KR102561289B1 - Peptide for whitening and cosmetic composition with improved percutaneous absorption comprising the same - Google Patents

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Abstract

미백 활성을 갖는 펩타이드 및 이를 포함하는 경피흡수 개선용 리포좀 화장료 조성물이 개시된다. 일실시예에 따른 펩타이드는 기존의 펩타이드 대비 우수한 미백 활성을 나타내며, 일실시예에 따른 화장료 조성물은 우수한 안정성과 경피 흡수 개선 효과를 나타낸다.A peptide having whitening activity and a liposome cosmetic composition for improving percutaneous absorption containing the same are disclosed. The peptide according to one embodiment exhibits excellent whitening activity compared to conventional peptides, and the cosmetic composition according to one embodiment exhibits excellent stability and percutaneous absorption improvement effect.

Description

미백용 펩타이드 및 이를 포함하는 경피 흡수가 개선된 화장료 조성물{Peptide for whitening and cosmetic composition with improved percutaneous absorption comprising the same}Peptide for whitening and cosmetic composition containing the same with improved percutaneous absorption

아래 실시예들은 미백용 펩타이드 및 이를 포함하는 경피 흡수가 개선된 화장료 조성물 기술에 관한 것이다. The following examples relate to whitening peptides and cosmetic composition techniques with improved percutaneous absorption containing the same.

피부는 인체의 일차 방어막으로서 체내의 기관들을 온도 및 습도 변화, 자외선, 공해물질 등 외부환경의 자극으로부터 보호해 주며, 체온조절 등의 생체 항상성 유지에 중요한 역할을 한다.Skin, as the primary barrier of the human body, protects internal organs from external environmental stimuli such as temperature and humidity changes, ultraviolet rays, and pollutants, and plays an important role in maintaining body homeostasis such as regulating body temperature.

산업이 발달함에 따라 환경 오염이 심각해지고, 피부의 노화 방지, 미백 등에 관한 관심이 고조되고 있다. 특히, 사람의 피부는 끊임없이 변화를 겪게 되는데, 가장 대표적인 변화가 노화에 의한 피부 기능 저하 및 시각적 아름다움의 감소이다. 피부 노화의 결과 나타나는 최종적인 피부 외관에서의 현상은 주름의 형성, 피부 탄력 저하, 노인성 반점 형성 등이 있으며, 주름의 형성이 가장 대표적인 현상으로 손꼽힌다.As the industry develops, environmental pollution becomes serious, and interest in anti-aging and whitening of the skin is increasing. In particular, human skin constantly undergoes changes, and the most representative change is a decrease in skin function and visual beauty due to aging. Phenomenon in the final skin appearance as a result of skin aging includes formation of wrinkles, decrease in skin elasticity, formation of senile spots, etc., and formation of wrinkles is considered the most representative phenomenon.

피부의 주요 구성물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등은 산화되어 피부 세포 및 조직이 파괴될 수 있으며, 결국 피부가 노화될 수 있다. 특히 단백질의 산화에 의해 피부의 결합조직인 콜라겐, 히알루론산, 엘라스틴, 프로테오글라이칸, 피브로넥틴 등이 절단되고 과다 염증반응이 나타날 수 있으며, 더욱 심화되는 경우 DNA 변이에 의한 돌연변이, 면역기능의 저하, 암의 유발이 촉진될 수 있다.Lipids, proteins, polysaccharides, and nucleic acids, which are major constituents of the skin, are oxidized and skin cells and tissues may be destroyed, resulting in aging of the skin. In particular, the oxidation of proteins can cut connective tissues such as collagen, hyaluronic acid, elastin, proteoglycan, and fibronectin, etc., and cause excessive inflammatory reactions.

따라서, 신체의 대사 과정 중 발생하는 활성산소종이나 자외선 조사, 염증반응에 의해 매개 되는 활성산소종을 소거하여 세포막을 보호하고, 활발한 신진대사를 통해 손상 받은 세포를 재생시켜 피부 건강을 회복시키는 것이 바람직하다.Therefore, it is desirable to protect cell membranes by scavenging active oxygen species generated during the metabolic process of the body or mediated by ultraviolet irradiation and inflammatory reactions, and to restore skin health by regenerating damaged cells through active metabolism.

한편, 멜라닌은 색소 세포 내에 존재하는 타이로시네이즈의 작용에 의해 타이로신으로부터 도파(dopa), 도파퀴논(dopaquinone)으로 변환되어 도파크롬(dopachrome) 등을 거쳐 생성된다. 멜라닌은 자외선 등 피부 유해 요소로부터 신체를 보호하고 체내 호르몬 분비를 조절하는 역할을 한다.On the other hand, melanin is converted from tyrosine to dopa and dopaquinone by the action of tyrosinase present in pigment cells and is produced through dopachrome and the like. Melanin plays a role in protecting the body from harmful factors such as ultraviolet rays and regulating the secretion of hormones in the body.

그러나, 멜라닌은 과잉 생산되어 기미, 주근깨의 형성 및 피부노화를 촉진시킬 수 있으며, 피부암의 유발에 관여할 수 있으므로, 멜라닌의 과잉생산을 억제하기 위한 연구개발이 활발하게 이루어지고 있다.However, since melanin is overproduced, it can promote the formation of melasma and freckles and skin aging, and can be involved in the induction of skin cancer, so research and development for suppressing the overproduction of melanin is being actively conducted.

종래에 아스코르빈산(일본특개평 4-9320), 하이드로퀴논(일본특개평 6-192062), 코직산(일본특개소 56-7710), 알부틴(일본특개평 4-93150) 및 식물 추출물 등이 타이로시네이즈 저해 활성을 나타내어 미백 화장료로 이용되었다. 하지만, 상기 성분들은 화장품 제형 중에서 안정성이 미흡하여, 분해되어 착색되거나, 이취를 유발할 수 있으며, 생체 내에서 안전성 또는 효능이 불명확하여 그 사용이 제한되고 있다.Conventionally, ascorbic acid (Japanese Patent Laid-open Hei 4-9320), hydroquinone (Japanese Patent Laid-Open No. 6-192062), kojic acid (Japanese Patent Laid-open Publication No. 56-7710), arbutin (Japanese Patent Laid-Open No. 4-93150), plant extracts, etc. have shown tyrosinase inhibitory activity and have been used as whitening cosmetics. However, these components have insufficient stability in cosmetic formulations, may be decomposed and colored, or may cause off-flavors, and their use is limited due to unclear safety or efficacy in vivo.

한편, 화장품 업계는 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 제품을 활발히 개발하고 있다. 그러나, 천연물 유래의 화장료 소재는 친환경적인 특성에도 불구하고, 화장료 조성물 내에서 쉽게 변질되어 기능성이 온전히 구현되지 않거나 천연소재에 대한 국내외 연구가 포화상태에 이르러 신규 소재의 발굴이 쉽지 않은 상황이다.Meanwhile, the cosmetics industry is actively developing products using natural substances to reduce skin irritation caused by chemicals. However, cosmetic materials derived from natural products, despite their eco-friendly characteristics, are easily deteriorated in the cosmetic composition and functionality is not completely implemented, or research on natural materials at home and abroad is saturated, making it difficult to discover new materials.

따라서, 최신 피부 과학 이론에 기반하여 새로운 피부 개선 메커니즘을 규명하고, 이를 이용한 화장품 소재 개발이 활발하게 이루어지고 있다.Therefore, based on the latest skin science theory, a new skin improvement mechanism is identified, and cosmetic material development using it is being actively conducted.

