KR102525204B1

KR102525204B1 - 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체의 장기지속성 유성현탁 주사용 조성물 및 이의 제조방법

Info

Publication number: KR102525204B1
Application number: KR1020210023119A
Authority: KR
Inventors: 강명주; 정민영; 김민섭; 박준수; 정회택; 한영택; 호명진
Original assignee: 단국대학교 천안캠퍼스 산학협력단
Priority date: 2021-02-22
Filing date: 2021-02-22
Publication date: 2023-04-24
Also published as: KR20220119817A

Abstract

본 발명은 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체의 장기지속성 유성현탁 주사용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로서, 근육내 또는 피하주사시 2주 이상 약물의 유효혈중농도를 유지하고 염증 반응을 최소화 할 수 있는 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체의 장기지속성 유성현탁 주사용 조성물 및 그 제조방법에 관한 것이다. 본 발명을 통해 제조된 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체의 장기 지속성 유성현탁 주사용 조성물은 0.5 내지 10 ㎛의 균일한 입자크기를 가지며, 2주 이상 유효 혈중농도를 제공할 수 있으며, 근육내 또는 피하주사시 투여 부위에 발생하는 염증 반응을 현저하게 감소시킬 수 있다. 본 발명에 의한 제제는 단회 투여 후 수 주 이상 엔테카비어의 유효 혈중 농도를 유지하여 지속적인 효과를 발현할 수 있어 환자의 복약 순응도를 개선할 수 있으며 투여 부위에 대한 염증 반응을 획기적으로 개선할 수 있다.

Description

엔테카비어 지방산 에스테르 유도체의 장기지속성 유성현탁 주사용 조성물 및 이의 제조방법{Injectable composition for long-lasting oil-based suspension of entecavir fatty acid esters analogs and method for preparing the same}

본 발명은 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체의 장기지속성 유성현탁 주사용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로서, 근육내 또는 피하로 단회 투여시 2주 이상의 혈중 농도 유지를 제공하며, 기존의 수성현탁제 조성물에 비해 투여 부위에서의 염증 반응 감소를 확연하게 확인할 수 있다.

엔테카비어(entecavir), 즉 하기 화학식 1에 나타낸 바와 같은 화합물 2-아미노-9-[(1S,3R,4S)-4-하이드록시-3-(하이드록시메틸)-2-메틸렌사이클로펜틸]-1H-퓨린-6(9H)-온은 뉴클레오사이드 유형의 항바이러스제이다.

[화학식 1]

엔테카비어는 시중에서 시판 중인 항-HBV (B형 간염 바이러스) 약물 중에 최고의 항-HBV 활성을 나타내는 약물이다. 엔테카비어의 항-HBV 활성은 라미뷰딘 및 아데포비어 디피복실보다 각각 100배 및 30배 이상 높은 것으로 알려져 있다. 또한 부작용이 적고, 라미뷰딘에 내성을 나타내는 환자에서 치료효과를 나타낸다. 따라서 엔테카비어는 B형 간염에 유용한 치료제로 사용되고 있다.

HBV 감염 치료에는 엔테카비어 제제의 장기간 복용이 필요한데, 엔테카비어는 식사시간을 피해 매일 경구투여를 해야 하므로 환자의 복약 순응도가 떨어지는 문제점이 있다. 이에 한 번의 약물투여를 통해 장시간의 항-HBV 활성을 나타낼 수 있는 약물의 개발이 요구되고 있다.

엔테카비어의 장시간 항-HBV 활성을 위해 엔테카비어에 지방산을 결합하여 수용해도를 대폭 낮춘 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체를 합성한 바가 있다. 해당 지방산 중합체를 수상에 현탁하여 근육 또는 피하에 주사한 경우이며 장기 방출을 위해 주사로 투여하여 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체를 고체, 즉 현탁상태로 투여하여 체내 투여부위에서 고체상태의 저장형으로 존재하다가 천천히 용해(dissolution) 및 가수분해(hydrolysis)되어 지속적인 엔테카비어의 방출 패턴을 제공할 수 있음을 확인한 바가 있다.

하지만, 수성현탁제가 지속적인 혈중농도 유지를 제공했음에도 불구하고, 과량을 투여할 경우 염증반응이 수반되는 문제점을 발견하였다. 이는 투입된 약물 입자를 체내에서 이물로 인식(foreign body reaction)하여 염증 및 면역 반응이 나타나는 것을 확인하였다. 이에, 상기 문제점을 개선하기 위한 제제 개발 필요성이 요구되고 있다.

