KR102499475B1 - 세포 배양 시스템 및 방법 - Google Patents

Abstract

세포 배양물을 배양, 성장 및 채취하기 위한 생물 배양 시스템 및 방법이 기재되어 있다. 또한, 시스템과 함께 사용될 수 있는 바이오프로세스 컨테이너가 개시되어 있다. 본 발명의 일 양태에서, 바이오프로세스 시스템은 개방 연결 및/또는 파열을 방지하면서 튜브들이 함께 용접될 수 있게 하는 특정 재료로 제조되고 특정 치수를 갖는 바이오프로세스 튜브 및 세포 배양 튜브를 포함한다. 이러한 방식으로, 바이오프로세스 컨테이너는 폐쇄된 환경 내에서 및 관련 모니터링없이 조작을 수행하지 않고도 세포 배양 장치와 연결 및 분리될 수 있다.

Description

세포 배양 시스템 및 방법

관련 출원

본 출원은 2017 년 2 월 10 일자로 출원된 미국 가출원 제 62/457,341 호에 기초하여 우선권을 주장하며, 이는 본원에 참고로 인용된다.

벌크, 가요성, 일회용 컨테이너 시스템에서 멸균 액체 배지 및 시약의 패키징을 필요로 하는 급속히 변화하는 생명 공학 분야에서 새로운 공정 및 절차가 개발되고 있다. 바이오프로세스 컨테이너는 일반적으로 시약 및 완충액을 비롯한 세포 배양 배지의 패키징을 위한 일회용 컨테이너뿐만 아니라 하류 제조 공정에서 얻은 최종 제품을 위한 폐쇄 및 저장 용기로도 설계된다.

세포 배양 용기의 접종을 위한 폐쇄 시스템 공정은 일반적으로 보다 큰 배양물을 갖는 바이오프로세스 컨테이너 내로 세포 현탁액을 옮기는 것을 포함한다. 이어서, 바이오프로세스 컨테이너를 배양 용기에 부착하고, 바이오프로세스 컨테이너에 수용된 희석된 세포 현탁액을 배양 용기 내로 옮긴다. 일단 배양 용기에 접종되면, 세포 현탁액은 세포 성장 및 번식을 유발하는 조건에 노출되어 세포 배양을 증가시킨다. 성장하는 세포의 유형에 따라 세포 배양이 성장하는 동안 세포를 둘러싼 세포 배양 배지를 교체하거나 보충해야할 필요가 있다. 세포 배양이 원하는 정도로 성장한 후에 세포 배양 장치로부터 세포를 채취할 필요가 있다. 이러한 각각의 절차는 세포 배양 장치로부터 다양한 다른 바이오프로세스 컨테이너를 연결 및 분리할 것을 요구한다.

현재, 세포 배양의 성장 중에 바이오프로세스 컨테이너를 세포 배양 장치에 분리하고 연결하는 가장 일반적인 방법은 의료용 플라스틱 원형 커넥터(MPC 커넥터)를 사용하는 것이다. MPC 커넥터는 바이오프로세스 컨테이너의 탈부착을 가능하게 한다. 그러나 MPC 커넥터는 부착 또는 분리 공정 중에 개방 연결을 형성한다. 본원에 사용된 개방 연결은 짧은 시간 동안 주위 환경에 개방된 튜브를 지칭한다. 따라서, MPC 커넥터의 사용은 세포 배양의 성장 공정을 상당히 복잡하게 만든다. 예를 들어, MPC 커넥터를 사용하여 개방 연결이 이루어지기 때문에, 고도로 여과된 공기를 사용하여 엄격하게 제어되는 폐쇄된 환경에서 연결해야 하며 광범위한 환경 모니터링이 필요하다. 또한 MPC 커넥터를 사용하려면 고도로 제어된 환경에서 수동 조작이 필요하므로 튜브를 연결하거나 분리할 때 조작자의 변동성과 오류가 발생하기 쉬운 간단한 절차를 만들어야 한다. MPC 커넥터를 사용하면 공정의 모든 단계에서 오염될 위험이 있을 뿐 아니라 용기를 조작하는 상당한 시간의 조작자 시간을 필요로 한다. 환경 제어 영역의 필요성 때문에, MPC 커넥터의 사용은 실험실 엔지니어링뿐만 아니라 중요한 실험실 공간이 필요하며 제어된 환경 내에서 용기를 이동 및 조작할뿐만 아니라 환경 데이터를 분석하여 오염이 발생하지 않는 것을 보장해야 하는 추가 시간을 필요로 한다.

과거에는, 당업자는 MPC 커넥터를 사용하는 대신 튜브를 함께 용접할 것을 제안했다. 불행히도, 용접으로 인해 가변성 및 모순된 결과를 발생했다. 특히 상당한 양의 용접 오류가 발생했다. 용접 오류로 인해 개방 연결이 이루어질 수 있고, 이는 환경 오염의 위험을 야기할뿐만 아니라 전체 세포 배양을 손상시킬 수 있다.

상기와 관련하여, 바이오프로세스 컨테이너를 세포 배양 장치에 부착 및 분리하는 시스템 및 방법에 대한 필요성이 존재한다. 예를 들어, 개방 연결을 형성하지 않고 제어된 환경 내에서 절차를 조작하지 않고도 세포 배양 장치로 또는 세포 배양 장치로부터 바이오프로세스 컨테이너를 연결 및 분리하는 방법 및 시스템에 대한 필요성이 존재한다. 또한, 유동 제어와 관련된 어떠한 문제점도 경험하지 않고 세포 배양 장치와 쉽게 연결 및 분리될 수 있는 개선된 바이오프로세스 컨테이너에 대한 필요성이 존재한다.

본 발명은 일반적으로 세포 배양물을 성장시키기 위한 시스템 및 방법, 및 세포 배양 장치로 또는 세포 배양 장치로부터의 세포 배양 배지의 첨가 또는 제거를 용이하게 하는 바이오프로세스 컨테이너에 관한 것이다. 일 실시예에서, 본 발명은 다층 세포 배양 장치가 세포 팽창을 위한 완전 폐쇄 및 멸균 시스템을 사용하여 씨드(또는 접종), 공급, 채취, 조작 및 연결될 수 있는 방법에 관한 것이다. 상기 방법 및 시스템은 개방 연결의 위험없이 세포 및 시약을 세포 배양 장치로부터 첨가 및 제거할 수 있게 하여, 과거에 사용된 다른 방법에 비해 배양 공정이 환경 조절을 덜어 안전하게 수행할 수 있게 한다. 본 발명의 방법 및 시스템은 안전성을 증가시키고, 보다 확장성이 있으며, 세포 배양 장치를 사용하여 세포 배양물을 성장시키는데 필요한 수동 조작의 수를 감소시킨다.

일 실시예에서, 본 발명은 세포 배양 장치로 재료를 전달하고 세포 배양 장치로부터 재료를 제거하는 방법에 관한 것이다. 상기 방법은 적어도 하나의 바이오프로세스 튜브의 단부를 통한 유체 유동을 차단하는 단계를 포함하고, 상기 바이오프로세스 튜브는 세포 배양 장치와 유체 교통한다. 세포 배양 장치는 적층 배열된 복수의 세포 배양 챔버들을 포함한다. 일 실시예에서, 세포 배양 장치는 공기 또는 가스가 없는 환경에서 세포 배양물을 성장시키도록 설계되고, 각 챔버는 세포 배양 배지의 특정 성분을 한 챔버에서 다른 챔버로 이동시키는 선택적 투과성 막에 의해 다른 챔버로부터 분리된다. 세포 배양 장치에 연결된 바이오프로세스 튜브는 실리콘과 같은 열가소성 탄성중합체로 제조될 수 있으며 세포 배양 장치로 재료를 전달하고 세포 배양 장치로부터 재료를 제거하도록 구성될 수 있다.

본 발명의 방법은 바이오프로세스 컨테이너와 교통하는 세포 배양 링크 튜브의 단부를 통한 유체 유동을 차단하는 단계를 추가로 포함한다. 바이오프로세스 컨테이너는 세포 배양 배지를 포함할 수 있다. 본원에 사용된 바와 같이, 세포 배양 배지는 세포, 시약, 세포용 영양 조성물, 단백질 분해제, 켄치 조성물 등을 함유하는 임의의 조성물을 포함할 수 있다. 본 발명에 따르면, 바이오프로세스 튜브의 단부는 개방 연결을 형성하지 않고 절단되고 세포 배양 링크 튜브의 단부에 용접된다. 예를 들어, 바이오프로세스 튜브 및 세포 배양 링크 튜브의 단부들은 개방 연결이 형성되지 않도록 함께 동시에 절단 및 용접될 수 있다. 본 발명에 따르면, 바이오프로세스 튜브 및 세포 배양 링크 튜브는 적어도 2.75 mm(0.1 인치), 적어도 3 mm(0.11 인치)와 같은 적어도 2.25 mm(0.09 인치)의 세포 벽 두께를 갖는다. 바이오프로세스 튜브 및 세포 배양 링크 튜브의 내경은 일반적으로 약 8.5 mm(0.35 인치) 내지 약 10.5 mm(0.4 인치)와 같은, 약 7.5 mm(0.3 인치) 내지 약 12.5 mm(0.5 인치)일 수 있다.

일단 바이오프로세스 튜브와 세포 배양 링크 튜브가 함께 용접되면, 바이오프로세스 튜브 및 세포 배양 링크 튜브를 통한 유체 유동이 차단해제된다. 바이오프로세스 컨테이너 내의 세포 배양 배지는 링크 튜브 및 바이오프로세스 튜브를 통해 세포 배양 장치로 공급된다.

일 실시예에서, 본 발명의 방법은 세포 배양 링크 튜브의 단부를 통한 유체 유동을 차단하는 단계, 바이오프로세스 튜브를 통한 유체 유동을 차단하는 단계, 및 제 2 바이오프로세스 컨테이너와 교통하는 제 2 세포 배양 링크 튜브의 단부를 통한 유체 유동을 차단하는 단계를 추가로 포함한다. 예를 들어, 제 2 바이오프로세스 컨테이너는 세포 배양 배지를 포함할 수 있다. 본 발명에 따르면, 바이오프로세스 튜브 및 제 2 세포 배양 링크 튜브의 단부는 개방 연결을 생성하지 않는 방식으로 함께 절단되고 용접된다. 바이오프로세스 튜브를 통과하고 제 2 세포 배양 링크 튜브를 통과하는 유체 유동은 차단해제되어 제 2 바이오프로세스 컨테이너 내의 세포 배양 배지가 제 2 세포 배양 링크 튜브 및 바이오프로세스 튜브를 통해 세포 배양 장치 내로 공급되도록 한다. 상술한 공정을 통해, 2 개의 상이한 세포 배양 배지가 시스템에서 개방 연결을 형성하지 않으면서 상이한 바이오프로세스 컨테이너로부터 세포 배양 장치로 공급된다.

일 실시예에서, 예를 들어, 제 1 바이오프로세스 컨테이너 내의 세포 배양 배지는 세포 배양 장치에 접종하기 위한 생존가능한 세포들을 포함한다. 한편, 제 2 바이오프로세스 컨테이너에 수용된 세포 배양 배지는 세포 배양 장치에서 세포 배양물의 성장을 촉진하기 위한 영양 조성물을 포함할 수 있다.

일 실시예에서, 세포 배양 장치로부터 세포를 채취하기 위해, 제 2 바이오프로세스 컨테이너는 세포 배양 장치에 공급되어 세포 배양 장치의 벽으로부터 개별 세포가 분리되도록 하는 단백질 분해제를 수용할 수 있다 . 일단 분리되면, 채취된 세포는 제 2 바이오프로세스 컨테이너로 다시 공급될 수 있다.

하나의 특정 실시예에서, 제 2 세포 배양 링크 튜브는 제 1 Y 튜브 및 제 2 Y 튜브에 연결되는 Y 커넥터를 포함한다. 제 1 Y 튜브는 제 2 바이오프로세스 컨테이너에 연결될 수 있고, 제 2 Y 튜브는 제 3 바이오프로세스 컨테이너에 연결될 수 있다. 제 2 바이오프로세스 컨테이너는 단백질 분해제를 수용할 수 있는 반면, 제 3 바이오프로세스 컨테이너는 켄칭 조성물을 수용할 수 있다. 이 실시예에서, 세포 배양 장치로부터 세포를 채취할 때가 되면, 먼저 단백질 분해제가 제 2 바이오프로세스 컨테이너로부터 세포 배양 장치로 공급된다. 이어서, 켄칭 조성물을 제 3 바이오프로세스 컨테이너로부터 세포 배양 장치에 공급한다. 세포 배양 장치로부터 세포를 채취하기 위해, 세포 배양 장치로부터 세포를 제 2 바이오프로세스 컨테이너 또는 제 3 바이오프로세스 컨테이너 중 하나로 배출시킨다. 일 실시예에서, 채취된 세포는 제 2 바이오프로세스 컨테이너에 공급되고, 제 2 바이오프로세스 컨테이너를 제 1 Y 튜브로부터 분리시키기 위해 신속한 분리가 사용된다.

