KR102493231B1 - 건강보조식품 - Google Patents

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Abstract

본 발명은 건강보조식품에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 카카오닙스와 효모의 유산균 발효물, 파파인과 브로멜라인의 혼합물, 유산균, 키틴, 글루코아밀라아제, 전지분유, 비타민C, 베타글루칸, 해조칼슘, 멀티비타민미네랄믹스, 셀렌건조효모, 아연건조효모, 비타민D 및 정제포도당을 포함하며, 성장을 촉진시키고, 면역력을 증진시키는 것을 특징으로 한다. 본 발명에 의하면, 균형 잡힌 영양분을 공급하면서도 프로바이오틱스의 기능과 높은 효소활성을 가짐으로써, 어린이 및 청소년의 성장을 촉진하고, 신진대사를 활성화시켜 면역력을 증진시킬 수 있어 섭취자의 건강 유지를 돕는다는 장점이 있다.

Description

건강보조식품{HEALTH ASSISTANCE FOOD}
본 발명은 건강보조식품에 관한 것으로, 더욱 상세하게는 프로바이오틱스의 효능을 가지며, 효소활성이 우수하고 각종 영양성분이 균형있게 혼합되어 유아, 어린이 및 청소년의 성장발육을 돕는 면역증강 및 성장촉진용 건강보조식품에 관한 것이다.
면역이란 특정한 병원체 또는 독소에 대해서 생명체가 강한 저항을 나타내는 상태를 말한다. 면역은 외부 자극에 의한 손상이나 병원 미생물의 침입으로부터 자신을 방어하기도 하지만, 염증반응 등과 같이 자기 자신의 조직에 손상을 줄 수도 있다.
면역기능의 변화를 조절하여 정상으로 회복시키거나 변화의 폭을 줄여 주는 작용은 면역기능 억제 또는 면역기능 증강으로 구분된다. 과민면역반응 완화는 외부 물질에 대해 불리하게 반응하여 초래되는 알레르기 반응, 자기항원 또는 변형된 자기항원에 대한 반응 등 바람직하지 않게 증가된 면역반응을 억제시키는 것을 의미한다.
면역은 크게 태어날 때부터 선천적으로 지니게 되는 선천면역과 후천적으로 지니게 되는 적응면역으로 구분된다.
선천면역은 특정 항원에 노출된 경험이 없는데도 직접적으로 반응하여 공격대상 세포를 파괴하는 자연면역반응을 의미하는데, 항원에 대해 비특이적으로 반응하며, 특별한 기억작용은 없다. 선천면역체계로는 항원의 침입을 차단하는 피부·점액조직, 강산성의 위산, 혈액에 존재하는 보체 등이 있다. 선천면역체계의 세포적 방어인 식세포(산성백혈구, 중성백혈구, 단핵구)와 림프구 중의 하나인 NK 세포들은 침입한 미생물을 공격한다. 이 중 단핵구는 상처부위에 도달하면 커다란 대식세포(macrophage)로 성장하게 되는데, NK 세포와 함께 방어기전의 가장 중추적인 역할을 담당하게 되며, 실제 대부분의 감염은 선천면역에 의해 방어된다.
적응면역은 획득면역이라고도 하며, 처음 침입한 항원에 대해 기억할 수 있고, 다시 침입할 때 특이적으로 반응하여 효과적으로 항원을 제거할 수 있는 특징이 있어 선천면역을 보강하는 역할을 한다. 적응면역은 B림프구가 관여하는 체액면역과 T림프구가 관여하는 세포면역으로 나누어진다. 체액면역은 B림프구가 항원을 인지한 후 분화되어 항체를 분비, 이 항체는 주로 감염된 세균을 제거하는 기능을 보여준다. 세포면역은 흉선에서 유래한 T 림프구가 항원을 인지하여 림포카인을 분비하거나 직접 감염된 세포를 죽이는 역할을 한다.
