18H), 0.01 (s, 6H).
화합물 18의 제조
화합물 17 (2.7 g, 2.12 mmol)을 다이클로로메테인 (20 mL)에 녹인 후 피롤리딘 (0.43 mL, 5.29 mmol)과 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (98 mg, 0.085 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 6 시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (30 mL)를 가한 후 다이클로로메테인 (2 x 50 mL)으로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (50 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 18 (1.7 g, 72%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1108.2, 1/2[M+H]+ 554.7.
화합물 19의 제조
화합물 18 (1.6 g, 1.44 mmol)을 다이클로로메테인 (100 mL)에 녹인 후 피리딘 (0.3 mL, 3.03 mmol)과 알릴 클로로포메이트 (0.13 mL, 1.30 mmol)를 -78 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하고 반응 용액을 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (100 mL)를 가한 후 다이클로로메테인 (2 x 100 mL)으로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (100 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 19 (985 mg, 57%)을 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.91 (br s, 1H), 7.26 (s, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.95 (s, 1H), 6.83 (s, 1H), 6.74 (s, 1H), 6.23 (s, 1H), 5.99-5.88 (m, 1H), 5.33 (dd, J = 17.2, 1.6 Hz, 1H), 5.23 (dd, J = 10.4, 1.2 Hz, 1H), 5.14 (s, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.97 (br, 2H), 4.90 (br, 2H), 4.65-4.58 (m, 3H), 4.22-4.10 (m, 8H), 3.87-3.82 (m, 4H), 3.82 (s, 3H), 3.75 (s, 3H), 3.74-3.64 (m, 16H), 2.68 (br, 4H) 0.87 (s, 18H), 0.02 (s, 6H).
<실시예 5> 화합물 24의 제조
화합물 21의 제조
화합물 19 (980 mg, 0.82 mmol)를 건조한 테트라하이드로퓨란 (40 mL)에 녹인 후 -10 oC에서 트라이포스겐 (98 mg, 0.33 mmol)과 트라이에틸아민 (0.18 mL, 1.32 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 20 (490 mg, 0.90 mmol, 화합물 20은 대한민국 공개특허 제10-2018-0110645호에 기술된 방법으로 제조하였다)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (5 mL)에 녹이고 트라이에틸아민 (0.18 mL, 1.32 mmol)을 첨가한 후 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하였다. 1 시간 후 반응 용액을 가열 환류시키고 12 시간동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 희석한 후 소금물 (20 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 21 (580 mg, 40%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1760.7, 1/2[M+H]+ 880.6.
화합물 22의 제조
화합물 21 (580 mg, 0.33 mmol)을 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹인 후 피롤리딘 (0.035 mL, 0.43 mmol)과 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (9 mg, 0.0082 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (20 mL)를 가한 후 다이클로로메테인 (2 x 20 mL)으로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (20 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 22 (455 mg, 82%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1676.7, 1/2[M+H]+ 838.6.
화합물 24의 제조
화합물 22 (450 mg, 0.27 mmol)를 건조한 테트라하이드로퓨란 (15 mL)에 녹인 후 -10 oC에서 트라이포스겐 (32 mg, 0.11 mmol)과 트라이에틸아민 (0.12 mL, 0.81 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 23 (216 mg, 0.30 mmol, 화합물 23은 대한민국 공개특허 제10-2018-0110645호에 기술된 방법으로 제조하였다)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (3 mL)에 녹이고 트라이에틸아민 (0.12 mL, 0.81 mmol)을 첨가한 후 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하였다. 1 시간 후 반응 용액을 가열 환류시키고 16 시간동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 희석한 후 소금물 (20 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 24 (293 mg, 45%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2243.8, 1/2[M+H]+ 1122.5.
<실시예 6> 화합물 28의 제조
화합물 25의 제조
화합물 24 (293 mg, 0.12 mmol)를 테트라하이드로퓨란/증류수 (3 mL/3 mL)에 녹이고 아세트산 (8 mL)를 첨가한 후 상온, 질소 대기 하에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 25 (180 mg, 68%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2204.4, 1/2[M+H]+ 1102.8.
화합물 26의 제조
화합물 25 (180 mg, 0.082 mmol)를 다이클로로메테인 (5 mL)에 녹인 후 데스-마틴 펄아이오디네인 (Dess-Martin periodinane, 76 mg, 0.18 mmol)를 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 26 (120 mg, 66%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2199.7, [M+Na]+ 2222.5.
화합물 27의 제조
화합물 26 (120 mg, 0.055 mmol)을 메탄올/테트라하이드로퓨란 (1 mL/3 mL)에 녹인 후 수산화 리튬 (20 mg, 0.55 mmol)을 증류수 (1 mL)에 녹인 용액을 -40 ℃에서 서서히 첨가하였다. 반응 온도를 서서히 0 ℃로 올리면서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 아세트산으로 중화한 후 반응 용액을 감압 농축하고 HPLC로 정제 및 동결건조하여 화합물 27 (32 mg, 31%)을 흰색의 고체로 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1905.4, 1/2[M+H]+ 953.8.
화합물 28의 제조
화합물 27 (32 mg, 0.017 mmol)을 다이클로로메테인 (3 mL)로 묽힌 후 트라이플루오로아세트산 (1 mL)를 0 oC에서 첨가하고 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제하고 동결건조하여 화합물 28을 흰색의 고체 (5.6 mg)로 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1805.4, 1/2[M+H]+ 903.5.
<실시예 7> 화합물 32의 제조
화합물 29의 제조
화합물 17 (350 mg, 0.27 mmol)을 테트라하이드로퓨란/증류수 (3 mL/3 mL)에 녹이고 아세트산 (6 mL)를 첨가한 후 상온, 질소 대기 하에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (30 mL)를 가한 후 에틸 아세테이트 (2 x 30 mL)으로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (30 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 29 (197 mg, 70%)을 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.40 (br s, 2H), 7.29 (s, 2H), 6.93 (s, 1H), 6.87 (s, 2H), 6.74 (s, 2H), 5.95-5.85 (m, 2H), 5.29 (dd, J = 17.2, 1.2 Hz, 2H), 5.23-5.16 (m, 6H), 4.98 (br s, 2H), 4.89 (br s, 2H), 4.64-4.52 (m, 5H), 4.16 (s, 4H), 4.08-4.00 (m, 3H), 3.88-3.83 (m, 4H), 3.80 (s, 6H), 3.74-3.64 (m, 13H), 2.76-2.66 (m, 2H), 2.48-2.40 (m, 2H).
화합물 30의 제조
화합물 29 (190 mg, 0.18 mmol)를 다이클로로메테인 (5 mL)에 녹인 후 데스-마틴 펄아이오디네인 (Dess-Martin periodinane, 185 mg, 0.44 mmol)를 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제하여 화합물 30 (168 mg, 89%)을 수득하였다.
화합물 31의 제조
화합물 30 (100 mg, 0.096 mmol)을 메탄올/테트라하이드로퓨란 (1 mL/3 mL)에 녹인 후 수산화 리튬 (5 mg, 0.12 mmol)을 증류수 (1 mL)에 녹인 용액을 -40 ℃에서 서서히 첨가하였다. 반응 온도를 서서히 0 ℃로 올리면서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 아세트산으로 중화한 후 반응 용액을 감압 농축하고 HPLC로 정제 및 동결건조하여 화합물 31 (95 mg, 96%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1029.9, [M+Na]+ 1051.8.
화합물 32의 제조
화합물 31 (40 mg, 0.039 mmol)을 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 피롤리딘 (0.01 mL, 0.12 mmol)과 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (2 mg, 0.0017 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제하여 화합물 32 (8.1 mg, 25%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 825.7, 1/2[M+H]+ 413.4.
*<실시예 8> 화합물 33의 제조
화합물 33의 제조
화합물 30 (50 mg, 0.048 mmol)을 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 피롤리딘 (0.01 mL, 0.12 mmol)과 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (2 mg, 0.0017 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제하여 화합물 33 (5.4 mg, 13%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 839.7, 1/2[M+H]+ 420.4.
<실시예 9> 화합물 38의 제조
화합물 34의 제조
화합물 2 (3.6 g, 11.5 mmol)를 메탄올/테트라하이드로퓨란 (5 mL/10 mL)에 녹인 후 수산화 리튬 (725 mg, 17.3 mmol)을 증류수 (5 mL)에 녹인 용액을 0 ℃에서 첨가하였다. 2 시간 동안 교반한 후 1 N 염산 수용액으로 pH ~2 정도로 맞춘 후 에틸 아세테이트 (2 x 30 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조한 후 여과 및 농축하여 화합물 34 (2.8 g, 81%)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.38-7.20 (m, 5H), 4.56 (s, 2H), 4.12 (s, 2H), 3.77-3.58 (m, 12H).
화합물 36의 제조
화합물 34 (2.8 g, 9.36 mmol)과 화합물 35 (1.8 g, 8.51 mmol, 화합물 35는 대한민국 공개특허 제10-2018-0078329호에 기술된 방법으로 제조하였다)를 N,N-다이메틸폼아마이드 (6 mL)에 녹인 후 1-하이드록시벤조트리아졸 (1.7 g, 12.8 mmol), N-(3-다이메틸아미노프로필)-N’-에틸카보다이이미드 염산염 (2.4 g, 12.8 mmol), 그리고 트라이에틸아민 (9 mL, 34.0 mmol)을 차례로 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하였다. 반응 용액을 24 시간 동안 상온에서 교반한 후 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (100 mL)를 반응 용액에 넣고 에틸 아세테이트 (2 x 100 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (100 mL)로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 36 (3.35 g, 78%)을 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.44 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.38-7.21 (m, 5H), 4.71-4.60 (m, 1H), 4.54 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 3.95 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 3.72-3.58 (m, 18H), 2.74-2.58 (m, 4H).
화합물 37의 제조
화합물 36 (3.3 g, 7.25 mmol)을 메탄올 (50 mL)에 녹인 후 팔라듐/차콜 (10 % w/w, 330 mg)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온, 수소 대기 하에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과한 후 농축하여 화합물 37 (2.14 g, 79%)을 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.55 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 4.65 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 3.99 (s, 2H), 3.78-3.58 (m, 18H), 3.00 (bs, 1H), 2.79-2.62 (m, 4H).
화합물 38의 제조
화합물 37 (0.50 g, 1.37 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (5 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 테트라브로모메테인 (0.545 g, 1.64 mmol)과 트라이페닐포스핀 (368 mg, 1.37 mmol)을 차례로 첨가하였다. 반응 용액을 6 시간 동안 교반한 후 에틸 아세테이트 (50 mL)로 묽히고, 증류수 (50 mL)로 닦아 주었다. 모인 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조한 후 여과 및 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 38 (350 mg, 64%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 398.3.
<실시예 10> 화합물 41의 제조
화합물 39의 제조
화합물 7 (1.2 g, 3.01 mmol)과 화합물 38 (960 mg, 2.51 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (25 mL)에 녹인 후 세슘 카보네이트 (1.22 g, 3.76 mmol)를 첨가하고 질소 대기, 상온 하에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 증류수 (100 mL)로 묽힌 뒤 에틸 아세테이트 (2 x 100 mL)로 추출하였다. 추출된 유기층을 소금물 (100 mL)로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 39 (1.65 g, 90%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 731.1.
화합물 40의 제조
화합물 39 (1.65 g, 2.26 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (50 mL)에 녹인 후 테트라뷰틸암모늄 플루오라이드 (1 M 테트라하이드로퓨란 용액, 5.2 mL, 5.2 mmol)를 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하였다. 1 시간 교반 후 포화 염화암모늄 수용액 (100 mL)으로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2 x 100 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (100 mL)로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 40 (1.10 g, 97%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 502.6.
화합물 41의 제조
화합물 40 (1.1 g, 2.19 mmol)을 다이클로로메테인 (20 mL)에 녹인 후 트라이에틸아민 (0.76 mL, 5.48 mmol)과 메탄설포닐 클로라이드 (0.37 mL, 4.82 mmol)를 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하였다. 1 시간 교반 후 증류수 (30 mL)으로 희석하고, 다이클로로메테인 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 여과 후 농축하여 화합물 41 (crude 1.4 g, 100%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 658.5.
<실시예 11> 화합물 44의 제조
화합물 42의 제조
화합물 16 (2.4 g, 5.11 mmol)과 화합물 41 (1.4 g, 2.13 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (10 mL)에 녹인 후 0 ℃에서 포테슘 카보네이트 (1.45 g, 10.6 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 20 시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (30 mL)를 가한 후 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (50 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 42 (2.12 g, 70%)를 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.81 (brs, 1H), 7.89 (brs, 1H), 7.43 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 7.24 (s, 1H), 7.14 (s, 1H), 6.99 (s, 2H), 6.81 (s, 2H), 6.02-5.84 (m, 2H), 5.34 (d, J = 18.0 Hz, 2H), 5.22 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.18-5.06 (m, 4H), 5.00-4.82 (m, 4H), 4.52-4.40 (m, 7H), 4.22-4.16 (m, 4H), 3.88-3.84 (m, 4H), 3.81 (s, 6H), 3.77-3.72 (m, 2H), 3.70-3.62 (m, 16H), 2.78-2.60 (m, 8H), 0.86 (s, 18H), 0.02 (s, 12H).
화합물 43의 제조
화합물 42 (2.0 g, 1.41 mmol)를 다이클로로메테인 (20 mL)에 녹인 후 피롤리딘 (0.29 mL, 3.52 mmol)과 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (65 mg, 0.056 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (30 mL)를 가한 후 다이클로로메테인 (2 x 50 mL)으로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (50 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 43 (1.42 g, 81%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1251.5, 1/2[M+H]+ 626.4.
화합물 44의 제조
화합물 43 (1.3 g, 1.04 mmol)을 다이클로로메테인 (50 mL)에 녹인 후 피리딘 (0.16 mL, 2.08 mmol)과 알릴 클로로포메이트 (0.088 mL, 0.83 mmol)를 -78 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하고 반응 용액을 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (50 mL)를 가한 후 다이클로로메테인 (2 x 50 mL)으로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (50 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 44 (450 mg, 32%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1903.8, 1/2[M+H]+ 952.4.
<실시예 12> 화합물 47의 제조
화합물 45의 제조
화합물 44 (440 mg, 0.33 mmol)를 건조한 테트라하이드로퓨란 (20 mL)에 녹인 후 -10 oC에서 트라이포스겐 (40 mg, 0.14 mmol)과 트라이에틸아민 (0.074 mL, 0.53 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 20 (196 mg, 0.36 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (5 mL)에 녹이고 트라이에틸아민 (0.074 mL, 0.53 mmol)을 첨가한 후 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하였다. 1 시간 후 반응 용액을 가열 환류시키고 12 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 희석한 후 소금물 (20 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 45 (295 mg, 47%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1903.8, 1/2[M+H]+ 952.4.
화합물 46의 제조
화합물 45 (280 mg, 0.15 mmol)을 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹인 후 피롤리딘 (0.016 mL, 0.19 mmol)과 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (4 mg, 0.0029 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (20 mL)를 가한 후 다이클로로메테인 (2 x 20 mL)으로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (20 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 46 (250 mg, 93%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1819.4, 1/2[M+H]+ 910.3.
화합물 47의 제조
화합물 46 (250 mg, 0.14 mmol)를 건조한 테트라하이드로퓨란 (10 mL)에 녹인 후 -10 oC에서 트라이포스겐 (16 mg, 0.055 mmol)과 트라이에틸아민 (0.020 mL, 0.41 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 23 (100 mg, 0.14 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (3 mL)에 녹이고 트라이에틸아민 (0.020 mL, 0.41 mmol)을 첨가한 후 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하였다. 1 시간 후 반응 용액을 가열 환류시키고 12 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 희석한 후 소금물 (20 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 47 (208 mg, 72%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2575.7, 1/2[M+H]+ 1288.8.
<실시예 13> 화합물 48의 제조
화합물 48은 화합물 47으로부터 화합물 28의 합성과 유사한 방법으로 제조하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1934.8, 1/2[M+H]+ 967.8.
<실시예 14> 화합물 52의 제조
화합물 49의 제조
화합물 42 (250 mg, 0.18 mmol)를 테트라하이드로퓨란/증류수 (1.5 mL/1.5 mL)에 녹이고 아세트산 (3 mL)를 첨가한 후 상온, 질소 대기 하에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (30 mL)를 가한 후 에틸 아세테이트 (2 x 30 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (30 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 49 (190 mg, 91%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1191.2, [M+Na]+ 1213.0.