한국등록특허 제10-2197257호(2020.12.24)

본 발명의 목적은 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체의 장기지속성 유성현탁 주사용 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것으로서, 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체의 유성현탁제를 근육내 또는 피하에 주사 투여하여 단회 투여시 장기 지속가능하고 동시에 투여부위에서의 염증반응을 획기적으로 개선하기 위한 주사투여용 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체 유성현탁액의 제제 제조방법 및 조성물을 제공하는 데에 있다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 (a) 하기 화학식 2로 표시되는 엔테카비어 팔미틴산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염; 및 (b) 약제학적으로 허용가능한 유성 담체를 포함하는 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체의 장기지속성 유성현탁 주사용 조성물을 제공한다.

[화학식 2]

상기 식에서, R¹은 C15임.

또한, 본 발명은 엔테카비어 팔미틴산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염을 유성 담체에 분산시키는 제1단계; 및 상기 유성 담체에 분산된 고체 상태의 엔테카비어 팔미틴산을 분쇄시키는 제2단계를 포함하는, 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체 수성현탁액의 안정화 조성물 제조방법을 제공한다.

도 1은 본 발명의 실시예 1 및 비교예 1에 대한 약물 동력학적 평가 결과를 나타낸다.
도 2는 본 발명의 실시예 1 및 비교예 1에 대한 염증 평가 결과를 나타낸다.

본 발명은 (a) 하기 화학식 2로 표시되는 엔테카비어 팔미틴산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염; 및 (b) 약제학적으로 허용가능한 유성 담체를 포함하는 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체의 장기지속성 유성현탁 주사용 조성물을 제공한다.

[화학식 2]

상기 식에서, R¹은 C15임.

또한, 본 발명은 상기 화학식 2로 표시되는 엔테카비어 팔미틴산 뿐만 아니라, 이로부터 제조될 수 있는 가능한 용매화물, 수화물, 이성질체 등을 모두 포함할 수 있다.

바람직하게는, 상기 약학적으로 허용가능한 염은 염산염, 브롬산염, 황산염, 인산염, 질산염, 구연산염, 초산염, 젖산염, 주석산염, 말레산염, 글루콘산염, 숙신산염, 포름산염, 트리플루오로아세트산염, 옥살산염, 푸마르산염, 메탄술폰산염, 벤젠술폰산염, 파라톨루엔술폰산염, 캠퍼술폰산염, 나트륨염, 칼륨염, 리튬염, 칼슘염 및 마그네슘염으로 이루어진 군에서 선택될 수 있다.

바람직하게는, 상기 약제학적으로 허용가능한 유성담체는 중쇄 트리글리세라이드류(medium chain triglycerides) 또는 지방산 에스테르 글리세롤류(Glycerin fatty acid esters)로 이루어진 군을 사용할 수 있다. 상기 중쇄 트리글리세라이드는 탄소수 6 내지 12개의 탄소 사슬 길이를 갖는 글리세롤 및 3개의 지방산으로부터 유래되는 에스테르일 수 있다. 구체적으로, 탄소수 6인 카프로인산 트리글리세라이드(caproic acid triglyceride), 탄소수 8인 카프릴산 트리글리세라이드(caprylic acid triglyceride), 탄소수 10인 카프린산 트리글리세라이드(capric acid triglyceride), 탄소수 12인 라우린산 트리글리세라이드(lauric acid triglyceride) 및 이들의 혼합 오일(예: Glyceryl Tricaprylate/Tricaprate인 Captex300, Labrafac Lipophile WL 1349 등 시판 제품 많음), 중쇄(medium-chain) 지방산 트리글리세라이드들을 다량포함하는 천연 오일인 콩기름, 코코넛유, 해바라기씨유, 깨기름, 피마자유, 면실유, 야자유, 홍화유, 땅콩기름, 옥수수기름, 올리브유, 카놀라유, 크릴유 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다. 지방산 에스테르 글리세롤류로서 Capryol 90 (propylene glycol monocapryate), Labrafac PG (propylene glycol dicaprylocaprate), Lauroglycol 90 (propylene glycol monolaurate), Lauroglycol FCC (propylene glycol monolaurate), Monosteol (propylene glycol monopalmitostearate EP) 등을 포함할 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

보다 바람직하게는, 상기 약제학적으로 허용가능한 유성 담체는 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트(propylene glycol dicaprylocaprate; Labrafac PG), 트리카프릴린(Tricaprylin), Miglyol 812, 프로필렌 글리콜 모노팔미토스테아레이트 EP (propylene glycol monopalmitostearate EP; Monosteol), 프로필렌 글리콜 디라우레이트(propylene glycol dilaurate), 트리미리스틴(Trimyristin), 프로필렌 글리콜 모노카프리에이트(propylene glycol monocapryate; Capryol 90) 및 면실유(Cotton seed oil)로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되지 않는다.