바쁜 현대사회에 접어들면서 나이에 관계없이 아동부터 수험생, 노인들이 만성피로에 시달리거나 면역력이 저하되어 건강관리에 문제를 겪는 경우가 많아지고 있다. 스트레스, 과로, 수면부족, 과음, 불균형한 식사, 각종 환경공해 노출 등은 면역력 저하의 주된 원인으로 알려져 있다. 이러한 문제들로 본래 우리 몸이 가지고 있는 자연치유기능이 점차 약화되어 아토피성 피부염, 알레르기 비염, 두드러기, 과민성폐렴, 중이염, 허약체질, 식욕부진, 성장장애, 집중력 저하, 잦은 감기, 호흡기 바이러스 등과 같은 다양한 질환 또는 증상이 유발된다.
현재까지 면역력 증진을 목적으로 한 수많은 백신 면역증강제가 개발 중이지만 실제로 사용허가를 받은 면역증강제는 5~6종에 지나지 않는다. 가장 널리 사용되고 있는 면역증강제인 명반항원보강제(alum adjuvant)는 상대적으로 낮은 면역증강 효율과 자가면역반응 발생과 같은 부작용 보고가 있다. 면역증강제의 안전성 문제로 인해, 상대적으로 안전한 건강기능식품의 사용이 보다 바람직한 방안으로 지목되어, 이에 대한 연구가 활발히 진행되고 있다.
KR 10-1713309 B1 KR 10-0529476 B1 KR 10-1871115 B1
따라서, 본 발명의 목적은 프로바이오틱스와 효소, 각종 영양성분이 균형있게 혼합되어 유아, 어린이, 청소년의 장 건강에 도움을 주고, 성장을 촉진하며, 신진대사를 활성화시켜 면역력을 증진시킬 수 있는 건강보조식품을 제공하는 데 있다.
상기한 목적을 달성하기 위한 본 발명의 건강보조식품은, 카카오닙스와 효모의 유산균 발효물, 파파인과 브로멜라인의 혼합물, 유산균, 키틴, 글루코아밀라아제, 전지분유, 비타민C, 베타글루칸, 해조칼슘, 멀티비타민미네랄믹스, 셀렌건조효모, 아연건조효모, 비타민D 및 정제포도당을 포함하며, 성장을 촉진시키고, 면역력을 증진시키는 것을 특징으로 한다.
프락토올리고당, 자일리톨 및 팔라티노스를 더 포함하는 것을 특징으로 한다.
관능성 증가 성분으로서, 식물성크림분말, 쿠키앤크림맛분말, 블랙칩분말 및 코코아분말을 더 포함하는 것을 특징으로 한다.
그 배합비는, 카카오닙스와 효모의 유산균 발효물 5~10중량%, 파파인과 브로멜라인의 혼합물 0.1~1중량%, 유산균 1~5중량%, 키틴 0.01~0.5중량%, 글루코아밀라아제 0.5~1.5중량%, 전지분유 3~5중량 %, 비타민C 0.1~1중량%, 베타글루칸 0.1~1중량%, 해조칼슘 0.1~0.5중량%, 멀티비타민미네랄믹스 0.1~0.5중량%, 셀렌건조효모 0.01~0.2중량%, 아연건조효모 0.01~0.2중량%, 비타민D 0.01~0.05중량%, 프락토올리고당 7~12중량%, 자일리톨 4~6중량%, 팔라티노스 3~5중량%, 식물성크림분말 4~6중량%, 쿠키앤크림맛분말 4~6중량%, 블랙칩분말 4~6중량%, 코코아분말 4~6중량% 및 잔량의 정제포도당인 것을 특징으로 한다.
상기 카카오닙스와 효모의 유산균 발효물은, 카카오닙스와 효모를 1:0.1~1중량비로 혼합한 혼합물에 유산균을 접종하고, 배양하여서 된 것이고, 상기 파파인과 브로멜라인의 혼합물은 상기 파파인과 브로멜라인이 1:0.1~1중량비로 혼합된 것임을 특징으로 한다.