화합물 50의 제조
화합물 49 (190 mg, 0.16 mmol)를 다이클로로메테인 (5 mL)에 녹인 후 데스-마틴 펄아이오디네인 (Dess-Martin periodinane, 162 mg, 0.39 mmol)를 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 15 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제하여 화합물 50 (151 mg, 79%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1187.3, [M+Na]+ 1208.8.
화합물 51의 제조
화합물 50 (70 mg, 0.059 mmol)을 메탄올/테트라하이드로퓨란 (1 mL/2 mL)에 녹인 후 수산화 리튬 (6.2 mg, 0.15 mmol)을 증류수 (1 mL)에 녹인 용액을 0 ℃에서 서서히 첨가하였다. 16 시간 동안 교반한 후 반응 용액을 아세트산으로 중화하고, 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제 및 동결건조하여 화합물 51 (61 mg, 89%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1159.0, [M+Na]+ 1181.0.
화합물 52의 제조
화합물 51 (60 mg, 0.052 mmol)을 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 피롤리딘 (0.011 mL, 0.13 mmol)과 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (2.3 mg, 0.0021 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제하여 화합물 52 (23 mg, 47%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 954.6, 1/2[M+H]+ 477.9.
*<실시예 15> 화합물 53의 제조
화합물 53의 제조
화합물 50 (30 mg, 0.025 mmol)을 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 피롤리딘 (0.005 mL, 0.063 mmol)과 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (1 mg, 0.001 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제하여 화합물 53 (11.2 mg, 45%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 982.9, 1/2[M+H]+ 491.9.
<실시예 16> 화합물 56의 제조
화합물 54의 제조
화합물 7 (3.5 g, 9.14 mmol)과 메틸 브로모아세테이트 (1.68 g, 10.97 mmol)를 N,N-다이메틸폼아마이드 (35 mL)에 녹인 후 세슘 카보네이트 (4.5 g, 13.71 mmol)를 첨가하고 질소 대기, 상온 하에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽힌 뒤 증류수 (3 x 100 mL)로 세척하였다. 세척한 유기층을 소금물 (100 mL)로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축하여 화합물 54 (3.83 g, 92%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.89 (s, 1H), 6.77 (s, 2H), 4.70 (s, 4H), 4.64 (s, 2H), 3.80 (s, 3H).
화합물 55의 제조
화합물 54 (3.8 g, 8.35 mmol)를 메탄올 (30 mL)에 녹인 후 캄포술폰산 (776 mg, 3.34 mmol)을 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하였다. 상온에서 5 시간 교반 후 트라이에틸아민 (0.8 mL)을 넣고 용매를 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 55 (1.83 g, 97%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.99 (s, 1H), 6.85 (s, 2H), 4.67 (s, 4H), 4.66 (s, 2H), 3.81 (s, 3H).
화합물 56의 제조
화합물 55 (700 mg, 3.09 mmol)를 다이클로로메테인 (25 mL)에 녹인 후 트라이에틸아민 (1.3 mL, 9.27 mmol)과 메탄설포닐 클로라이드 (0.53 mL, 6.81 mmol)를 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가한 후 1 시간 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (50 mL)로 묽힌 뒤 증류수 (50 mL)로 세척하였다. 세척한 유기층을 소금물 (50 mL)로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 56 (0.95 g, 81%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.09 (s, 1H), 6.98 (s, 2H), 5.21 (s, 4H), 4.68 (s, 2H), 3.82 (s, 3H), 2.99 (s, 6H).
<실시예 17> 화합물 60의 제조
화합물 57의 제조
화합물 13 (36 g, 62.1 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드/증류수 (300 mL/6 mL)에 녹인 후 소듐 아세테이트 (6.1 g, 74.6 mmol)를 첨가하고, 반응 용액을 상온, 질소 대기 하에서 교반하였다. 3 시간 후 증류수 (500 mL)를 첨가하고 에틸 아세테이트 (2 x 200 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 증류수 (200 mL), 그리고 소금물 (200 mL)순으로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 57 (26 g, 99%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) (rotamers) δ 7.77-7.76 (m, 1H), 6.81-6.76 (m, 1H), 6.05-6.01 (m, 1H), 5.10-4.83 (m, 2H), 4.58-4.54 (m, 1H), 3.99 (s, 3H), 3.89-3.56 (m, 3H), 3.34-3.26 (m, 1H), 2.81-2.67 (m, 2H), 0.89 (s, 9H), 0.09 (s, 6H).
화합물 58의 제조
화합물 57 (2.31 g, 5.46 mmol)과 화합물 56 (0.95 g, 2.48 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (20 mL)에 녹인 후 0 ℃에서 포테슘 카보네이트 (1.71 g, 12.40 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 20 시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽힌 뒤 증류수 (3 x 100 mL)로 세척하였다. 세척한 유기층을 소금물 (100 mL)로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 58 (2.45 g, 95%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1035.6.
화합물 59의 제조
화합물 58 (2.45 g, 2.36 mmol)을 에틸 아세테이트 (12 mL)와 에탄올 (12 mL)에 녹인 후 아연 가루 (Zinc dust, 9.28 g, 141.98 mmol)를 넣고 포름산 (3.56 mL, 94.4 mmol)을 에탄올 (12 mL)에 묽혀서 첨가하였다. 상온에서 4 시간 교반한 후, 에틸 아세테이트 (30 mL)로 희석하여 셀라이트로 여과하고 에틸 아세테이트 (100 mL)를 첨가하였다. 유기층을 증류수 (150 mL), 포화 탄산수소나트륨 수용액 (150 mL), 그리고 소금물 (100 mL)순으로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 59 (1.89 g, 82%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 975.3, 1/2[M+H]+ 488.4.
화합물 60의 제조
화합물 59 (1.89 g, 1.94 mmol)를 다이클로로메테인 (150 mL)에 녹인 후 피리딘 (0.31 mL, 3.88 mmol)과 알릴 클로로포메이트 (0.19 mL, 1.74 mmol)를 -78 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하고 반응 용액을 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 60 (923 mg, 44%)을 수득하였다.
<실시예 18> 화합물 63의 제조
화합물 61의 제조
화합물 60 (923 mg, 0.87 mmol)과 트라이포스겐 (93 mg, 0.31 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (45 mL)에 녹인 후, -10 ℃에서 N-메틸이미다졸 (0.24 mL, 4.35 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 20 (196 mg, 0.36 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (15 mL)에 녹이고 N-메틸이미다졸 (0.06 mL, 1.04 mmol)을 첨가한 후 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하고 상온에서 17 시간 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (20 mL)로 희석하고 증류수 (30 mL)로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 61 (1.01 g, 71%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1624.3, 1/2[M+H]+ 814.0.
화합물 62의 제조
화합물 61 (1.01 g, 0.62 mmol)을 다이클로로메테인 (60 mL)에 녹인 후 소듐 2-에틸헥사노에이트 (155 mg, 0.93 mmol)와 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (36 mg, 0.03 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 2 시간 동안 교반 후 소듐 2-에틸헥사노에이트 (50 mg, 0.30 mmol)와 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (12 mg, 0.01 mmol)을 추가로 첨가하였다. 반응물을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 62 (900 mg, 94%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1543.5, 1/2[M+H]+ 772.0.
화합물 63의 제조
화합물 62 (900 mg, 0.58 mmol)와 트라이포스겐 (62 mg, 0.21 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (30 mL)에 녹인 후, -10 ℃에서 N-메틸이미다졸 (0.16 mL, 2.90 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 23 (508 mg, 0.69 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹이고 N-메틸이미다졸 (0.04 mL, 0.69 mmol)을 첨가한 후 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하고 상온에서 17 시간 교반한다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (20 mL)로 희석하고 증류수 (30 mL)로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 63 (827 mg, 62%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2299.79, 1/2[M+H]+ 1150.3.
<실시예 19> 화합물 64의 제조
화합물 64은 화합물 63으로부터 화합물 28의 합성과 유사한 방법으로 제조하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1673.1, 1/2[M+H]+ 836.9.
<실시예 20> 화합물 68의 제조
화합물 65의 제조
5-브로모펜탄-1-올 (5 g, 29.93 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (70 mL)에 녹인 후, 0 ℃에서 이미다졸 (5.09 g, 47.82 mmol), t-뷰틸다이페닐 클로로실란 (8.6 mL, 32.92 mmol)을 순차적으로 넣고 4 시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 농축하고 에틸 아세테이트(100 mL)로 묽힌 후 증류수 (100 mL)로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 65 (11.2 g, 92%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.68-7.64 (m, 4H), 7.45-7.35 (m, 6H), 3.66 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.38 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 1.84 (m, 2H), 1.61-1.47 (m, 6H), 1.05 (s, 9H).
화합물 66의 제조
다이-t-부틸 포스파이트 (2 mL, 10 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (8 mL)에 묽힌 후, 수소화 나트륨 (0.24 g, 10 mmol)을 넣고 0 ℃에서 30 분간 교반하였다. 화합물 65 (2 g, 5 mmol)를 N,N-다이메틸폼아마이드 (8 mL)에 묽혀서 첨가하고, 질소 대기 하에서 16 시간 교반하였다. 메탄올 (0.5 mL)을 넣고 에틸 아세테이트 (70 mL)로 묽히고 포화 염화 암모늄 용액(50 mL), 소금물(50 mL)순으로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 66 (2.35 g, 90%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.67-7.65 (m, 4H), 7.44-7.35 (m, 6H), 3.66 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.65-1.40 (m, 24H), 1.20 (s, 9H).
화합물 67의 제조
화합물 66 (3.3 g, 6.36 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (40 mL)에 녹인 후 테트라뷰틸암모늄 플루오라이드 (1 M 테트라하이드로퓨란 용액, 7.63 mL, 7.63 mmol)를 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하였다. 2 시간 교반 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 67 (1.76 g, 99%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.65 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.72-1.33 (m, 26H).
화합물 68의 제조
화합물 67 (1.76 g, 6.28 mmol)을 다이클로로메테인 (40 mL)에 녹인 후 트라이에틸아민 (1.3 mL, 9.42 mmol)과 메탄설포닐 클로라이드 (0.58 mL, 7.53 mmol)를 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하였다. 2 시간 교반 후 다이클로로메테인 (30 mL)로 희석하고 증류수 (40 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 여과 후 농축하여 화합물 68 (crude 2.37 g, 100%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.23 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.01 (s, 3H), 1.77 (m, 2H), 1.68-1.56 (m, 4H), 1.53-1.40 (m, 20H).
<실시예 21> 화합물 71의 제조
화합물 69의 제조
화합물 7 (1.87 g, 4.90 mmol)과 화합물 68 (2.11 g, 5.88 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (20 mL)에 녹인 후 세슘 카보네이트 (2.39 g, 7.35 mmol), 아이오딘화 나트륨 (147 mg, 0.98 mmol)을 첨가하고 질소 대기, 상온 하에서 4 시간 동안 교반 후, 60 ℃에서 15 시간 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽힌 뒤 증류수 (3 x 80 mL)로 세척하였다. 세척한 유기층을 소금물 (70 mL)로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축하여 화합물 69 (crude 3.56 g, 100%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.84 (s, 1H), 6.75 (s, 2H), 4.69 (s, 4H), 3.95 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.84-1.72 (m, 2H), 1.72-1.42 (m, 28H), 0.94 (s, 18H), 0.09 (s, 12H).
화합물 70의 제조
화합물 69 (crude 3.56 g, 4.90 mmol)를 테트라하이드로퓨란 (50 mL)에 녹인 후 테트라뷰틸암모늄 플루오라이드 (1 M 테트라하이드로퓨란 용액, 16.6 mL, 16.6 mmol)를 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하였다. 2 시간 교반 후 감압 농축하여 화합물 70 (crude 2.04 g, 100%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.92 (s, 1H), 6.85 (s, 2H), 4.67 (s, 2H), 4.65 (s, 2H), 3.99 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 2.05 (t, J = 5.6 Hz, 2H), 1.78 (m, 2H), 1.71-1.48 (m, 26H).
화합물 71의 제조
화합물 70 (crude 2.04 g, 4.90 mmol)을 다이클로로메테인 (50 mL)에 녹인 후 트라이에틸아민 (2 mL, 14.40 mmol)과 메탄설포닐 클로라이드 (0.82 mL, 10.56 mmol)를 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하였다. 2 시간 교반 후 다이클로로메테인 (30 mL)으로 희석하고 증류수 (50 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 여과 후 농축하여 화합물 71 (crude 2.91 g, 100%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.02 (s, 1H), 6.95 (s, 2H), 5.20 (s, 4H), 3.98 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 2.99 (s, 6H), 1.83 (m, 2H), 1.71-1.51 (m, 6H), 1.50 (s, 18H).
<실시예 22> 화합물 74의 제조
화합물 72 제조
화합물 57 (1.2 g, 2.84 mmol)과 화합물 71 (766 mg, 1.29 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (20 mL)에 녹인 후 0 ℃에서 포테슘 카보네이트 (0.89 g, 6.45 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 20 시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽힌 뒤 증류수 (3 x 100 mL)로 세척하였다. 세척한 유기층을 소금물 (100 mL)로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 72 (0.85 g, 53%)를 수득하였다.
화합물 73의 제조
화합물 72 (850 mg, 0.69 mmol)를 에틸 아세테이트 (3 mL)와 에탄올 (3 mL)에 녹인 후 아연 가루 (Zinc dust, 2.72 g, 41.6 mmol)를 넣고 포름산 (1 mL, 27.6 mmol)을 에탄올 (4 mL)에 묽혀서 첨가하였다. 상온에서 5 시간 교반한 후, 에틸 아세테이트 (30 mL)로 희석하여 셀라이트로 여과하고 에틸 아세테이트 (70 mL)를 첨가하였다. 유기층을 증류수 (50 mL), 포화 탄산수소나트륨 수용액 (50 mL), 그리고 소금물 (50 mL)순으로 세척 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 73 (565 mg, 70%)을 수득하였다.
화합물 74의 제조
화합물 73 (2.03 g, 1.74 mmol)을 다이클로로메테인 (150 mL)에 녹인 후 피리딘 (0.28 mL, 3.48 mmol)넣고, 알릴 클로로포메이트 (0.17 mL, 1.57 mmol)를 다이클로로메테인 (60 mL)에 희석하여 -78 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하고 반응 용액을 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 74 (1.06 g, 49%)를 수득하였다.
<실시예 23> 화합물 77의 제조
화합물 75의 제조
화합물 74 (1.06 g, 0.87 mmol)와 트라이포스겐 (91 mg, 0.31 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (45 mL)에 녹인 후, -10 ℃에서 N-메틸이미다졸 (0.23 mL, 4.20 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 20 (500 mg, 0.92 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (15 mL)에 녹이고 N-메틸이미다졸 (0.06 mL, 1.00 mmol)을 첨가한 후 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하고 상온에서 17 시간 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (20 mL)로 희석하고 증류수 (30 mL)로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 75 (1.27 g, 83%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1818.4, 1/2[M+H]+ 909.6.
화합물 76의 제조
화합물 75 (1.27 mg, 0.69 mmol)를 다이클로로메테인 (60 mL)에 녹인 후 피롤리딘 (0.34 mL, 4.19 mmol)과 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (40 mg, 0.035 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 76 (1.1 g, 90%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1733.8, 1/2[M+H]+ 867.3.
화합물 77의 제조
화합물 76 (1.1 g, 0.63 mmol)과 트라이포스겐 (68 mg, 0.22 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (30 mL)에 녹인 후, -10 ℃에서 N-메틸이미다졸 (0.17 mL, 3.15 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 23 (506 mg, 0.69 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹이고 N-메틸이미다졸 (0.04 mL, 0.75 mmol)을 첨가한 후, 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하고 상온에서 17 시간 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (20 mL)로 희석하고 증류수 (30 mL)로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 77 (500 mg, 32%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2490.2, 1/2[M+H]+ 1245.7.
<실시예 24> 화합물 81의 제조
화합물 78의 제조
화합물 77 (500 mg, 0.20 mmol)을 테트라하이드로퓨란/증류수 (5 mL/5 mL)에 녹이고 아세트산 (10 mL)을 첨가한 후 상온, 질소 대기 하에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸아세테이트 (60 mL)로 희석하고, 증류수 (50 mL), 포화 탄산나트륨 용액 (2 x 50 mL)으로 세척한 후 무수황산나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 78 (240 mg, 52%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2262.2, [M+Na]+ 2284.0.