본 발명은 전술한 문제점을 해결하기 위해 안출된 것으로, 본 발명의 목적은 생체안정성이 우수하며, 피부 미백 활성이 우수한 신규의 펩타이드를 제공하는 것이다.The present invention has been made to solve the above problems, and an object of the present invention is to provide a novel peptide having excellent biostability and excellent skin whitening activity.

하나의 과제로서 본원은 피부 미백 활성이 우수한 펩타이드를 제공하고자 한다. 다른 하나의 과제로서 본원은 상기 펩타이드를 포함하며 안정성이 높고 경피흡수가 개선된 리포좀 화장료 조성물을 제공하고자 한다.As one problem, the present application is intended to provide a peptide having excellent skin whitening activity. As another task, the present application intends to provide a liposome cosmetic composition containing the peptide and having high stability and improved percutaneous absorption.

상기 과제를 해결하기 위해 하나의 양태로서 본 발명은 서열번호 1의 펩타이드를 유효성분으로 포함하는, 미백용 화장료 조성물을 제공한다.As one aspect to solve the above problems, the present invention provides a cosmetic composition for whitening, comprising the peptide of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient.

일 실시예에 따르면, 상기 유효성분을 0.5 내지 5.0 중량% 포함할 수 있다.According to one embodiment, it may contain 0.5 to 5.0% by weight of the active ingredient.

상기 화장료 조성물은 상기 유효성분, 인지질, 및 세라마이드를 포함하는 유상과 올레산, 아미노산, 및 아데노신을 포함하는 수상의 혼합을 통해 리포좀이 형성된 제형일 수 있다. 상기 아미노산은 히스티딘 또는 라이신을 포함하는 것일 수 있다.The cosmetic composition may be a formulation in which liposomes are formed by mixing an oil phase containing the active ingredient, phospholipid, and ceramide with an aqueous phase containing oleic acid, amino acid, and adenosine. The amino acid may include histidine or lysine.

일 실시예에 따르면, 상기 수상은 정제수, EDTA을 추가로 포함하며, 상기 유상은 에탄올, 글리세린, 1,3-부틸렌 글리콜, 스테아르산, 및 디부틸하이드록시톨루엔을 추가로 포함하는 것일 수 있다.According to one embodiment, the aqueous phase may further include purified water and EDTA, and the oil phase may further include ethanol, glycerin, 1,3-butylene glycol, stearic acid, and dibutylhydroxytoluene.

일 실시예에 따르면, 상기 EDTA는 0.03 내지 0.07 중량부, 상기 올레산은 0.1 내지 0.4 중량부, 상기 아미노산은 0.8 내지 1.2 중량부, 상기 아데노신은 0.8 내지 1.2 중량부, 상기 에탄올은 8 내지 12 중량부, 상기 글리세린은 25 내지 35 중량부, 상기 1,3-부틸렌 글리콜은 8 내지 12 중량부, 상기 유효성분은 0.8 내지 1.2 중량부, 상기 인지질은 2.5 내지 3.5 중량부, 상기 세라마이드는 0.8 내지 1.2 중량부, 상기 스테아르산은 0.2 내지 0.4 중량부, 상기 디부틸하이드록시톨루엔은 0.03 내지 0.07 중량부를 포함하는 것일 수 있다.According to one embodiment, the EDTA is 0.03 to 0.07 parts by weight, the oleic acid is 0.1 to 0.4 parts by weight, the amino acid is 0.8 to 1.2 parts by weight, the adenosine is 0.8 to 1.2 parts by weight, the ethanol is 8 to 12 parts by weight, the glycerin is 25 to 35 parts by weight, the 1,3-butylene glycol is 8 to 12 parts by weight , The active ingredient is 0.8 to 1.2 parts by weight, the phospholipid is 2.5 to 3.5 parts by weight, the ceramide is 0.8 to 1.2 parts by weight, the stearic acid is 0.2 to 0.4 parts by weight, the dibutylhydroxytoluene is 0.03 to 0.07 parts by weight.

일실시예에 따른 장치는 하드웨어와 결합되어 상술한 방법들 중 어느 하나의 항의 방법을 실행시키기 위하여 매체에 저장된 컴퓨터 프로그램에 의해 제어될 수 있다.An apparatus according to an embodiment may be combined with hardware and controlled by a computer program stored in a medium to execute any one of the methods described above.

실시예에 따른 펩타이드는 피부 미백 활성이 우수하다. 상기 펩타이드를 포함하는 리포좀 화장료 조성물인 처방예는 보관 안정성이 높고 경피흡수가 개선된 결과를 나타낸다.The peptide according to the embodiment has excellent skin whitening activity. The prescription example, which is a liposomal cosmetic composition containing the peptide, shows high storage stability and improved percutaneous absorption.

이하에서, 첨부된 도면을 참조하여 실시예들을 상세하게 설명한다. 그러나, 실시예들에는 다양한 변경이 가해질 수 있어서 특허출원의 권리 범위가 이러한 실시예들에 의해 제한되거나 한정되는 것은 아니다. 실시예들에 대한 모든 변경, 균등물 내지 대체물이 권리 범위에 포함되는 것으로 이해되어야 한다.Hereinafter, embodiments will be described in detail with reference to the accompanying drawings. However, since various changes can be made to the embodiments, the scope of the patent application is not limited or limited by these embodiments. It should be understood that all changes, equivalents or substitutes to the embodiments are included within the scope of rights.

실시예들에 대한 특정한 구조적 또는 기능적 설명들은 단지 예시를 위한 목적으로 개시된 것으로서, 다양한 형태로 변경되어 실시될 수 있다. 따라서, 실시예들은 특정한 개시형태로 한정되는 것이 아니며, 본 명세서의 범위는 기술적 사상에 포함되는 변경, 균등물, 또는 대체물을 포함한다.Specific structural or functional descriptions of the embodiments are disclosed for illustrative purposes only, and may be modified and implemented in various forms. Therefore, the embodiments are not limited to the specific disclosed form, and the scope of the present specification includes changes, equivalents, or substitutes included in the technical spirit.

제1 또는 제2 등의 용어를 다양한 구성요소들을 설명하는데 사용될 수 있지만, 이런 용어들은 하나의 구성요소를 다른 구성요소로부터 구별하는 목적으로만 해석되어야 한다. 예를 들어, 제1 구성요소는 제2 구성요소로 명명될 수 있고, 유사하게 제2 구성요소는 제1 구성요소로도 명명될 수 있다.Although terms such as first or second may be used to describe various components, such terms should only be construed for the purpose of distinguishing one component from another. For example, a first element may be termed a second element, and similarly, a second element may be termed a first element.

어떤 구성요소가 다른 구성요소에 "연결되어" 있다고 언급된 때에는, 그 다른 구성요소에 직접적으로 연결되어 있거나 또는 접속되어 있을 수도 있지만, 중간에 다른 구성요소가 존재할 수도 있다고 이해되어야 할 것이다.It should be understood that when an element is referred to as being “connected” to another element, it may be directly connected or connected to the other element, but other elements may exist in the middle.

실시예에서 사용한 용어는 단지 설명을 목적으로 사용된 것으로, 한정하려는 의도로 해석되어서는 안된다. 단수의 표현은 문맥상 명백하게 다르게 뜻하지 않는 한, 복수의 표현을 포함한다. 본 명세서에서, "포함하다" 또는 "가지다" 등의 용어는 명세서 상에 기재된 특징, 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것이 존재함을 지정하려는 것이지, 하나 또는 그 이상의 다른 특징들이나 숫자, 단계, 동작, 구성요소, 부품 또는 이들을 조합한 것들의 존재 또는 부가 가능성을 미리 배제하지 않는 것으로 이해되어야 한다.Terms used in the examples are used only for descriptive purposes and should not be construed as limiting. Singular expressions include plural expressions unless the context clearly dictates otherwise. In this specification, terms such as "comprise" or "having" are intended to specify that a feature, number, step, operation, component, part, or combination thereof described in the specification exists, but it should be understood that the presence or addition of one or more other features or numbers, steps, operations, components, parts, or combinations thereof is not excluded in advance.