상기 유산균은 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 락토바실러스 헬베티쿠스(Lactobacillus helveticus), 비피도박테리움 아니말리스(Bifidobacterium animalisspp Lactis), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 비피덤(Bifidobalcterium bifidum), 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterum breve), 스트렙토코쿠스 썸머필루스(Streptococcus thermophilus) 및 락토코쿠스 라티스(Lactococcus Lactis)의 혼합 유산균인 것을 특징으로 한다.
본 발명에 의하면, 균형 잡힌 영양분을 공급하면서도 유산균의 기능과 높은 효소활성을 가짐으로써, 어린이 및 청소년의 성장을 촉진하고, 신진대사를 활성화시켜 면역력을 증진시킬 수 있어 섭취자의 건강 유지를 돕는다는 장점이 있다.
도 1은 본 발명의 실험예 3의 결과를 나타낸 그래프.
이하, 본 발명을 상세히 설명한다.
본 발명은 건강보조식품으로서, 유산균의 효능과 소화 효소의 보충, 균형 잡힌 영양분을 공급하여, 어린이 및 청소년의 성장을 촉진하고, 면역력을 증진한다는 데 특징이 있다.
본 발명에 의한 건강보조식품은, 카카오닙스와 효모의 유산균 발효물, 파파인과 브로멜라인의 혼합물, 유산균, 키틴, 글루코아밀라아제, 전지분유, 비타민C, 베타글루칸, 해조칼슘, 멀티비타민미네랄믹스, 셀렌건조효모, 아연건조효모, 비타민D 및 정제포도당을 포함하는 것을 특징으로 한다.
이하, 각 성분들에 대하여 살펴본다.
먼저, 카카오닙스와 효모의 유산균 발효물은, 항산화성분의 일종인 카테킨이 풍부하게 함유된 카카오닙스와 면역력 증진에 도움을 주는 효모를 혼합하고, 이를 유산균으로 발효한 것으로, 면역력을 증진에 도움을 준다. 즉, 상기 카카오닙스는 발효과정을 통해 풍부하게 들어있는 항산화 성분인 카테킨이 감소하게 되면서, 위장에 자극이 줄어들고, 떫고 쓴 맛이 보완되며, 카테킨의 부작용은 낮추면서도, 카테킨의 다양한 효과를 누릴 수 있도록 하는 것이다. 또한, 맥주건조효모는 발효과 정을 통해 단백질, 아미노산, 비타민, 미네랄 등의 성분을 더욱 풍부하게 하여 성장기 청소년들의 골격과 근육 형성에 필요한 영양소를 충분히 공급할 수 있게 하는 것이다.
이러한 카카오닙스와 효모의 유산균 발효물은 카카오닙스와 효모를 유산균 발효한 것이라면 그 구체적인 제조방법을 제한하지 않으나, 예시적으로 카카오닙스와 맥주건조효모를 1:0.1~1중량비로 혼합하고, 이에 유산균을 접종한 후, 30~38℃에서 20~50시간 배양하여 30~50℃에서 건조한 것일 수 있다. 이때, 상기 유산균의 접종량은 상기 카카오닙스와 효모의 혼합물 100부피%에 대하여 1~5부피%일 수 있으며, 상기 유산균은 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 락토바실러스 헬베티쿠스(Lactobacillus helveticus), 비피도박테리움 아니말리스(Bifidobacterium animalisspp Lactis), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 비피덤(Bifidobalcterium bifidum), 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterum breve), 스트렙토코쿠스 썸머필루스(Streptococcus thermophilus) 및 락토코쿠스 라티스(Lactococcus Lactis)로 이루어진 군에서 선택된 어느 하나 또는 둘 이상일 수 있다. 상기 카카오닙스와 효모의 유산균 발효물은 건강보조식품 내 5~10중량%로 포함될 수 있는바, 그 함량이 5중량% 미만이면 면역력 증진 효과가 미미하고, 10중량%를 초과하면 과량이 되어 상대적으로 다른 영양소가 부족할 수 있기 때문이다.