화합물 79의 제조
화합물 78 (240 mg, 0.106 mmol)을 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹인 후 데스-마틴 펄아이오디네인 (Dess-Martin periodinane, 104 mg, 0.24 mmol)를 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 90 분 동안 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (20 mL)로 희석하고, 포화 탄산수소나트륨 수용액 (30 mL)으로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 79 (134 mg, 56%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2258.1, 1/2[M+H]+ 1129.3.
화합물 80의 제조
화합물 79 (134 mg, 0.059 mmol)를 메탄올 (4.2 mL)에 녹인 후, 수산화 리튬 (22 mg, 0.534 mmol)을 증류수 (4.2 mL)에 녹인 용액을 -50 ℃에서 서서히 첨가하고 상온에서 3 시간 교반하였다. 반응 용액을 포름산으로 중화하고, 반응 용액을 감압 농축한 후 동결 건조하여 화합물 80 (crude 147 mg, 100%)을 수득하였다.
화합물 81의 제조
화합물 80 (crude 147 mg, 0.059 mmol)을 다이클로로메테인 (4 mL)로 묽힌 후, 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 첨가하고 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후, HPLC로 정제하고 동결 건조하여 화합물 81을 흰색의 고체 (45 mg, 41%)로 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1765.3, 1/2[M+H]+ 883.1.
<실시예 25> 화합물 87의 제조
화합물 82의 제조
2-[2-(2-아지도에톡시)에톡시]에탄올 (21.0 g, 119.8 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (400 mL)에 녹인 후 0 ℃에서 메탄설폰산 무수물 (31.3 g, 179.7 mmol)과 N-메틸 몰폴린 (23.7 mL, 215.7 mmol)을 첨가하고 질소 대기, 상온 하에서 4 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 여과하고 감압 증류한 다음 테트라하이드로퓨란 (200 mL)에 녹인 후 브롬화 리튬 (20.8 g, 239.7 mmol)을 첨가하고 100 ℃에서 12 시간 교반하였다. 반응 용액을 상온으로 식힌 후 다이클로로메테인 (200 mL)로 묽히고, 증류수 (500 mL)로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 82 (26.0 g, 91%)를 수득하였다.
H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.84-.3.80 (m, 2H), 3.70 (s, 6H), 3.49-3.47 (m, 2H), 3.47-3.39 (m, 2H).
화합물 83의 제조
화합물 82 (2.12 g, 8.90 mmol)와 화합물 7 (2.84 g, 7.42 mmol)을 N,N-다이메틸 폼아마이드 (30 mL)에 녹인 후 세슘 카보네이트 (3.62 g, 11.13 mmol)을 첨가하고 질소 대기, 상온 하에서 12 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 묽힌 뒤 증류수 (80 mL)로 세척하였다. 세척한 유기층을 소금물 (70 mL)로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 83 (26.0 g, 91%)을 수득하였다.
H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.84 (s, 1H), 6.76 (s, 2H), 4.67 (s, 4H), 4.11 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.85 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.74-3.71 (m, 2H), 3.68-3.65 (m, 6H), 3.38 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 0.87 (s, 18H), 0.07 (s, 12H).
화합물 84의 제조
화합물 83 (3.73 g, 6.90 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (20 mL)에 녹인 후 증류수 (1.2 mL, 69.0 mmol), 트라이페닐 포스핀 (2.0 g,7.59 mmol)을 첨가하고 질소 대기, 상온 하에서 12 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 84 (2.67 g, 75%)를 수득하였다.
H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.86 (s, 1H), 6.77 (s, 2H), 4.69 (s, 4H), 4.13 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.6 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.74-3.72 (m, 2H), 3.66-3.64 (m, 2H), 3.54 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 2.89 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 2.21 (br, 2H), 0.94 (s, 18H), 0.09 (s, 12H). EI-MS m/z : [M+H]+ 514.4.
화합물 85의 제조
화합물 84 (2.67 g, 5.19 mmol)를 테트라하이드로퓨란 (30 mL)에 녹인 후 0 ℃에서 트라이에틸아민 (0.72 mL, 5.19 mmol), 다이-t-부틸 다이카보네이트 (1.1 g, 5.19 mmol)을 첨가하고 질소 대기, 상온 하에서 12 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (50 mL)로 묽힌 뒤 증류수 (80 mL)로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 85 (2.67 g, 84%)를 수득하였다.
H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.86 (s, 1H), 6.77 (s, 2H), 5.00 (br, 1H), 4.69 (s, 4H), 4.13 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.85 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.73-3.70 (m, 2H), 3.65-3.63 (m, 2H), 3.55 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.32 (q, 2H), 1.46 (s, 9H), 0.93 (s, 18H), 0.09 (s, 12H).
화합물 86의 제조
화합물 85 (2.67 g, 4.35 mmol)를 메탄올 (50 mL)에 녹인 후 캄포술폰산 (404 mg, 1.74 mmol)을 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하였다. 상온에서 2 시간 교반 한 후, 트라이에틸아민 (0.4 mL)을 넣고 용매를 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 86 (1.2 g, 72%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 6.94 (s, 1H), 6.88 (s, 2H), 5.03 (brs, 1H), 4.67 (s, 2H), 4.66 (s, 2H), 4.17 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.85 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.72-3.70 (m, 2H), 3.70-3.60 (m, 2H), 3.60-3.50 (m, 2H), 3.34-3.28 (m, 2H), 1.92 (brs, 2H), 1.43 (s, 9H).
화합물 87의 제조
화합물 86 (1.2 g, 3.11 mmol)을 다이클로로메테인 (30 mL)에 녹인 후 트라이에틸아민 (1.3 mL, 9.33 mmol)과 메탄설포닐 클로라이드 (0.53 mL, 6.84 mmol)를 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가한 후 1 시간 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (40 mL)으로 묽힌 뒤 증류수 (50 mL)로 세척하였다. 세척한 유기층을 소금물 (50 mL)로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 87 (1.57 g, 93%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.04 (s, 1H), 7.00 (s, 2H), 5.20 (s, 4H), 4.98 (brs, 1H), 4.17 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.87 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.73-3.71 (m, 2H), 3.66-3.64 (m, 2H), 3.55 (t, J = 5.2 Hz, 2H), 3.36-3.25 (m, 2H), 2.99 (s, 6H), 1.43 (s, 9H).
<실시예 26> 화합물 90의 제조
화합물 88의 제조
화합물 87 (1.57 g, 2.89 mmol)과 화합물 57 (2.69 g, 6.36 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (30 mL)에 녹인 후, 0 ℃에서 포테슘 카보네이트 (2 g, 14.45 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 20 시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽힌 뒤 증류수 (3 x 80 mL)로 세척하였다. 세척한 유기층을 소금물 (100 mL)로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 88 (2.73 g, 79%)을 수득하였다.
화합물 89의 제조
화합물 88 (2.1 g, 1.76 mmol)을 에틸 아세테이트 (10 mL)와 에탄올 (10 mL)에 녹인 후 아연 가루 (Zinc dust, 6.9 g, 105.60 mmol)를 넣고 포름산 (2.66 mL, 70.4 mmol)을 에탄올 (10 mL)에 묽혀서 첨가하였다. 상온에서 3 시간 교반한 후, 에틸 아세테이트 (30 mL)로 희석하여 셀라이트로 여과하고 에틸 아세테이트 (100 mL)를 첨가하였다. 유기층을 증류수 (150 mL), 포화 탄산수소나트륨 수용액 (150 mL), 그리고 소금물 (100 mL)순으로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 89 (crude 1.99 g, 100%)를 수득하였다.
화합물 90의 제조
화합물 89 (2.8 g, 2.46 mmol)를 다이클로로메테인 (200 mL)에 녹이고 피리딘 (0.39 mL, 4.93 mmol)을 첨가한 후, 알릴 클로로포메이트 (0.23 mL, 2.22 mmol)를 다이클로로메테인 (50 mL)에 희석하여 -78 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하고 반응 용액을 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 90 (1.5 g, 50%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1219.3.
<실시예 27> 화합물 93의 제조
화합물 91의 제조
화합물 90 (1.5 g, 1.23 mmol)과 트라이포스겐 (131 mg, 0.44 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (60 mL)에 녹인 후, -10 ℃에서 N-메틸이미다졸 (0.49 mL, 6.15 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 20 (799 mg, 1.47 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (20 mL)에 녹이고 N-메틸이미다졸 (0.12 mL, 1.47 mmol)을 첨가한 후 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하고 상온에서 17 시간 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (20 mL)으로 희석하고 증류수 (30 mL)로 세척한 후, 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 91 (1.83 g, 82%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1786.3, 1/2[M+H]+ 893.6.
화합물 92의 제조
화합물 91 (1.83 g, 1.02 mmol)을 다이클로로메테인 (80 mL)에 녹인 후 피롤리딘 (0.17 mL, 2.05 mmol)과 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (23.6 mg, 0.020 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 92 (1.26 g, 72%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1702.5, 1/2[M+H]+ 851.6.
화합물 93의 제조
화합물 92 (1.26 g, 0.74 mmol)와 트라이포스겐 (79 mg, 0.27 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (30 mL)에 녹인 후, -10 ℃에서 N-메틸이미다졸 (0.29 mL, 3.70 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 23 (649 mg, 0.88 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹이고 N-메틸이미다졸 (0.07 mL, 0.88 mmol)을 첨가한 후, 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하고 상온에서 17 시간 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (20 mL)으로 희석하고 증류수 (30 mL)로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 93 (910 mg, 50 %)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2458.9, 1/2[M+H]+ 1229.9.
<실시예 28> 화합물 97의 제조
화합물 94의 제조
화합물 93 (910 mg, 0.37 mmol)을 테트라하이드로퓨란/증류수 (10 mL/10 mL)에 녹이고 아세트산 (20 mL)을 첨가한 후 상온, 질소 대기 하에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸아세테이트 (60 mL)로 희석하고 증류수 (50 mL), 포화 탄산나트륨 용액 (2 x 50 mL)으로 세척한 후 무수황산나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 94 (620 mg, 72%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2230.4, [M+Na]+ 2252.2.
화합물 95의 제조
화합물 94 (620 mg, 0.27 mmol)를 다이클로로메테인 (25 mL)에 녹인 후 데스-마틴 펄아이오디네인 (Dess-Martin periodinane, (235 mg, 0.55 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 90분 동안 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (20 mL)으로 희석하고 포화 탄산수소나트륨 수용액 (30 mL)로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 95 (380 mg, 62%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2225.8, [M+Na]+ 2248.0.
화합물 96의 제조
화합물 95 (380 mg, 0.17 mmol)를 메탄올 (10 mL)에 녹인 후, 수산화 리튬 (64 mg, 1.53 mmol)을 증류수 (10 mL)에 녹인 용액을 -50 ℃에서 서서히 첨가하고 상온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 포름산으로 중화하고, 감압 농축한 후 HPLC로 정제하고 동결 건조하여 화합물 96 (50 mg, 14 %)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1946.0, [M+Na]+ 1969.1.
화합물 97의 제조
화합물 96 (50 mg, 0.025 mmol)을 다이클로로메테인 (4 mL)으로 묽힌 후 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 0 ℃에서 첨가하고 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제하고 동결 건조하여 화합물 97을 흰색의 고체 (27 mg, 52%)로 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1745.4, 1/2[M+H]+ 874.1.
<실시예 29> 화합물 100의 제조
화합물 98의 제조
화합물 89 (1.2 g, 1.06 mmol)와 트라이포스겐 (226 mg, 0.76 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (50 mL)에 녹인 후, -10 ℃에서 N-메틸이미다졸 (0.58 mL, 10.60 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 20 (1.26 g, 2.33 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (20 mL)에 녹이고 N-메틸이미다졸 (0.17 mL, 2.33 mmol)을 첨가한 후, 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하고 상온에서 17 시간 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (20 mL)로 희석하고 증류수 (30 mL)로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 98 (1.41 g, 58%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2270.2, 1/2[M+H]+ 1135.7.
화합물 99의 제조
화합물 98 (1.41 g, 0.62 mmol)을 테트라하이드로퓨란/증류수 (10 mL/10 mL)에 녹이고 아세트산 (20 mL)을 첨가한 후 상온, 질소 대기 하에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 99 (800 mg, 63%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2042.8, [M+Na]+ 2064.6.
화합물 100의 제조
화합물 99 (740 mg, 0.36 mmol)를 다이클로로메테인 (40 mL)에 녹인 후 데스-마틴 펄아이오디네인 (Dess-Martin periodinane, 352 mg, 0.83 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (20 mL)으로 희석하고 포화 탄산수소나트륨 수용액 (30 mL)으로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 100 (626 mg, 84%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2038.3 1/2[M+H]+ 1019.6.
<실시예 30> 화합물 102의 제조
화합물 101의 제조
화합물 100 (440 mg, 0.216 mmol)을 다이클로로메테인 (4 mL)로 묽힌 후 트라이플루오로아세트산 (1 mL)를 0 ℃에서 첨가하고 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축하여 화합물 101 (crude 443 mg, 100%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1937.7, 1/2[M+H]+ 969.7.
화합물 103의 제조
화합물 101 (443 mg, 0.216 mmol)과 화합물 102 (290 mg, 0.324 mmol, 화합물 102는 대한민국 공개특허 제10-2018-0078329호에 기술된 방법으로 제조하였다)를 N,N-다이메틸폼아마이드 (10 mL)에 녹인 후, 0 ℃에서 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (0.11 mL, 0.648 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 2 시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응 용액에 N-메틸이미다졸 (0.02 mL, 0.432 mmol)과 화합물 102 (398 mg, 0.44 mmol)를 추가로 첨가하고 16 시간 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (70 mL)로 묽히고 증류수 (3 x 50 mL)로 세척한 후, 모인 유기층을 소금물 (70 mL)로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 103 (340 mg, 56%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2694.3, 1/2[M+H]+ 1347.9.
<실시예 31> 화합물 105의 제조
화합물 104의 제조
화합물 103 (340 mg, 0.126 mmol)을 메탄올 (9 mL)에 녹인 후, 수산화 리튬 (53 mg, 1.26 mmol)을 증류수 (9 mL)에 녹인 용액을 -50 ℃에서 서서히 첨가하고 상온에서 4 시간 교반하였다. 반응 용액을 아세트산으로 중화하고, 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제 및 동결 건조하여 화합물 104 (117 mg, 44%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2274.4, 1/2[M+H]+ 1137.4.
화합물 105의 제조
화합물 104 (117 mg, 0.05 mmol)를 다이클로로메테인 (8 mL)으로 묽힌 후 트라이플루오로아세트산 (2 mL)을 0 ℃에서 첨가하고 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제하고 동결 건조하여 화합물 105를 흰색의 고체 (49.7 mg, 43%)로 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2173.9, 1/2[M+H]+ 1087.4.
<실시예 32> 화합물 110의 제조
화합물 106의 제조
2-(벤질옥시)에탄올 (5 g, 32.85 mmol)을 다이클로로메테인 (100 mL)에 녹인 후 N-메틸몰폴린 (4 mL, 36.14 mmol)과 메틸 프로피올레이트 (3.2 mL, 36.14 mmol)를 상온에서 16 시간 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축하고, 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽힌 후 증류수 (70 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 106 (6.90 g, 89%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.63 (d, J = 12.4 Hz, 1H), 7.38-7.29 (m, 5H), 5.23 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 4.58 (s, 2H), 4.02 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 3.73 (t, J = 3.2 Hz, 2H), 3.70 (s, 3H).
화합물 107의 제조
화합물 106 (6.9 g, 29.20 mmol)을 메탄올 (80 mL)에 녹인 후 팔라듐/차콜 (10% w/w, 3 g)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온, 수소 대기 하에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과한 후 농축하여 화합물 107 (4.01 g, 92%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 3.78 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 3.75-3.70 (m, 5H), 3.59 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 2.61 (t, J = 6.0 Hz, 2H).
화합물 108의 제조
화합물 107 (2 g, 13.5 mmol)을 다이클로로메테인 (100 mL)에 녹인 후 트라이에틸아민 (2.8 mL, 20.2 mmol)과 4-톨루엔설포닐 클로라이드 (3.09 g, 16.2 mmol)를 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 16 시간 교반하고, 다이클로로메테인 (30 mL)으로 희석한 후 증류수 (80 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 108 (4.59 g, 56%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.80 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 7.34 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.14 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 3.68 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.68 (s, 3H), 3.65 (t, J = 4.4 Hz, 2H), 2.52 (t, J = 6.0 Hz, 2H), 2.45 (s, 3H).