다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 실시예가 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥 상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 출원에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.Unless defined otherwise, all terms used herein, including technical or scientific terms, have the same meaning as commonly understood by a person of ordinary skill in the art to which the embodiment belongs. Terms such as those defined in commonly used dictionaries should be interpreted as having a meaning consistent with the meaning in the context of the related art, and are not interpreted in an ideal or excessively formal meaning unless explicitly defined in the present application.

본 발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 첨부되는 도면과 함께 상세하게 후술되어 있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하며, 본 발명이 속하는 기술분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.Advantages and features of the present invention, and methods of achieving them, will become clear with reference to the detailed description of the following embodiments taken in conjunction with the accompanying drawings. However, the present invention is not limited to the embodiments disclosed below, but will be implemented in a variety of different forms, and only these embodiments make the disclosure of the present invention complete, and those skilled in the art It is provided to completely inform the scope of the invention, and the present invention is only defined by the scope of the claims.

본 발명의 실시예들에서, 별도로 다르게 정의되지 않는 한, 기술적이거나 과학적인 용어를 포함해서 여기서 사용되는 모든 용어들은 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 일반적으로 이해되는 것과 동일한 의미를 가지고 있다. 일반적으로 사용되는 사전에 정의되어 있는 것과 같은 용어들은 관련 기술의 문맥 상 가지는 의미와 일치하는 의미를 가지는 것으로 해석되어야 하며, 본 발명의 실시예에서 명백하게 정의하지 않는 한, 이상적이거나 과도하게 형식적인 의미로 해석되지 않는다.In the embodiments of the present invention, unless otherwise defined, all terms used herein, including technical or scientific terms, have the same meaning as commonly understood by one of ordinary skill in the art to which the present invention belongs. Terms such as those defined in commonly used dictionaries should be interpreted as having a meaning consistent with the meaning in the context of the related art, and unless explicitly defined in the embodiments of the present invention, an ideal or excessively formal meaning. It is not to be interpreted.

본 발명의 실시예를 설명하기 위한 도면에 개시된 형상, 크기, 비율, 각도, 개수 등은 예시적인 것이므로 본 발명이 도시된 사항에 한정되는 것은 아니다. 또한, 본 발명을 설명함에 있어서, 관련된 공지 기술에 대한 구체적인 설명이 본 발명의 요지를 불필요하게 흐릴 수 있다고 판단되는 경우 그 상세한 설명은 생략한다. 본 명세서 상에서 언급된 '포함한다', '갖는다', '이루어진다' 등이 사용되는 경우 '~만'이 사용되지 않는 이상 다른 부분이 추가될 수 있다. 구성 요소를 단수로 표현한 경우에 특별히 명시적인 기재 사항이 없는 한 복수를 포함하는 경우를 포함한다.The shapes, sizes, ratios, angles, numbers, etc. disclosed in the drawings for explaining the embodiments of the present invention are illustrative, so the present invention is not limited to the details shown. In addition, in describing the present invention, if it is determined that a detailed description of related known technologies may unnecessarily obscure the subject matter of the present invention, the detailed description will be omitted. When 'includes', 'has', 'consists of', etc. mentioned in this specification is used, other parts may be added unless 'only' is used. In the case where a component is expressed in the singular, the case including the plural is included unless otherwise explicitly stated.

구성 요소를 해석함에 있어서, 별도의 명시적 기재가 없더라도 오차 범위를 포함하는 것으로 해석한다.In interpreting the components, even if there is no separate explicit description, it is interpreted as including the error range.

도면에서 나타난 각 구성의 크기 및 두께는 설명의 편의를 위해 도시된 것이며, 본 발명이 도시된 구성의 크기 및 두께에 반드시 한정되는 것은 아니다.The size and thickness of each component shown in the drawings are shown for convenience of description, and the present invention is not necessarily limited to the size and thickness of the illustrated components.

본 발명의 여러 실시예들의 각각 특징들이 부분적으로 또는 전체적으로 서로 결합 또는 조합 가능하며, 당업자가 충분히 이해할 수 있듯이 기술적으로 다양한 연동 및 구동이 가능하며, 각 실시예들이 서로에 대하여 독립적으로 실시 가능할 수도 있고 연관 관계로 함께 실시 가능할 수도 있다.Each feature of the various embodiments of the present invention can be partially or entirely combined or combined with each other, and as those skilled in the art can fully understand, various interlocking and driving are possible technically, and each embodiment can be implemented independently of each other. It may be possible to implement together in a related relationship.

본원에 따른 화장료 조성물은 일반적인 유화 제형 및 가용화 제형의 형태로 제조할 수 있다. 예컨대, 유연 화장수 또는 영양 화장수 등의 화장수; 훼이셜 로션, 바디로션 등의 유액; 영양 크림, 수분 크림, 아이 크림 등의 크림; 에센스; 화장연고; 스프레이; 젤; 팩; 선 스크린; 메이크업 베이스; 액체 타입, 고체 타입 또는 스프레이 타입 등의 파운데이션; 파우더; 클렌징 크림, 클렌징 로션, 클렌징 오일 등의 메이크업 제거제; 또는 클렌징 폼, 비누, 바디워시 등의 세정제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다. 또한 상기 피부 외용제는, 연고, 패취, 겔, 크림 또는 분무제로 제형화될 수 있으나 이에 한정되는 것은 아니다.The cosmetic composition according to the present application may be prepared in the form of a general emulsified formulation and a solubilized formulation. For example, cosmetic lotion, such as softening lotion or nourishing lotion; emulsions such as facial lotion and body lotion; creams such as nourishing creams, moisture creams, and eye creams; essence; cosmetic ointment; spray; gel; pack; sunscreen; makeup base; foundations such as liquid type, solid type or spray type; powder; makeup removers such as cleansing creams, cleansing lotions, and cleansing oils; Alternatively, it may be formulated as a cleanser such as a cleansing foam, soap, body wash, etc., but is not limited thereto. In addition, the skin external preparation may be formulated as an ointment, patch, gel, cream or spray, but is not limited thereto.

상기 화장료 조성물 또는 외용제는 각각의 제형에 있어서 상기 필수성분 외에 제형의 종류 또는 사용 목적 등에 따라 본 발명에 따른 목적을 저해하지 않는 범위 내에서 다른 성분들이 적절히 배합될 수 있다.In addition to the essential components in each formulation, the cosmetic composition or external preparation may be appropriately mixed with other components within a range that does not impair the purpose of the present invention depending on the type of formulation or purpose of use.

상기 화장료 조성물 또는 외용제는 통상적으로 허용 가능한 담체를 포함할 수 있으며, 예컨대 유분, 물, 계면활성제, 보습제, 저급 알코올, 증점제, 킬레이트제, 색소, 방부제, 향료 등을 적절히 배합할 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다.The cosmetic composition or external preparation may include a conventionally acceptable carrier, and for example, oil, water, a surfactant, a moisturizer, a lower alcohol, a thickener, a chelating agent, a colorant, a preservative, a flavoring agent, and the like may be appropriately blended, but is not limited thereto.