상기 파파인(Papain)과 브로멜라인(Bromelain)의 혼합물은, 파파야로부터 얻어지는 단백질 분해 효소인 파파인과 파인애플로부터 얻어지는 단백질 분해 효소인 브로멜라인을 1:0.1~1중량비로 혼합한 효소제로, 소염작용을 원활하게 하며 소화작용을 도와 탄수화물, 단백질 등의 각종 영양소의 흡수율을 높여주어 어린이 및 청소년의 성장을 촉진하면서도 면역력 증진을 돕는다. 상기 파파인과 브로멜라인의 혼합물은 건강보조식품 내 0.1~1중량%로 포함될 수 있는바, 그 함량이 0.1중량% 미만이면 효소활성이 높지 못해 그 효과가 미미하고, 1중량%를 초과하더라도 더 이상의 증진된 작용효과를 나타내지 못하기 때문이다.
상기 유산균은 신체 면역세포의 70~80%가 분포해있는 장 건강에 관여해 면역력을 증진하는데 도움을 주는 성분으로, 유산균을 증식하고 유해균 억제에 도움을 주며, 배변활동에도 도움을 준다. 상기 유산균으로는 바람직하게 17종의 혼합 유산균, 구체적으로 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 락토바실러스 헬베티쿠스(Lactobacillus helveticus), 비피도박테리움 아니말리스(Bifidobacterium animalisspp Lactis), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 비피덤(Bifidobalcterium bifidum), 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterum breve), 스트렙토코쿠스 썸머필루스(Streptococcus thermophilus) 및 락토코쿠스 라티스(Lactococcus Lactis)의 혼합 유산균을 사용한다. 상기 유산균은 건강보조식품 내 1~5중량%의 범위로 포함될 수 있다.
상기 키틴은 섬유소와 비슷한 천연 고분자 화합물로, 사람의 소화효소로는 소화, 흡수되지 않는 동물성 식이섬유이다. 상기 키틴은 지방이나 유해금속을 흡착하고, 체내에 침입한 병원체에 대한 항체생성 과정에 관여하여 면역을 증진시키는 등의 작용을 한다. 상기 키틴은 건강보조식품 내 0.01~0.5중량%의 범위로 포함될 수 있다.
상기 글루코아밀라아제는 탄수화물, 특히 다당류를 분해하는 효소로서, 탄수화물의 소화, 흡수를 돕는다. 상기 글루코아밀라아제는 건강보조식품 내 0.5~1.5중량%의 범위로 포함될 수 있다.
상기 전지분유는 원유를 그대로 가루 형태, 즉 분말화시킨 제품으로, 어린이 및 청소년의 성장을 촉진한다. 상기 전지분유는 건강보조식품 내 3~5중량%의 범위로 포함될 수 있다.
상기 비타민C는 결합조직의 형성과 기능 유지를 돕고, 유해산소로부터 세포를 보호하는 역할을 한다. 상기 비타민C는 건강보조식품 내 0.1~1중량%의 범위로 포함될 수 있다.
상기 베타글루칸은 효모의 세포벽, 버섯류, 곡류 등에서 발견되는 규칙적인 구조의 천연 고분자로서, 면역력 증가에 필수불가결한 성분이다. 상기 베타글루칸은 건강보조식품 내 0.1~1중량%의 범위로 포함될 수 있다.
상기 해조칼슘은 천연칼슘으로 칼슘함량이 32% 이상이며, 무미, 무취하며 오일 및 수분흡수율이 우수한 벌집형의 다공질 구조를 갖는다. 따라서, 소화흡수율이 우수하며, 중금속함량이 매우 낮은 특징이 있다. 이러한 해조칼슘은 김, 꼬시래기, 우뭇가사리 같은 작은 키의 홍조류(학명:Lithothamnium Calcareum)를 건조하여 분쇄한 것으로, 이러한 작은 키의 홍조류는 수명이 다하는 시점에서 줄기에 95~99.5%의 칼슘을 함유하게 되며, 칼슘 외에 칼슘 대사에 중요한 다른 미네랄 역시 다량 함유한다. 상기 해조칼슘의 제조방법은 종래 공지된 기술에 의하며, 시판되는 상품을 구입하여 사용하는 것도 가능함은 당연하다. 이러한 해조칼슘은 건강보조식품 내 0.1~0.5중량%의 비율로 포함되는바, 그 함량이 너무 낮으면 칼슘의 섭취량이 적어지게 되고, 과량이 되면 상대적으로 다른 영양성분의 함량이 적어지기 때문이다.
