KR102534346B1 - Cosmetic composition comprising a concentrate of collagen ingredients isolated from apricot - Google Patents

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Abstract

화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로, 상기 조성물은 콜라겐을 구성하는 아미노산을 고함량으로 포함하고 있는바, 피부 관련 상태의 예방, 개선 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다.It relates to a cosmetic composition and a manufacturing method thereof, and since the composition contains a high content of amino acids constituting collagen, it can be usefully used for preventing, improving or treating skin-related conditions.

Description

살구 유래 콜라겐 성분의 농축액을 포함하는 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising a concentrate of collagen ingredients isolated from apricot}Cosmetic composition comprising a concentrate of collagen ingredients isolated from apricot}

화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.It relates to a cosmetic composition and a manufacturing method thereof.

살구(Prunus armeniaca)는 장미과 벚나무속에 속하는 식물로 한의학에서는 행인이라 불리며, 본초강목과 동의보감 등에 살구씨를 이용한 치료 방법이 200여 가지나 기록되어 있을 정도로 쓰임새와 약효가 많다. 특히, 살구씨를 갈아서 만든 한방 외용제는 기미나 주근깨 등 피부 색소 침착, 종기, 부스럼 등에 사용되며, 피부를 하얗고 윤기 있게 한다. Apricot ( Prunus armeniaca ) is a plant belonging to the genus Rosaceae and is called a passerby in oriental medicine, and has many uses and medicinal effects, such that more than 200 treatment methods using apricot seeds have been recorded in Herbal Medicine and Donguibogam. In particular, herbal external preparations made by grinding apricot seeds are used for skin pigmentation such as spots and freckles, swelling, swelling, etc., and make the skin white and shiny.

최근 들어 비건(Vegan), 클린 뷰티(Clean bueaty) 등에 관심이 높아짐과 동시에 유기농 및 non-GMO 등과 같이 깨끗하고 안전한 천연 소재에 대한 소비자 선호도가 높아지고 있다. 뿐만 아니라, 먹는 피쉬 콜라겐, 먹는 히알루론산 등 건강기능식품 및 이너 뷰티 제품에 대한 관심도 증가하고 있다. 특히, 피부 미용 분야 중 안티-에이징(anti-aging)에 대한 수요자들의 관심이 증가하고 있다. Recently, interest in vegan, clean beauty, etc. has increased, and at the same time, consumer preference for clean and safe natural materials such as organic and non-GMO is increasing. In addition, interest in health functional foods and inner beauty products such as edible fish collagen and edible hyaluronic acid is increasing. In particular, consumers' interest in anti-aging in the field of skin care is increasing.

따라서, 안티-에이징 효능을 가지면서 화학적 및 동물성 소재를 대체할 수 있는 깨끗하고 안전한 식물성 원료를 개발할 필요가 있다. Therefore, there is a need to develop clean and safe vegetable raw materials that can replace chemical and animal materials while having anti-aging effects.

일 양상은 살구에서 분리된 아미노산 농축액을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물을 제공하는 것이다. One aspect is to provide a cosmetic composition comprising an amino acid concentrate isolated from apricots as an active ingredient.

다른 양상은 살구에서 분리된 아미노산 농축액을 유효성분으로 포함하는 피부 외용제 조성물을 제공하는 것이다. Another aspect is to provide a composition for external application for skin comprising an amino acid concentrate isolated from apricot as an active ingredient.

다른 양상은 살구에서 분리된 아미노산 농축액을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품 조성물을 제공하는 것이다. Another aspect is to provide a health functional food composition comprising an amino acid concentrate isolated from apricots as an active ingredient.

다른 양상은 건조된 살구에 식물성 효소를 혼합하는 단계; 및 상기 효소와 혼합된 살구에서 아미노산을 가수분해하는 단계;를 포함하는 살구에서 콜라겐의 구성 아미노산을 분리하는 방법을 제공하는 것이다. Another aspect is mixing vegetable enzymes with dried apricots; and hydrolyzing amino acids in the apricot mixed with the enzyme.

일 양상은 살구에서 분리된 아미노산 농축액을 유효성분으로 포함하는 조성물을 제공한다. 일 구체예에 있어서, 상기 아미노산은 콜라겐을 구성하는 성분인 것일 수 있다. One aspect provides a composition comprising an amino acid concentrate isolated from apricots as an active ingredient. In one embodiment, the amino acid may be a component constituting collagen.

본 명세서에서 용어, "콜라겐"은 단백질의 일종으로 종류에 따라 뼈나 피부, 연골, 결합 조직 등을 구성한다. 콜라겐 합성에는 수많은 콜라겐 합성 유전자가 관여하며, 콜라겐을 비롯한 결합조직 성분을 분해하는 MMPs(matris metalloproteinase)가 존재한다. 노화에 의해 콜라겐 합성이 감소하고 콜라겐을 분해하는 MMPs 효소의 활성 증가로 인해 콜라겐의 분해가 증가하여 탄력을 감소시킴으로써 주름이 증가한다. 콜라겐을 구성하는 아미노산으로는 하이드록시프롤린 (Hydroxyproline), 프롤린 (Proline), 및 글리신 (Glycine)가 대부분을 차지하고 있다. 따라서, 일 양상에 따른 조성물은 살구에서 분리된 아미노산으로서 콜라겐을 구성하는 하이드록시프롤린 (Hydroxyproline), 프롤린 (Proline), 및 글리신 (Glycine) 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 포함하는 것일 수 있다. 상기 "하이드록시프롤린(Hydroxyproline)"은 프롤린(Proline)의 4번 위치의 탄소에 하이드록시기(-OH)가 붙은 아미노산 성분으로 콜라겐에 다량 함유되어 있다. 상기 하이드록시프롤린은 콜라겐 섬유의 수축작용을 촉진하고 엘라스틴을 보호하는데 관여하며, 피부 노화를 촉진하는 활성산소로부터 피부를 보호함으로써 탄력 있고 생기 있는 피부 관리에 도움을 준다. 또한, 상기 "프롤린(Proline)"은 단백질을 구성하는 지방족 아미노산의 하나로 하이드록시프롤린과 함께 콜라겐의 대부분을 차지하고 있다. 상기 프롤린은 피부에 컨디셔닝 역할을 하여 윤기 있고 탄력 있는 피부 관리에 도움을 준다. 또한, 상기 "글리신(Glycine)"은 콜라겐을 구성하는 필수 아미노산으로서 우수한 보습력을 가지며, 피부 세포에 빠르게 침투하여 피부에 윤기와 촉촉함을 준다. As used herein, the term "collagen" is a type of protein and constitutes bone, skin, cartilage, connective tissue, etc. depending on the type. Numerous collagen synthesis genes are involved in collagen synthesis, and matrix metalloproteinases (MMPs) that degrade connective tissue components including collagen exist. Aging reduces collagen synthesis and increases the activity of MMPs enzymes that decompose collagen, which increases the degradation of collagen, reducing elasticity and increasing wrinkles. Amino acids constituting collagen are mostly hydroxyproline, proline, and glycine. Accordingly, the composition according to one aspect may include, as an active ingredient, hydroxyproline, proline, and glycine, or a mixture thereof constituting collagen as amino acids isolated from apricots. The "hydroxyproline" is an amino acid component in which a hydroxyl group (-OH) is attached to the carbon at position 4 of proline and is contained in a large amount in collagen. The hydroxyproline is involved in promoting the contraction of collagen fibers and protecting elastin, and helps to manage elastic and lively skin by protecting the skin from active oxygen that promotes skin aging. In addition, the "Proline" is one of the aliphatic amino acids constituting protein and accounts for most of collagen together with hydroxyproline. The proline plays a role in conditioning the skin to help manage shiny and elastic skin. In addition, the "glycine (Glycine)" is an essential amino acid constituting collagen, has excellent moisturizing power, and quickly penetrates into skin cells to give luster and moisture to the skin.