본 발명은 또한 바이오프로세스 시스템에 관한 것이다. 바이오프로세스 시스템은 세포 배양물을 성장시키고 채취하기 위한 세포 배양 장치를 포함한다. 세포 배양 장치는 적층 배열된 복수의 세포 배양 챔버들을 포함한다. 세포 배양 장치는 직경 및 벽 두께를 갖는 열가소성 탄성중합체로 구성된 적어도 하나의 바이오프로세스 튜브를 포함한다. 상기 시스템은 복수의 바이오프로세스 컨테이너를 추가로 포함한다. 상기 컨테이너는 세포 배양 배지를 유지하기 위한 중공 인클로저를 한정한다. 각각의 컨테이너는 중공 인클로저와 교통하는 세포 배양 링크 튜브를 포함한다. 링크 튜브는 직경, 벽 두께를 가지며, 바이오프로세스 튜브의 직경, 벽 두께 및 열가소성 탄성중합체와 모두 호환되는 재료로 제조된다.

본 발명에 따르면, 각각의 바이오프로세스 컨테이너의 세포 배양 링크 튜브는 각 바이오프로세스 컨테이너가 선택적으로 세포 배양 장치와 유체 교통될 수 있도록 세포 배양 장치의 바이오프로세스 튜브에 용접되도록 구성된다. 멸균 및 무균 연결이 세포 배양 링크 튜브와 바이오프로세스 튜브 사이에서 이루어지는 것을 보장하도록, 세포 배양 링크 튜브와 바이오프로세스 튜브는 모두 적어도 적어도 2.75mm(0.1 인치), 적어도 3mm(0.11 인치)와 같은 적어도 2.25 mm(0.09 인치)의 벽 두께를 갖는다. 예를 들어, 세포 배양 링크 튜브 및 바이오프로세스 튜브의 벽 두께는 약 2.75 mm(0.1 인치) 내지 약 3.75 mm(0.15 인치)일 수 있다. 상기한 바와 같이 벽 두께를 갖는 것 이외에, 바이오프로세스 튜브 및 세포 배양 링크 튜브의 내경은 약 7.5 mm (0.3 인치) 내지 약 11.5 mm(0.45 인치)와 같은, 약 6.25 mm(0.25 인치) 내지 약 12.5 mm(0.5 인치)일 수 있다.

세포 배양 링크 튜브 및 바이오프로세스 튜브의 치수는 용접 공정 중에 튜브들 사이에 누출 방지 연결이 이루어지도록 보장한다. 일 실시예에서, 예를 들어, 세포 배양 링크 튜브들 중 하나가 세포 배양 장치의 바이오프로세스 튜브에 연결될 때, 용접 구조체가 용접 과정 중에 형성된다. 용접 구조체는 세포 배양 링크 튜브가 바이오프로세스 튜브에 부착된 위치를 둘러싸는 누출 방지 플랜지를 포함한다. 예를 들어, 플랜지는 약 0.3mm 초과, 약 0.4mm초과와 같은 약 0.2mm 초과의 높이를 가질 수 있다.

일 실시예에서, 시스템은 바이오프로세스 튜브 내에 개방 연결부를 생성하지 않고 세포 배양 장치로 재료를 공급하거나 또는 세포 배양 장치로부터 제거하기 위해 세포 배양 장치를 바이오프로세스 컨테이너들 중 하나와 유체 교통하도록 배치하기 위해 세포 배양 링크 튜브들 중 하나와 함께 바이오프로세스 튜브를 동시에 절단 및 용접하도록 구성된 바이오웰딩 장치를 추가로 포함한다. 상기 시스템은 상기 바이오웰딩 장치에서 상기 튜브의 절단 및 용접 중에 상기 바이오프로세스 튜브 및 상기 링크 튜브 내의 유체 유동을 방지하기 위한 유동 정지 장치들을 추가로 포함할 수 있다.

일 실시예에서, 각각의 세포 배양 링크 튜브 내의 바이오프로세스 튜브는 동일한 직경, 벽 두께를 가지며 동일한 열가소성 탄성중합체로 제조된다. 예를 들어, 열가소성 탄성중합체는 실리콘 중합체, 폴리비닐 클로라이드 중합체, 폴리프로필렌 중합체, 폴리에틸렌 중합체 또는 폴리에스테르 중합체를 포함할 수 있다.

상기 바이오프로세스 시스템은 단일 바이오프로세스 컨테이너를 포함할 수 있거나 복수의 바이오프로세스 컨테이너를 수용할 수 있다. 일 실시예에서, 예를 들어, 시스템은 적어도 3 개의 바이오프로세스 컨테이너를 포함한다. 예를 들어, 컨테이너들 중 하나는 시약 또는 세포 영양 성분을 수용할 수 있다. 다른 컨테이너는 세포 배양 장치로부터 액체 배지를 받기 위해 비워질 수 있다. 한편, 다른 바이오프로세스 컨테이너는 세포 배양 장치로부터 세포를 채취하는 것을 돕도록 설계된 조성물을 수용할 수 있다. 예를 들어, 바이오프로세스 컨테이너는 효소와 같은 단백질분해 시약을 수용할 수 있다. 각각의 바이오프로세스 컨테이너는 특정 적용 및 목적을 위해 설계된 체적을 가질 수 있다. 예를 들어, 컨테이너는 약 0.5 리터 내지 약 25 리터의 체적을 가질 수 있다.

본 발명은 또한 세포 배양 장치와 함께 사용되도록 설계된 바이오프로세스 컨테이너에 관한 것이다. 상기 바이오프로세스 컨테이너는 제 1 단부 및 제 2의 반대편 단부를 갖는 가요성 컨테이너를 포함한다. 가요성 컨테이너는 세포 배양 배지와 같은 유체를 유지하기 위한 내부 체적을 한정한다. 가요성 컨테이너는 컨테이너의 제 1 단부에 위치된 복수의 포트를 포함한다. 각 포트는 내부 체적과 유체 교통한다. 포트들 중 하나는 세포 배양 링크 튜브에 연결된다. 링크 튜브는 예를 들어, 적어도 약 3mm와 같은, 적어도 약 2.25mm의 벽 두께를 가질 수 있고, 약 8.5mm 내지 약 10.5mm의 내경을 가질 수 있다.

본 발명에 따르면, 바이오프로세스 컨테이너는 각각의 포트와 교통하는 가요성 컨테이너의 제 1 단부에 위치된 유동 안내 장치를 추가로 포함할 수 있다. 유동 안내 장치는 경질 중합체와 같은 단단한 재료로 제조된 단일 부재 구조체를 포함할 수 있다. 유동 안내 장치는 복수의 포트에 대응하는 복수의 이격된 통로를 형성한다. 유동 안내 장치 상의 각각의 통로는 약 7.5 mm(0.3 인치) 내지 약 11.5 mm(0.45 인치)와 같은, 약 6.25 mm(0.25 인치) 내지 약 12.5 mm(0.5 인치)의 직경을 가질 수 있다. .

본 발명은 또한 도면에 도시된 바와 같이 바이오프로세스 컨테이너의 장식 설계에 관한 것이다.

본 발명의 다른 목적 및 이점은 하기에서보다 상세하게 논의된다.

본 발명의 완전하고 가능한 개시는 첨부된 도면을 참조하여 명세서의 나머지 부분에서 보다 구체적으로 설명된다.
도 1은 본 발명의 시스템과 함께 사용될 수 있는 세포 배양 장치의 일 실시예의 사시도이다.
도 2는 본 발명에 따른 세포 배양 시스템의 일 실시예의 사시도이다.
도 3은 본 발명에 따라 사용될 수 있는 바이오웰딩 장치의 일 실시예의 평면도이다.
도 4는 본 발명에 따른 2 개의 바이오처리된 튜브들 사이의 용접 구조체의 일 실시예의 측면도이다.
도 5는 본 발명에 따른 세포 배양 장치에 연결된 바이오프로세스 컨테이너의 사시도이다.
도 6은 세포 배양 장치로부터 세포 배양물을 채취하기 위한 시스템의 일 실시예의 사시도이다.
도 7은 본 발명에 따른 바이오프로세스 컨테이너의 일 실시예의 사시도이다.
도 8은 독창적이고 장식적인 설계를 보여주는 본 발명에 따른 바이오프로세스 컨테이너의 일 실시예의 사시도이다.
도 9는 도 8에 도시된 바이오프로세스 컨테이너의 측면도이다.
도 10은 도 8에 도시된 바이오프로세스 컨테이너의 다른 측면도이다.
도 11은 도 10에 도시된 측면의 반대편 측면을 도시하는 도 8에 도시된 바이오프로세스 컨테이너의 다른 측면도이다.
도 12는 도 9의 컨테이너의 반대편 측면을 도시하는, 도 8에 도시된 바이오프로세스 컨테이너의 다른 측면도이다.
도 13은 도 8에 도시된 바이오프로세스 컨테이너의 평면도이다.
도 14는 도 8에 도시된 바이오프로세스 컨테이너의 저면도이다.

본 기술 분야의 통상의 지식을 가진 자라면 본 발명의 설명이 단지 예시적인 실시예에 대한 설명이며, 본 발명의 보다 넓은 측면을 제한하고자하는 것은 아니라는 것을 이해할 것이다.

일반적으로, 본 발명은 세포 배양물을 성장시키기 위한 시스템 및 방법에 관한 것이다. 보다 구체적으로, 본 발명은 장치 내에 세포 배양물을 접종하고, 세포 배양물을 성장시키며 및/또는 세포 배양물을 채취하기 위해 세포 배양 장치로 재료를 공급하고 재료를 제거하는 방법에 관한 것이다. 세포 배양은 여러 이유로 성장할 수 있다. 예를 들어, 일 실시예에서, 세포 배양은 세포 치료를 위해 성장될 수 있다. 세포 치료는 엑스 비오(ex vio)를 조작하거나 변경한, 자가, 동종 또는 이종 세포의 투여에 의한 사람의 질병이나 상해의 예방, 치료, 치유 또는 완화이다. 세포 치료의 한 가지 목표는 손상된 조직이나 기관을 치료, 교체 또는 복원하는 것이다.

그러나, 세포 치료 이외에, 세포 배양은 많은 다른 이유로 본 발명에 따라 성장될 수 있다. 예를 들어, 세포 배양물은 연구 또는 다양한 다른 응용 분야에 사용될 수 있다.

현재, 바이오 의약품의 제조에 대한 주요 장애는 장치와 함께 사용되는 세포 배양 장치 및 바이오프로세스 컨테이너의 유지, 멸균 및 검증과 관련된 비용이다. 예를 들어, 세포 배양물을 성장시킬 때, 멸균의 유지는 항상 중요한 관심사이다. 예를 들어, 최종 제품은 멸균 여과, 열, 방사선 또는 화학적 수단을 사용하는 것과 같은 전통적인 방법으로는 멸균될 수 없다. 예를 들어, 위의 모든 방법은 생산되는 살아있는 세포를 파괴하거나 손상시킬 수 있다. 최종 제품의 멸균을 보장하기 위해, 세포 배양을 생산하는 공정은 항상 멸균에 관해 엄격하게 관리되어야 한다. 동시에, 액체 시약, 세포 자체 또는 단백질분해 조성물과 같은 상이한 세포 배양 배지가 세포 배양 용기 내외로 이동되어야 한다. 전형적으로, 이러한 이동은 외부 환경으로 시스템을 개방하는 방식으로 수행되어, 외부 오염물이 시스템으로 유입될 위험을 증가시킨다.

그러나, 본 발명에 따르면, 개방 연결을 생성하지 않으면서 세포 배양 배지를 세포 배양 장치 내외로 이동시킬 수 있는 방법 및 시스템이 개발되었다. 예를 들어, 바이오프로세스 컨테이너, 튜빙, 및 비교적 간단한 조작 시스템을 생성함으로써, 본 발명의 시스템 내의 개방 연결을 제거할 수 있다.

일반적으로, 본 발명의 시스템은 다층 세포 배양 장치와 관련하여 특별히 설계된 바이오프로세스 컨테이너 및/또는 특별히 설계된 바이오튜브의 사용을 포함한다. 예를 들어, 본 발명에 따라 사용된 바이오튜브는 일반적으로 엘라스토머 중합체로 제조되는 것 이외에 팽창된 벽 두께와 관련하여 비교적 큰 내경을 갖는다. 바이오튜브의 치수는 멸균 용접기를 사용하고 개방 연결을 형성하지 않으면서 바이오프로세스 컨테이너와 세포 배양 장치 사이의 연결을 허용한다. 또한, 바이오튜브의 치수는 클램핑될 때, 배양 중 및 조작 중에 라인의 비틀림을 감소시키는 것으로 밝혀졌다. 이렇게 비틀림을 형성하고 공기 유동을 차단하는 경향이 줄어들면, 조작 및 후속 조작자 오류를 줄이는 이점이 있다. 본원의 재료의 사용을 통해, 전체 시스템은 세포 배양 장치로 들어가고 성장되는 세포 배양물을 오염시킬 외적 위험을 크게 감소시키는 폐쇄된 시스템으로 유지될 수 있다. 또한, 용접을 이용함으로써 멸균의 무균 연결 및 멸균의 무균 분리가 공학 및 인원 통제가 감소된 환경에서 수행될 수 있다. 결과적으로, 본 발명에 따르면, 바이오프로세스 튜브는 분리될 수 있고 새로운 튜브는 통기된 인클로저 또는 연기 후드와 같은 제어된 환경 내에서 작동할 필요없이 세포 배양 장치에 연결될 수 있다.