상기 허용 가능한 담체는 제형에 따라 달리할 수 있다. 예컨대, 연고, 페이스트, 크림 또는 젤로 제형화될 때 담체 성분으로서 동물성 유, 식물성 유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌 글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크, 산화아연 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있다The acceptable carrier may vary depending on the formulation. For example, when formulated into an ointment, paste, cream or gel, animal oil, vegetable oil, wax, paraffin, starch, tracanth, cellulose derivative, polyethylene glycol, silicone, bentonite, silica, talc, zinc oxide or a mixture thereof may be used as a carrier component.

상기 화장료 조성물 또는 외용제가 파우더 또는 스프레이로 제형화될 때, 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록사이드, 칼슘 실케이트, 폴리아미드 파우더 또는 이들의 혼합물이 사용될 수 있고, 스프레이의 경우 클로로플루오로히드로카본, 프로판, 부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진제를 더 포함할 수 있다.When the cosmetic composition or external agent is formulated as a powder or spray, lactose, talc, silica, aluminum hydroxide, calcium silicate, polyamide powder or a mixture thereof may be used as a carrier component, and in the case of a spray, a propellant such as chlorofluorohydrocarbon, propane, butane or dimethyl ether may be further included.

상기 화장료 조성물 또는 외용제가 용액 또는 유탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 용매, 용해화제, 또는 유탁화제가 사용될 수 있고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 벤조에이트, 프로필렌 글리콜, 1,3-브틸글리콜 오일이 사용될 수 있고, 특히, 목화씨 오일, 땅콩 오일, 옥수수 배종 오일, 올리브 오일, 피마자 오일 및 참깨 오일, 글리세롤 지방족 에스테르, 폴리에틸렌 글리콜 또는 소르비탄의 지방산 에스테르가 사용될 수 있다.When the cosmetic composition or external preparation is formulated as a solution or emulsion, a solvent, solubilizing agent, or emulsifying agent may be used as a carrier component, for example, water, ethanol, isopropanol, ethyl carbonate, ethyl acetate, benzyl benzoate, propylene glycol, 1,3-butyl glycol oil may be used, in particular, cottonseed oil, peanut oil, corn germ oil, olive oil, castor oil and sesame oil, glycerol aliphatic esters , polyethylene glycol or fatty acid esters of sorbitan may be used.

상기 화장료 조성물 또는 외용제가 현탁액으로 제형화될 때, 담체 성분으로서 물, 에탄올 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리 옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 아가 또는 트라칸트 등이 사용될 수 있다.When the cosmetic composition or external preparation is formulated as a suspension, water, a liquid diluent such as ethanol or propylene glycol, a suspending agent such as ethoxylated isostearyl alcohol, polyoxyethylene sorbitol ester and polyoxyethylene sorbitan ester, microcrystalline cellulose, aluminum metahydroxide, bentonite, agar or tracanth may be used as carrier components.

상기 화장료 조성물이 비누로 제형화될 때, 담체 성분으로서 지방산의 알칼리 금속 염, 지방산 헤미에스테르 염, 지방산 단백질 히드롤리제이트, 이세티오네이트, 라놀린 유도체, 지방족 알코올, 식물성 유, 글리세롤, 당 등이 사용될 수 있다When the cosmetic composition is formulated as a soap, alkali metal salts of fatty acids, fatty acid hemiester salts, fatty acid protein hydrolyzates, isethionates, lanolin derivatives, fatty alcohols, vegetable oils, glycerol, sugar, etc. may be used as carrier components.

상기 화장료 조성물 또는 피부 외용제는 최종 제품의 품질이나 기능에 따라 업계에서 통상적으로 사용되는 지방 물질, 유기용매, 용해제, 농축제, 겔화제, 연화제, 항산화제, 현탁화제, 안정화제, 발포제(foaming agent), 방향제, 계면활성제, 물, 이온형 또는 비이온형 유화제, 충전제, 금속이온봉 쇄제, 킬레이트화제, 보존제, 차단제, 습윤화제, 필수 오일, 염료, 안료, 친수성 또는 친유성 활성제, 화장품에 통상적으로 사용되는 임의의 다른 성분과 같은 화장품학 또는 피부과학 분야에서 통상적으로 사용되는 보조제를 추가적으로 함유할 수 있다.The cosmetic composition or skin external preparation is a fatty substance, organic solvent, solubilizer, thickener, gelling agent, softener, antioxidant, suspending agent, stabilizer, foaming agent, fragrance, surfactant, water, ionic or nonionic emulsifier, filler, sequestering agent, chelating agent, preservative, blocking agent, wetting agent, essential oil, dye, pigment, hydrophilic or affinity commonly used in the industry depending on the quality or function of the final product It may additionally contain adjuvants commonly used in the field of cosmetology or dermatology, such as oil-based actives and any other ingredients commonly used in cosmetics.

본원에 따른 리포좀 화장료 조성물은 수상 및 유상의 혼합과 교반에 의해 나노 리포좀의 현탁액으로 제조될 수 있다. 구체적으로, 수상을 먼저 혼합하여 70 내지 90℃의 온도로 가온하여 2,500 내지 3,500rpm으로 5 내지 30분 교반하여 냉각한 후, 유상을 혼합하여 실온에서 2,500 내지 3,500rpm으로 5 내지 30분 교반한 후, 이후 수상과 유상을 혼합한 후 500 내지 1,500 rpm으로 5 내지 30분 교반한 후, 상기 혼합액을 Microfluidizer (MF)를 이용하여 800 내지 1,200bar에서 3회 이상 순환하여 나노리포좀의 현탁액으로 제조될 수 있다.The liposome cosmetic composition according to the present application may be prepared as a suspension of nano-liposomes by mixing and stirring the aqueous phase and the oil phase. Specifically, the aqueous phase is first mixed, heated to a temperature of 70 to 90 ° C, stirred at 2,500 to 3,500 rpm for 5 to 30 minutes, cooled, mixed with the oil phase, stirred at room temperature at 2,500 to 3,500 rpm for 5 to 30 minutes, then mixed with the water phase and then stirred at 500 to 1,500 rpm for 5 to 30 minutes, then the mixing The liquid may be circulated three or more times at 800 to 1,200 bar using a Microfluidizer (MF) to prepare a nanoliposome suspension.

이하, 구체적인 실시예와 비교예를 통하여 본 발명의 구성 및 그에 따른 효과를 보다 상세히 설명하고자 한다. 그러나, 본 실시예는 본 발명을 보다 구체적으로 설명하기 위한 것이며, 본 발명의 범위가 이들 실시예에 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, the configuration of the present invention and its effects will be described in more detail through specific examples and comparative examples. However, these examples are for explaining the present invention in more detail, and the scope of the present invention is not limited to these examples.

제조예: 펩타이드의 제조Preparation Example: Preparation of Peptide

9-플루오레닐메톡시카르보닐(9-fluorenylmethoxycarbonyl; Fmoc)을 아미노산의 보호기로 사용하는 통상의 고체상 펩타이드 합성법(solid phase peptide synthesis: SPPS)을 이용하여 펩타이드를 합성하였다. N-히드록시벤조 트리아졸(N-hydroxybenzotriazole; HOBt)와 N,N-디아이소프로필카보 디이미드(N,N'-diisopropylcarbodiimide; DIC)를 활성화제로 사용하여 아미노산 잔기를 연장하였다[참고문헌 : Wang C. Chan, Perter D. White, 'Fmoc-solid phase peptide synthesis', Oxford].Peptides were synthesized using a conventional solid phase peptide synthesis (SPPS) method using 9-fluorenylmethoxycarbonyl (Fmoc) as a protecting group for amino acids. Amino acid residues were extended using N-hydroxybenzotriazole (HOBt) and N,N'-diisopropylcarbodiimide (DIC) as activators [Reference: Wang C. Chan, Perter D. White, 'Fmoc-solid phase peptide synthesis', Oxford].