일 실시예에서는 살구에서 분리된 아미노산 농축액이 항노화 및 항주름 인자, 예를 들어 COL1A1의 함량을 증가시키거나 또는 자외선에 의해 증가된 MMP-1의 발현을 감소시키고, 피부 보습 및 피부 장벽 관련 인자인 히알루론산 합성 효소(Hyaluronan synthase 3, HAS3) 또는 아쿠아포린 3(Aquaporin 3, AQP3)의 발현을 증가시키는 것을 확인하였다. 따라서, 살구에서 분리된 아미노산 농축액을 포함하는 조성물은 피부 미용 개선 효과, 예를 들어, 피부 노화 억제, 피부 장벽 강화, 피부 주름 억제 또는 피부 보습 효과를 갖는 것일 수 있다. In one embodiment, the amino acid concentrate isolated from apricots increases the content of anti-aging and anti-wrinkle factors, such as COL1A1, or reduces the expression of MMP-1, which is increased by ultraviolet rays, and skin moisturizing and skin barrier-related factors. It was confirmed that the expression of hyaluronan synthase 3 (HAS3) or aquaporin 3 (AQP3) was increased. Therefore, a composition comprising an amino acid concentrate isolated from apricot may have a skin beauty improvement effect, for example, skin aging inhibition, skin barrier strengthening, skin wrinkle inhibition, or skin moisturizing effect.

일 구체예에 있어서, 상기 조성물은 상기 피부 상태 개선 또는 피부 미용 개선용인 것일 수 있다. 예를 들어, 상기 피부 상태 또는 피부 미용 개선은 피부 노화 억제 또는 개선, 항 주름, 피부 탄력, 피부 재생, 피부 장벽 강화, 또는 피부 보습인 것일 수 있다. In one embodiment, the composition may be for improving the skin condition or improving skin beauty. For example, the skin condition or skin beauty improvement may be suppression or improvement of skin aging, anti-wrinkle, skin elasticity, skin regeneration, skin barrier strengthening, or skin moisturizing.

본 명세서에서 용어, "피부 노화"란 나이가 들어가면서 피부에 나타나게 되는 유형과 무형상의 변화를 통틀어 말하는 것으로, 예컨대 표피 두께가 얇아지는 현상, 진피의 세포 수나 혈관 수, DNA 손상복구 능력, 세포교체주기, 상처 회복, 피부장벽기능, 표피의 수분 유지, 땀분비, 피지분비, 비타민D 생산, 물리적 손상방어, 화학물질 제거능력, 면역반응, 감각 기능, 체온조절의 감소를 말한다. 특히, 피부 노화의 주요한 증상으로 주름 및 탄력 저하가 있으며, 이는 진피 내 주 단백질인 콜라겐 및 엘라스틴(elastin)의 감소와 이들 탄력 섬유의 네트워크 변형에 의한 것으로 알려져 있다. 진피와 표피에 존재하는 엘라스틴, 피브로넥틴(fibronectin)이 촘촘하게 네트워크를 구성하여 피부 쿠션층을 유지하고 있으나, 노화에 의해 콜라겐 섬유의 수가 줄어들고 이들이 조각화되어 꼬이면서 탄력 섬유의 네트워크 밀도가 감소함에 따라 정상적인 피부 지탱력을 상실하게 된다. As used herein, the term "skin aging" refers to both tangible and intangible changes that appear in the skin with age, such as thinning of the epidermis, number of cells or blood vessels in the dermis, DNA damage repair ability, cell replacement cycle , wound healing, skin barrier function, epidermal moisture retention, sweat secretion, sebum secretion, vitamin D production, physical damage defense, chemical substance elimination ability, immune response, sensory function, and decrease in body temperature control. In particular, wrinkles and loss of elasticity are the main symptoms of skin aging, which are known to be caused by the reduction of collagen and elastin, which are the main proteins in the dermis, and the network deformation of these elastic fibers. Elastin and fibronectin, which exist in the dermis and epidermis, form a dense network to maintain the skin cushion layer. loses its holding power.

상기 조성물은 외인성 요인 또는 내인성 요인에 의해 유발되는 피부 노화 개선용일 수 있다. 상기 외인성 요인은 여러 가지 외부 요인, 예컨대 자외선(광)을 말하고 내인성 요인은 연대기적 요인이라고도 지칭되며 주로 시간의 흐름에 의해 발생하는 요인을 말한다. 즉, 상기 피부 노화는 구체적으로는 자외선, 공해, 담배연기, 화학물질 등에 의한 외부 자극에 의해 유도되는 조기 노화 증상 뿐만 아니라, 나이가 들어감에 의해 피부세포의 증식이 감소함에 따라 발생하는 자연 노화 현상을 포함하며 주름, 탄력 감소, 피부 쳐짐 및 건조 현상 등을 모두 포함하는 개념이다. 또한 주름은 내ㆍ외부 요인의 변화에 의한 자극이 피부조직을 구성하고 있는 성분을 변화시켜 주름을 유발하는 것을 포함한다. The composition may be used to improve skin aging caused by exogenous factors or endogenous factors. The extrinsic factor refers to various external factors, such as ultraviolet rays (light), and the endogenous factor is also referred to as a chronological factor and refers to a factor mainly caused by the passage of time. That is, the skin aging is specifically a natural aging phenomenon that occurs as the proliferation of skin cells decreases with age as well as premature aging symptoms induced by external stimuli such as ultraviolet rays, pollution, cigarette smoke, chemicals, etc. It is a concept that includes wrinkles, loss of elasticity, skin sagging and dryness. In addition, wrinkles include stimulation caused by changes in internal and external factors that cause wrinkles by changing components constituting skin tissue.

상기 노화는 광노화일 수 있다. 본 명세서에서 용어, "광노화(Photoaging)"는 외부 환경적인 요인에 의해 유발되는 현상으로, 가장 대표적인 인자로는 자외선이 있다. 자외선은 단백질 분해효소의 활성화와 기질단백질의 사슬절단 및 비정상적인 교차결합 등의 생체 구성 성분들의 손상을 가져오고, 이러한 메커니즘의 반복은 외관상으로도 확연한 피부노화를 초래하게 된다. The aging may be photoaging. As used herein, the term "photoaging" is a phenomenon caused by external environmental factors, and the most representative factor is ultraviolet rays. Ultraviolet rays cause damage to biocomponents such as activation of proteolytic enzymes, chain scission of matrix proteins, and abnormal cross-linking, and repetition of these mechanisms results in apparent skin aging.

본 명세서에서 용어, "주름"은 피부의 탄력성이 상실되어 느슨해진 상태를 의미하며, 예를 들면 피부가 접히는 것일 수 있다. 상기 "피부 주름 예방 또는 개선"이란 주름과 관련된 인자의 발현을 억제하여 주름을 방지 또는 개선하거나, 콜라겐 총량을 증가시키는 모든 작용을 의미할 수 있다.As used herein, the term "wrinkle" refers to a state in which elasticity of the skin is lost and loosened, and for example, the skin may be folded. The "prevention or improvement of skin wrinkles" may mean any action of preventing or improving wrinkles by suppressing the expression of wrinkle-related factors or increasing the total amount of collagen.

상기 "피부 장벽 강화"는 피부 가장 바깥쪽에 위치하여 수분과 영양 손실을 막아주는 피부 장벽의 기능이 증진되는 모든 작용을 의미할 수 있다. 또한, "피부 장벽 기능 손상"은 피부 장벽의 기능이 저하되거나 손상되어 피부에 나타나는 모든 변화를 의미할 수 있다. 예를 들어, 피부 주름 증가, 건조, 피부염, 아토피 피부염, 알레르기성 피부염, 여드름 등을 포함할 수 있다.The "strengthen the skin barrier" may refer to any action that enhances the function of the skin barrier, which is located at the outermost layer of the skin and prevents loss of moisture and nutrients. In addition, "damaged skin barrier function" may refer to all changes in the skin due to a decrease or damage to the function of the skin barrier. Examples include increased skin wrinkling, dryness, dermatitis, atopic dermatitis, allergic dermatitis, acne, and the like.