화합물 109의 제조
화합물 108 (2.09 g, 6.91 mmol)과 4-아이오도페놀 (1.82 g, 8.29 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (20 mL)에 녹인 후 0 ℃에서 포테슘 카보네이트 (1.43 g, 10.36 mmol)와 아이오딘화 나트륨 (207 mg, 1.38 mmol)을 첨가하고 70 ℃에서 2 시간 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (70 mL)로 희석하고 증류수 (3 x 50 mL)로 세척하였다. 유기층은 무수 황산 나트륨으로 건조하고 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 109 (1.73 g, 71%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.54 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.69 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 4.07 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.84-3.78 (m, 4H), 3.69 (s, 3H), 2.62 (t, J = 6.8 Hz, 2H).
화합물 110의 제조
화합물 109 (930 mg, 4.94 mmol)와 비스(피나콜라토)다이보론 (1.01 g, 3.98 mmol), [1,1'-비스(다이페닐포스피노)페로센]팔라듐(II) 다이클로라이드 (0.43 g, 0.53 mmol), 그리고 포테슘 아세테이트 (0.78 g, 7.95 mmol)를 N,N-다이메틸폼아마이드 (20 mL)에 넣고 90 ℃, 질소 대기 하에서 16 시간 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (70 mL)로 희석하고 증류수 (3 x 50 mL)로 세척하였다. 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 110 (685 mg, 74%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.73 (d, J = 8.4 Hz, 2H), 6.90 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 4.13 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 3.85-3.82 (m, 4H), 3.68 (s, 3H), 2.63 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 1.33 (s, 12H).
<실시예 33> 화합물 117의 제조
화합물 111의 제조
화합물 16 (7.9 g, 16.5 mmol)과 다이아이오도펜테인 (12.3 mL, 82.8 mmol)을 아세톤 (100 mL)에 녹인 후 포테슘 카보네이트 (2.3 g, 16.5 mmol)를 첨가하고 60 ℃에서 10 시간 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 111 (9.7 g, 87%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.88 (brs 1H), 7.83 (s, 1H), 6.82 (s, 1H), 5.99-5.92 (m, 1H), 5.35 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 5.24 (d, J = 10.4 Hz, 1H), 5.14-4.84 (m, 2H), 4.69-4.54 (m, 2H), 4.24-4.14 (m, 2H), 4.09 (t, J = 6.8 Hz, 2H), 3.91-3.42 (m, 5H), 3.22 (t, J = 7.3 Hz, 2H), 2.76-2.61 (m, 2H), 1.95-1.84 (m, 4H), 1.62-1.55 (m, 2H), 0.89 (s, 9H), 0.03 (s, 6H)
화합물 113의 제조
화합물 112 (5.3 g, 9.09 mmol, 화합물 112는 ACS. Med. Chem. 2016, 7, 11, 983-987에 기술된 방법으로 제조하였다)을 다이클로로메테인 (50 mL)에 녹인 후 -10 ℃에서 트라이클로로아이소사이아누리산 (1.48 g, 6.36 mmol), 템포 (TEMPO, 142 mg, 0.91 mmol)를 넣고 1 시간 동안 교반하였다. 다이클로로메테인 (50 mL)으로 희석하고 포화 탄산수소나트륨 (2 x 70 mL), 소금물 (100 mL)로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하여 화합물 113 (5.79 g, 100%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) (rotamers) δ 7.71 (s, 1H), 6.73 (s, 1H), 5.01-4.99 (m, 1H), 4.32-4.29 (m, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.73 (dd, 1H), 3.66 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 3.46 (d, J = 16.8 Hz, 1H), 2.83-2.76 (m, 1H), 2.59-2.54 (m, 1H), 1.36-1.24 (m, 3H), 1.12 (d, J = 10.4 Hz, 18H), 0.89 (s, 9H), 0.11 (s, 3H), 0.09 (s, 3H).
화합물 114의 제조
화합물 113 (3.79 g, 6.51 mmol)을 다이클로로메테인 (60 mL)에 녹인 후 -55 ℃, 질소 대기 하에서 2,6-루티딘 (3 mL, 26.0 mmol)과 트라이플루오로메탄설폰산 무수물 (3.3 mL, 19.5 mmol)을 첨가하였다. 반응 용액을 30 분 동안 교반한 후 다이클로로메테인 (30 mL)으로 묽히고 포화 탄산수소나트륨 수용액 (100 mL)으로 세척하였다. 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하고 여과 후 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 114 (2.95 g, 63%)를 수득하였다.
화합물 115의 제조
화합물 114 (2.95 g, 4.13 mmol)를 에탄올/톨루엔/증류수 (7 mL/14 mL/7 mL)에 녹인 후 상온, 질소 대기 하에서 화합물 110 (1.69 g, 4.82 mmol), 탄산나트륨 (1.42 g, 13.44 mmol), 그리고 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐 (0) (0.52 g, 0.45 mmol)을 첨가하였다. 반응 용액을 85 ℃, 3 시간 동안 교반한 후 에틸 아세테이트 (100 mL)로 반응 용액을 묽히고 소금물 (100 mL)과 증류수 (100 mL)로 유기층을 세척하였다. 모인 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하고, 여과 후 감압 농축하였다. 얻어진 화합물을 N,N-다이메틸폼아마이드/증류수 (10 mL/0.2 mL)에 녹이고 소듐 아세테이트 (67 mg, 0.81 mmol)를 첨가한 후 상온, 질소 대기 하에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트(50 mL)로 희석하고 증류수 (3 x 40 mL)로 세척한 후 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 115 (1.10 g, 41%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.81 (s, 1H), 7.126 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.91 (s, 1H), 6.81 (d, J = 8.8 Hz, 2H), 6.15 (s, 1H), 5.98 (s, 1H), 4.79 (m, 1H), 4.08 (t, J = 4.8 Hz, 2H), 4.01 (s, 3H), 3.88-3.78 (m, 4H), 3.68 (s, 3H), 3.24-3.12 (m 1H), 3.04-2.96 (m, 1H), 2.62 (t, J = 6.4 Hz, 2H), 0.88 (s, 9H), 0.15 (s, 6H).
화합물 116의 제조
화합물 115 (1.10 g, 1.74 mmol)와 화합물 111 (1.28 g, 1.91 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (12 mL)에 녹인 후 0 ℃에서 포테슘 카보네이트 (0.29 g, 2.08 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 20 시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽힌 뒤 증류수 (3 x 100 mL)로 세척하였다. 세척한 유기층을 소금물 (100 mL)로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 116 (1.34 g, 65%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1176.1.
화합물 117의 제조
화합물 116 (1.34 g, 1.14 mmol)을 에틸 아세테이트 (6 mL)와 에탄올 (6 mL)에 녹인 후 아연 가루 (Zinc dust, 1.49 g, 22.8 mmol)를 넣고 포름산 (0.86 mL, 22.8 mmol)을 에탄올 (6 mL)에 묽혀서 첨가하였다. 상온에서 3 시간 교반한 후, 에틸 아세테이트 (50 mL)로 희석하여 셀라이트로 여과하고 에틸 아세테이트 (100 mL)를 첨가하였다. 유기층을 증류수 (150 mL), 포화 탄산수소나트륨 수용액 (150 mL), 그리고 소금물 (100 mL)순으로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 117 (1.21 g, 93%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1146.5, 1/2[M+H]+ 573.4.
<실시예 34> 화합물 120의 제조
화합물 118의 제조
화합물 117 (700 mg, 0.61 mmol)과 트라이포스겐 (65 mg, 0.22 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (30 mL)에 녹인 후, -10 ℃에서 N-메틸이미다졸 (0.17 mL, 3.05 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 20 (376 mg, 0.73 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹이고 N-메틸이미다졸 (0.04 mL, 0.73 mmol)을 첨가한 후, 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하고 상온에서 17 시간 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (20 mL)으로 희석하고 증류수 (30 mL)로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 118 (0.72 g, 69%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1713.1, 1/2[M+H]+ 857.0.
화합물 119의 제조
화합물 118 (720 mg, 0.42 mmol)을 다이클로로메테인 (40 mL)에 녹인 후 소듐 2-에틸헥사노에이트 (105 mg, 0.63 mmol)와 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (24 mg, 0.02 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 119 (586 mg, 85%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1629.1, 1/2[M+H]+ 815.0.
화합물 120의 제조
화합물 119 (586 mg, 0.36 mmol)와 트라이포스겐 (38 mg, 0.13 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (15 mL)에 녹인 후, -10 ℃에서 N-메틸이미다졸 (0.1 mL, 1.80 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 23 (315 mg, 0.43 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (5 mL)에 녹이고 N-메틸이미다졸 (0.02 mL, 0.43 mmol)을 첨가한 후, 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하고 상온에서 17 시간 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (15 mL)으로 희석하고 증류수 (20 mL)로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 120 (516 mg, 60%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2385.5, 1/2[M+H]+ 1193.2.
<실시예 35> 화합물 122의 제조
화합물 121의 제조
화합물 120 (516 mg, 0.216 mmol)을 테트라하이드로퓨란/증류수 (3 mL/3 mL)에 녹이고 아세트산 (7 mL)을 첨가한 후 상온, 질소 대기 하에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 121 (383 mg, 82%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2157.9, [M+Na]+ 2179.1.
화합물 122의 제조
화합물 121 (383 mg, 0.18 mmol)를 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹인 후 데스-마틴 펄아이오디네인 (Dess-Martin periodinane, 173 mg, 0.41 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 4 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (30 mL)로 희석하고 포화 탄산수소나트륨 수용액 (30 mL)로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 122 (200 mg, 52%)를 수득하였다.
<실시예 36> 화합물 124의 제조
화합물 123의 제조
화합물 122 (200 mg, 0.093 mmol)를 메탄올 (6 mL)에 녹인 후 수산화 리튬 (35 mg, 0.835 mmol)을 증류수 (6 mL)에 녹인 용액을 -50 ℃에서 서서히 첨가하고 상온에서 3 시간 교반하였다. 반응 용액을 포름산으로 중화하고, 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제 및 동결 건조하여 화합물 123 (95 mg, 55%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1858.9, [M+Na]+ 1880.3.
* 화합물 124의 제조
화합물 123 (90 mg, 0.051 mmol)을 다이클로로메테인 (4 mL)으로 묽힌 후 트라이플루오로아세트산 (1 mL)을 0 ℃에서 첨가하고 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제하고 동결 건조하여 화합물 124를 흰색의 고체 (34 mg, 35.7%)로 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1758.9, 1/2[M+H]+ 879.9
<실시예 37> 화합물 130의 제조
화합물 125의 제조
트라이에틸렌 글리콜 (10.0 g, 66.6 mmol)을 다이클로로메테인 (60 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 산화은 (I) (23.1 g, 73.3 mmol)과 벤질 브로마이드 (8.7 mL, 99.9 mmol)를 차례로 첨가하였다. 반응 용액을 상온으로 올리고 20 시간 동안 교반한 후, 셀라이트로 여과하였다. 여과된 용액을 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 125 (11.2 g, 70%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.24-7.36 (m, 5H), 4.57 (s, 2H), 3.76-3.56 (m, 12H), 2.60 (br s, 1H).
화합물 126의 제조
0 ℃에서 테트라하이드로퓨란 (250 mL)에 수소화나트륨 (1.3 g, 31.9 mmol)을 첨가한 후 화합물 125 (5.9 g, 24.6 mmol)를 테트라하이드로퓨란 (50 mL)로 묽혀 반응 용액에 서서히 첨가한 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 0 ℃ 1 시간 동안 교반하였다. 그리고 t-부틸 브로모아세테이트 (4.7 mL, 24.6 mmol)를 첨가하고 상온에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 묽히고, 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (100 mL)로 닦아 준 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 126 (5.9 g, 56%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.25-7.36 (m, 5H), 4.57 (s, 2H), 4.02 (s, 2H), 3.76-3.62 (m, 12H), 1.47 (s, 9H).
화합물 127의 제조
화합물 126 (9.2 g, 25.9 mmol)을 에탄올 (200 mL)에 녹인 후 팔라듐/차콜 (10% w/w, 9.0 g)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온, 수소 대기 하에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과한 후 농축하여 화합물 127 (6.47 g, 94%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.03 (s, 2H), 3.76-3.67 (m, 12H), 2.59 (m, 1H), 1.47 (s, 9H).
화합물 128의 제조
-78 ℃에서 옥살릴 클로라이드 (3.5 mL, 41.2 mmol)를 다이클로로메테인 (80 mL)으로 묽인 후, 다이메틸설폭사이드 (3.4 mL, 48.4 mmol)를 다이클로로메테인 (10 mL)에 묽힌 용액을 서서히 첨가하였다. 10 분 후 화합물 127 (6.4 g, 24.2 mmol)을 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹인 후 -78 ℃, 질소 대기 하에서 반응 용액에 첨가하였다. 반응 용액을 30 분 동안 교반한 후 트라이에틸아민 (16.8 mL, 121.0 mmol)을 첨가하고, 상온에서 18 시간 동안 교반하였다. 증류수 (20 mL)를 첨가한 후 다이클로로메테인 (100 mL)으로 묽히고, 0.5 N 염산 수용액 (50 mL)과 포화 탄산수소 나트륨 수용액 (50 mL)으로 닦아주었다. 모인 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하고 여과한 후 농축하여 화합물 128 (6.2 g, 97%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 9.74 (s, 1H), 4.17 (s, 2H), 4.03 (s, 2H), 3.76-3.67 (m, 8H), 1.47 (s, 9H).
화합물 129의 제조
화합물 128 (3.0 g, 11.4 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (20 mL)에 녹인 후 2 M 2-메틸-2-부텐 테트라하이드로퓨란 용액 (28 mL, 57.2 mmol)을 첨가한 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 아염소산 나트륨 (3.2 g, 28.6 mmol)과 다이소듐 포스페이트(2.2 g, 16.0 mmol)를 증류수 (40 mL)에 녹인 용액과 과산화수소수 (30 wt. % 수용액, 18.0 g, 160.1 mmol)를 차례로 첨가하였다. 반응 용액을 50 ℃에서 2 시간 동안 교반하고 1 N 염산 수용액으로 pH 3 까지 산성화시킨 후 에틸 아세테이트 (200 mL)로 묽히고, 소금물 (100 mL)로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 다이아이소프로필에틸아민으로 염기화 시킨 후 농축하였다. 그리고 테트라하이드로퓨란 (40 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 아이오딘화 메틸 (2.1 mL, 34.2 mmol)과 포테슘 카보네이트 (1.6 g, 11.4 mmol)를 차례로 첨가하고 상온에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (200 mL)로 묽히고, 증류수 (100 mL)로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 129 (1.1 g, 33%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.17 (s, 2H), 4.02 (s, 2H), 3.76-3.62 (m, 11H), 1.47 (s, 9H).
화합물 130의 제조
화합물 129 (1.1 g, 3.8 mmol)를 다이클로로메테인 (5 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 트라이플루오로아세트산 (5 mL, 65.3 mmol)과 아니솔 (4.1 mL, 37.6 mmol)을 차례로 첨가하였다. 반응 용액을 상온에서 4 시간 동안 교반하고 농축하여 화합물 130 (867 mg, 97%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.48 (m, 1H), 4.18 (s, 2H), 4.16 (s, 2H), 3.77-3.73 (m, 11H).
<실시예 38> 화합물 137의 제조
화합물 131의 제조
5-나이트로벤젠-1,3-다이카복실산 (5 g, 23.7 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (30 mL)에 녹인 후 보레인 (1 M 테트라하이드로퓨란 용액, 94.8 mL, 94.8 mmol)을 -20 ℃, 질소 대기 하에서 서서히 첨가하였다. 반응 용액을 상온으로 서서히 올리면서 48 시간 동안 교반한 후, 0 ℃로 낮추고 메탄올 (30 mL)을 반응 용액에 서서히 첨가하였다. 반응 용액을 농축한 후 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽히고, 증류수 (100 mL)로 닦아 주었다. 모인 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조한 후 여과 및 농축하여 화합물 131 (4.6 g)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.16 (s, 2H), 7.73 (s, 1H), 4.84 (d, J = 4.0 Hz, 4H), 1.91 (t, J = 5.6Hz, 2H).