바람직하게는, 상기 엔테카비어 팔미틴산 또는 이의 약학적으로 허용가능한 염은 조성물 총 100 중량부에 대하여 엔테카비어로써 0.01 내지 50 중량부로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 0.05 내지 30 중량부로 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

상기 명시한 엔테카비어의 중량이 적을 경우 유효 혈중농도까지 도달하기 어려우며 중량이 많을 경우 현탁제제의 점도가 증가하여 주사 투여에 어려움이 있다.

바람직하게는, 상기 조성물 내 엔테카비어 팔미틴산의 평균 입자 크기는 0.5 내지 10 ㎛ 크기로 조절될 수 있다. 엔테카비어 팔미틴산의 입자크기가 상기 명시한 범위보다 작으면 약물이 신속하고 빠르게 용출되어 지속적인 유효 혈중농도를 유지하기 어려우며 상기 명시한 범위보다 크면 현탁제제의 점도가 증가하여 주사투여하는데 어려움이 있다.

바람직하게는, 본 발명의 조성물은 안정화제 또는 보존제를 추가로 포함할 수 있다.

본 발명에 따른 유성현탁제에서 사용하기 위한 적절한 안정화제로는 염화 세틸피리디니움(cetylpyridinium chloride), 젤라틴(gelatin), 카세인(casein), 레시틴(포스페티드)(lecithin(phosphatides), 덱스트란, 글리세롤, 아카시아 고무, 콜레스테롤, 트라가칸트(tragacanth), 스테아린산, 염화벤잘코니움(benzalkonium chloride), 스테아린산칼슘(calcium stearate), 글리세롤 모노스테아레이트(glycerol monostearate), 세토스테아릴알콜(cetostearyl alcohol), 세토마크로고르 유화 왁스(cetomacrogol emulsifying wax), 소르비탄 에스테르, 폴리옥시 에틸렌 알킬 에테르(예를 들면, 세트마크로골 1000과 같은 마크로골 에테르), 폴리옥시 에틸렌 카스토 오일 유도체(polyoxyethylene castor oil derivatives), 폴리옥시 에틸렌 소르비탄 지방산 에스테르(예를 들면, 시판되는 Tweens (등록상표), 예를 들면, Tween20 (등록상표) 및 Tween80 (등록상표) (ICI Specialty Chemicals)); 폴리에틸렌 글리콜(예를 들면, Carbowaxs 3350 (등록상표) 및 1450 (등록상표), 및 Carbopo1 934 (등록상표) (Union Carbide)), 도데실트리메틸 암모늄 브로마이드(dodecyl trimethyl ammonium bromide), 폴리옥시 에틸렌 스테아레이트, 콜로이달 실리콘 디옥사이드, 인산염, 도데실 황산나트륨, 카르복시메틸 셀룰로오스 칼슘(Carboxymethylcellulose calcium), 히드록시 프로필 셀룰로오스(예를 들면, HPC, HPC-SL, 및 HPC-L), 메틸 셀룰로오스, 히드록시 에틸 셀룰로오스, 히드록시 프로필 셀룰로오스, 히드록시 프로필 메틸-셀룰로오스 프탈레이트, 비정질 셀룰로오스(noncrystalline cellulose), 규산 마그네슘 알루미늄, 트리에탄올 아민, 폴리비닐 알코올(PVA), 에틸렌옥사이드 및 포름알데히드와의 4- (1,1,3,3-테트라 메틸 부틸)-페놀 폴리머(티록사폴(tyloxapol), 슈페리온(Superione), 및 트리톤(triton)으로 알려져 있다), 폴록사머 (poloxamers) (예를 들면, Pluronics F68 (등록상표) 및 F108 (등록상표), 이것들은, 에틸렌옥사이드 및 프로필렌 옥사이드의 블록 코폴리머이다); 포록사민(예를 들면, Tetronic 908 (등록상표), Poloxamine 908 (등록상표)로 알려짐, 이것은, 에틸렌디아민에 프로필렌 옥사이드 및 에틸렌옥사이드의 연속 부가로부터 유도되는 4-관능성 블록 코폴리머이다(BASF Wyandotte corporation, Parsippany, N.J. )); 하전된 인 지방질(charged phospholipid), 예를 들면, 디미리스토일 포스페타이디 글리세롤(dimyristoyl phosphatidylglycerol), 디옥틸 술포 숙시네이트(Doss) ; Tetronic 1508 (등록상표) (T-1508) (BASF Wyandotte Corporation), 술포 숙신산 나트륨의 디알킬 에스테르(예를 들면, Aerosol OT (등록상표), 이것은 술포 숙신산 나트륨의 디옥틸 에스테르이다 (American Cyanamid)) ; DuponoI P (등록상표), 이것은 라우릴 황산나트륨이다(DuPont) ; Tritons X-200 (등록상표), 이것은 알킬 아릴 폴리에테르 슐포네이트이다(Rohm and Haas) ; Crodestas F-110 (등록상표), 수크로스스테아레이트 및 수크로스 디스테아레이트의 혼합물이다(Croda Inc.); p-이소노닐 페녹시 폴리-(글리시돌), Olin-10G (등록상표) 또는 Surfactant 10-G (등록상표)로 알려져 있다(Olin Chemicals, Stamford, Conn.); Crodestas SL-40(등록상표)(Croda,Inc.);및 SA9OHCO, 이것은 C₁₈H₃₇CH₂(CON(CH₃))-CH₂(CHOH)₄(CH₂OH)₂이다(Eastman Kodak Co.); 디카노일-N-메틸글루카미드; n-디실 β-D-글루코피라노시드; n-디실 β-D-말트피라노시드; n-도데실 β-D-글루코피라노시드; n-도데실 β-D-말트시드; 헵타노일-N-메틸글루카미드; n-헵틸-β-D-글루코피라노시드; n-헵틸β-D-티오글루코시드; n-헥실 β-D-글루코피라노시드; 노나노일-N-메틸글루카미드; n-노닐 β-D-글루코피라노시드; 옥타노일-N-메틸글루카미드; n-옥틸-β-D-글루코피라노시드; 옥틸 β-D-티오글루코피라노시드 등 이다. 바람직하게는 폴리소르베이트(예를 들면, Tween20 (등록상표) 및 Tween80 (등록상표))류, 마크로골 15 하이드록시스테아레이트(예를 들면, Solutol HS 15), 폴리옥시 에틸렌 캐스터 오일 유도체(polyoxyethylene castor oil derivatives)류(예를 들면, Cremophor EL), 폴리에틸렌 글리콜류가 단독 또는 혼합하여 0.01 내지 10%, 더욱 바람직하게는 0.1 내지 10%(w/v)의 농도로 사용된다.