도 1을 참조하면, 예를 들어, 본 발명에 따라 사용될 수 있는 세포 배양 장치(10)의 일 실시예가 도시되어 있다. 도 1의 세포 배양 장치(10)는 세포 배양 챔버의 층이 세포 배양 배지와 같은 유체로 직렬 또는 병렬로 채울 수 있게 하는 매니폴드를 통해 연결된 세포 배양 챔버의 층을 갖는 다층 구조로 되어 있다.

예를 들어, 도 1을 참조하면, 세포 배양 장치(10)는 복수의 세포 배양 챔버(12)를 포함한다. 도시된 실시예에서, 장치는 함께 적층된 3 개의 개별 서브 유닛을 포함한다. 세포 배양 장치(10)는 일반적으로 적층 배열된 10 개 초과의 세포 배양 챔버, 예를 들어, 약 15 개 초과의 세포 배양 챔버, 예를 들어, 약 20 개 초과의 세포 배양 챔버, 예를 들어, 약 25 개 초과의 세포 배양 챔버, 예를 들어, 30 개 초과의 세포 배양 챔버, 예를 들어, 35 개 초과의 세포 배양 챔버, 예를 들어, 40 개 초과의 세포 배양 챔버, 예를 들어, 약 45 개 초과의 세포 배양 챔버, 예를 들어, 약 50 개 초과의 세포 배양 챔버들을 포함할 수 있다. 일반적으로, 세포 배양 장치(10)는 약 200 개 미만의 분리 챔버, 예를 들어, 약 100 개 미만의 분리 챔버들을 수용한다. 도 1에 도시된 실시예에서, 예를 들어, 세포 배양 장치(10)는 36 개의 세포 배양 챔버들을 포함한다.

세포 배양 장치(10)는 유체 채널(16)과 교통하는 복수의 매니폴드(14)를 포함한다. 세포 배양 장치(10)는 바이오프로세스 튜브(18) 및 필터 튜브(22)에 연결된 필터(20)를 추가로 포함한다. 세포 배양 장치(10)를 세포 배양 배지로 채우기 위해, 세포 배양 배지는 바이오프로세스 튜브(18)를 통해 유체 채널(16)로 공급될 수 있다. 유체 채널(16)은 세포 배양 배지를 개별 세포 배양 챔버(12) 내로 지향시키는 매니폴드(14)와 교통한다. 세포 배양 장치(10)가 세포 배양 배지로 채워짐에 따라, 공기와 같은 가스가 장치 내에서 변위되어 필터 튜브(22) 및 가스 필터(20)를 통해 배출된다.

일 실시예에서, 세포 배양 장치는 복수의 서브 유닛 또는 세포 배양 용기를 포함할 수 있다. 각 세포 배양 용기는 복수의 세포 배양 챔버들을 포함할 수 있다. 세포 배양 용기는 외부 매니폴드를 사용하여 직렬 또는 병렬로 연결될 수 있다.

세포 배양 장치(10)는 임의의 적합한 재료로 제조될 수 있다. 일 실시예에서, 세포 배양 챔버가 세포 배양 배지로 완전히 채워지고 세포 배양 장치 내에 포함된 모든 가스가 필터(20)를 통해 배출되도록 세포 배양 장치가 설계된다. 세포 배양 장치(10)가 액체 시스템만으로 구성되는 경우, 장치는 세포 배양 챔버와 세포 배양 장치의 주위와의 사이에서 가스 교환을 허용하는 가스 투과성 부분을 포함할 수 있다. 예를 들어, 일 실시예에서, 각각의 세포 배양 챔버는 가스 투과성 필름에 의해 형성된 가스 투과성 섹션을 포함할 수 있다. 가스 투과성 필름은 세포 배양 챔버의 적어도 일부를 형성할 수 있고 챔버와 주변 환경 사이에서 가스가 전달되도록 한다. 그러나, 가스 투과성 필름은 또한 액체 불투과성으로 설계될 수 있다. 일 실시예에서, 예를 들어, 세포 배양 장치(10)는 가스 투과성 필름에 인접하여 위치된 장치 내의 가스 공간을 포함할 수 있다. 이 공간은 필름이 외부 환경과 가스를 교환할 수 있게 한다. 예를 들어, 일 실시예에서, 세포 배양 장치(10)는 가스 유동을 촉진시키기 위한 스페이서 층을 포함할 수 있다.

세포 배양 장치(10)에서 사용하기 위한 가스 투과성 필름은 상이한 중합체 재료로 제조될 수 있다. 중합체는 예를 들어, 폴리스티렌, 폴리에틸렌, 폴리카보네이트, 폴리올레핀, 에틸렌 비닐 아세테이트, 폴리메틸펜텐, 폴리프로필렌, 폴리술폰, 폴리테트라플루오로에틸렌(PTFE) 또는 호환성 플루오로중합체, 실리콘 고무 또는 공중합체, 폴리(스티렌 - 부타디엔 - 스티렌) 또는 이들 자재들의 조합물을 포함한다. 세포의 성장을 위한 제조 및 적합성이 허용될 때, 다양한 중합체 재료가 이용될 수 있다. 바람직하게는, 필름은 필름을 가로질러 가스의 효율적인 전달을 허용하는 두께를 갖는다. 예를 들어, 폴리스티렌 필름은 두께가 약 0.003 인치(약 75 마이크로미터)의 두께일 수 있지만, 다양한 두께가 또한 세포 성장을 허용한다. 이와 같이, 멤브레인은 임의의 두께, 바람직하게는 약 25 내지 250 마이크로미터, 또는 약 25 내지 125 마이크로미터일 수 있다. 멤브레인은 조립체의 챔버와 외부 환경 사이에서 가스의 자유로운 교환을 가능하게 하며 어떤 크기나 모양을 취할 수 있다. 바람직하게는, 멤브레인은 장치의 제조, 취급 및 조작을 위해 내구성이 있다.

세포 배양 장치의 나머지 부분은 예를 들어, 장치에 구조체를 제공할 수 있는 임의의 적합한 중합체 재료로 제조될 수 있다. 세포 배양 장치를 형성하는데 사용되는 재료는 또한 장치 내에서 성장되는 세포 배양과 호환해야 한다. 예를 들어, 세포 배양 장치는 폴리스티렌, 폴리메틸메타크릴레이트, 폴리비닐 클로라이드, 폴리카보네이트, 폴리술폰, 폴리스티렌 공중합체, 플루오로중합체, 폴리에스테르, 폴리아미드, 폴리스티렌 부타디엔 공중합체, 완전 수소화 스티렌 중합체, 폴리카보네이트 PDMS 공중합체, 및 예를 들어, 폴리에틸렌, 폴리프로필렌, 폴리메틸 펜텐, 폴리프로필렌 공중합체 및 주기성 올레핀 공중합체와 같은 폴리올레핀 등으로 제조될 수 있다.

세포 배양 장치(10)를 사용하여 세포 배양물을 배양하고 성장시킬 때, 다양한 다른 세포 배양 배지가 장치에 공급되고 장치로부터 제거될 필요가 있다. 예를 들어, 세포 배양 장치는 먼저 세포 배양물과 접종될 필요가 있다. 세포 배양물이 세포 배양 장치(10)에 공급된 후에, 특정 용도에 따라, 다양한 다른 세포 배양 배지가 장치에 공급되고 장치로부터 제거될 필요가 있을 수 있다. 예를 들어, 일 실시예에서, 세포 영양 조성물을 포함하는 다양한 시약이 세포 배양물의 성장 동안 세포 배양 장치에 공급될 수 있다. 일단 세포 배양이 원하는 정도로 성장하면, 세포는 장치로부터 채취된다. 일 실시예에서, 세포 배양 장치로부터 세포 배양물을 채취하기 위해, 세포에 손상을 주지 않으면서 장치의 벽으로부터 세포를 분리시키는 단백질 분해제를 장치에 공급할 수 있다. 그런 다음 세포 배양물을 장치에서 비우고 바이오프로세스 컨테이너에 넣고 원하는대로 사용한다.

세포 배양 장치에 세포 배양 배지를 공급하거나 세포 배양 장치로부터 유체를 제거하기 위해, 다양한 바이오프로세스 컨테이너의 연결 및 분리를 포함하는 다양한 조작이 요구된다. 바이오프로세스 컨테이너는 장치에 공급될 수 있는 세포 배양 배지를 수용할 수 있거나 세포 배양 장치로부터 유체를 수용하기 위해 비어 있을 수 있다. 본 발명의 일 양태는 세포 처리 장치(10)를 바이오프로세스 컨테이너와 연결 및 분리하기 위한 방법 및 시스템에 관한 것이다.

예를 들어, 도 2를 참조하면, 임의의 개방 연결을 생성하지 않으면서 세포 배양 장치(10)를 바이오프로세스 컨테이너(30)에 연결하기 위한 시스템의 일 실시예가 도시되어 있다. 도시된 바와 같이, 시스템은 바이오프로세스 컨테이너(30)에 부착된 세포 배양 링크 튜브(32) 및 바이오프로세스 튜브(18)를 함께 용접하도록 설계된 바이오웰딩 장치(24)를 추가로 포함한다. 바이오프로세스 컨테이너(30)는 세포 배양 배지(34)를 수용할 수 있다. 세포 배양 장치(10)에 접종하기 위해, 예를 들어, 세포 배양 배지(34)는 세포 배양 장치(10)에 공급 및 적재될 생존가능한 세포 배양물을 포함할 수 있다. 세포들은 세포 배양 장치(10) 내로 유동하고 임의의 수의 세포들은 각각의 세포 배양 챔버(12)로 유입된다. 각 세포 배양 챔버(12)는 세포 성장 및 증식을 위한 환경을 제공하는 세포 성장 표면을 포함한다.

본 발명 내용에 따르면, 바이오프로세스 튜브(18) 및 세포 배양 링크 튜브(32)는 호환 가능한 재료로 제조되며 개방 연결을 생성하지 않고 용접 공정 중 발생되는 파열의 위험없이 튜브들이 서로 용접될 수 있게 하는 것으로 확인된 특정 치수를 갖는다. 특히, 바이오프로세스 튜브(18) 및 세포 배양 링크 튜브(32)는 각각 직경과 벽 두께를 가지며, 다양한 장점 및 이점을 제공하는 것으로 확인된 열가소성 탄성중합체로 제조된다.

더욱 상세하게는, 바이오프로세스 튜브(18) 및 세포 배양 링크 튜브(32)는 비교적 큰 내경을 갖는 것과 관련하여 비교적 두꺼운 벽을 갖도록 제조된다. 예를 들어, 바이오프로세스 튜브(18) 및 세포 배양 링크 튜브(32)는 적어도 2.25mm, 예를 들어, 적어도 2.75mm, 예를 들어, 적어도 3mm의 벽 두께를 가질 수 있다. 벽 두께는 일반적으로 약 4.25mm 미만, 예를 들어, 약 3.75mm 미만, 예를 들어, 약 3.5mm 미만이다. 각각의 튜브의 내경은 일반적으로 약 7.5mm보다 크고, 예를 들어, 약 8.5mm보다 크고, 예를 들어, 약 9mm보다 크다. 내경은 일반적으로 약 12.5mm 미만, 예를 들어, 약 10.5mm 미만, 예를 들어, 약 10mm 미만이다. 일 실시예에서, 바이오프로세스 튜브(18)의 치수는 세포 배양 링크 튜브(32)의 치수와 동일하다.

바이오프로세스 튜브 및 세포 배양 링크 튜브의 외경은 일반적으로 약 13 mm보다 크고, 예를 들어, 약 14 mm보다 크고, 예를 들어, 약 15 mm보다 크다. 외경은 일반적으로 약 20 mm 미만, 예를 들어, 약 18 mm 미만, 예를 들어, 약 17 mm 미만이다.

또한, 바이오프로세스 튜브(18) 및 세포 배양 링크 튜브(32)는 호환성인 열가소성 중합체, 특히 호환성인 열가소성 탄성중합체로 제조된다. 예를 들어, 각 튜브는 실리콘 중합체로 만들 수 있다. 튜브를 제조하는데 사용될 수 있는 다른 탄성중합체는 폴리비닐 클로라이드 중합체, 폴리프로필렌 중합체, 폴리에틸렌 중합체 또는 폴리에스테르 중합체를 포함한다. 본원에 사용된 바와 같이, 중합체는 단독 중합체, 공중합체, 블록 공중합체, 랜덤 공중합체, 삼원 공중합체 등을 의미할 수 있다. 일 실시예에서, 튜브를 만드는데 사용되는 조성물은 또한 가소제를 포함한다.