상기 멀티비타민미네랄믹스(Multivitamin mineral mix)는 퓨라칼, 비타민C, 비타민E, 비타민B6, 비타민B1, 비타민A, 비타민B2, 니코틴산아마이드, 엽산, 산화아연 및 푸말산제1철 등으로 구성된 것으로, 시판상품을 구입하여 사용할 수 있다. 상기 멀티비타민미네랄은 건강보조식품 내 0.1~0.5중량%의 범위로 포함될 수 있다.
상기 셀렌건조효모는 유해산소로부터 세포를 보호할 뿐만 아니라 부형제로도 사용된다. 상기 셀렌건조효모는 건강보조식품 내 0.01~0.2중량%의 범위로 포함될 수 있다.
상기 아연건조효모는 정상적인 면역기능 및 세포분열에 필요한 것이며, 부형제로도 사용된다. 상기 아연건조효모는 건강보조식품 내 0.01~0.2중량%의 범위로 포함될 수 있다.
상기 비타민D는 칼슘과 인의 흡수를 촉진하며 골격형성에 도움을 준다. 상기 비타민 D는 건강보조식품 내 0.01~0.05중량%의 범위로 포함될 수 있는데, 그 함량이 적으면 칼슘과 인의 흡수에 도움을 주지 못하며, 과량이 되면 과잉증이 있을 수 있기 때문이다.
상기 정제포도당은 뇌의 활동량을 증진시켜 집중력을 좋게 하고, 피로회복과 기력을 좋게 하여 신진대사를 활발하게 하며, 성장기 유아, 소아 및 청소년의 근성장을 돕는 것으로, 건강보조식품 내 잔량으로 포함된다.
즉, 상기와 같이 구성된 본 발명의 건강보조식품은 균형있는 영양소와, 근골격의 성장에 도움을 주는 성분이 함께 함유되고, 우수한 효소활성을 나타냄으로써, 탄수화물, 단백질은 물론, 각종 영양소의 소화, 흡수를 도와 유아, 소아 및 청소년의 근골격 성장을 촉진하고, 신진대사를 활성화시켜 면역력을 증진시킬 수 있다는 효과를 갖는다.
한편, 상기 건강보조식품은 프락토올리고당, 자일리톨 및 팔리티노스를 더 포함할 수 있다.
상기 프락토올리고당은 프리바이오틱스를 함유하여 섭취 시 위에서 소화되지 않고 장까지 내려가 장내 유익균의 성장을 극대화하는 것으로, 꾸준히 섭취시 장내 유익균의 활성화를 도울 수 있어 면역력 향상, 배변 문제를 해결하는 데 도움을 주는 성분이다. 상기 프락토올리고당은 건강보조식품 내 7~12중량%로 포함될 수 있다.
상기 자일리톨은 충치균을 억제하는 데 뛰어난 작용을 할 뿐 아니라, 당도가 높아 감미료로서 사용된다. 상기 자일리톨은 건강보조식품 내 4~6중량%로 포함될 수 있다.
상기 팔라티노스는 충치를 유발하지 않는 치아비우식성 당으로, 분해속도가 느려 섭취시 급격한 혈당 변화를 유발하지 않고, 당도가 우수하여 감미료로서 사용된다. 상기 팔라티노스는 건강보조식품 내 3~5중량%로 포함될 수 있다.