합성된 펩타이드를 C18 역상 고성능액체크로마토그래피(HPLC, Waters Associates, USA)를 이용하여 순수 분리하였다. 컬럼은 ACQUITY UPLC BEH300 C18 (2.1 x 100 mm, 1.7 μM, Waters Co, USA)을 이용하였다.The synthesized peptide was purified using C18 reverse phase high performance liquid chromatography (HPLC, Waters Associates, USA). ACQUITY UPLC BEH300 C18 (2.1 x 100 mm, 1.7 μM, Waters Co, USA) was used as the column.

상기 방법에 따라 합성된 펩타이드는 하기 표 1과 같다.Peptides synthesized according to the above method are shown in Table 1 below.

구분division 서열order 비고note 실시예Example YCHFFQASCVYCHFFQASCV 서열번호 1SEQ ID NO: 1

한편, 비교예로서 공지된 서열번호 2 (YCRFFQASCY)의 펩타이드를 사용하였다.Meanwhile, as a comparative example, a known peptide of SEQ ID NO: 2 (YCRFFQASCY) was used.

실험예 1: 피부 미백효과Experimental Example 1: Skin whitening effect

멜라닌 생성 세포를 이용하여 펩타이드의 미백효능을 실험하였다.The whitening effect of peptides was tested using melanin-producing cells.

피부가 흑화를 일으키는 것은 피부의 멜라닌 생성세포에서 멜라닌을 만들어 표피로 내보내기 때문으로 멜라닌 생성세포의 멜라닌 생성과 그 기전을 차단시킨다면, 멜라닌이 만들어 지지 않아 피부 흑화는 나타나지 않는다. 따라서 멜라닌 생성과 멜라닌 합성의 주요단계에 관여하는 티로시나제 효소의 활성도는 미백을 측정하는 중요한 척도로 사용된다.The reason why the skin darkens is because the melanin-producing cells of the skin make melanin and export it to the epidermis, so if the melanin production of melanin-producing cells and its mechanism are blocked, melanin is not made and skin blackening does not appear. Therefore, the activity of tyrosinase enzyme involved in melanin production and the main steps of melanin synthesis is used as an important measure for whitening.

본 실험은 멜라닌생성세포(melanoma) 세포주와 멜라닌자극호르몬을 이용한 in vitro assay계를 확립하여 펩타이드에 의한 멜라닌 생성 억제 효과, 티로시나제 활성 억제효과를 측정함으로써 피부 미백 효과를 확인하였다.In this experiment, the skin whitening effect was confirmed by establishing an in vitro assay system using a melanoma cell line and melanin-stimulating hormone to measure the melanin production inhibitory effect and tyrosinase activity inhibitory effect by the peptide.

(1) 세포주 및 세포배양(1) Cell line and cell culture

실험에 사용된 세포주는 melanoma B16F10 세포와 human primary melanocyte HEMn-LP 세포(Cascade Biologics, USA)를 사용하였다 B16F10 세포는 37°C, 5% CO2의 조건에서 10% FBS (Gibco Co), 100 ㎍/㎖ 스트렙토마이신(streptomycin), 100 U/㎖ 페니실린 (penicillin)이 첨가된 DMEM(Dulbecco's modified Eagle medium)을 사용하여 배양하였다(Incubator; Thermo-scientific, USA). HEMn-LP 세포는 1% HMGS (Cascade Biologics, USA)이 혼합된 99% Medium 254 (Cascade Biologics, USA) 배지를 이용하여 세포는 37°C, 5% CO2의 조건에서 배양하였다 (Incubator; Thermo-scientific, USA). B16F10, HEMn-LP 세포는 100 cm2플라스크 (Corning, USA)에서 충분히 증식시킨 후 배양 3일 간격으로 배양세포 표면을 PBS로 씻어준 후 0.25% 트립신-EDTA 용액을 넣고 배양기에서 3분간 처리한 다음 트립신-EDTA 용액을 버리고 37℃에서 5분간 보관하여 세포를 탈착시켰다. 탈착된 세포는 10% FBS가 포함된 DMEM 10 ㎖을 새로운 배양용기에 옮겨 1:5의 분할율 (split ratio)로 37℃5% CO2의 조건에서 계대배양하였다.The cell lines used in the experiment were melanoma B16F10 cells and human primary melanocyte HEMn- LP cells (Cascade Biologics, USA). B16F10 cells were prepared in DMEM (D ulbecco's modified Eagle medium) was used (Incubator; Thermo-scientific, USA). HEMn-LP cells were cultured in 99% Medium 254 (Cascade Biologics, USA) mixed with 1% HMGS (Cascade Biologics, USA) at 37°C and 5% CO 2 conditions (Incubator; Thermo-scientific, USA). B16F10, HEMn-LP cells were sufficiently proliferated in a 100 cm 2 flask (Corning, USA), washed the surface of the cultured cells with PBS every 3 days, added 0.25% trypsin-EDTA solution, treated in an incubator for 3 minutes, discarded the trypsin-EDTA solution, and stored at 37 ° C. for 5 minutes to detach the cells. The detached cells were transferred to a new culture vessel in 10 ml of DMEM containing 10% FBS, and subcultured at 37° C. 5% CO 2 at a split ratio of 1:5.

(2) 티로시나제 활성억제를 통한 미백효과 실험 (2) Whitening effect test through inhibition of tyrosinase activity

6 well plate의 각 well에 B16F10 멜라닌 생성세포 (또는 HEMn-LP 멜라닌 세포)를 1x105cell/well (Final volume 3ml)로 넣고, 37°C, 5% CO2 인큐베이터에서 24시간 배양한 후, 각 웰의 배지를 제거하고 새로운 DMEM으로 교체하였다. 각각의 웰에 미백효능 시료를 농도별로 만들어 30분간 전처리 하였다.B16F10 melanocytes (or HEMn-LP melanocytes) were added to each well of a 6-well plate at 1x10 5 cell/well (Final volume 3ml) and cultured in an incubator at 37°C, 5% CO 2 for 24 hours. Then, the medium in each well was removed and replaced with new DMEM. In each well, a whitening effect sample was prepared by concentration and pre-treated for 30 minutes.