상기 "피부 보습"은 피부 수분을 유지하거나 수분 손실을 방지하는 모든 작용을 의미할 수 있다.The "moisturizing skin" may refer to any action that maintains skin moisture or prevents moisture loss.

일 구체예에 있어서, 상기 조성물은 화장료 조성물인 것일 수 있다. In one embodiment, the composition may be a cosmetic composition.

상기 화장료 조성물은 예를 들면, 유연화장수, 영양화장수, 마사지크림, 영양크림, 에센스, 팩, 젤, 앰플 또는 피부 점착 타입의 화장료 제형을 갖는 것일 수 있다.The cosmetic composition may have, for example, softening lotion, nutrient lotion, massage cream, nutrient cream, essence, pack, gel, ampoule, or skin-adhesive cosmetic formulation.

상기 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효성분으로서 상기 조성물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함할 수 있으며, 예를 들면, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료 및 향료와 같은 통상적인 보조제 및 담체를 포함할 수 있다.Ingredients included in the cosmetic composition may include ingredients commonly used in cosmetic compositions other than the composition as active ingredients, for example, conventional adjuvants and carriers such as stabilizers, solubilizers, vitamins, pigments and flavors. can include

다른 구체예에 있어서, 상기 조성물은 피부 외용제 조성물인 것일 수 있다. In another embodiment, the composition may be a composition for external application for skin.

상기 피부외용제는 크림, 겔, 연고, 피부 유화제, 피부 현탁액, 경피전달성 패치, 약물 함유 붕대, 로션, 또는 그 조합일 수 있다. 상기 피부외용제는 통상 화장품이나 의약품 등의 피부외용제에 사용되는 성분, 예를 들면 수성성분, 유성성분, 분말성분, 알코올류, 보습제, 증점제, 자외선흡수제, 미백제, 방부제, 산화방지제, 계면활성제, 향료, 색제, 각종 피부 영양제, 또는 이들의 조합과 필요에 따라서 적절하게 배합될 수 있다. 상기 피부외용제는, 에데트산이나트륨, 에데트산삼나트륨, 시트르산나트륨, 폴리인산나트륨, 메타인산나트륨, 글루콘산 등의 금속봉쇄제, 카페인, 탄닌, 벨라파밀, 감초추출물, 글라블리딘, 칼린의 과실의 열수추출물, 각종생약, 아세트산토코페롤, 글리틸리틴산, 트라넥삼산 및 그 유도체 또는 그 염등의 약제, 비타민 C, 아스코르브산인산마그네슘, 아스코르브산글루코시드, 알부틴, 코지산, 글루코스, 프룩토스, 트레할로스 등의 당류 등도 적절하게 배합할 수 있다.The external skin preparation may be a cream, gel, ointment, skin emulsifier, skin suspension, transdermal delivery patch, drug-containing bandage, lotion, or a combination thereof. The external skin preparation is a component usually used in external preparations for skin such as cosmetics or pharmaceuticals, for example, water-based components, oil-based components, powder components, alcohols, moisturizers, thickeners, ultraviolet absorbers, whitening agents, preservatives, antioxidants, surfactants, and fragrances. , colorants, various skin nutrients, or combinations thereof and may be suitably blended as needed. The external skin preparations include metal sequestering agents such as disodium edetate, trisodium edetate, sodium citrate, sodium polyphosphate, sodium metaphosphate, and gluconic acid, caffeine, tannin, bellapamil, licorice extract, glabridin, and calin. Hot-water extracts of fruits, various herbal medicines, tocopherol acetate, glycyrrhizic acid, tranexamic acid and its derivatives or salts and other drugs, vitamin C, magnesium ascorbate phosphate, ascorbic acid glucoside, arbutin, kojic acid, glucose, fructose, Sugars, such as trehalose, etc. can also be mix|blended suitably.

또 다른 구체예에 있어서, 상기 조성물은 건강기능식품 조성물인 것일 수 있다. In another embodiment, the composition may be a health functional food composition.

상기 건강기능식품 조성물은 상기 조성물 단독 또는 다른 식품 또는 식품 성분과 함께 사용될 수 있고, 통상적인 방법에 따라 적절하게 사용될 수 있다. 유효 성분의 혼합양은 사용 목적 (예방, 건강 또는 치료적 처치)에 따라 적합하게 결정될 수 있다. 일반적으로, 식품 또는 음료의 제조시에 본 명세서의 조성물은 원료에 대하여 15 중량부 이하의 양으로 첨가될 수 있다. 상기 건강기능식품의 종류에는 특별한 제한은 없다. 건강기능식품의 종류 중 음료 조성물은 통상의 음료와 같이 여러 가지 향미제 또는 천연 탄수화물 등을 추가 성분으로서 함유할 수 있다. 상기 천연 탄수화물은 포도당, 과당과 같은 모노사카라이드, 말토스, 슈크로스와 같은 디사카라이드, 및 덱스트린, 사이클로덱스트린과 같은 폴리사카라이드, 자일리톨, 소르비톨, 에리트리톨 등의 당알콜이다. 감미제로서는 타우마틴, 스테비아 추출물과 같은 천연 감미제나, 사카린, 아스파르탐과 같은 합성 감미제 등을 사용할 수 있다. 상기 건강식품 조성물은 또한 영양제, 비타민, 전해질, 풍미제, 착색제, 펙트산 및 그의 염, 알긴산 및 그의 염, 유기산, 보호성 콜로이드 증점제, pH 조절제, 안정화제, 방부제, 글리세린, 알콜, 탄산 음료에 사용되는 탄산화제, 또는 그 조합을 함유할 수 있다. 상기 건강기능식품 조성물은 또한, 천연 과일쥬스, 과일쥬스 음료, 야채 음료의 제조를 위한 과육, 또는 그 조합을 함유할 수 있다.The health functional food composition may be used alone or in combination with other foods or food ingredients, and may be appropriately used according to conventional methods. The mixing amount of the active ingredient may be appropriately determined depending on the purpose of use (prevention, health or therapeutic treatment). In general, when preparing food or beverage, the composition of the present specification may be added in an amount of 15 parts by weight or less based on the raw material. There is no particular limitation on the type of health functional food. Among the types of health functional foods, beverage compositions may contain various flavoring agents or natural carbohydrates as additional components, like conventional beverages. The natural carbohydrates include monosaccharides such as glucose and fructose, disaccharides such as maltose and sucrose, polysaccharides such as dextrin and cyclodextrin, and sugar alcohols such as xylitol, sorbitol, and erythritol. As the sweetener, natural sweeteners such as thaumatin and stevia extract, or synthetic sweeteners such as saccharin and aspartame may be used. The health food composition may also contain nutrients, vitamins, electrolytes, flavors, colorants, pectic acid and its salts, alginic acid and its salts, organic acids, protective colloidal thickeners, pH adjusters, stabilizers, preservatives, glycerin, alcohol, and carbonated beverages. carbonation agent used, or a combination thereof. The health functional food composition may also contain natural fruit juice, fruit juice beverages, fruit flesh for preparing vegetable beverages, or a combination thereof.

다른 양상은 유효한 양의 상기 조성물을 그를 필요로 하는 개체에 처리 또는 투여하는 단계를 포함하는 개체의 피부 상태를 예방, 개선 또는 치료하는 방법을 제공한다. 상기 피부 상태의 구체적인 내용은 전술한 바와 같다.Another aspect provides a method for preventing, improving or treating a skin condition in a subject comprising treating or administering to a subject in need thereof an effective amount of the composition. Details of the skin condition are as described above.