본 발명의 조성물에는 추가적으로 보존제가 포함될 수 있으며, 상기 보존제는 벤조산, 벤질 알콜, 부틸화 하이드록시아니솔, 부틸화 하이드록시톨루엔, 클로르부톨, 갈레이트, 하이드록시벤조에이트, EDTA, 페놀, 클로로크레졸, 메타크레졸, 벤즈토니움 클로라이드, 미리스틸-γ -피콜리늄 클로라이드, 페닐머큐릭 아세테이트 및 티머로잘로 구성된 그룹으로부터 선택될 수 있는 항미생물제 및 항산화제이다. 특히, 이는 2%(w/v) 이하, 바람직하게는 1.5%(w/v) 이하의 농도로 사용될 수 있는 벤질 알콜이다.

바람직하게는, 상기 유성 담체는 중쇄 트리글리세라이드(medium chain triglyceride) 또는 지방산 에스테르 글리세롤류((Glycerin fatty acid esters)일 수 있으며, 보다 바람직하게는, 상기 유성 담체는 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트(propylene glycol dicaprylocaprate; Labrafac PG), 트리카프릴린(Tricaprylin), Miglyol 812, 프로필렌 글리콜 모노팔미토스테아레이트 EP (propylene glycol monopalmitostearate EP; Monosteol), 프로필렌 글리콜 디라우레이트(propylene glycol dilaurate), 트리미리스틴(Trimyristin), 프로필렌 글리콜 모노카프리에이트(propylene glycol monocapryate; Capryol 90) 및 면실유(Cotton seed oil)로 이루어진 군에서 선택될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

바람직하게는, 상기 제2단계의 분쇄시키는 단계는 상기 유성 담체에 분산된 고체 상태의 엔테카비어 팔미틴산을 마이크로 또는 나노 단위로 분쇄시키는 습식 분쇄일 수 있다.

유성용매 내 고체상태의 엔테카비어 지방산 중합체를 마이크로 및 나노 단위로 분쇄시킬 수 있는 대표적인 방법은 습식 분쇄이다. 통상적인 습식 분쇄기술은 거친 약물 성분의 액체 현탁액을 분산 분쇄기(dispersion mill)와 같이 약물 성분의 크기를 감소시키기 위한 기계적 수단에 적용시키는 것을 포함한다. 분산 분쇄기의 한가지 예는 비드밀(bead mill)과 같은 매체 분쇄기(media mill)이다. 습식 비드분쇄는 분쇄되지 않은 거친 약물 성분의 현탁액을 제조하는 것을 수반한다. 그 후에 이 분산액은 모터 구동된 패들 및 다량의 분쇄비드(grinding bead)를 함유 하는 분쇄기 챔버(mill chamber)를 통해서 인출시켜 미분된 현탁액을 생성시킨다. 스크린을 사용하여 분쇄기 챔버 내에 비드를 보유시키면서 각각의 분쇄기 챔버의 외부로 생성물이 통과하도록 한다. 인라인 믹서(inline mixer)를 공정 라인에서 사용하여 분쇄된/분쇄되지 않은 응집체를 파괴시킬 수 있다.