이어서 α-Melanocyte stimulating hormone (α-MSH) 1ppm을 처리하고 48시간 동안 배양하였다. 그 후, 배양액을 제거하고 PBS를 1ml씩 넣어 세포스크래퍼로 각 웰을 긁어 세포를 떼어낸 뒤, 각각의 1.5ml 튜브로 옮겼다. 이어서 4°C, 1,300rpm에서 3분간 원심분리하여 상층액을 제거하고, 세포펠렛을 회수하여 200ml의 라이시스 버퍼 (1% Triton X-100, 1mM PMSF이 함유된 100mM sodium phosphate buffer (pH6.8))를 넣었다. 30분 동안 10분 간격으로 vortex하여 세포를 용해시킨 뒤, 4°C, 1,300rpm에서 30분간 원심분리하여 상층액을 새로운 1.5ml 튜브로 옮겼다. BCA protein assay kit (PIERCE, USA)를 이용하여 총단백질 정량을 하였고, 같은 양으로 정량된 시료를 96 well plate의 각 웰에 40ml씩 넣고, 이어서 2mg/ml로 실험 전 phosphate buffer (pH 6.8)에 바로 녹인 L-3,4-dihydroxyphenylalanine (L-DOPA)를 120ml씩 넣었다. 37°C에서 30분~60분간 반응시킨 뒤, ELISA 리더를 이용하여 475nm에서 흡광도를 측정하였다. 음성대조군을 기준으로 타이로시나제 활성억제율(%)을 다음 [수학식 4]에 의하여 구하였다. 음성대조군은 시료대신 DMSO를 처리하여 샘플로 사용하였다.Subsequently, α-Melanocyte stimulating hormone (α-MSH) was treated with 1 ppm and cultured for 48 hours. Thereafter, the culture medium was removed, 1 ml of PBS was added, and cells were removed by scraping each well with a cell scraper, and transferred to each 1.5 ml tube. Subsequently, the supernatant was removed by centrifugation at 4°C and 1,300 rpm for 3 minutes, and the cell pellet was collected and 200 ml of lysis buffer (100 mM sodium phosphate buffer (pH6.8) containing 1% Triton X-100 and 1 mM PMSF) was added. Cells were lysed by vortexing at 10-minute intervals for 30 minutes, and then centrifuged at 4°C and 1,300 rpm for 30 minutes, and the supernatant was transferred to a new 1.5 ml tube. Total protein was quantified using the BCA protein assay kit (PIERCE, USA), and 40 ml of the same amount of quantified sample was put into each well of a 96 well plate, followed by 2 mg/ml of phosphate buffer (pH 6.8). After reacting at 37 ° C for 30 to 60 minutes, absorbance was measured at 475 nm using an ELISA reader. Based on the negative control group, the inhibition rate (%) of tyrosinase activity was obtained by the following [Equation 4]. The negative control group was treated with DMSO instead of the sample and used as a sample.

표 2는 본 발명의 일 실시예로서 상기의 방법으로 펩타이드의 a-MSH 에 의해 증가한 티로시나제의 활성 억제 효과를 나타낸 표이다.Table 2 is a table showing the effect of inhibiting the activity of tyrosinase increased by a-MSH of the peptide by the above method as an embodiment of the present invention.

[수학식 4][Equation 4]

티로시나제활성 억제율(%) = [(Tm -Ts)/( Tm -Tc)]×100Tyrosinase activity inhibition rate (%) = [(T m -T s ) / (T m -T c )] × 100

Tc: 컨트롤군의 흡광도T c : absorbance of the control group

Tm: α-MSH 처리군의 흡광도T m : Absorbance of α-MSH treated group

TS: 시료와 α-MSH를 처리한 군의 흡광도T S : Absorbance of the sample and the group treated with α-MSH

α-MSH 첨가α-MSH addition -- ++ ++ ++ ++ ++ 시료sample 실시예 1.5ppmExample 1.5 ppm 실시예 2.0ppmExample 2.0 ppm 비교예 1.5ppmComparative example 1.5 ppm 비교예 2.0ppmComparative example 2.0 ppm 타이로네이즈 활성%Tyronease activity % 100%100% 440%440% 175%175% 158%158% 273%273% 267%267% 억제율%Inhibition rate % 78%78% 83%83% 49%49% 51%51%

(3) 멜라닌 생성억제 효과 측정(3) Measurement of melanin production inhibitory effect

6 well plate 의 각 웰에 B16F10 멜라닌 생성세포 (또는 HEMn-LP 멜라닌 세포)를 1x105cell/well (Final volume 3ml)로 넣고, 37°C, 5% CO2 인큐베이터에서 24시간 배양한 후, 각 웰의 배지를 제거하고 새로운 DMEM으로 교체하였다. 각각의 웰에 미백효능 시료를 농도별로 만들어 30분간 전처리 하였다.B16F10 melanocytes (or HEMn-LP melanocytes) were added to each well of a 6-well plate at 1x10 5 cell/well (Final volume 3ml) and cultured in an incubator at 37°C, 5% CO 2 for 24 hours. Then, the medium in each well was removed and replaced with new DMEM. In each well, a whitening effect sample was prepared by concentration and pre-treated for 30 minutes.

이후 α-Melanocyte stimulating hormone (α-MSH) 1ppm을 처리하고 48시간 동안 배양하였다. 그 후, 배양액을 제거하고 PBS를 1ml씩 넣어 세포스크래퍼로 각 웰을 긁어 세포를 떼어낸 뒤, 각각의1.5ml 튜브로 옮겼다. 이어서 4°C, 1,300rpm에서 3분간 원심분리하여 상층액을 제거하고, 세포펠렛을 회수하여 200ml의 라이시스 버퍼 (1% Triton X-100, 1mM PMSF, 50mM Tris-HCl (pH7.0), 2mM EDTA(pH8.0), 150mM NaCl)를 넣었다. 30분 동안 10분 간격으로 vortex하여 세포를 용해시킨 뒤, 4°C, 1,300rpm에서 30분간 원심분리하여 상층액을 제거하고 세포펠렛을 회수하여 60°C에서 약 3시간 건조시킨 뒤, 10% DMSO가 첨가된 2N NaOH를 150ml씩 넣어 60°C에서 1시간 동안 세포 내 멜라닌을 용해시켰다. 96 well plate 의 각 웰에 용해시켜 얻은 상층액을 100ml씩 넣어 ELISA 리더를 이용하여 405nm에서 흡광도를 측정하였다. 음성대조군은 시료대신 DMSO로 처리하였다. 멜라닌 생성억제율(%)은 다음 [수학식 5]에 의하여 구하였다.Thereafter, α-Melanocyte stimulating hormone (α-MSH) was treated with 1 ppm and cultured for 48 hours. Thereafter, the culture medium was removed, 1 ml of PBS was added, and cells were removed by scraping each well with a cell scraper, and transferred to each 1.5 ml tube. Subsequently, the supernatant was removed by centrifugation at 4 ° C and 1,300 rpm for 3 minutes, and the cell pellet was collected and 200 ml of lysis buffer (1% Triton X-100, 1 mM PMSF, 50 mM Tris-HCl (pH7.0), 2 mM EDTA (pH8.0), 150 mM NaCl) was added. After vortexing at 10-minute intervals for 30 minutes, the cells were lysed, centrifuged at 4°C and 1,300 rpm for 30 minutes to remove the supernatant, and the cell pellet was recovered and dried at 60°C for about 3 hours. Then, 150 ml of 2N NaOH with 10% DMSO was added to dissolve the intracellular melanin at 60°C for 1 hour. 100 ml of the supernatant obtained by dissolution was put into each well of a 96 well plate, and absorbance was measured at 405 nm using an ELISA reader. The negative control group was treated with DMSO instead of the sample. The melanin production inhibition rate (%) was obtained by the following [Equation 5].

표 3은 본 발명의 일 실시예로서 상기의 방법으로 펩타이드의 α-MSH 에 의해 증가한 멜라닌의 생성 억제 효과를 나타낸 도표이다.Table 3 is a chart showing the effect of inhibiting the production of melanin increased by α-MSH of the peptide in the above method as an embodiment of the present invention.