본 명세서에서 용어, "투여하는", "도입하는", 및 "이식하는"은 상호교환적으로 사용되고 일 구체예에 따른 조성물의 원하는 부위로의 적어도 부분적 국소화를 초래하는 방법 또는 경로에 의한 개체 내로의 일 구체예에 따른 조성물의 배치를 의미할 수 있다. As used herein, the terms "administering," "introducing," and "implanting" are used interchangeably and according to one embodiment into a subject by a method or route that results in at least partial localization of a composition to a desired site. It may mean the arrangement of the composition according to one embodiment of.

투여는 당업계에 알려진 방법에 의하여 투여될 수 있다. 투여는 예를 들면, 정맥내, 근육내, 경구, 경피 (transdermal), 점막, 코안 (intranasal), 기관내 (intratracheal) 또는 피하 투여와 같은 경로로, 임의의 수단에 의하여 개체로 직접적으로 투여될 수 있다. 상기 투여는 전신적으로 또는 국부적으로 투여될 수 있다.Administration may be administered by a method known in the art. Administration can be administered directly to a subject by any means, for example, by routes such as intravenous, intramuscular, oral, transdermal, mucosal, intranasal, intratracheal or subcutaneous administration. can The administration may be administered systemically or locally.

상기 개체는 포유동물, 예를 들면, 사람, 소, 말, 돼지, 개, 양, 염소, 또는 고양이일 수 있다. 상기 개체는 피부미용 개선, 예를 들어 피부 보습, 피부 장벽 강화, 피부 주름 개선 효과를 필요로 하는 개체일 수 있다.The subject may be a mammal, such as a human, cow, horse, pig, dog, sheep, goat, or cat. The subject may be a subject in need of skin beauty improvement, for example, skin moisturizing, skin barrier strengthening, and skin wrinkle improvement effects.

상기 투여는 일 구체예에 따른 조성물을 개체당 일당 0.1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 예를 들면, 0.1 ㎎ 내지 500 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 100 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 50 ㎎, 0.1 ㎎ 내지 25 ㎎, 1 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 1 ㎎ 내지 500 ㎎, 1 ㎎ 내지 100 ㎎, 1 ㎎ 내지 50 ㎎, 1 ㎎ 내지 25 ㎎, 5 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 5 ㎎ 내지 500 ㎎, 5 ㎎ 내지 100 ㎎, 5 ㎎ 내지 50 ㎎, 5 ㎎ 내지 25 ㎎, 10 ㎎ 내지 1,000 ㎎, 10 ㎎ 내지 500 ㎎, 10 ㎎ 내지 100 ㎎, 10 ㎎ 내지 50 ㎎, 또는 10 ㎎ 내지 25 ㎎을 투여하는 것일 수 있다. 다만, 투여량은 제제화 방법, 투여 방식, 환자의 연령, 체중, 성별, 병적 상태, 음식, 투여 시간, 투여 경로, 배설 속도 및 반응 감응성과 같은 요인들에 의해 다양하게 처방될 수 있고, 당업자라면 이러한 요인들을 고려하여 투여량을 적절히 조절할 수 있다. 투여 횟수는 1일 1회 또는 임상적으로 용인 가능한 부작용의 범위 내에서 2회 이상이 가능하고, 투여 부위에 대해서도 1개소 또는 2개소 이상에 투여할 수 있으며, 매일 또는 2 내지 5일 간격으로 총 투여 일수는 한번 치료 시 1일에서 30일까지 투여될 수 있다. 필요한 경우, 적정 시기 이후에 동일한 치료를 반복할 수 있다. 인간 이외의 동물에 대해서도, kg당 인간과 동일한 투여량으로 하거나, 또는 예를 들면 목적의 동물과 인간과의 기관(심장 등)의 용적비(예를 들면, 평균값) 등으로 상기의 투여량을 환산한 양을 투여할 수 있다.The administration is 0.1 mg to 1,000 mg per day of the composition according to one embodiment, for example, 0.1 mg to 500 mg, 0.1 mg to 100 mg, 0.1 mg to 50 mg, 0.1 mg to 25 mg, 1 mg to 1,000 mg, 1 mg to 500 mg, 1 mg to 100 mg, 1 mg to 50 mg, 1 mg to 25 mg, 5 mg to 1,000 mg, 5 mg to 500 mg, 5 mg to 100 mg, 5 mg to 50 mg , 5 mg to 25 mg, 10 mg to 1,000 mg, 10 mg to 500 mg, 10 mg to 100 mg, 10 mg to 50 mg, or 10 mg to 25 mg may be administered. However, the dosage may be prescribed in various ways depending on factors such as formulation method, administration method, patient's age, weight, sex, pathological condition, food, administration time, administration route, excretion rate and reaction sensitivity, and those skilled in the art can Dosage can be appropriately adjusted in consideration of these factors. The number of administrations can be once a day or twice or more within the range of clinically acceptable side effects, and the administration site can be administered to one or more than two sites, daily or every 2 to 5 days, total The number of administration days may be administered from 1 day to 30 days per treatment. If necessary, the same treatment can be repeated after a titration period. For non-human animals, the same dosage per kg as for humans is used, or the above dosage is converted by the volume ratio (eg, average value) of the organ (heart, etc.) between the target animal and the human. A single dose can be administered.

다른 양상은 건조된 살구에 식물성 효소를 혼합하는 단계; 및 상기 효소와 혼합된 살구에서 아미노산을 가수분해하는 단계;를 포함하는 살구에서 콜라겐의 구성 아미노산을 분리하는 방법을 제공한다. Another aspect is mixing vegetable enzymes with dried apricots; and hydrolyzing amino acids in the apricot mixed with the enzyme.

일 구체예에 있어서, 상기 효소는 식물성 천연 효소인 것일 수 있다. 상기 효소는 파파인, 파인애플, 배, 무화과, 생강, 아스파라거스, 키위, 민트, 멜론 등에서 유래된 것일 수 있으며 예를 들어, 파파인(papain), 카이모파파인(chymopapain), 브로멜라인(bromelain) 등인 것일 수 있다. In one embodiment, the enzyme may be a natural vegetable enzyme. The enzyme may be derived from papain, pineapple, pear, fig, ginger, asparagus, kiwi, mint, melon, etc., and may be, for example, papain, chymopapain, bromelain, etc. there is.

또한, 상기 아미노산을 가수분해 하는 단계에서 에어 버블 브루잉(Air bubble brewing) 공정을 4 내지 48 시간 동안 수행하는 것일 수 있다. In addition, in the step of hydrolyzing the amino acid, an air bubble brewing process may be performed for 4 to 48 hours.

본 명세서에서, 용어 "에어 버블 브루잉(Air bubble brewing)"은 물 속에서 1 ㎛ 내지 5㎜ 사이즈의 미세 공기방울을 생성시키는 기술로, 외부로부터 공급된 대기압 이상의 압력으로 물 속에서 산소 기체에 의한 버블을 형성할 수 있다. 상기 에어 버블 브루잉 공정을 수행함으로써 물리적 교반에 의한 아미노산의 가수분해를 촉진하는 효과가 있다. In the present specification, the term "air bubble brewing" is a technique for generating fine air bubbles of 1 μm to 5 mm in size in water, and oxygen gas in water at a pressure higher than atmospheric pressure supplied from the outside. bubbles can be formed. By performing the air bubble brewing process, there is an effect of promoting hydrolysis of amino acids by physical stirring.