일 실시예에서, 바이오프로세스 컨테이너(30)를 세포 배양 장치(10)에 연결하기 전에, 세포 배양 링크 튜브(32) 및 바이오프로세스 튜브(18)를 통한 유동을 정지시킬 수 있다. 예를 들어, 시스템은 튜브를 통한 유동을 방지하도록 작동될 수 있는 유동 정지 장치(38, 36)를 포함할 수 있다.

본 발명에 따라 세포 배양 링크 튜브(32)를 바이오프로세스 튜브(18)에 부착하기 위해, 튜브는 우선 바이오웰딩 장치(24)에 적재된다. 예를 들어, 일 실시예에서, 튜브 홀더(26)는 바이오웰딩 장치(24)로부터 제거될 수 있다. 바이오프로세스 튜브(18)와 세포 배양 링크 튜브(32)는 그 다음 바이오웰딩 장치(24)에 적재된다. 튜브들은 튜브 홀더(26)에 확고하게 배치된다. 도 2 및 도 3에 도시된 바와 같이, 각 튜브의 단부는 각 튜브 홀더(26)를 지나서 연장된다. 일단 바이오웰딩 장치(24) 내에 적재되면, 튜브 홀더(26) 모두는 도 3에 도시된 바와 같이 폐쇄될 수 있다.

상기 바이오프로세스 튜브(18)와 세포 배양 링크 튜브(32)를 상기 바이오웰딩 장치(24)에 적재한 후, 상기 바이오웰딩 장치에 블레이드를 삽입할 수 있다. 예를 들어, 블레이드는 플레이트 형태의 직사각형과 같은 임의의 적합한 형상을 가질 수 있다. 블레이드가 바이오웰딩 장치(24)에 적재되면, 바이오웰딩 장치의 커버가 폐쇄되고 용접 과정이 시작된다.

용접 공정 동안, 블레이드는 바이오프로세스 튜브(18) 및 세포 배양 링크 튜브(32)를 제조하는데 사용되는 중합체를 용융시키기에 충분한 온도로 가열된다. 예를 들어, 블레이드는 적어도 약 280 ℃, 예를 들어, 적어도 약 300 ℃, 예를 들어, 적어도 약 320 ℃, 또는 예를 들어, 적어도 약 340 ℃, 예를 들어, 적어도 약 380 ℃, 또는 예를 들어, 적어도 약 400 ℃의 온도로 가열될 수 있다. 블레이드가 가열되는 온도는 튜브를 형성하는 데 사용되는 열가소성 중합체를 포함하는 여러 팩터들에 따라 의존한다. 일반적으로, 블레이드는 약 600 ℃ 미만, 예를 들어, 약 500 ℃ 미만, 예를 들어, 약 450 ℃ 미만의 온도로 가열된다.

일단 블레이드가 가열되면, 블레이드는 튜브 홀더(26) 내에 유지되는 양 튜브와 접촉하게 된다. 일 실시예에서, 블레이드는 양 튜브를 동시에 절단하도록 설계될 수 있다. 블레이드는 일반적으로 튜브의 외경보다 큰 높이를 가지므로 절단 후 튜브는 밀봉된 배열로 블레이드와 접촉 상태를 유지한다. 이러한 방식으로, 블레이드는 개방 연결을 형성하지 않고 튜브를 절단할 수 있다. 튜브가 블레이드와 접촉하는 동안, 튜브는 바이오웰딩 장치에 의해 회전된다. 블레이드는 그 다음 개방 연결의 생성없이 튜브들 사이에서 제거되고 2 개의 튜브들이 함께 용접되도록 튜브의 절단 단부가 용융되거나 연화된 상태에 있다.

일 실시예에서, 바이오웰딩 장치(24)는 특히 도 4에 도시된 바와 같이 바이오프로세스 튜브(18)와 세포 배양 링크 튜브(32) 사이에 용접 구조체(40)를 형성한다. 용접 구조체(40)는 예를 들어, 누출 방지 플랜지(42)를 포함할 수 있다. 예를 들어, 바이오프로세스 튜브의 치수, 세포 배양 링크 튜브의 치수 및 튜브를 형성하는데 사용되는 열가소성 탄성중합체는 용접 공정 중에 플랜지(42)가 형성되도록 선택된다. 플랜지(42)는 적절한 용접이 이루어졌을뿐만 아니라 용접 공정 중에 튜브 파열을 방지한다. 플랜지(42)는 바이오프로세스 튜브(18) 및 세포 배양 링크 튜브(32)를 균일하게 둘러싸도록 구성될 수 있다. 플랜지(42)는 또한 전체 둘레에 대해 비교적 균일한 높이를 가질 수 있다. 예를 들어, 누출 방지 플랜지(42)는 약 0.2mm보다 크고, 예를 들어, 약 0.5mm보다 크고, 예를 들어, 약 0.7mm보다 크고, 예를 들어, 약 1mm보다 크고, 예를 들어, 약 1.2mm보다 크고 예를 들어, 약 1.5mm보다 더 큰 높이를 가질 수 있다. 상기 플랜지는 일반적으로 약 5mm 미만, 예를 들어, 약 3mm 미만의 높이를 갖는다. 플랜지(42)의 높이는 부분적으로 함께 용접되는 튜브의 벽 두께에 기인한다. 예를 들어, 벽 두께는 튜브들이 실제로 정렬되는 방식으로 튜브들이 적절하게 함께 용접되는 것을 보장한다.

용접 공정 후에, 용접 구조체(40)는 튜브의 원주 둘레에 가시적 플랜지가 존재하는 것을 보장하도록 조작자에 의해 검사될 수 있다. 플랜지의 존재는 방사상 정렬을 나타낼뿐만 아니라 튜브가 적절하게 함께 용접되는 것을 보장한다. 용접 구조체에 임의의 불규칙성이 표시된 경우, 용접 공정은 개방 연결을 생성하지 않고 반복될 수 있다. 가시적인 검사를 통해 용접 구조체가 균일하게 보이고 완전성을 갖는다면, 용접된 튜브는 바이오웰딩 장치로부터 제거될 수 있고 유동 정지 장치(36, 38)는 유체가 바이오프로세스 컨테이너(30)로부터 세포 배양 장치(10) 내로 흐를 수 있도록 개방될 수 있다.

도 2에 도시된 바와 같이, 바이오프로세스 컨테이너(30)는 중력이 세포 배양 배지(34)를 세포 배양 장치(10)로 배수하는 것을 도울 수 있도록 프레임(44)으로부터 현수될 수 있다.

도 5를 참조하면, 바이오프로세스 컨테이너(30)는 세포 배양 링크 튜브(32) 및 바이오프로세스 튜브(18)를 통해서 세포 배양 장치(10)에 연결되는 것으로 도시된다. 일 실시예에서, 세포 배양 장치(10)와 바이오프로세스 컨테이너(30)는 롤링 카트(46) 상에 배치될 수 있다. 바이오프로세스 컨테이너(30)는 카트(46)에 연결된 프레임(44)으로부터 현수될 수 있다. 이러한 방식으로, 세포 배양 배지(34)가 세포 배양 장치(10) 내로 배출되도록 중력이 사용될 수 있다. 도 5에 도시된 바와 같이, 세포 배양 장치(10)는 세포 배양 배지(34)를 적재하는 동안 장치 내에 존재할 수 있는 기포를 제거하기 위해 세포 배양 장치(10)를 조작하는 것을 돕기 위해 웨지 부재(48) 상에 배치될 수 있다.

세포 배양 장치(10)에 세포 배양물을 접종한 후, 세포 배양 장치(10)를 배양기 내에 설치하여 장치 내의 성장 표면 상에서 세포가 성장하도록 할 수 있다. 세포 성장 과정 동안, 소비된 세포 배양 배지를 추출하고 및/또는 신선한 배양 배지를 세포 배양 장치(10)에 삽입하는 것이 필요할 수 있다. 예를 들어, 신선한 세포 배양 배지는 임의의 적합한 시약 및/또는 세포 영양 조성물을 포함할 수 있다. 세포 배양 장치에서 세포 배양 배지를 제거하거나 세포 배양 장치에 새로운 세포 배양 배지를 공급하기 위해서는, 새로운 바이오프로세스 컨테이너를 장치에 부착할 필요가 있다. 본 발명에 따르면, 새로운 바이오프로세스 컨테이너는 상술한 바와 같이 세포 배양 링크 튜브와 교통할 수 있으며, 바이오프로세스 컨테이너는 상기 세포 배양 링크 튜브가 바이오프로세스 튜브에 용접되는 상술한 공정을 반복하는 세포 배양 장치와 유체 교통하게 배치될 수 있다. 일 실시예에서, 세포 배양 장치로부터 세포 배양 배지를 제거하기 위해, 빈 바이오프로세스 컨테이너가 상술한 바와 같은 공정을 사용하여 세포 배양 장치에 연결될 수 있다.

일 실시예에서, 세포 배양 장치 내의 세포 배양물이 일정 기간 동안 배양된 후, 장치로부터 세포를 채취하는 것이 바람직할 수 있다. 세포 배양 장치(10)로부터 세포 배양물을 채취하기 위해서는, 단백질 분해제를 세포 배양 장치에 공급할 수 있다. 예를 들어, 단백질 분해제는 세포를 손상시키지 않으면서 세포 배양 장치의 표면으로부터 세포를 분리시킬 수 있는 화학적 조성물을 포함한다. 일 실시예에서, 단백질 분해제는 효소 첨가제를 포함할 수 있다. 효소 첨가제는 예를 들어, 트립신, 프로나제, 콜라게나제 및/또는 단백질 K와 같은 임의의 적합한 프로테아제를 포함할 수 있다.

일 실시예에서, 단백질 분해제는 중성 pH 또는정상 배양 조건의 pH 이상의 pH에서 세포 배양 장치에 공급될 수 있다. 예를 들어, pH는 약 7 내지 약 10, 예를 들어, 약 7.8 내지 약 9.5일 수 있다. 원한다면, 성장 매체와 같은 세포 배양 장치에 함유된 임의의 액체를 제거하여 단백질 분해제를 장치에 공급하기 전에 세포 배양물로부터 분리할 수 있다. 원한다면, 세포 배양 장치에 단백질 분해제를 공급하기 전에 세포 배양물을 헹궈낼 수도 있다. 예를 들어, 세포 배양물은 수성 등장성 완충액으로 헹궈낼 수 있다.

단백질 분해제는 일반적으로 세포 배양 장치에 액체 형태로 첨가된다. 단백질 분해제 이외에, 단백질분해 조성물은 다양한 다른 성분 및 요소를 함유할 수 있다. 일 실시예에서, 예를 들어, 단백질 분해제는 EDTA와 같은 킬레이트 제와 함께 제공될 수 있다. 킬레이트 제는 세포 배양 장치에 존재할 수 있는 양이온의 스캐빈저로서 작용한다. 이러한 양이온은 예를 들어, 칼슘, 마그네슘 등을 포함할 수 있다. 단백질 분해제는 일반적으로 약 0.1 % 초과, 예를 들어, 약 0.2 % 초과의 농도로 단백질분해 조성물에 수용될 수 있다. 조성물 중의 단백질 분해제의 농도는 일반적으로 약 0.5 % 미만, 예를 들어, 약 0.3 % 미만, 예를 들어, 약 0.2 % 미만이다.

상기 세포 배양 장치(10)에 트립신과 같은 단백질 분해제를 공급하기 위하여, 단백질 분해제를 수용하는 바이오프로세스 컨테이너는 상술한 바와 같은 용접 공정을 이용하여 바이오프로세스 장치에 연결된다. 일 실시예에서, 단백질 분해제 이외에, 켄치 조성물이 또한 세포를 채취하기 위한 세포 배양 장치에 공급된다. 단백질 분해제는 효소 반응을 정지시키기 위해 켄치 조성물이 첨가되는 동안 세포 배양 장치의 성장 표면으로부터 세포를 방출한다. 단백질 분해제 및 퀸치 조성물이 세포 배양 장치에 공급된 후에, 세포 배양 장치의 전체 내용물은 퀸치 조성물을 공급하는 바이오프로세스 컨테이너 내로 배출되거나 빈 바이오프로세스 컨테이너 내로 배출될 수 있다.

도 6을 참조하면, 세포 배양 장치로부터 세포를 채취하기 위한 본 발명에 따라 제조된 시스템의 일 실시예가 도시되어 있다. 상기 시스템은 상기 바이오프로세스 튜브(18)와 유체 교통하는 세포 배양 장치(10)를 포함한다. 상기 바이오프로세스 튜브(18)는 본 발명에 따라 세포 배양 링크 튜브(32)와 용접된다. 도시된 바와 같이, 누출 방지 플랜지를 포함하는 용접 구조체(40)는 바이오프로세스 튜브(18)를 세포 배양 링크 튜브(32)로부터 분할한다.