[수학식 5][Equation 5]

멜라닌 생성 억제율(%) = [(Mm -Ms)/( Mm -Mc)]×100Melanin production inhibition rate (%) = [(M m -M s )/(M m -M c )]×100

Mc: 컨트롤군의 멜라닌양M c : Amount of melanin in the control group

Mm: α-MSH 처리군의 멜라닌양M m : the amount of melanin in the α-MSH treated group

MS: 시료와 α-MSH를 처리한 군의 멜라닌양 MS : Amount of melanin in the sample and the group treated with α-MSH

α-MSH 첨가α-MSH addition -- ++ ++ ++ ++ ++ 시료sample 실시예 1.5ppmExample 1.5 ppm 실시예 2.0ppmExample 2.0 ppm 비교예 1.5ppmComparative example 1.5 ppm 비교예 2.0ppmComparative example 2.0 ppm 타이로네이즈 활성%Tyronease activity % 100%100% 230%230% 135%135% 121%121% 167%167% 158%158% 억제율%Inhibition rate % 73%73% 84%84% 48%48% 55%55%

(4) cAMP 생성 억제효과 (4) cAMP production inhibitory effect

cAMP ELISA kit (Assay Design, USA)을 이용하여 세포 내에 방출된 cAMP양을 측정하였다. 피부흑화의 세포전달시 발생되는 cAMP의 양을 얼마나 억제하는지 그 양을 ELISA법을 통해 측정하여 그 결과를 도12에 나타내었다.The amount of cAMP released into cells was measured using a cAMP ELISA kit (Assay Design, USA). The amount of cAMP generated during cell transfer of skin darkening was measured by ELISA, and the results are shown in FIG. 12 .

상기 실험결과, 펩타이드에서 cAMP의 억제효과를 보임을 확인하였다As a result of the above experiment, it was confirmed that the peptide had an inhibitory effect on cAMP.

α-MSH 첨가α-MSH addition -- ++ ++ ++ ++ ++ 시료sample 실시예 1.5ppmExample 1.5 ppm 실시예 2.0ppmExample 2.0 ppm 비교예 1.5ppmComparative example 1.5 ppm 비교예 2.0ppmComparative example 2.0 ppm 타이로네이즈 활성%Tyronease activity % 100%100% 160%160% 65%65% 57%57% 118%118% 107107 억제율%Inhibition rate % 158%158% 172%172% 70%70% 88%88%

상기와 같이 실험한 결과 본 발명의 실시예는 비교예 대비 우수한 미백 성분임을 확인할 수 있었다.As a result of the experiment as described above, it was confirmed that the embodiment of the present invention is an excellent whitening component compared to the comparative example.

처방예 1 내지 4: 리포좀 화장료 조성물의 제조Formulation Examples 1 to 4: Preparation of liposomal cosmetic composition

본 발명의 실시예가 화장료 조성물로서 경피 흡수가 잘되며 안정적인 처방예를 구현하고자 리포좀 화장료 조성물을 제조하였다. 표 5와 같은 조성의 수상을 혼합한 후 80℃로 가온하여10분간 교반한 후 (3,000rpm) 냉각하였다. 하기의 표 5의 조성의 유상을 혼합한 후 실온에서 10분간 교반하였다(3,000rpm). 수상과 유상의 혼합하고 20분간 교반하였다(1,500rpm). 상기 혼합액을 Microfluidizer (MF)를 이용하여 1000bar에서 3회 순환하여 나노 리포좀 현탁액을 얻었다. 이후 표 5에 기재된 방부제를 첨가한 후 10분간 교반하였다(500rpm).An embodiment of the present invention was prepared as a cosmetic composition with good percutaneous absorption and a liposome cosmetic composition to implement a stable prescription. After mixing the aqueous phase of the composition shown in Table 5, it was heated to 80 ° C., stirred for 10 minutes, and then cooled (3,000 rpm). After mixing the oil phase of the composition of Table 5 below, it was stirred at room temperature for 10 minutes (3,000 rpm). The water phase and the oil phase were mixed and stirred for 20 minutes (1,500 rpm). The mixture was circulated three times at 1000 bar using a Microfluidizer (MF) to obtain a nanoliposome suspension. After adding the preservatives shown in Table 5, the mixture was stirred for 10 minutes (500 rpm).

성분 (중량%)Ingredients (% by weight) 처방예 1Prescription Example 1 처방예 2Prescription example 2 처방예 3Prescription example 3 처방예 4Prescription Example 4 수상Awards 정제수Purified water To 100To 100 To 100To 100 To 100To 100 To 100To 100 EDTA-2NAEDTA-2NA 0.050.05 0.050.05 0.050.05 0.050.05 올레산oleic acid 0.20.2 0.30.3 0.20.2 00 아미노산amino acid 히스티딘 1histidine 1 라이신 1lysine 1 00 히스티딘 1histidine 1 아데노신adenosine 1One 1One 1One 1One 유상Paid 에탄올ethanol 1010 1010 1010 1010 글리세린glycerin 3030 3030 3030 3030 1,3-부틸렌글리콜1,3-butylene glycol 1010 1010 1010 1010 실시예 펩타이드Example Peptide 1One 1One 1One 1One 인지질 Phospholipid 33 33 33 33 세라마이드ceramide 1One 1One 1One 1One 스테아르산stearic acid 0.30.3 0.20.2 0.30.3 0.50.5 MCT oilMCT oil 33 33 33 33 디부틸하이드록시톨루엔Dibutylhydroxytoluene 0.050.05 0.050.05 0.050.05 0.050.05 방부제antiseptic SHD-62(1,2-Hexanediol)SHD-62 (1,2-Hexanediol) 1One 1One 1One 1One

실험예 2: 처방예의 입도 분석 및 안정성 시험Experimental Example 2: Particle size analysis and stability test of prescription

본 실험에서 입도분석은 일반 광학현미경으로는 확인되지 않는 나노 사이즈의 다중층 리포좀이 실제 어느 정도의 크기와 입도분포를 갖는지를 확인하기 위하여 광산란(Light scattering)법을 이용한 입도분석기(Particle size analyzer)로서 독일 Sympatec사의 Helos 모델장비를 이용하여 분석하였다. 안정성 시험은 5℃, 25℃, 45℃, 및 cycle로 1개월간 성상의 변화를 확인하였다.In this experiment, the particle size analysis was performed using Helos model equipment from Sympatec, Germany as a particle size analyzer using the light scattering method to confirm the actual size and particle size distribution of the nano-sized multilayer liposomes, which cannot be confirmed with a general optical microscope. Stability test confirmed the change in properties for 1 month at 5 ℃, 25 ℃, 45 ℃, and cycle.

[표 6]에서 육안 관찰한 결과를 광산란법을 이용한 입도분석장비를 이용하여 분석하여 검증하였다. 투명도 : ◎투명), ○반투명), △반투명 - 탁함), × (유백색)The results of visual observation in [Table 6] were analyzed and verified using a particle size analysis equipment using a light scattering method. Transparency: ◎transparent), ○translucent), △translucent - cloudy), × (milk white)

처방예 1Prescription Example 1 처방예 2Prescription example 2 처방예 3Prescription example 3 처방예 4Prescription Example 4 입자 크기(초기)Particle size (initial) 110nm110nm 131nm131 nm 459nm459 nm 1424nm1424 nm 투명도(초기)
Transparency (initial)
입자크키 (45℃1개월)particle size (45℃ 1 month) 107nm107 nm 138nm138 nm 560nm560 nm 976nm976 nm 투명도
(45℃개월)
transparency
(45℃ months)
◎(◎(
입자크키
(5℃개월)
particle size
(5℃ months)
103nm103 nm 112nm112 nm 340nm340 nm 분리separation
투명도
(5℃1개월)
transparency
(5℃ 1 month)
입자크키
(Cyc,1개월)
particle size
(Cyc, 1 month)
124nm124 nm 150nm150 nm 810nm810 nm 분리separation
투명도
(Cyc, 1개월)
transparency
(Cyc, 1 month)
◎(◎(
입자크키
(25℃개월)
particle size
(25℃ months)
111nm111 nm 129nm129nm 431nm431 nm 821nm821 nm
투명도
(25℃개월)
transparency
(25℃ months)
◎(◎(

이상과 같이 처방예 1 내지 3은 입자의 캡슐화가 안정한 반면, 처방예 4에서는 성상이 탁해지는 것을 확인할 수 있었다. 이에 따라, 처방예 1 내지 3을 대상으로 추가 실험을 진행하였다.As described above, while formulation examples 1 to 3 had stable particle encapsulation, in formulation example 4, it was confirmed that the properties were cloudy. Accordingly, additional experiments were conducted on Prescription Examples 1 to 3.