대부분의 습식 비드 분쇄는 하나의 분쇄기 챔버를 통한 재순환 방법을 사용하여 수행하며, 여기에서는 하나의 비드 크기를 사용하여 필요한 크기 감소에 도달한다. 이것은 페인트, 잉크 및 세라믹 처리를 위해 확립된 방법이며, 여기에서는 고정된 양의 에너지 [kW/시간]를 습식 분쇄공정 중에 생성물에 공급하여 표적 입자크기를 얻는다. 습식 분쇄에 사용되는 분쇄기는 통상적으로 강인한 세라믹 또는 스테인레스 스틸, 예를 들어 텅스텐 카바이드를 이용하여 분쇄기 챔버 및 교반패들을 형성시키고, 통상적으로 사용되는 분쇄 매체(grinding media)에는 다이아몬드의 경도에 근접한 경도를 갖는 새로 개발된 이트륨 안정화된 산화지르코늄 비드, 또는 폴리스티렌 또는 다른 유사한 폴리머를 기본으로 하는 훨씬 더 연질의 분쇄 매체가 포함된다.

본 발명의 엔테카비어 팔미틴산의 장기 지속성 주사용 유성현탁제는 근육 또는 피하에 주사한 이후 체내에서 쉽게 가수분해되어 모약물 (엔테카비어)로 전환된다. 따라서 엔테카비어와 동일하게 만성 B형 간염을 치료하는 데 있어서 의약으로서 유용하게 사용될 수 있다.

바람직하게는, 상기 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체, 이의 약학적으로 허용가능한 염 또는 이들의 수화물은 조성물 총 100 중량부에 대하여 엔테카비어로써 0.1 내지 30 중량부로 포함될 수 있으며, 바람직하게는 0.2 내지 15 중량부로 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

바람직하게는, 상기 안정화제는 조성물 총 100 중량부에 대하여 0.1 내지 10 중량부로 포함될 수 있으나, 이에 제한되는 것은 아니다.

본 발명의 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체 수성현탁액은 근육 또는 피하에 주사한 이후 체내에서 쉽게 가수분해되어 모약물 (엔테카비어)로 전환된다. 따라서 엔테카비어와 동일하게 만성 B형 간염을 치료하는 데 있어서 의약으로서 유용하게 사용될 수 있다.

이하, 본 발명의 이해를 돕기 위하여 실시예를 들어 상세하게 설명하기로 한다. 다만 하기의 실시예는 본 발명의 내용을 예시하는 것일 뿐 본 발명의 범위가 하기 실시예에 한정되는 것은 아니다. 본 발명의 실시예는 당업계에서 평균적인 지식을 가진 자에게 본 발명을 보다 완전하게 설명하기 위해 제공되는 것이다.

<실시예>

Labrafac PG (등록상표), 트리카프릴린 (Tricaprylin), Miglyol 812 (등록상표), Monosteol (등록상표), 프로필렌 글리콜 디라우레이트 (Propylene glycol dilaurate), 트리미리스틴 (Trimiristin), Capryol 90 (등록상표), 면실유 (Cotton seed oil) 5 ml을 바이알 (vial)에 적가하고, 엔테카비어 팔미틴산 5 mg (실시예 1), 50 mg (실시예 2, 5), 500 mg (실시예 3, 6), 1000 mg (실시예 4, 7, 8)을 상기 언급한 담체에 분산시켰다. 바이알 (vial)에 0.3 ㎜ 지르코니아 비드 (zirconia bead)를 5g 탑재한 후 원심쉐이커인 zentrimix 380R에 장착하고 회전 속도 (rpm) 및 분쇄 시간을 조절하여 나노에서 마이크로미터 단위로 입자를 분쇄시켰다. 제조된 조성물은 하기 표 1과 같다(단위: 중량 %).