화합물 132의 제조
화합물 131 (4.6 g)을 다이클로로메테인 (150 mL)에 녹인 후 트라이에틸아민 (18.2 mL, 130.4 mmol)과 메테인설포닐 클로라이드 (7.7 mL, 99.5 mmol)을 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하였다. 상온에서 반응 용액을 16 시간 교반한 후 다이클로로메테인 (100 mL)을 첨가하였다. 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액 (200 mL)으로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 132 (3.06 g, 2 steps 59%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.23 (s, 2H), 7.77 (s, 1H), 4.66 (s, 4H).
화합물 133의 제조
화합물 132 (500 mg, 2.27 mmol)를 N,N-다이메틸폼아마이드 (20 mL)에 녹인 후 0 ℃에서 포테슘 아이오다이드 (188.4 mg, 1.14 mmol), 화합물 16 (2.8 g, 5.9 mmol), 포테슘 카보네이트 (940 mg, 6.8 mmol) 순으로 첨가하고 질소 대기 하에서 16 시간 동안 40 ℃에서 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (30 mL)를 가한 후 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (50 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 133 (1.72 g, 69%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.80 (br s, 1H), 8.34 (s, 2H), 7.93-7.90 (m, 3H), 6.85 (s, 2H), 5.94-5.93 (m, 2H), 5.34 (d, J = 17.6 Hz, 2H), 5.27-5.22 (m, 6H), 4.99-4.91 (m, 4H), 4.61 (s, 4H), 4.21-4.17 (m, 2H), 4.03-3.85 (m, 8H), 3.64 (m, 2H), 2.70 (s, 4H), 0.88 (s, 18H), 0.03 (s, 12H).
화합물 134의 제조
화합물 133 (200 mg, 0.182 mmol)을 에탄올 (5 mL)에 녹인 후 아연 가루 (Zinc dust, 475 mg, 7.268 mmol)와 포름산 (0.27 mL, 7.268 mmol)을 첨가하였다. 상온에서 반응 용액을 1 시간 교반한 후, 셀라이트로 여과하고 에틸 아세테이트 (20 mL)를 첨가하였다. 유기층을 포화 탄산수소나트륨 수용액 (20 mL), 그리고 소금물 (20 mL)순으로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하여 화합물 134 (200 mg, 99%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1070.8, [M+Na]+ 1092.9.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.80 (br s, 1H), 7.89 (s, 2H), 6.93 (s, 1H), 6.82-6.78 (m, 4H), 5.95-5.93 (m, 2H), 5.36-5.09 (m, 8H), 4.98-4.90 (m, 4H), 4.62 (m, 4H), 4.20-4.03 (m, 5H), 3.83-3.64 (m, 11H), 2.69 (s, 4H), 0.87 (s, 18H), 0.23 (s, 9H).
화합물 135의 제조
화합물 134 (1.2 g, 1.1 mmol)와 화합물 130 (386 mg, 1.6 mmol)을 다이메틸폼아마이드 (15 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 N,N,N’,N’-테트라메틸-O-(1H-벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트 (779 mg, 2.0 mmol)와 다이아이소프로필에틸아민 (0.56 mL, 3.3 mmol)을 차례로 첨가하고 상온에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽히고, 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (50 mL), 포화 탄산수소나트륨 수용액 (50 mL), 증류수 (50 mL) 순서로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 135 (1.1 g, 78%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1289.7, 1/2[M+H]+ 645.1.
화합물 136의 제조
화합물 135 (1.1g, 0.85 mmol)를 다이클로로메테인 (20 mL)에 녹인 후 피롤리딘 (0.27 mL, 3.34 mmol)과 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (49 mg, 0.043 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 30 분 동안 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (30 mL)를 가한 후 다이클로로메테인 (2 x 50 mL)으로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (50 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 136 (937 mg, 97%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1112.1, 1/2[M+H]+ 561.1.
화합물 137의 제조
화합물 136 (937 mg, 0.83 mmol)을 다이클로로메테인 (40 mL)에 녹인 후 피리딘 (0.14 mL, 1.67 mmol)과 알릴 클로로포메이트 (0.080 mL, 0.75 mmol)를 -78 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하고 반응 용액을 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (50 mL)를 가한 후 다이클로로메테인 (2 x 50 mL)으로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (50 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 137 (465 mg, 46%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1205.3, 1/2[M+H]+ 603.0.
<실시예 39> 화합물 140의 제조
화합물 138의 제조
화합물 137 (465 mg, 0.38 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (20 mL)에 녹인 후 0 ℃에서 트라이포스겐 (40 mg, 0.14 mmol)과 N-메틸이미다졸 (0.12 mL, 1.54 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 20 (251 mg, 0.46 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (5 mL)에 녹이고 N-메틸이미다졸 (0.03 mL, 0.38 mmol)을 첨가한 후 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하였다. 17 시간 동안 교반 후 반응 용액을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 희석한 후 소금물 (20 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 138 (261 mg, 38%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1772.3, 1/2[M+H]+ 886.7.
화합물 139의 제조
화합물 138 (261 mg, 0.147 mmol)을 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 피롤리딘 (0.018 mL, 0.221 mmol)과 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (5 mg, 0.0044 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 30 분간 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (20 mL)를 가한 후 다이클로로메테인 (2 x 20 mL)으로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (20 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 139 (198 mg, 80%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1688.5, 1/2[M+H]+ 844.6.
화합물 140의 제조
화합물 139 (198 mg, 0.117 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (1.5 mL)에 녹인 후 0 ℃에서 트라이포스겐 (12.5 mg, 0.042 mmol)과 N-메틸이미다졸 (0.037 mL, 0.469 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 23 (102.9 mg, 0.141 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (1.5 mL)에 녹이고 N-메틸이미다졸 (0.009 mL, 0.117 mmol)을 첨가한 후 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하였다. 상온에서 반응 용액을 6 시간 교반한 후, 에틸 아세테이트 (20 mL)를 첨가하였다. 유기층을 증류수 (20 mL)로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 140 (227 mg)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2444.6, 1/2[M+H]+ 1222.8.
<실시예 40> 화합물 144의 제조
화합물 141의 제조
화합물 140 (227 mg)을 테트라하이드로퓨란/증류수 (1.0 mL/1.0 mL)에 녹이고 아세트산 (2 mL)를 첨가한 후 상온, 질소 대기 하에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (20 mL)를 가한 후 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (30 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 141 (100 mg)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2216.2, 1/2[M+H]+ 1108.7.
화합물 142의 제조
화합물 141 (100 mg)을 다이클로로메테인 (1.5 mL)에 녹인 후 데스-마틴 펄아이오디네인 (Dess-Martin periodinane, 45.9 mg, 0.108 mmol)를 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 포화 탄산수소나트륨 수용액 (20 mL)를 가한 후 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (30 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 142 (64 mg)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2212.5, 1/2[M+H]+ 1106.7.
화합물 143의 제조
화합물 142 (64 mg, 0.029 mmol)를 메탄올/테트라하이드로퓨란 (1.4 mL/1.4 mL)에 녹인 후 수산화 리튬 (7.3 mg, 0.173 mmol)을 증류수 (1.4 mL)에 녹인 용액을 -50 ℃에서 서서히 첨가하였다. 반응 온도를 서서히 0 ℃로 올리면서 4 시간 동안 교반한 후 반응 용액을 아세트산으로 중화하고, 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제 및 동결 건조하여 화합물 143 (20 mg)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1917.5, 1/2[M+H]+ 959.6.
화합물 144의 제조
화합물 143 (20 mg, 0.010 mmol)을 다이클로로메테인 (0.45 mL)에 녹인 후 트라이플루오로아세트산 (0.05 mL)을 0 ℃에 서서히 첨가하였다. 1 시간 동안 교반한 후 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제 및 동결 건조하여 화합물 144 (9.2 mg, 46%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1817.9, 1/2[M+H]+ 909.5.
<실시예 41> 화합물 148의 제조
화합물 146의 제조
화합물 22 (677 mg, 0.398 mmol)를 건조한 테트라하이드로퓨란 (4 mL)에 녹인 후 0 ℃에서 트라이포스겐 (42.5 mg, 0.143 mmol)과 N-메틸이미다졸 (0.13 mL, 1.59 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 145 (305.9 mg, 0.478 mmol, 화합물 145는 대한민국 공개특허 제10-2018-0110645호에 기술된 방법으로 제조하였다)를 건조한 테트라하이드로퓨란 (4 mL)에 녹이고 N-메틸이미다졸 (0.03 mL, 0.398 mmol)을 첨가한 후 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하였다. 상온에서 반응 용액을 16 시간 교반한 후, 에틸 아세테이트 (30 mL)를 첨가하였다. 유기층을 증류수 (20 mL)로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 146 (780 mg)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2342.1, 1/2[M+H]+ 1171.4
화합물 147의 제조
화합물 146 (780 mg)을 테트라하이드로퓨란/증류수 (3.5 mL/3.5 mL)에 녹이고 아세트산 (7 mL)를 첨가한 후 상온, 질소 대기 하에서 6 시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (20 mL)를 가한 후 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (30 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 147 (393 mg, 3 steps 47%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2113.5, 1/2[M+H]+ 1057.2.
화합물 148의 제조
화합물 147 (393 mg)을 다이클로로메테인 (6 mL)에 녹인 후 데스-마틴 펄아이오디네인 (Dess-Martin periodinane, 174 mg, 0.409 mmol)를 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 6 시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 포화 탄산수소나트륨 수용액 (20 mL)를 가한 후 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (30 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 148 (310 mg)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2109.7, 1/2[M+H]+ 1055.3.
<실시예 42> 화합물 151의 제조
화합물 149의 제조
화합물 148 (310 mg)을 다이클로로메테인 (4.75 mL)에 녹인 후 트라이플루오로아세트산 (0.5 mL)을 0 ℃에 서서히 첨가하였다. 3 시간 동안 교반한 후 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제 및 동결 건조하여 화합물 149 (380 mg)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2009.3, 1/2[M+H]+ 1005.1.
화합물 150의 제조
화합물 149 (160 mg)와 DBCO-PEG4-acid (40.6 mg, 0.074 mmol)를 N,N-다이메틸폼아마이드 (3 mL)에 녹인 후 (1-[비스(다이메틸아미노)메틸렌]-1H-1,2,3-트리아졸[4,5-b]피리디늄 헥사플루오로포스페이트 (36.4 mg, 0.096 mmol)와 다이아이소프로필에틸아민 (0.033 mL, 0.191 mmol)을 차례로 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하였다. 반응 용액을 16 시간 동안 상온 교반한 후 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (20 mL)을 반응 용액에 가한 후 에틸 아세테이트 (2 x 20 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (30 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 150 (98 mg, 2 steps 52%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+Na]+ 2565.0, 1/2[M+H]+ 1272.4.
화합물 151의 제조
화합물 150 (98 mg, 0.0385 mmol)을 메탄올/테트라하이드로퓨란 (0.7 mL/2.9 mL)에 녹인 후 수산화 리튬 (16.15 mg, 0.385 mmol)을 증류수 (1.8 mL)에 녹인 용액을 -50 ℃에서 서서히 첨가하였다. 반응 온도를 서서히 0 ℃로 올리면서 2 시간 동안 교반한 후 반응 용액을 아세트산으로 중화하고, 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제 및 동결 건조하여 화합물 151 (13.2 mg, 15%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2249.1, 1/2[M+H]+ 1125.3.
<실시예 43> 화합물 156의 제조
화합물 153의 제조
화합물 152 (4.9 g, 8.46 mmol, 화합물 152는 ACS. Med. Chem. 2016, 7, 11, 983-987에 기술된 방법으로 제조하였다)를 N,N-다이메틸폼아마이드/증류수 (98 mL/6 mL)에 녹인 후 소듐 아세테이트 (694 mg, 8.46 mmol)를 첨가하고, 반응 용액을 70 ℃, 질소 대기 하에서 교반하였다. 3 시간 후, 반응 온도를 상온으로 내리고, 에틸 아세테이트 (100 mL)를 첨가하였다. 유기층을 증류수 (70 mL), 그리고 소금물 (70 mL)순으로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 153 (3.52 g, 98%)을 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.74 (s, 1H), 6.79 (s, 1H), 6.16 (br s, 1H), 5.54 (s, 1H), 4.65 (m, 1H), 3.98 (s, 3H), 2.84-2.71 (m, 1H), 2.60-2.45 (m, 1H), 1.62 (s, 3H), 1.58 (s, 1H), 0.89 (s, 9H), 0.10 (s, 6H).
화합물 154의 제조
화합물 153 (3.5 g, 8.49 mmol)과 화합물 10 (1.9 g, 3.69 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (20 mL)에 녹인 후 0 ℃에서 포테슘 카보네이트 (2.6 g, 18.4 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 20 시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (30 mL)를 가한 후 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (50 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 154 (3.33 g, 78%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.75 (d, 2H), 7.13 (s, 1H), 7.01 (s, 2H), 6.80 (s, 2H), 5.55 (s, 2H), 5.18 (s, 4H), 4.65 (m, 2H), 4.16 (s, 4H), 3.96 (s, 7H), 3.87 (t, J = 4.8 Hz, 3H), 3.71-3.63 (m, 13H), 2.86-2.66 (m, 2H), 2.58-2.44 (m, 2H), 1.59 (s, 6H) 0.89 (s, 18H), 0.10 (s, 12H).
화합물 155의 제조
화합물 154 (3.3 g, 2.82 mmol)를 에탄올 (47 mL)에 녹인 후 아연 가루 (Zinc dust, 7.2 g, 113.06 mmol)과 포름산 (5% in EtOH, 3 mL)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 포화 탄산수소 나트륨 용액 (50 mL)을 가한 후 에틸아세테이트 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (50 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 155 (2.15 g, 70%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.02 (s, 1H), 6.92 (s, 2H), 6.75 (s, 2H), 6.25-6.15 (m, 4H), 5.08 (s, 4H), 4.71-4.55 (m, 2H), 4.29 (s, 4H), 4.18-3.62 (m, 23H), 2.78-2.64 (m, 2H), 2.58-2.46 (m, 2H), 1.62 (2, 6H) 0.87 (s, 18H), 0.11-0.01 (m, 12H).
화합물 156의 제조
화합물 155 (2.2 g, 1.99 mmol)를 다이클로로메테인 (250 mL)에 녹인 후 피리딘 (0.4 mL, 4.97 mmol)과 알릴 클로로포메이트 (0.19 mL, 1.79 mmol)를 -78 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하고 반응 용액을 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (100 mL)를 가한 후 다이클로로메테인 (2 x 100 mL)으로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (100 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 156 (730 mg, 35%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.76 (br s, 1H), 7.91 (br s, 1H), 7.09 (s, 1H), 6.97 (s, 1H), 6.94 (s, 1H), 6.80 (s, 1H), 6.75 (s, 1H), 6.26-6.10 (m, 3H), 5.99-5.88 (m, 1H), 5.33 (d, J = 17.2 Hz, 1H), 5.22 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 5.13 (s, 2H), 5.10 (s, 2H), 4.72-4.56 (m, 4H), 4.29 (br s, 2H), 4.21-4.09 (m, 5H), 4.01-3.91 (m, 3H), 3.90-3.75 (m, 11H), 3.71-3.63 (m, 12H), 2.78-2.66 (m, 2H), 2.61-2.48 (m, 2H), 1.60 (s, 6H) 0.87 (s, 18H), 0.11-0.01 (m, 12H).
<실시예 44> 화합물 163의 제조
화합물 157의 제조
2-(트라이메틸실릴)에탄올 (1 g, 8.45 mmol)과 비스(4-나이트로페닐)카보네이트 (3.1 g, 10.14 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (20 mL)에 녹인 후 0 ℃에서 N,N-다이이소프로필에틸아민 (2.9 mL, 16.9 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 20 시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (30 mL)를 가한 후 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (50 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 157 (2.27g, 95%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.27 (d, 2H), 7.37 (d, 2H), 4.39 (t, 2H), 1.15 (t, 2H), 0.08 (s, 9H).
화합물 159의 제조
화합물 158 (5.0 g, 17.2 mmol, 화합물 158은 대한민국 공개특허 제10-2018-0078329호에 기술된 방법으로 제조하였다)을 다이클로로메탄 (20 mL)에 녹인 후 염산 (4 M 1,4-다이옥세인 용액, 8.61 mL, 34.4 mmol)를 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하였다. 2 시간 교반 후 감압 농축하여 화합물 159 (3.0 g, 76%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 5.48 (br s, 2H), 3.82 (s, 2H), 3.64 (s, 8H), 3.36 (s, 2H).