또한, 본 발명의 건강보조식품은, 관능성의 향상을 위하여, 관능성 증가 성분으로서, 식물성크림분말 4~6중량%, 쿠키앤크림맛분말 4~6중량%, 블랙칩분말 4~6중량% 및 코코아분말 4~6중량%를 더 포함할 수 있다.
상기와 같은 건강보조식품에 함유되는 성분은 모두 식품재료 및 식품으로 사용되는 것으로, 복용 또는 섭취시 인체에 대한 안전성이 우수하다.
그리고 상기 건강보조식품은 통상의 제조방법에 따라 분말, 캡슐, 산제, 정제, 과립, 탕제, 엑기스, 음료 등의 형태로 제형화할 수 있다. 이때, 제형화를 위하여 공지된 식품첨가성분이 더 첨가될 수 있음은 당연하다.
상기와 같은 본 발명의 건강보조식품은 앞서 설명된 바와 같이, 유, 소아 및 청소년의 성장을 촉진시키고, 면역력을 증진시키는 효과가 있으며, 관능성이 우수하여 섭취가 용이하다는 장점도 있다.
본 발명의 건강보조식품은 연령, 체중에 따라 적량을 선택하여 섭취할 수 있으며, 1일 2000mg 내지 4000mg의 섭취로 충분한 효과를 얻을 수 있다. 상기 섭취량은 1회 또는 2회 이상으로 나누어 복용할 수 있으며, 바로 씹어서 먹거나, 물이나 우유와 같이 섭취하는 것도 가능하다..
이하, 실시예를 통해 본 발명을 더욱 상세히 설명한다.
(실시예 1 및 2)
하기 표 1과 같은 비율로 각 성분을 혼합하고, 이를 타정기로 타정하여 정제(1정당 1500mg)로 제조하였다.
실시예 1 및 2의 성분비(중량%)
구분 실시예 1 실시예 2
카카오닙스와 효모의 유산균 발효물 8.00 8.00
파파인과 브로멜라인의 혼합물
(해나눔:파브자임-2)		 0.20 0.20
17종 혼합 유산균
(해나눔)		 3.00 3.00
키틴 0.10 0.10
글루코아밀라아제 1.00 1.00
전지분유 4.10 4.10
비타민C 0.50 0.50
베타글루칸 0.50 0.50
해조칼슘 0.20 0.20
멀티비타민미네랄믹스
(선일에프앤씨)		 0.20 0.20
셀렌건조효모
(비전바이오켐)		 0.10 0.10
아연건조효모
(해나눔)		 0.10 0.10
비타민D 0.02 0.02
프락토올리고당 - 9
자일리톨 - 5
팔라티노스 - 4
식물성크림분말
(선일에프앤씨)		 - 5
쿠키앤크림맛분말
(세진FD)		 - 5
블랙칩분말
(세진FD)		 - 5
코코아분말
(선일에프엔씨)		 - 5
정제포도당 to 100 to 100
이때, 카카오닙스와 효모의 유산균 발효물은 카카오닙스와 맥주건조효모를 1:0.5중량비로 혼합하고, 이 혼합물에 대하여 유산균을 2부피%로 접종한 후, 35℃에서 30시간 배양하여 45℃에서 건조한 것을 사용하였다. 이때, 상기 유산균은 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum)을 사용하였다.
(실험예 1)
본 발명의 건강보조식품이 조골세포의 생존률에 미치는 영향을 확인하였다.
조골세포인 MG-63 세포는 10% FBS (Hyclone Laboratories, Logan, Utah, USA)와 MEM(minimal essential medium)(ATCC)에 1% 페니실린-스트렙토마이신(penicillin-streptomycin, Hyclone Laboratories, Logan, Utah, USA), 1% L-글루타민(L-glutamine, Hyclone Laboratories, Logan, Utah, USA), 0.1% 겐타마이신(Gentamycin, Gibco, GrandIsland, N.Y, USA)을 첨가하여 75T 플라스크에 넣고 37℃, 5% CO2의 조건하에서 배양하였다. 그 후, 세포는 2일에 한 번씩 배지를 갈아주고 약 4~5일에 계대하여 사용하였다.