구성성분 (중량%)	실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4	실시예 5	실시예 6	실시예 7	실시예 8
엔테카비어 팔미틴산 (%)	0.09	1.0	9.9	19.8	0.9	9.8	19.9	19.8
Labrafac PG (%)	q.s. to 100	0	0	0	0	0	0	0
Tricaprylin (%)	0	q.s. to 100	0	0	0	0	0	0
Miglyol 812 (%)	0	0	q.s. to 100	0	0	0	0	0
Monosteol (%)	0	0	0	q.s. to 100	0	0	0	0
Propylene glycol dilaurate (%)	0	0	0	0	q.s. to 100	0	0	0
Trimyristin (%)	0	0	0	0	0	q.s. to 100	0	0
Capryol 90	0	0	0	0	0	0	q.s. to 100	0
Cotton seed oil	0	0	0	0	0	0	0	q.s. to 100
벤질 알콜 (%)	0	0	0	0.9	0.9	0	0	0
페놀 (%)	0	0	0.5	0	0	0.5	0	0
메타크레졸 (%)	0	0	0	0	0	0	0.3	0.3
회전속도 (rpm)	500	1000	1000	2000	500	1000	1000	500
분쇄 시간 (hour)	2	2	2	2	4	4	2	4

< 비교예 1> 수성 담체를 포함하는 수성현탁제 조성물

엔테카비어 팔미틴산 80 mg을 에탄올 10 ml에 용해시켰고, 안정화제로서 PEG 4000(Polyethylene glycol 4000) 및 Tween 20 (등록상표), 완충제로서 인산수소이나트륨칠수화물(Na₂HPO₄-7H₂O) 및 인산이수소나트륨이수화물(NaH₂PO₄-2H₂O)을 주사용수 100 ml에 용해시켰다. 엔테카비어 팔미틴산을 포함하는 에탄올을 40도로 유지된 주사용수 20 ml에 적가하고, 질소 퍼지 (7.5 L/min)를 통해 에탄올을 증발시켜 입자를 제조하였다. 제조된 조성물은 하기 표 2와 같다(단위: 중량 %).

	비교예 1
엔테카비어 팔미틴산	0.4
tween 20	0.5
PEG 4000	1
인산이수소나트륨 일수화물	0.232
인산수소이나트륨 칠수화물	0.099
염산 또는 수산화나트륨	q.s.
주사용수	q.s. to 100%

< 비교예 2 내지 5> 다른 유성담체를 포함하는 유성현탁제 조성물

카스토 오일 (Castor oil), 피넛 오일 (Peanut oil), 소이빈 오일 (Soybean oil), 올레산 (Oleic acid) 5 ml을 바이알에 적가하고 엔테카비어 팔미틴산 50 mg을 분산시켰다. 0.3 ㎜ 지르코니아 비드 (zirconia bead)를 5g 탑재한 후 원심쉐이커 zentrimix 380R에 장착하고 회전 속도 (rpm) 및 분쇄 시간을 조절하여 나노에서 마이크로미터 단위로 입자를 분쇄시켰다. 제조된 조성물은 하기 표 3과 같다(단위: 중량 %).

구성성분 (중량%)	비교예 2	비교예 3	비교예 4	비교예 5
엔테카비어 팔미틴산 (%)	1.0	0.9	1.1	0.9
Castor oil (%)	q.s. to 100	0	0	0
Peanut oil (%)	0	q.s. to 100	0	0
Soybean oil (%)	0	0	q.s. to 100	0
Oleic acid (%)	0	0	0	q.s. to 100
벤질 알콜 (%)	0.9	0	0	0.9
페놀 (%)	0	0	0.5	0
메타크레졸 (%)	0	0	0	0
회전속도 (rpm)	500	500	1000	2000
분쇄 시간 (hour)	2	2	2	2

< 실험예 1> 제조 후 성상, 입도 평가

실시예 1-8과 비교에 1-5를 제조 후 성상과 입도를 평가하였다. 유리 바이알에 5 ml을 담고, 성상을 육안으로 관찰했다. 입자의 크기와 분포는 마스터사이저(MS 2000(Hydro 2000S), Malvern사)를 사용해 입도누적분포 10%(d(0.1)), 50%(d(0.5)), 90%(d(0.9))의 값으로 평가하였다. SPAN 값은 [d(0.9)-d(0.1)]/d(0.5)를 계산한 값으로 평가하였다. 함량은 UV/VIS이 장착된 HPLC(Waters사 515, 717plus, 486)를 사용하였고, 칼럼으로는 C18 칼럼(CAPCELL PAK C18, Shiseido사, Type MG 5um, 4.6mmI.D. x 150mm)을 사용하였다. 이동상으로 Isopropyl alchol 60%를 1ml/min으로 용리하는 조건에서 253nm의 흡광 파장을 이용해 분석하였다. 유성 담체내 엔테카비어 팔미틴산의 용해비율은 원심 분리 후 맑은 상층액을 상기 명시한 HPLC 분석방법으로 동일하게 분석하였다.