일 구체예에 있어서, 상기 에어 버블 브루잉 공정은 4 내지 48시간, 4 내지 36 시간, 4 내지 24 시간, 12 내지 24 시간, 18 내지 36 시간, 18 내지 30 시간, 24 내지 36 시간 또는 24 내지 32시간 동안 수행될 수 있다. 이때, 에어 브루잉 공정의 수행 시간이 상기 범위 미만인 경우, 가수분해가 원활하게 진행되지 않아 콜라겐의 구성 아미노산인 하이드록시프롤린, 프롤린, 글리신 및/또는 이들의 혼합물이 충분히 생성되지 않는다는 문제점이 있으며, 상기 범위를 초과하는 경우, 살구에서 분해된 아미노산이 부패 또는 변질될 뿐만 아니라 공정비가 상승하는 문제점이 있다. In one embodiment, the air bubble brewing process is 4 to 48 hours, 4 to 36 hours, 4 to 24 hours, 12 to 24 hours, 18 to 36 hours, 18 to 30 hours, 24 to 36 hours, or 24 to 24 hours. It can be performed for 32 hours. At this time, when the air brewing process takes less than the above range, there is a problem in that hydrolysis does not proceed smoothly, so that hydroxyproline, proline, glycine and / or mixtures thereof, which are constituent amino acids of collagen, are not sufficiently produced. When the above range is exceeded, there is a problem in that amino acids decomposed from apricots not only decay or deteriorate, but also increase processing costs.

일 실시예에서는 살구 추출물과 비교하여 건조 및 식물성 효소와 혼합된 살구를 에어 버블 브루잉 공정을 수행하여 아미노산을 분리하여 제조한 파우더에서 COL1A 발현 증가, 증가된 MMP-1의 발현 감소, 엘라스틴, HAS3 및 AQP3 발현 증가 효과가 현저한 것을 확인하였다. 따라서, 일 양상의 방법에 따라 분리된 아미노산은 살구 추출물과 비교하여 콜라겐을 구성하는 하이드록시프롤린, 프롤린 및 글리신의 함량이 현저하게 높은 바, 상기 아미노산에 의한 항노화 활성, 피부 장벽 강화, 피부 보습 활성이 우수하다. In one embodiment, compared to apricot extract, dried and mixed apricots with vegetable enzymes were subjected to an air bubble brewing process to isolate amino acids, resulting in increased COL1A expression, decreased expression of MMP-1, elastin, and HAS3. And it was confirmed that the effect of increasing AQP3 expression was remarkable. Therefore, the amino acid isolated according to the method of one aspect has a significantly higher content of hydroxyproline, proline and glycine constituting collagen compared to the apricot extract, and anti-aging activity, skin barrier strengthening, and skin moisturizing by the amino acid activity is excellent.

일 양상에 따른 조성물은 콜라겐을 구성하는 아미노산을 고 함량으로 포함하고 있는바, 피부 관련 상태의 예방, 개선 또는 치료에 유용하게 사용될 수 있다. Since the composition according to one aspect contains a high content of amino acids constituting collagen, it can be usefully used for preventing, improving, or treating skin-related conditions.

도 1은 일 구체예에 따른 농축액이 MMP-1의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 2는 일 구체예에 따른 농축액이 COL1A1의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 3은 세포 내 콜라겐과 엘라스틴의 위치와 생성량을 형광 항체로 관찰한 사진이다.
도 4는 형광 항체를 통하여 세포 내 엘라스틴의 위치와 생성량을 관찰한 사진이다.
도 5는 일 구체예에 따른 농축액이 HAS3의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
도 6은 일 구체예에 따른 농축액이 AQP3의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.
1 is a graph showing the effect of a concentrate according to one embodiment on the expression of MMP-1.
Figure 2 is a graph showing the effect of the concentrate according to one embodiment on the expression of COL1A1.
3 is a photograph of the position and amount of production of collagen and elastin in cells observed with a fluorescent antibody.
Figure 4 is a photograph of the location and production of elastin in cells observed through a fluorescent antibody.
Figure 5 is a graph showing the effect of the concentrate according to one embodiment on the expression of HAS3.
Figure 6 is a graph showing the effect of the concentrate according to one embodiment on the expression of AQP3.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 바람직한 실시예를 제시한다. 그러나 하기의 실시예는 본 발명을 보다 쉽게 이해하기 위하여 제공되는 것일 뿐, 하기 실시예에 의해 본 발명의 내용이 한정되는 것은 아니다.Hereinafter, a preferred embodiment is presented to aid understanding of the present invention. However, the following examples are provided to more easily understand the present invention, and the content of the present invention is not limited by the following examples.

[실시예][Example]

실시예 1. 살구 아미노산 농축액의 제조 Example 1. Preparation of Apricot Amino Acid Concentrate

살구를 자연 건조한 뒤 세척하였다. 이후, 건조한 살구에 식물성 천연 효소를 혼합한 뒤 수조에서 미세 공기방울을 생성시키는 에어 버블 브루잉(Air bubble brewing) 공정을 24시간 동안 수행하여 살구의 과육에서 콜라겐 성분을 가수분해하였다. 가수분해된 콜라겐 성분을 분리 및 추출하고 2회에 걸쳐 여과하여 여과액을 수득한 뒤 농축된 콜라겐 성분만을 분리하였다. 이후, 농축된 콜라겐 성분들을 12~24시간 동안 동결건조하여 살구 농축 콜라겐 성분 파우더를 제조하였다. 제조된 파우더를 15 kGy의 감마선을 조사하여 살균처리 하였다. The apricots were naturally dried and then washed. Thereafter, the dried apricots were mixed with natural plant enzymes and then subjected to an air bubble brewing process for generating fine air bubbles in a water bath for 24 hours to hydrolyze the collagen component in the flesh of the apricots. After separating and extracting the hydrolyzed collagen component and filtering twice to obtain a filtrate, only the concentrated collagen component was isolated. Thereafter, the concentrated collagen components were lyophilized for 12 to 24 hours to prepare an apricot concentrated collagen component powder. The prepared powder was sterilized by irradiating gamma rays of 15 kGy.

[비교예][Comparative example]

비교예 1. 살구 추출물의 제조 Comparative Example 1. Preparation of apricot extract

살구를 자연 건조한 뒤 세척하였다. 이후, 건조한 살구를 50℃의 물을 사용하여 살구 추출물을 제조하였다. The apricots were naturally dried and then washed. Thereafter, an apricot extract was prepared using dried apricots with 50° C. water.

[실험예][Experimental example]

실험예 1. 콜라겐 구성 성분의 함량 확인Experimental Example 1. Confirmation of content of collagen components

상기 실시예 1의 살구 아미노산 농축액에 포함된 콜라겐 구성 성분의 함량을 고성능액체크로마토그래피 (High Performance Liquid Chromatography; HPLC) 분석을 통해 확인하였다. 구체적으로, 상기 실시예 1에서 제조한 농축액 1.0 ㎕를 컬럼에 주입한 후, 2.0 ㎖/min 유속으로 용매를 흘려주었다. 이때, 용매는 2개의 이동상인 40 mM Phosphate buffer pH 7.8 (용매 A)와 메탄올/아세토나이트릴/물 (45/45/10, v/v, 용매 B)로 구성하였으며, 다음과 같은 농도 구배 조건을 사용하였다: 50~100 % 용매 A (20분). 또한 검출 파장은 262 ㎚, 338 ㎚로 하였다. 비교예 1의 추출물도 동일한 방법으로 실험하였다. The content of collagen components contained in the apricot amino acid concentrate of Example 1 was confirmed through High Performance Liquid Chromatography (HPLC) analysis. Specifically, after injecting 1.0 μl of the concentrate prepared in Example 1 into the column, the solvent was flowed at a flow rate of 2.0 ml/min. At this time, the solvent was composed of two mobile phases, 40 mM Phosphate buffer pH 7.8 (solvent A) and methanol / acetonitrile / water (45/45/10, v / v, solvent B), and the following concentration gradient conditions was used: 50-100% solvent A (20 min). In addition, the detection wavelengths were 262 nm and 338 nm. The extract of Comparative Example 1 was also tested in the same way.