MG-63세포를 96-웰 플레이트(96-well plate)에 1×104cells/well의 농도로 10% FBS를 첨가한 MEM 배양액에 분주하여 12시간 동안 안정화시킨 후, 시료를 0.2% DMSO에 녹여 5㎍/㎖ 농도로 처리하고 48시간 동안 배양하였다. 배양 후 각 웰(well)에 MTT(3-(4,5-methylthiazol-2-yl)-2,5-diphenyltetrazolium bromide) 시약을 20㎕ 처리하여 최대 3시간 37℃ 인큐베이터(incubator)에서 배양한 후, 배지와 MTT 시약을 제거하고 DMSO 200㎕를 가하여 560nm에서 ELISA reader(VERSAMAXSL-20 Molecular Devices, Seoul, Korea)를 이용하여 흡광도를 측정하였으며, 3회 측정하여 그의 평균값과 표준 오차를 구하였다. 시료를 처리하지 않은 군을 대조군으로 하였으며, 그 결과는 하기 표 2에 나타내었다.
시험예 1 결과
구분 세포 생존률(%)
대조군 100±9.5
실시예 1 135.2±5.2
실시예 2 138.4±7.4
상기 표 2에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 1, 2는 모두 대조군 대비 조골세포 생존률이 우수함을 확인할 수 있었다.
(실험예 2)
본 발명의 건강보조식품이 조골세포의 증식에 미치는 영향을 확인하였다.
MG-63 세포를 96-웰 플레이트(96-well plate)에 1×104cells/well의 농도로 10% FBS를 첨가한 MEM 배양액에 분주하여 12시간 동안 안정화시킨 후, 시료를 0.2% DMSO에 녹여 10, 20㎍/㎕의 농도로 각각 처리하고 48시간 동안 배양하였다. 배양 후 각 웰(well)에 MTT 시약을 20㎕로 처리하여 최대 3시간, 37℃ 인큐베이터(incubator)에서 배양한 후, 배지와 MTT 시약을 제거하고 DMSO 200㎕를 가하여 560nm에서 ELISA reader를 이용하여 흡광도를 측정하였으며, 3회 측정하여 그의 평균값과 표준 오차를 구하였다. 시료를 처리하지 않은 군을 대조군으로 하였으며, 그 결과는 하기 표 3에 나타내었다.
시험예 2 결과
구분 세포증식률(%)
대조군 100±2.7
실시예 1 10㎍/㎕ 145±6.2
20㎍/㎕ 137±4.3
실시예 2 10㎍/㎕ 148±3.1
20㎍/㎕ 147±4.4
상기 표 3에서 확인할 수 있는 바와 같이, 본 발명에 따른 실시예 1, 2는 모두 대조군 대비 조골세포의 증식률이 증가한 것을 확인할 수 있었다.
(실험예 3)
본 발명의 건강보조식품이 사이토카인 발현에 미치는 영향을 확인하였다.
측정 대상 싸이토카인으로는 면역반응과 관련하여 대표적인 싸이토카인인 TNF-α, IL-1β, IL-6, 및 IL-12를 선정하였다.
6 well plate에 2×106의 세포를 2mL 배지와 함께 각 well에 분주하여 20~24시간 부착시켰다. 그 후에 배지를 혈청(serum)이 포함되지 않은 것으로 교환해주었다(starvation 과정) 2시간 후 시료를 최종농도에 맞게 처리한 후 20~22시간 후 배지를 취하고, 앞서 선정한 싸이토카인(TNF-α, IL-1β, IL-6, 및 IL-12)의 발현량을 ELISA법을 이용하여 측정하였다. 1ug/mL의 지질다당류(lipopolysaccharide: LPS)를 양성대조군으로 사용하였고, 상기 시료를 처리하지 않은 음성대조군을 100%로 환산하여 싸이토카인들의 발현량을 나타내었다.