세포 배양 링크 튜브(32)는 Y 구조체를 통해 제 1 Y 튜브(50) 및 제 2 Y 튜브(52)와 유체 교통한다. 제 1 Y 튜브(50)는 제 1 바이오프로세스 컨테이너(54)와 유체 교통하며, 제 2 Y 튜브(52)는 제 2 바이오프로세스 컨테이너(56)와 교통한다. 제 1 바이오프로세스 컨테이너(54)는 세포 배양물에 공급하기 위한 단백질분해 조성물을 수용하도록 구성된다. 한편, 제 2 바이오프로세스 컨테이너(56)는 전형적으로 단백질분해 조성물 후에 세포 배양 장치(10)에 공급되는 켄치 조성물을 수용하도록 설계된다. 시스템을 통한 유체 유동을 제어하기 위해, 튜브 각각은 유동 정지 장치(36)와 교통한다.

도 6에 도시된 시스템을 사용하여 세포를 채취하기 위해, 제 1 및 제 2 바이오프로세스 컨테이너는 먼저 상술한 바와 같이 본 발명의 공정을 통해 바이오프로세스 장치(10)에 연결된다. 이어서, 제 1 바이오프로세스 컨테이너(54)에 수용된 단백질분해 조성물을 세포 배양 장치(10)에 공급한다. 단백질분해 조성물을 세포 배양 장치(10)에 공급한 후, 세포 배양 장치(10)는 그 다음 제 2 바이오프로세스 컨테이너(56) 내로 배출된다. 유동 정지 장치(36)는 세포 배양 장치 내외로 바이오프로세스 컨테이너로부터 유동을 정지 및 개시하는데 사용될 수 있다. 도 6에 도시된 바와 같이, 제 2 Y 튜브(52)는 신속 분리 장치(58)를 포함한다. 일단 세포 배양물이 제 2 바이오프로세스 컨테이너(56)에 수집되면, 신속 분리 장치(58)는 바이오프로세스 컨테이너를 시스템으로부터 분리하기 위해 결합된다. 그 다음, 바이오프로세스 컨테이너(56)는 세포 배양물을 저장 및 운송하는데 사용될 수 있다.

세포 배양물을 배양, 성장 및 채취하기 위한 시스템 및 방법에 더하여, 본 발명은 또한 본 발명의 공정 및 시스템에서 사용하기에 특히 적합한 바이오프로세스 컨테이너에 관한 것이다. 예를 들어, 도 7 내지 도 14를 참조하면, 바이오프로세스 컨테이너(30)의 다양한 실시예가 도시된다. 일 실시예에서, 바이오프로세스 컨테이너(30)는 가요성 중합체 필름으로 제조될 수 있다. 중합체 필름은 예를 들어, 단층 필름 또는 다층 필름일 수 있다. 컨테이너를 제조하는데 사용될 수 있는 중합체는 예를 들어, 폴리비닐 클로라이드, 폴리프로필렌 및/또는 폴리에틸렌과 같은 폴리올레핀 중합체, 폴리에스테르 중합체 등을 포함한다. 일 실시예에서, 바이오프로세스 컨테이너(30)는 투명하거나 반투명이어서 컨테이너의 내용물을 볼 수 있다. 바이오프로세스 컨테이너는 일반적으로 약 0.75 리터와 같이 약 0.5 리터보다 큰 체적을 가질 수 있다. 컨테이너의 체적은 일반적으로 약 25 리터 미만, 예를 들어, 약 15 리터 미만, 예를 들어, 약 10 리터 미만, 예를 들어, 약 5 리터 미만, 예를 들어, 약 3 리터 미만, 예를 들어, 약 2 리터 미만, 예를 들어, 약 1.5 리터 미만이다.

도 7에 도시된 바이오프로세스 컨테이너(30)는 탭 부분(60)을 포함하는 제 1 단부를 포함할 수 있다. 탭 부분(60)은 바이오프로세스 컨테이너(30)를 유지 및 조작하기 위한 것이다. 일 실시예에서, 탭 부분(60)은 핸들로서의 역할을 할 수 있고 및/또는 클램프 또는 다른 유사한 유지 장치로부터 바이오프로세스 컨테이너를 현수하는데 사용될 수 있다.

바이오프로세스 컨테이너(30)의 반대편 단부는 복수의 포트들을 포함한다. 예를 들어, 바이오프로세스 컨테이너는 적어도 하나의 포트, 예를 들어, 적어도 2 개의 포트, 예를 들어, 적어도 1 개의 포트를 포함할 수 있다. 일반적으로, 바이오프로세스 컨테이너(30)는 약 6 포트 미만, 예를 들어, 약 5 포트 미만, 예를 들어, 약 4 포트 미만을 수용한다. 도 7에 도시된 실시예에서, 바이오프로세스 컨테이너는 4 포트(64,66,68,70)를 포함한다. 본 발명에 따르면, 바이오프로세스 컨테이너(30)는 포트(64,66,68,70)를 한정하는 유동 안내 장치(72)를 추가로 포함한다. 유동 안내 장치(72)는 강성 플라스틱과 같은 강성 재료로 제조될 수 있는 단일 구조체이다. 유동 안내 장치(72)는 바이오프로세스 컨테이너(30)를 취급 및 조작할 때 다수의 장점 및 이점을 제공한다. 유동 안내 장치(72)는 예를 들어, 다양한 튜브 및 다른 출구에 대한 바이오프로세스 컨테이너의 연결을 용이하게 한다. 또한, 유동 안내 장치(72)는 다른 경우 발생할 수 있는 비틀림 및 다른 유동 차단을 방지한다. 유동 안내 장치가 단일 재료 부재로 제조될 뿐만 아니라 과거의 바이오프로세스 컨테이너와 비교하여 상대적으로 큰 내경을 포함하기 때문에 이러한 장점이 얻어진다. 예를 들어, 각 포트(64, 66, 68, 70)의 내경은 약 6mm 초과, 예를 들어, 약 6.5mm 초과, 예를 들어, 약 7mm 초과, 예를 들어, 약 7.5mm 초과, 예를 들어, 약 8mm 초과, 예를 들어, 약 8.5mm 초과, 예를 들어, 약 9mm 초과일 수 있다. 유동 안내 장치(72) 내의 각각의 포트의 내경은 일반적으로 약 14mm 미만, 예를 들어, 약 12mm 미만, 예를 들어, 약 10mm 미만이다. 특히 도 7에서 도시된 바와 같이, 포트들은 다른 튜브, 입구 및 출구가 서로 간섭하지 않도록 이격되어 있다. 예를 들어, 각각의 포트 사이의 간격은 일반적으로 약 3mm 초과, 예를 들어, 약 4mm 초과, 예를 들어, 약 5mm 초과, 예를 들어, 약 6mm 초과, 예를 들어, 약 7mm 초과, 예를 들어, 약 8mm 초과, 예를 들어, 약 9mm 초과, 예를 들어, 약 10mm 초과일 수 있다. 각각의 포트 사이의 간격은 일반적으로 약 50 mm 미만, 예를 들어, 약 40 mm 미만, 예를 들어, 약 30 mm 미만, 예를 들어, 약 20 mm 미만, 예를 들어, 약 10 mm 미만, 예를 들어, 약 8 mm 미만, 예를 들어, 약 6 mm 미만이다.

도 7에 도시된 실시예에서, 바이오프로세스 컨테이너(30)는 4 개의 포트(64, 66, 68, 70)를 포함한다. 포트(66)는 상술한 바와 같이 세포 배양 링크 튜브(32)에 연결된다. 세포 배양 링크 튜브는 튜브가 비슷한 치수와 특성을 가진 다른 튜브와 성공적으로 용접될 수 있게 하는 물리적 치수와 특성을 가진다. 상술한 바와 같이, 세포 배양 링크 튜브(32)의 치수 및 특성은 개방 연결을 형성하지 않으면서 바이오프로세스 컨테이너(30)가 세포 배양 장치에 연결되게 한다. 따라서, 바이오프로세스 컨테이너(30)는 흄 후드(hume hood) 하에서 또는 광범위한 모니터링을 통해 제어된 환경에서 작동을 완료하지 않고도 세포 배양 장치와 연결 및 분리될 수 있다.

포트(66) 이외에, 바이오프로세스 컨테이너(30)는 샘플링 라인(74)에 부착된 포트(68)를 포함한다. 샘플링(74)은 바이오프로세스 컨테이너로부터 샘플을 얻기 위해 사용될 수 있다. 한편, 포트(70)는 충전 라인(76)에 연결된다. 포트(70) 및 충전 라인(76)은 바이오프로세스 컨테이너를 세포 배양 배지로 채우기 위해 사용될 수 있다.

마지막으로, 바이오프로세스 컨테이너(30)는 제 4 포트(64)를 포함한다. 제 4 포트(64)는 주입 포트(78)에 연결된다. 주입 포트(78)는 사용자가 소량의 재료를 바이오프로세스 컨테이너(30) 내로 주입할 수 있게 하도록 설계될 수 있다. 예를 들어, 주입 포트(78)는 원한다면 바이오프로세스 컨테이너(30) 내로 생존가능한 세포들을 주입하는데 사용될 수 있다. 주입 포트(78)는 또한 pH와 같은 세포 배양 배지의 특성을 변경시키는데 사용될 수 있다. 주입 포트(78)는 또한 바이오프로세스 컨테이너(30) 내에 수용된 세포 배양 배지를 다른 첨가제 및 성분과 결합시키는데 사용될 수 있다.

본원에 기술된 장치, 설비 및 방법은 원핵 및/또는 진핵 세포계를 포함하여 임의의 원하는 세포계를 배양하는데 적합하다. 또한, 실시예에서, 장치, 설비 및 방법은 현탁액 세포 또는 고정 의존성(부착성) 세포의 배양 중에 유체를 여과하기에 적합하고 폴리펩타이드 생성물, 핵산 생성물(예: DNA 또는 RNA), 또는 세포 및/또는 바이러스 치료법에서 사용되는 것과 같은 세포 및/또는 바이러스와 같은 약제 및 생물 의약품의 생산을 위해 구성된 생산 공정에 적합하다.

실시예에서, 세포는 재조합 치료 또는 진단 제품과 같은 생성물을 발현 또는 생성한다. 하기에 보다 상세히 기술되는 바와 같이, 세포에 의해 생성된 생성물의 예로는 항체 분자(예: 단일 클론 항체, 이중 특이적 항체), 항체 모방체(항원에 특이적으로 결합하지만 예를 들어, DARPins, affibodies, adnectins, or IgNARs와 같은 항체와 구조적으로 관련이 없는 폴리펩타이드), 융합 단백질(예: Fc 융합 단백질, 키메라 사이토카인), 다른 재조합 단백질(예: 글리코 실화된 단백질, 효소, 호르몬), 바이러스 치료제[예: 항암 온콜리틱(anti-cancer oncolytic), 유전자 치료 및 바이러스 면역 치료용 바이러스 벡터], 세포 치료제(예: 다능성 줄기 세포, 중간엽 줄기 세포 및 성체 줄기 세포), 백신 또는 지질 캡슐화 입자(예: 엑소좀, 바이러스 유사 입자), RNA(예: siRNA) 또는 DNA(예: 플라스미드 DNA), 항생제 또는 아미노산을 포함하지만, 이들에 국한되지 않는다. 실시예에서, 장치, 설비 및 방법은 바이오시밀러를 생산하는데 사용될 수 있다.

언급된 바와 같이, 실시예에서, 장치, 설비 및 방법은 진핵 세포, 예를 들어, 포유류 세포 또는 하등 진핵 세포, 예를 들어, 효모 세포 또는 사상 균류 세포 또는 원핵 세포, 예를 들어, 그람 양성 또는 그람 음성 세포의 생산 및/또는 진핵 세포 또는 원핵 세포의 생성물, 예를 들어, 단백질, 펩타이드, 항생제, 아미노산, 진핵 세포에 의해 대규모로 합성된 핵산(예: DNA 또는 RNA)의 생산을 허용한다. 여기에서 달리 언급하지 않는 한, 장치, 설비 및 방법에는 벤치 스케일, 파일럿 스케일 및 전체 생산 규모 용량을 포함하되 이에 제한되지 않는 원하는 체적 또는 생산 용량이 포함될 수 있다.