성분ingredient 실시예 1Example 1 비교예 1Comparative Example 1 하이드록시프롤린 (Hydroxyproline)Hydroxyproline 48.34 ㎎/㎏48.34 mg/kg 19.59 ㎎/㎏19.59 mg/kg 프롤린 (Proline)Proline 178.78 ㎎/㎏178.78 mg/kg 66.58 ㎎/㎏66.58 mg/kg 글리신 (Glycine)Glycine 41.04 ㎎/㎏41.04 mg/kg 0.2 ㎎/㎏0.2 mg/kg

그 결과, 상기 표 1에 나타낸 바와 같이 실시예 1은 비교예 1에 비해 하이드록시프롤린, 프롤린 및 글리신의 함량이 현저하게 높았다. 구체적으로, 실시예 1은 비교예 1에 비해 하이드록시프폴린, 프롤린 및 글리신의 함량이 각각 2.5배, 2.7배 및 200배 이상 높게 측정되었다. As a result, as shown in Table 1, Example 1 had significantly higher contents of hydroxyproline, proline, and glycine than Comparative Example 1. Specifically, in Example 1, the contents of hydroxyproline, proline, and glycine were measured to be 2.5 times, 2.7 times, and 200 times higher than those of Comparative Example 1, respectively.

즉, 일 구체예에 따른 살구 농축액은 살구 추출물에 비해 콜라겐을 구성하는 아미노산의 함량이 현저하게 높은 것을 확인할 수 있다. That is, it can be seen that the apricot concentrate according to one embodiment has a significantly higher content of amino acids constituting collagen than the apricot extract.

실험예 2. 항노화 활성 1Experimental Example 2. Anti-aging activity 1

상기 실시예 1의 살구 아미노산 농축액이 노화피부 노화 및 주름 생성과 관련된 인자에 미치는 영향을 분석하였다. The effect of the apricot amino acid concentrate of Example 1 on factors related to aging skin aging and wrinkle formation was analyzed.

구체적으로, 인간 섬유아세포 세포주(Human dermal fibroblast, Hs68)를 10% 우태아혈청(FBS) 및 1% 페니실린를 포함하는 DMEM(Dulbecco's modified Eagle's medium)에서 배양하였고, 배양은 37℃, 5% CO2 및 습도 95% 조건의 배양기에서 24시간 동안 수행하였다. 이후 배지를 제거하고 DPBS를 넣은 후 20 mJ/㎠의 UVB를 조사하거나 조사하지 않았다. UVB 조사 직후 DPBS를 제거하고 FBS가 없는 배지로 갈아 준 후, 실시예 1 및 비교예 1을 농도별(10ppm, 100ppm)로 처리하고 24시간 동안 추가 배양하였다. 음성 대조군으로 순수 증류수 첨가 및 양성대조군으로서 1 μM EGCG 첨가군을 사용하였다. 이후, 각 배지의 세포를 수득하여 냉각된 PBS로 세척하고 RNAprep 키트(Monarch®Total RNAprep Kit, NEB, 미국)를 이용하여 RNA를 분리한 뒤 nanodrop으로 260 ㎚에서 RNA를 정량한 후, 각각 2㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA를 주형으로 타겟 유전자인 COL1A1, 및 MMP-1에 대하여 사이버그린 (SYBR Green supermix, Applied Biosystems, USA)을 프라이머(하기 표 2 참조) 및 cDNA와 함께 첨가하여 실시간(real-time) PCR 기계 (Step One Plus, Applied Biosystems, 미국)에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 수행하였다. 실시간 PCR 반응은 94℃에서 5분 동안 중합효소 활성화 후, 95℃에서 30초, 55℃에서 30초, 72℃에서 30초 반응의 사이클을 40 사이클로 반복하여 수행하였다. COL1A1와 MMP-1 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였고, 그 결과를 도 1 및 도 2에 각각 나타내었다. Specifically, a human dermal fibroblast cell line (Hs68) was cultured in DMEM (Dulbecco's modified Eagle's medium) containing 10% fetal bovine serum (FBS) and 1% penicillin, and the culture was carried out at 37°C, 5% CO 2 and It was performed for 24 hours in an incubator at 95% humidity. Thereafter, the medium was removed, DPBS was added, and 20 mJ/cm 2 of UVB was irradiated or not irradiated. Immediately after UVB irradiation, DPBS was removed and replaced with FBS-free medium, and Example 1 and Comparative Example 1 were treated at different concentrations (10 ppm, 100 ppm) and further cultured for 24 hours. Pure distilled water was added as a negative control group and 1 µM EGCG was added as a positive control group. Thereafter, cells in each medium were obtained, washed with cold PBS, and RNA was isolated using an RNAprep kit (Monarch®Total RNAprep Kit, NEB, USA), RNA was quantified at 260 nm by nanodrop, and each 2 μg cDNA was synthesized in an amplifier using the RNA of (C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, USA). Using the synthesized cDNA as a template, cybergreen (SYBR Green supermix, Applied Biosystems, USA) was added together with primers (see Table 2 below) and cDNA for the target genes COL1A1 and MMP-1, followed by real-time PCR. Real-time polymerase chain reaction was performed on a machine (Step One Plus, Applied Biosystems, USA). The real-time PCR reaction was performed by repeating 40 cycles of polymerase activation at 94°C for 5 minutes, followed by 95°C for 30 seconds, 55°C for 30 seconds, and 72°C for 30 seconds. The expression levels of the COL1A1 and MMP-1 genes were finally analyzed through correction for the β-actin gene, and the results are shown in FIGS. 1 and 2, respectively.

유전자gene 정방향 프라이머forward primer 역방향 프라이머reverse primer COL1A1COL1A1 5'-GAGGGCCAAGACGAAGACATC-3'5′-GAGGGCCAAGACGAAGACATC-3′ 5'-CAGATCACGTCATCGCACAAC-3'5'-CAGATCACGTCATCGCACAAC-3' MMP-1MMP-1 5'-CGAATTGCCGACAGAGATGA-3'5′-CGAATTGCCGACAGAGATGA-3′ 5'-GTCCCTGAACAGCCCAGTACTT-3'5′-GTCCCTGAACAGCCCAGTACTT-3′ β-actinβ-actin 5'-GGCCATCTCTTGCTCGAAGT-3'5′-GGCCATCTCTTGCTCGAAGT-3′ 5'-GAGACCTTCAACACCCCAGC-3'5′-GAGACCTTCAACACCCCAGC-3′

도 1은 일 구체예에 따른 아미노산 농축액이 MMP-1의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이고, 도 2는 일 구체예에 따른 아미노산 농축액이 COL1A1의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다.1 is a graph showing the effect of an amino acid concentrate according to one embodiment on the expression of MMP-1, and FIG. 2 is a graph showing the effect of an amino acid concentrate according to one embodiment on the expression of COL1A1.

그 결과, 도 1에 나타낸 바와 같이, 실시예 1 및 비교예 1은 자외선에 의해 증가된 MMP-1의 발현을 농도 의존적으로 감소시키는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 실시예 1의 경우, 비교예 1과 비교하여 MMP-1 발현량이 현저하게 감소하는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 도 2에 나타낸 바와 같이, 실시예 1 및 비교예 1은 COL1A1의 발현을 농도 의존적으로 증가시키는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 실시예 1의 경우, 비교예 1과 비교하여 COL1A1 발현량이 유의적으로 증가하는 것을 확인할 수 있었다. As a result, as shown in FIG. 1, it was confirmed that Example 1 and Comparative Example 1 reduced the expression of MMP-1, which was increased by ultraviolet light, in a concentration-dependent manner. In particular, in the case of Example 1, compared to Comparative Example 1, it was confirmed that the MMP-1 expression level was significantly reduced. In addition, as shown in Figure 2, it was confirmed that Example 1 and Comparative Example 1 increased the expression of COL1A1 in a concentration dependent manner. In particular, in the case of Example 1, it was confirmed that the COL1A1 expression level significantly increased compared to Comparative Example 1.