실험예 3: 리포좀의 피부투과 시험Experimental Example 3: Liposome Skin Permeation Test

본 발명의 리포좀 현탁액의 경피흡수율을 측정하기 위해, 생체 외 피부흡수시험 가이드라인(식품의약품안전처)을 따라 진행하였다. 생체 외 피부 흡수시험방법은 시험물질이 피부를 통과하는 것을 확인하는 것으로 피부 표면에 시험물질을 도포 혹은 적용하여 일정한 시간 이후 피부 안쪽 용액저장소에 이동한 양을 측정하는 방법으로, 인간 또는 다른 종의 다세포 동물의 피부, 또는 인공피부를 사용할 수 있다. 특히 인공 피부를 사용하는 경우 시험물질에 대하여 반복 측정이 가능하며 실험 동물을 사용하지 않고 노출 조건에 대한 연구가 가능하다. 생체 외 피부흡수시험은 물질의 조성에 따른 피부 흡수와 투과를 비교할 수 있어, 인체 내 피부흡수에 의한 위험성 평가 등에 유용한 모델로 사용할 수 있다.In order to measure the percutaneous absorption rate of the liposome suspension of the present invention, in vitro skin absorption test guidelines (Ministry of Food and Drug Safety) were followed. The in vitro skin absorption test method confirms that the test substance passes through the skin. It is a method of applying or applying the test substance to the surface of the skin and measuring the amount moved to the solution reservoir inside the skin after a certain period of time. The skin of a human or other species multicellular animal, or artificial skin can be used. In particular, in the case of using artificial skin, it is possible to repeatedly measure the test substance and study the exposure conditions without using laboratory animals. The in vitro skin absorption test can compare skin absorption and permeation according to the composition of the substance, and can be used as a useful model for risk assessment by skin absorption in the human body.

본 실험예에서는, 밀리포아(미국)사의 경피흡수시험용 인공 Membrane Strat-M을 사용하여, Franz-Diffusion Cell and System (LOGAN사 미국)에 장착하여 실험하였다.  Franz-Diffusion Cell은 비폐색(non-occluded) 조건으로 공여 챔버(donor chamber)를 파라 필름(para film)으로 밀봉하지 않은 상태로 유지하였다.In this experimental example, using an artificial Membrane Strat-M for percutaneous absorption test manufactured by Millipore (USA), the experiment was carried out by attaching it to a Franz-Diffusion Cell and System (LOGAN USA). In the Franz-Diffusion Cell, the donor chamber was kept unsealed with para film under non-occluded conditions.

각 시험물질을 용매와 혼합하여 공여 챔버에 로딩(loading)하고 일정 시간 이후에 멤브레인 및 Reservoir에 있는 액체를 채취하여 펩타이드 성분을 분석하여 시험물질의 피부 투과율을 확인하였다. 또한, 피부에 남아 있는 잔존량을 측정하였다. 처방예 1 내지 3의 100g을 각각 상기 인공피부에 처리하여, 2시간 이후에 피부 투과 정도를 측정하였다. 전체 펩타이드 함량 (1g)을 기준으로 검출된 펩타이드의 중량%로 표시하였다.Each test substance was mixed with a solvent, loaded into the donor chamber, and after a certain period of time, the liquid in the membrane and reservoir was collected and the peptide components were analyzed to confirm the skin permeability of the test substance. In addition, the residual amount remaining on the skin was measured. 100 g of Prescription Examples 1 to 3 was treated on the artificial skin, respectively, and the degree of skin penetration was measured after 2 hours. It is expressed as weight percent of peptides detected based on the total peptide content (1 g).

처방예 1Prescription Example 1 처방예 2Prescription example 2 처방예 3Prescription Example 3 피부 skin 5%5% 5%5% 51%51% 멤브레인membrane 15%15% 19%19% 5%5% ReservoirReservoir 35%35% 31%31% 3%3%

상기와 같이 처방예 1 및 2를 사용한 경우에는 멤브레인 및 Reservoir로 유의미하게 피부 흡수가 나타난 반면, 처방예 3에서는 피부에 많은 펩타이드가 잔존하고 있는 것으로 확인되었다. 이에 따라, 처방예 1 및 2가 적합한 제형으로 고안되었다.In the case of using Formulation Examples 1 and 2 as described above, significant skin absorption was shown through the membrane and reservoir, whereas in Formulation Example 3, it was confirmed that many peptides remained on the skin. Accordingly, Formulation Examples 1 and 2 were designed as suitable formulations.

<110> HAN, DOSOOK <120> Peptide for whitening and cosmetic composition with improved percutaneous absorption comprising the same <130> P22193 <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide for cosmetic <400> 1 Tyr Cys His Phe Phe Gln Ala Ser Cys Val 1 5 10 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Peptide for cosmetic <400> 2 Tyr Cys His Phe Phe Gln Ala Ser Cys Val 1 5 10 <110> HAN, DOSOOK <120> Peptide for whitening and cosmetic composition with improved percutaneous absorption comprising the same <130> P22193 <160> 2 <170> KoPatentIn 3.0 <210> 1 <211> 10 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> peptide <400> 1 Tyr Cys His Phe Phe Gln Ala Ser Cys Val 1 5 10 <210> 2 <211> 10 <212> PRT <213> artificial sequence <220> <223> peptide <400> 2 Tyr Cys His Phe Phe Gln Ala Ser Cys Val 1 5 10

Claims (3)

서열번호 1의 펩타이드를 유효성분으로서 0.5 내지 5.0 중량% 포함하는, 미백용 화장료 조성물로서,
상기 화장료 조성물은, 상기 펩타이드, 인지질, 및 세라마이드를 포함하는 유상; 및 올레산, 아미노산, 및 아데노신을 포함하는 수상의 혼합을 통해 리포좀이 형성된 제형을 갖고,
상기 아미노산은 히스티딘 또는 라이신을 포함하며,
상기 올레산은 0.1 내지 0.4 중량부, 상기 아미노산은 0.8 내지 1.2 중량부, 상기 아데노신은 0.8 내지 1.2 중량부, 상기 펩타이드는 0.8 내지 1.2 중량부, 상기 인지질은 2.5 내지 3.5 중량부, 상기 세라마이드는 0.8 내지 1.2 중량부인 것인, 미백용 화장료 조성물.


A cosmetic composition for whitening comprising 0.5 to 5.0% by weight of the peptide of SEQ ID NO: 1 as an active ingredient,
The cosmetic composition, an oil phase containing the peptide, phospholipid, and ceramide; and a formulation in which liposomes are formed through mixing of an aqueous phase containing oleic acid, amino acids, and adenosine;
The amino acid includes histidine or lysine,
The oleic acid is 0.1 to 0.4 parts by weight, the amino acid is 0.8 to 1.2 parts by weight, the adenosine is 0.8 to 1.2 parts by weight, the peptide is 0.8 to 1.2 parts by weight, the phospholipid is 2.5 to 3.5 parts by weight, the ceramide is 0.8 to 1.2 parts by weight, a cosmetic composition for whitening.


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