또한, 본원에서 달리 언급하지 않는 한, 상기 장치, 설비 및 방법은 교반 탱크, 에어리프트, 섬유, 마이크로섬유, 중공 섬유, 세라믹 매트릭스, 유동층, 고정층(들) 및/또는 분출 베드 바이오반응기를 포함하지만 이에 제한되지 않는 임의의 적합한 반응기를 포함할 수 있다. 본원에서 사용되는 "반응기"는 발효기 또는 발효 유닛, 또는 임의의 다른 반응 용기를 포함할 수 있으며, 용어 "반응기"는 "발효기"와 교환 가능하게 사용된다. 예를 들어, 일부 양태에서, 예시적인 바이오반응기 유닛은 다음 중 하나 이상 또는 전부를 수행할 수 있다: 영양소 및/또는 탄소원의 공급, 적절한 가스(예: 산소)의 주입, 발효의 유입 및 유출 유동 또는 세포 배양 배지, 가스 및 액체상 분리, 온도 유지, 산소 및 CO₂ 수준의 유지, pH 수준의 유지, 요동(예: 교반) 및/또는 세척/멸균 등이 포함된다. 발효 유닛과 같은 예시적인 반응 유닛은 유닛 내에 복수의 반응기를 포함할 수 있는데, 예를 들어, 유닛은 각 유닛 내에 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40, 45, 50, 60, 70, 80, 90 또는 100 또는 그 이상의 바이오반응기를 가질 수 있고 및/또는 설비는 설비 내에 하나 또는 복수의 반응기를 갖는 복수의 유닛을 포함할 수 있다. 다양한 실시예에서, 바이오반응기는 배치(batch), 반공급 배치, 공급 배치, 관류 및/또는 연속 발효 공정에 적합할 수 있다. 임의의 적합한 반응기 직경이 사용될 수 있다. 실시예에서, 바이오반응기는 약 100 mL 내지 약 50,000 L의 체적을 가질 수 있다. 비 제한적인 예는 100 mL, 250 mL, 500 mL, 750 mL, 1 리터, 2 리터, 3 리터, 4 리터, 5 리터, 6 리터, 7 리터, 8 리터, 9 리터, 10 리터, 15 리터, 20 리터, 25 리터, 30 리터, 40 리터, 50 리터, 60 리터, 70 리터, 80 리터, 90 리터, 100 리터, 150 리터, 200 리터, 250 리터, 300 리터, 350 리터, 400 리터, 450 리터, 500 리터, 550 리터, 600 리터, 650 리터, 700 리터, 750 리터, 800 리터, 850 리터, 900 리터, 950 리터, 1000 리터, 1500 리터, 2000 리터, 2500 리터, 3000 리터, 3500 리터, 4000 리터, 4500 리터, 5000 리터, 6000 리터, 7000 리터, 8000 리터, 9000 리터, 10,000 리터, 15,000 리터, 20,000 리터 및/또는 50,000 리터의 체적을 가질 수 있다. 또한, 적합한 반응기는 다용도, 일회용, 폐기용 또는 비-폐기용일 수 있으며, 스테인레스 강(예: 316L 또는 임의의 다른 적합한 스테인레스 강) 및 인코넬, 플라스틱 및/또는 유리와 같은 금속 합금을 포함하는 임의의 적합한 재료로 형성될 수 있다.

실시예들에서 그리고 본원에서 다르게 언급되지 않는 한, 본원에 기술된 장치들, 설비들 및 방법들은 이러한 생성물의 분리, 정제, 및 격리를 위한 조작 및/또는 장비와 같은, 달리 언급되지 않은 임의의 적절한 단위 조작 및/또는 장비를 포함할 수 있다. 기존의 고착 설비, 모듈식, 이동식 및 임시 설비 또는 기타 적절한 건축, 설비 및/또는 레이아웃과 같은 적합한 시설 및 환경을 사용할 수 있다. 예를 들어, 일부 실시예에서는 모듈식 클린 룸이 사용될 수 있다. 추가적으로, 달리 언급하지 않는 한, 본원에서 설명된 장치, 시스템 및 방법은 단일 위치 또는 설비에서 수용 및/또는 수행되거나 또는 대안적으로 개별 또는 복수의 위치 및/또는 설비에서 수용 및/또는 수행될 수 있다.

비제한적인 그리고 제한없는 예를 통해서, 미국 특허 공보 제 2013/0280797 ; 2012/0077429; 2011/0280797; 2009/0305626; 및 미국 특허 제 8,298,054; 7,629,167; 및 5,656,491은 본원에서 그 전체가 참조 문헌으로 포함되며, 적합할 수 있는 예시적인 설비, 장비 및/또는 시스템을 기술한다.

실시예에서, 세포는 진핵 세포, 예를 들어, 포유류 세포이다. 포유류 세포는 예를 들어, 인간 또는 설치류 또는 소세포계 또는 세포주일 수 있다. 그러한 세포, 세포계(cell line) 또는 세포주(cell strain)의 예는 예를 들어, 마우스 골수종(NSO)-세포계, 중국 햄스터 난소(CHO) 세포계, HT1080, H9, HepG2, MCF7, MDBK Jurkat, NIH3T3, PC12, BHK(아기 햄스터 신장 세포), VERO, SP2/0, YB2/0, Y0, C127, L 세포, COS, 예를 들어, COS1 및 COS7, QC1-3, HEK-293, VERO, PER.C6, HeLA, EBI, EB2, EB3, 종양 세포 또는 하이브리도마 세포계이다. 바람직하게는, 포유류 세포는 CHO 세포계이다. 일 실시예에서, 세포는 CHO 세포이다. 일 실시예에서, 세포는 CHO-K1 세포, CHO-K1 SV 세포, DG44 CHO 세포, DUXB1 1 CHO 세포, CHOS, CHO GS 녹아웃 세포, CHO FUT8 GS 녹아웃 세포 , CHOZN 또는 CHO 유래 세포이다. CHO GS 녹아웃 세포(예: GSKO 세포)는 예를 들어, CHO-K1 SV GS 녹아웃 세포이다. CHO FUT8 녹아웃 세포는 예를 들어, Potelligent® CHOK1 SV(Lonza Biologies, Inc.)이다. 진핵 세포는 또한 조류 세포, 세포계 또는 세포주, 예를 들어, EBx® cells, EB14, EB24, EB26, EB66, or EBvl3이다.

일 실시예에서, 진핵 세포는 줄기 세포이다. 줄기 세포는 예를 들어, 배아 줄기 세포(ESC), 성체 줄기 세포, 유도된 다능성 줄기 세포(iPSCs), 조직 특이적 줄기 세포(예: 조혈 줄기 세포) 및 간엽 줄기 세포(MSCs)를 포함하는 다능성 줄기 세포일 수 있다.

일 실시예에서, 세포는 본원에 기재된 임의의 세포의 분화된 형태이다. 일 실시예에서, 세포는 배양중인 임의의 일차 세포로부터 유래된 세포이다.

실시예에서, 세포는 인간 간세포, 동물 간세포 또는 비-실질 세포와 같은 간세포이다. 예를 들어, 세포는 평판 대사(plateable metabolism) 자격을 갖춘 인간 간세포, 평판 유도 자격을 갖춘 인간 간세포, plateable Qualyst Transporter Certified ™ 인간 간세포, 정지(suspension) 자격을 갖춘 인간 간세포(10 도너 및 20 도너 풀링된 간세포 포함), 인간 간장 쿠퍼 간세포, 인간 간 성상 세포, 개 간세포(단일 및 풀링된 비글 간세포 포함), 마우스 간세포(CD-1 및 C57Bl/6 간세포 포함), 쥐 간세포(Sprague-Dawley, Wistar Han 및 Wistar 간세포 포함), 원숭이 간세포(Cynomolgus 또는 Rhesus 원숭이 간세포 포함), 고양이 간세포(Domestic Shorthair hepatocytes 포함) 및 토끼 간세포(뉴질랜드 백색 간세포 포함)일 수 있다. 예시적 간세포는 미국, 27709 노스 캐롤라이나, 데이비스 드라이브 리서치 트라이앵글 파크 6 소재의 Triangle Research Labs, LLC로부터 상업적으로 입수 가능하다.

일 실시예에서, 진핵 세포는 예를 들어, 효모 세포(예: Pichia genus(예: Pichia pastoris, Pichia methanolica, Pichia kluyveri, and Pichia angusta), Komagataella genus(예: Komagataella pastoris, Komagataella pseudopastoris or Komagataella phaffii), Saccharomyces genus(예: Saccharomyces cerevisae, cerevisiae, Saccharomyces kluyveri, Saccharomyces uvarum), Kluyveromyces genus(예: Kluyveromyces lactis, Kluyveromyces marxianus), the Candida genus(예: Candida utilis, Candida cacaoi, Candida boidinii,), the Geotrichum genus(예: Geotrichum fermentans), Hansenula polymorpha, Yarrowia lipolytica, or Schizosaccharomyces pombe)와 같은 하부 진핵 세포이다. 종 Pichia pastoris가 선호된다. Pichia pastoris 균주의 예는 X33, GS115, KM71, KM71H 및 CBS7435이다.

일 실시예에서, 진핵 세포는 진균 세포[예: 아스페르길루스(예: A.niger, A.fumigatus, A.orzyae, A.nidula와 같은 Aspergillus), Acremonium(예: A.thermophilum), Chaetomium(예: C. thermaris), Cryyosporium(C. thermophile), Cordyceps(예: C. militaris), Corynascus, Ctenomyces, Fusarium(예: F.oxysporum), Glomerella(예: G. graminicola), Hypocrea(N. crassa)), Penicillium, Sporotrichum(예: S. thermophile), Thielavia(예: T. terrestris, T. heterothallica), Trichoderma(예: T. reesei) 또는 Verticillium(예: V. dahlia)]이다.

일 실시예에서, 진핵 세포는 곤충 세포(예: Sf9, Mimic^TM Sf9, Sf21, High Five^TM(BT1-TN-5B1-4) 또는 BT1-Ea88 세포), 조류 세포(예: of the genus Amphora, Bacillariophyceae, Dunaliella, Chlorella, Chlamydomonas, Cyanophyta(cyanobacteria), Nannochloropsis, Spirulina,or Ochromonas)의 세포, 또는 식물 세포[예: 외엽 식물(예: 옥수수, 쌀, 밀 또는 세타리아)로부터의 세포, 또는 쌍떡잎 식물(예: 카사바, 감자, 콩, 토마토, 담배, 알팔파, Physcomitrella patens 또는 Arabidopsis)로부터 유래된 세포]이다.

일 실시예에서, 세포는 세균 또는 원핵 세포이다.

실시예에서, 원핵 세포는 Bacillus, Streptomyces Streptococcus, Staphylococcus 또는 Lactobacillus와 같은 그람 양성 세포(Gram-positive cell)이다. 사용될 수 있는 바실러스는 예를 들어, B.subtiiis, B.amyloliquefaciens, B.licheniformis, B.natto 또는 B.megaterium이다. 실시예에서, 세포는 B.subtiiis 3NA 및 B.subtiiis 168과 같은 B.subtiiis이다. 바실러스는 예를 들어, 오하이오 OH 43210-1214 콜럼버스 484 웨스트 12차 애비뉴 바이오라지컬 사이언스 556 소재의 Bacillus Genetic Stock Center로부터 얻을 수 있다.

일 실시예에서, 원핵 세포는 살모넬라 종 또는 대장균과 같은 그람 음성 세포(Gram-negative cell, 예를 들어, TG1, TG2, W3110, DH1, DHB4, DH5a, HMS 174, HMS174(DE3), NM533, C600, HB101, JM109, MC4100, XL1-Blue 및 Origami뿐만 아니라, 예를 들어, BL-21 또는 BL21(DE3) 및 같은 대장균 B-균주로부터 유래된 것이며, 이들은 모두 상업적으로 입수 가능하다.

적합한 숙주 세포는 예를 들어, DSMZ(독일 브라운쉬바이히 소재의 Deutsche Sammlung von Mikroorganismen 및 Zellkulturen GmbH) 또는 American Type Culture Collection(ATCC)와 같은 배양물 수집물로부터 상업적으로 입수할 수 있다.

실시예에서, 배양된 세포는 치료 용도로 단백질, 예를 들어, 항체, 예를 들어, 모노클로날 항체 및/또는 재조합 단백질을 생산하는데 사용된다. 실시예에서, 배양된 세포는 펩타이드, 아미노산, 지방산 또는 기타 유용한 생화학 중간체 또는 대사산물을 생산한다. 예를 들어, 실시예에서, 약 4000 달톤 내지 약 140,000 달톤 초과의 분자량을 갖는 분자를 생산할 수 있다. 실시예에서, 이들 분자는 일정 범위의 복잡성을 가질 수 있으며, 글리코실화를 포함하는 번역후 변형(posttranslational modification)을 포함할 수 있다.