즉, 일 양상에 따른 아미노산 농축액은 자외선에 의해 증가된 MMP-1의 생성을 억제하고, 콜라겐을 증가시킴으로써 탄력 감소, 주름 생성 억제 등과 같은 피부 노화 방지에 탁월한 효과가 있다.That is, the amino acid concentrate according to one aspect inhibits the production of MMP-1 increased by ultraviolet rays and increases collagen, thereby having an excellent effect on preventing skin aging such as reducing elasticity and suppressing wrinkle formation.

실험예 3. 항노화 활성 2Experimental Example 3. Anti-aging activity 2

상기 실험예에서 배양한 세포의 Type 1 콜라겐과 엘라스틴의 세포 내 위치와 생성량을 컨포컬 현미경으로 관찰하였다. The intracellular location and amount of production of Type 1 collagen and elastin in the cells cultured in the above experimental example were observed under a confocal microscope.

구체적으로, 상기 실험예 1의 세포주를 Poly-L-Lysine으로 코팅한 4 well lab-tek chambered cover glass에 3.0ⅹ104 세포/웰로 분주하여 37 ℃, 5% CO2 조건에서 24시간 동안 배양하였다. 이후, 배지를 제거하고 PBS로 세척해 준 후, Serum free media로 교체하여 37℃, 5% CO2 조건 하에서 48시간 배양하였다. 이후, 배지를 제거하고 10% Neutral buffered formalin으로 10분간 고정한 후, 0.5% Trixon X-100으로 Permeabilization을 수행하였다. 이후, 1% BSA(0.01 g/㎖ in PBS)를 첨가한 후 상온에서 1시간 동안 Blocking하고, 1차 항체인 Anti-collagen 1 antibody와 Anti-Elastin antibody를 첨가하여 4℃에서 밤새(overnight) 배양하였다. 다음 날 2차 항체인 Anti-Rabbit 및 Anti-Mouse Antibody를 넣고 상온에서 1시간 동안 빛을 차단한 채로 염색하였다. 이후, Lab-tek cover를 제거한 후 VECTASHIELD® MOUNTING MEDIUM with DAPI 1drop을 첨가하여 coverslip으로 덮어주고 Nail polish로 주변을 발라서 고정한 뒤 완전히 말려서 관찰용 샘플을 제작하였다. 이 후 해당 샘플을 confocal 현미경(Olympus FV 1200)을 이용하여 형광을 관찰하였다. 아스코르브산(Ascorbic acid)은 양성 대조군으로 사용하였다.Specifically, the cell line of Experimental Example 1 was dispensed at 3.0×10 4 cells/well into a 4-well lab-tek chambered cover glass coated with Poly-L-Lysine, and cultured for 24 hours at 37 °C and 5% CO 2 conditions. Thereafter, the medium was removed, washed with PBS, replaced with Serum free media, and cultured for 48 hours at 37°C, 5% CO 2 conditions. Thereafter, the medium was removed and fixed with 10% neutral buffered formalin for 10 minutes, followed by permeabilization with 0.5% Trixon X-100. Then, after adding 1% BSA (0.01 g/ml in PBS), blocking was performed at room temperature for 1 hour, and the primary antibodies, Anti-collagen 1 antibody and Anti-Elastin antibody, were added and incubated overnight at 4°C. did The next day, secondary antibodies, Anti-Rabbit and Anti-Mouse Antibody, were added and stained while blocking light for 1 hour at room temperature. Then, after removing the Lab-tek cover, 1 drop of VECTASHIELD® MOUNTING MEDIUM with DAPI was added, covered with a coverslip, fixed by applying nail polish around the area, and dried completely to prepare a sample for observation. Thereafter, fluorescence of the sample was observed using a confocal microscope (Olympus FV 1200). Ascorbic acid was used as a positive control.

도 3은 세포 내 콜라겐 typeⅠ과 엘라스틴의 위치와 생성량을 형광 항체로 관찰한 사진이다. FIG. 3 is a photograph of the location and amount of intracellular collagen type I and elastin observed with a fluorescent antibody.

도 4는 형광 항체를 통하여 세포 내 엘라스틴의 위치와 생성량을 관찰한 사진이다. Figure 4 is a photograph of the location and production of elastin in cells observed through a fluorescent antibody.

그 결과, 도 3에 나타낸 바와 같이, 실시예 1은 비교예 1과 비교하여 엘라스틴(빨간색)과 콜라겐 typeⅠ(녹색)의 형광 세기가 강하게 나타나는 것을 확인할 수 있었다. 또한, 도 4에 나타낸 바와 같이, 실시예 1은 비교예 1과 비교하여 엘라스틴(빨간색)의 형광 세기가 더 강하게 나타났으며 양성 대조군과 비교하여도 형광 세기가 더 강하게 나타나는 것을 확인할 수 있었다. As a result, as shown in FIG. 3, it was confirmed that Example 1 showed strong fluorescence intensities of elastin (red) and collagen type I (green) compared to Comparative Example 1. In addition, as shown in FIG. 4, Example 1 showed a stronger fluorescence intensity of elastin (red) compared to Comparative Example 1, and it was confirmed that the fluorescence intensity was stronger compared to the positive control group.

즉, 일 양상에 따른 아미노산 농축액은 피부 탄력에 영향을 미치는 인자인 콜라겐과 엘라스틴을 생성을 촉진시킴으로써 피부 탄력을 증가에 도움을 줄 수 있다. That is, the amino acid concentrate according to one aspect can help increase skin elasticity by promoting the production of collagen and elastin, which are factors affecting skin elasticity.

실험예 4. 피부 장벽 강화 및 피부 보습 활성Experimental Example 4. Skin barrier strengthening and skin moisturizing activity

상기 실시예 1의 아미노산 농축액이 피부장벽강화 및 피부 보습 활성에 미치는 영향을 분석하였다. The effect of the amino acid concentrate of Example 1 on skin barrier strengthening and skin moisturizing activity was analyzed.

구체적으로, 인간 각질형성 세포주(human keratinocyte)인 HaCaT 세포를 10% 우혈청 (fetal bovine serum) 및 1% 페니실린을 포함한 DMEM 배지(Dulbecco'smodified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038)에서 배양하였고, 배양은 모두 37℃ 5% CO2 및 습도 95% 조건의 배양기에서 수행하였다. 상기 배양된 세포주에 실시예 1 및 비교예 1을 농도별(10ppm, 100ppm)로 처리하고 24시간 동안 추가 배양하였다. 양성 대조군으로 레티논산(Retionic acid) 1 μM을 사용하였다. 이후, 각 배지의 세포를 회수하여 냉각된 PBS로 세척하고 RNAprep 키트(Monarch® Total RNAprep Kit, NEB, 미국)를 이용하여 RNA를 분리한 뒤 nanodrop으로 260㎚에서 RNA를 정량한 후, 각각 2㎍의 RNA를 사용하여 증폭기에서 cDNA를 합성하였다(C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, 미국). 합성된 cDNA를 주형으로 타겟 유전자인 피부 장벽 강화 및 보습과 관련된 인자인 HAS3(히알루론산 합성 효소), 및 AQP3(아쿠아포린 합성 단백질)에 대한 프라이머(하기 표 3 참조) 및 cDNA와 함께 첨가하여 실시간(real-time) PCR 기계 (Step One Plus, Applied Biosystems, 미국)에서 실시간 중합효소 연쇄반응을 수행하였다. 실시간 PCR 반응은 94℃에서 5분 동안 중합효소 활성화 후, 95℃에서 30초, 55℃에서 30초, 72℃에서 30초 반응의 사이클을 40 사이클로 반복하여 수행하였다. HAS3 및 AQP3 유전자의 발현량은 β-actin 유전자에 대한 보정을 통해 최종적으로 분석하였고, 그 결과를 도 1 및 도 2에 나타내었다. Specifically, human keratinocyte HaCaT cells were cultured in DMEM medium (Dulbecco's modified Eagle's Medium, Gibco 1210-0038) containing 10% fetal bovine serum and 1% penicillin, and the culture was All were performed in an incubator at 37°C, 5% CO 2 and 95% humidity. The cultured cell lines were treated with Example 1 and Comparative Example 1 at different concentrations (10 ppm, 100 ppm) and further cultured for 24 hours. As a positive control, 1 μM of retinoic acid was used. Thereafter, the cells in each medium were collected, washed with chilled PBS, RNA was isolated using an RNAprep kit (Monarch® Total RNAprep Kit, NEB, USA), RNA was quantified at 260 nm with nanodrop, and 2 μg each cDNA was synthesized in an amplifier using the RNA of (C1000 Thermal Cycler, Bio-Rad, USA). The synthesized cDNA was added as a template along with primers (see Table 3 below) and cDNA for HAS3 (hyaluronic acid synthase) and AQP3 (aquaporin synthesis protein), which are factors related to strengthening and moisturizing the skin barrier, which are target genes. Real-time polymerase chain reaction was performed in a real-time PCR machine (Step One Plus, Applied Biosystems, USA). The real-time PCR reaction was performed by repeating 40 cycles of polymerase activation at 94°C for 5 minutes, followed by 95°C for 30 seconds, 55°C for 30 seconds, and 72°C for 30 seconds. The expression levels of the HAS3 and AQP3 genes were finally analyzed through correction for the β-actin gene, and the results are shown in FIGS. 1 and 2 .