화합물 160의 제조
화합물 159 (1.1 g, 4.85 mmol)를 N,N-다이메틸폼아마이드 (15 mL)에 녹인 후 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (2.2 mL, 12.1 mmol)과 화합물 157 (1.7 g, 5.82 mmol)을 첨가한 후 상온에서 반응 용액을 6 시간 교반한 후 에틸 아세테이트 (30 mL)를 첨가하였다. 유기층을 증류수 (15 mL), 그리고 소금물 (15 mL)순으로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 160 (450 mg, 27%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 7.71 (s, 1H), 4.30-4.21 (m, 2H), 4.03 (s, 1H), 3.79-3.61 (m, 8H), 3.40 (s, 2H), 1.68 (s, 1H), 1.03-0.95 (m, 2H), 0.03 (s, 9H).
화합물 161의 제조
화합물 160 (450 mg, 1.34 mmol)을 메탄올 (20 mL)에 녹인 후 팔라듐/차콜 (10 % w/w, 100 mg)을 첨가하였다. 반응 용액을 상온, 수소 대기 하에서 18 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 셀라이트로 여과한 후 농축하여 화합물 161 (371 mg, 89%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 4.30-4.18 (m, 2H), 4.06-3.98 (m, 2H), 3.78-3.59 (m, 8H), 3.58-3.52 (m, 2H), 2.87 (t, 2H), 1.02 (t, 2H), 0.03 (s, 9H).
화합물 163의 제조
화합물 162 (642 mg, 1.32 mmol, 화합물 162는 대한민국 공개특허 제10-2018-0078329호에 기술된 방법으로 제조하였다)와 화합물 161 (371 mg, 1.20 mmol)을 N,N-다이메틸폼아마이드 (10 mL)에 녹인 후 N,N,N’,N’-테트라메틸-O-(1H-벤조트리아졸-1-일)우로늄 헥사플루오로포스페이트 (1.2 g, 3.02 mmol)과 N,N-다이아이소프로필에틸아민 (0.8 mL, 4.8 mmol)을 0 oC,질소 대기하에서 첨가하였다. 반응 용액을 14 시간 동안 상온 교반 후, 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (50 mL)를 반응 용액에 넣고 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (50 mL)로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 163 (621 mg, 67%)을 수득하였다
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.12 (s, 1H), 7.95 (s, 1H), 7.50 (t, 1H), 7.45 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.99 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 5.42-5.20 (m, 4H), 4.62 (s, 2H), 4.31-4.14 (m, 3H), 3.96 (s, 2H), 3.62-3.48 (m, 15H), 2.41 (br s, 1H), 2.03 (s, 9H), 0.98 (t, 2H), 0.01 (s, 9H).
<실시예 45> 화합물 166의 제조
화합물 164의 제조
화합물 156 (720 mg, 0.61 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (15 mL)에 녹인 후 -10 ℃에서 트라이포스겐 (65 mg, 0.22 mmol)과 N-메틸이미다졸 (0.19 mL, 2.42 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 20 (360 mg, 0.67 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (15 mL)에 녹이고 N-메틸이미다졸 (0.05 mL, 0.6 mmol)을 첨가한 후 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하였다. 1 시간 후 반응 용액을 가열 환류 시키고 12 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 희석한 후 소금물 (20 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 164 (508 mg, 48%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.87-8.62 (m, 2H), 8.02 (m, 1H), 7.96-7.84 (m, 1H), 7.49-7.41 (m, 2H), 7.14 (s, 1H), 7.06-6.94 (m, 3H), 6.78 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 6.19 (br s, 2H), 5.98-5.84 (m, 1H), 5.41-5.02 (m, 10H), 4.69-4.54 (m, 4H), 4.21-4.06 (m, 5H), 4.02-3.88 (m, 2H), 3.87-3.74 (m, 9H), 3.72-3.62 (m, 14H), 3.59-3.52 (m, 2H), 3.39 (s, 2H), 2.77-2.64 (m, 2H), 2.58-2.48 (m, 2H), 2.03 (s, 9H), 1.66 (s, 6H), 0.86 (s, 18H), 0.09-0.01 (m, 12H).
화합물 165의 제조
화합물 164 (495 mg, 0.28 mmol)를 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹인 후 피롤리딘 (0.070 mL, 0.84 mmol)과 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (8 mg, 0.007 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (20 mL)를 가한 후 다이클로로메테인 (2 x 20 mL)으로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (20 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 165 (372 mg, 79%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.91-8.79 (m, 1H), 7.93 (br s, 1H), 7.59-7.34 (m, 2H), 7.10 (s, 1H), 7.03 (s, 1H), 6.97 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 6.78 (d, J = 12.8 Hz, 2H), 6.22 (d, J = 14.0 Hz, 2H), 5.46-5.26 (m, 3H), 5.12 (d, J = 12.8 Hz, 6H), 4.64 (br s, 2H), 4.32 (br, 2H), 4.24-4.20 (m, 1H), 4.16 (s, 5H), 4.04-3.89 (m, 3H), 3.87-3.64 (m, 26H), 3.57 (s, 3H), 3.31 (s, 2H), 3.23 (s, 1H), 2.78-2.64 (m, 2H), 2.62-2.48 (m, 2H), 2.05 (s, 9H), 1.68 (s, 6H), 0.88 (s, 18H), 0.04 (s, 12H).
화합물 166의 제조
화합물 165 (365 mg, 0.22 mmol)을 건조한 테트라하이드로퓨란 (10 mL)에 녹인 후 -10 ℃에서 트라이포스겐 (23 mg, 0.08 mmol)과 N-메틸이미다졸 (0.07 mL, 0.87 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 163 (200 mg, 0.26 mmol)를 건조한 테트라하이드로퓨란 (10 mL)에 녹이고 N-메틸이미다졸 (0.04 mL, 0.44 mmol)을 첨가한 후 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하였다. 1 시간 후 반응 용액을 가열 환류 시키고 16 시간동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (30 mL)로 희석한 후 소금물 (20 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 166 (513 mg)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.84 (br s, 1H), 8.08-7.99 (m, 2H), 7.98-7.88 (m, 2H), 7.71-7.62 (m, 1H), 7.58-7.51 (m, 1H), 7.49-7.41 (m, 6H), 7.09-6.98 (m, 4H), 6.79 (s, 2H), 6.20 (br s, 2H), 5.42-5.24 (m, 8H), 5.19-5.04 (m, 6H), 4.66 (s, 4H), 4.24-4.16 (m, 4H), 4.04-3.92 (m, 4H), 3.88-3.76 (m, 1H), 3.76-3.64 (m, 3H), 3.55 (s, 3H), 3.41 (s, 2H), 3.31 (s, 1H), 2.78-2.64 (m, 2H), 2.59-2.49 (m, 2H), 2.04 (s, 18H), 1.67 (s, 6H), 1.00 (t, J = 8.4 Hz, 2H), 0.87 (s, 18H), 0.02 (s, 21H).
<실시예 46> 화합물 170의 제조
화합물 167의 제조
화합물 166 (513 mg, 0.21 mmol)을 테트라하이드로퓨란/증류수 (4 mL/4 mL)에 녹이고 아세트산 (8 mL)를 첨가한 후 상온, 질소 대기 하에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 167 (172 mg)을 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.44 (br s, 1H), 8.14-7.96 (m, 2H), 7.72-7.49 (m, 2H), 7.48-7.32 (m, 2H), 7.09 (s, 1H), 7.08-6.84 (m, 4H), 6.80 (s, 2H), 6.04 (s, 2H), 5.44-5.24 (m, 5H), 5.23-4.98 (m, 6H), 4.70 (s, 2H), 4.28-4.06 (m, 7H), 4.01 (S, 1H), 3.90-3.76 (m, 9H), 3.76-3.61 (m, 18H), 3.56 (s, 3H), 3.41 (s, 2H), 3.31 (s, 1H), 2.90-2.74 (m, 2H), 2.36-2.22 (m, 2H), 2.14-2.08 (m, 3H), 2.04 (s, 18H), 1.64 (s, 6H). EI-MS m/z : [M+H]+ 2247.3, 1/2[M+H]+ 1124.2.
화합물 168의 제조
화합물 167 (165 mg, 0.056 mmol)을 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹인 후 데스-마틴 펄아이오디네인 (Dess-Martin periodinane, 52 mg, 0.12 mmol)를 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 168 (128 mg, 78%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 2243.3, 1/2[M+H]+ 1121.5.
화합물 169의 제조
화합물 168 (120 mg, 0.053 mmol)을 메탄올/테트라하이드로퓨란 (1 mL/3 mL)에 녹인 후 수산화 리튬 (22 mg, 0.54 mmol)을 증류수 (1 mL)에 녹인 용액을 -78 ℃에서 서서히 첨가하였다. 반응 온도를 서서히 0 ℃로 올리면서 4 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 아세트산으로 중화한 후 반응 용액을 감압 농축하고 HPLC로 정제 및 동결건조하여 화합물 169 (20 mg, 20%)를 흰색의 고체로 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1950.7, 1/2[M+H]+ 975.2.
화합물 170의 제조
화합물 169 (19 mg, 0.01 mmol)를 테트라하이드로퓨란 (2 mL)로 묽힌 후 테트라부틸암모늄플루라이드 (0.28 mL, 0.29 mmol)를 실온에서 첨가하고 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 레진 정제하고, HPLC로 정제하고 동결건조하여 화합물 170을 흰색의 고체 (2.3 mg)로 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1804.9, 1/2[M+H]+ 903.1.
<실시예 47> 화합물 174의 제조
화합물 171의 제조
화합물 21 (500 mg, 0.28 mmol)을 테트라하이드로퓨란/증류수 (3 mL/3 mL)에 녹이고 아세트산 (6 mL)를 첨가한 후 상온, 질소 대기 하에서 6 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 171 (284 mg, 65%)을 수득하였다. 1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 8.43 (br s, 2H), 8.05 (s, 1H), 7.52 (s, 1H), 7.40 (s, 2H), 7.06-6.98 (m, 1H), 6.95 (s, 1H), 6.89 (s, 2H), 6.94-6.74 (m, 2H), 5.48-5.25 (m, 5H), 5.24-5.05 (m, 7H), 5.01-4.75 (m, 4H), 4.78-4.46 (m, 4H), 4.17 (s, 7H), 3.90-3.86 (m, 3H), 3.84-3.76 (m, 6H), 3.73-3.65 (m, 16H), 3.62-3.54 (m, 3H), 3.41 (s, 3H), 2.90-2.74 (m, 2H), 2.36-2.22 (m, 2H), 2.04 (s, 3H), 2.04 (s, 18H), 1.64 (s, 6H). EI-MS m/z : [M+H]+ 2247.3, 1/2[M+H]+ 1124.2.
화합물 172의 제조
화합물 171 (280 mg, 0.056 mmol)을 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹인 후 데스-마틴 펄아이오디네인 (Dess-Martin periodinane, 52 mg, 0.12 mmol)를 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 24 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 172 (266 mg, 78%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1527.53, 1/2[M+H]+ 1549.36.
화합물 173의 제조
화합물 172 (226 mg, 0.17 mmol)를 메탄올/테트라하이드로퓨란 (2 mL/6 mL)에 녹인 후 수산화 리튬 (43 mg, 1.04 mmol)을 증류수 (6 mL)에 녹인 용액을 -78 ℃에서 서서히 첨가하였다. 반응 온도를 서서히 0 ℃로 올리면서 4 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 아세트산으로 중화한 후 반응 용액을 감압 농축하고 HPLC로 정제 및 동결건조하여 화합물 173 (151 mg, 63%)을 흰색의 고체로 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1372.84, 1/2[M+H]+ 686.83.
* 화합물 174의 제조
화합물 173 (100 mg, 0.07 mmol)을 다이클로로메테인 (4 mL)에 녹인 후 피롤리딘 (0.010 mL, 0.09 mmol)과 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (2 mg, 0.004 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (20 mL)를 가한 후 다이클로로메테인 (2 x 20 mL)으로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (20 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 174 (46.9 mg, 53%)를 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1270.5, 1/2[M+H]+ 635.8.
<실시예 48> 화합물 176의 제조
화합물 175의 제조
화합물 84 (2.0 g, 3.9 mmol)를 다이클로로메테인 (30 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기하에서 N,N’-비스-tert-부톡시카보닐-1H-피라졸-1-카복시아미딘 (1.3 g, 4.2 mmol)과　트리에틸아민(0.7 mL, 4.6 mmol)을 첨가하였다. 반응 용액을 0 ℃ 3 시간 동안 교반 후, 반응 용액 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 175 (2.5 g, 88%)를 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0.09 (s, 12H), 0.94 (s, 18H), 1.47 (s, 9H), 1.50 (s, 9H), 3.62 (m, 4H), 3.67 (m, 2H), 3.74 (m, 2H), 3.88 (t, 2H), 4.13 (t, 2H), 4.69 (s, 4H), 6.77 (s, 2H), 6.86 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 11.48 (s, 1H).
화합물 176의 제조
화합물 175 (2.2 g, 2.9 mmol)를 테트라하이드로퓨란 (30 mL)에 녹인 후 0 ℃, 질소 대기 하에서 테트라뷰틸암모늄 플루오라이드 (1 M 테트라하이드로퓨란 용액, 7.4 mL, 7.4 mmol)를 첨가하고 0 ℃에서 2 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 에틸 아세테이트 (100 mL)로 묽히고, 포화 암모늄 클로라이드 수용액 (50 mL), 증류수 (50 mL) 순서로 닦아 주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 감압 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 176 (1.5 g, 93%)을 수득하였다.
1H-NMR (400 MHz, CDCl3) δ 1.48 (s, 9H), 1.50 (s, 9H), 3.60 (m, 4H), 3.69 (m, 2H), 3.75 (m, 2H), 3.87 (t, 2H), 4.16 (t, 2H), 4.65 (sd, 4H), 6.87 (s, 2H), 6.92 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 11.41 (s, 1H).
<실시예 49> 화합물 179의 제조
화합물 177의 제조
화합물 176 (800 mg, 1.51 mmol)을 다이클로로메테인 (20 mL), N,N-다이메틸폼아마이드 (7 mL)에 녹인 후 0 ℃에서 화합물 57 (1.4 g, 3.33 mmol), 트라이페닐포스핀 (994 mg, 3.79 mmol), 다이아이소프로필 아조다이카르복실레이트 (0.74 mL, 3.79 mmol) 순으로 첨가하고 질소 대기 하에서 3 시간 동안 상온에서 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (30 mL)를 가한 후 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (50 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 177 (1.7 g, 84%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1336.4.
화합물 178의 제조
화합물 177 (1.7 g, 1.27 mmol)을 에틸 아세테이트 (12 mL)와 에탄올 (12 mL)에 녹인 후 아연 가루 (Zinc dust, 5.03 g, 76.9 mmol)를 넣고 포름산 (2.9 mL, 76.9 mmol)을 에탄올 (12 mL)에 묽혀서 첨가하였다. 상온에서 4 시간 교반한 후, 에틸 아세테이트 (30 mL)로 희석하여 셀라이트로 여과하고 에틸 아세테이트 (100 mL)를 첨가하였다. 유기층을 증류수 (150 mL), 포화 탄산수소나트륨 수용액 (150 mL), 그리고 소금물 (100 mL)순으로 닦은 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 후 농축하고 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 178 (1.21 g, 74%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1276.4.
화합물 179의 제조
화합물 178 (1.2 g, 0.94 mmol)을 다이클로로메테인 (50 mL)에 녹인 후 피리딘 (0.22 mL, 2.82 mmol)과 알릴 클로로포메이트 (0.1 mL, 0.94 mmol)를 -78 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하고 반응 용액을 3 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 179 (312 mg, 23%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1360.5.