실시예에서, 단백질은 예를 들어, 다음과 같다: BOTOX, Myobloc, Neurobloc, Dysport(또는 보툴리눔 신경 독소의 다른 혈청형), alglucosidase 알파, daptomycin, YH-16, choriogonadotropin 알파, filgrastim, cetrorelix, interleukin-2, aldesleukin, teceleulin, denileukin diftitox, 인터페론 알파-n3(주사), 인터페론 알파-nl, DL-8234, 인터페론, Suntory(감마-1 a), 인터페론 감마, thymosin 알파 1 , tasonermin, DigiFab, ViperaTAb, EchiTAb, CroFab, nesiritide, abatacept, alefacept, Rebif, eptoterminalfa, teriparatide(골다공증), 칼시토닌 주사가능(뼈질환), 칼시토닌(비강, 골다공증), etanercept, 헤모글로빈 glutamer 250(bovine), drotrecogin 알파, collagenase, carperitide, 재조합 인간 표피 성장 인자(국소 젤, 상처 치유), DWP401 , 다브에포틴 알파, 에포틴 오메가, 에포틴 베타, 에포틴 알파, desirudin, lepirudin, bivalirudin, nonacog 알파, Mononine, eptacog 알파(활성화), 재조합 인자 VIII+VWF, Recombinate, 재조합 인자 VIII, 인자 VIII(재조합), Alphnmate, octocog 알파, 인자 VIII, palifermin,lndikinase, tenecteplase, alteplase, pamiteplase, reteplase, nateplase, monteplase, follitropin 알파, rFSH, hpFSH, micafungin, pegfilgrastim, lenograstim, nartograstim, sermorelin, glucagon, exenatide, pramlintide, iniglucerase, galsulfase, Leucotropin, molgramostirn, triptorelin acetate, histrelin(피하이식, 하이드론), deslorelin, histrelin, nafarelin, leuprolide sustained release depot(ATRIGEL), leuprolide implant(DUROS), goserelin, Eutropin, KP-102 program, somatropin, mecasermin(성장 실패), enlfavirtide, Org-33408, 인슐린 glargine, 인슐린 glulisine, 인슐린(흡입), 인슐린 lispro, 인슐린 deternir, 인슐린(buccal, RapidMist), mecasermin rinfabate, anakinra, celmoleukin, 99 mTc-apcitide 주사, myelopid, 베타세론, glatiramer acetate, Gepon, sargramostim, oprelvekin, 인간 백혈구 유래된 알파 인터페론, Bilive, 인슐린(재조합), 재조합 인간 인슐린, 인슐린 aspart, mecasenin, Roferon-A, 인터페론-알파 2, Alfaferone, 인터페론 alfacon-1 , 인터페론 알파, 아보넥스의 재조합 인간 황체 호르몬, 쇠약성 알파, trafermin, ziconotide, taltirelin, diboterminalfa, atosiban, becaplermin, eptifibatide, Zemaira, CTC-1 1 1 , Shanvac-B, HPV 백신(quadrivalent), octreotide, lanreotide, ancestirn, agalsidase 베타, agalsidase 알파, laronidase, prezatide copper acetate(국소 겔), rasburicase, ranibizumab, Actimmune, PEG-lntron, Tricomin, 재조합 집 먼지 진드기 알러지 탈감작 주사, 재조합 인간 부갑상선 호르몬(PTH) 1 -84(sc, 골다공증), 에포틴 delta, transgenic anti트롬빈 III, Granditropin, Vitrase, 재조합 인슐린, 인터페론-알파(oral lozenge), GEM-21 S, vapreotide, idursulfase, omnapatrilat, 재조합 serum 알부민, certolizumab pegol, glucarpidase, 인간 재조합 C1 esterase 억제제(angioedema), lanoteplase, 재조합 인간 성장 호르몬, enfuvirtide(무바늘 주사, 바이오젝터 2000), VGV-1 , 인터페론(알파), lucinactant, aviptadil(흡입, 폐질환), icatibant, ecallantide, omiganan, Aurograb, pexigananacetate, ADI-PEG-20, LDI-200, degarelix, cintredelinbesudotox, Favld, MDX-1379, ISAtx-247, liraglutide, teriparatide(골다공증), tifacogin, AA4500, T4N5 liposome lotion, catumaxomab, DWP413, ART-123, Chrysalin, desmoteplase, amediplase, corifollitropin알파, TH-9507, teduglutide, Diamyd, DWP-412, 성장 호르몬(서방성 주사), 재조합 G-CSF, 인슐린(흡입, 공기), 인슐린(흡입, 테크노스피어), 인슐린(흡입, AERx), RGN-303, DiaPep277, 인터페론 베타(hepatitis C viral infection(HCV)), 인터페론 알파-n3(oral), belatacept, transdermal 인슐린 patches, AMG-531 , MBP-8298, Xerecept, opebacan, AIDSVAX, GV-1001 , LymphoScan, ranpirnase, Lipoxysan, lusupultide, MP52(beta-tricalciumphosphate carrier, 뼈 재생), 흑색종 백신, sipuleucel-T, CTP-37, Insegia, vitespen, 인간 트롬빈(동결된, 수술 출혈), 트롬빈, TransMID, alfimeprase, Puricase, terlipressin(정맥, 간장 증후군), EUR-1008M, 재조합 FGF-I(주사가능, 정맥 질환), BDM-E, rotigaptide, ETC-216, P-1 13, MBI-594AN, duramycin(흡입, 낭포성 섬유증), SCV-07, OPI-45, Endostatin, Angiostatin, ABT-510, Bowman Birk 억제제 Concentrate, XMP-629, 99 mTc-Hynic-Annexin V, kahalalide F, CTCE-9908, teverelix(연장성 질환), ozarelix, rornidepsin, BAY-504798, interleukin4, PRX-321 , Pepscan, iboctadekin, rhlactoferrin, TRU-015, IL-21 , ATN-161 , cilengitide, Albuferon, Biphasix, IRX-2, 오메가 인터페론, PCK-3145, CAP-232, pasireotide, huN901 -DMI, ovarian 암 immuno치료 백신, SB-249553, Oncovax-CL, OncoVax-P, BLP-25, CerVax-16, multi-epitope 펩타이드 흑색종 백신(MART-1 , gp100, tyrosinase), nemifitide, rAAT(흡입), rAAT(dermatological), CGRP(흡입, 천식), pegsunercept, thymosinbeta4, plitidepsin, GTP-200, ramoplanin, GRASPA, OBI-1 , AC-100, salmon 칼시토닌(구강, 엘리겐), 칼시토닌(구강, 골다공증), examorelin, capromorelin, Cardeva, velafermin, 131 l-TM-601 , KK-220, T-10, ularitide, depelestat, hematide, Chrysalin(국소), rNAPc2, 재조합 인자 V1 1 1(PEGylated liposomal), bFGF, PEGylated 재조합 staphylokinase variant, V-10153, SonoLysis Prolyse, NeuroVax, CZEN-002, islet cell neogenesis therapy, rGLP-1 , BIM-51077, LY-548806, exenatide(controlled release, Medisorb), AVE-0010, GA-GCB, avorelin, ACM-9604, linaclotid eacetate, CETi-1 , Hemospan, VAL(injectable), 신속 작용 인슐린(injectable, Viadel), intranasal 인슐린, 인슐린(inhaled), 인슐린(구강, 엘리겐), 재조합 methionyl 인간 leptin, pitrakinra subcutaneous 주사, eczema), pitrakinra(흡입 건조 분말, 천식), Multikine, RG-1068, MM-093, NBI-6024, AT-001 , PI-0824, Org-39141 , Cpn10(자가면역 질환/염증), talactoferrin(국소), rEV-131(안과), rEV-131(호흡 질환), 구강 재조합 인간 인슐린(당뇨병), RPI-78M, oprelvekin(구강), CYT-99007 CTLA4-lg, DTY-001 , valategrast, 인터페론 알파-n3(국소), IRX-3, RDP-58, Tauferon, bile salt stimulated lipase, Merispase, alaline phosphatase, EP-2104R, Melanotan-ll, bremelanotide, ATL-104, 재조합 인간 microplasmin, AX-200, SEMAX, ACV-1 , Xen-2174, CJC-1008, dynorphin A, SI-6603, LAB GHRH, AER-002, BGC-728, 말라리아 백신(virosomes, PeviPRO), ALTU-135, parvovirus B19 백신, 인플루엔자 백신(재조합 neuraminidase), 말라리아/HBV 백신, 탄저균 백신, Vacc-5q, Vacc-4x, HIV 백신(구강), HPV 백신, Tat Toxoid, YSPSL, CHS-13340, PTH(1 -34) liposomal cream(Novasome), Ostabolin-C, PTH analog(국소, 건선), MBRI-93.02, MTB72F 백신(결핵), MVA-Ag85A 백신(결핵), FARA04, BA-210, 재조합 plague FIV 백신, AG-702, OxSODrol, rBetVI , Der-p1/Der-p2/Der-p7 알레르기-표적 백신(진드기 알러지), PR1 펩타이드 항원(백혈병), mutant ras 백신, HPV-16 E7 립포펩타이드 백신, labyrinthin 백신(선암종), CML 백신, WT1 -펩타이드 백신(암), IDD-5, CDX-1 10, Pentrys, Norelin, CytoFab, P-9808, VT-1 1 1 , icrocaptide, telbermin(피부, 당뇨성 발 궤양), rupintrivir, reticulose, rGRF, HA, 알파-galactosidase A, ACE-01 1 , ALTU-140, CGX-1 160, 안지오텐신 치료 백신, D-4F, ETC-642, APP-018, rhMBL, SCV-07(구강, 결핵), DRF-7295, ABT-828, ErbB2-specific immunotoxin(항암), DT3SSIL-3, TST-10088, PRO-1762, Combotox, cholecystokinin-B/가스트린-수용체 결합 펩타이드, 1111-hEGF, AE-37, trasnizumab-DM1 , 항작용제 G, IL-12(재조합), PM-02734, IMP-321 , rhlGF-BP3, BLX-883, CUV-1647(국소), L-19 기반 방사선 면역치료(암), Re-188-P-2045, AMG-386, DC/1540/KLH 백신(암), VX-001 , AVE-9633, AC-9301 , NY-ESO-1 백신(펩타이드s), NA17.A2 펩타이드, 흑색종 백신(펄스형 항원 치료), prostate 암 백신, CBP-501 , 재조합 인간 lactoferrin(dry eye), FX-06, AP-214, WAP-8294A(injectable), ACP-HIP, SUN-1 1031 , 펩타이드 YY [3-36](obesity, intranasal), FGLL, atacicept, BR3-Fc, BN-003, BA-058, 인간 부갑상선 호르몬 1 -34(비강, 골다공증), F-18-CCR1 , AT-1 100(복강 질환/당뇨병), JPD-003, PTH(7-34) liposomal cream(Novasome), duramycin(안과, 건조증), CAB-2, CTCE-0214, GlycoPEGylated erythropoietin, EPO-Fc, CNTO-528, AMG-1 14, JR-013, 인자 XIII, aminocandin, PN-951 , 716155, SUN-E7001 , TH-0318, BAY-73-7977, teverelix(즉시 방출), EP-51216, hGH(제어 방출, Biosphere), OGP-I, sifuvirtide, TV4710, ALG-889, Org-41259, rhCCI O, F-991 , thymopentin(폐 질환), r(m)CRP, 간장선택 인슐린, 서브알린, L19-IL-2 fusion 단백질, elafin, NMK-150, ALTU-139, EN-122004, rhTPO, thrombopoietin 수용체 작용제(혈소판 감소장애), AL-108, AL-208, 신경 성장 인자 길항제(통증), SLV-317, CGX-1007, INNO-105, 구강 teriparatide(엘리겐), GEM-OS1 , AC-162352, PRX-302, LFn-p24 fusion 백신(Therapore), EP-1043, S 폐렴 소아 백신, 말라리아 백신, Neisseria meningitidis Group B 백신, neonatal group B streptococcal 백신, 탄저균 백신, HCV 백신(gpE1 +gpE2+MF-59), 중이염 치료, HCV 백신(핵심 항원+ISCOMATRIX), hPTH(1 -34)(transdermal, ViaDerm), 768974, SYN-101 , PGN-0052, aviscumnine, BIM-23190, 결핵 백신, multi-epitope tyrosinase 펩타이드, 암 백신, enkastim, APC-8024, GI-5005, ACC-001 , TTS-CD3, 혈관-표적 TNF(고형 종양), desmopressin(buccal controlled-release), onercept, and TP-9201.

일부 실시예에서, 폴리펩타이드는 adalimumab(HUMIRA), infliximab(REMICADE™), rituximab(RITUXAN™/MAB THERA™) etanercept(ENBREL™), bevacizumab(AVASTIN™), trastuzumab(HERCEPTIN™), pegrilgrastim(NEULASTA™), 또는 바이오시밀러 및 바이오베터를 포함하는 임의의 다른 적합한 폴리펩타이드이다.

다른 적합한 폴리펩타이드는 US2016/0097074의 하기의 및 표 1에 기재되어 있다 :

실시예에서, 폴리펩티드는 표 2에 나타낸 바와 같이 호르몬, 혈액 응집 인자/응고 인자, 사이토카인/성장 인자, 항체 분자, 융합 단백질, 단백질 백신 또는 펩타이드이다.

실시예에서, 단백질은 다중특이성 단백질, 예를 들어, 표 3에 나타낸 바와 같은 이중특이성 항체이다.

본 발명에 대한 이들 및 다른 변형 및 변경은 첨부된 청구범위에서 보다 구체적으로 설명되는 본 발명의 사상 및 범위를 벗어나지 않고 당업자에 의해 실시될 수 있다. 또한, 다양한 실시예의 양태들이 전체적으로 또는 부분적으로 상호 교환될 수 있다는 것을 이해해야 한다. 또한, 당업자는 상술한 설명이 단지 예를 들어, 첨부된 청구범위에서 더 기술된 본 발명을 제한하고자 하는 것이 아님을 이해할 것이다.