유전자gene 정방향 프라이머forward primer 역방향 프라이머reverse primer HAS3HAS3 5'-CTTAAGGGTTGCTTGCTTGC-3'5′-CTTAAGGGTTGCTTGCTTGC-3′ 5'-GTTCGTGGGAGATGAAGGAA-3'5′-GTTCGTGGGAGATGAAGGAA-3′ AQP3AQP3 5'-GTCACTCTGGGCATCCTCAT-3'5′-GTCACTCTGGGCATCCTCAT-3′ 5'-CTATTCCAGCACCCAAGAAGG-3'5′-CTATTCCAGCACCCAAGAAGG-3′ β-actinβ-actin 5'-GGCCATCTCTTGCTCGAAGT-3'5′-GGCCATCTCTTGCTCGAAGT-3′ 5'-GAGACCTTCAACACCCCAGC-3'5′-GAGACCTTCAACACCCCAGC-3′

도 5는 일 구체예에 따른 아미노산 농축액이 HAS3의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이고, 도 6은 일 구체예에 따른 아미노산 농축액이 AQP3의 발현에 미치는 영향을 나타낸 그래프이다. Figure 5 is a graph showing the effect of the amino acid concentrate according to one embodiment on the expression of HAS3, Figure 6 is a graph showing the effect of the amino acid concentrate according to one embodiment on the expression of AQP3.

그 결과, 도 5 및 도 6에 나타낸 바와 같이, 실시예 1 및 비교예 1은 농도 의존적으로 HAS3 및 AQP3의 발현을 유의적으로 증가시키는 것을 확인할 수 있었다. 특히, 실시예 1은 비교예 1과 비교하여 동일한 농도에서 HAS3 및 AQP3 발현 증가 효과가 현저한 것을 확인할 수 있었다. As a result, as shown in FIGS. 5 and 6, it was confirmed that Example 1 and Comparative Example 1 significantly increased the expression of HAS3 and AQP3 in a concentration-dependent manner. In particular, in Example 1, it was confirmed that the effect of increasing HAS3 and AQP3 expression was remarkable compared to Comparative Example 1 at the same concentration.

따라서, 일 양상에 따른 조성물은 손상된 피부 장벽을 복원시키고 피부 장벽을 강화하여 피부 방어력을 높여줄 수 있다. 또한, 피부 보습에 탁월하여 보습 관련 질환의 예방 또는 치료에 효과적이다. Therefore, the composition according to one aspect can restore the damaged skin barrier and enhance skin defense by strengthening the skin barrier. In addition, it is excellent in moisturizing the skin and is effective in preventing or treating diseases related to moisturizing.

전술한 본 발명의 설명은 예시를 위한 것이며, 본 발명이 속하는 기술분야의 통상의 지식을 가진 자는 본 발명의 기술적 사상이나 필수적인 특징을 변경하지 않고서 다른 구체적인 형태로 쉽게 변형이 가능하다는 것을 이해할 수 있을 것이다. 그러므로 이상에서 기술한 실시예들은 모든 면에서 예시적인 것이며 한정적이 아닌 것으로 이해해야만 한다.The above description of the present invention is for illustrative purposes, and those skilled in the art can understand that it can be easily modified into other specific forms without changing the technical spirit or essential features of the present invention. will be. Therefore, the embodiments described above should be understood as illustrative in all respects and not limiting.

Claims (8)

살구에서 분리된 아미노산 농축액을 유효성분으로 포함하는 화장료 조성물로서, 상기 아미노산은 에어 버블 브루잉(air bubble brewing)을 수행하여 수득된 것인 화장료 조성물.A cosmetic composition comprising an amino acid concentrate isolated from apricot as an active ingredient, wherein the amino acid is obtained by performing air bubble brewing. 청구항 1에 있어서, 상기 아미노산은 콜라겐을 구성하는 것인 화장료 조성물. The cosmetic composition according to claim 1, wherein the amino acid constitutes collagen. 청구항 1에 있어서, 상기 아미노산은 하이드록시프롤린 (Hydroxyproline), 프롤린 (Proline), 및 글리신 (Glycine)으로 구성된 군으로부터 선택된 것인 화장료 조성물. The cosmetic composition according to claim 1, wherein the amino acid is selected from the group consisting of Hydroxyproline, Proline, and Glycine. 청구항 1에 있어서, 피부 상태 개선, 또는 보습용 화장료 조성물.The method according to claim 1, skin condition improvement, or cosmetic composition for moisturizing. 청구항 4에 있어서, 상기 피부 상태는 피부 장벽 강화, 피부 주름, 피부 탄력, 또는 피부 재생인 것인 화장료 조성물. The cosmetic composition according to claim 4, wherein the skin condition is skin barrier enhancement, skin wrinkles, skin elasticity, or skin regeneration. 살구에서 분리된 아미노산 농축액을 유효성분으로 포함하는 피부 주름 개선 또는 피부 탄력 개선용 피부 외용제 조성물로서, 상기 아미노산은 에어 버블 브루잉(air bubble brewing)을 수행하여 수득된 것인 피부 외용제 조성물.A composition for external application for skin for improving skin wrinkles or skin elasticity, comprising an amino acid concentrate isolated from apricot as an active ingredient, wherein the amino acid is obtained by performing air bubble brewing. 살구에서 분리된 아미노산 농축액을 유효성분으로 포함하는 건강기능식품 조성물로서, 상기 아미노산은 에어 버블 브루잉(air bubble brewing)을 수행하여 수득된 것인 건강기능식품 조성물.A health functional food composition comprising an amino acid concentrate isolated from apricot as an active ingredient, wherein the amino acid is obtained by performing air bubble brewing. 건조된 살구에 식물성 효소를 혼합하는 단계; 및
에어 버블 브루잉(air bubble brewing)을 수행하여 상기 효소와 혼합된 살구에서 아미노산을 가수분해하는 단계;를 포함하는 살구에서 콜라겐의 구성 아미노산을 분리하는 방법.
mixing vegetable enzymes with dried apricots; and
A method for separating amino acids constituting collagen from apricots, comprising: performing air bubble brewing to hydrolyze amino acids from apricots mixed with the enzyme.
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