도 1은 그 결과를 나타낸 그래프로서, 도 1에서와 같이 본 발명의 실시예 1은 면역반응 싸이토카인인 TNF-α, IL-1β, IL-6, 및 IL-12의 발현량을 증가시킴을 확인하였다.
이상으로 본 발명의 특정한 부분을 상세히 기술하였는바, 당 업계의 통상의 지식을 가진 자에게 있어서 이러한 구체적인 기술은 단지 바람직한 구현예일 뿐이며, 이에 본 발명의 범위가 제한되는 것이 아닌 점은 명백하다. 따라서, 본 발명의 실질적인 범위는 첨부된 청구항과 그의 등가물에 의하여 정의된다고 할 것이다.

Claims (5)

  1. 카카오닙스와 효모의 유산균 발효물, 파파인과 브로멜라인의 혼합물, 유산균, 키틴, 글루코아밀라아제, 전지분유, 비타민C, 베타글루칸, 해조칼슘, 멀티비타민미네랄믹스, 셀렌건조효모, 아연건조효모, 비타민D 및 정제포도당을 포함하고,
    프락토올리고당, 자일리톨 및 팔라티노스를 더 포함하며,
    관능성 증가 성분으로서, 식물성크림분말, 쿠키앤크림맛분말, 블랙칩분말 및 코코아분말을 더 포함하며,
    상기 카카오닙스와 효모의 유산균 발효물은,
    카카오닙스와 맥주건조효모를 1:0.1~1중량비로 혼합하고, 이에 유산균을 접종한 후, 30~38℃에서 20~50시간 배양하여 30~50℃에서 건조한 것이고,
    그 배합비는, 카카오닙스와 효모의 유산균 발효물 5~10중량%, 파파인과 브로멜라인의 혼합물 0.1~1중량%, 유산균 1~5중량%, 키틴 0.01~0.5중량%, 글루코아밀라아제 0.5~1.5중량%, 전지분유 3~5중량%, 비타민C 0.1~1중량%, 베타글루칸 0.1~1중량%, 해조칼슘 0.1~0.5중량%, 멀티비타민미네랄믹스 0.1~0.5중량%, 셀렌건조효모 0.01~0.2중량%, 아연건조효모 0.01~0.2중량%, 비타민D 0.01~0.05중량%, 프락토올리고당 7~12중량%, 자일리톨 4~6중량%, 팔라티노스 3~5중량%, 식물성크림분말 4~6중량%, 쿠키앤크림맛분말 4~6중량%, 블랙칩분말 4~6중량%, 코코아분말 4~6중량% 및 잔량의 정제포도당인 것을 특징으로 하는 건강보조식품.
  2. 삭제
  3. 삭제
  4. 삭제
  5. 제1항에 있어서,
    상기 유산균은 락토바실러스 플란타럼(Lactobacillus plantarum), 락토바실러스 아시도필루스(Lactobacillus acidophilus), 락토바실러스 루테리(Lactobacillus reuteri), 락토바실러스 람노서스(Lactobacillus rhamnosus), 락토바실러스 파라카세이(Lactobacillus paracasei), 락토바실러스 카세이(Lactobacillus casei), 락토바실러스 불가리쿠스(Lactobacillus bulgaricus), 락토바실러스 퍼멘텀(Lactobacillus fermentum), 락토바실러스 가세리(Lactobacillus gasseri), 락토바실러스 살리바리우스(Lactobacillus salivarius), 락토바실러스 헬베티쿠스(Lactobacillus helveticus), 비피도박테리움 아니말리스 락티스(Bifidobacterium animalis spp. lactis), 비피도박테리움 롱검(Bifidobacterium longum), 비피도박테리움 비피덤(Bifidobacterium bifidum), 비피도박테리움 브레베(Bifidobacterium breve), 스트렙토코쿠스 썸머필루스(Streptococcus thermophilus) 및 락토코쿠스 락티스(Lactococcus lactis)의 혼합 유산균인 것을 특징으로 하는 건강보조식품.
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