<실시예 50> 화합물 182의 제조
화합물 180의 제조
화합물 179 (312 mg, 0.23 mmol)와 트라이포스겐 (24 mg, 0.082 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (15 mL)에 녹인 후, -10 ℃에서 N-메틸이미다졸 (91 μL, 1.15 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 20 (148 mg, 0.27 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹이고, N-메틸이미다졸 (18 μL, 0.23 mmol)을 첨가한 후 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하고 상온에서 17 시간 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (20 mL)로 희석하고 증류수 (30 mL)로 세척한 후 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 180 (315 mg, 69%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1927.8, 1/2[M+H]+ 964.5
화합물 181의 제조
화합물 180 (315 mg, 0.16 mmol)을 다이클로로메테인 (3 mL)에 녹인 후 피롤리딘 (40 μL, 0.49 mmol)과 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (9 mg, 0.008 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 30 분간 교반하였다. 반응 용액에 증류수 (10 mL)를 가한 후 다이클로로메테인 (2 x 10 mL)으로 추출하였다. 모인 유기층을 소금물 (10 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 181 (221 mg, 80%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1843.8, 1/2[M+H]+ 922.4.
화합물 182의 제조
화합물 181 (221 mg, 0.12 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (12 mL)에 녹인 후 0 ℃에서 트라이포스겐 (12 mg, 0.043 mmol)과 N-메틸이미다졸 (38 μL, 0.48 mmol)을 첨가하고 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 화합물 23 (105 mg, 0.14 mmol)을 건조한 다이클로로메테인 (5 mL)에 녹이고 N-메틸이미다졸 (9.5 μL, 0.12 mmol)을 첨가한 후 이 용액을 반응 용액에 서서히 첨가하였다. 17 시간 동안 교반 후 반응 용액을 다이클로로메테인 (15 mL)로 희석한 후 소금물 (20 mL)로 닦아주고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 182 (131 mg, 42%)를 수득하였다. EI-MS m/z : 1/2[M+H]+ 1301.1.
<실시예 51> 화합물 183의 제조
화합물 183은 화합물 182로부터 화합물 97의 합성과 유사한 방법으로 제조하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 1788.5, 1/2[M+H]+ 895.3.
<실시예 52> 화합물 188의 제조
화합물 184의 제조
화합물 117 (250 mg, 0.218 mmol)을 다이클로로메테인 (20 mL)에 녹인 후 피리딘 (0.035 mL, 0.436 mmol)과 알릴 클로로포메이트 (0.026 mL, 0.24 mmol)를 0 ℃, 질소 대기 하에서 첨가하고 반응 용액을 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (30 mL)에 희석하고 증류수 (40 mL)로 세척한 후, 유기층을 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축하여 화합물 184 (crude 273 mg, quant.)를 수득하였다.
화합물 185의 제조
화합물 184 (crude 273 mg, 0.218 mmol)를 테트라하이드로퓨란/증류수 (3 mL/3 mL)에 녹이고 아세트산 (7 mL)를 첨가한 후 상온, 질소 대기 하에서 16 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 185 (210 mg, 96%)을 수득하였다.
화합물 186의 제조
화합물 185 (210 mg, 0.209 mmol)를 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹인 후 데스-마틴 펄아이오디네인 (Dess-Martin periodinane, 205 mg, 0.48 mmol)를 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 4 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 다이클로로메테인 (30 mL)로 희석하고 포화 탄산수소나트륨 수용액 (30 mL)로 세척하고 무수 황산 나트륨으로 건조하였다. 여과 및 감압 농축한 후 컬럼 크로마토그래피로 정제하여 화합물 186 (146 mg, 70%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 997.6, 1/2[M+H]+ 499.4.
화합물 187의 제조
화합물 186 (146 mg, 0.146 mmol)을 테트라하이드로퓨란 (1.6 mL)에 녹인 후 수산화 리튬 (9.2 mg, 0.219 mmol)을 증류수 (1.6 mL)에 녹인 용액을 0 ℃에서 서서히 첨가하고 상온에서 6 시간 교반하였다. 반응 용액을 아세트산으로 중화하고, 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제 및 동결 건조하여 화합물 187 (102 mg, 71%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 983.7, 1/2[M+H]+ 492.5.
화합물 188의 제조
화합물 187 (102 mg, 0.103 mmol)을 다이클로로메테인 (10 mL)에 녹인 후 피롤리딘 (0.04 mL, 0.515 mmol)과 테트라키스(트라이페닐포스핀)팔라듐(0) (2.4 mg, 0.002 mmol)을 첨가하고 상온, 질소 대기 하에서 1 시간 동안 교반하였다. 반응 용액을 감압 농축한 후 HPLC로 정제 및 동결 건조하여 화합물 188 (33 mg, 41%)을 수득하였다. EI-MS m/z : [M+H]+ 779.5, 1/2[M+H]+ 390.4.
< 실시예 53 >
ADC의 제조
ADC의 제조는 다음의 두 단계를 거처 제조되었으며, 공통적으로 사용한 LCB14-0512와 LCB14-0606은 대한민국 공개특허 제10-2014-0035393호에 기재된 방법으로 제조하였다. LCB14-0512와 LCB14-0606의 구조식은 다음과 같다:
1단계 : prenylated antibody의 제조
항체의 프레닐레이션 (prenylation) 반응 혼합물을 제조하여 30 ℃에서 16 시간 반응하였다. 항체는 한국공개특허 제10-2014-0035393호에서 사용한 Herceptin-G7-CVIM (LC)를 이용하였다. 반응 혼합물은 24 μM 항체, 200 nM FTase (Calbiochem #344145)와 0.144 mM LCB14-0606 (in house, 한국공개특허 제10-2014-0035393호)을 포함하는 완충용액 (50 mM Tris-HCl (pH 7.4), 5 mM MgCl2, 10 μM ZnCl2, 0.25 mM DTT)으로 구성하였다. 반응 종료 후 프레닐레이션된 항체는 PBS 완충용액으로 평형화된 G25 Sepharose 컬럼 (AKTA purifier, GE healthcare)으로 제염시켰다.
2단계 : Drug-conjugation 방법
프레닐레이션된 항체와 링커-약물간의 옥심본드 생성반응 혼합물은 100 mM Na-아세테이트 완충용액 pH 5.2, 10% DMSO, 24 μM 항체와 240 μM 링커-약물(in house, 표 1의 화합물)을 섞어 제조하였으며 30 ℃에서 약하게 교반하였다. 24 시간 반응 후에 FPLC(AKTA purifier, GE healthcare) 과정을 거쳐 사용된 과량의 small molecule을 제거하였으며 단백질 분획은 수집하여 농축하였다.
Anti-HER2 ADC 제조 목록
실시예 링커-약물 ADC#
6 화합물 28 ADC1
13 화합물 48 ADC2
19 화합물 64 ADC3
24 화합물 81 ADC4
28 화합물 97 ADC5
31 화합물 105 ADC6
36 화합물 124 ADC7
40 화합물 144 ADC8
46 화합물 170 ADC9
대조물질 - LCB14-0235
< 실험예 1 > In vitro 세포 독성 평가
하기 표 2와 3에 기재된 약물 및 ADC의 암세포주에 대한 세포증식억제 활성을 측정하였다. 암세포주로 시판 중인 사람 유방암 세포주 MCF-7(HER2 음성 내지 정상) 및 SK-BR3(HER2 양성), JIMT-1(HER2 양성)을 사용하였다. 대조물질로는 SG2057과 SG2057을 독소로 사용한 표 1의 LCB14-0235를 사용하였다. 96-웰 플레이트에 웰(well)당 SK-BR3와 MCF-7은 5,000 개, JIMT-1 은 2,500개씩 접종(seeding)하여 24시간 동안 배양한 뒤에 ADC는 25 fM~10 nM (5 배 연속 희석), 약물은 25 fM~10 nM (5 배 연속 희석) 또는 1 fM~100 nM (10 배 연속 희석) 농도로 처리하였다. 144 시간 뒤에 살아있는 세포수를 SRB (Sulforhodamine B)염료를 사용하여 정량하였다.
피롤로벤조다이아제핀 유도체들의 세포 독성 비교
Test samples IC50 (nM)
SK-BR3 JIMT-1 MCF7
SG2057 0.01 0.04 0.05
화합물 32 18.2 >100 >100
화합물 33 >100 >100 >100
화합물 52 >100 >100 >100
화합물 53 2.52 8.93 11.8
화합물 188 0.96 1.92 -
대조물질 SG2057의 구조는 다음과 같다.
SK-BR3와 JIMT-1 및 MCF7 유방암 세포주에서 신규로 제조한 피롤로벤조다이아제핀 32, 33, 52, 53 및 188의 세포독성이 대조물질 피롤로벤조다이아제핀 (SG2057) 대비 매우 약함을 확인하였다.
Anti-HER2 ADC 들의 세포 독성 비교
Test samples IC50 (nM)
SK-BR3 JIMT-1 MCF7
SG2057 0.02 0.05 0.06
ADC1 0.01 0.24 >10
ADC2 0.03 2.53 >10
ADC3 0.01 3.67 >10
ADC4 0.01 0.19 0.56
ADC5 0.01 0.21 >10
ADC6 0.01 0.13 >10
ADC7 0.02 0.21 0.67
ADC8 0.01 0.28 >10
ADC9 0.05 >10 >10
LCB14-0235 0.01 0.17 >10
대조물질 ADC인 LCB14-0235에 사용된 링커-약물 LCB20-0174의 구조는 다음과 같다. (LCB20-0174는 대한민국 공개특허 제10-2018-0110645호에 기술된 방법으로 제조하였다.)(LCB20-0174)
*SK-BR3와 JIMT-1 유방암 세포주에서 항체-약물 접합체 중 링커-약물 28과 48이 도입된 ADC1, 2의 세포독성이 신규로 제조된 피롤로벤조다이아제핀 유도체 32, 52 자체보다는 항원 의존적으로 현저하게 뛰어난 효능을 보였다. 또한 ADC1,2를 포함한 다른 신규 ADC1~9는 항원 의존적으로 SK-BR3 세포주에서 0.01~0.05 nM의 IC50를, JIMT-1 세포주에서는 0.13 nM ~ 10 nM 이상의 IC50를 보였다. 특히 ADC1,5,6,8은 대조물질인 LCB14-0235와 거의 동등한 약효를 확인하였다.
< 실험예 2 > In vivo xenograft 실험
HER2를 과발현하는 사람 유방암 세포주이면서 Herceptin과 T-DM1에 내성을 갖는 JIMT-1 세포주(입수처: Addexbio)를 이용하여 ADCs의 효능을 평가하였다. JIMT-1 세포주는 matrigel과 1:1의 비율로 혼합하여 마리당 2×106세포를 6주령의 female mouse의 우측 옆구리에 0.2 mL씩 피하투여 하였다. 종양사이즈가 평균 1 mm3에 도달하면 그룹핑하여 10 mL/kg으로 꼬리정맥을 통하여 시험 물질을 단회 투여하고 일주일에 2번씩 종양사이즈와 체중을 측정하였다.
ADC1을 2 mg/kg으로 단회 투여한 그룹에서 42일차 이후로 종양이 전 개체에서 사라져 종양 억제능이 뛰어난 것으로 확인되었다 (도 2 참조).
< 실험예 3 > 랫트 프리 톡스 실험
8주령의 수컷 SD rat를 21 마리를 각각 3 마리씩 7개의 그룹으로 나누고, 2 mL/kg으로 시험물질을 꼬리정맥으로 단회 투여한 뒤, 체중/사망여부/임상 증상 등을 관찰하였다. 체중은 일주일에 2회 측정하고 사망여부 및 임상 증상은 매일 관찰하였다. 투여 4주 뒤, 계획 도살하여 장기들의 육안 소견을 검사하였다. 그 결과는 도 3에 도시된 바와 같다.
SG2057과 화합물 32번을 동일한 용량으로 투여하였을 때, SG2057은 0.02 mg/kg 및 0.04 mg/kg 그룹에서 체중 증가를 현저히 억제하는 경향이 확인되었다. 4주차 시험 종료 시점에서 vehicle 군이 투여 당시 체중에 비해 167% 증가하였고, SG2057 투여군의 체중은 167, 148, 115%로 각각 확인되었다. 반면 화합물 32번 투여군은 대조군과 유사한 체중 증가 양상으로 독성에 의한 체중 증가 억제는 매우 미미한 수준으로 171, 164, 161%로 각각 확인되었다. 이는 화합물 32번이 SG2057에 비해 SD rat에서의 독성이 낮음을 예측하게 한다.
< 실험예 4 > Bystander Effect 실험
하기 표 4에 기재된 약물 및 ADC의 암세포주에 대한 세포증식억제 활성을 측정하였다. HER2 양성 세포주로 SK-BR3 사람 유방암 세포주(입수처: 한국세포주은행(KCLB))를 HER2 음성 세포주로 MDA-MB-468 사람 삼중음성 유방암 세포주(입수처: ATCC)를 사용하였다. 대조 물질로는 이미 bystander effect를 보이는 것으로 알려진 free toxin으로 MMAE를 bystander effect를 보이지 않는 것으로 알려진 MMAF를 사용하였다. SG2057과 SG2057의 유도체를 비교하고 앞서 기술한 free toxin이 포함된 각각의 ADC를 처리하여 toxin 및 ADC가 bystander effect가 있는지 확인하고자 하였다. 시험에 사용한 ADCs는 모두 anti-HER2 ADCs이다. 96-웰 플레이트에 웰(well)당 SK-BR3 6,000개, MDA-MB-468 6,000개, 또는 SK-BR3와 MDA-MB-468을 3,000개씩 같이 접종(seeding)하여 24시간 동안 배양한 뒤에 각각의 약물 및 ADCs를 1 nM의 단일 농도로 처리하였다. 144 시간 뒤에 살아있는 세포수를 SRB (Sulforhodamine B)염료를 사용하여 정량하였다.
Test samples Cell viability (%)
SK-BR3 MDA-MB-468 Co-culture (SK-BR3 : MDA-MB-468 = 1:1
MMAF 101 105 99
MMAE 12 14 12
SG2057 7 4 6
LCB14-0235 11 102 32
화합물 32번 98 101 98
ADC1 11 102 71
신규로 합성한 화합물 32번의 경우에는 MMAE, SG2057과 달리 SK-BR3 세포주와 MDA-MB-468 세포주, co-culture 조건에서 모두 세포독성을 나타내지 않았다. 이는 bystander effect가 없다고 알려진 MMAF와 유사한 경향이었다. 또한, 화합물 32번이 도입된 ADC1의 경우에도 항원 발현 정도에 의존적으로 SK-BR3에서만 세포독성을 나타냈으며, co-culture 조건에서는 미약하게만 세포 독성을 보여 세포의 생존율은 71%로 확인되었다. 반면, SG2057이 도입된 LCB14-0235의 경우에는 SK-BR3에서 뛰어난 세포독성을 보였으며, co-culture 조건에서도 bystander effect에 의해 32%의 세포 생존율을 나타내었다(도 4 참조). 상기의 결과는 화합물 32번과 ADC1에서 bystander effect가 없음을 나타낸다.