Claims (26)

1. 바이오프로세스 시스템으로서,
   세포 배양물들을 성장 및 채취하기 위한 세포 배양 장치로서, 상기 세포 배양 장치는 적층 배열된 복수의 세포 배양 챔버들을 포함하고, 직경 및 벽 두께를 갖는 적어도 하나의 바이오프로세스 튜브를 포함하고, 상기 적어도 하나의 바이오프로세스 튜브는 열가소성 탄성중합체로 구성되는, 상기 세포 배양 장치;
   세포 배양 배지를 유지하기 위한 중공 인클로저를 한정하는 복수의 바이오프로세스 컨테이너들로서, 각각의 컨테이너는 상기 중공 인클로저와 교통하는 세포 배양 링크 튜브를 포함하고, 상기 링크 튜브는 직경, 벽 두께를 구비하고 상기 바이오프로세스 튜브의 상기 직경, 벽 두께 및 열가소성 탄성중합체와 호환될 수 있는 재료로 구성되는, 상기 복수의 바이오프로세스 컨테이너들을 포함하고,
   상기 각 바이오프로세스 컨테이너의 세포 배양 링크 튜브는 상기 각 바이오프로세스 컨테이너가 상기 세포 배양 장치와 유체 교통하게 선택적으로 배치될 수 있도록 상기 세포 배양 장치의 바이오프로세스 튜브에 용접되도록 구성되고, 상기 각 세포 배양 링크 튜브와 상기 바이오프로세스 튜브는 적어도 2.25 mm의 벽 두께와 7.5mm 내지 12.5mm의 내경을 가지고,
   상기 세포 배양 링크 튜브들 중 하나는 상기 세포 배양 장치의 바이오프로세스 튜브에 연결되고, 상기 세포 배양 링크 튜브는 상기 바이오프로세스 튜브에 용접되어 용접 구조체를 형성하고, 상기 용접 구조체는 상기 세포 배양 링크 튜브가 상기 바이오프로세스 튜브에 부착된 위치를 둘러싸고 용접시 상기 세포 배양 링크 튜브 및 상기 바이오프로세스 튜브로부터 형성되는 누출 방지 플랜지를 포함하는, 바이오프로세스 시스템.
2. 삭제
3. 제 1 항에 있어서,
   상기 누출 방지 플랜지는 0.2mm보다 큰 높이를 갖는, 바이오프로세스 시스템.
4. 제 1 항 또는 제 3 항에 있어서,
   상기 바이오프로세스 튜브 내에 개방 연결부를 생성하지 않고 재료들을 상기 세포 배양 장치로 공급하거나 상기 세포 배양 장치로부터 재료들을 제거하기 위해 상기 바이오프로세스 컨테이너들 중 하나와 유체 교통하게 상기 세포 배양 장치를 배치하기 위해, 상기 바이오프로세스 튜브를 상기 세포 배양 링크 튜브들 중 하나와 함께 동시에 절단 및 용접하도록 구성된 바이오웰딩 장치를 추가로 포함하는, 바이오프로세스 시스템.
5. 제 4 항에 있어서,
   상기 바이오웰딩 장치에서 상기 튜브들의 절단 및 용접 중에 상기 바이오프로세스 튜브 및 상기 링크 튜브들 내의 유체들의 유동을 방지하기 위한 유동 정지 장치들을 추가로 포함하는, 바이오프로세스 시스템.
6. 제 1 항 또는 제 3 항에 있어서,
   상기 열가소성 탄성중합체는 실리콘 중합체, 폴리비닐 클로라이드 중합체, 폴리프로필렌 중합체, 폴리에틸렌 중합체 또는 폴리에스테르 중합체를 포함하는, 바이오프로세스 시스템.
7. 제 1 항 또는 제 3 항에 있어서,
   상기 바이오프로세스 튜브는 적어도 2.75mm의 벽 두께를 갖는, 바이오프로세스 시스템.
8. 제 1 항 또는 제 3 항에 있어서,
   상기 바이오프로세스 튜브는 2.75mm 내지 3.75mm의 벽 두께를 갖는, 바이오프로세스 시스템.
9. 제 1 항 또는 제 3 항에 있어서,
   상기 바이오프로세스 튜브는 8.5mm 내지 10.5mm의 내경을 갖는, 바이오프로세스 시스템.
10. 제 1 항 또는 제 3 항에 있어서,
    상기 바이오프로세스 튜브 및 상기 링크 튜브들은 동일한 직경, 벽 두께를 가지며 동일한 열가소성 탄성중합체로 제조되는, 바이오프로세스 시스템.
11. 제 1 항 또는 제 3 항에 있어서,
    상기 시스템은 적어도 세 개의 바이오프로세스 컨테이너들을 포함하고, 상기 컨테이너들 중 적어도 하나는 시약을 수용하고, 상기 컨테이너들 중 적어도 하나는 상기 세포 배양 장치로부터 액체 배지를 수용하기 위해 비어 있는, 바이오프로세스 시스템.
12. 제 1 항 또는 제 3 항에 있어서,
    상기 바이오프로세스 컨테이너들의 중공 인클로저는 0.5 리터 내지 25 리터의 체적을 갖는, 바이오프로세스 시스템.
13. 세포 배양 장치에 재료들을 전달하는 방법으로서,
    적어도 하나의 바이오프로세스 튜브의 단부를 통한 유체 유동을 차단하는 단계로서, 상기 바이오프로세스 튜브는 세포 배양 장치에 연결되고 상기 세포 배양 장치와 유체 교통하며, 상기 세포 배양 장치는 적층 배열된 복수의 세포 배양 챔버들을 포함하며, 상기 바이오프로세스 튜브는 내경 및 벽 두께를 갖는 열가소성 탄성중합체를 포함하며, 상기 바이오프로세스 튜브는 상기 세포 배양 장치로 재료들을 전달하고 상기 세포 배양 장치로부터 재료들을 제거하도록 구성되는, 상기 차단하는 단계;
    세포 배양 배지를 수용하는 바이오프로세스 컨테이너와 교통하는 세포 배양 링크 튜브의 단부를 통한 유체 유동을 차단하는 단계;
    상기 바이오프로세스 튜브 및 상기 세포 배양 링크 튜브의 단부들을 함께 절단 및 용접하는 단계로서, 상기 바이오프로세스 튜브 및 상기 세포 배양 링크 튜브가 적어도 2.25mm의 벽 두께와 7.5mm 내지 12.5mm의 내경을 가지고, 상기 바이오프로세스 튜브의 단부와 상기 세포 배양 링크 튜브의 단부는 용접 구조체를 형성하고, 상기 용접 구조체는 상기 바이오프로세스 튜브가 상기 세포 배양 링크 튜브에 용접된 위치를 둘러싸는 누출 방지 플랜지를 포함하는, 상기 절단 및 용접하는 단계;
    상기 바이오프로세스 튜브 및 상기 세포 배양 링크 튜브를 통한 유체 유동을 차단해제하는 단계; 및
    상기 바이오프로세스 컨테이너로부터 상기 링크 튜브 및 바이오프로세스 튜브를 통해 상기 세포 배양 장치로 상기 세포 배양 배지를 공급하는 단계를 포함하는, 세포 배양 장치에 재료들을 전달하는 방법.
14. 제 13 항에 있어서,
    상기 적어도 하나의 바이오프로세스 튜브의 단부를 통한 유체 유동을 차단하는 단계;
    상기 세포 배양 링크 튜브의 단부를 통한 유체 유동을 차단하는 단계;
    상기 바이오프로세스 튜브를 통한 유체 유동을 차단하는 단계;
    세포 배양 배지를 수용하는 제 2 바이오프로세스 컨테이너와 교통하는 제 2 세포 배양 링크 튜브의 단부를 통한 유체 유동을 차단하는 단계;
    상기 바이오프로세스 튜브를 상기 제 2 세포 배양 링크 튜브의 단부와 함께 절단 및 용접하는 단계로서, 상기 바이오프로세스 튜브 및 상기 제 2 세포 배양 링크 튜브의 단부는 상기 바이오프로세스 튜브의 개방 연결부가 절단 및 용접 과정 중에 절대로 형성되지 않는 방식으로 함께 절단 및 용접되는, 상기 절단 및 용접하는 단계;
    상기 바이오프로세스 튜브 및 상기 제 2 세포 배양 링크 튜브를 통한 유체 유동을 차단해제하는 단계; 및
    상기 세포 배양 배지를 상기 제 2 바이오프로세스 컨테이너로부터 상기 제 2 세포 배양 링크 튜브 및 바이오프로세스 튜브를 통해 상기 세포 배양 장치 내로 공급하는 단계를 추가로 포함하는, 세포 배양 장치에 재료들을 전달하는 방법.
15. 제 13 항에 있어서,
    상기 바이오프로세스 튜브 및 상기 세포 배양 링크 튜브의 단부들을 함께 절단 및 용접하는 단계는 통기된 인클로저 내에서 발생하지 않는, 세포 배양 장치에 재료들을 전달하는 방법.
16. 제 13 항에 있어서,
    상기 세포 배양 배지는 상기 세포 배양 장치를 접종하고 상기 세포 배양 장치 내에서 세포 배양물을 성장시키기 위한 생존가능한 세포들을 포함하는, 세포 배양 장치에 재료들을 전달하는 방법.
17. 제 13 항에 있어서,
    상기 바이오프로세스 튜브의 단부는 개방 연결부를 형성하지 않고 절단되어 상기 세포 배양 링크 튜브의 단부에 용접되는, 세포 배양 장치에 재료들을 전달하는 방법.
18. 제 14 항에 있어서,
    상기 세포 배양 배지는 상기 세포 배양 장치를 접종하고 상기 세포 배양 장치 내에서 세포 배양물을 성장시키기 위한 생존가능한 세포들을 포함하고, 상기 제 2 바이오프로세스 컨테이너에 수용된 상기 세포 배양 배지는 세포 영양 성분을 포함하는, 세포 배양 장치에 재료들을 전달하는 방법.
19. 제 14 항에 있어서,
    상기 제 2 바이오프로세스 컨테이너 내에 수용된 상기 세포 배양 배지는 상기 세포 배양 장치로부터 세포 배양물을 분리하여 채취하기 위한 단백질 분해제를 포함하는, 세포 배양 장치에 재료들을 전달하는 방법.
20. 제 14 항에 있어서,
    상기 제 2 세포 배양 링크 튜브는 제 1 Y 튜브 및 제 2 Y 튜브로 이어지는 Y 연결부를 포함하고, 상기 제 1 Y 튜브는 상기 제 2 바이오프로세스 컨테이너에 연결되고, 상기 제 2 Y 튜브는 제 3 바이오프로세스 컨테이너에 연결되고, 상기 제 2 바이오프로세스 컨테이너에 수용된 상기 세포 배양 배지는 상기 세포 배양 장치로부터 세포 배양물을 분리 및 채취하기 위한 단백질 분해제를 포함하며, 상기 제 3 바이오프로세스 컨테이너는 켄치 조성물(quench composition)을 수용하고, 상기 켄치 조성물은 상기 단백질 분해제 다음에 상기 세포 배양 장치 내로 공급되는, 세포 배양 장치에 재료들을 전달하는 방법.
21. 제 20 항에 있어서,
    상기 세포 배양 장치로부터 세포 배양물을 채취하기 위하여 상기 단백질 분해제 및 상기 켄치 조성물이 상기 세포 배양 장치 내로 공급된 후에, 상기 세포 배양 장치는 상기 제 2 바이오프로세스 컨테이너 내로 또는 상기 제 3 바이오프로세스 컨테이너 내로 비워지는, 세포 배양 장치에 재료들을 전달하는 방법.
22. 제 13 항에 있어서,
    상기 플랜지는 0.2mm보다 큰 높이를 갖는, 세포 배양 장치에 재료들을 전달하는 방법.
23. 제 1 항 또는 제 3 항에 있어서,
    상기 바이오 프로세스 컨테이너는,
    제 1 단부 및 제 2 반대편 단부를 가지며, 유체를 유지하기 위한 내부 체적을 한정하는 가요성 컨테이너;
    상기 가요성 컨테이너의 제 1 단부에 위치되는 복수의 포트들로서, 상기 내부 체적과 각각 유체 교통하는, 상기 복수의 포트들;
    상기 가요성 컨테이너를 세포 배양 장치에 연결하도록 구성된 세포 배양 링크 튜브에 연결되는 상기 포트들 중 하나; 및
    상기 포트들과 각각 교통하는 상기 가요성 컨테이너의 제 1 단부에 배치된 유동 안내 장치로서, 강성 재료로 제조된 단일 구조체를 포함하고, 상기 복수의 포트들에 대응하는 복수의 이격된 통로들을 형성하는, 상기 유동 안내 장치를 포함하는, 바이오프로세스 시스템.
24. 제 23 항에 있어서,
    상기 세포 배양 링크 튜브는 적어도 2.25 mm의 벽 두께를 갖는, 바이오프로세스 시스템.
25. 제 23 항에 있어서,
    상기 세포 배양 링크 튜브는 적어도 2.75 mm의 벽 두께를 가지며, 상기 튜브는 7.5 mm 내지 12.5 mm의 내경을 갖는, 바이오프로세스 시스템.
26. 제 23 항에 있어서,
    상기 복수의 이격된 통로들은 6mm 내지 12mm의 직경을 갖는, 바이오프로세스 시스템.

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