실험 결과는 하기 표 4 및 표 5와 같다. 실시예는 모두 성상이 탁한 우유빛깔을 나타내며, 입도 균일성을 평가할 수 있는 SPAN 값이 모두 2.5 이하로 측정되었다. 또한 유성 현탁제에서 유성 담체내 엔테카비어 팔미틴산 용해량이 매우 적고 대부분이 현탁 된 것을 확인 할 수 있었다. 반면, 비교예 1을 제외한 비교예 2-5에서는 엔테카비어 팔미틴산이 유성담체 내 과량 용해된 것을 확인하였고 비교예 2 및 비교예 3에서 응집 및 침전이 발생한 것을 확인할 수 있었다. 이를 통해 실시예의 샘플들이 비교예에 비해 균일성이 우수한 현탁 제형임을 확인하였다.

		실시예 1	실시예 2	실시예 3	실시예 4	실시예 5	실시예 6	실시예 7	실시예 8
성상		균일	균일	균일	균일	균일	균일	균일	균일
입도 (㎛)	d(0.1)	1.72	1.20	0.82	0.74	3.23	0.41	1.32	2.78
	d(0.5)	3.26	2.52	2.02	1.32	7.23	0.86	3.09	9.27
	d(0.9)	5.86	4.78	4.87	2.61	12.78	2.47	6.01	23.54
	SPAN	1.27	1.23	2.01	1.42	1.32	1.23	1.52	2.24
약물 함량 (%)		98.7	99.1	99.8	99.5	99.1	98.6	101.2	100.9
용해량 (%)		0.011	0.0031	0.063	0.082	0.024	0.0021	0.055	0.098

		비교예 1	비교예 2	비교예 3	비교예 4	비교예 5
성상		균일	응집/침전	응집/침전	균일	균일
입도 (㎛)	d(0.1)	1.43	N/A	N/A	N/A	N/A
	d(0.5)	2.82	N/A	N/A	N/A	N/A
	d(0.9)	4.92	N/A	N/A	N/A	N/A
	SPAN	1.23	N/A	N/A	N/A	N/A
약물 함량 (%)		98.7	N/A	N/A	N/A	N/A
용해량 (%)		0.0001	0.21	0.16	0.081	0.59

< 실험예 2> 약물 동력학적 평가

실시예 2, 및 비교예 1 각각을 5 마리의 시궁쥐 (S.D rat)의 대퇴부 근육(biceps femoris)에 투여하였다. 엔테카비어로서 체중 kg당 1.44 mg으로 BD 사 0.3 ml insulrin syringe 사용하여 투여하였고 혈장 중 엔테카비어 농도를 결정하기 위하여 4주 동안 혈액 샘플을 채취하였다. LC-MS/MS로 혈중 농도를 분석하였으며 하기 약력학적 변수를 실험 데이터로부터 계산하였다(평균치 ± S.D.). 시간에 따른 혈장 중 약물농도 프로파일에서 보는 바와 같이, 실시예 2는 투여 직후 0.3 ng/ml 이상의 농도를 확보할 수 있으며, 투여 2주 후에도 0.3 ng/ml 이상의 농도를 유지할 수 있음을 확인하였다. 비교예 1의 경우, 실시예보다 최고혈중농도에 천천히 도달함을 알 수 있다. 두 예시 모두 4주 이후에는 약물이 검출되지 않아, 치료 유효기간은 4주 미만인 것을 알 수 있다(도 1). 한편, 약동학적 파라미터는 표 6에 나타냈다.

	실시예 2	비교예 1
AUC_(0- _28day ₎ (ng·day/ml)	37.29 ± 9.12	32.11 ± 4.09
Cmax (ng/ml)	13.30 ± 5.29	5.04 ± 2.43
Tmax (days)	0.54 ± 0.25	0.35 ± 0.14
14일차 농도 (ng/ml)	0.79 ± 0.46	1.16 ± 0.55
28일차 농도 (ng/ml)	N/A	N/A

< 실험예 3> 염증 평가

실시예 2와 비교예 1에 대해 염증평가를 실시하였다. 시궁쥐(S.D rat)의 대퇴부 근육(biceps femoris)에 실시예 2 와 비교예 1 및 멸균생리식염수를 주사 투여하였다. 각각을 엔테카비어로서 체중 kg당 1.44 mg을 4주치 투여하였고 멸균생리식염수는 상기 제제들과 같은 부피로 투여 하였다. 투여 후 2, 7, 14, 28일차에 시궁쥐의 투여부위를 적출하여 파라핀 고정 후 헤마톡실린 & 에오신 염색법 (Hematoxylin & Eosin staining)을 진행하였다.