Claims (21)

  1. 하기 화학식 I의 구조를 갖는 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물:
    [화학식 I]

    상기 식에서,
    점선은 C1 및 C2, 또는 C2 및 C3 사이의 이중결합의 임의의 존재를 나타내 고,
    R1 및 R1'은 각각 독립적으로 H, OH, =O, =CH2, CN, 및 C1-6 알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되거나 또는 이고,
    여기에서, B1는 결합, -O-, -NH-, -C≡C-, -CONRm- 및 -CONRmRm'으로 이루어진 그룹으로부터 선택되며, 여기에서 Rm 및 Rm'은 각각 독립적으로 수소 또는 C1-6알킬이고;
    B2는 결합, -((CH2)pV)q- 또는 -V(Y(CH2)p)q-이고,
    여기에서, V 및 Y는 각각 독립적으로 O 또는 -NR23C(O)R24-이고, 여기에서 R23 및 R24는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-6알킬렌이며,
    p는 1 내지 10의 정수이고,
    q는 1 내지 20의 정수이며;
    C는 RqC(O)ORr, , 또는 이고,
    여기에서, Rq 및 Rq'은 서로 동일하거나 상이하고, 각각 독립적으로 C1-6알킬렌, C2-6알케닐렌 또는 C2-6알키닐렌이며,
    Rr 및 Rs는 서로 동일하거나 상이하고, 각각 독립적으로 수소, 카복실, 카복실로 치환된 C1-6알킬, 및 C1-6알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고,
    R2, R3, R5 , R2,', R3' 및 R5'는 각각 독립적으로 H, OH, 및 ORm로 이루어진 그룹으로부터 선택되며,
    여기에서, Rm은 치환되거나 비치환된 C1-12알킬, 치환되거나 비치환된 C2-12알케닐, 치환되거나 비치환된 C2-12알키닐, 치환되거나 비치환된 C5-20아릴, 치환되거나 비치환된 C5-20헤테로아릴, 치환되거나 비치환된 C3-6사이클로알킬, 치환되거나 비치환된 3 내지 7- 원 헤테로사이클릴, 치환되거나 비치환된 3 내지 7-원 헤테로사이클로알킬, 및 치환되거나 비치환된 5 내지 7-원 헤테로아릴로 이루어진 그룹으로부터 선택되고,
    여기에서 C1-12알킬, C2-12알케닐, C2-12알키닐, C5-20아릴, C5-20헤테로아릴, C3-6 사이클로알킬, 3 내지 7-원 헤테로사이클릴, 3 내지 7-원 헤테로사이클로알킬, 또는 5 내지 7-원 헤테로아릴이 치환되는 경우, C1-12알킬, C2-12알케닐, C2-12알키닐, C5-20아릴, C5-20헤테로아릴, C3-6사이클로알킬, 3 내지 7-원 헤테로사이클릴, 3 내지 7-원 헤테로사이클로알킬, 또는 5 내지 7-원 헤테로아릴의 각 수소원자는 각각 독립적으로 C1-12알킬, C2-12알케닐, C2-12알키닐, C5-20아릴, C5-20헤테로아릴, C3-6사이클로알킬, 3 내지 7-원 헤테로사이클릴, 3 내지 7-원 헤테로사이클로알킬, 및 5 내지 7-원 헤테로아릴로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 어느 하나 이상으로 치환되고
    여기에서, Rm'는 Rm, CO2Rm, CORm, CHO, CO2H, 및 할로로 이루어진 그룹으로부터 선택되며;
    R4 및 R4'는 각각 독립적으로 H, Rm, OH 및 ORm으로 이루어진 그룹으로부터 선택되고;
    여기에서 Rm은 C1-3 알킬이고;
    X 및 X'는 링커와 결합 가능한 부위로, -C(O)O*가 부착될 수 있고,
    여기에서 *은 링커가 부착되는 부분이고,
    Y 및 Y'은 O이고;
    R6은 하기 화학식 II의 구조를 갖는 극성 작용기이며,
    [화학식 II]

    여기에서,
    B1은 결합, -O-, -NH-, -C≡C-, -CONRm- 및 -CONRmRm'으로 이루어진 그룹으로부터 선택되며, 여기에서 Rm 및 Rm'은 각각 독립적으로 수소 또는 C1-6알킬이고;
    B2는 결합, -((CH2)pV)q- 또는 -V(Y(CH2)p)q-이고,
    여기에서, V 및 Y는 O 또는 -NR23C(O)R24-이고, 여기에서 R23 및 R24는 각각 독립적으로 수소 또는 C1-6알킬렌이며,
    p는 1 내지 10의 정수이고,
    q는 1 내지 20의 정수이며;
    C는 RqC(O)ORr, , 또는 이고,
    여기에서, Rq 및 Rq'은 서로 동일하거나 상이하고, 각각 독립적으로 C1-6알킬렌, C2-6알케닐렌 또는 C2-6알키닐렌이며,
    Rr 및 Rs는 서로 동일하거나 상이하고, 각각 독립적으로 수소, 카복실, 카복 실로 치환된 C1-6알킬, 및 C1-6알킬로 이루어진 그룹으로부터 선택되고,
    R7 및 R7'은 각각 독립적으로 수소, C1-6 알킬 또는 ORt이며,
    여기에서 Rt는 H 또는 C1-7 알킬이다.
  2. 하기 구조식을 갖는 화합물 그룹으로부터 선택되는 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물, 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 용매화물.
    ,
    ,
    ,
    ,및
    .
    .
  3. 하기 화학식 III의 구조를 갖는 접합체, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물:
    [화학식 III]
    Ligand - (L - D) n
    상기 식에서,
    Ligand는 리간드이고,
    L은 링커이며,
    D는 제1항 또는 제2항에 따른 피롤로벤조디아제핀 이량체 화합물이고,
    여기에서 링커는 D의 N10 위치, N10' 위치, 또는 N10 및 N10' 위치를 통해 D와 결합되며,
    n은 1 내지 20의 정수이다.
  4. 제3항에 있어서,
    링커는,
    상기 D의 X 및 X'을 통해 D와 결합되는,
    접합체, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
  5. 제3항에 있어서,
    n은 1 내지 10의 정수인,
    접합체, 또는 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
  6. 하기 화학식 IV의 구조를 갖는 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커 화합물, 이 의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물:
    [화학식 IV]

    상기 식에서,
    점선, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, Y, R1', R2', R3', R4', R5', R7', 및 Y'은 각각 제1항에서 화학식 I의 화합물에 대해 정의한 바와 동일하고,
    X 및 X′는 각각 독립적으로 -C(O)O*이고,
    Xa 및 Xa'은 각각 독립적으로 결합(bond), 또는 치환되거나 비치환된 C1-6알킬렌이며, 여기에서 C1-6알킬렌이 치환되는 경우, 수소, C1-8알킬 또는 C3-8사이클로알킬로 치환되고,
    G 및 G'은 글루쿠로나이드 (glucuronide)기 또는 갈락토사이드기이고,
    Z 및 Z'는 각각 독립적으로 H, , 및 -(CH 2)m-OCH3 로 이루어진 그룹으로부터 선택되고,
    여기에서, R8, R9 및 R10은 각각 독립적으로, H, C1-3알킬, C1-3알콕시 및 메톡시 에틸로 이루어진 그룹으로부터 선택되며, m은 1 내지 6이고,
    n은 1 내지 3의 정수이고, n이 2 이상의 정수인 경우 각각의 Z 및 Z′은 서로 동일하거나 상이할 수 있으며,
    W는 -C(O)-, -C(O)NR'''- 또는 -C(O)O-이고, 상기 R'''는 H 또는 C1-8알킬이며,
    L은 브랜칭 유닛(branching unit), 연결 유닛(connection unit) 및 결합 유닛(binding unit)으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 하나 이상의 유닛, 또는 이들 유닛의 조합이며,
    여기에서 연결 유닛은 W와 결합 유닛을, W와 브랜칭 유닛을, 브랜칭 유닛과 브랜칭 유닛을, 또는 브랜칭 유닛과 결합 유닛을 연결하고, 여기에서 브랜칭 유닛 은 연결 유닛과 W를, 또는 연결 유닛과 또 다른 연결 유닛을 연결하며,
    브랜칭 유닛은 C2-8 알케닐(여기서, 알케닐의 탄소 원자는 하나 또는 그 이상의 N, O 및 S로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 헤테로원자로 치환될 수 있으며, 알케닐은 하나 또는 그 이상의 C1-6알킬로 더 치환될 수 있다), 친수성(hydrophilic) 아미노산, -C(O)-, -C(O)NR''''-, -C(O)O-, -(CH2)s-NHC(O)-(CH2) t-, -(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-, -(CH2)s-NHC(O)-(CH2)t- C(O)-, -(CH2)u-C(O)NH-(CH2)v-C(O)-이고 (여기서, R''''는 H, C1-8알킬, C3-8사이클로알킬, C1-8알콕시, C1-8알킬티오, 모노- 또는 다이-C1-8알킬아미노, C3-20헤테로아릴 또는 C5-20아릴이며, s, t, u 및 v는 각각 독립적으로 0 내지 5의 정수이고),
    연결 유닛은 -(CH2)r(V(CH2)p)q-이며, 여기에서, r은 0 내지 8의 정수이고, p는 1 내지 12의 정수이며, q는 1 내지 20의 정수이고, V는 단일결합 또는 -O-이며,
    결합 유닛은 , , 또는 이고, 여기에서 L1은 단일결합 또는 C2-8알케닐이며, R11은 H 또는 C1-6알킬이고, L2는 C2-8알케닐이며;
    Rv는 -NH2, N3, 치환되거나 비치환된 C1-12알킬, C2-12알키닐, C1-3알콕시, 치환되거나 비치환된 C3-20헤테로아릴, C3-20헤테로사이클릴 또는 치환되거나 비치환된 C5-20아릴이고,
    여기에서 C1-12알킬, C3-20헤테로아릴, C3-20헤테로사이클릴 또는 C5-20아릴이 치환되는 경우, C1-12알킬, C3-20헤테로아릴, C3-20헤테로사이클릴 또는 C5-20아릴에 존재하는 하나 이상의 수소원자는 각각 독립적으로 OH, =O, 할로, C1-6알킬, C1-6알콕시, C2-6알케닐옥시, 카복시, C1-6알콕시카르보닐, C1-6알킬카르보닐, 포르밀, C6-8아릴, C5-12아릴옥시, C5-12아릴카르보닐, 또는 C3-6헤테로아릴로 치환된다.
  7. 제6항에 있어서,
    Xa 및 Xa'은 각각 독립적으로 결합(bond) 또는 C1-3알킬렌인,
    피롤로벤조디아제핀 이량체-링커 화합물, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
  8. 하기 화학식을 갖는 피롤로벤조디아제핀 이량체 링커 화합물, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물:
    ,
    ,
    ,
    ,
    ,
    ,
    , 또는
    .
  9. 하기 화학식 V의 구조를 갖는 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물:
    [화학식 V]

    상기 식에서,
    점선, R1, R2, R3, R4, R5, R6, R7, X, Y, R1', R2', R3', R4', R5', R7', X', Y'은 각각 제1항에서 화학식 I의 화합물에 대해 정의한 바와 동일하고,
    Xa, G, Z, W, L, Xa', G', Z'은 각각 제6항에서 화학식 IV의 화합물에 대해 정의한 바와 동일하며;
    Ligand는 항원 결합 모이어티이다.
  10. 제8항에 따른 화학식을 갖는 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커 화합물을 이용한, 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물:
    여기에서, 리간드(Ligand)는 항원 결합 모이어티이다.
  11. 제9항 또는 제10항에 있어서,
    Ligand는 단백질인,
    피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
  12. 제9항 또는 제10항에 있어서,
    Ligand는 항체인,
    피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
  13. 제12항에 있어서,
    항체는 항-HER2 항체, 항-DLK1 항체, 항-ROR1 항체, 항-MUC1 항체, 항-CD19 항체, 및 항-CD276 항체로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것인,
    피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
  14. 제11항에 있어서,
    상기 단백질은 이소프레노이드 트랜스퍼라아제에 의하여 인식될 수 있는 하 나 이상의 아미노산 모티프를 갖는 것인,
    피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
  15. 제14항에 있어서,
    상기 이소프레노이드 트랜스퍼라아제는 FTase(farnesyl protein tra nsferase) 또는 GGTase(geranylgeranyl transferase)인,
    피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
  16. 제14항에 있어서,
    상기 아미노산 모티프가 CYYX, XXCC, XCXC 또는 CXX이고,
    여기에서 C는 시스테인, Y는 지방족 아미노산, X는 이소프레노이드 트랜스퍼라아제의 기질 특이성을 결정하는 아미노산인,
    피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물.
  17. 제9항 또는 제10항의 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물을 포함하는,
    증식성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  18. 제17항에 있어서,
    상기 증식성 질환은 신생물, 종양, 암, 백혈병, 건선, 뼈 질환, 섬유증식성 장애, 및 죽상동맥경화증으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것인, 증식성 질환 의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  19. 제18항에 있어서,
    상기 암은 폐암, 소세포성 폐암, 위장관암, 대장암, 장암, 유방암, 난소암, 전립선암, 고환암, 간암, 신장암, 방광암, 췌장암, 뇌암, 육종, 골육종, 카포시 육종 및 흑색종으로 이루어진 그룹으로부터 선택되는 것인, 증식성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  20. 제9항 또는 제10항의 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물; 및
    약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는,
    증식성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
  21. 제9항 또는 제10항의 피롤로벤조디아제핀 이량체-링커-리간드 접합체, 이의 약학적으로 허용되는 염 또는 용매화물;
    1종 이상의 증식성 질환의 치료적 공동 작용제(therapeutic co-agent); 및
    약학적으로 허용되는 부형제를 포함하는,
    증식성 질환의 예방 또는 치료용 약학 조성물.
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JP2024512324A (ja) 2021-03-05 2024-03-19 ジーオー セラピューティクス，インコーポレイテッド 抗グリコｃｄ４４抗体およびその使用
EP4380604A1 (en) 2021-08-05 2024-06-12 Go Therapeutics, Inc. Anti-glyco-muc4 antibodies and their uses
EP4389152A1 (en) 2022-12-23 2024-06-26 Synaffix B.V. Conjugates of pbd prodrugs

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB0226593D0 (en) 2002-11-14 2002-12-24 Consultants Ltd Compounds
ATE527262T1 (de) * 2006-01-25 2011-10-15 Sanofi Sa Neue tomaymycin derivate enhaltende zytotoxische mittel
ES2435779T3 (es) * 2007-07-19 2013-12-23 Sanofi Agentes citotóxicos que comprenden nuevos derivados de tomaimicina y su uso terapéutico
GB0819097D0 (en) 2008-10-17 2008-11-26 Spirogen Ltd Pyrrolobenzodiazepines
KR20110075542A (ko) 2009-12-28 2011-07-06 주식회사 효성 연료전지 시스템의 워터트랩 장치
PE20130342A1 (es) 2010-04-15 2013-04-20 Spirogen Sarl Pirrolobenzodiacepinas y conjugados de las mismas
US9242013B2 (en) * 2010-04-15 2016-01-26 Seattle Genetics Inc. Targeted pyrrolobenzodiazapine conjugates
EP2558475A1 (en) 2010-04-15 2013-02-20 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines used to treat proliferative diseases
KR101921068B1 (ko) 2011-05-08 2018-11-22 주식회사 레고켐 바이오사이언스 단백질-활성제 접합체 및 이의 제조 방법
WO2013164593A1 (en) 2012-04-30 2013-11-07 Spirogen Sàrl Pyrrolobenzodiazepines
PL2906253T3 (pl) * 2012-10-12 2019-02-28 Adc Therapeutics Sa Koniugaty pirolobenzodiazepina-przeciwciało anty-psma
BR112015023070B1 (pt) * 2013-03-13 2022-06-07 Genentech, Inc. Conjugados e compostos de pirrolobenzodiazepinas, composição farmacêutica que compreende os mesmo, bem como seus usos para o tratamento de uma doença proliferativa
KR101628872B1 (ko) 2014-05-28 2016-06-09 주식회사 레고켐 바이오사이언스 자가-희생 기를 포함하는 화합물
WO2016063595A1 (ja) 2014-10-24 2016-04-28 ソニー株式会社 画像処理装置、画像処理方法及びプログラム
WO2016063564A1 (ja) 2014-10-24 2016-04-28 株式会社ソニー・コンピュータエンタテインメント 制御装置、制御方法、プログラム及び情報記憶媒体
EP3380126A4 (en) 2015-11-25 2019-07-24 LegoChem Biosciences, Inc. ANTIBODY-MEDICINAL CONJUGATES COMPRISING BRANCHED LINKS AND RELATED METHODS
JP6949732B2 (ja) * 2015-11-25 2021-10-13 レゴケム バイオサイエンシズ， インク．Ｌｅｇｏｃｈｅｍ Ｂｉｏｓｃｉｅｎｃｅｓ， Ｉｎｃ． 自壊性基を含む複合体及びそれに関連した方法
MA43821A (fr) 2016-03-14 2018-11-28 Afferent Pharmaceuticals Inc Pyrimidines et variantes de celles-ci, et leurs utilisations
WO2018031662A1 (en) * 2016-08-11 2018-02-15 Genentech, Inc. Pyrrolobenzodiazepine prodrugs and antibody conjugates thereof
GB201617466D0 (en) * 2016-10-14 2016-11-30 Medimmune Ltd Pyrrolobenzodiazepine conjugates
WO2018182341A1 (ko) * 2017-03-29 2018-10-04 주식회사 레고켐 바이오사이언스 피롤로벤조디아제핀 이량체 전구체 및 이의 리간드-링커 접합체 화합물
MX2019011655A (es) 2017-03-29 2019-12-19 Legochem Biosciences Inc Profarmaco de dimero de pirrolobenzodiazepina y compuesto conjugado ligando-conector de este.
RS63502B1 (sr) * 2017-04-18 2022-09-30 Medimmune Ltd Konjugati pirolobenzodiazepina

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