실시예 2와 비교예 1및 멸균생리식염수의 투여 후 2, 7, 14, 28일차의 염증 확인 결과를 도 2에 첨부하였다. 빈칸 혹인 하얀색으로 보이는 부분은 약물이 투여된 부위 이고 붉은색으로 보이는 부분은 에오신 (Eosin)에 의해 염색된 근육세포의 세포질 이며 파란색으로 보이는 부분은 헤마톡실린 (Hematoxylin)에 의해 염색된 염증세포 및 근육세포의 핵이다. 실시예 2와 비교예 1을 비교하였을 때 염증 세포의 수 및 염증 반응이 나타난 면적이 확연하게 차이가 나는 것을 확인하였다.

이상과 같이, 본 발명은 비록 한정된 실시예와 도면에 의해 설명되었으나, 본 발명은 이것에 의해 한정되지 않으며 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에 의해 본 발명의 기술 사상과 아래에 기재될 청구범위의 균등 범위 내에서 다양한 수정 및 변형이 가능함은 물론이다.

Claims

(a) 하기 화학식 2로 표시되는 엔테카비어 팔미틴산; 및
(b) 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트(propylene glycol dicaprylocaprate; Labrafac PG), 트리카프릴린(Tricaprylin), 카프리/카프릭 트리글리세라이드(Capry/Capric Triglyceride; Miglyol 812), 프로필렌 글리콜 모노팔미토스테아레이트 EP (propylene glycol monopalmitostearate EP; Monosteol), 프로필렌 글리콜 디라우레이트(propylene glycol dilaurate), 트리미리스틴(Trimyristin), 프로필렌 글리콜 모노카프리에이트(propylene glycol monocapryate; Capryol 90) 및 면실유(Cotton seed oil)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 약제학적으로 허용가능한 유성 담체를 포함하는 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체의 장기지속성 유성현탁 주사용 조성물.
[화학식 2]

상기 식에서, R¹은 C15임.
삭제
삭제
삭제
제1항에 있어서, 상기 조성물은 안정화제 또는 보존제를 추가로 포함하는 것을 특징으로 하는 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체의 장기지속성 유성현탁 주사용 조성물.
제1항에 있어서, 상기 엔테카비어 팔미틴산은 조성물 총 100 중량부에 대하여 엔테카비어로써 0.05 내지 30 중량부로 포함되는 것을 특징으로 하는 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체 수성현탁액의 안정화 조성물.
제1항에 있어서, 상기 조성물 내 엔테카비어 팔미틴산의 평균 입자 크기는 0.5 내지 10 ㎛인 것을 특징으로 하는 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체 수성현탁액의 안정화 조성물.
엔테카비어 팔미틴산을 프로필렌 글리콜 디카프릴로카프레이트(propylene glycol dicaprylocaprate; Labrafac PG), 트리카프릴린(Tricaprylin), 카프리/카프릭 트리글리세라이드(Capry/Capric Triglyceride; Miglyol 812), 프로필렌 글리콜 모노팔미토스테아레이트 EP (propylene glycol monopalmitostearate EP; Monosteol), 프로필렌 글리콜 디라우레이트(propylene glycol dilaurate), 트리미리스틴(Trimyristin), 프로필렌 글리콜 모노카프리에이트(propylene glycol monocapryate; Capryol 90) 및 면실유(Cotton seed oil)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 이상의 유성 담체에 분산시키는 제1단계; 및
상기 유성 담체에 분산된 고체 상태의 엔테카비어 팔미틴산을 분쇄시키는 제2단계를 포함하는, 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체 수성현탁액의 안정화 조성물 제조방법.
삭제
삭제
제8항에 있어서, 상기 제2단계의 분쇄시키는 단계는 상기 유성 담체에 분산된 고체 상태의 엔테카비어 팔미틴산을 마이크로 또는 나노 단위로 분쇄시키는 습식 분쇄인 것을 특징으로 하는 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체 수성현탁액의 안정화 조성물 제조방법.
제8항에 있어서, 상기 엔테카비어 팔미틴산은 조성물 총 100 중량부에 대하여 엔테카비어로써 0.05 내지 30 중량부로 포함되는 것을 특징으로 하는 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체 수성현탁액의 안정화 조성물 제조방법.
제8항에 있어서, 상기 조성물 내 엔테카비어 팔미틴산의 평균 입자 크기는 0.5 내지 10 ㎛인 것을 특징으로 하는 엔테카비어 지방산 에스테르 유도체 수성현탁액의 안정화 조성물 제조방법.